JPS5844211B2 - 血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法 - Google Patents
血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法Info
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- JPS5844211B2 JPS5844211B2 JP10815378A JP10815378A JPS5844211B2 JP S5844211 B2 JPS5844211 B2 JP S5844211B2 JP 10815378 A JP10815378 A JP 10815378A JP 10815378 A JP10815378 A JP 10815378A JP S5844211 B2 JPS5844211 B2 JP S5844211B2
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/64—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving ketones
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血中ケトン体、殊に血清中のＤ−３−ヒドロキ
シ酪酸を酵素的にアセト酢酸へ転換し、既存のアセト酢
酸とともに総ケトン体として定量し、さらには総ケトン
体量から既存のアセト酢酸量を減じてＤ−３−ヒドロキ
シ酪酸の定量を行なう高感度簡易比色分別定量法に係る
。
シ酪酸を酵素的にアセト酢酸へ転換し、既存のアセト酢
酸とともに総ケトン体として定量し、さらには総ケトン
体量から既存のアセト酢酸量を減じてＤ−３−ヒドロキ
シ酪酸の定量を行なう高感度簡易比色分別定量法に係る
。
糖尿病患者の臨床診断に際しては、血中のケトン体量を
測定することが極めて重要であり、各種測定方法が提案
され、また症状によって各種ケトン化合物含量に相違が
認められるので個々のケトン体量を測定することが極め
て意義あるものとされている。
測定することが極めて重要であり、各種測定方法が提案
され、また症状によって各種ケトン化合物含量に相違が
認められるので個々のケトン体量を測定することが極め
て意義あるものとされている。
しかしながら、現在一般に使用されている二重ロプルシ
ツド法並びに酵素法にあっては、前者は半定量法であっ
て不正確であり、後者はその操作手技が極めて煩雑であ
ると謂う欠陥を有しており、従って精度が高く且つ操作
が容易な測定法の開発が望まれていた。
ツド法並びに酵素法にあっては、前者は半定量法であっ
て不正確であり、後者はその操作手技が極めて煩雑であ
ると謂う欠陥を有しており、従って精度が高く且つ操作
が容易な測定法の開発が望まれていた。
斯かる要望に沿い、本発明者等は血清中のアセト酢酸量
を感度及び精度に優れたジアゾニウム塩とのカップリン
グ反応を利用して比色定量する方法を提案した（特願昭
５３−８６８０３号特開昭５５−１５００４号公報）。
を感度及び精度に優れたジアゾニウム塩とのカップリン
グ反応を利用して比色定量する方法を提案した（特願昭
５３−８６８０３号特開昭５５−１５００４号公報）。
この方法によれば、血清中のアセト酢°酸量は容易に且
つ高精度にて求めることはできるが、別のケトン体であ
るＤ−３−ヒドロキシ酪酸は定量不可能である。
つ高精度にて求めることはできるが、別のケトン体であ
るＤ−３−ヒドロキシ酪酸は定量不可能である。
斯くて本発明の主目的は血中のＤ−３−ヒドロキシ酪酸
を酵素的にアセト酢酸に転換し、既存のアセト酢酸とと
もに総ケトン体として定量し、さらＯこは前掲特願昭５
３−８６８０３号特開昭５５−１５００４号公報に記載
の方法と組み合せて血中のＤ−３−ヒドロキシ酪酸を定
量する方法を提供することである。
を酵素的にアセト酢酸に転換し、既存のアセト酢酸とと
もに総ケトン体として定量し、さらＯこは前掲特願昭５
３−８６８０３号特開昭５５−１５００４号公報に記載
の方法と組み合せて血中のＤ−３−ヒドロキシ酪酸を定
量する方法を提供することである。
本発明によれば、血清中のＤ−３−ヒドロキシ酪酸は酵
素的酸化によりｉｏｏ％アセト酢酸に変ぜられ、このた
めには３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素及びＮＡＩＭニコ
チンアミドアデニンジヌクレオタイド）が使用されるが
、さらにはＮＡＤの再生産を行ない、酵素的転換を完全
に行なうために熱性ブドウ酸及び乳酸脱水素酵素が使用
される。
素的酸化によりｉｏｏ％アセト酢酸に変ぜられ、このた
めには３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素及びＮＡＩＭニコ
チンアミドアデニンジヌクレオタイド）が使用されるが
、さらにはＮＡＤの再生産を行ない、酵素的転換を完全
に行なうために熱性ブドウ酸及び乳酸脱水素酵素が使用
される。
Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸が酸化されて生成したアセト酢
酸及び血清中に既存のアセト酢酸はジアゾニウム塩と反
応せしめられてアゾ化合物となされるが、本発明におい
ては斯かる反応関与体であるジアゾニウム塩としてｐ−
ニトロフェニルジアゾニウムフルオロポレートが使用さ
れる。
酸及び血清中に既存のアセト酢酸はジアゾニウム塩と反
応せしめられてアゾ化合物となされるが、本発明におい
ては斯かる反応関与体であるジアゾニウム塩としてｐ−
ニトロフェニルジアゾニウムフルオロポレートが使用さ
れる。
この目的に供し得るものとして従来知られているジアゾ
ニウム塩としては２，５−ジクロロベンゼンジアゾニウ
ムクロライドが存するが、これは液状であり且つ不安定
であるので測定当田こ新たに調製しなければならないと
謂う煩られしさがあり、しかも発色生成物が不安定であ
るので測定値がバラツクという欠点を有している。
ニウム塩としては２，５−ジクロロベンゼンジアゾニウ
ムクロライドが存するが、これは液状であり且つ不安定
であるので測定当田こ新たに調製しなければならないと
謂う煩られしさがあり、しかも発色生成物が不安定であ
るので測定値がバラツクという欠点を有している。
一方、本発明に使用される上記ｐ−ニトロフェニルジア
ゾニウムフルオロポレートは結晶性粉末であり、冷暗所
に保存すれば数ケ月に亘って安定であり、水溶性でアセ
ト酢酸との反応性が良く、しかも発色生成物が安定であ
ると謂う利点を有している。
ゾニウムフルオロポレートは結晶性粉末であり、冷暗所
に保存すれば数ケ月に亘って安定であり、水溶性でアセ
ト酢酸との反応性が良く、しかも発色生成物が安定であ
ると謂う利点を有している。
尚、本発明方法の実施に際して生ずる諸反応を示せば下
記の通りである。
記の通りである。
次に試薬及び操作等に関連して本発明方法を更に説明す
る。
る。
試薬
（１）トリス緩衝液
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン溶液２川濃度
のものを使用。
のものを使用。
（２）無性ブドウ酸
２０ｍＭ水溶液を使用。
（３）ＮＡＤにコチンアミドアデニンジヌクレオタイド
） β−Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ａｄｅｎｉｎｅ Ｄｉ
ｎｕｃ＋ｅｏｔｉｄｅ（βＮＡＤ 、β−ＤＰＮ） ・Ｃ２□Ｈ２７Ｎ７０□４Ｐ２・３Ｈ２０グレード■（
ＫＯＨＪＩＮ Ｒｅａｇｅｎｔ） ２０ ｍＭ濃度に調整 （４）３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素 菌ドイツ在ベーリンガー・マンハイム社 （Ｂｏｃｂｒｉ ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅ ｉｍ Ｇｍ
ｂＨ）製のもの（グレード■） １５単位／ｍｌに調整（０，０１ｍ使用されるので使用
量は０．１５単位） （５） ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素） アメリカ合衆国在シグマ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ−）製のもの（タイプ■）７２５０
単位／７ｒＬｌに調整（０，０’１−使用されるので使
用量は７２．５単位であるが、更に稀釈して２単位程度
になしても使用量として充分である） （６）クエン酸緩衝液 ０．２３Ｍのクエン酸溶液と０．２３Ｍのクエン酸ナト
リウム溶液を混合してｐＨ４，５に調整する。
） β−Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ａｄｅｎｉｎｅ Ｄｉ
ｎｕｃ＋ｅｏｔｉｄｅ（βＮＡＤ 、β−ＤＰＮ） ・Ｃ２□Ｈ２７Ｎ７０□４Ｐ２・３Ｈ２０グレード■（
ＫＯＨＪＩＮ Ｒｅａｇｅｎｔ） ２０ ｍＭ濃度に調整 （４）３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素 菌ドイツ在ベーリンガー・マンハイム社 （Ｂｏｃｂｒｉ ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅ ｉｍ Ｇｍ
ｂＨ）製のもの（グレード■） １５単位／ｍｌに調整（０，０１ｍ使用されるので使用
量は０．１５単位） （５） ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素） アメリカ合衆国在シグマ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ−）製のもの（タイプ■）７２５０
単位／７ｒＬｌに調整（０，０’１−使用されるので使
用量は７２．５単位であるが、更に稀釈して２単位程度
になしても使用量として充分である） （６）クエン酸緩衝液 ０．２３Ｍのクエン酸溶液と０．２３Ｍのクエン酸ナト
リウム溶液を混合してｐＨ４，５に調整する。
（７）ジアゾニウム塩試薬
［）合成
ｐ−Ｎ０２Ｃ６Ｈ４Ｎ’ｉち＋ＨＮＯ２＋ＨＢＦ ４→
ｐ −Ｎｏ２０６Ｈ４Ｎ２ＢＦ４＋ ２ Ｈ２０ｐ−ニ
トロアニリン３．４．！９を４２％硼弗化水素酸１１Ｔ
ｒＬｌ中に充分に攪拌しながら添加し、これに氷冷亜硝
酸すｌ−ＩＪウム溶液（１，，７Ｆ！／３．４ｍ１）を
滴加する。
ｐ −Ｎｏ２０６Ｈ４Ｎ２ＢＦ４＋ ２ Ｈ２０ｐ−ニ
トロアニリン３．４．！９を４２％硼弗化水素酸１１Ｔ
ｒＬｌ中に充分に攪拌しながら添加し、これに氷冷亜硝
酸すｌ−ＩＪウム溶液（１，，７Ｆ！／３．４ｍ１）を
滴加する。
数分間攪拌し、ガラスフィルターで吸引濾過し氷冷硼弗
化水素酸３ｍｌで１回、９５％メタノールで２回、エチ
ルエーテルで数回洗浄した後０こ五酸化燐を入れた真空
デシケータ中で乾燥せしめれば黄色結晶状粉末である所
望のｐ−ニトロフェニルジアゾニウムフルオロポレート
５．６＆（収率９、５．９％）が得られる。
化水素酸３ｍｌで１回、９５％メタノールで２回、エチ
ルエーテルで数回洗浄した後０こ五酸化燐を入れた真空
デシケータ中で乾燥せしめれば黄色結晶状粉末である所
望のｐ−ニトロフェニルジアゾニウムフルオロポレート
５．６＆（収率９、５．９％）が得られる。
ｉｉ）使用態様
１■／諦の濃度となるように蒸留水に溶解する。
１１１）保存態様
粉末体は比較的安定であり、冷暗所保存により数ケ月に
亘り安定、溶液化したものは直ちに使用が原則であるが
、遮光下に水冷しておくことにより少なくとも４〜５時
間程度安定に保存しておくことができる。
亘り安定、溶液化したものは直ちに使用が原則であるが
、遮光下に水冷しておくことにより少なくとも４〜５時
間程度安定に保存しておくことができる。
（８）次亜燐酸溶成
２０％溶液を使用。
測定手技
尤血清中の総ケトン体の算出方法
（１）除蛋白
試験管に血清０．２ｍ１．を採取し、２％過塩素酸溶液
２．０ｍｌを混和し、３０００Ｆで１５分間遠心した後
の上澄液を検体溶液として使用する０ （２）Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸のアセト酢酸への酵素的
転換 上記検体溶液０．５１１Ｌｌにトリス緩衝液０．２ｍｌ
！を加え、ｐＨ８，５において３−ヒドロ、キシ酪酸脱
水素酵素０．０１１１ＬｌとＮＡＤ ０．１ ｍ１．と
無性ブドウ酸０．１ ｍ１．！：、 ＬＤＨｏ、０１
ｍとの共存下に、３０℃、３０分間反応卿装する。
２．０ｍｌを混和し、３０００Ｆで１５分間遠心した後
の上澄液を検体溶液として使用する０ （２）Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸のアセト酢酸への酵素的
転換 上記検体溶液０．５１１Ｌｌにトリス緩衝液０．２ｍｌ
！を加え、ｐＨ８，５において３−ヒドロ、キシ酪酸脱
水素酵素０．０１１１ＬｌとＮＡＤ ０．１ ｍ１．と
無性ブドウ酸０．１ ｍ１．！：、 ＬＤＨｏ、０１
ｍとの共存下に、３０℃、３０分間反応卿装する。
その後反応溶液に３５％過塩素酸溶液０．１ｍｌを添加
して強酸性にする。
して強酸性にする。
（３）発色と吸光度測定
上記２）項にて得たる溶液０．５＠ｌ中にクエン酸緩衝
液０．５ ｒｕ級びジアゾニウム塩試薬０．５−を添加
し、３０℃の恒温槽内で２０分間に亘り反応させる。
液０．５ ｒｕ級びジアゾニウム塩試薬０．５−を添加
し、３０℃の恒温槽内で２０分間に亘り反応させる。
次いで、次亜燐酸溶液０．５１１１を添加して残存する
ジアゾニウム塩を分解すると共に、生成していたアゾ化
合物をヒドラゾ化合物に変じた後に溶液の吸光度Ａを３
９０ｎｍの波長で測定する。
ジアゾニウム塩を分解すると共に、生成していたアゾ化
合物をヒドラゾ化合物に変じた後に溶液の吸光度Ａを３
９０ｎｍの波長で測定する。
（４）標準検量線の作製
検体溶液の代りに６％アルブミン溶液を用いて、Ｄ−３
−ヒドロキシ酪酸ナトリウムの０ 、０．２５ 、０．
５ 、１．０ 、２．０及び４．０ｍＭ溶液を調製し、
２％過塩素酸溶液で除蛋白後、上記２）及び３）項Ｉこ
記載の処理操作を行ない、各溶液の吸光度を３９０ ｎ
ｍの波長で測定し、各吸光度値からＯｍＭの場合の吸光
度値（Ａ′ニブランク値）を減じた値をプロットして標
準検量線を作製する。
−ヒドロキシ酪酸ナトリウムの０ 、０．２５ 、０．
５ 、１．０ 、２．０及び４．０ｍＭ溶液を調製し、
２％過塩素酸溶液で除蛋白後、上記２）及び３）項Ｉこ
記載の処理操作を行ない、各溶液の吸光度を３９０ ｎ
ｍの波長で測定し、各吸光度値からＯｍＭの場合の吸光
度値（Ａ′ニブランク値）を減じた値をプロットして標
準検量線を作製する。
（５）定量計算
次式１（こ従って血清中に存在していた総ケトン体量、
すなわちＤ−３−ヒドロキシ酪酸とアセト酢酸の総ミリ
モル量ＥＡ（ｍＭ／ ｌりを算定する。
すなわちＤ−３−ヒドロキシ酪酸とアセト酢酸の総ミリ
モル量ＥＡ（ｍＭ／ ｌりを算定する。
式１ （Ａ−Ａ’ ） ＸＦＡ＝ＥＡ
〔式中ＦＡは標準検量線の吸光度が１．０のときのＤ−
３−ヒドロキシ酪酸の濃度（ｍＭ／ｌ）を意味する。
３−ヒドロキシ酪酸の濃度（ｍＭ／ｌ）を意味する。
〕Ｂ〕血清中Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸の算出方法（１）
検体溶液 血清を前掲「除蛋白」の項に記載の方法により除蛋白し
て検体溶液とする。
検体溶液 血清を前掲「除蛋白」の項に記載の方法により除蛋白し
て検体溶液とする。
（２）検体溶液の発色と吸光度測定
検体溶液０．５ＴＩｌｌ中にクエン酸緩衝液０．５ｍ／
？及びジアゾニウム塩試薬０．５ｍｌを加えて３０℃の
恒温槽内で２０分間反応させる。
？及びジアゾニウム塩試薬０．５ｍｌを加えて３０℃の
恒温槽内で２０分間反応させる。
次いで次亜燐酸溶液０．５７７１１を添加して残存する
ジアゾニウム塩を分解すると共に、生成していたアゾ化
合物をヒドラゾ化合物に変じた後（こ溶液の吸光度Ｂを
３９０ ｎｍの波長で測定する。
ジアゾニウム塩を分解すると共に、生成していたアゾ化
合物をヒドラゾ化合物に変じた後（こ溶液の吸光度Ｂを
３９０ ｎｍの波長で測定する。
（３）標準検量線の作製
６％アルブミン溶液を用いて、リチウムアセト酢酸の０
、０．２５ 、０．５ 、１．０ 、２．０及び４．
０ｍＭ溶液を調製し、２％過塩素酸溶液で除蛋白後、上
記２）項と同様の操作を行ない各溶液の吸光度を３９０
ｎｍの波長で測定し、各吸光度値からＯｍＭの場合の
吸光度値（Ｂ′ニブランク値）を減じた値をプロットし
て標準検量線を作製する。
、０．２５ 、０．５ 、１．０ 、２．０及び４．
０ｍＭ溶液を調製し、２％過塩素酸溶液で除蛋白後、上
記２）項と同様の操作を行ない各溶液の吸光度を３９０
ｎｍの波長で測定し、各吸光度値からＯｍＭの場合の
吸光度値（Ｂ′ニブランク値）を減じた値をプロットし
て標準検量線を作製する。
（４）定量計算
次式２に従って血清中に存在していたアセト酢酸の総ミ
リモル量ＥＢ（ｍＭ／ｌ）を算定する。
リモル量ＥＢ（ｍＭ／ｌ）を算定する。
式２ （Ｂ−Ｂ’ ）ＸＦＢ＝ＥＢ
〔式中ＦＢは標準検量線の吸光度が１．０のときのリチ
ウムアセト酢酸の濃度（ｍＭ／ｌ）を意味する。
ウムアセト酢酸の濃度（ｍＭ／ｌ）を意味する。
〕（５）Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸およびアセト酢酸の標
準検量線の比較 第１図及び第２図はリチウムアセト酢酸及びＤ−３−ヒ
ドロキシ酪酸ナトリウムよりそれぞれ出発して処理操作
を行なって得た標準検量線を示しており、これ等の図に
於いて２直線はほぼ合致することからＤ−３−ヒドロキ
シ酪酸からアセト酢酸への転換率はほぼ１００％であり
、従って次式３に従ってＤ−３−ヒドロキシ酪酸量（ｍ
ＷＶｌ ）を算出することができる。
準検量線の比較 第１図及び第２図はリチウムアセト酢酸及びＤ−３−ヒ
ドロキシ酪酸ナトリウムよりそれぞれ出発して処理操作
を行なって得た標準検量線を示しており、これ等の図に
於いて２直線はほぼ合致することからＤ−３−ヒドロキ
シ酪酸からアセト酢酸への転換率はほぼ１００％であり
、従って次式３に従ってＤ−３−ヒドロキシ酪酸量（ｍ
ＷＶｌ ）を算出することができる。
式３ＥＡ−ＥＢ
以下には、血清にアセト酢酸とＤ−３−ヒドロキシ酪酸
を混合溶解した検体の計算値と本発明方法による実測値
との比較（表１）並びにヒト血清測定例を挙げる（表２
） ３表１） 血清に添加したアセト酢酸とＤ−３−ヒドロキシ酪酸の
各濃度の理論値と本発明方法によって比色定量した実測
値（Ｍ、±Ｓ 、Ｄ）を比較した表であり、両者がほぼ
一致することから、本発明方法による測定精度が極めて
高いものであることが判る。
を混合溶解した検体の計算値と本発明方法による実測値
との比較（表１）並びにヒト血清測定例を挙げる（表２
） ３表１） 血清に添加したアセト酢酸とＤ−３−ヒドロキシ酪酸の
各濃度の理論値と本発明方法によって比色定量した実測
値（Ｍ、±Ｓ 、Ｄ）を比較した表であり、両者がほぼ
一致することから、本発明方法による測定精度が極めて
高いものであることが判る。
（表２）
本発明方法により健常人５１名の血中ケトン体分別定量
を行ない、その濃度を平均値上Ｓ、Ｄ（ｍｕ／ｌ ）で
示したものと、糖尿病患者３例、境界型糖尿病患者２例
について測定した結果を示している。
を行ない、その濃度を平均値上Ｓ、Ｄ（ｍｕ／ｌ ）で
示したものと、糖尿病患者３例、境界型糖尿病患者２例
について測定した結果を示している。
異常高値を示すものは（平均＋２８Ｄ以上）糖尿病３例
中、アセト酢酸、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸、総ケトン体
とも２例にみられ、境界型糖尿病では２例ともアセト酢
酸、総ケトン体において高値を示した。
中、アセト酢酸、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸、総ケトン体
とも２例にみられ、境界型糖尿病では２例ともアセト酢
酸、総ケトン体において高値を示した。
第１図はリチウムアセト酢酸より出発して処理操作を行
なった場合の標準検量線（第２標準検量線）を示すグラ
フであり、第２図はＤ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム
より出発して処理操作を行なった場合の標準検量線（第
１標準検量線）を示すグラフである。
なった場合の標準検量線（第２標準検量線）を示すグラ
フであり、第２図はＤ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム
より出発して処理操作を行なった場合の標準検量線（第
１標準検量線）を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ａ）検体血清を除蛋白し、トリス緩衝液中で３−
ヒドロキシ酪酸脱水素酵素と、ＮＡＤにコチンアミドア
デニンジヌクレオダイド）を加え反応装置し、Ｄ−３−
ヒドロキシ酪酸をアセト酢酸Ｏこ転換し、この際アセト
酢酸への酵素的転換を完全に行うために焦点ブドウ酸及
び乳酸脱水素酵素を加えＮＡＤの再生産を行って反応を
促進させ、次いでこの反応液にクエン酸緩衝液を加えｐ
−ニトロフェニルジアゾニウムフルオロポレートと反応
させてアゾ化合物を生成せしめ、次亜燐酸溶液を添加し
て残存ジアゾニウム塩を分解するとともに、上記アゾ化
合物をヒドラゾ化合物に変じた後、３９０ｎｍの波長に
おけるこの溶液の吸光度Ａを測定する工程と、 ｂ）検体血清を除蛋白後、ａ）で述べた酵素的変換操作
を省き、直接クエン酸緩衝液中で、ｐ−ニトロフェニル
ジアゾニウムフルオロボレートと反応せしめてａ）と同
様の操作を行い、３９０ｎｍの波長に耘けるこの溶液の
吸光度Ｂを測定すする工程と、 ａ９６％アルブミン溶液を用い、Ｄ−３−ヒドロキシ酪
酸ナトリウムの０ 、０．２５ 、０．５ 。 １．０ 、２．０及び４．０ ｍＭ温溶液調製−除蛋白
後、上記ａ）工程記載の処理を行なって、各溶液の吸光
度を３９０ｎｍの波長で測定し、各吸光度値からＯｍＭ
の場合の吸光度値（Ａ′： ブランク値）を減じた値
をプロットして第１標準検量線を作製する工程と、 ｂ９６％アルブミン溶液を用い、リチウムアセト酢酸の
０ 、０．２５ 、０．５ 、１．０ 、２．０及び４
、０ ｍＭ温溶液調製し、除蛋白後、上記ｂ）工程記載
の処理を行なって、各溶液の吸光度を３９０ ｎｍの波
長で測定し、各吸光度値からＯｍＭの場合の吸光度値（
Ｂ′ニブランク値）ヲ減じた値をプロットして第２標準
検量線を作製する工程を具備しており、 式１ （Ａ−Ａ’）ＸＦＡ 〔式中ＦＡは第１標準検量線の吸光度が１．０のときの
Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸の濃度 ｍＭ／Ｌ）を意味する〕 で得た値、すなわち血中総ケトン体濃度より、式２
（Ｂ−Ｂ’）ＸＦＢ 〔式中ＦＢは第２標準検量線の吸光度が１．０のときの
リチウムアセト酢酸の濃度（ｍＭ／ｌ）を意味する〕 で得た値、すなわち血中アセト酢酸濃度を減することに
より、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸を算定することを特徴と
する血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10815378A JPS5844211B2 (ja) | 1978-09-05 | 1978-09-05 | 血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10815378A JPS5844211B2 (ja) | 1978-09-05 | 1978-09-05 | 血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5535232A JPS5535232A (en) | 1980-03-12 |
| JPS5844211B2 true JPS5844211B2 (ja) | 1983-10-01 |
Family
ID=14477283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10815378A Expired JPS5844211B2 (ja) | 1978-09-05 | 1978-09-05 | 血中ケトン体の高感度簡易比色分別定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5844211B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6091998A (ja) * | 1983-10-27 | 1985-05-23 | Yukio Shigeta | 体液及び尿中のｄ―３―ヒドロキシ酪酸の測定法並びにそのための測定試薬 |
-
1978
- 1978-09-05 JP JP10815378A patent/JPS5844211B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5535232A (en) | 1980-03-12 |
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