JPS5836345A - 等電点沈澱させた植物性蛋白質混合物からの７ｓ及び１１ｓ蛋白質の分別及び単離 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は植物性蛋白質の分別及び単離に関する。

植物性蛋白質の機能的及び化学的特性は複雑である。植
物性種子材料は蛋白質分子及び蛋白質凝集体の多様な混
合物を含Ｎｊる。典型的な市販の植物性種子蛋白質抽出
物は２ｇ、７８，１１８及び１５８の蛋白質の混合物を
含有し、これらは超遠心分離により分析するとそれぞれ
ほぼ２５．．９００゜１６０．０００．３５０，０００
及び６００，０００のピーク分子量に対応する。単離物
の工業的製造において、これらの蛋白質成分は４．２〜
４．６の範囲の沈澱叱声調整により植物性種子水可溶物
から典型的に単離されている。その他の植物性種子蛋白
質成分としてはホエー蛋白質がある。単離物製造に通常
用いられる加工条件のためにホエー蛋白質は市販の単離
物製品中には通常存在しない。ホエー蛋白質は。

ｐＨ４，２〜４．６の範囲において、水溶液中和残る低
分子量の水゛溶性り子である。９Ｓと称される画分は、
低いイオン強度の条件下において形成される７Ｓ画分の
二量体であると思われている。典型的な商業的抽出方法
によってほぼ２２％２８，３７％７Ｓ、３１％１１ｇ及
び１１％１５Ｂよりなる蛋白質凝集体がもたらされる。

　′ これらの各種蛋白質画分を単離及び特性化するために、
複雑な実験室的技術が工夫されている。

しかしながら、その様な技術は商業操作には実用的では
ない。分別方法におけるわずかな相違がしばしば単離物
製品の特性及び組成を相当に変化させるとい５ことが゛
観察されている。

ス２ス等は（大豆蛋白質のベプチゼーシヨンーー油不含
荒びき粉からの酸及び塩基による壇の添加或いは無添加
でのＩｆｊｉ素成分の抽出−工ｍｕ８ｔｒ−ｉａｌ　　
＆　　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ＠　　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ
、Ｖｏｌ　　３０　、Ｎｏ、　１２　。

１９３８、　Ｐ、１４１４〜口１８）、告稽−条件下に
おける大豆蛋白質の抽出用の溶解度曲線を開示している
。最少の大豆蛋白質抽出は−４，０〜５．０の範囲〜５
．９の範囲で行うことによる脱脂大豆材料からの淡厚化
７Ｓ蛋白質画分の抽出が開示されている。

濃厚化７Ｓ単喝物画分は抽出した２Ｓ及び９．９８蛋白
質と共ＶＣ７Ｂ”ｌｔ沈澱させる−４．５に抽出物を調
整することにより回収される。英国％軒第１．３７７．
３９２　Ｎ明細書は水溶性亜＊＃塩１重亜硫、酸塩或い
はジチオナイト塩の存在下における水性脱脂大豆抽出物
からの蛋白質単離物の沈ｍｙ報告し【いる。米国％訂第
２，４８９．，２０８号明細書は−６，４〜６．８にお
けるグリシニ／の抽出′％：開示し【おり、それによれ
ば、その抽出物Ｖ次いで二撤化イオウχ用、いてｐＨｇ
４．２〜４．６の範囲に声調整することによりグリシニ
ンを沈澱させ℃いる。

Ｔｈａｎｈ等は（Ｊｒ、ムｇｒ、　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ
、、　Ｖｏｌ、　２４　。

Ｎｏ、６．１９７６、Ｐ、１１１７〜１１２１）、　７
　ｇ及び１１８大豆グロブリン混合物の粗抽出物から稀
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンで緩衝化され
た蛋白質抽出物Ｙニー６．６・に調整するＣとにより１
１８を沈澱させるための予備技術を開示して−する。

酸−沈澱させた１１８　ｆｉ蛋白質遠心分離により回収
し、７Ｓ蛋白質＋その他の蛋白質抽出物は上澄液からｐ
ｉ（４，８の酸沈＃により単離する。７ｇ沈−物を水に
再溶解し、トリスで緩衝化し、ｐＨ６，２に調整して７
Ｓをそれから可溶化する。岬、イオン強度、トリス緩衝
液及び蛋白質濃度が７８及び１１８分別の効率に影響を
及ぼすと報告されている。

７８．１１８分１１ｔについて報告をしでいるその他の
文献としては次のものが挙げられる：Ｅｌｄルー等の「
大豆蛋白質の１１８成分の精製」（ｃｅｒｅａｉ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ、　４４巻、１９６７年１１月、６４５
＼６５２頁）。

Ｂｒ１ｇｇ１　　等の「大豆蛋白質の電気泳動分析」（
Ｃｅｒｅａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２７巻、　１９
５０年５月、　２４３〜２５７頁）。

Ｗｏｌｆ等の「大豆蛋白質のＩＩＳ成分の精製及び特性
化Ｊ　（Ａｒｃｈｉｅｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｉｉｃｓ田、１８６〜
１９９頁、１９５９年）。

米国特許第３，９５３，６１１号明細誓及び米国特許第
３．８７０，８０１号明細書、。

多くの特許に、蛋白質の性質を質性させる目的で植物性
種子蛋白質のＩＩＩＸ処理も又報きされている。植物性
種子蛋白質の＃葉質性に関する特許の具体例としては、
米国特許第１，３７３，６５１号明細書。

同２，３８１，４０７号明細書、同３，８１４，８１６
号明細書。

同２，５０２，０２９号明細書及び同２，５０２，４８
２号明細書などが挙げられる。従来＊累変性は典型的に
は蛋白質混合物について行われてきている。米国特許第
３，８１４，８１６号明細書は各種の用途について植物
性気泡用蛋白ｊｊｉ　（ｙ＠ｇｅｔａｂｌｅ　ａｅｒａ
ｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）　トして及びカゼイン或い
は卵代用物として有用な酵素変性大豆蛋白質な開示して
いる。米国特許第３．８１４，８１６号明細書によれば
、植物性蛋白質を抽出し加水分屏しくｉｌ！又はアルカ
リ）、引続いてペゾシンで処理して酵素的に変性された
植物性蛋白質加水分解物を得ている。この米国特許第３
８１４８１６号明細督を除いては、＃累的に変性さ・れ
た蛋白質の商業的な成功は限られたものである。

本発明は、植物性蛋白質７Ｓ及び１１８の混合物からの
濃厚化７Ｓ蛋白質画分及び濃厚化ｌＩＳ蛋白質画分の製
造方法において５等電的に沈澱させた７Ｓ蛋白質及び１
１ｇ蛋白質Ｙ主たる蛋白質成分として含有する水性植物
性蛋白質スラリーのｐＨｗ５．０〜５．６に調整し、か
つ水溶性塩濃度Ｙ　Ｏ，０１Ｍ〜０．２Ｍの範囲のモル
濃度に調製して十分量の７８ＩＲ白質を抽出して濃厚化
水溶性ｌ５ｉｌＩｉ分及び濃厚化１１ｇ水不溶性画分Ｙ
：得、後者は電を基準で１１ｓｔ’主たる水不溶性蛋白
質として含有して（・るものであって、文に抽出した７
Ｓ蛋白′ｒ４画分乞水不溶性１１８両分−から分離する
ことｔ特徴とする方法を提供する・ 本発明は、粗製４Ｓ及び１１８混合物１￥：有効に分別
するための単純化され商業的に実権可能な手段を提供す
るものである。従来の多段の分別提案と異なり、本発明
の方法は、粗１ｉ１７Ｓ及びＩＩｓ混合物の可動な分別
を一工程で達成するものである。

この方法は実質的に１１８汚染のな−・７Ｓ画分及び濃
厚化１１３画分を与えることができる。これにより７Ｓ
及び１１８画分を更に精製及び純化する必要性が回避さ
れる。

本発明において、７８画分の相対純度−工抽出齢媒の声
及び塩濃度によりコントローｌ−することカーできる。

これは、濃厚化７Ｓ画分を等電点沈澱により回収したい
場合に特Ｋｉｌ要である。高純度の、等電的に沈浸させ
た７Ｓ蛋白質画分は、しばしば回収及び操作が困難な高
度に粘弾性的ガムを形成する傾向を有する。少量の１１
８蛋白質（例えば１５％未満）を含有させることＫより
、等電的に沈澱した７１Ｓ蛋白質はより散扱い及び回収
が容易になる。７Ｓ及び１１８の比率ｔコントロールす
ることが可能であることにより各種最終用途（機能的に
役立つ単Ｉ＠物製品を有効に設計する手段も与えられる
。

本発明による方法は、従来技術の実施と比べて。

分別方法が、ｉ１１！沈澱させた７Ｓ及び１１８蛋白質
の粗製混合物（例えば５．０未満のｐＨで）Ｖ中和塩基
’？＋１加″″ｒることＫよりより中性のｐＨの方向に
調整して７Ｓ蛋白質を抽出することを含む点で異なる。

伝統的な実施方法は典型的に粗製混合物な塩基性或いは
中性Ｐ）（において溶解させ、次いでｒｌ！ｔ’添加し
て蛋白質画分ｔそれから沈澱させることｔ特徴としてい
る。

本発明の１分別した７Ｓ蛋白質及び１１ｇ蛋白質単離物
は通常の分別方法では得られないある種の独特の機能特
性を有する。これらの機能的差異は、本発明において７
Ｓ及び１１８単離物Ｙ：１）ｉＩ製するために用いられ
ている独特の条件の結果であると思われる。

本発明において用、いられる酸−沈澱植物性蛋白質は各
種源泉から得ることができる。蛋白源の具体例としては
、脱脂植物性荒挽き粉（例えば４０％以上の蛋白賞金り
、濃縮物（例えば７０〜９０％蛋白質含貴）、賞金物（
少なくとも９０％蛋白１含ｔ）。

それらの混合物などが挙げられる。粗製７Ｓ及び１１Ｂ
蛋白質単離物混合物（乾燥、＊液及び／又はスラリー形
態）が特に適当な７Ｓ及びＩＩｇ混合物源東材料である
。荒挽き粉或いは濃縮物と異なり、これらの単離物は特
性的に、実質的に不溶性セルロース繊維を含まない。こ
の率Ｉ物を使用することＫよりこれらの汚染物質ｙｕｓ
ｍ分から除去する必要性（例えば１１８溶液の透明化）
、ン避けることができる。

粗ＩＡ蛋白質の植物性蛋白質源の具体例としては。

ワ一種、と５もろこし、小麦、それらの混合物等の油含
有種子材料が挙げられる。脱脂された豆科の種材料１％
に、脱脂大豆材料が粗製１１Ｂ及び１ｓｔｉ合物の源泉
材料として特に適したものである。

７Ｓ及びｔｉｓ混合物の脱脂大豆材料源の具体例として
は、大豆荒挽き粉、大豆粉末、荒挽き大豆、。

大豆蛋白質濃縮物、大豆単離物、それらの混合物などが
挙げられる。

商業的操作においては、粗＠７Ｂ及び１１８率離物混合
物の抽出、その蛋白質の沈澱及び７Ｓ及び１１８蛋白質
の分別ン一体化された雪造操作において行５のが有利で
ある。これは、７Ｓ及び１１Ｂの両画分の回収可能な収
量ン改良する。脱脂植物性蛋白質材料からの水溶性成分
の抽出は、７８及び１１８並びたその他の可溶性蛋白質
及び炭水化物成分を材料から抽出する一水準において行
われる。

７Ｓ及び１１ｇ蛋白質の等電点沈澱−未満（例えばｐＨ
ａ、ｏ　−４，０）　において抽出を行うことも可能で
あるが、抽出−はｐＨ６，０〜１０．０の範囲内におい
て行うのが最適である。抽出は約６．５〜９．０のμｓ
において行うのが有利であり、好ましいのを１約７．０
〜約８．５の場合である。このμｓ範囲は１１８及び７
Ｓ蛋白質分子の生米の特性を保存し、蛋白質抽出物をよ
り容易に分別し、所望の７８及び１１８目的生成物画分
に転換できる形態にする。

又、抽出媒体中には、可溶性成分抽出及び蛋白質抽出物
の保存が引続き行われる分別、蛋白′ｆ４回収及び／又
は蛋白質変性工程に適した形になるようにするための補
助添加剤を４人″ｆるごとも５■能である。

抽出工程において用いられる抽出浴媒対脱脂遣材料の重
量比は、通常５：ｌ５２０：１であり、？：ｌ５−１５
：１の範囲が有利である。最適の１１８及び７８蛋白質
の収量は８：１〜１２：１の範囲内で達成され、約１０
：１の比が７Ｓ及び１１８抽出の破適条件ｌ与える・ 蛋白質抽出物の確定ｇ９特性に影響を反ぼ丁要因とし、
′１：ば声、イオン強度、温度及び亜硫酸イオン含量が
含まれる。各要因が蛋白質抽出物の安定化に及ぼ′１″
影響は、任意の要因或いは要因の組合せが抽出蛋白質に
及ぼす強さＫより異る。

抽出は、７８及び１１　Ｓ　ｆ白質抽出柳の生米のレオ
ロジー特性を保護する熱的条件下に行うのが望ましい。

１１８Ｍ１白′ｊＩは熱的変性に敏感である。高温（例
えば５０℃以上）は比較的短時間（例えば２分間未冑）
であれば１１Ｂ蛋白の夾彌的変性ｔもたらすことなく使
用することができる。一般的に抽出温度は約１０℃〜（
資）℃の範囲が適当であり、約田℃〜４０”Ｃの範囲が
有利である。

１１８及び７Ｓの抽出を完結したのち、水−不溶性成分
（例えば存在する場合にはセルロース材料）を可溶性抽
出物から分離する（例えば−過、遠心分離など）のが有
利である。これにより、以後の蛋白質成分の単離及び回
収ｙ！−実質的にセルロースの汚染もな（行うことが可
能となる。

清澄化された蛋白質抽出物混合物Ｙ：次いで１１８及び
７Ｓ蛋白質を沈澱させるＰＪＣ調整する。沈澱性μｓ水
準は典型的にはｐｌ（４，０〜５．０の範囲である。

殆んどの操作について、水性抽出物！＄ＰＨ４，２〜４
．８の範囲に調整して蛋白質を沈澱させるのが有利であ
り、好ましくは約４．２〜約４．４の範囲で行うのが好
ましい。

沈黛媒体は可溶性抽出物乞含有する。荒挽き粉或いは粉
末などの種子材料抽出物はｏＴ溶性炭水化物及びホエー
蛋白質の両者χ含有する抽出物乞与える。蛋白質濃縮物
及び単離物は０れらの水溶性成分を実質的に含まない抽
出物を与える。その様な水溶性の炭化氷菓及びホエー蛋
白質が存在″″ｆ′る場合には、不溶性成分から可溶性
成分を分離するのが便利である。この分離は常法により
行うことができる。

粗製７Ｓ及びＩＩＳ沈澱物はｐＨ５，０〜５．６の範Ｈ
に調整される。これらの条件下で７８蛋白質は水溶性と
なり、酸沈澱物から抽出されるのに対して。

１１８蛋白質は子供性残渣として残る。７Ｓ蛋白質抽出
物と共に沈澱物から抽出される１１８蛋白賞の量は抽出
溶媒の−及びイオン強度ンコントロールすることにより
制御することができる。０．１　Ｍ塩化ナトリウム溶液
及び７．５ｍＭ重亜（ｉｉＩｅｌＲナトリウムの存在下
におけるｐＨ５，１の抽出により典型的に９０贅より大
の、７８大豆グロゾリンを含有する抽出物が得られる。

７Ｓ蛋白質に加えて、抽出物は典型的には粗製の７８及
び１１８出発混合物の純度に応じて微量の１１８大豆グ
ロブリン、ホエー蛋白質及び／又は可溶性炭水化物を含
有する。

７Ｓ抽出媒体中の水済性塩の存在は、より有効な７Ｓ及
び１１８蛋白質分別を可能に′１′″る。水溶性＠　Ｅ
ｌ）　ｔは、７８蛋白質抽出を可能１ｃ−ｊると共に有
効にｔｉ　ｓ　”ｒ不済性残渣として可動にとどめるに
十分な水準に維持される。一般的に水溶性塩は。

０．０１〜０．２の範囲であるが、約０．０５Ｍ〜約０
．１５Ｍの範囲においてより有効な抽出及び分別が達成
される。水溶性塩の具体例としては、鉱酸及び有機酸の
アルカリ金［塩、アルカリ土類金属塩及びアンモニウム
塩が含まれる。その様な塩としては、ハロゲン化物（例
、塩化物）、酢ＷＲ堪、アジピンｒＩＲ塩、クエシ■堰
、７マルｍ塩、乳酸塩、リン！識＊、＋ｊｙ酸塩、プロ
ピオンＷＲ塩、コハク酸塩。

酒石酸塩、マレイン酸塩、それらの混合物などが挙げら
れる。必要に応じである種のこれらの塩の緩衝効果を利
用して抽出媒体を特定の一水準に維持することが可能で
ある。水溶性塩としては１食用のアルカリ金属塩が約帆
０７５Ｍ〜約０．１２５Ｍ。

好ましくは約０．１　Ｍの濃度で用いられる。塩化ナト
リウムが好ましい塩である０ 又、７８抽出媒体中には、可溶性成分抽出及び蛋白質抽
出物の保存が、引続いて行われる分別。

蛋白質回収及び／又は蛋白質変性工程に対して適当な形
態になるようにするための補助添加剤を導入することも
可能である。単離した蛋白質生成物の分別及び品質を改
良するために少量の亜硫酸イオ７’ｌｌ’ｌＢ抽出媒体
中に添加するのが有利である。

亜硫酸イオン溶液或いは水中において亜硫酸を形成する
二讃化イオウ或いは水溶性塩のようなその帥駆体マ亜硫
散イオン源として用いることができる。亜硫酸イオン濃
度は一般的に約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭの範囲にあり、
最も典型的には約１．□ｍｍ〜約１０ｍＭ範囲内である
。亜硫酸の水溶性塩の具体例としては゛、亜硫嘔プルカ
リ金属（例、亜硫酸。

重唾硫酸、ピロ亜硫酸、メタ重亜硫酸、のカ１］ウム又
はす）　ＩＪウム堰、亜硫酸リチウムその他の水溶性塩
及びカチオン（例、アンモニウム、それらの混合物など
））を挙げることができる。蛋白質混合物の品質１％性
、組成物及び収量は水溶性塩及び亜硫酸イオンの組合せ
により改良される。

本発明のより限定された側面において、７８抽出は、５
．２〜５．４の範囲のＰ）ＩＣ好ましくは約５．３のｐ
Ｈ）において約０．０７５　Ｍ〜約０．１２５Ｍのモル
を与えるに十分な量の水溶性塩な用いて行なわれる（好
ましくは約０．１　Ｍのモル濃度にお一亀て行なわれ、
更に約１．９ｍＭ〜約１０　ｍＭ　Ｏ）　ＮａＨ３ＯＢ
と組合わせることＫよって有利に行なわれ、少な（とも
７５％の７８蛋白質及び１５％未満の１１８蛋白質を含
有する７８抽出物Ｙ与える）。

７８抽出が完了すると水不溶性の１１８残渣を水溶性７
Ｓ画分から分離して濃厚化１１Ｂ単離物沈轍物並びに濃
厚化水溶性７８画分或い１丁抽出物を与える。不溶性１
１８画分は通常の回収技術（例、冷却、デカンテーショ
ン、遠心分離、デ過など）によって分離、回収し、或い
は更に洗浄、水溶液中の再溶解、乾燥（例、スプレー乾
燥、真空乾燥。

凍結乾燥、ドラム乾燥、などの乾燥）、酵素的処理など
に付すことができる。

濃厚化７８抽出物の回収も同様に通常の回収技術により
達成される。必要に応じて濃厚化７ｓ画分を乾燥し、沖
過及び／又は酸沈澱に付し、濃厚化７Ｓ画分を水溶性成
分（例、若し存在するならばホエー蛋白質及び水溶性炭
水化物）から分離し、＃素処理し、単離し、更ＫＭ製し
、或いは百ちに液体バインダーなどとして使用すること
ができる。

７Ｓ及び１１．Ｓ蛋白質を植物性資源から有効に分離及
び単離する簡単な方法を提供する他に、本発明の方法は
、植物性材料から回収可能な蛋白質の量を改良する手段
を提供するものである。こり単離方法は蛋白質率を物の
生米の特性を余り変化させない。１１８及１１ｇ／７Ｓ
ｆｆｉ合吻の単離に用いられる塩の量は廃棄物処理の問
題ｔ″ａけるように十分に低くされており、塩汚染のな
い単離物画分の回収を可能にする。

本発明の別の態様においては、本発明に従って製造した
７Ｓ及び／又は１１８単離物をペプチドヒドロラーゼで
酵素的に変性させ、酵素変性蛋白質単離物ｔ＋１！供す
る。ペプチドヒドロラーゼはＩｌｌ命名法”　ＥｎＥｙ
ｍｅ　Ｎｏｍｅｎｃ４ａｔｕｒｅ”（１９７２年）の、
３．４において同定されており、ベプチドース（エキン
ペ！チダーぜ３．４．１１〜１５）及びプロティナーゼ
（３，４，２１〜２４）を含む。各種の機能的に異なっ
た酵素変性単離生成物は単離画分を単離物の機能的、化
学的、物理的特性を変性するようにペプチドヒドロラー
ゼで処理して製造することができる。ゾロティナーゼの
代表的なものとしては。

ヘフシン、ノリ悩ン、トリプシン、フィシン、酸ゾロテ
イナーゼ、それらの混合物などが挙げられる。３．４．
２３の酸プロティナーゼ類１例えばペプシｙＡ（３，４
−２３，１）、ペプシンＢ（３，４゜羽、２）及びペプ
シン（３，４，２３，３）、キモシン（３，４，２３，
４）、カテプシンＤ（３，４，２３，５）。

アスペルギルス酸ゾロティナーゼ（３，４，Ｚ３．６）
。

ペネシラムジャンセイネラＡ　（Ｐｅｎｅｃｉｌｌｕｍ
　ｊａｎｔｈｅ−ｉｎｅｌｌｕｍ）　ｒＲプロテイナー
ゼ（３，４，２３，７）、簿冊プロテイナーぜＡ（３，
４，２３，８）、ライザ／臂スＷ！Ｉ　（Ｒｈ１ｚｏｐ
ｕｓ　ａｃｉｄ）プロテイナーゼ（３，４゜２３．９）
、エンドチア酸ゾロテイナーゼ（３，４゜２３　、１０
　）　、それらの混合物などを用いて４Ｌ離画分ン変性
するのが有利である。ペプシンは特に有効な酵素変性剤
であることが見い出された。

Ｎ累変性の主たる目的は、率※吻の嘲能袴注馨変化させ
ることである。反応条件（消化条件）。

酵素及び基質の選択並びに加水分解の程度は早離物画分
九機能的特性を付与するように最適にコントレールする
Ｃとができる。ＷＩ累的変化の８度に寄与する要因とし
ては、単離物の組成、特別の酵素、その加水分解の態様
及び任意の与えられた単離画分を変性するために用いら
れる加水分解の条件などが含まれる。７８対１１８の比
ｔコントロールすることＫより、酵素変性された単離生
成物の組成的及び機能的特性を変えることができる・単
離物な変性するために用いられる消化温度。

蓼、その他の条件は、酵素及び変性される基質の加水分
解の必要条件に応じて極めて異なる。酵素加水分解の必
要条件は商業刊行物及び％軒文献により得るこ午ができ
る。米国特許第３，８１４，８１６号明細曹により開示
されている酵素条件が１１８単離物Ｙ大豆蛋白質ホイツ
ピン７剤に転換するのに適当であることが見い出された
。本発明の分別及び単離法Ｙ適用して広範な用途に適す
るようにした広いスペクトルの＃素質性単離物を製造す
ることができる。

３．４．２３ｇプロテイナーゼについては、消化一度及
び−範囲は典型的には約５℃〜ω℃（好ましくは、約あ
℃〜約４５℃）及び約ｐＨ１〜約ｐＨ５であり、約ＰＨ
１，２〜約ｐＨ２，５が好ましい。

消化した単蟻物は、その液状状態において亘接釣に回収
してもよく、或いは更に加工に付してもよい。酵素処理
固体の回収は、処理物を脱水し、或いは適当であるなら
ば、ｐＨ［整により酵素変性し１こ単離生成物を酵素処
理物から沈澱させることにより、達成される。その様な
沈澱或いは凝固された酵素処理物は次いで通常の回収手
段により（例、濾過、遠心分離など）及び／又は精製技
術（例、水中における洗浄及び再溶解）、乾燥（例。

ドラム乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、スプレー乾燥など）
Ｋより処理物から分離され、所望の最終生成物Ｙ与える
。

本発明において、７８及び１１８の分析は、＋１！ｉ１
分のａｍ、ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリル
アミドゲル電気泳動プロフィールに僅づいて行われる。

個々の種類の定量は、ＳＤＳゲルプロフィールの濃度計
による走査により得られる。全７８グロブリン画分は、
ターｙ　（Ｔｈａｎｈ　）等（１）　（Ｂｉｏｃｈｅｍ
。

Ｂｉｏｐｈ）ｒｓ、　Ａｃｔａ、、　４９０．１９７７
年３７０〜３８４　）に記載されているようなアルファ
、アルファ及び（−タサブユニットの合計である。全１
１８大豆グロブリン画分も同様にＣａｔｓｉｃｎｐｏｏ
ｌａｓ等の（Ｊｒ、　ｓｃｉ。

Ｆｏｏｄ　Ａｇｒｉｃ、、２２．１９７１年、４４８〜
４５０　）　ＫＪ：り説明されているよ５な酸性及び塩
基性サブユニットの合計である。７＄及び１１８大豆蛋
白賛はＴｈｕｍｂ等の方法（Ｊｒ、　Ａｇｒｉｃ、　Ｆ
ｏｏｄ　Ｃｈｅｍ、　２４、（１９７６年）１１１７〜
１１２１　）により率−され、８Ｄ８　／リアクリルア
建ド、ゲル電気泳動の標準として使用された。

８０Ｂ　／リアクリルア電ドゲル電気泳動は、Ｌａｅｍ
ｍｌｉ　（Ｎｉｔｕｒｅ、（Ｌｏｎｄｏｎ）２２７．　
（１９７０）６８０〜６８５）により説明された方法に
従って垂直スラブセル（米国、カリフォルニア州、リッ
チモンド。

Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社の２２０
型）及び直流電源（ＬＫＢ、Ｂｒｏｍｍａ、８曽ｅｄｅ
ｎ、２１０３型）を用いて行った。分離及び積層ゲルは
それぞれ１０．５％及び４．５％アクリルアミドであっ
た。大豆蛋白質試料及び標準試料１ｇＩ：ｉ、♂ｍ／ｖ
　Ｓｎ２．１０％ｗ／ｖグリセ０−ル。

２％Ｗ／Ｖ　２−メルカゾトエタノールな含有する、０
．０６５ＭトリスＨＣＩ緩衝液、ｐ）１６．８中に＠解
し、１００℃において５分間加熱した。ゲル（２）は３
３ｍムチ１．５時間運転後、８０ｍＡにおいて１．５〜
ＺｆｌＶＩ間運転した。分子量検量蛋白質標準試料は、
ｐｈａｒ−ｍａｃｅａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｍ
　（米国、ニュージャージ州ｐｔ＠ｃａｔａＷ１７．　
ＬＭＷキット）より得た。

蛋白′Ｊｉｉは２−プロパノ−ルー酢酸−水（２５−１
０−６５Ｖ／Ｖ／Ｖ）中の０．１％ｗ／ｖ　Ｃｏｏｍａ
ｓｓｅ　ＢｌｕｅＲ−２５０中において染色した（ｗａ
ｎｇ−Ｋ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１６％（１９７７）１８５７〜１８６５頁）。脱色はス
ラブ拡散脱色器（米国、カリフォルニア州、リッチモン
ドＢ１ｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社の２２
２型）内”において、２−　プロフィールー　酢ｆｌｉ
ｔ”　水（１０−１０−ｍ　Ｖ／ｖ／Ｖ）中において行
った。脱色されたゲルは濃度計（’Ｅ−ＣＡｐｐａｒａ
ｔｕｓ　Ｃｏｒｐ、　ＥＣ−９１０型）及び二重流路積
分オムニスクライブ（ＯｍｎｉＳｃｒｉｂｅ）記録針（
米国、テキサス州、オースチン、　１ｉｏｕｓｔｏｎＩ
ｎｌｔｌ”ｕｍｔｎｔ１社製の５０００型）を用−１て
走査した。

大豆蛋白質の分布率は下記式により求められる如（，７
Ｓ或いは１１８大豆蛋白質凝集物ン表わす個々のサブユ
ニット種の面積の合計を走査の全面積で除して１００を
かゆ曵計算した。

（式中、α′、α及びβはＴｈａｎｈ等により定義され
た７Ｓダロプリンの主たるサブユニット檜の面積を表わ
し、Ａサブ及びＢサブは☆々Ｃａｔｓ１ｍｐｏｏｌａｓ
等ニよす定義されｚ１１Ｂグロブリンの酸性及び１基性
サブユニツト領域な表わ′ｆ′）。

以下、具体例に工り本発明を例示する。

例１ 粗製水性蛋白質抽出液を先ず、１重量部（１ｐｂｗ）の
中程度の大Ｉさの大豆ｌ−荒荒挽粉【脱脂（１％油分’
）　、　６ＯＮ８Ｉ、　Ｆ）３．６％蛋白質分大豆’Ｉ
″Ｇｒｉｔｓ　（中径）、Ａ、Ｅ、　８　ｔａｓｔｙ　
ＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇＣＯｍｐａｎ）ｒ　（米国
、イリノイ州％Ｄ＠ｃｉｔｕｒ）　］を、１１４重量の
水（４０℃、及び２５％ＮａＯＨでｐ）１８．ＯＫ調整
）中で低速で攪拌しながら１時間スラ１３−（ヒさせて
調製した。使用済の荒挽き粉を抽出液力・ら。

５６５１において遠心分離により、キャン／セスライナ
ーを含有するａ３．ｚｍ（ｒｙイｙチ）［ｌｆ）穿孔Ｉ
−ルヘッドを用いて除去した・抽出液をＷｅｓｔｆａｌ
　ｉａ　（８Ａ　−１型）遠心分離機に付し、懸濁固体
が帆２％未満の清澄化抽出液を得た。この清澄化抽出液
ｈＬ　６２．７％（Ｎｘ６．２５）の１−グリッド蛋白
質を含有していた。

この清澄化抽出液（ｐＨ８，０〜７．８）を低速で連続
的に攪拌しながら１８％塩酸で−４，３に調整し亀等電
的に沈澱した凝固蛋白Ｙ４３．２ｃＫ（１℃インチ）の
固体−−ル遠心分離機を用いて５６５　Ｘ　ＩＩにおい
て遠心分離で単離した。

この等電点凝固蛋白（１５部、　ｄ、ｓ、ｂ、）’ｔ’
璽量基量基準（８Ｓ部）Ｋ分散させた。７．５　ｍＭの
溶液ン生成する重亜硫酸ナト、リウム及び０．１Ｍの溶
液を生成する塩化ナトリウムを添加し、スラリーン（資
）分間２１．５℃、ＰＨ４，５において攪拌した。この
スラリーの声を２５％水酸化ナトリウムで−５，３に調
整し、ｎ″Ｃにおいて１時間低速で攪拌し、濃厚化７Ｓ
画分ｔこのスラリーから抽出した。可溶性抽出物（即ち
、濃厚化７Ｓ蛋白’り′％：次いで４３．２１２１（１
℃インチ）固体ぜ一ル遠心分離機を用いて５６５）ｌに
おいて遠心分離で不溶性残渣から分離し、ＣＯ抽出液Ｙ
　Ｗｅｓｔｆａｌ　ｉａ　（Ｓ　Ａ　−１ｆＭ　）遠心
分離機中Ｗｃおいて清澄化した。このＰＨ５，３の抽出
液は８９．０％の７６を含有し、残部は微量のホエー蛋
白質及び１１８であった。分離された不溶性両会は、い
ずれも全蛋白質基準で７０．５％１１８及び２９．６％
７Ｓ’？ｔ−含有していた。

例２ 本例においては１例１の粗製率峻物から濃厚化７８を抽
出するために用いられる抽出溶媒の声が各種ｐＨ水準に
おいて行なわれた。抽出点の、抽出液及び不溶性残渣中
の７Ｓ及びＩＩＳの濃度（及ぼす影響ン下記に示す。

濃厚化７Ｓ可溶性成分及び不溶性１１８９４．９　　　
　　　５．１　　　　　　微量８８．７　　　　　　５
．２　　　　　　８．９７８．２　　　　　　５．３　
　　　　１３．３６６．９　　　　　　５．４　　　　
　２３．４５７．１　　　　　　５．５　　　　　３２
．１４６．６　　　　　　５．６　　　　　４１．７不
溶性残渣 ４０．０　　　　５．１　　　　４５．８４５．５　　
　　５．２　　　　４３．４２６°３５・３　　　　６
６．６ ２１．４　　　　５．４　　　　６９．７２３．１　　
　　５．５　　、　　６０．３元の粗Ｍｐｋ１４．３ ３７．４　　　　　　　　　　　　　　　５１．０上記
の如く、ｐＨ５，１〜５．６の範囲の一水準がより散性
になるに従って、最大の７８抽出物の純度が得られる。

上記の如く、７８中の不純物は主として１１８の汚染に
より生ずる。５．３を超える一水準においては、相当に
多量の１１８が沈澱物から抽出される。しかしながら、
不溶性残渣の１１８純度は抽出をより高い一僅において
行うことにより、７Ｓ蛋白質の可溶化がより完全になる
ので改良される。必要に応じ【不溶性残渣は、通常の分
別及・び単離技術により更ＫｗＩ製して１１部純度を改
良することができる。

例３ 例１の不溶性１１８　Ｋ富んだ画分を大豆蛋白質ホイツ
ピング剤に転換した。酵素変性は、１５部固体の不溶性
１１１９単履物（ｄ、ｍ、ｂ、−水重量基準）、０．５
％ペプシン（固体基準、　ｉ　：　１０，０００活性）
及び０．５％重亜硫酸ナトリウム（蛋白質乾燥固形分電
ｔ）Ｙ：含πする水性混合物Ｙ：ｐＨ１，：ｌｃ調整し
、溶解７Ｓ及び１１８蛋白質混合物！３７℃において４
時間＃素処理して行なわれた。この酵素処理作用は・７
Ｓ及び１１Ｓ蛋白質の両方を変性した。

酵素変性した生成物を処理液から、ｐＨ１，３において
８０’Ｃで１時間加熱した後ｐｉ（Ｙ２５％水酸化ナト
リウムで５．１に調整して分離した。Ｃの加熱工程は、
未変性大豆蛋白質を変性し沈澱させる。ホイツピング剤
の機能特性及び収率はこの加工工程により幾分改良され
る。

不溶性画分を、可溶化された酵素変性濃厚化ｌＩＳ単離
物から、フィルター助材の存在下において濾過により分
離し、スプレー乾燥して酵素変性大豆蛋白質ホイツピン
グ剤χ得た。

ホイツピング剤の機能同性能は全ての試験用途において
米国％肝第３，８１４，８１６号明細畜に記載されてい
るものに匹敵するものであった、しかしながら、この大
豆ホイツピング剤は、米国’ｗｒｆｇ３．８１４，８１
６号明細書のホイツピング剤よりも改良された風味及び
色特性を有するものであった。

上記方法は、大豆蛋白質ホイツピングｊ！ｒｉＪＩｌｔ
造の金工ｔｔ’有意義に単純化するものである。１１ｇ
混合物の１１累変性により、ｃｉＩ素変性率臘物の風味
及び色を改良するより温和な熱的条件下で製品を製造す
る手段が与えられる。又、この大豆ホイツピング剤の製
法により、廃棄物処理及びエネルギーの必要性も大賞的
に減少される。同様に、回収収率及び蛋白質変性の効率
も咄記米国Ｉ￥ｆｉｆｆ第３．８１４，８１６号明細書
中の夾施例において得られるものよりも優れている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、植物性蛋白質７Ｓ及び１１　Ｓ　ｆ）混合物からの
   濃厚化７Ｓ蛋白質画分及び濃厚化１１８蛋白備画分の製
   造方法において、等電点沈澱させた７ｓ蛋白質及び１１
   ８　＊白質を主たる蛋白質成分として含有する水性植物
   性蛋白質スラリーのＰＨ１１：５．０〜５．６に！Ｉｌ
   整し、かつ水溶性塩濃度’＆　０．０１　Ｍ〜０．２Ｍ
   の範囲のモル濃度に調整して十分量の７８蛋白質を抽出
   して濃厚化水溶性７ＳＩＩｄｌｉ分及び濃厚化１１ｇ水
   不溶性画分を倚、後者は電量基準で１１８を主たる水不
   溶性蛋白質として含有するものであって、更＃／Ｃ１抽
   出した７ｓ蛋白質画分を水不溶性１１ｓ画分から分離す
   ること１ｈ：ｔ＃黴とする方法。 乙種物性蛋白質が大豆蛋白質である、特許請求の範囲第
   １項に記載の方法。 ３、水溶性塩濃度が０．０７５Ｍ〜０．１２５ＭＫ１［
   整される、特Ｉｆｆ請求の範囲第１項又は第２項に記載
   の方法。 ４、水溶性塩が塩化ナトリウムである、特許請求の範囲
   第１項〜第３項のいずれか一項に記載の方法。 ５、水溶性塩に加えてスラリーが更に０．５ｍＭ〜２５
   ｍＭの亜ｗ＊イオンを含有する。　４１１ｆｆ−請求の
   範囲第１項〜第４項のいずれか一項に記載の方法。 ６．７Ｓ、８分が５．２〜５．４のｐｉ（において抽出
   される、特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれか一項
   に記載の方法。 ７、等電点沈澱させた混合物から十分量の７８ｆｉ白質
   を抽出して（全７Ｂ１２白質及び１１８ｊ［白質・重量
   基準で）少なくとも７０　ｇ　ｉｉ％の１１８　ｆｉ蛋
   白質含有する水不溶性残渣ｔ／得る、特許請求の範囲第
   １項〜第６項のいずれか一項に記載の方ム８、水溶性塩
   に加えてスラリーが約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭの亜硫酸
   イオンを含有する、特許請求の範囲第７項に記載の方法
   。 ９、水溶性塩が塩化す）　１７ウムであり、亜硫酸イオ
   ン源が重亜硫酸ナトＩＪウムである、ｆＰｉＦＦ請求の
   範・囲第８項に記載の方法。 １０、全１１８及び７８東量１準で少なくとも８５重量
   ％の７Ｓｆｉ白質を含む濃厚化７Ｓ画分が、抽出した７
   Ｓ蛋白質画分から回収される、特許請求の範囲第１項〜
   第９項のいずれか一項に記載の方法。 １１、−を調整するためにスラリー＜ｆｊ＆加する塩基
   の量が、所定の７８蛋白質及びＩＩｓ蛋白質の罰金を有
   する７Ｓ画分を与える特定の水準に維持される、ＩＩＩ
   ｆＩ？！ｆ請求の範囲第１項〜第１０項のいずれか一項
   に記載の方法。 １２、回収された蛋白５Ｒ画分の少なくとも一方がペプ
   チドヒドロラーゼを用いて酵素変性される、！ＩＦＰｆ
   ｌｆ求の範囲第１項〜第１１項のいずれか一項に記載の
   方法。