JPS58173455A - 光散乱測定方法 - Google Patents

光散乱測定方法

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JPS58173455A
JPS58173455A JP57056432A JP5643282A JPS58173455A JP S58173455 A JPS58173455 A JP S58173455A JP 57056432 A JP57056432 A JP 57056432A JP 5643282 A JP5643282 A JP 5643282A JP S58173455 A JPS58173455 A JP S58173455A
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JP
Japan
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light scattering
reaction
antigen
antibody
measurement
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Pending
Application number
JP57056432A
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English (en)
Inventor
Yoshinobu Miyashita
宮下 佳展
Haruki Oishi
晴樹 大石
Taido Ueno
上野 泰道
Hiroki Shiraishi
浩己 白石
Kazuyuki Tsubaki
椿 和行
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Original Assignee
Wako Pure Chemical Industries Ltd
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Publication date
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Priority to AT83103297T priority patent/ATE58245T1/de
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/82Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a precipitate or turbidity

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  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、光散乱測定方法及びこれに用いる装置に関す
るものである。さらに詳しくは、本発明は、血液凝固反
応と抗原抗体反応とを1つのレーザー光源と1つ以上の
光検出器を用いて被検液の散乱光として測定する光散乱
の測定方法及びこれに用いる装置に関するものである。
血液凝固検査は、出血傾向が認められる患者の治療、あ
るいは、抗凝固剤治療を行なう患者の追跡管理に極めて
重要な検査であり、又1手術に失立つ検査として必須の
ものである。
かかる凝固検査として、プロトロンビン時間(以下、P
Tと略称する。)及び活性化部分トロンボプラスチン時
間(以)’、APTTと略称する。
)を測定する検査がよく知られており、各々、外因系凝
血機序及び内因系凝血機序の総合的な検査として実施さ
れている。
父、現在では、FT、APTTを測定することができる
各種の自動装置も多数市販されている。
血液凝固反応は、凝固第1〜第XIII因子による複雑
な連鎖反応とされておl、PTあるいはAPTTに異常
が認められた場合、どの因子がどの程度不足しているか
を測定する因子定量検査を行なう必要がある。
従来、因子定量のためには、補正試薬を用いて、FTあ
るいはAPTT検査を行ない、どの因子が欠乏している
かを定性的Kp4べた後、適当な因子欠乏血漿を用いて
FTあるいはAPTT検査による検量関係を測定しなけ
ればならず、非常に繁雛な手続きと多大の労力が必要で
あった。
又、測定法が間接的であるため得られる定量結果はそれ
程精度の高いものではなかった。
近年、PTあるいはAPTTのような凝固反応の総合的
な検査ではなく、抗原抗体反応を利用した免疫活性値の
測定あるいは合成基質による酵素反応を利用した生物活
性値の測定によって、直接各凝固因子を定量する方法が
提案されている。
該方法によれば、簡便で特異性が高く精度の良い測定が
可能となるが、従来のFT、APTTilll定装置で
は該方法による測定実施が不可能であるため、新たに高
価な装置を準備する必要があり。
非常に不経済であった。
逆に、該方法による測定を行なう装置は、FT    
 ’APTTという血液凝固検査に於ける極めて有効な
スクリーニング検査が実施不可能であるという欠点を有
していた。
本発明の目的は、上記現状に鑑み、従来のPT、APT
T測定等の血液#固測定と抗原抗体反応を利用した血液
凝固因子等の免疫学的測定を双方とも実施可能とする測
定方法及びこれに用いる装置を提供することにある。
本発明によれば、一台の装置で効率よく、スクリーニン
グ検査から定量検査迄を簡便に高釉度で♀Jなうことが
可能になる。
本発明の方法は、1つのレーザー光源と、該光源によっ
て照射される被検液と、該被検液の散乱光を検出する1
つ以上の光検出器から構成される装置を用いる。
第1図に1本発明に係るレーザー光源と光散乱源である
被検液及び光検出器の配置を、1つの実施例として示す
反応キュベツト2.内の被検液4は、レーザー光源1.
より発せられた一定光量のレーザー光束によって照射さ
れ1wZ検液の状態に応じて該入射光束を散乱する。
この光散乱強度を11111定して電気信号に変換する
1つ以上の光検出器、例えば2つの光検出器3及び光検
出器5が反応キーペットに対して特定の位置に配置され
る。
レーザー光源1は例えば発振波長700〜80Qnmの
可視近赤外半導体レーザーでよく、反応キュベツト2.
は例えば内径5mmの試験管キュペット、又、光検出器
3及び5は通常のシリコンフォトセルでよい。
反応キーペット2の中心を通るレーザー光軸と光検出器
のなす角度をθとし、光検出器の位置を表わすとすれば
、例えば、θ=50°の位置に配置した光検出器3.を
使用して血液凝固反応による光散乱強度Sの経時変化を
記録するとfJ/fJ2図が得られる。
又1例えば、θ=155°の位置に配置された光検出器
5を使用して抗原抗体反応による光散乱強度Sの経時変
化を記録すると第3図が得られる。
血液凝固反応による光散乱強度Sの経時変化を記録した
第2図に於て、aの部分は、被検試料と試薬の混合によ
って凝固反応は進行しているが。
未だフィブリンの析出は認められない状態、bの部分は
、フィブリンの析出が盛んに進行している状態、Cの部
分は、フィブリノーゲン1.−F、FIBと略称する。
)のフィブリ/への転換析出が終了した状態と解されて
おり、aからbへ移行する時点Tcがフィブリン析出の
開始時点であることが経験的に知られている。
上記実施例の装置を用いて、PT測測定於ける正常ヒト
血漿の生食水にょ−る希釈率とTcの関係(以下、活性
度曲線と略称する。)を求めた結果が第5図である。
即ち、クエン酸加正常ヒト血漿の生食水希釈試料100
aとトロンボプラスチン試液(ウサギ脳由来−) 10
01Le及び002M塩化カルシウム水溶液1004を
混合後の光散乱強度の変化の様子からTcを求め、前記
正常ヒト血漿試料希釈率との関係をプロットした。
10倍希釈という凝固活性の低い試料迄安定した活性度
曲線が得られた。
凝固反応に伴う散乱光の変化からTcを求めることは公
知であるが、光源として強度、単色性に優れたレーザー
を用いることで、低活性凝固反応迄感度よく安定した測
定が可能となる。
又、凝固反応検出をレーザーを光源とする散乱光測定方
式とすることによって、同一の装置で抗原抗体反応の測
定も可能となる。
抗原抗体反応による光散乱強度Sの経時変化は第3図に
示すようになる。
即ち、測定すべき抗原あるいは抗体を含む溶液と対応す
る抗体あるいは抗原を含む試薬を混合した時点から光散
乱強度Sは増加を°開始し、時間TA経過後は一定のレ
ベルΔBを維持する。
上記実施例の装置を用いて、血液凝尚第1因了であるフ
ィブリノーゲンの検Ik線を求めた結果が第6図である
即ち、抗FIB血清(ウサギ由来)125倍希釈液30
0tt−eK各濃度ノF I B抗原を含む41AI1
114血漿61倍希釈液60μEを添加し、室温で15
分間イ/キーペー7ヨンして、上記装置の光検出器の出
力を読み、△5=(155+後の光散乱強度5)−(反
応開始前の光散乱強度S)と濃度との関係を求めた。
定隼測定に十分な検量関係が得られた。
又、上記実施例に於ける光検出器3を用いても抗原抗体
反応の測定が可能である。
この場合も、被検液内の抗原抗体反応の進行に伴う光散
乱強度Sの経時変化の様子は、感度の低下はあるものの
、第3図と類似のパターンを示す。
前述の実施例と同様にして、抗原あるいは抗体を定量す
ることができるが、第4図に示すように、光散乱強度S
の変化の速度(dS/dT)の経時変化から抗原あるい
は抗体を定量することもできる。
例えば、光散乱強度Sの変化の最大値Pとフィブリノー
ゲ/濃度′の検量線を上記実施例の装置で求めた結果が
第7図である。
即ち、抗Fより血清(ウサギ)125倍希釈液300/
7−gに、各濃度のFより抗原を含む標準血漿21倍希
釈液5olLeを添加し、上記装置の光検出器3.の出
力を公知の微分電気回路で処理し、微分の最大値Pと濃
度との関係を求めた。
定量測定に十分な安定した検量関係が得られた。
本実施例によれば、凝固反応の測定と抗原抗体反応の測
定が同一の光検出器で可能であり、光学系が簡素化され
るメリットがある。
このように、レーザーを光源とする散乱光測定方式によ
って血液凝固反応と抗原抗体反応を同一の装置で測定で
きるという点に関して、本発明に係る技術開示以前に言
及した例は無い。
本発明によれば、スクリーニング検査と定量検査とに従
来必要であった2種類の装置の機能を1台で実現でき、
その効果が顕著なものであることは明らかである。
又1本方法及び′装置によって、抗原抗体反応による凝
集反応を測定することができる。
該測定では、ラテックス粒子に抗原あるいは抗体を結合
し、被検試料と平板上で混合攪拌し、抗原抗体反応によ
るラテックス粒子の凝集の有無から被検試料中の抗原あ
るいは抗体量を半定量的に測定する方法が従来から行な
われている。
本発明による実施例の装置で、光検出器3を用いて被検
液の光散乱強度を測定し、ラテックス粒子による散乱光
のパックグランド信号を゛電気的に除去すると、抗原抗
体反応による凝集の有無に応じて、光散乱強度Sの経時
変化の信号が第3図に類似した形で得られる。
この場合も、該信号の変化速度d死Tの経時変化として
第4図に類似の信号が得られ、その最大値Pより、被検
液中の抗原あるいは抗体の濃度を定量できる。
例えば、近年、血液凝固検査に関連して検査需要が増大
しているフィブリン分解産生物(以下、FDPと略称す
′る。)の測定も、上記の方法によりラテックス凝集反
応として本発明による装置で容易に実施できる。
抗原抗体反応を凝集反応として捉える方法に対しても本
発明の方法及び装置を適用できることは、本発明の応用
を拡げ、その効果を一層顕著なものとする。
第8図は1本発明を実際の光散乱測定装置として構成し
た装置のブロック図である。
光検出器で電気信号に変換された光散乱強度信号は、信
号前処理器6.で処理される。
信号切替器12.は、光検出器3.と5.0出力信号の
うちいずれを信号前処理器に人力するかを切り肴える。
信号前処理器5は、電気的増幅、又、Pを利用する抗原
抗体反応の測定では更に微分処理を行ない、その結果を
A/D変換器7に入力する。
コンヒユーター8.は、該A/T)変換器によってデジ
タル景に変換された光散乱強度信号の情報を演算処理し
、血液凝固測定の場合は凝固時点を判定し、抗原抗体反
応測定の場合は抗原あるいは抗体−1の濃度を算出する
血液凝固時点の判定、又、抗原あるいは抗体の濃度の算
出方法として、上記実施例以外にも種々の手順が提案さ
れ各々に対応する様々なプログラムが作成できることは
周知であるが、それは本発明の実施態様を制限するもの
ではない。
さらに、コンピューターで処理したデータの表示印字部
91反応過程を連続的に観測する記録計110.及び試
薬分注機構自動検体準備機構−10,によって装置は構
成される。
このように1本発明と既存技術の組み合わせによって自
動化、省力化された光散乱測定方法及び装置が容易に実
現できることは明らかでやる。
以上5本発明の実施例についても併せて述べたが、本発
明はこれらの実施例にのみ限定されるものではなく1本
発明の範囲内で各種の具体例に応用することができるも
のである。
本発明は、上述した如く、従来一台の装置では不可能で
あった血液凝固反応の測定と抗原抗体反応の測定を同一
の装置で高精度に実現できるものであシ、当該測定の効
率化及び合理化に大きく貢献するものであるとともに、
本方法及び装置によれば、臨床検査の実施に当って詳細
なる臨床成績を得ることができ、医療分野に於ける貢献
は大なるものがある。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明による測光系原理図、第2図は血液凝固
反応に於ける被検液の時間光散乱強度特性図、第3図は
抗原抗体反応に於ける被検液の時間光散乱強度特性図、
第4図は第3図の特性図についての時間微分特性図、第
5図はFT測測定於ける希釈率と凝固時間の特性図、第
6図はFより測定に於ける抗原濃度と光散乱強度につい
ての検量特性図、第7図はFIB測定に於ける抗原濃度
と光散乱強度変化の最大速度についての検量特性図、第
8図は本発明を応用した光散乱測定装置のブロック図で
ある、 1、 レーザー光源 2 反応キュベツト 3及び5. 光検出器 7、  A/Dコンバーター 8 コンピューター 特許出願人 和光純薬工業株式会社 図面のルー、内容に羨変なし) 第1図 dS/dTw14図 B 1゛c    第5図 帥 第6図 第8図 0 1 事件の表示 昭和57年特許願第56432号 2 発明の名称 光散乱測定方法 3、 補正をする者 事件との関係  特許出願人 4 補正命令の日付 m−−〒 5 補正の対象 明細書及び図面。 6、 補正の内容 明細書及び図面の浄書(内容に変更なし)。 別紙の通り。 以上

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)レーザー光線を反応容器内の被検液に照射しJゾ
    応開始後の被検液の光散乱強度の変化からi)被検液の
    血液凝固反応の測定 ii)被検液の抗原抗体反応の測定 を1つの光源と1つV上の光検出器で行うことを特徴と
    する光散乱測定方法。
  2. (2)レーザー光軸に列して異なる角度の株数の光散乱
    強度を測定する特許請求の範囲第1項記載の光散乱測定
    方法。
  3. (3)血液凝固117間の測定が、血液凝固反応の進行
    に伴なうフィブリンの析出による光散乱強度の変化に基
    く特許請求の範囲第1項又は第2項記載の光散乱測定方
    法。
  4. (4)抗原抗体反応の測定が抗原抗体複合物の形成によ
    る光散乱強度の変化に基く特許請求の範囲第1項又は第
    2項記載の光散乱測定方法。
  5. (5)抗原抗体反応の測定が抗原又は抗体を支持する不
    溶性担体粒子の凝集による光散乱強度の変化に基く特許
    請求の範囲第1項又は第2項記載の光散乱測定方法。
JP57056432A 1982-04-04 1982-04-05 光散乱測定方法 Pending JPS58173455A (ja)

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US06/481,961 US4766083A (en) 1982-04-04 1983-04-04 Method for the photometric determination of biological agglutination
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AT83103297T ATE58245T1 (de) 1982-04-04 1983-04-05 Verfahren zur photometrischen bestimmung biologischer agglutinaten.
DE8383103297T DE3381979D1 (de) 1982-04-04 1983-04-05 Verfahren zur photometrischen bestimmung biologischer agglutinaten.

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62142274A (ja) * 1985-10-25 1987-06-25 アルタ ダイアグノステイツク マシーンズ リミテイド 血液中の抗体含有量の測定のための方法及び装置
ITUD20090047A1 (it) * 2009-02-25 2010-08-26 Alifax Holding S P A Apparecchiatura per analizzare un campione biologico

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