JPS5831997A - 培地と殺菌剤を含んだ体液の培養法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質Ａ−曲の殺菌？ｉ１．１の抑制因子を
含んだ体液標本中の生物ｒ３性のｉ　ｒｒ　９：ｉｌ　
（’　）ための１ジξ良型方法に関ｉ”　６０特に本発
明は殺１ｉ＋’１削の抑制因子を砂起することのできる
物り′［の有効１．［イどニーＣ？’ｒ　＋ｉ′１１１
１￥１の改良ハ・！培地に関する。

殺ｉ、”ｆ　ｆ＋’Ｊの有効性にもかかわらす両皿（血
液中のバクテリア）などのような＋ＯＩｔ俟中の生物ｌ
６性はｉｉＬ”７な間ｙＱ　ヲｌ−Ｑ　Ｌ　−（イロ。

ｊＩ！ＶＣＴｒｉ血ＪｉＥＣｔ）２．Ｈｉ者カラ有害生
物を迅速に分離することは、ｔＢ者が抗生物質を投与さ
れている時にはより困難となる。そしてその抗生物質は
血液中のバクテリアとともに培養液に移されしばしば生
物の成長を阻害する。しかし、画面症の進行過程におい
て、できるだけ早く？１７．入された生物のいろいろな
殺菌剤に対する感受性を決定し、同定を行なうことばｊ
ｊｊ：　９である。

従来の培養技術を混入された生物を同定するために利用
すると、試験標本採取の前の殺耐剤投与により、バクテ
リアの成長を抑制することができる。このようにして有
害生物の分離と同定を妨げている。抗生物質が存在しな
い血液中でさえも血７＃、血しようあるいは赤血球の中
に含まれる抑制因子のために有害生物の分離は、更に余
分な潜伏期を必要とするであろう。

尿、髄液、膿瘍滲出液、血清および腹膜液等柚々の体液
標本が試験されているにもかかわらず同様の問題が存在
している。

普通のバクテリアの検査方法は、培地に体液を５　ｒｕ
ｌ注入し、バクテリアの成長のしるしである混濁Ｉ！、
〔が現われるのを待つ。抗生物質療法を受けてきた患者
は発酵が始寸った時、体液中に抗生物質が存在している
であろう。バクテリアの成Ｊ４は抗生物質が存在するこ
とによって阻；グされ、バクテリアの分離を１４目はメ
ｈらせることになるであろう。

最近、血液中の生物活性の探知のだめの放射線技術が１
４ｖ床検査で行なわれるようになり、１１ａ業規模で応
用されるようになった。その方法では、血液標本は炭素
源にｃ　１４を含む）Ａ当な培地に注入そのような過程
は１９７２年７月１■１１発行された米国特許第３．６
７６，６７９号および’　ＥａｒｌｙＤｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ＧｒｏｗＬｈ　Ｉｗｉ
ｔ＋１Ｃａｒｂｏｎ１４Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｇｌｕｃｏｓ
ｅ　Ｉ’　Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ　＋　　９２　＋　Ｎｏ
、　ｌ　＋ｐｐ、１５４−５（１９６９年１月）　；　
’　Ａｌｌｔｏｍａｔｅｄｌｌｋｄｉｏｍｅｔｒｉｃ　
　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　　ｏｆ　　１３ａｃｔｅｒｉａ
ｌ　　Ｇｒｏｗｔｈ　　１ｎＢｌｏｏｄ　Ｃｕ１ｔｕｒ
ｅ　＋　’　Ｊ、　Ｌａｂｓ、　ＣｌＩｎ、　Ｍｅｄ、
　＃　　７５　＊Ｎｏ、３．ｐｐ、５２９−３４（１９
７０年３月）；９Δｕｔｏｍａｔｅｄ　　Ｌ（ａｄｉｏ
ｍａｔｒｊｃ　　Ｉ）ｅｔｅｃｔｌｏｎ　　ｏｆ　　Ｔ
３ａｃｔｅｒｉａｉｎ　　２，９６７　　＋３１ｏｏｄ
　　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　　＋　　’　　Ａｐｐｌｉｅｄ
　　Ｍｉｃｒｏｈｉｏｌｏｇｙ＋２２、Ｎｏ、５−　ｐ
ｐ、８４６−８４９（１９７９年１１月）１・１．０文
献にも記述されている。迅速なオートメーション化され
た製、ａ工程を実施する商業規模の器（・凌が、登録商
標ｎＡＣＴＥＣ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ　）の１：で利用される。しかし、この方法は
抗生物質：１・ｊＪ：び抑制因子が培地に存在しない場
合に、バクテリアの存在な迅速に決定するために利用す
ることのできろものである。この方法は培養生物が培」
１１Ｌ中に抗生物質や他の抑制因子の存在下で培養され
ている時には効果がない。

抗生物質はＢ１″Ａクロマトグラフィーによって微生′
（メかも分ｋ（、できる。しかしこれらの手順は分離技
術の複雑さと試験培養物が高滴度で汚染されているため
、実用的でない。

米国’ｉ’＞　＋ｔ’Ｆ第４．１７４，２７７号におい
てＭｅｌｎｉｃｋ、（゛）は体／［ａ水中のバクテリア
からの抗生物質の分νｉｌｔ方法を明らかにしている。

Ｍｅｌｎｊｃｋの特許の方法によれば抗生物質は、洗浄
剤処理した樹脂組織の混入した体）電標水中から選択的
に除去される。

洗浄剤は（・ｉ・Ｉ脂組織に抗生物質のし・１沢性な与
え、一方では淫吏出ｔｌＸ’Ｐにバクテリアが残１′ｆ
・できるようにする。このようにしてバクテリアはＩＪ
シ生′１勿仙かも分離される。そして、バクテリアを含
む浴出体液抹本は培地に注入され培養される１゜ １ｖｌｅ１旧ｃｋ等の特許の方法は血液標本中の抗生物
質の抑制因子の汚染の問題１ど克服する場Ｉ・に便利で
ある。その方法は従来の培養方法の１］ＩＳに体液標本
を扱う分離操作手順を）ｊｉ□人したものである３゜現
在のオートメーション化した発酵装置が行なっているよ
うに、多数の標本を扱う場合、その分離操作手順は特に
厄介であり汚染の原因となる。

それゆえ、培養生物に培地を与え、抗生物質あるいは抑
制物質の分離手段を行なう心安ｊｒ　＜、体液標本中に
混入した生物の検出をすることが本発明の主要な１］的
である。

培地中の生物の成Ｊを期間中に体液標本から殺凶１１す
化分離する手段を１是供することは本発明のも５１つの
目的である。

培地中で成長中の標本の微生′吻個体群の物質交代に重
大な影響を及ばずことなく、混入された体液標本から抗
生物質を分離する手段を提供することもさらに本発明の
目的である。

体液標本中に含まれる抗生物質および他の抑制因子を分
離し、一方では標本中の微生物の成長にほとＸ７ど影響
を及ぼさない樹脂を利用する方法を提供することもさら
に本発明のもう１つの目的である。

標本の微生物個体群に影響することなく、体Ｉ＆標本水
中微生物の阻害物質を分離する樹脂を提供することも本
発明の更にもう１つの目的である。

本発明は、混入した体液標本中の殺菌物質を分離できろ
物質の有効量を含む微生物培養用の培順に関する。本発
明の殺菌物質を分離する物質は抗生物ｊａや他の抑制因
子の分離能力によって特色づけもれるイオン交換樹脂お
よび非イオン吸着樹脂である。

イオン交換樹脂および吸着樹脂は体液標本から荷１枕し
た抗生物質な吸Ａすることで知られているが、それらが
混入したバクテリアの迅速な分離と同定を行なう目的に
拓いて、バクテリアの混入した標本から抗生物質を除去
するｌ：１足のゆく手段であることは立証されていなか
った。１；λ本を含む抗生物質な処理するためにイオン
交換樹脂１，１よび吸着樹脂を利用することが成功しな
い理由は、抗生物質および混入した生物を含む標本を樹
脂に通すことにある。終結の＋ｌＡ（Ｗ’ｉは抗生物７
′（のない物質だけでなく混入されたバクテリアもまた
４Ｊ　ｌ１ｔｒによって十分に除去されるのである。

前、水の理由のために体液標本からｒＪＩ′、大したバ
クテリアを除去せずに抗生物質や１１μの抑制因子を除
去できる樹脂を提供するためＶこ、イオン交換樹脂およ
び／あるいは非イオン吸着４ｆｆ、Ｉ脂の改良に多くの
研究がなされてきた。米国ｔ１ν１〆Ｆｅ（％／１，１
７４，２７７号においてγ、’Ｉｅｌｎｉｅｋ等は体１
１に標本から抗生物質および他のバクテリアの抑制因子
を−１＜択的腺去ずろ樹脂を改良した成果の一例である
。

培地から養分および抗生物質のみならず（１６人Ｌ７た
微生物までも除去してしまうイオン交換樹脂」ｄよび非
イオン吸着樹脂の効果のために、体液を含んだ培地中の
微生物および栄養分を同時に除去ｔ、てしまうことなく
培地中から抗生物質と、他の抑制因子を分離することは
工柴的には不可能と思われていた。

本発明によって、イオン交換樹脂と非イオン吸者何脂は
、培養生物の成長に有害な抗生物質や他の抑制因子を効
果的に分離すると同時に、培地中に混入された微生物の
成長能力を阻害することなく、体液標本の培養中に存在
し得るとい５ことが発見された。標本中の微生物の迅速
な培養と分析は、抗生物質や他の抑制因子を除去する個
々の手段をとら７．ｒ、＜ても、これによって可能とな
った。

本゛迅明によれば殺菌剤を分離できる物質は、安定した
培地を供給するために加えられる。その安定（５た培地
は、標本中の微生物の成長を妨げる抗生物質を除去する
一方、微生物を混入し、抗生物′尚および他の抑制因子
で汚染された体液標本を培つ！（−するために使われる
。

本発明で〕ｒ？力１シ中の殺ＩＷ　ｈｌｌを分＋ｊ、ｆ
ｌｌするためＶｃ醍用されろ物質（佳、殺菌１ｉｌｊ可
・・吸１１仁ｆイ）ことで知ら）れているイｆｆＪ　１
１旨ル）ろいは−亡のｉ？ｌｌノ′ト合ゎ、（（−で１
、（リイ）。・二の応用を而して本番１ヅ１のイり脂に
、１：る１Ｊ＋グツ、’７（ｉ５．１＋１Ｍ生物の成長
を阻害すること４にく、微生物の＋ノーｉ、、にの伸１
ｂ１］因子を分離する４Ｉｙ４脂のｒ＋ｉ？力に関すイ
蜂−１Ｊ〕λ−１−〕れイ）。

混入したイ叔生物を含む培」１ム中。ｔｌ　（ｒ：酎し
１：する仙の′吻賀（こおよｌχずｈｆ　ｆｌｉｔの物
’（’Ｉｊｊ、旧影響は、を夕生物の成長の抑１１ｉ１
１因子が１１Ｊ、生物の成１七′、１１簀イ（（７ない
限り、重要ではＺｃい。

特に、本発明の火力１′Ｑに１リノ７１、る１４１　Ｉ
Ｎｒは、イオン父換情ｊｌｉ’ｒおよび不機能共合体吸
Ａ、ｔ　４σ１脂を５〜む。

本発明の東論に使用される樹１１ｉｒｆ、ｒ、翻脅１１
１）イロＪコニび付加ｉｆ合により１１ニ成したＪＨ（
傾’ｔむ合成・ｒオン交換樹脂および不）ぺ能弁イオン
吸着４ｉｉＩ　Ｊｌｌを：’；ｍ′寺ニシヒニルヘンゼ
ント架橋結合１．　ｌ；−ポリスチレン樹脂が使われる
。本発明ではナトＩＪ　＋ンム、水素、アンモニウムの
陽イオン交換４ｄＪ脂が特に使用に適しているというこ
とがわかった。次Ｌ／）、１：う／「陰イオン交換樹脂
が効果的であることがわかった：ｎＩｏ　−ＲＡＤ　Ｌ
ａ１）ｏｒｏｔｏｒｉｅａ　（バイオ−ラッド研究所）
の７３１０−ＲＥＸ ＡＧ　　５０Ｗ　Ｘ２、Ｘ４、Ｘ６、Ｘ８、Ｘ１ｏ１Ｘ
工、およびＸ□６ＤＣ）ｖｔ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃ
ｏ＋＋＋ｐａｎｙ　　（ダウケミカル社）の１）ＯＷＥ
Ｘ ５０（ｖ−Ｘ２、Ｘ４、Ｘ８、Ｘ工。、Ｘ１２およびＸ
１６Ｆｉａｌｏ＋ｒ　　５Ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　　Ｃｏ
、　　（フイツシャーツイｔイフイツク社）の１Ｌｃｘ
ｙｎ　１０１ これらはすべて８０３をもった強酸のポリスチレンＪＩ
ＶＩ　ｌ１ｉｉ’である。陽イオン交換樹脂は、Ｒｏｈ
ｍ　＆　Ｈａａａによって製潰されたＸＡＤ樹脂および
ＢｉｏＲａｄで刃！造されたｓ　Ｍ樹脂などのような不
機能樹脂を組み合わせると便利である。

、１．ｔｘ化物、ギ酸塩、酢酸塩および水酸化物の陰イ
オン交換樹脂は、一般に適していることがわかった。特
に、次の登録商標で売られている吸着樹１１ｉ「と塩化
物陰イオン交換樹脂とを組み合わせると本発明の実施に
効果があると認められる：１’）ｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　ＣｏｍｐａｎｙのＤＯＷＥＸ　Ｉ　−Ｘ８、Ｄｉａ
ｒ＋＋ｏｎｄ　Ｓｈａｍｒｏｃｋ　ＣｏｍｐａｎｙのＤ
ＵＯＩ、ＩＴＥ　Ａ−１０９Ｒｏｈｒｎ　＆　］（ａａ
ｓ　（′１）ＡＭＢＴ’ＣＲＴ、ＩＴＥ　　ＩＲＡ４０
０、これらはずべて、ポリスチレン第四級アンモニウム
塩基をもった強塩基樹脂である１、 Ｄｉａｍｏｎｄ　　Ｓｈａｍｒｏｃｋ　　Ｃｏｍｐａｎ
ｙのＤＴ、ＩＯＴ、ＴＴ１６　　　Ａ＝７Ｒｏｋｗｎ　
＆　）ｉａａｓのＡＭＢＥＲＪ、Ｔ’ｌ”ＥＩＲ４５こ
れらは弱均基で第三級アミンなもつイ・１１類である。

陰イオン交換樹脂は、好ましくは、［Ｌｏ１１ｒ＋１＆
　ｌ１ａａｓのＸＡＤ　樹脂およびＩＨｏＲａｄのＳ　
Ｍ　ｈ’ｔｊ　Ｊｉｆｆのような不機能樹脂なイ・！［
み合わ１ぜＣｆ１１４われる。ｌｌνにＸＡＩ）４　（
１１Ｊ　Ｊｌｌ７は、スチレンと４ジビニルベンゼンと
の不機能共重合体である。

本発明の実施において、＋ＭＪ脂の細孔の大きさは重要
でない。一般に、樹脂は、その内部なバクテリアが通過
するような十分な細孔の広さがない。

しかしながら、ある種の樹ＪＩｉ７は、内部に、大きな
分子を通過させるような内面をもった細孔１１４潰をも
つ。そのようなにｔｌ１孔をもった樹脂は、ｒｉ：ＩＩ
＋孔中にバクテリアをとらえるために培」１１Ｌ巾に存
在するバクテリアの成長を制限する必要もなく本発明の
実施のために利用するのに全く適１．７ていイ）。吸着
性が、その樹脂、即ち、微細孔を持つ樹脂の外表面に主
として影響される比較的小さな孔を持つ樹脂もまた本発
明の実施に適している。特に好ましいλＩ１１み合わせ
は、ＸＡＤ−＝１　　と陽イオン交換樹脂の、１．５７
：仁不機１１目重合体吸着樹脂である。そのようなｐＨ
１み合、）ノせの４′ＴＪ脂は、体液標本中に含まれた
微生物の成長を害することなく、他の抑制因子のみなり
ず抗生物質も分離する。

一般に名々３　ｉＪ　ｍ１ｃｌ）微生物の培地に、約０
．０５〜約１．０ｇ−（乾ヅ、”Ｖ！　’ｐｆｉ：　Ｊ
ｉＪｃ）のイオン交換樹脂をＪｔｌｉみ合わせた約Ｑ、
　５〜？ｌｔ′ノ５ｇ（乾ｊ！１重景）の不機能重合休
職＊’ｆ　（８４Ｊｌｉｔを使用するのが好ましい。樹
脂の指示されたｌ【ｌ−をＡ１（えると、培地は体液標
本の約１０ＩＩＩ←Ｅでの培養に適する。約２　ｍｌか
ら約５　ｍｌの体液イ、；゛；本が好ましい。

本発明の４６〕脂は、尿、血液および髄液などをｉｆめ
た体液０；ｆ本から抗生物質およびその他の抑制因子を
分離する。一般に体液標本は、注射器の針で薬びんの隔
膜を穿通し、体液標本を薬びんに注入することによって
適当な培地と樹脂を入れた薬びんに無菌の状１９項で移
される。薬びんはシェーカーあるいロー他の適当ブよ装
置ン°ｔの」二に、【・ｊ′ｈ−、）］５、樹脂と（禁
本が十分接触する。ｈ　５に十分な時間、振り動かされ
る。４２：水中の樹脂と抗生物ピ１１あるいは他の殺菌
剤との接触が確かめも旧、十分に接ＩＮ・１（できる方
法や装置ならどんなものでも使用できる。

振ったり、ころがしたりして標本と（匍脂を接触させた
１多、←ｊ脂、培地」、９よび標本を入れた檗びんは、
仁″水中の微生′吻が発１％’Ｐできるような適当な培
養状況の下に維持される。１培１（方ｔ、！−の期間中
ずつと振り動かすことを、洸げてもよい。

一般に一七の方法には水」（５よび炭素源からなる適当
なＣ１４窒素源となる鉱′吻および痕跡性元素を含んだ
養分培ＪＩ口が使用されろ。Ｃ１４′を會む典２ζυ的
な炭素源として（］１、グルコース、」４を糖、ガラク
トース、マンノースおよびラノ、ノースナト、フェニー
ルアラニン、リジンおよびアルギニンＩＫ、と、グ１片
ヒロール、尿素およびクエン酸などのようなカルボン酸
などである。グルコース（ま直ちに利用できるものであ
り、好ましいＣ１４を包゛ｌｒ物質で構成されている。

一般に、放射能のレベルは１ｏｍ／につき約０．１から
約１０マイクロギユリーの間で変化する。同化可能な窒
素源は、硝酸塩、亜硝酸塩、アンモニア、尿およびアミ
ノ酸、などの有機物や無機物である。またカルシウム、
ナトリウム、カリウム、マグネシウムなどの塩化物、硫
酸塩、リン酸塩のような金属あるいはマンガン、鉄、亜
鉛およびコバルトなどのような痕跡性元素もまた用いら
れる。ビタミンや補因子、または抗凝固剤のよ５な増菌
剤も必要あれば加える。最後に、培地は、−１の調整と
維持のため緩衝剤も含める。好気性細菌のテストが行な
われれば、培地上の気層は酸素などである。しかるに、
嫌気性菌のテストが行なわれれば窒素やＣ０２が使用さ
れる。

培１１！Ｉ中に含まれる可能な成分の広い選択は、米国
特許第３，６７６，６７９号でも着手されている。

しかしその特許では培地中に２０％以下かそれ以」二の
炭水化物が使用されている。好ましい培地では、炭水化
物を約０．５％まで含む。そして商業規模で使用する場
合では、そのようなごく小量の炭水化物が加えられてい
る。更に、培地がペプトンや酵母エキスなどを含むなら
ば、炭水化物の１チぐらいが成分として存在することに
なる。

Ｊｏｈｎｓｔｏｎ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＮｏ、
　Ｇ　（〕）好気性菌の培地を含んだ蘂びんと、Ｎｏ、
７の姉気性菌の培地を含んだ業びんは商業規模で役ぐ（
−＼′Ｌつ３、・１−ｖ）薬びんは呼称５　Ｑ　ｍｉの
能力をもち、：（Ｑ　ｍｅの」１・篤地を含み、）・シ
２マイクロギュリーのＪｔｋ射１１１１をもつ。好気１
７Ｆ１λ１の発酵に適した培地（に）は、トリブチケー
ス大豆汁、ヘミン、メナジオン、ナトリウムポリアネト
ールのむｆｊ　ｌ’ＴΩｊ１・１裏、１６よびＣ１４で
印につレア１′ン；ＩＩにす、（：）１１を含む。一方
、妹（気性１眉に滴１．た」８地（力（゛よ、トリブチ
ケース大豆汁、酵母］−ギス、へはン、メナジオン、Ｌ
−システィン、ナトリウノ、ポリアイ・トールの硫酸塩
およびＣ１４で印をつレナたノア；％ｊ（を含む。

５０　ｒｊ＋６の薬びんは３０　ｕ＋ｌの培Ｊｉ１２を
江み、約２マイクロギユリーの放射能をもつ。１（６品
規模で使用される培地のｐＨは約７．３である。

周知のものや同定された抗生物質を１ぐむ分析用の標本
ではその抗生物質を分ν：１［する効果をもつことで知
られる樹脂が選ばれ、体液標本を含んだ培地に加えられ
る。１つか、あるいはそれ以上の同定されていない抗生
物質を含む標本では、いろいろな抗生物質を分離し、微
生物の成長を害さない樹脂の、ｔ（Ｌみ合わせが使われ
る。その標本は発酵中に上記の方法に従って選ばれた樹
脂と接触する。

ｌ−だ本発明の１１４！囲に制限を加えようとするもの
ではない。

実槍例 樹脂が培養を行なう培地に成長を助長するような能力が
あるかどうかを決定するため、血液標本は、全血液標本
（５ｍ、ｌ　）に対して、１００コロ７二−を形成する
ユニットのレベル（ＣＦＵ）、あるいはそれ以下のレベ
ルで特別な微生物を加えろことによって準備した。注入
される血液標本は、３０１ノＩｌの培地か、あるいは、
４１の非イオン重合体職着樹１１ｒ（Ｘ　Ａ　Ｄ　−４
（Ｉｔｏｔｕｎ　＆、ＦＩａａｓ　）およびＲｅｘ）ｒ
ｎ］　Ｕ　Ｉ　　（Ｉｉ’ｉｓｌ＋ｅｒ　５ｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ　）のようなナトリウム型陽イオン交換樹脂を
０．２５ｇ−含む３０ｍ１の１７＜地に加えられる。６
Ｂと印された培地は次のような組成をもつ。

Ｋ’ｌｉ　　　　　　　　ノ１ぐ　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　３（）１ノ＋１トリブナ
ケース大Ｖ汁　　　　　　　　　　　　２．７５　％　
　Ｗ／Ｖへ　　く　　　ン　　　　　　　　　　　　　
　　　０．０００５　ｙｇ　　ｗ／ｖヒタミン′Ｋ　　
　　　　　　　　　Ｏ，０ＵＯＯ５％　ｗ／ｖＣケもっ
た基νｃ　　　　　　　　　　　ｏ、２ｔｔｃ：徂炭１
裟すトリウノ、　　　　　　　　　ｌ）、（１３７５嗟
ｗ／ｖＣＯ３気体１０％ｖｖ 白糖（スフ１：Ｉ−ス）　　　　　　　　　　　０．２
５％　ｗ／ｖビリドキザル１ｉ　ＣＬ　（ビタミン１３
　Ｇ　）　　　　　０．００１チ　φナトリウムポリア
ネトールの１１１ｉ（’Ｑ塩　　　　　０．０２５　＄
　　ｗ／ｖ’Ｉ？殊な憾生物を７七大した血１夜イシ；
：本をａ゛む別の薬びんは、相反性のシ毛−カーの中に
入れ、２・１時間３７℃で培養される１、特殊な微生物
な■む標本は、培地を含む別の薬びんで」す′１養され
Ｈ，：、、　Ｑそして、それは・とた培地に」−記の（
Ω（脂を含む別の桑びんにおいても培養される。成長の
比較の結果は、以下の表１に示す。（→−は、その成長
が認められたことを示す。） １−−−− ニス、　アウレウス　（Ｓ、　　ａｌｌｒｅｔｌｇ　）
）　　イー、　　　コ　　リ　　　　　　（１（、ｃｏ
ｌｉ　　）ｌ　　ＧｐＤ　　れんさ球＠　（Ｇｐｌ、）
　　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　）１　エヌ、　ゴノ
ルヘア（Ｎ、　Ｋｏｎｏｒｒｂｅａｅ　）Ｉ　　　。

ビー、　　エルキノサ　（Ｐ＋　ａａｒｕｇｉｎｏｓａ
　　）（ビー、　アルカリダンス　（Ｐ、　　ａ＋＋、
ａｌｉｇｏｎｅａ　）１　　。

（ビー、　テストスデロシス　（、Ｐ、　　ｔｅ８Ｌｏ
ｓｔｅｒｏａｉｓ　　）ｌ”７・　ｙＷ　　ｔ　　７　
（Ｓ、　ｂｏ“１”９れんさ球７　　（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ　）：　　　　　モラクセラ　エスピー（
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ　　ｓｐ　　）！ （ビー、　　ア　　り　　ネ　　　　（Ｐ、　　ａｃｎ
ａ　　）その後、５ｍｌの血液標本と種々の生物は、以
下の表２に示す抗生物質を添加した培地に注入された。

イ；１本のうち一方にはＢ６の培地だけを含み他方には
Ｂ６培地と上記の樹脂を加える。再び２つの標本を発酵
する。それぞれの場合は以下の表２に示したように、樹
脂を含む培地では、抗生物質の存在下でさえ、明らかな
成長を示している。

表２．　樹脂の保護効果 」−十 一　　　・　　　　　＋　　　　　　□■ 十：十 −・　　　　　＋　　　　　　１ 十’＋ −十 □ 十　　　・　　　　　十 ４−１ 呈−一一一 十 一　　・　　　＋　　　　） 、、　、、−、、−、、、、、、、−、、、、、−、、
−、、−−−−−、ＪＬ　　続　　補　　正　　書 昭和５７年７月を口 特＋Ｙｌ庁Ｊ・ト官　若　杉　和　＆　　　ＪＩＶ１！
」１件の表示 昭和５７年ｌＩＭ′許願第　７９８１’１　　号２発明
の名称 培曲と殺菌剤を含んだ体液の培養法 ろ、補正をする者 事件どの関係　　特許出願人 住所 ４代　理　人 明細１”ｉの〔特１；午請求の範囲〕のＩｉＹ、］６袖
市θ）内容 別Ｓ氏σ）ＩＩｆ！す （１）用紙） １−４’ｆ　ｒｉイ１請求の範囲６ｒ十記θ）よつに１
ｉｆ１１Ｌ　−：「Ｊ−ｔ＋Ｆ　（１１（ａ）　　　ｌ
Ｈ′４　＋（＋）が１４；　ｒｆｋ　１票４＜　ｐ　＋
＞；　＋Φイ【−受け　；（１））体７？に標本”　Ｉ
＞ｚ　、ｌ’ｌｌｉ　６：受けに−Ｊ’ｉ’９１１１２
　カ代、ＩＱｌ　ｉｉ！’１産物イノ）′ｌ：産を起こ
一１゛（））にｌ’　；）　Ｚ：　１０１間、１’ｌ−
常な代謝・ノ）王（“１゛θ）発′１に・１゛ン＜状β
Ｃ、ドてＩｊ’ｉ養さ才１； ｔｊ−ＪＬ　０・ （ｃ）　　代謝副Ｍｆ物ヲｌｌ物話１’ｌ　％、、検出
Ｊ−る／１−めに悦祝し； （ｄ）　　’：’′ｉ佇間間中に！１〆吻活１／１を９
Ｊ４弓゛すに、ｌ核体液−（堺−づぐ中に台ｔｔ：する
いか４′るイクｊｌＩ１．ｉ　’吻°ｔ′［も分前しｆ
ＩＩる樹脂θ）イＪ°効ｉ１ｉイ＋・１１゛ｌ朋の中に
含むことからなる改良； ｂ・ からなる、殺１！ｌ′４物質を３′玖体液標本に１・・
いて、生物活性を検１１ト載る方ｌノ１、 （２）該樹脂がイオン交換幀１脂である′１旨’ｌ’　
ｉ：！’Ｉ求Ｑ）範囲第１工「１記載θ）ノＪ／、ｌ５
．、（ろ）該樹１后が不（幾１屯吸椙樹１１°１１であ
る１’！１．ｊ′１．請求Ｖ〕範範囲第１記記１＆のノ
ｊθ、３゜ （２） （，１）該’ｄｔＪ脂かイオン交換１？ｊ脂と不ＪＩＦ
、吸着位１脂とθ）用７ノ、合わしトからなる’Ｉ屓？
’ｌ’請求の範囲第１ｊ”ｌ　’＋ｔｌ：：　Ｉｌρθ
）方法１、（５）　　ｌ：’）イ」ン交換（酊脂が陽イ
オン交換切崩である１’！Ｉｊ’ｌ’　＋漬）１この範
囲第２項゛ｌ）−よび４項記載の方ｔノ５１、 （６）　　１１３イオン文肋樹脂がナトリウム型である
！１〒＋ｉ’１．ｔ！’Ｉ求の１′１へ間第５　、Ｑ’
ｊ記載の方θ、。

（７）　　ジビご一ルベンゼンとスチレンの不機能−ｕ
　正合１１４、ジビニルベンゼンとスチレンの共重合体
であるイオン交換慎↑脂」・・よびこれらの組み合わＩ
ＪＪか１゛−〕なる類」：り樹脂を選んだ」實Ｙ［請求
の仲、間第１　、ｒ／ｉ記載の方法１、（８）体液ｊ′
ｌｌｊ本が血液である！１暫ｊＴ　１ｊＩＩ＋求の範囲
第１１１′１記市見の　ツノθ【（） （９）体ｔＩＩｉ、標本が尿である４′ｌ’　：￥１請
求の範囲第１項１１己１１品σ）方θよ０ （１１１）　　体液標本がｔｔｌｌｆ液である時１ＦＩ
ｉ＾求の範囲第１１ｆｌ記載の方法９、 （１１）体液標本が腹膜液である特許請求の範囲第１　
Ｊｆ：　ｒｉ己、１夕の力広。

（１２）什物的栄養物′ｔなの水１／Ｉ分１１り浴液Ｉ
ｔ；　、１、びｆ（、液標」（の培養１ｔｌ１間中にｌ
ｌ物話（’１ヶ害−ｆイ）ことなく殺菌物質２分νｄ１
．’−＋”ｌ、！イ）樹脂の（ｊ効１１１ｈ・１′〕な
４）殺１”イ４物？Ｔ　ｙ＜含む１４＜　７１’ｊ　Ｆ
　ＡＸ中１／ｉ：　：ｔ、；　’ｔ）　Ｚ＋　’ｌ’ｌ
’／１活性の検出世培ｔｌｌ！０ （１３）　　該樹脂がイ」／交換樹脂−（’ｌ’　ｒ、
（’）イ）ノ１旨′１晶求の範囲第１２拍記載の１ｊ′
＜曲。

（１／Ｉ）　　ｉ該別脂がイ・機能ｌ１％　；ｌＴ　ｌ
☆１脂−こ、いイ）！１．′１１．′１．．ｌ１１水ノ
ｉｌｉ’４　ＩＩＬＩ　第１２　Ｊｆ！　記＋１ｉ１７
　（７）　、１３ｉ　１１ｉ。

（１５）該樹脂がイオン交１１Ｑ＋樹脂とイく機能吸／
；１台１脂との絹４７／舎わぜから／、ＣろＩ（し４　
、ｌｌ’ｆ　、’ｌ”の範囲第１２項１．己、１父の培
Ｊ山。

（１６）詠イオン交換樹脂が、■（Ａ／＊ｊ閘＋ｂ＋脂
である’Ｌｌ１１ｊ’ｌ請求の化１１１ドＪ’＋　１３
Ｊ１’ｌ　；ｔｕ　、１ひ１５　ｉｌ’ｉＨ［’ｉ載の
培地。

（１７）　　　ＩＸ弓　イ　」　ノ父１奥］姐１旨が　
フ゛　１・　リ　ウ　ノ、λ’ｌ”、　’（’：　＋ｌ
’、ｌ　イ）！１イｉＴ請求の範囲第１６１１ｉ　＊ｉ
＋、’　１１％）　Ｊ７”Ｌｌ、ｔｌｌＨ。

（１８）　　ジビニルベンゼンとλＦレンのイ・機能、
ｉｌ、正合１４Ｘ１　　ジビニルベンゼンどスーｆ゛レ
ノの１１、中介体であるイオン交換１酊脂、１？よびこ
れらの組み合わせからなる類」二〇樹脂を選んで！（Ｓ
許請求θ）範囲第１２項記載の培地〇 （１！ｌｊ　　体ｎｋ標本が血液である′ｌ’ｆ　ｒ！
′「請求の範囲第１２項記載の培１１ｖ（、 （、！０１　　体液（１ソ；本が尿である！１．′１１
；′「請求の範囲第１２項記載の培地。

ｅ！　１１　　体液標本がＭＩＬ’／（ｆ、　テあるＩ
Ｉ’Ｙ　ｒＦｒ請求の範囲第１２ｆｌ’Ｊ　＋：己載の
１１°’ｒ　、１１ｂ　。

ｔ）！＋２１　　体液標」くが腹膜液である′ＩＭ−π
「請求の砲間第１２項記載ａ）培１１１２．１．ｌ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｂ）　　（ａ）　　培地が体液標本の接種を受ゆ；０）
   ）体液標本の接種を受けた培地が代謝副産物の生Ｐ′Ｃ
   を起こすのに十分な期間、正常な代謝の工程の発生に導
   く状況下で培養され；′ｔ６よび （ｃ）代謝副産物を生物活性を検出するためにＷ＋−ｉ
   視し； （ｄ）　　培養）ＩＩｊ間中に生物活性を妨げずに、核
   体１１に中にイｆ在するいかなる殺菌物質も分離し１）
   Ｉる樹脂の有効量を培地の中に含むことからなる改良： かもなる、殺菌物質を含む体液標本において、生物活性
   を検出する方法。 （２）該別ｌｉ、７がイオン交換樹脂である特許請求範
   囲ε（）１〕帽１（：載の方法。 （３）該別Ｊｌｋｔが不機能吸着樹脂である特許請求範
   囲第１Ｄ′１記載の方法。 （４）該樹脂がイオン交換樹脂と不磯ｒｉｌ■！１．ｊ
   ＋”７樹脂との組み合わせからなイ）特許請求範囲２４
   ”ｒ　］　：＋ｒｊ記載の方法。 （５）該イオン交換樹脂が陽イオン又険（耐脂でル）ろ
   特許請求範囲第２項むＳよび４項ｉ’ｊＬ　’ｌ・（の
   方法。 （６）陽イオン交換樹脂がナトリウム型でルＪイ）！１
   ケ許請求範囲第５項記載の方法。 （力　ｊ；１１　ＪＩｉＴがジビニルベンゼアＪ６よび
   スチレンの不機能共、ｌ【合体と、ジビニルベンゼン：
   ｌ＋ｉよびスチレンの共重合体およびぞれらのヤＩＩみ
   合Ｊ−）ｌｒからなるイオン変換樹脂とからなる唄、１
   ：り選んだ特許ｉ！ｌ’（末節１！Ｉ（２４Ｙ、１項記
   戎の方法。 （８）　　体ｉ標本が血液である１１ケ許請求範囲第１
   項記載の方法っ （９）体液標本が尿である’ｌＩｔ′７Ｆ　ｒＤｊ求１
   １）１囲第ｉ　６３記城の方法。 （１０）　　体液標本が４ＪｉＩ液である１時、〆「請
   求１セ、１λ囲第１項記載の方法。 ｕｌ）体液上に本が腹膜液である’Ｂｆ許ｉｉ１’７求
   範囲第１　Ｈ＋記載の方法。 （１２）生物的栄養物質の水性分散溶液および体液標本
   の培養期間中に生物活性を害することなく殺菌物質を分
   離できる樹脂の有効量からなる殺菌物質を含む体液標本
   中における生物活性の検出方法。 （ｌ　：ｌｌ　　核樹脂がイオン交換樹脂である特許Ｒ
   ｙｔ求範囲ε１シ１２項記載の培地。 （１４）該＋６Ｊ脂が不機能吸着樹脂である特許請求範
   囲第１２項記載の培地。 （ｌ　！ｉ）　　該樹脂がイオン交換樹脂と不機能吸着
   樹脂との組み合わせからなる特許請求範囲第１２項記載
   の培地。 Ｌｌｌｉ）　　＋を亥イオン交換樹脂が、陽イオン交換
   樹脂である特許請求範囲第１３項および１５項記載の培
   地。 （１’Ｉ）　　陽イオン交換樹脂がナトリウム壓である
   特許請求範囲第１６項記載の培地。 ｔ１８）　　４ａＪ　Ｊｌｔｒがジビニルベンゼンおよ
   びスチレンの不機能共重合体゛と、ジビニルベンゼンお
   よびスチレンの共′ＩＳ（合体およびそれらの徂・す２
   合」っ、４Ｊ−からなろイオン交換樹脂とからなイ）川
   よりＩ；ｑんだ特許請求の範囲第１２１１’ｔｉｌマシ
   ・１１にの培地、２（１体液札）本が血液であろ特許Ｉ
   ｉ１’Ｊ求、ｉ：ｉｌ’　ｊｌｌｌ化１２項記載の培地
   。 （ビ０）　　体液標本が尿である特、：゛Ｆ請求・ｊｉ
   ｉｊ囲第１間第ｉｆｆシ載の培１１ｊ４　。 シ１）　体液標本がｆｉ＋Ｊ面である特許請求１？１へ
   間第１２項ｄ己Ｉ（戊の培Ｊ也。 ｔ２ａ　　（＝Ｉ；液標本が腹膜液である特許請求範囲
   、：１ｒ　１２項記載の培地、。