JPS58134155A - 安定化されたロマノウスキイ型染色溶液 - Google Patents
安定化されたロマノウスキイ型染色溶液Info
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- JPS58134155A JPS58134155A JP58006748A JP674883A JPS58134155A JP S58134155 A JPS58134155 A JP S58134155A JP 58006748 A JP58006748 A JP 58006748A JP 674883 A JP674883 A JP 674883A JP S58134155 A JPS58134155 A JP S58134155A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B67/00—Influencing the physical, e.g. the dyeing or printing properties of dyestuffs without chemical reactions, e.g. by treating with solvents grinding or grinding assistants, coating of pigments or dyes; Process features in the making of dyestuff preparations; Dyestuff preparations of a special physical nature, e.g. tablets, films
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- C09B67/0083—Solutions of dyes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血液染色方法に関し、更に詳しくは蔦ロマノ
ウスキイ（Ｒｏａｎｎ・ｗｓｋｙ ）型染料、例えば、
ライト（Ｗｒｉｇｈｔ）溶液及びギームザ（Ｇｉ＠ｍｓ
ａ）１１液の安定化に関する。これらの染料は、メチレ
ンブルー及びエオシン染料のメタノール溶液を他の類似
染料と共に含有している。代表的な類似染料としては、
アズールム、アズールＢ及びアズールＣが挙げられ、か
つエオシンＹが好ましいエオシン染料であり、通常、そ
のニナトリウム塩の形でメタノール溶液に加えられる。
ウスキイ（Ｒｏａｎｎ・ｗｓｋｙ ）型染料、例えば、
ライト（Ｗｒｉｇｈｔ）溶液及びギームザ（Ｇｉ＠ｍｓ
ａ）１１液の安定化に関する。これらの染料は、メチレ
ンブルー及びエオシン染料のメタノール溶液を他の類似
染料と共に含有している。代表的な類似染料としては、
アズールム、アズールＢ及びアズールＣが挙げられ、か
つエオシンＹが好ましいエオシン染料であり、通常、そ
のニナトリウム塩の形でメタノール溶液に加えられる。
かかる染料を用いるには、一般に１乾燥染料のメタノー
ル溶液を調製し、そしてその溶液を血液塗抹標本等に塗
布することが必要である。次に１顯黴鏡で蒙察すると、
細胞染色の・相違が血液塗抹標本上に生じるまで、この
染色された塗抹標本に、緩衡溶液及び洗浄溶液を段階的
に加える。
ル溶液を調製し、そしてその溶液を血液塗抹標本等に塗
布することが必要である。次に１顯黴鏡で蒙察すると、
細胞染色の・相違が血液塗抹標本上に生じるまで、この
染色された塗抹標本に、緩衡溶液及び洗浄溶液を段階的
に加える。
メチレンブルーに加えて、第２の染料、％にエオシンＹ
が存在することは、溶液の染色能を高めるのに望ましい
。他の類似・□染料、すなわちアＸ−ルム、アズールＢ
及びア７←ルＣも又血液塗抹榔−′１゜ 本を染色ｆるための溶液め性能を高めるのに望ましい。
が存在することは、溶液の染色能を高めるのに望ましい
。他の類似・□染料、すなわちアＸ−ルム、アズールＢ
及びア７←ルＣも又血液塗抹榔−′１゜ 本を染色ｆるための溶液め性能を高めるのに望ましい。
かかる染料を用いる標準的な方法は、メタノール溶液を
調製し、次にこの溶液を一定時間放は、メ′タノールに
溶解しに＜＜、メチレンブルーは溶液中で熟成すると、
エオシンの存在下で、脱メチル基反応によってアズール
類に減成する。最適の染色結果を達成する丸めには、通
常、約２週間の放置期間を要する。不都合なことＫは、
染料は減成しつづけ、生じ九減成生成物によシ、溶液は
所定の目的に適さないもＯＫなってしまう。更に、熟成
時に染料溶液中に生じる不特定の沈澱によシ、染色能が
低下することに々る。かくして、染料溶液が、充分に効
果を発揮するようになるＫは、約２週間を要するけれど
も、その保存寿命は僅か約３ケ月からおおよそ１２ケ月
しかない。
調製し、次にこの溶液を一定時間放は、メ′タノールに
溶解しに＜＜、メチレンブルーは溶液中で熟成すると、
エオシンの存在下で、脱メチル基反応によってアズール
類に減成する。最適の染色結果を達成する丸めには、通
常、約２週間の放置期間を要する。不都合なことＫは、
染料は減成しつづけ、生じ九減成生成物によシ、溶液は
所定の目的に適さないもＯＫなってしまう。更に、熟成
時に染料溶液中に生じる不特定の沈澱によシ、染色能が
低下することに々る。かくして、染料溶液が、充分に効
果を発揮するようになるＫは、約２週間を要するけれど
も、その保存寿命は僅か約３ケ月からおおよそ１２ケ月
しかない。
ギリランド等（Ｇｉｌｌｉｌａｍｄ ＠＄ ａｌ ）は
、８４ａｉｍＴ＠ｅｋｎ＠ｌｅｇｙ 、第５４巻、第３
号、 １４４〜１５０頁において、工・、′オシンをプ
ロトン化する丸めに溶液１ を酸性ＫＬ、（−、れによって、沈澱の生成を阻止する
ことにより、゛・〜ノウスキイ型血液染料を安定化でき
ることを報告している。使用に際しては、染料は、４Ｉ
Ｋ配合した定着性溶液によシ中和される。我々はこの方
法が、ある自動染色装置での適正化に必ｌ！表濃度の染
料を安定化するためには好適でないことを見出した。か
かる自動装ｆｌにおいては、染色時間の短いことが要求
されるので、この濃度は、分光光度針で走査するｉ、６
４５ナノメートルＣ−ｍ’）では２３０光学濃度単位（
ｏｐｊｌａｍ”１ｄ＊ｎ＋＊Ｌｔｙ ｕｎｉｔｓ’）、
及び５２５１１ｍでは１２８光学濃度単位を吸収する溶
液を拠供するに少なくとも十分なものでなければならな
い。こ、こで用いら孔ている場合光学濃度単位は、稀釈
因子の吸光変倍として定義され、即ち、それは濃度の関
数である。
、８４ａｉｍＴ＠ｅｋｎ＠ｌｅｇｙ 、第５４巻、第３
号、 １４４〜１５０頁において、工・、′オシンをプ
ロトン化する丸めに溶液１ を酸性ＫＬ、（−、れによって、沈澱の生成を阻止する
ことにより、゛・〜ノウスキイ型血液染料を安定化でき
ることを報告している。使用に際しては、染料は、４Ｉ
Ｋ配合した定着性溶液によシ中和される。我々はこの方
法が、ある自動染色装置での適正化に必ｌ！表濃度の染
料を安定化するためには好適でないことを見出した。か
かる自動装ｆｌにおいては、染色時間の短いことが要求
されるので、この濃度は、分光光度針で走査するｉ、６
４５ナノメートルＣ−ｍ’）では２３０光学濃度単位（
ｏｐｊｌａｍ”１ｄ＊ｎ＋＊Ｌｔｙ ｕｎｉｔｓ’）、
及び５２５１１ｍでは１２８光学濃度単位を吸収する溶
液を拠供するに少なくとも十分なものでなければならな
い。こ、こで用いら孔ている場合光学濃度単位は、稀釈
因子の吸光変倍として定義され、即ち、それは濃度の関
数である。
例えば、４００倍に稀釈したのち、分光晃度計捌定によ
り、６４５”−６の波長において０．５７５の吸光度を
示す溶液は、０．５７５Ｘ４００’即ち２３０の光学濃
度程度の吸収を行うであろう。メチレジブルー及びアズ
ール類の溶液は６４５ ！ｌｆｆ１で最大吸収を、又、
エオシンＹの溶液は５２５１１１１にで最大吸収を示す
ので、これらの波長において、吸収測定が行われる。ギ
リランド等（Ｇｉｌｌｔｌａｎｄ ＠％ｍｌ）は、引用
文献において、染料溶液の濃度については開示していな
いが、その文献の第１図に開示された吸光度のデータか
ら判断すると、染料濃度は、６４５ｎｍ ′ｃ約１６２
光学濃度単位、５２５ ａｍでは約８７．５光学濃度単
位の光学濃度程度と推定され、これは上に引用し九自動
染色装置に、溶液が適応するのく必要とされる濃度のＪ
ｌ’１７０にである。
り、６４５”−６の波長において０．５７５の吸光度を
示す溶液は、０．５７５Ｘ４００’即ち２３０の光学濃
度程度の吸収を行うであろう。メチレジブルー及びアズ
ール類の溶液は６４５ ！ｌｆｆ１で最大吸収を、又、
エオシンＹの溶液は５２５１１１１にで最大吸収を示す
ので、これらの波長において、吸収測定が行われる。ギ
リランド等（Ｇｉｌｌｔｌａｎｄ ＠％ｍｌ）は、引用
文献において、染料溶液の濃度については開示していな
いが、その文献の第１図に開示された吸光度のデータか
ら判断すると、染料濃度は、６４５ｎｍ ′ｃ約１６２
光学濃度単位、５２５ ａｍでは約８７．５光学濃度単
位の光学濃度程度と推定され、これは上に引用し九自動
染色装置に、溶液が適応するのく必要とされる濃度のＪ
ｌ’１７０にである。
ＨＣｌを添加するととＫよって、所望濃度の染料溶液を
酸性化す為際、ギリランド尋によって開示されているよ
うに、ｐＨ３，０までの酸性化では、自動染色装置に有
用なＪより高い濃度の染色溶液中に沈澱が生じないよう
にするには不十分である。更に、ｐＨ１，ｌｔで酸性化
すると、沈澱を防止するが、この−では、エオシンＹが
ある別の種（ｓｐ・６ｉ０）Ｋ不可逆的に転換し、染料
の染色能を劣化させる。
酸性化す為際、ギリランド尋によって開示されているよ
うに、ｐＨ３，０までの酸性化では、自動染色装置に有
用なＪより高い濃度の染色溶液中に沈澱が生じないよう
にするには不十分である。更に、ｐＨ１，ｌｔで酸性化
すると、沈澱を防止するが、この−では、エオシンＹが
ある別の種（ｓｐ・６ｉ０）Ｋ不可逆的に転換し、染料
の染色能を劣化させる。
マーシャぶ等（Ｍａ’ｒｓｈａｌｌ ａｔ ｍｌ ）は
、Ｊ、 （：：ｌｉｍ。
、Ｊ、 （：：ｌｉｍ。
Ｐａｔｈｄ、、 ２８巻ｉ ９２０９２３頁（１９７５
）Ｋ、メチレンブルー、アズールＢ及びエオシン染料の
遊離酸をグリ七″リン及ルメタノールの１：１マ／マ混
合物に溶解して、ロマノウスキイ型染料を製造すること
Ｋついて開示している。彼らは従来の口マノウスキイ型
染料が同様の安定性を示すと報告しているが、この溶液
は極めて安定なものとして述べている。いずれにして４
、溶媒の・５０°％がグリセリンである染料溶液は極め
て安定なものとして知られているが、高い粘度を有する
ので、自動染色装置に用いるＫは適当でない。
）Ｋ、メチレンブルー、アズールＢ及びエオシン染料の
遊離酸をグリ七″リン及ルメタノールの１：１マ／マ混
合物に溶解して、ロマノウスキイ型染料を製造すること
Ｋついて開示している。彼らは従来の口マノウスキイ型
染料が同様の安定性を示すと報告しているが、この溶液
は極めて安定なものとして述べている。いずれにして４
、溶媒の・５０°％がグリセリンである染料溶液は極め
て安定なものとして知られているが、高い粘度を有する
ので、自動染色装置に用いるＫは適当でない。
本発明は、メチレンブルー；アズールム、アズールＢ又
はアズールＣ：及びエオシンＹの遊離酸混合物を、得ら
れた溶液が、６４５１１ｍで少なくとも約２３０光学濃
度単位の、かつ５２５ ａｍで少々くとも約１２８光学
濃度単位の分光光度的な吸収性を示すような量、メタノ
ールに溶解することを特徴とする改良された安定性特性
を有するロマノウスキイ染色溶液の製造方法である。
はアズールＣ：及びエオシンＹの遊離酸混合物を、得ら
れた溶液が、６４５１１ｍで少なくとも約２３０光学濃
度単位の、かつ５２５ ａｍで少々くとも約１２８光学
濃度単位の分光光度的な吸収性を示すような量、メタノ
ールに溶解することを特徴とする改良された安定性特性
を有するロマノウスキイ染色溶液の製造方法である。
改良された安定性特性を有するロマノウスキイ型染料は
、メタノール中で、自動染色装置に用いるのに必要とさ
れる濃度で、エオシンＹのニナトリウム塩よ−シむしろ
エオシンｔの遊離酸を用いて製造することができること
が発見されている。
、メタノール中で、自動染色装置に用いるのに必要とさ
れる濃度で、エオシンＹのニナトリウム塩よ−シむしろ
エオシンｔの遊離酸を用いて製造することができること
が発見されている。
本発明に含まれる化学反応は、模式図ムの構造式によシ
図示され志。エオシンＹは、通常、ニナトリウム塩（１
）の形゛で“検版されているが、上式により示されたよ
うに、容易にその遊離酸α）Ｋ転１化できる。遊離酸の
カルボキシル基は、そのラクトンＣ）と平衡状態で存在
し、更に酸性化すると、このラクトン偵）は、便宜上Ｅ
Ｔ’として記された１１（ｓｐ＠ｓｉ＠ａ ） ＱＶ）
に不可逆的に転化する。化合物（１）は、少なくとも約
ｏ、ｓ３ｆ／−のエオシンＹにナトリウム塩）を含有す
る染色溶液を酸性化することＫより生成でき、このエオ
シンＹＯ量は、自動染色装置における効果的性能にとっ
て必要であシ、かつ染色性能は化合物（１）と同等であ
る。しかしながら、この原料はこれらの濃度ではメタノ
ールよシ沈澱することが観察された。ｖＭｌ、 ６まで
更に酸性化すると、沈澱を防止するが染色性能の不十分
な化合物（ロ）（ＥＹ’）の生成を引きおこす。染料の
メタノール溶液を直接酸性化すると検討中のエオシンＹ
の濃度では沈澱生成又は過度な酸性化が避は難いので、
エオシンＹの遊離酸の有用性を検討し友。かくして、メ
タノール溶液の酸性化によ如化合物（１）をその場で遊
離酸（厘）に転化させるよりむしろ、遊離酸を溶液製造
に直接用いて、メチレンブルー：エオシンＹの遊離酸；
及びアズールム。
図示され志。エオシンＹは、通常、ニナトリウム塩（１
）の形゛で“検版されているが、上式により示されたよ
うに、容易にその遊離酸α）Ｋ転１化できる。遊離酸の
カルボキシル基は、そのラクトンＣ）と平衡状態で存在
し、更に酸性化すると、このラクトン偵）は、便宜上Ｅ
Ｔ’として記された１１（ｓｐ＠ｓｉ＠ａ ） ＱＶ）
に不可逆的に転化する。化合物（１）は、少なくとも約
ｏ、ｓ３ｆ／−のエオシンＹにナトリウム塩）を含有す
る染色溶液を酸性化することＫより生成でき、このエオ
シンＹＯ量は、自動染色装置における効果的性能にとっ
て必要であシ、かつ染色性能は化合物（１）と同等であ
る。しかしながら、この原料はこれらの濃度ではメタノ
ールよシ沈澱することが観察された。ｖＭｌ、 ６まで
更に酸性化すると、沈澱を防止するが染色性能の不十分
な化合物（ロ）（ＥＹ’）の生成を引きおこす。染料の
メタノール溶液を直接酸性化すると検討中のエオシンＹ
の濃度では沈澱生成又は過度な酸性化が避は難いので、
エオシンＹの遊離酸の有用性を検討し友。かくして、メ
タノール溶液の酸性化によ如化合物（１）をその場で遊
離酸（厘）に転化させるよりむしろ、遊離酸を溶液製造
に直接用いて、メチレンブルー：エオシンＹの遊離酸；
及びアズールム。
アズールＢ又はアズールＣからなる改良ライト（Ｗｒｉ
ｇｈｔ）染料を提供する。調製品のｐｉｆ（Ｍ＠ＯＨ）
は２５及び３．０の間であることが判明し、チアジン類
が非常に安定であることが判明し、呈温で３０日間、メ
チレンブルー及びアメール類の変化は全く検出されず、
約０．２にのＥＹ′の生成が、高性能液体クロマトグラ
フ（ＨＰＬ、Ｃ）ｇよや測定された。
ｇｈｔ）染料を提供する。調製品のｐｉｆ（Ｍ＠ＯＨ）
は２５及び３．０の間であることが判明し、チアジン類
が非常に安定であることが判明し、呈温で３０日間、メ
チレンブルー及びアメール類の変化は全く検出されず、
約０．２にのＥＹ′の生成が、高性能液体クロマトグラ
フ（ＨＰＬ、Ｃ）ｇよや測定された。
約２ＸのエオシンＹが、６０℃で３０日間の熟成後、Ｅ
Ｙ’に減成した仁とが判明した。吸収分光法、ＨＰＬＣ
分析又は顕微鏡試験によって測定されたように６０℃、
室温及び５℃に保たれ友染料試料中には、沈澱仲全く検
出されなかった。 ５本発明方法により製造された典型
的配合としては、約０．６４〜Ｌｏｔ／Ｌのメチレンブ
ルー、０．４９−１．０ｔ／Ｌ、のエオシンＹの遊離酸
及び０．３２〜１ｆ／ｌの類似染料、すなわち、アズー
ルム、アズールＢ又はアズールＣを溶解するものがある
。メチレンブルーに加えて、エオシンＹＱ存在は、溶液
の染色能を高めるのに必要である。
Ｙ’に減成した仁とが判明した。吸収分光法、ＨＰＬＣ
分析又は顕微鏡試験によって測定されたように６０℃、
室温及び５℃に保たれ友染料試料中には、沈澱仲全く検
出されなかった。 ５本発明方法により製造された典型
的配合としては、約０．６４〜Ｌｏｔ／Ｌのメチレンブ
ルー、０．４９−１．０ｔ／Ｌ、のエオシンＹの遊離酸
及び０．３２〜１ｆ／ｌの類似染料、すなわち、アズー
ルム、アズールＢ又はアズールＣを溶解するものがある
。メチレンブルーに加えて、エオシンＹＱ存在は、溶液
の染色能を高めるのに必要である。
本発明の実施方法及び本発明固有の有利性について、以
下の実施例によって更に説明する。
下の実施例によって更に説明する。
実施例１
約１．ＯＯ−のメタノールに３ｆの濃度で、市販のライ
ト（Ｗｒｉｇｈｔ）染料粉末（メチレンブルー、エオシ
ンのニナトリウム塩、及び類似アズール染料の混合物）
を溶解して、メタノール溶液を調製しえ。この溶液は、
メタノールで４００倍に稀釈し九後には、６４５１１ｍ
で０．５７５．５２５ ａｒｍで０．３２０の吸光度を
有した。したがってこの溶液は、１１１４ ！Ｓ Ｉｋ
ｍでは所望の２”’３ Ｇ光学濃度単位、５２５ａｍで
は所望の１２８光学濃度単位を有した。この溶液を、塩
化水素のメタノール溶液（０，９６Ｎ）で酸性化し、ｐ
Ｈ（Ｍ＠ｏｎ） ３．１とした。ギリランド等（Ｇｌｌ
ｌｌｌａｍｄ ＠ｔ ｍｌ） ＪＩＣよる前述の文献に
よると、これは、ニオシンＹのニナトリウム塩をその遊
離酸に転化するに十分な酸性度である。しかしながら、
安定な溶液を調製する１代）Ｋ、、この方法ｆ″ によると、−室温、５℃及び６１０℃で、３時間、３日
霞。
ト（Ｗｒｉｇｈｔ）染料粉末（メチレンブルー、エオシ
ンのニナトリウム塩、及び類似アズール染料の混合物）
を溶解して、メタノール溶液を調製しえ。この溶液は、
メタノールで４００倍に稀釈し九後には、６４５１１ｍ
で０．５７５．５２５ ａｒｍで０．３２０の吸光度を
有した。したがってこの溶液は、１１１４ ！Ｓ Ｉｋ
ｍでは所望の２”’３ Ｇ光学濃度単位、５２５ａｍで
は所望の１２８光学濃度単位を有した。この溶液を、塩
化水素のメタノール溶液（０，９６Ｎ）で酸性化し、ｐ
Ｈ（Ｍ＠ｏｎ） ３．１とした。ギリランド等（Ｇｌｌ
ｌｌｌａｍｄ ＠ｔ ｍｌ） ＪＩＣよる前述の文献に
よると、これは、ニオシンＹのニナトリウム塩をその遊
離酸に転化するに十分な酸性度である。しかしながら、
安定な溶液を調製する１代）Ｋ、、この方法ｆ″ によると、−室温、５℃及び６１０℃で、３時間、３日
霞。
及び６０日それぞれ貯蔵すると、実質的な沈澱が認めら
れる溶液を提供した。
れる溶液を提供した。
実施例１のように、市販のライ） （ｆｒｉｇｈｔ ）
染料粉末を用いてメタノール溶液を調製し、塩化水素の
メタノール溶液（０，９６Ｎ）で酸性化して、ｐＨ（Ｍ
ｅＯＨ） １．６とした。６０℃で３日間熟成後、約１
０％のエオシンＹがＥＴ’ ｉｃ減成したことが認めら
れ、有効なエオシンＹの濃度が低くなるために、染色性
能の低下をきたし、かつ所定の目的に適さないものにな
ってしまった。
染料粉末を用いてメタノール溶液を調製し、塩化水素の
メタノール溶液（０，９６Ｎ）で酸性化して、ｐＨ（Ｍ
ｅＯＨ） １．６とした。６０℃で３日間熟成後、約１
０％のエオシンＹがＥＴ’ ｉｃ減成したことが認めら
れ、有効なエオシンＹの濃度が低くなるために、染色性
能の低下をきたし、かつ所定の目的に適さないものにな
ってしまった。
実施例３
メチレンブルー（ｏ、’ｔｘｔ／ｌＫ相当する微塵）、
エオシンＹの遊離酸（０，５５ｆ／Ｌに相当する濃度）
及びアズールＣ（０，３６ｆ／ｌ Ｋ相当する濃度）を
メタノールに溶解してメタノール溶液を調製しえ。
エオシンＹの遊離酸（０，５５ｆ／Ｌに相当する濃度）
及びアズールＣ（０，３６ｆ／ｌ Ｋ相当する濃度）を
メタノールに溶解してメタノール溶液を調製しえ。
この溶液は６４５ ｎｍで２３０光学濃度単位、５２５
ａｍで１２８−１学濃度単位吸収した。吸収は、溶液を
メタノ−舛で４００倍に稀釈後測定した。
ａｍで１２８−１学濃度単位吸収した。吸収は、溶液を
メタノ−舛で４００倍に稀釈後測定した。
６０℃で３０日間この溶液を促進した後も、分光光度的
な吸収性は変化しなかつ元。観察しうる沈澱及びメチレ
ンブルーの減成は、ＨＰＬＣＫよって、全く検出されな
かつ九。これは実施例ＩＫ述べたようＫして調製し九溶
液とは対照的であった。すなわち、実施例１では、エオ
シンＹはニナトリウム塩の形でありその場合メチレンブ
ルー及びアズール染料の吸収が６４５ｍｍで１６３．２
１光学濃度単位壕で半分以上減成した。
な吸収性は変化しなかつ元。観察しうる沈澱及びメチレ
ンブルーの減成は、ＨＰＬＣＫよって、全く検出されな
かつ九。これは実施例ＩＫ述べたようＫして調製し九溶
液とは対照的であった。すなわち、実施例１では、エオ
シンＹはニナトリウム塩の形でありその場合メチレンブ
ルー及びアズール染料の吸収が６４５ｍｍで１６３．２
１光学濃度単位壕で半分以上減成した。
実施例４
実施例３に述べたように調製した染色溶液を、ＨＫＭＡ
ＴＩＣＫ ｔ （登碌商標、へ！チックＩ）自動組織
染色装置及び ＨＮ８ＭＡＴＩＫ Ｉ （へ！チック
璽）自動組織染色装置で試験し九。この染料は、６４５
ｍｍｍ及び５２５ ａｍで、それぞれ２３０及び１２ｇ
光学光学率位の吸収を示す市販のライ） （Ｗｒｉｇｈ
ｌ ）染料の溶液と同等であることが判明した。
ＴＩＣＫ ｔ （登碌商標、へ！チックＩ）自動組織
染色装置及び ＨＮ８ＭＡＴＩＫ Ｉ （へ！チック
璽）自動組織染色装置で試験し九。この染料は、６４５
ｍｍｍ及び５２５ ａｍで、それぞれ２３０及び１２ｇ
光学光学率位の吸収を示す市販のライ） （Ｗｒｉｇｈ
ｌ ）染料の溶液と同等であることが判明した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 メチレンブルー；アズールム、アぞ一ルＢ。 アズールＣ又はそれらの混合物；及びエオシンＹの遊離
酸の混合−を、得られ九溶液が、６４５ｍ１１ｍで少な
くとも２，３０光学濃閾単位の分光光度的な吸収性を、
及び５２５ ｎｕｎで少なくとも１，２８光学鎖度単位
の分光光度的な吸収性を示すような量、メタノールに溶
解することを特徴とす不改良された安定性特性を有する
ロマノウスキイ型染色溶液の製造方法。 １０．６４〜１．０ｆ／ｌ Ｋ相当する量のメチレンブ
ルー、０．４９〜１． Ｏｆ、／ｌ に相当する量のエ
オシンＹの遊離酸及び０．３２〜１．０ｆ／ＡＫ相当す
る量のアズール染料をメタノールに溶解することにより
、染料を製造する特許請求の範囲第１項記載のロマノウ
スキイ型染色溶液の製造方法。 ３、 メチレンブルー；アズールム、アズールＢ１アズ
ールＣ又はそれらを組み合わせ丸もの：及びエオシンＹ
の遊離酸のメタノール溶液からなシ、メチレンブルー及
びアズール染料が、６４５！１！Ｉ１１で少なくとも２
３０光学濃度単位の分光光度的な吸収性を示す濃度で存
在し、エオシンＹの遊離酸が、５２５ ｎｌａで少なく
とも１２８光学濃度単位の分光光度的な吸収性を示す量
、存在することを特徴とする改良された安定性特性を有
するロマノウスキイ製染色溶液。 ４、 メタノール溶液が、０．６４〜１．０ｆ／ｌＫ相
当する量のメチレンブルー、０，４９〜１．０ ｆ／ｌ
に相当する量のエオシンＹの遊離酸、及び０．３２〜１
．０ ｆ／Ｌ Ｋ相当する量のアズール染料を含有する
特許請求の範囲第３項記載のロマノウスキイ製染色溶液
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US344390 | 1982-02-01 | ||
| US06/344,390 US4392864A (en) | 1982-02-01 | 1982-02-01 | Stabilized Romanowsky stain solution |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58134155A true JPS58134155A (ja) | 1983-08-10 |
| JPH0224467B2 JPH0224467B2 (ja) | 1990-05-29 |
Family
ID=23350351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58006748A Granted JPS58134155A (ja) | 1982-02-01 | 1983-01-20 | 安定化されたロマノウスキイ型染色溶液 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4392864A (ja) |
| EP (1) | EP0086951B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58134155A (ja) |
| AU (1) | AU532581B2 (ja) |
| CA (1) | CA1167749A (ja) |
| DE (1) | DE3361084D1 (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU186309B (en) * | 1983-09-02 | 1985-07-29 | Reanal Finomvegyszergyar | Reagent for determining the thrombacyta and leucocyte number |
| US4595524A (en) * | 1984-03-28 | 1986-06-17 | Miles Laboratories, Inc. | Two component stain composition for producing a Giemsa blood stain effect |
| US4741898A (en) * | 1985-04-01 | 1988-05-03 | Fisher Scientific Company | Stabilized stain composition |
| DE3533515A1 (de) * | 1985-09-20 | 1987-04-02 | Merck Patent Gmbh | Stabilisator fuer faerbeloesungen |
| US5175109A (en) * | 1986-09-10 | 1992-12-29 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for classifying leukocytes by flow cytometry |
| US5179026A (en) * | 1986-11-27 | 1993-01-12 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Method of classifying leukocytes by flow cytometry and reagents used in the method |
| US5039613A (en) * | 1986-11-27 | 1991-08-13 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagents used in a method of classifying leukocytes by flow cytometry |
| DE3736490A1 (de) * | 1987-10-28 | 1989-05-11 | Merck Patent Gmbh | Stabilisatoren fuer faerbeloesungen |
| US6241788B1 (en) * | 1999-11-16 | 2001-06-05 | Betzdearborn Inc. | Method of stabilizing dye solutions and stabilized dye compositions |
| US6858432B2 (en) * | 2002-08-29 | 2005-02-22 | Wescor, Inc. | Method and staining reagent for staining hematology sample in an automated staining apparatus |
| FR2854239B1 (fr) * | 2003-04-23 | 2006-03-10 | Reactifs Ral | Procede de preparation d'un reactif de coloration de cellules et reactif obtenu |
| CN111610138B (zh) * | 2011-04-15 | 2023-06-09 | 罗氏血液诊断股份有限公司 | 测量细胞体积和成份 |
| CN103874913B (zh) | 2011-06-17 | 2017-04-26 | 罗氏血液诊断股份有限公司 | 用于生物样品的组织加工的溶液 |
| CN102980793B (zh) * | 2012-11-20 | 2015-05-27 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 循环肿瘤细胞染色试剂盒及其应用 |
| WO2014123844A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-14 | Tripath Imaging, Inc. | Cytological staining compositions and uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57171263A (en) * | 1981-04-03 | 1982-10-21 | Miles Lab | Stabilized romanouskii type dyeing solution |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1183499A (en) * | 1966-12-05 | 1970-03-04 | Baxter Laboratories Inc | Biological Stains |
| US4290769A (en) * | 1980-10-14 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
| US4363632A (en) * | 1981-12-28 | 1982-12-14 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized solution producing a Romanowsky effect |
-
1982
- 1982-02-01 US US06/344,390 patent/US4392864A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-08-26 CA CA000410162A patent/CA1167749A/en not_active Expired
- 1982-08-30 AU AU87840/82A patent/AU532581B2/en not_active Ceased
-
1983
- 1983-01-19 DE DE8383100414T patent/DE3361084D1/de not_active Expired
- 1983-01-19 EP EP83100414A patent/EP0086951B1/en not_active Expired
- 1983-01-20 JP JP58006748A patent/JPS58134155A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57171263A (en) * | 1981-04-03 | 1982-10-21 | Miles Lab | Stabilized romanouskii type dyeing solution |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4392864A (en) | 1983-07-12 |
| JPH0224467B2 (ja) | 1990-05-29 |
| CA1167749A (en) | 1984-05-22 |
| AU8784082A (en) | 1983-08-11 |
| AU532581B2 (en) | 1983-10-06 |
| DE3361084D1 (en) | 1985-12-05 |
| EP0086951B1 (en) | 1985-10-30 |
| EP0086951A1 (en) | 1983-08-31 |
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