JPS58195154A - 細胞活動抑制剤の生体内有効性を決めるための血清免疫学的方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、細胞活動抑制剤の生体内有効性を次めるため
の血清免疫学的方法に関する。

この２０年間に細胞活動抑制剤（癌抑制剤）は、悪性増
噴治僚に型費な進歩ｔもたらした。鍛初、単一の勧賞が
使われたｏしかしながらこれら出投薬法と１瘍の型次第
で、せいぜい全症例の３５チに有効性が見られる結果と
なつ友Ｏこの単一療法は、７０年代に組み合えせ療法に
工っで置きかえられた。いくつかの細胞活動停止剤、晋
通は２から４、かいっしょに組み合わせて投与され、佑
僚結来に着しく改書され魁 投与された細胞活動抑制剤の数ｔさらに増加しても、そ
れ以上の進歩はもたらされな〜治療の停滞状１１に：達
してしまった。たとえ、より多くの細胞活動抑制剤を組
み合わせて投与しても普通は、個々の物質の有効性／非
有効性は少ししか変化しないから、そのことは理解でき
る。その改良された治療結果は、組み合わせ療法におけ
る個々の物質の毒性と有効性という犠牲において達成さ
れたある毒性レベルをらは、利点と欠点とが互いに相殺
する。

それ故、目標を定めるかもｌ〜〈は制御粂件下で細胞活
動停止剤を投与する緊急必要性がある。

制御条件とは、適当な試験管内テスト系における、個々
の癌治療剤の有効性／非有効性の、事前１）　、　１４
４試験を意味する・近年このテーマに関する、１゜ 数多の発表がある、隼び： Ｈｏす／プルグ　ｈ、ＫＬ−３−ブラケッテ一二［化学
療法耐性テストによる卵巣癌の治療における１６年間の
臨床結果１Ｆ＠科学と婦人科学４１（１９８１）。

１２６〜１３５頁。

Ｍ、ボルム他：「試験管内短時間テストによる人間の腫
瘍の、細胞活動抑制剤に対する感蕨テスト（ドイツ連邦
共和国　連邦研究技術省の線傷感度テストに関する共同
研’Ｋ）（ＫＳＳＴ）ドイツメヂチニッシェ　ボッヘン
シュリフト　１０５（１９８０）、１４９３〜１４９６
頁。

Ｍ、カウフマン外［卵巣及び乳癌の化学感度テスト一種
々の方法の可能性と限界、そしてその臨床応用ｊ、助産
学及び婦人科学４２（１８８２）、１６１〜１６５負。

Ｓ、Ｅ、サルモンタト　［卵巣癌と忌性黒色腫における
新薬：人間穎場幹細胞アッセイを用いた、試験官内組２
７エーズ　スクリーニング癌治療報告−ＩＩＦＶｏｌ。

６５、ム１−、２．１月／２月　１９８１年魔１−１２
゜　　　　　　　゛ 屓 ＃ｌ胞宿動抑制剤→整された使用とは、治療の動性／非
有効性が、練−１〜−カー６１１定（腫瘍のモ＝り＝）
によって追跡される手順全意味する。このテーマ　　　
　　　　　　　髪は、１９８呼１月のケルンにおけるシ
ンポジウムで詳しく討論された。

Ｇ、ウーレン！ル、り及びビンツアー著「癌胎児性抗原
と他の腫瘍マーカー」、シン４ジウム報告書ツモールー
ジアグノスチク７エルラークＤ−７２５０レオンペルグ
。

試験管内細胞活動（増殖）抑制感度テストの九めＫは、
軸の際得られた生きたｉま分離された腫瘍細胞が必要で
ある。この方法には、特別の研究室と、現場専門家の助
力を必要とする。

一つの治療サイクルの開始から、他の治療サイクルの開
始までの腫瘍の進行を追跡し、その治療が有効か有効で
ないかを決定する。しかし、全症例のうちごく少数の例
にしか細胞活動抑制剤（ｆｌ胞増殖抑制剤）（以下側細
胞剤と略称）組み合わせのうちの、個々の成分にその有
効性を認めること、もしくは推測することはできない。

腫瘍マーカーの反応は、少しの例外、例えば絨毛腹痛の
短時間分析におけるＨＣＧ−β−濃度−変化などを除い
て、余シ遅すぎて、そのような推測は不可能である。

標的を定めて、制細胞剤を投与することが可能であれば
、改善された治療結果が得られるであろうし、また、よ
り低いレベルの制細胞剤で間違の結果が見られるだろう
。そのことはそれ自身、著しい進歩であるだろう。

最近の諸発見によれば、癌のケースにシける液性免疫反
応が、ますます重要な役割をしていることが推測されて
いる。癌の型次第で癌症例の７０Ｓまでは、腫瘍細胞の
細胞膜構造に対する循還血中の免疫複合体か遊峻液性抗
体のどぢらかが決定できる。循還免疫複合体は、死細胞
の断片や、腫瘍細胞による抗原分泌から由来する。

この免疫挙動は、櫨々の実験室的方法によシ検出できる
。

一遊離液性抗体は、生きたまま、元の部位から分ｌＩｌ
！された腫瘍細胞における間接的免疫螢光法によシ検出
できる（Ｄ、ステ７アンパルトス：婦人科の癌免疫第３
作業部会への報告１９８２年３月ノン−刊行物準備中）
。

一循還血中免疫複合体は種々の方法により癌症例におい
て検出できる。例えば、Ｃ−１ｑ−１１２５−結合テス
トとか、ＰＥＧ−沈降法（ＰｉＣＧ：、ｊｒリエチレン
グリコール）。

一うゾー細胞−技法（オリジナル）又はｌ−１２５−ラ
ベル！ロテインームー技法、補体転向テストヤ全補体血
清活性測定によってもまた、血清テンプルの成分中の循
還血中免疫複合体やその結果としての反応二次変化を測
定できる。

新しい方法は、二段階から成る血清免疫学的方法に基〈
ものである、即ち １、α二２−　ＰＡＧ　（７レグナンシイ一結合−α−
２−グリコプロティン）もしくは、同義語として＋１１
’−３（７’し一ンター特異的！ロチイン３）は、従来
説明されてい友ような腫瘍マーカーではなくて、極めて
敏感な腫瘍マーカーとしての性質を持つ免疫マーカーで
あるという認識。

２、免疫１−力：：＝フ：：：：、制細胞剤の有効性、
非有効性　　　　　　　　使われ、その際好ましくは１
つの治療サイクルの開始から、他の治療サイクルの開始
への長期同じ免疫マーカーが分析され、その上この目的
の丸めには、好ましくは治療を決定する時制細胞剤の組
み合せの個々の成分を引き続いて投与するのでその有効
性／非有効性を測定できるという認識。

α−２−ＰＡＧの知識水準は、１９７９年に刊行された
Ｈ、−−ンとＷ、　ノ４ウアーの仕事に遡る。

Ｈ，＆−ンとＷ、ノ量つアー：［妊娠関連性α−２グリ
コグロナイン（α−２ＰＡＧ）：悪性発病時のその決定
の重要性」ラーラトリウムデレター２９゜１１９−１２
６貞（１９７９）。

Ｄ、ステ７アンパルトスはα−２−ＰＡＧが腫ｇ関連蛋
白質ではなく、免疫マーカーであることを証明し走。

Ｄ、ステファンパルトス：乳癌における「腫瘍マーカコ
としての、個体内部（ｉｍｔｒａ−１ｍｄｉ−マｉｄｍ
ｅｌｌ・）のα−２−ＰＡＧ　（妊娠関連性α−１ ２−グリコグロチイン）−血／ｆｔ（象。

１９７ｇ−１９８（ｅ、年よおけ、シー９７）７７（７
：）：。

乳癌−血清討論会の結束。Ｈ，ウーレンプルックとＧ、
ディンツアー著：ＣＥムと他の腫瘍マーカー中の３５７
頁、シンＩゾウム集／ツモールジアグノスチク　フェル
ラークＤ−７２５０レオンペルク１９８１は、１９７８
から１９８０年における見込み研究を示している。！リ
ンｒンーオーリクスのをルカー病院におりる全乳癌例は
４４５例でその中３８例は転移乳癌の症例であるが、そ
の全ての症例が血清免疫学的に集められた０手術前／治
療前の血清サンプルと、治療測定時に処理された患者た
ちからの血清サンプルが毎日集められ、細分されて、−
２８℃で貯蔵された。この研究の主要点は連続的な個体
内部α−２−ＦＡＧ−レベルの臨床的価値の決定にあっ
た。その結果を基礎とし、そしてα−２−ＰＡＧ機作に
関する他の知見Ｉコ基いて、腫瘍症例におけるα−２−
ＰＡＧ免疫応答の一モデルが作り出された。乳癌は、そ
の免疫応答により、三つの型にわけることができる：１
−０免疫反応性２．α−２−ＦＡＧ免疫応答陽性、３．
α−２−ＦＡＧ免疫応答陰性。α−２、ＦＡＧは＠瘍マ
ーカーではない。それは、腫瘍分解や腫瘍塊増大の第二
次免疫応答の指示薬である。免疫反応性乳癌の場合、個
体内部α−２−ＰＡＧ−レベルは高度に過敏な「腫瘍マ
ーカー」０機能を有している。妊娠時とウィルス感染を
伴う癌患者とにおけるα−２−ＰＡＧ−レベルの比較研
究から「免疫反応性乳癌」という語が使われ始めている
。免疫反応性乳癌では、血清中のα−２−ＰＡＧの個体
内部レベルの偏差はウィルス感染において記録されるも
のの複写である。免疫反応の強さは、妊娠のそれと近似
している。その他知見から、免疫反応性乳癌では、身体
とウィルスｒツム暗号化され九、腫瘍関連膜結合移殖抗
原との反応が起こるという疑いが生じる。この免疫反応
性は予後に重要なものである。

Ｄ、ステ７アンパルトス：乳癌における化学−及びホル
モン療法と予後計画の丸めの広汎な叙述的テス）、１１
−２６頁り為ぺ、り産婦人科学における腫瘍免疫字画２
研究討論、（１９８１年１月１８日）。発行者り、クレ
ープスは乳癌におけるα−２−ＰＡＧの免疫マーカー機
能を公開している。スチムソン等（１１）の発表に刺激
されて我々は１９７７年以来乳癌及び卵巣癌に、おける
妊娠関連性α−２−グリコプロティンの可能なｍｓマ−
カー機能にもっばら九ずされってきた・卵巣癌では、術
後または効果的治療の結果としての寛解の際または例外
の少ない進行の症例におけるα−２−ＰＡＧ反応形式は
常Ｋｉｊｉ−的で５〜２５μシ郁（マイクログラム／ミ
リリッター）の腫瘍特異的α−２−ＰＡＧ血清レベル分
画の範囲で進行する。

それと対照的に、乳癌では、図は不均質である。

我々の成果は、１９８０年１１月にケルンのＣＩＣＡ−
シンポジウムで始めて発表され＆（１２）。その後の発
見は、ダッティンｒンで１９８０年１２月のムＩＯ−シ
ンデジウムに報告された。（１３）実際の個体内α−２
−ＰＡＧ血清ノベルの、腫瘍特異的分画の機能は第１図
に見ることができる。

α−２−ＦＡＧは一すンノ々系の産物である。その半減
期は約６日である。α−２−ＦＡＧは、外因性もしくは
内因性抗原ノーシステンス（ｐ＠ｒｓ１ｍｔ＠ｎｃ・）
によってつくられ、％−−分的ロコホーカルな免疫寛容
性に関連している。・単一の抗原／抗体バランスや、細
胞免疫防御の強さからそれぞれの抗−Ａｇ／Ａｂ系は、
それぞれの抗原特異的ムｇ／Ａｂ系じ、この結果として
、一般的α−２−ＰＡＧ血清レベルの部分的分画を生じ
る。実際α−２−ＰＡＧ血清レベルはそれ故、ある特別
な時間における、全ての外因性及び内因性抗原の総和的
産物であシ、個体によってかなシ差がある。

反応強度の増加を伴ったα−２−ＰＡＧ免疫応答０３つ
のレベル（反応形式）が存在する：息、す！し、す〜Ｔ
−細胞レベルと、マクロファーノのレベル ｂ、　　？し受容体レベル（液性及び抗体を誘導するＭ
ｉｉ施性） Ｃ１受容体レベル（液性及び細胞免疫反応の抗体誘導分
画の枠組の中でのＣ−１−不活性化物もしくはＣ−Ｃ受
容体、＠定的） α−２−ＰＡＧ＝τ度（実際のα−２−ＰＡＧ血清の腫
瘍　　　　　）が次のように測定さｉ″′ｌ。

れる。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　＼ａ、嘘瘍細胞の抗原によ
って す、腫瘍の質量から ６、腫瘍の拡張法と、そのリンｄ系への解剖学的関連性
から ｄ、免疫応答の強さから（普通のコンｒイシ１ン、年齢
遺伝要素等）。

実際の個体内α−２血清レイルの腫瘍特異的分画は腫瘍
組織に対するロコホーカルで局部的な、もしくは普通の
免疫寛容の一つの表現である。これは同時に、免疫学的
防御反応の可能な強さと、最高の予後の重要性の一表現
である。乳癌におけるα−２−１’ＡＧ応答の観察され
た反応形式は、第２図Ｋまとめられている。１４３例の
第一次処理済乳癌からの血清サンダルの手術時点分析は
、乳癌の３６優は免疫反応性で、４２チはα−２−ＰＡ
Ｇ応答陽性で、残り０２２＊ｕａ−２−ＰＡＧ−免疫応
答陰性であることを示している。

第２図：腫瘍におけるα−２−ＰＡＧ免疫応答の反応形
式を示す。

液性α−２−ＰＡＧ免疫反応性腫瘍形態ではもっばら、
腫瘍細胞の構造に対するＩＱ−Ｇ型及び／又はＩＱ−Ｍ
型の液性抗体が見出される。α−２−ＰＡＧ免疫応答の
強さは、乳遍において最高の予後重要性を有する。我々
の臨床的材料は一歩づつ造シ上げられるだけである。す
でに、第３図の結果はこの発見の重要性を明らかにして
いる。リン／１節転移の始ま夛と第一次腫瘍の直径はα
−２−ＰＡＧ免疫応答の強さに依存している。第−次治
療時の、ＬＫ−（１性乳癌５３／１０１の数は第一次＠
瘍直径の大難さによって現われα−２−ＦＡＧ血清レベ
ルの強度に依存し、手術時点のα−２−ＦＡＧ血清レベ
ル減少として決定された。この格づけは１０μ？膚の腫
瘍特異的α−２−ＰＡＧ血清レベル分画で起こった。α
−２−ＰＡＧ免疫応答が１０μシゼよりも大きければリ
ンフ４節侵襲は、１０μ７７ｋｌより少ない腫瘍に対す
るα−２−ＰＡＧ免疫応答の増加會伴う症例の際（Ｄ９
／３０（−３０チ）、７／９（−７８ｇｉ）、１０／１
０　（昭１００慢）と比して、症例の６／４３　（＝１
３．６１　）、１１／２０（−５５１１Ｇ）、１０／１
５（−６７チ）に、見られるのである。

実際のα−２−ＰムＧ血清レベルの腫瘍特異的分画は、
将来診断治療決定においてよ〉大きな重要性を持つとこ
ろの高度感受性の＠瘍マーカーの機乳癌における腫瘍細
胞膜に対する、循還血免疫、庫ゝ 複合体と、遊離液性抗体の検出可能性は、α−２−ＰＡ
Ｇ反応強度に依存している（１５）。

一方この報告はまた、レーデ−免疫螢光法によって、単
離単一細胞乳癌の細胞懸濁液を用いて証明された。単離
され培養された自家腫瘍Ｓ胞の膜ｍ造に対する、副次的
免疫グＯｆ　リンーＧ−抗体Ａ手 としての遊離液性抗壁、主に１ｇムとＩｇＭの検出可能
性は、α−２−？ムＧ反応強度に依存している。

これによって、α−２−ＰＡＧの免疫マーカー機能につ
いての直接的確証が得られた。

Ｄ、ステ７オンノ＝トスの研究は、さらに次のピ１ ことを示し九。血清中の一瘍特異的α−２−ＰＡＧ分画
が２０〜３０μｙ、ＡＩＮｔ）高い腫瘍例においてはＩ
Ｑ−ＧとＩＧ−Ｍ型の遊離液性抗体が測定され、これら
の症例は乳癌において有意なよシ良好な予後を得た（１
９８２年３月がンにおける産婦人科学の腫瘍免疫学研究
討論会３における講演。刊行物準備中）。

この知見は、新しく発見され九方法にとって最も重要で
ある。

この発明によると、免疫学的活性腫瘍への制細胞剤の有
効性を決定するための一連の免疫学的方法が提供されて
いる。そしてその際薬剤投与（単独もしくは組み合せて
）、免疫マーカー／免疫・ｆラメ−ターの短時間スケー
ル分析またはこれらの・中ラメータの組み合せ測定によ
り、腫瘍破壊及び腫瘍抗原免疫防御バランスの一時的変
位を基として有効な投薬についての予言がなされまたそ
のような変化の不在、１ｌｌｆｆｌ可能の生産抑制／研
究されたノ譬ラメーター濃度の減少に基いて、非有効的
投薬であるかどうかの二つの予言がなされるのである。

　　　　　　　　“□゛ ７．．１： この発明の対象は菟”棲学的活性腫瘍に対する制細胞剤
の生体内有効゛性９決定方法で６９、その特　　　　　
　　　　　　、を徴は免疫マーカー及び／又は免疫ノ々
ラメ−ターが制御ａ施剤投与前後の３日以内の血清中で
測定される点に存する。

この発明の一実施ａ様では研究され九Ｉタラメーターは
、個々のα−２−血清ＰＡＧの腫瘍特異的部分である。

またこの発明は、免疫学的活性腫瘍に制御ａＪ＃ｉ剤（
癌抑制物質）が有効であるか否かを早期検出する九めの
一連の免疫学的方法【提供する。その際問題の薬剤の服
用、あるいは免疫マーカー／免疫ツヤラメ−ターの短時
間分析による、薬剤の組み合わせ、あるいはこれらの−
ナラメータの組み合わされた測定の後、有効表投薬の場
合は、腫瘍破壊と、腫瘍抗原免疫防御バランスの一時的
変位と、研究される・ナラメーターの短時間変位がおき
ると、非有効的投薬の場合は、これらの変化がおきなか
った夛、あるいは、測定可能な生産抑制／研究されてい
るノナラメ−ターの濃厚の減少が、制細胞剤の、適応体
細胞の機能への抑制効果のために、おきるという一つの
予言がなされ得るのである。

好ましくは適当な研究や研究されるべきノダラメーター
の事前分析によシ、個々の患者の症例の適当なポイント
において、腫瘍にとっての免疫応答と免疫ＷａＯ質が決
定される。そしてこれらのデータは、よ）有効な予言が
なされうる様にこの方法の結果の解釈の中で考慮されて
いる。

普通、研究されるべきノナラメ−ターの場合において、
個々のα−２血清ＰＡＧの＠温特異的分画が研究される
。

或はまた、研究されているｔ＋５メーターの場合には、
血清サンダルの全抗補体活性が、傾準状況下で測定され
る。

典型的には、研究されているノ母ラメ−ターの場合には
、循還血中免疫複合体の＃反中の変化あるいは質の変化
が研究される。そしてそれらは腫瘍の進行に関連してい
るのである。

１、免疫学的活性腫瘍においては、免疫１１！（腫瘍に
侵された器官の、免疫学的防御の可能性）と、現存抗原
１（認識され、免疫学的反応を誘傳する、個々人の異物
抗原性を伴う有機体中の腫瘍ｉｔｓ＞との間には一つの
平衡状態が存在する。

この平衡は、次の等式で記される。

腫瘍抗原の量−免疫能 ２．　　Ｔｏる開側原剤を投与して非常に有効であるな
らば、それは、腫瘍１Ａｊｉｌの死で６ｐ１腫瘍の量の
減少となる。これに関連して、腫瘍抗原が放出される。

上述の平衡は、短時間、抗原過多の方向へ変位する。免
疫系は、この平衡の変動に対して極めて鋭敏で一時的に
反応する・次のことが、短時間に起こる。

ａ）末梢静脈血中の循還血免疫複合体の量の増加。

ｂ）遊離液性抗体の飽和によって遊離液性抗体量に減少
が起こる。

Ｃ）循還血中抗体の抗補体特性において、量的、質的変
化が起こる。これらの変化は、適当な分析系、例えば光
度測定による補体結合テストを用いた患者血清の全抗補
体活性における““″貨：ニニ＝；“°“。

ｄ）血清中　　　　　　　の一時的増加が、腫瘍組織の
破壊の結果としての第二次反応として起こる。急性期蛋
白質のこの増加は血清すされうる。

・）α−２−ＰＡＧ−血清レベルの一時的増加が起こる
。α−２−ＦＡＧは免疫マーカーであり、リン・譬系は
新しいα−２−ＰＡＧを合成することにより、有機体中
の抗原抗体バランスの変位にすばやく、一時的に反応す
る。もし、ＩＱ−Ｇ及び／またはＩＱ−Ｍ型の遊離液性
抗体が患者の憾瘍細胞の抗原構造に対するものであっ−
たり、これらの抗体がＣ−１４かＣ−３受容体結合能特
性（補体活性液性抗体）を有しているならば、血清中の
α−２−１”ＡＧの一時的増加が大きければ大きいほど
限定的抗原性と特定の免疫応答１能を有する、特定の腫
瘍レベル用の開側原剤は、より有効である。

、：１１ ３、　もし、投与したー胞剤が効かないならば、腫爲減
少も起こらチー。抗原！（腫瘍により決められる）と免
疫防御とのバランスは、多かれ少なかれ同一のｔｔであ
り欠配のことは起こらない： ａ）循還血中免疫複合体の量は増加しない。

ｂ）循還血中免疫複合体の生物学的性質は変わらない。

血中免疫複合体と血清サンダルの抗補体性質は同一の１
まである。

Ｃ）急性期蛋白質の増加は起こらない。

ｄ）そして特に興味のあることは：α−２−ＰＡＧ血液
レベルの一時的減少である。これは、開側原剤が末梢リ
ンΔ系中ｖ−２−ｐＡＧ合成を阻害するという事実から
説明される。リン・中球は、開側施剤１．より阻害され
るか、あるいは複数の開側ＡＮ／により、その作用が阻
害される。α−２−ＰＡＧは約６日の半減期を有する０
例えば、５０キのアドリブプステン（”　３０　Ｍｌ／
ｍ”体表面域）ｔｌ、７ｍ”平均体表面域を有する患者
に投与すると、約２４時間α−２−ＰＡＧ生産の完全な
阻害が起きる。

もし、この開側原剤が完全に非有効であれば、血清α−
２−ＰＡＧにおける約１５％の結果低ｆが起こる。一方
それが非常に有効であれば、この陰性効果が打消しにな
るばか９ではなく、それを補うことになる。腫瘍が免疫
学的に極めて活性であるならば、α−２−ＰＡＧの増加
が特に起こるのである。

その理由から、血清α−２−ＰＡＧの短時間分析は、特
に血清免疫学的生体内ａ原酒性感−受注テストに適して
いる。なぜならば、α−２−ＰＡＧの場合は、その再現
性につきｉ九分析方法実施の容易さを考え脅せ極めて有
効な反応と、非有効的反応間の測定シグナルが極めて大
きく違っているからである。

４、開側原剤がより効果的でない場合は、上記の変化は
、より狭い。

５、新しい治療が始まる時、段階的にすなわち３６〜４
８時間毎に個々の開側胞成分を投与することが好ましく
、α−２−ＦＡＧ血清レベルは８〜１２時間ごとに分析
されるべきである。こうして最適の予言が可能となる。

同様の方法がこの目的のための、上記他の免疫ノ譬ラメ
ーター使用時にも勧められる。

もちろん、上記の方法の予言的特質はよシ大きいのであ
る。すなわち、それは、免疫応答の質がよりよく知られ
、腫瘍に対する個々の患者の免疫能が、より正確に記述
されうろことを意味する。

このようなわけで、上記の方法のためＫＯ！用される免
疫ノ臂ラメ−ターはくり返しあるいはある時間間隔にお
いて決定されることが望ましく、それによって手術前、
手術後また再治療中これらの免疫Δラメーターのレベル
を腫瘍成長に関連されることができる。（例えば手術前
後の分析によ広または治療中の腫瘍のない状態、もしく
は、逆行期とか新しい進行に比べられる完全な寛解状態
における、この値の分析による個体内α−２−ＦＡＧ血
清レベルの腫瘍特異的分画の測定）。これらの測定は、
より正確な予言をするために、例えば骨シンチグラム、
Ｘ線研究壜どのような他の研究と□ 組合せるのが好ましい’、１．”、１１１１１．１：ｌ
：例えば、陽性の免疫複合体結果の場合、他の化学ノ豐
ラメ−ターや他の条件が考慮されねばならないし、また
例えば患者が水痘ヤ、重いインフルエンザのようなウィ
ルスに感染している場合、結果は、腫瘍に帰することが
できないことは、明らかである。

他方、短時間分析においては、非特異的効果がよシゆつ
〈９とした反応速度もしくは研究されている・膏ラメー
ターへのよりゆっくりとした作用を有しているので、こ
れらの非特異的効果は、関係かないことは理解できうる
。

α−２−ＰＡＧ測定は、α−２−ＰＡＧが直接の免疫マ
ーカー機能をもっているので、遊１ＩＩｎ性抗体の検出
及びこれらの遊離液性抗体の質に基いた反応の応答の強
さをも予言することができる。

見 １、　α−２−血清レベルの測定は、ラウレルによる周
知の電気免疫拡散法（免ｇ２鑞気泳動法）によ−てルー
チンに行なわｉる。

その検出法は、グ計センド血清ｌｄ中３．８〜６μ？の
α−２−ＰＡＧという”騙９低い限度を持ち、そのｐｅ
、ｉ値は約１０μｂ釘のα−２−ＰＡＧとして　　　　
　　　　　　を決定されうる。

それ故ある技術、限定物質法の技術もまた好んで使われ
る。この方法においては、全ての標準希釈と全ての血清
サンダルはｌｌ０ＪＩＪシＵのα−２濃度のα−２−Ｐ
ＡＧ標準液の体積で１／１０加えられた。これは、全て
のサンダルと全てのスタンダードがｌ／１１就ｌＯμ？
のα−２−ＰＡＱｌｆｄを含むことを保証する。α−２
−ＰＡＧのサンダル中濃度が２〜シＵならば、得られる
値は１２μノα−２−ＰＡΦ似である。サングル中の濃
度の違いｌＯジ（ｆランクの値）と１２声ノは、正確に
測られうる。これは、分析方法をかなｐ改真し、臨床測
定範囲を完全に網羅する。この範囲は１〜２μｔα−２
−ＰＡＧＡａｉｓ　ラ２５０〜５００　ｘ？Ａｄｌ　テ
。

関にある。

ラウレルの電気免疫拡散法では、再現性が′ｈま９よく
ないことが知られている。一方、一連の研究の精密度（
アッセイ内再現性）は、±３．５チより小さい偏差率を
有して極めて良好である。

このような理由で、以前の血清サンダルは、少Ｉで一２
１℃以下で冷凍して貯えられ、そのために各新研究にお
いて新しいサンダルがまた、再び決定され得るのである
。これは、長期のコントロールを許すことになる。

２、循還血中免疫複合体の測定は、二つの標準方法によ
って行なわれうる。

１）ホフケンＨ他：免疫複合体とヒト乳癌の予後、ラン
セット１　：６７２−６７３．１９７８の研究によるも
の ｂ）　Ｕ、コルドブスキーとり、ステファンＩルトス：
ラジー細胞−Ｊ−１２５−グロティンーＡ−テクニック
による、乳癌の際の長期分析における循還血中免疫複合
体の証明：公開準備中。１９８１年１０月のローザンヌ
での癌学会要約が出されている。

３、免疫ノ豐ラメ−ターとしての、血清サンダルの全抗
補体活性測定のための、測光法試薬。さらに詳しい情報
については１９８２年４月出願の完全に可視的で測光的
な補体結合テストに関する、アイルランド特許出願４９
４３１８２（出願人パルトス−アイルフントノ譬テント
・デペロッグメントアンド　ホールジングカンノ４二一
リミテド）を参照のこと。

腫瘍患者のサンダルの処置：血清サンダルは、自然凝固
後１〜２時間以内で遠心分離−２１℃に貯蔵する。研究
の日に、この方法による一連のテストのための全ての血
清サンダルは順次分析される。血清サンプルを加温し、
補体活性は３０分間”−５６０で除去される。血清サン
ダルの両受体様活性は安定化ヒツジ赤血球（セロｚ４　
ｙクーアイルランド−Ｌｔｄ、社及びセロパックーセロ
バクテリオロギッシ島　グレΔツート　り／ト　イ五ノ
デアグノスチカ　ＧｍｂＨＤ−５６５０！リンｒンの製
品）を用いて除去される。補体除去後の８００ａｍのサ
ンプルに、安定化ヒツジ赤血球５０チ懸濁液２００　ｓ
Ｌを加える。そのサンダルｔ−１０分間室温放置し遠心
分離する。その上澄がテストにおけ・：１・： る処置された血清サイ１トルとして使われる。

方法：前処理したｉＬニーサンダル３００μｔｔ−作用
物質（セロΔ、クー補体転向テス）ｉｔ）３００μＬに
加え、１８０分関３ＴＣで培養する。そして混合物５０
０μｔをキエペットに入れエツーｅ／ドルフ製の自動細
胞変化器の中で、３７℃に処置する。そして、補体活性
滴定は吸光イη０．４になるように５０μｔのヒツジ赤
血球悪肩液を加えることＫよシ始められる。個々のサン
ダルの実際の補体活性の決定は、ｃａ−ｓｏｎ−溶解時
間分析によって行なわれる。秒単位の溶解時間は、自然
対数値に変換され、これらの値が結果の計算に使われる
。

各系列において、ブランクサンダルのコントロール（ｌ
Ｏ）がいつも、全ての血清サンダルとの対Ｏ分析におい
て行なわれる。！ランクは、血清サンダルの代ｆｉＫ（
ＪＴ−Δ、ファーを含んでおり、反応混合物の自発的非
活性化のコントロールの役目を果す。

その上ヒト膿帯血湾に基く標準ヒトコントロー：１′ ル血清（流動免疫！□ｌ、体のないもの）もまた使われ
る。　　　　　　　　ｌｊ。

テストの評価：秒単位の個々の１ブランクのＣＩ（−Ｘ
５０慢溶解時間は、自然対数で表わされ、同時に血清サ
ンダルの個々の値も同様に処理される。そして後者は、
前者から差し引かれる二〇の方法は補体消費蓋の絶対値
を反映するデルタマイナス値を示してくれる。これらの
データは薬の投与時に対してグラフ化される。このグラ
フｌ１１ｍの下の領域は、投薬の有効性に対応し、腫装
置や腫瘍に対する有効な免疫能の結果である。これらは
短時間ではＴｏまシ変化しないので、この領域は制御Ｍ
１１１胞剤の有効性と実際には同一である。

例：ｆランクのＣＨ−５０溶解時間５分３０秒−３３０
秒 自然対数値　５．８ 投薬、０時間における血清サンダルの同様の値１１分１
２秒厘６７２秒 自然対数値６．５１は、デルタマイナス０．７１を与え
る。

デルタマイナス０．７１は、高病理学的値で６９、対照
標準血清は、デルタマイナス０．２１値を示す。

これは、血清サンダルが高濃度の循還血中免疫複合体を
有することが、極めて疑わしいことを示している。

投薬後２４時間、４０時間後の同様な値：２４時間では
デルタマイナス０．９６．４８時間後デルタマイナス０
．８６．これとともに、投薬後の血清サンダルの抗補体
活性の増加は、それぞれ自然対数値デルタマイナス０，
２５もしくはデルタ０．１５０絶対値を有していて、こ
れは循還血中免疫複合体の量における強い増加を示しか
つ服用された薬の強い効果を示唆している。

セロパック・補体転向テストは、両受体／補体から成る
即時使用試薬混合物を含み、補体系１ｃｍ１−不活性系
の限度まで感度を高めた免疫複合体を限定する発生期生
成物を有する。この試薬混合物と測光評価は２〜５ナノ
グラム抗原／ｄ試薬混合物の検出を可能にする。二重定
量における上記の技術の再現性はその系列において士自
然対数０．０３絶対値であった。

第１図：実際の個体内α−，２−ＰＡＧ血清レベルの腫
瘍特異市分画のモデルである。

α−２−ＰＡＧ全血清レベルの特定の分画は、有機体の
抗原抵抗性、それぞれの抗原抗体免疫応答系から生じる
。ふつうは、α−２−ＦＡＧは末梢リン・中球／局部的
リン・量系中の異物抗原除去の時間まで、ロコホーカリ
イに生産される。同様のことが免疫学的活性腫瘍の場合
に起きる。腫瘍は又、実際の個体内血清レベル上の特定
の分画をつくる。

この、α−２−ＰＡＧ血清レベルの腫瘍特異的分画のみ
が、腫瘍の免疫マーカーとして使用できる。

第２図：α−２−ＰＡＧ免疫応答の反応形式。

液性α−２−ＰＡＧ免疫反応性腫瘍形態においては、腫
瘍細胞の構造に対するＩＧ−Ｇ及び／またはＩＧ−Ｍ型
の液体抗体がもっばら見出される。

第３図：腹部の転移乳癌患者における開側原剤組み合わ
せの有効性テストの結果： 循還血中免疫補体及び上掛のステロ・母ツクー補体転向
テス）ＩＩにおける血清蛋白の全抗補体活性１１ としての急性期蛋白質の：← 組み合わせ投薬後０．２“４．　、、４８時間での血清
サンダルの分析ポイント。

１９８０年４月と７月に０時間におけるば一ラス注射と
してビンクリスチン２ｑ靜注、アトリ！ラスチ／（ムｏ
ａ）５０ｑｄ注、サイクロフォスファイト６００η靜注
を投与。３か月前に始まったこの治療で１９８０年４月
には臨床的部分的寛解状態、１９８０年４月から７月に
は臨床的後退の始まり。１９８０年９月にビンクリスチ
ン５■のピンテノン（Ｖｉｎｄ）との組み合せ投薬に代
えられた・ ピンデシン（−・ｌｄｉｍｌｎ・）は半合成ピンアルカ
ロイドである。左上腹部手のひら大の腫瘍の臨床的死滅
、４瘍の破壊は振壷と体温上昇を伴った。

その後、臨床的に新しい持続的部分的寛、ｑＩがおこっ
た。この免疫ノ々ラメ−ターの分析結果に基いて示され
た領域から、最初の化学療法的組み合せの効果減少が明
らかになる。グインカアルカロイドピンクリスチンを５
キコンデシン靜注に代えることにより、化学療法の譬し
い高レベルの有効性が”　””’ｌ１１゜ もたらされた。

腫瘍は免疫学的に活性であった。１０か月後開腹手術の
一部として、腹部の＠瘍細胞が得られ、数週間組織培養
された。循還血中免疫複合体と同様にＩＱ−ＧとＩＱ−
Ｍ型の遊離液性抗体も〈９返しデモンストレートできた
。同じ時のα−２−ＰＡＧ分析の反応図はそれぞれの時
間に少ない上昇ではあるが血清レベル内の同様な変化を
示した。それによると最も大きな上昇は１９８０年９月
の時点に記鍮された。投薬０時間の２４時間後ＣＴＩで
は＋１３％、Ｃｒ２では＋７１．Ｃ７０では１８’ｌＧ
である。

第４，５及び６図：これらの図は、転移乳癌患者（Ｈ，
Ｇ、夫人、５３歳、記録醤号：Ｍ−３７）の薬学校でで
さえも認識される腫瘍マーカーである。

ＣＥＡ進行曲線は疾病進行の状態を示す（第４及び５図
）。

３〜５の胸部放射線と組み合わせてアトリゾラスチンｓ
ｏｗ静注の単一化学療法（ＣＴＩ〜７）で可成シの部分
的寛解。タモキシフェンとＭＰＡ（メトロキシグログス
テロンアセテート）のホルモン法の非有効性後。化学療
法４：ピンデシンとマイ）−ＶイシンーＣ−組み合わせ
の時点で、アドリブラスチン単独服用で再び得られる、
大きな進行を有する白血球減少症の発生。その後プイン
デゾン（自ａｄ）の単一投与さらにアドリ！ラスチンの
付加的投与、化学療法耐性の始まりへの発展。

さらに進行、治療への耐性、そして６００ナノグラム／
ｘｔ１以上の血清−（ＪＡ−レベルの増加。

第６図ニ一つのサイクルの始まりからもう一つのサイク
ルの始まりへの長時間進行と、α−２−ｆ”ＡＧ血清レ
ベルに基い九短時間分析を示している。

ｃｇムー血清レベルを比較すると細胞活性制御治療の有
効性、非有効性を予言する一方法としてのα−２−短時
間分析の重要性が明らかになる。

この発明は以上説明し九方法に限定されず細かい点では
変更されてもよいことは言うまでもない。

【図面の簡単な説明】

第１−６図は本発明の血清免疫学的方法の説明図である
。 代　理　人　　　砂　　川　　五　　部外１名 ＣＴｌ３　　　　ＣＴ１４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）免疫マーカー及び／または免疫パラメーターを細
   胞活動抑制剤投与前の３日と、その後の３日以内の血清
   中で測定することを特徴とする、免疫学的活性腫瘍に対
   する細胞活動抑制剤の生体内有効性を決定する方法。 （２）決定されるべき免疫マーカーが、ま−２ＤＡＧで
   あることを特徴とする請求の範囲ｌの方法。 （３）免疫パラメーターが補体結合能力の偏位であるこ
   とを特徴とする請求の範囲ｌの方法。 （４）免疫パラメーターが循還液中免疫複合体蓋である
   こと金待微とする請求の範囲ｒの方法。 異分画が、測定されるだけであることを特徴とする請求
   の範囲１の方法。 （６）免免疫マーカー及び／もしぐは免疫パラメーター
   の・ｔ！瘍特異分画が測定されるだけであること？Ｉ−
   特徴とする請求の範囲２の方法。 （７）免疫マーカー及び／もしくは免疫Ｉくラメ−ター
   の慄＋ｉＩＩ特異分画が測定されるだけであること’ｔ
   ％倣とする請求の範囲３の方＠０ （８）免疫マーカー及び／もしくに免疫ノくラメ−ター
   σ）ｍ瘍特異分画が測定されるだけであることｒ特徴と
   する請求の範囲４の方法０