JPS58140642A - ビリルビン測定用試薬 - Google Patents
ビリルビン測定用試薬Info
- Publication number
- JPS58140642A JPS58140642A JP2264882A JP2264882A JPS58140642A JP S58140642 A JPS58140642 A JP S58140642A JP 2264882 A JP2264882 A JP 2264882A JP 2264882 A JP2264882 A JP 2264882A JP S58140642 A JPS58140642 A JP S58140642A
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- JP
- Japan
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- bilirubin
- reagent
- chelating agent
- ion
- heavy metal
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/728—Bilirubin; including biliverdin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はビリルビン測定試薬に関する。
ビリルビンの測定に用いられる従来の試薬は、安息香酸
ナトリウム、カフェインあるいはメタノール、ある徳の
外向活性剤などの直接化剤（直接ビリルビンの場合は工
費）と７７ゾ化剤（多くの場４！ｒ亜硝酸ナトリウムと
スルファニル酸）とアルカリ化剤より＊ｇさ扛ている。
ナトリウム、カフェインあるいはメタノール、ある徳の
外向活性剤などの直接化剤（直接ビリルビンの場合は工
費）と７７ゾ化剤（多くの場４！ｒ亜硝酸ナトリウムと
スルファニル酸）とアルカリ化剤より＊ｇさ扛ている。
こ扛ら従来の試薬を自動分析装置に応用して長時間に亘
る再現性を検討した場合、大部分の測定値は±０．２ｍ
ｇ／ｄｔの範囲に入り良好な再現性を示すか、１００回
のテストに１１ｇ１程度の割合で０、５ ｍｇ／ｄ を
以上も低い測定値が出現する現象が、 おり、その原
因は不明であった。さらに１ケの分橙。
る再現性を検討した場合、大部分の測定値は±０．２ｍ
ｇ／ｄｔの範囲に入り良好な再現性を示すか、１００回
のテストに１１ｇ１程度の割合で０、５ ｍｇ／ｄ を
以上も低い測定値が出現する現象が、 おり、その原
因は不明であった。さらに１ケの分橙。
法器で異った試薬を次々に分注する形式の小型自動分析
装置に対して上述の従来の試薬の適用した場合、銅イオ
ンを含むビューレット試薬によって蛋白質を測定した直
後に総ビリルビンあるいは直接ビリルビンを測定すると
、特異的に着しい負誤差を生ずることが判明した。
装置に対して上述の従来の試薬の適用した場合、銅イオ
ンを含むビューレット試薬によって蛋白質を測定した直
後に総ビリルビンあるいは直接ビリルビンを測定すると
、特異的に着しい負誤差を生ずることが判明した。
本発明の目的は自動分析装置によるしビリルビン及び直
接とりルピンの測定に関連して、前述のような負誤差を
防止できるビリルビン６１＋ｒ足用試桑を提供せんとす
るものである。
接とりルピンの測定に関連して、前述のような負誤差を
防止できるビリルビン６１＋ｒ足用試桑を提供せんとす
るものである。
このような目的ｔ−這成するために、ビリルピン測定に
おいて頻々と遭遇する負誤左の原因を究明した結果、そ
のほとんどは重金属イオンによるジアゾ反応阻害である
ことが判明した。したがって、問題解決の根本はキレー
ト剤によるこれら重金属イオンのマスキングであるが、
陶時にマスキングに用いるキレート剤がビリルビンの測
定反応に影響しないことが重要な条件となることが判明
したことに基づいて本発明はなさｔたものである。
おいて頻々と遭遇する負誤左の原因を究明した結果、そ
のほとんどは重金属イオンによるジアゾ反応阻害である
ことが判明した。したがって、問題解決の根本はキレー
ト剤によるこれら重金属イオンのマスキングであるが、
陶時にマスキングに用いるキレート剤がビリルビンの測
定反応に影響しないことが重要な条件となることが判明
したことに基づいて本発明はなさｔたものである。
以下実施例を用いて本発明のビリルビン測定用試薬につ
いて説明する。
いて説明する。
原因究明のため、前述のヒユーレット試薬に含まれる酒
石酸ナトリウムカリウム、ヨー化カリ。
石酸ナトリウムカリウム、ヨー化カリ。
界面活性剤（ティーボール）、硫酸銅などの各成分を総
ビリルビン試薬に添加して測定値に対する影＊を調べた
。その結果０．１−一度の硫酸銅の添加によって総ビリ
ルビンの測定値がＯ，ａｍｇ、’ｄＬ（１，Ｑｎ１ｇ／
ｃｌｊ −＋ Ｑ、 ７ｍｇ／ｄｌ ）低下することが
判つ友。ビリルビンの正常範囲が０．２〜１． Ｏｍ
ｇ／ｄ ｔであるから０．３ｍｇ／ａｔの負−差は１大
である。
ビリルビン試薬に添加して測定値に対する影＊を調べた
。その結果０．１−一度の硫酸銅の添加によって総ビリ
ルビンの測定値がＯ，ａｍｇ、’ｄＬ（１，Ｑｎ１ｇ／
ｃｌｊ −＋ Ｑ、 ７ｍｇ／ｄｌ ）低下することが
判つ友。ビリルビンの正常範囲が０．２〜１． Ｏｍ
ｇ／ｄ ｔであるから０．３ｍｇ／ａｔの負−差は１大
である。
また銅イオンのほかに第２鉄イオンなどによっても負−
差Ｔｋ午することも判明した。自動分析装置は血清ビペ
ツテンク糸、試薬分注糸、洗紗糸など多くの部分がステ
ンレス合金で構成されているため、これらの部分の腐蝕
によって、鉄イオンが測定猷中に混入する可能性が考え
らｔｌこれが前述の突発的負−差の原因と考えらｒしる
。
差Ｔｋ午することも判明した。自動分析装置は血清ビペ
ツテンク糸、試薬分注糸、洗紗糸など多くの部分がステ
ンレス合金で構成されているため、これらの部分の腐蝕
によって、鉄イオンが測定猷中に混入する可能性が考え
らｔｌこれが前述の突発的負−差の原因と考えらｒしる
。
ビリルビンの発色反応は次式に示すようにジアゾ縮合反
応であり、酸化触媒となる銅、第２鉄などによって中間
生成物であるジアゾニウム塩が酸化されるための発色率
が低下するのではないかと推定される。
応であり、酸化触媒となる銅、第２鉄などによって中間
生成物であるジアゾニウム塩が酸化されるための発色率
が低下するのではないかと推定される。
（スル７アニＡ１１） （８ｗ！ソータ）（ジアゾ
ニウム塩）（ビリルビン） 以上の観点から、本発明においては重金楓イオンをマス
キングするために適尚なキレート剤を総ビリルビン及び
直接ビリルビン試薬中に混在させた。懺１に本発明の１
案施例の試薬組成を示した。
ニウム塩）（ビリルビン） 以上の観点から、本発明においては重金楓イオンをマス
キングするために適尚なキレート剤を総ビリルビン及び
直接ビリルビン試薬中に混在させた。懺１に本発明の１
案施例の試薬組成を示した。
表１ 試薬組成（最終良度）
従来の試薬組成は懺１のＥＤＴＡ−２Ｎａの濃度を０と
した組成で表わされる。本発明の試薬と従来の試薬を比
較するために、両方の試薬を用いて前述の小皺自動分析
＃Ｃ皺によって総蛋白と総ビリルビンの同時１１ｊ定を
行った。結果は表２に示すように従来の試薬では総蛋白
を測定した直後の総ビリルビン醐定値が１．３ｍｇ／ａ
ｚ （約４０％） 低下するが、本発明の試薬ではそ
のような低下現象は全く見られない。
した組成で表わされる。本発明の試薬と従来の試薬を比
較するために、両方の試薬を用いて前述の小皺自動分析
＃Ｃ皺によって総蛋白と総ビリルビンの同時１１ｊ定を
行った。結果は表２に示すように従来の試薬では総蛋白
を測定した直後の総ビリルビン醐定値が１．３ｍｇ／ａ
ｚ （約４０％） 低下するが、本発明の試薬ではそ
のような低下現象は全く見られない。
表２ 小屋自動分析装置による比軟結果＊ ＢＩＬはｍ
ｇ／ｄ４ ＴＰはｇ／ｄｔｍＪ＆で示している筐た１６
テヤン不ルの大緘目製分析装置によってプール血清５０
０検体の逼絖創定を行なった。
ｇ／ｄ４ ＴＰはｇ／ｄｔｍＪ＆で示している筐た１６
テヤン不ルの大緘目製分析装置によってプール血清５０
０検体の逼絖創定を行なった。
従来のＫｍでは平均１ｋ （２，１ｍｇ／ｃｌｔ）±０
．２ｎ＋ｇ／ａｚの範囲に入らない低１１１が３ケ（１
，５，１，７，１，７）祝われたが、不発明の試薬では
５００検体全ての１．９〜２．３ｍｇ／Ｑｔ（７）ｙｌ
ｅＦＭｒｃ人−）＊。
．２ｎ＋ｇ／ａｚの範囲に入らない低１１１が３ケ（１
，５，１，７，１，７）祝われたが、不発明の試薬では
５００検体全ての１．９〜２．３ｍｇ／Ｑｔ（７）ｙｌ
ｅＦＭｒｃ人−）＊。
医４ＣＥＤＴＡｉ添加したことによるヒリルビン側足１
ｍに対する影曽會児るために両刃の試条會片いて同一装
置による相関実験金材なった。結果は第１凶に示すよう
に回帰１１よほは４５″の直線となりり、ｂ’ｌ’Ａ−
２Ｎａによる悪影臀は全く見られない。
ｍに対する影曽會児るために両刃の試条會片いて同一装
置による相関実験金材なった。結果は第１凶に示すよう
に回帰１１よほは４５″の直線となりり、ｂ’ｌ’Ａ−
２Ｎａによる悪影臀は全く見られない。
１７ｔ ＥＤＴＡ−２ｈａの范加電會検討した。０．０
１ ｍＭでは六２の実馴において本発明の紙業において
も看干の負誤差（’ｌ’ＰｆＡＩ＋足のｌｊｌ恢で０．
１〜０．３低くなる）がｍｔ）ｒＬるが、０． Ｉ Ｉ
ｎＭＴは表２の１ｍＭと同様の粕来會侍た。つまり、０
．０１ｍＭ以上が有効でめる。）！、ＩＪＴＡの他のキ
レート剤、ＧＥＩ）ＴＡ（クリコールエーテルンアミン
四酢敵） 、１ＪＰＴＡ −ＯＨ（ジアミノプロパノー
ル四酢改）などについてはＥｌ）ＴＡとはとんと同様の
結果を得た。Ｉ’ｌｌ’Ａ （ニド１７０三酢敵）など
は１０ｎＩＮ以上で有効であった。エチレンジアミンの
ように弱いキレート剤はｌＱｍλ１でもｔ゛よとんど効
果がなかった。
１ ｍＭでは六２の実馴において本発明の紙業において
も看干の負誤差（’ｌ’ＰｆＡＩ＋足のｌｊｌ恢で０．
１〜０．３低くなる）がｍｔ）ｒＬるが、０． Ｉ Ｉ
ｎＭＴは表２の１ｍＭと同様の粕来會侍た。つまり、０
．０１ｍＭ以上が有効でめる。）！、ＩＪＴＡの他のキ
レート剤、ＧＥＩ）ＴＡ（クリコールエーテルンアミン
四酢敵） 、１ＪＰＴＡ −ＯＨ（ジアミノプロパノー
ル四酢改）などについてはＥｌ）ＴＡとはとんと同様の
結果を得た。Ｉ’ｌｌ’Ａ （ニド１７０三酢敵）など
は１０ｎＩＮ以上で有効であった。エチレンジアミンの
ように弱いキレート剤はｌＱｍλ１でもｔ゛よとんど効
果がなかった。
＠接ビリルビン測定においても測定値が全体的に近いこ
とを除けば総ビリルビンの場合と全く同様の結果になる
。
とを除けば総ビリルビンの場合と全く同様の結果になる
。
以上のように適量のキレート剤を混在させることによっ
て銅、鉄などの重金楓イオンの汚采によると考えられる
総ビリルビン及び直接ビリルピン測定における負誤差を
元金に防止できるものである。
て銅、鉄などの重金楓イオンの汚采によると考えられる
総ビリルビン及び直接ビリルピン測定における負誤差を
元金に防止できるものである。
以上述べたことから明らかなように、本発明の試楽を用
いることによって、自動分析装置による総ビリルビン及
びａｈビリルビン６１Ｑ ｉにおける異常な負−差を防
止する目的は完全に達成できる。
いることによって、自動分析装置による総ビリルビン及
びａｈビリルビン６１Ｑ ｉにおける異常な負−差を防
止する目的は完全に達成できる。
し〃・も添加されるキレート剤のｔは惨＾ノで倣菫なた
め試薬のコストは従来通りである。
め試薬のコストは従来通りである。
特に前述の小皺自動分析装置においては有効となるもの
でるる。
でるる。
第１図ＩＩｉ従来法の試薬と本発明の試薬を用いた場合
の総ビリルビン−ｊ友の相関図でおる。
の総ビリルビン−ｊ友の相関図でおる。
Claims (1)
- １、 ビリルビンの測定に用いられる試薬にキレート剤
が混在されていることを特徴とするビリルビン測定用試
薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2264882A JPS58140642A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | ビリルビン測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2264882A JPS58140642A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | ビリルビン測定用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58140642A true JPS58140642A (ja) | 1983-08-20 |
Family
ID=12088664
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2264882A Pending JPS58140642A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | ビリルビン測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58140642A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989003030A1 (en) * | 1987-09-29 | 1989-04-06 | Ivan Endre Modrovich | Stable reagent for determining bilirubin in serum |
| US4965210A (en) * | 1987-09-29 | 1990-10-23 | Modrovich Ivan Endre | Stable reagent for determining bilirubin in serum and method of preparation |
| WO1992007273A1 (en) * | 1990-10-19 | 1992-04-30 | Ivan Endre Modrovich | The characterization of a single reagent for the determination of direct bilirubin |
| FR2738663A1 (fr) * | 1995-09-12 | 1997-03-14 | Doryokuro Kakunenryo | Procede de separation d'actinides trivalents et d'elements de terres rares d'un dechet liquide fortement acide |
-
1982
- 1982-02-17 JP JP2264882A patent/JPS58140642A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989003030A1 (en) * | 1987-09-29 | 1989-04-06 | Ivan Endre Modrovich | Stable reagent for determining bilirubin in serum |
| EP0335954A1 (en) * | 1987-09-29 | 1989-10-11 | Ivan E. Modrovich | Method for forming a stable reagent for determining bilirubin in serum and reagent obtainable by said method |
| US4965210A (en) * | 1987-09-29 | 1990-10-23 | Modrovich Ivan Endre | Stable reagent for determining bilirubin in serum and method of preparation |
| US5112769A (en) * | 1987-09-29 | 1992-05-12 | Modrovich Ivan Endre | Stable single liquid reagent for determination of direct bilirubin in sera and method of forming same |
| WO1992007273A1 (en) * | 1990-10-19 | 1992-04-30 | Ivan Endre Modrovich | The characterization of a single reagent for the determination of direct bilirubin |
| FR2738663A1 (fr) * | 1995-09-12 | 1997-03-14 | Doryokuro Kakunenryo | Procede de separation d'actinides trivalents et d'elements de terres rares d'un dechet liquide fortement acide |
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