JPH1175836A - New mannose isomerase and production of mannose - Google Patents
New mannose isomerase and production of mannoseInfo
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- JPH1175836A JPH1175836A JP25153897A JP25153897A JPH1175836A JP H1175836 A JPH1175836 A JP H1175836A JP 25153897 A JP25153897 A JP 25153897A JP 25153897 A JP25153897 A JP 25153897A JP H1175836 A JPH1175836 A JP H1175836A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｄ−マンノース
（以下、マンノースと略す）とＤ−フラクトース（以
下、フラクトースと略す）を相互に異性化する新規マン
ノースイソメラーゼ及びその製造方法並びに該酵素を用
いたマンノースの製造方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel mannose isomerase for mutually isomerizing D-mannose (hereinafter abbreviated as mannose) and D-fructose (hereinafter abbreviated as fructose), a method for producing the same, and a method using the enzyme. And a method for producing mannose.
【０００２】[0002]
【従来の技術】マンノースは，鶏へのサルモネラ菌の感
染を阻害することが知られ（Poultry Science, 68号, 1
357頁, (1989)）、鶏などの家禽・家畜への飼料添加物
や、機能性をもつ食品素材としての利用が検討されてい
る。従来、マンノースはゾウゲヤシなどの植物の多糖
（マンナンなど）を分解して製造されている。また、６
価モリブデンを含有する触媒にグルコースを接触させ高
温下でエピ化することによっても得られる（特公昭５６
−４０７００）。しかし、これらの方法で製造されるマ
ンノースは、非常に高価である。BACKGROUND ART Mannose is known to inhibit the infection of chickens with Salmonella (Poultry Science, 68, 1).
357, (1989)), and its use as a feed additive to poultry and livestock such as chickens and as a functional food material is being studied. Conventionally, mannose is produced by decomposing plant polysaccharides (such as mannan) such as elephant palm. Also, 6
It can also be obtained by contacting glucose with a catalyst containing polyvalent molybdenum and epitaxizing at high temperature (Japanese Patent Publication No.
-40700). However, mannose produced by these methods is very expensive.
【０００３】マンノースイソメラーゼは、遊離６炭糖に
高い親和性をもつ最初の異性化酵素としてシュードモナ
ス・サッカロフィラ（Pseudomonas saccharophila）に
見出された（J.Biol.Chem.,218巻, 535頁(1956)）。そ
の後、キサントモナス・ルブリリネアンス（Xanthomona
s rubrilineans）（日本農芸化学会誌, 37号, 524頁(19
63)）、ストレプトマイセス・エアロコロリゲネス（Str
eptomyces aerocolorigenes）（工業技術院発酵研究所
報告, 28号, 89頁(1965)）、アシネトバクター属（特開
平８−９９８６）にもマンノースイソメラーゼの存在が
確認された。これらの酵素は至適温度が40℃付近にあ
り、熱安定性もよくないため、産業上利用するのに適し
た酵素とはいえない。特開平４−２１８３７０のシュー
ドモナス属細菌のマンノースイソメラーゼも、５０℃以
上では不安定であり、ｐＨ安定性もｐＨ６から９の範囲
である。（J.Ferment.Bioeng.76巻 237頁(1993)）。[0003] Mannose isomerase was found in Pseudomonas saccharophila as the first isomerase having a high affinity for free hexasaccharide (J. Biol. Chem., 218, 535 (1956)). )). After that, Xanthomonas lubrillianeans ( Xanthomona
s rubrilineans ) (Journal of the Japanese Society of Agricultural Chemistry, 37, 524 pages (19
63)), Streptomyces aerocolorigenes ( Str
eptomyces aerocolorigenes (Report from the Institute of Fermentation, National Institute of Industrial Science, No. 28, p. 89 (1965)) and the genus Acinetobacter (JP-A-8-9986) also confirmed the presence of mannose isomerase. These enzymes have an optimum temperature of around 40 ° C. and have poor thermostability, so they cannot be said to be enzymes suitable for industrial use. Mannose isomerase of Pseudomonas bacterium disclosed in JP-A-4-218370 is also unstable at 50 ° C. or higher, and its pH stability is in the range of pH 6 to pH 9. (J. Ferment. Bioeng. 76, 237 (1993)).
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】マンノースイソメラー
ゼを用いることによって工業的にマンノースを生産する
には、熱安定性やｐＨ安定性に優れ、高い基質濃度下で
も効率的に作用する酵素を探索する必要がある。In order to produce mannose industrially by using mannose isomerase, it is necessary to search for an enzyme which is excellent in thermostability and pH stability and which works efficiently even at a high substrate concentration. There is.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、安価なフ
ラクトース含有物からマンノースを生産する方法を確立
することを目的に、工業的に利用が可能な耐熱性マンノ
ースイソメラーゼを生産する微生物の探索を行った。す
なわち、熱安定性に優れ、フラクトースからマンノース
への変換率が高いマンノースイソメラーゼを産生する微
生物を探索した。その結果、サーモモノスポラ属に属す
る放線菌を培養することにより、６０℃でもマンノース
とフラクトースの異性化反応を効率的に触媒する、以下
に示す性質を有する新規マンノースイソメラーゼが得ら
れることを見出し、本発明を完成させるに至った。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors aimed at establishing a method for producing mannose from an inexpensive fructose-containing substance by using a commercially available microorganism producing a thermostable mannose isomerase. Searched. That is, a microorganism that produces mannose isomerase having excellent heat stability and a high conversion rate of fructose to mannose was searched. As a result, it was found that by culturing actinomycetes belonging to the genus Thermomonospora, a novel mannose isomerase having the following properties, which efficiently catalyzes the isomerization reaction between mannose and fructose even at 60 ° C., was obtained. The present invention has been completed.
【０００６】（１）作用 本酵素はマンノースに作用しフラクトースに異性化す
る。また、フラクトースに作用しマンノースに異性化す
る。 （２）基質特異性 本酵素はＤ−マンノースおよびＤ−フラクトースに作用
し、Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−リボース、Ｌ−ラムノースには実質的に作用し
ない。 （３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性 本酵素は５０℃においてｐＨ９が至適であり、ｐＨ４〜
１１で安定である。 （４）至適温度と熱安定性 本酵素はｐＨ７．０において至適温度は５５〜６０℃で
あり、ｐＨ７．０、１０分間で５５℃付近まで安定であ
る。 （５）阻害 銅イオンおよび銀イオンによって阻害を
受ける。 （６）分子量 約６３０００(1) Action This enzyme acts on mannose and isomerizes to fructose. It acts on fructose and isomerizes to mannose. (2) Substrate specificity This enzyme acts on D-mannose and D-fructose, and does not substantially act on D-glucose, L-arabinose, D-xylose, D-ribose, and L-rhamnose. (3) Optimum pH and pH stability This enzyme has an optimum pH of 9 at 50 ° C.
11 is stable. (4) Optimum temperature and thermostability This enzyme has an optimum temperature of 55 to 60 ° C at pH 7.0, and is stable up to around 55 ° C in 10 minutes at pH 7.0. (5) Inhibition Inhibited by copper ions and silver ions. (6) Molecular weight about 63000
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明は、サーモモノスポラ属に
属する微生物を培養し、新規マンノースイソメラーゼを
蓄積させ、これを採取することを特徴とする新規マンノ
ースイソメラーゼの製造方法である。本発明の新規マン
ノースイソメラーゼは微生物を用いて生産され、その生
産菌としては、上記性質を有するマンノースイソメラー
ゼを産生する能力を有するものであればよく、例えば、
サーモモノスポラ・エスピーＭＢＬ１０００３またはそ
の変異株などがある。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention is a method for producing a novel mannose isomerase, which comprises culturing a microorganism belonging to the genus Thermomonospora, accumulating the novel mannose isomerase, and collecting the same. The novel mannose isomerase of the present invention is produced using a microorganism, and the production bacteria may be any as long as it has the ability to produce mannose isomerase having the above properties.
Thermomonospora sp MBL10003 or a mutant thereof.
【０００８】本発明の新規マンノースイソメラーゼを生
産するための微生物の培養条件について検討した。まず
基本培地として、炭素源１．０％、酵母エキス０．４
％、リン酸水素二カリウム０．２％、硝酸アンモニウム
０．２％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、炭酸
ナトリウム０．５％を用い、この培地にサーモモノスポ
ラ・エスピーＭＢＬ１０００３を植菌し、５０℃、２４
時間培養した後の活性を比較した結果、基質となるマン
ノースやフラクトースは良好な炭素源であるが、安価な
ショ糖、澱粉、グルコースなどでも新規マンノースイソ
メラーゼの生産が可能であることがわかった。[0008] Culture conditions of microorganisms for producing the novel mannose isomerase of the present invention were examined. First, as a basic medium, a carbon source 1.0%, yeast extract 0.4
%, Dipotassium hydrogen phosphate 0.2%, ammonium nitrate 0.2%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05%, sodium carbonate 0.5%, and inoculate Thermomonospora sp MBL10003 in this medium. And 50 ° C, 24
As a result of comparing the activities after culturing for a period of time, it was found that mannose and fructose as substrates are good carbon sources, but inexpensive sucrose, starch, glucose and the like can produce a novel mannose isomerase.
【０００９】また、マンノースイソメラーゼは菌体内に
生産される酵素であるが、菌体からマンノースイソメラ
ーゼを採取、精製するには既知の方法を適当に組み合わ
せて行えばよい。例えば、培養後にろ過や遠心分離によ
り菌体を回収し、自己消化法、超音波処理、界面活性剤
処理などにより酵素を菌体より抽出し、粗酵素液として
用いることができる。必要により塩析や溶媒沈澱、ある
いは限外ろ過などにより濃縮・乾燥保存することもでき
る。また、菌体をそのまま粗酵素として用いたり、菌体
を固定化して用いてもよい。マンノースイソメラーゼの
精製は各種の方法でできる。例えば粗酵素液を硫酸アン
モニウムで塩析後、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ルろ過クロマトグラフィーにより電気泳動的に単一のバ
ンドを示す標品を得ることができる。本酵素の性質を検
討した結果を以下に示す。 （１）酵素力価の測定法 酵素の活性はマンノースを基質として用い、システイン
・カルバゾール・硫酸法により生成するフラクトースの
量を測定し、５０℃で１分間に１マイクロモル当量のフ
ラクトースを生成する酵素量を１単位（１U）とした。 （２）作用 反応液組成を基質（２％糖液）１ml、0.2Mリン酸緩衝液
（pH7.0）0.25ml、酵素液（2.5U/ml）0.1mlとして、５
０℃で５時間反応させたときの反応生成物を薄層クロマ
トグラフィーで分析した結果、本酵素はマンノースとフ
ラクトースを相互に異性化する酵素であることがわかっ
た。 （３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性 反応液組成を基質（０．４Mマンノース）０．５ml、
０．２M緩衝液０．５ml、酵素液（０．２５U/ml）１ml
として、５０℃で３０分間反応させたときの活性を比較
した結果、本酵素の至適ｐＨは９であった。また、本酵
素は、２５℃、３時間でｐＨ４〜１１の範囲で安定であ
った。 （４）至適温度および熱安定性 反応液組成を基質（０．４Mマンノース）０．５ml、
０．２Mリン酸緩衝液（pH７）０．５ml、酵素液（０．
４U/ml）１mlとして、ｐＨ７で３０分間反応させたとき
の活性を比較した結果、本酵素の至適温度は５５〜６０
℃であった。また、熱安定性については、酵素液（０．
４U/ml）１．０mlに、リン酸緩衝液（pH７．０）を０．
５ml加え、各種温度で１０分間静置後、残存する酵素活
性を測定した結果、本酵素は、５５℃まで安定であっ
た。 （５）阻害 銅イオンおよび銀イオンにより阻害を受けた。 （６）分子量 電気泳動法によって求めた本酵素の分子量は、約６３０
００であった。以上に示したように、本酵素は従来のマ
ンノースイソメラーゼと異なる新規なマンノースイソメ
ラーゼであることがわかる。[0009] Mannose isomerase is an enzyme produced in the cells. Mannose isomerase can be collected and purified from the cells by appropriately combining known methods. For example, after culturing, cells can be collected by filtration or centrifugation, and an enzyme can be extracted from the cells by autolysis, ultrasonic treatment, surfactant treatment, etc., and used as a crude enzyme solution. If necessary, it can be concentrated and dried and stored by salting out, solvent precipitation, or ultrafiltration. The cells may be used as a crude enzyme as they are, or the cells may be immobilized and used. Mannose isomerase can be purified by various methods. For example, after a crude enzyme solution is salted out with ammonium sulfate, a sample showing a single band electrophoretically by ion exchange chromatography and gel filtration chromatography can be obtained. The results of examining the properties of this enzyme are shown below. (1) Measuring method of enzyme titer The activity of the enzyme is determined by measuring the amount of fructose produced by the cysteine / carbazole / sulfuric acid method using mannose as a substrate, and producing 1 micromolar equivalent of fructose per minute at 50 ° C. The enzyme amount was 1 unit (1 U). (2) Action Assuming that the reaction solution composition is 1 ml of substrate (2% sugar solution), 0.25 ml of 0.2 M phosphate buffer (pH 7.0) and 0.1 ml of enzyme solution (2.5 U / ml),
As a result of analyzing the reaction product obtained by reacting at 0 ° C. for 5 hours by thin layer chromatography, it was found that the present enzyme is an enzyme that mutually isomerizes mannose and fructose. (3) Optimum pH and pH stability 0.5 ml of substrate (0.4 M mannose)
0.5 ml of 0.2 M buffer, 1 ml of enzyme solution (0.25 U / ml)
As a result of comparing the activities when reacted at 50 ° C. for 30 minutes, the optimum pH of the present enzyme was 9. The enzyme was stable in the range of pH 4 to 11 at 25 ° C for 3 hours. (4) Optimal temperature and thermal stability The reaction solution composition was 0.5 ml of substrate (0.4 M mannose),
0.5 ml of 0.2 M phosphate buffer (pH 7), enzyme solution (0.
As a result of comparing the activity when the reaction was carried out for 30 minutes at pH 7 with 1 ml of 4 U / ml), the optimal temperature of the enzyme was 55 to 60.
° C. As for thermostability, the enzyme solution (0.
(4U / ml) in 1.0 ml of phosphate buffer (pH 7.0).
After adding 5 ml and standing at various temperatures for 10 minutes, the remaining enzyme activity was measured. As a result, the enzyme was stable up to 55 ° C. (5) Inhibition It was inhibited by copper ions and silver ions. (6) Molecular weight The molecular weight of the enzyme determined by electrophoresis is about 630.
00. As described above, this enzyme is a novel mannose isomerase different from conventional mannose isomerase.
【００１０】本発明のマンノースイソメラーゼを生産す
る微生物としては、以下に例示するサーモモノスポラ・
エスピーＭＢＬ１０００３（Thermomonospora sp.ＭＢ
Ｌ１０００３）または、その変異株などを用いることが
できる。サーモモノスポラ・エスピーＭＢＬ１０００３
は、土壌より新たに分離されたものであり、その分類学
的性質は以下の通りである。なお、本菌は、FERM Ｐ−
１６２０９号として工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託されている。 （１）形態的性質 気菌糸を形成し、気菌糸上に単胞子を形成する。 （２）培養的性質 マンノース１．０％、酵母エキス０．４％、リン酸水素
二カリウム０．２％、硝酸アンモニウム０．２％、硫酸
マグネシウム７水和物０．０５％、炭酸ナトリウム０．
５％を組成とする寒天培地上で、黄色味を帯びた基生菌
糸を形成し、白色の気菌糸を生ずる。 （３）生理学的性質 生育温度範囲は、４５〜６５℃であった。また、炭素源
としてＤ−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−グルコ
ース、シュクロース、Ｄ−キシロースを利用し、Ｌ−ア
ラビノース、イノシトール、Ｄ−マンニトール、ラフィ
ノース、ラムノースを利用しない。 （４）化学分類学的性質 細胞壁の組成については、ジアミノピメリン酸はmeso型
であった。また、ジアミノ酪酸、グリシン、アスパラギ
ン酸、オルニチン、リジンは検出されなかった。全菌体
中の加水分解物中にアラビノース、ガラクトース、キシ
ロースは存在しなかった。以上の結果から細胞壁タイプ
はIII型と考えられた。キノン系についてはMK-10(H8)、
MK-11(H6)、MK-11(H8)、MK-12(H6)が検出された。以上
の結果から本菌は、サーモモノスポラ属に属する放線菌
と同定された。本菌によって生産されるマンノースイソ
メラーゼは、フラクトースを基質として濃度５０％の高
濃度においても効率的に作用し、フラクトースまたはフ
ラクトース含有液を約２５％の変換率でマンノースに変
換した。また、グルコースによる反応阻害は認められ
ず、異性化糖からも効率よくマンノースを生成すること
ができた。The microorganisms producing the mannose isomerase of the present invention include Thermomonospora
SP MBL10003 (Thermomonospora sp. MB
L10003) or a mutant thereof can be used. Thermomonospora sp MBL10003
Is newly isolated from soil, and its taxonomic properties are as follows. In addition, this bacterium is FERM P-
No. 16209 has been deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. (1) Morphological properties Form aerial hyphae and form monospores on aerial hyphae. (2) Cultural properties Mannose 1.0%, yeast extract 0.4%, dipotassium hydrogen phosphate 0.2%, ammonium nitrate 0.2%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05%, sodium carbonate 0.1%
On an agar medium having a composition of 5%, a base mycelium with a yellowish tinge is formed, and a white aerial mycelium is produced. (3) Physiological properties The growth temperature range was 45-65 ° C. In addition, D-mannose, D-fructose, D-glucose, sucrose, and D-xylose are used as carbon sources, and L-arabinose, inositol, D-mannitol, raffinose, and rhamnose are not used. (4) Chemotaxonomic properties Regarding the composition of the cell wall, diaminopimelic acid was meso type. Diaminobutyric acid, glycine, aspartic acid, ornithine and lysine were not detected. Arabinose, galactose and xylose were not present in the hydrolyzate in all cells. From the above results, the cell wall type was considered to be type III. MK-10 (H 8 ) for quinones,
MK-11 (H 6 ), MK-11 (H 8 ) and MK-12 (H 6 ) were detected. From the above results, this bacterium was identified as an actinomycete belonging to the genus Thermomonospora. Mannose isomerase produced by the present bacterium efficiently acted even at a high concentration of 50% using fructose as a substrate, and converted fructose or a fructose-containing solution to mannose at a conversion rate of about 25%. In addition, no reaction inhibition by glucose was observed, and mannose could be efficiently produced from isomerized sugar.
【００１１】[0011]
【実施例】次に実施例により本発明を説明する。 実施例１ （３０Ｌジャー培養によるマンノースイソメ
ラーゼの調製） グルコース０．５％、マンノース０．５％、酵母エキス
０．４％、リン酸水素二カリウム０．２％、硝酸アンモ
ニウム０．２％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５
％、炭酸ナトリウム０．５％の培地でサーモモノスポラ
・エスピーＭＢＬ１０００３を５０℃で４０時間培養し
た結果、約２００U／Lの活性をもつ培養液が得られた。Next, the present invention will be described by way of examples. Example 1 (Preparation of mannose isomerase by 30 L jar culture) Glucose 0.5%, mannose 0.5%, yeast extract 0.4%, dipotassium hydrogen phosphate 0.2%, ammonium nitrate 0.2%, magnesium sulfate Heptahydrate 0.05
As a result of culturing Thermomonospora sp. MBL10003 at 50 ° C. for 40 hours in a medium containing 0.5% sodium carbonate and 0.5% sodium carbonate, a culture solution having an activity of about 200 U / L was obtained.
【００１２】実施例２ （マンノース生産試験） 実施例１で得られた菌体を超音波破砕して酵素液を抽出
し、フラクトースを基質としたマンノース生産試験を行
った。ｐＨ７、５０℃、基質濃度５，１０，２０，３
０，５０％として酵素反応を行い、反応液を経時的にサ
ンプリングして生成マンノースを高速液体クロマトグラ
フィーで測定した。得られた結果を図１に示す。図１か
ら明らかなように、本酵素は高濃度の基質に対しても効
率よく作用し、約２５％の変換率でマンノースが得られ
ることがわかった。Example 2 (Mannose production test) The bacterial cells obtained in Example 1 were sonicated to extract an enzyme solution, and a mannose production test using fructose as a substrate was performed. pH 7, 50 ° C, substrate concentration 5, 10, 20, 3
The enzymatic reaction was carried out at 0.50%, the reaction solution was sampled with time, and the produced mannose was measured by high performance liquid chromatography. The results obtained are shown in FIG. As is clear from FIG. 1, it was found that the present enzyme works efficiently even with a high concentration of substrate, and that mannose can be obtained at a conversion rate of about 25%.
【００１３】実施例３ （グルコース存在下でのマンノ
ース生産試験） 実施例２で用いた酵素液を用いて２，５，１０，２０，
３０％のグルコース存在下で基質フラクトース濃度をそ
れぞれ２，５，１０，２０，３０％として酵素反応を行
い、反応液を経時的にサンプリングして生成マンノース
を高速液体クロマトグラフィーで測定した。得られた結
果を図２に示す。図２から明らかなように、本酵素はグ
ルコースの存在下でも効率よく作用し、約２５％の変換
率でマンノースが得られることがわかった。Example 3 (Mannose production test in the presence of glucose) Using the enzyme solution used in Example 2, 2, 5, 10, 20,
The enzymatic reaction was carried out in the presence of 30% glucose with the substrate fructose concentrations being 2, 5, 10, 20, and 30%, respectively, and the reaction solution was sampled with time to measure the produced mannose by high performance liquid chromatography. FIG. 2 shows the obtained results. As is clear from FIG. 2, it was found that the present enzyme works efficiently even in the presence of glucose, and that mannose can be obtained at a conversion of about 25%.
【００１４】[0014]
【発明の効果】マンノースを生産するための、工業的に
利用可能なマンノースイソメラーゼを探索した。耐熱性
およびｐＨ安定性に優れ、また高濃度の基質の存在下で
も効率よく作用するので工業上応用の可能なマンノース
イソメラーゼを見出した。Industrial Applicability Mannose isomerase for producing mannose was searched for. A mannose isomerase that is excellent in heat resistance and pH stability and works efficiently even in the presence of a high concentration of a substrate has been found to be industrially applicable.
【図１】本酵素をフラクトースに作用させたときに生成
するマンノースの生成量を示す。FIG. 1 shows the amount of mannose produced when the present enzyme is allowed to act on fructose.
【図２】本酵素をグルコース存在下でフラクトースに作
用させたときに生成するマンノースの生成量を示す。FIG. 2 shows the amount of mannose produced when this enzyme is allowed to act on fructose in the presence of glucose.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 平山 匡男 埼玉県坂戸市千代田５丁目３番１号 明治 製菓株式会社生物科学研究所内 ────────────────────────────────────────────────── ─── Continued on the front page (72) Inventor Masao Hirayama 5-3-1 Chiyoda, Sakado-shi, Saitama Meiji Seika Co., Ltd.
Claims (4)
ゼ。 (a)作用 マンノースをフラクトースに異性化する。また、フラク
トースをマンノースに異性化する。 (b)基質特異性 本酵素はＤ−マンノースおよびＤ−フラクトースに作用
し、Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−リボース、Ｌ−ラムノースには実質的に作用し
ない。 (c)至適ｐＨ ５０℃でｐＨ９が至適である。 (d)至適温度 ｐＨ７．０で至適温度は５５〜６０℃。 (e)熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で５５℃付近まで安定である。 (f)ｐＨ安定性 ２５℃、３時間で、ｐＨ４〜１１の範囲で安定である。 (g)阻害物質 銅イオンおよび銀イオンで阻害を受ける。 (h)分子量 電気泳動法による分子量は約６３０００。1. A mannose isomerase having the following properties: (a) Action Isomerizes mannose to fructose. Also, fructose isomerized to mannose. (b) Substrate specificity This enzyme acts on D-mannose and D-fructose, and does not substantially act on D-glucose, L-arabinose, D-xylose, D-ribose, and L-rhamnose. (c) Optimum pH pH 50 is optimal at 50 ° C. (d) Optimum temperature The optimum temperature is 55 to 60 ° C at pH 7.0. (e) Thermal stability pH 7.0, stable up to around 55 ° C. in 10 minutes. (f) pH stability Stable at pH 4 to 11 at 25 ° C for 3 hours. (g) Inhibitors Inhibited by copper and silver ions. (h) Molecular weight The molecular weight determined by electrophoresis is about 63,000.
生産するサーモモノスポラ属に属する微生物を培養し、
該マンノースイソメラーゼを生産させ、これを採取する
ことを特徴とする新規マンノースイソメラーゼの製造方
法。2. A method for culturing a microorganism belonging to the genus Thermomonospora, which produces the mannose isomerase according to claim 1,
A method for producing a novel mannose isomerase, comprising producing the mannose isomerase and collecting the mannose isomerase.
生産するサーモモノスポラ・エスピーＭＢＬ１０００
３。3. A thermomonospora sp MBL1000 producing the mannose isomerase according to claim 1.
3.
をフラクトース含有液に作用させてマンノース含有液を
生産し、これを採取することを特徴とするマンノースの
製造方法。4. A method for producing mannose, comprising: producing a mannose-containing solution by allowing the mannose isomerase according to claim 1 to act on a fructose-containing solution; and collecting the mannose-containing solution.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25153897A JPH1175836A (en) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | New mannose isomerase and production of mannose |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP25153897A JPH1175836A (en) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | New mannose isomerase and production of mannose |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1175836A true JPH1175836A (en) | 1999-03-23 |
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ID=17224316
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25153897A Pending JPH1175836A (en) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | New mannose isomerase and production of mannose |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1175836A (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000066719A1 (en) * | 1999-04-30 | 2000-11-09 | Japan Science And Technology Corporation | Heat-resistant mannose isomerase, process for producing the same and process for producing mannose by using the same |
| WO2000075297A1 (en) * | 1999-06-07 | 2000-12-14 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Thermostable mannose isomerase and process for producing mannose by using the enzyme |
| WO2001025443A1 (en) * | 1999-10-06 | 2001-04-12 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Mannose isomerase gene |
| WO2002008238A1 (en) * | 2000-07-24 | 2002-01-31 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Crystalline mannose and method for production thereof |
| KR20140096077A (en) * | 2011-10-27 | 2014-08-04 | 고쿠리츠다이가쿠호우징 카가와다이가쿠 | Polyol oxidase |
-
1997
- 1997-09-17 JP JP25153897A patent/JPH1175836A/en active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000066719A1 (en) * | 1999-04-30 | 2000-11-09 | Japan Science And Technology Corporation | Heat-resistant mannose isomerase, process for producing the same and process for producing mannose by using the same |
| US6897047B1 (en) | 1999-04-30 | 2005-05-24 | Japan Science And Technology Corporation | Heat-resistant mannose isomerase, process for producing the same and process for producing mannose by using the same |
| WO2000075297A1 (en) * | 1999-06-07 | 2000-12-14 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Thermostable mannose isomerase and process for producing mannose by using the enzyme |
| WO2001025443A1 (en) * | 1999-10-06 | 2001-04-12 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Mannose isomerase gene |
| JP4686090B2 (en) * | 1999-10-06 | 2011-05-18 | 昭和産業株式会社 | Mannose isomerase gene |
| WO2002008238A1 (en) * | 2000-07-24 | 2002-01-31 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Crystalline mannose and method for production thereof |
| KR20140096077A (en) * | 2011-10-27 | 2014-08-04 | 고쿠리츠다이가쿠호우징 카가와다이가쿠 | Polyol oxidase |
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