JPH11515095A - Stain and capillary slides for detecting animal and plant cells - Google Patents

Stain and capillary slides for detecting animal and plant cells

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JPH11515095A
JPH11515095A JP9510980A JP51098097A JPH11515095A JP H11515095 A JPH11515095 A JP H11515095A JP 9510980 A JP9510980 A JP 9510980A JP 51098097 A JP51098097 A JP 51098097A JP H11515095 A JPH11515095 A JP H11515095A
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JP
Japan
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blood
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dye
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JP9510980A
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Japanese (ja)
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ロジャー クランピット
ロナルド バロン
Original Assignee
ジノサイト リミテッド
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    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G—PHYSICS
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract

(57)【要約】 酸性又は塩基性の緩衝溶液、膜調整剤、染料化合物及び溶媒を有し、血液又はその他の動物又は植物のサンプルを準備するために適切である染色剤が提供される。前記染色剤は毛管作用により液体を自分自身に引き入れるように改造したスライドと共に使用されてもよい。 (57) Abstract: A stain is provided that has an acidic or basic buffer solution, a membrane conditioner, a dye compound, and a solvent, and is suitable for preparing a blood or other animal or plant sample. The stain may be used with a slide that has been modified to draw liquid into itself by capillary action.

Description

【発明の詳細な説明】 動物及び植物の細胞を検出するための染色剤及び毛管スライド 本発明は染色剤、スライド及び血液サンプルを準備する方法に関する。 ヒト又は動物の血液中には、例えば赤血球細胞（ＲＢＣs）及びいくつかの型 の白血球細胞（ＷＢＣs）のような、様々な種類の細胞や微粒子が見られる。健 康個体では、各種の細胞数は複雑な身体メカニズムによってコントロールされ得 る。通常範囲からのあらゆる変化は、体内の深刻な生理学的又は病理学的な変化 を示し得る。それゆえ、血液中の各種の細胞数又は微粒子数の決定を可能とする ことは重要である。この数は血液或いは患者又は植物のその他の生化学的流動体 又は生化学的物質、の適切なサンプルを準備し、前記サンプルを例えば顕微鏡等 でスクリーニングすることによって得られる。植物の細胞成分の染色に染色剤が 用いられてもよく、ここでの「植物」という特定には水中及びその他の環境サン プル中に存在する菌類、バクテリア等を含んでいる。 従来は、最初に血液をスライドにのせ、空中で乾かし、その血液標本を（細胞 を固定するために）メタノール等の浴槽に浸し、最後に前記血液標本を染色する ことによって塗抹標本サンプルが準備されている。 従来の染色剤及び染色方法は複雑で時間のかかる一連の過程を含んでいる。結 果として、全ての染色過程が完了するまでにはある程度の時間、例えば１時間か かり、満足の行く結果を得るためにはオペレーターが熟練しており、経験を積ん でいなければならない。塗抹標本作成過程において、血液中の細胞及び微粒子は 均一に散布されなかったり、又は傷つけられ、それゆえスクリーニング中に検出 するのが困難又は不可能となる。 さらに、従来の多くの染色剤は、構成成分が混合されると、例えば２〜３日の 短い時間しか安定ではなく、バルクで購入した場合、迅速に使用しないと容易に 汚染される。さらに、ある染色剤はある種の血液細胞しか分染しないか、及び／ 又はある種の動物の血液細胞の染色にしか効果がなかったりする。 上記に述べられた問題と複雑さを考慮すると、上記のような方法で少量のサン プルを準備することや、例えば外科又は診療所等のこのような技術を専門として いない人によって準備されることは好適でない。結果として、分析のために血液 が遠方の契約した研究所に送られることもある。これはお金がかかり、比較的大 量の血液サンプルが提供される必要があり、かなりの時間遅延が含まれる。さら に付け加えると、移送中に血液が変化したり、血液中の微粒子や細胞が損なわれ るかも知れない。 本発明の目的は熟練していない人が困難なく高い品質のテスト標本を作成でき るような方法を提供することである。 ひとつの局面から、本発明は以下の構成要素、 （ｉ）被検査物質の特性に応じてその浸透圧が変更可能な酸性又は塩基性の緩 衝溶液と、 （ｉｉ）固定性の有機膜調整剤と、 （ｉｉｉ）サンプル中の細胞核及び細胞質成分を染色する化合物と、及び （ｉｖ）溶媒と、 を含む、動物又は植物サンプルの染色剤を提供する。 好ましくは、前記緩衝溶液が分子量294.1のクエン酸３ナトリウム２水和物（ 式Ｃ6Ｈ5Ｏ7Ｎａ3・２Ｈ2Ｏ）である。 好ましくは、前記膜調整剤が分子量90.12の２−エトキシエタノール（エチレ ングリコールモノエチルエーテル）（式Ｃ2Ｈ5ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）である。 好ましくは、前記染料化合物が分子量305.8のアズールＢ（c.l.52010；ＢＳＣ によって特定された、植物組織中の細胞ＲＮＡ及びＤＮＡを分染するアズール１ ）（式Ｃ15Ｈ16ＣＩＮ3Ｓ）、又はアズールＢの誘導体である。 好ましくは、前記アズールＢ、又はその誘導体が、約８０％の色素含有量を有 する。 好ましくは、前記溶媒が脱イオン水又は蒸留水である。 典型的には、染色剤を使用してヒト又は動物から採取された血液サンプルを染 色でき、並びに細胞及び／又は前記細胞中の微粒子の種類を分染できる。 本発明に係る染色剤は室温でも良好な安定性が得られるという利点があり、血 液細胞の種類及び細胞内構造に対してよいコントラストを与え、様々な異なる種 類の動物の血液染色に効果的に用いられるであろう。 別の局面からは、本発明は一容量の液体と以下の構成成分、 （ｉ）被検査物質の特性に応じてその浸透圧が変更可能な酸性又は塩基性の緩 衝溶液と、 （ｉｉ）固定性の有機膜調整剤と、 （ｉｉｉ）サンプル中の細胞核及び細胞質成分を染色する化合物と、及び （ｉｖ）溶媒と、 を有する染色剤とを混合する過程と、並びに混合物を静置する過程と、を含む染 色方法を提供する。 好ましくは前記染色剤が以下の構成成分、 （ｉ）分子量294.1のクエン酸３ナトリウム２水和物（式Ｃ6Ｈ5Ｏ7Ｎａ3・２ Ｈ2Ｏ）と、 （ｉｉ）分子量90.12の２−エトキシエタノール（エチレングリコールモノエ チルエーテル）（式Ｃ2Ｈ5ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）と、 （ｉｉｉ）分子量305.8のアズールＢ（c.l.52010；ＢＳＣによって特定された 、植物組織中の細胞ＲＮＡ及びＤＮＡを分染するアズール１）（式Ｃ15Ｈ16ＣＩ Ｎ3Ｓ）と、及び （ｉｖ）脱イオン水及び／又は蒸留水と、 を含む。 好ましくは、前記アズールＢが約８０％の色素含有量を有する。 典型的に、前記液体は血液であってもよい。 本発明に係る染色方法は、素早く簡単な一段階の過程を有し、新鮮な血液サン プルの染色に使用できるという利点を有する。 典型的に、前記血液と前記染色剤が１：４の割合で混合されてもよく、緩やか な攪拌で混合されてもよい。 好ましくは、前記混合物が１分から６０分の間、１５℃から６０℃の間の温 度で、静置されてもよい。 さらにまた別の局面からは、本発明は毛管作用によって液体をそれ自身の中に 引き入れるようにしたスライドを提供する。 典型的に、前記液体は染色されている、又は染色されていない血液サンプルで ある。 本発明に係るスライドの利点は、血液一滴を毛管チャンバーの一方の端に単に 導入し、毛管作用によってチャンバーの長さに沿って流れさせ、細胞の単分子膜 を形成することにより、塗抹標本を作る必要なしに、質のよい単分子膜の血液フ ィルムを作成することができるということである。それゆえに本発明に係るスラ イドは、容易に使用でき、従来どおりの方法で分析するための新鮮な血液サンプ ルの素早く簡単な準備を促進する。 好ましくは、前記スライドは共に配置されたベースとカバーを含み、毛管チャ ンバーを形成している。 本発明に係るスライドのさらなる利点は、毛管チャンバーが、血液等の分析さ れるテストサンプルの制御された量又は既知量を提供し、そのため定量分析が可 能である点である。従来のスライドは定性分析にしか使用できなかった。 好ましくは、前記ベース及び前記カバーがガラス及び／又はプラスチック素材 で造られたものがよい。好ましくは、前記ガラスはフロートガラス等の極めて平 坦なガラスがよい。 典型的に前記カバーは毛管チャンバーの密封剤として働くように、接着剤によ って前記ベースに固定されている。 製造段階で小球体が使用されてもよく、前記カバーを前記ベースから分離して 前記カバーと前記ベースの間に既知の距離の隙間を確保している。前記小球体の 直径は５ミクロンから２０ミクロンの間で、ビニルベンゼン及び／又はポリスチ レンから造られている。好ましくは、前記小球体が水溶液を含み、接着剤に不溶 で、前記ベースや前記カバーに適用される前に接着剤に混合される。 前記毛管チャンバーが、前記ベースに溝を与えることによって輪郭付けられ、 接着剤の流れがチャンバーに入り込むのを防ぎ、好ましくはその溝が制御され た容量である。 付加的には、ガラス又はプラスチック製の前記ベース及び／又は前記カバーが 処理又はコートされ、スライド中でのテストサンプルの流出を補助又は阻止して いる。 付加的には、前記スライドは押出加工法又は鋳型加工法のいずれかによって造 られた定容量のくぼみ、又は引っ込み部分を有するプラスチック製のベースと、 平坦又は平面のカバーと、を含む。 第４の局面として、本発明は一容量の血液を染色する過程と、染色した血液を 毛管作用によって液体をそれ自身の中に引き入れるようにしたスライドに導入す る過程と、を含む血液サンプルの準備方法を提供する。 本発明に係る準備方法は、素早く簡単であり、質のよい単分子血液フィルム膜 を生産し、例えば、血液細胞数の計量を容易にするという利点を有する。特別な 技術又はテクニックを必要とせず、例えば一般の開業医の外科等での小規模の使 用に適している。さらに、小容量の血液しか必要でなく、それゆえ小動物から血 液が採取される際の外傷を減少する。 最後の局面として、本発明は、以下の構成要素、 （ｉ）被検査物質の特性に応じてその浸透圧が変更可能な酸性又は塩基性の緩 衝溶液と、 （ｉｉ）固定性の有機膜調整剤と、 （ｉｉｉ）サンプル中の細胞核及び細胞質成分を染色する化合物と、及び （ｉｖ）溶媒と、 を有する染色剤と、並びに毛管作用によって液体をそれ自身の中に引き入れるよ うにしたスライドと、を含むキットを提供する。実施例 本発明に係る染色剤は以下の手順により準備される。 クエン酸３ナトリウム（１６．０ｇ）を蒸留水に溶解し、１．０１（哺乳動物 の赤血球細胞の等浸透圧の５０％に相当）にする。２−エトキシエタノール （２００ｍｌ）と前記クエン酸３ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）を攪拌して混 合する(これを第一の緩衝溶液とする)。緩衝溶液のｐＨは８．９である(未調整) 。アズールＢ（１．０ｇ）を５００ｍｌの前記第一の緩衝溶液に加え、１．０１ に調整する(これが標準染色剤である)。前記標準染色剤をＷａｔｍａｎｓ １１ ３Ｖ湿性加強フィルター紙で重心濾過する。 動物から血液サンプルを採取し、前記血液と前記染色剤との容量比が１：４と なるように混合する。血液と染色剤は緩やかに攪拌して混合し、混合物を１分か ら６０分の間１５℃から６０℃の間の温度でインキュベートする。 本発明の実施例を図を参照して説明する。 図１は本発明に係るスライドの好適な実施例の側面図である。 図２は図１で示したスライドの上面図である。 図３は図３のスライドの別の態様の実施例の側面図である。 図４は図３のスライドの上面図である。 まず図１及び２に言及すると、スライド１はベース２とカバー３を有し、両方 ともガラス素材から造られている。ベース２及びカバー３の寸法は、それぞれ２ ５ｍｍ×４０ｍｍ×１．１ｍｍ、及び１５ｍｍ×５ｍｍ×０．３〜０．６ｍｍで ある。 スライド１はカバー３の端に沿って設置されたスペーサとして働く小球体４に よっても提供される。これらのスペーサは約５．０μｍの厚さを有するが、本発 明の別の態様の実施例では４．０から２５．０μｍの厚さを有してもよい。 カバー３はベース２に、カバー３の端に沿って接着剤５によって固定され、毛 管チャンバー６を形成している。溝７が提供され、接着剤５の流れが毛管チャン バー６に入り込むのを防いでいる。 染色された血液（図示していない）一滴（１．０〜５．０μｌ）を毛管チャン バー６の開口８のいずれかに導入する。 血液は毛管作用によって毛管チャンバー６の中に引き入れられ、カバー３、ベ ース２及びスペーサの間で質のよい層を形成する。接着剤細片５は漏れを防ぐよ うに毛管チャンバー６の密封剤として作用する。 染色した血液を含んだスライド１はあらゆる適切な方法によって分析される。 図３及び４において、ベース２はプラスチック造型物から造られている。毛管 チャンバー６は造型されたベース２の一部に形成されたくぼみによって提供され る。カバー３はガラス又はプラスチックである。カバー３とベース２を固定する 接着剤又はテープ５が図示されている。The present invention relates to stains, slides and methods for preparing blood samples. Various types of cells and microparticles are found in human or animal blood, for example, red blood cells (RBCs) and some types of white blood cells (WBCs). In healthy individuals, the number of various cells can be controlled by complex body mechanisms. Any change from the normal range can indicate a serious physiological or pathological change in the body. It is therefore important to be able to determine the number of various cells or microparticles in blood. This number can be obtained by preparing a suitable sample of blood or other biochemical fluid or biochemical substance of the patient or plant and screening said sample, for example under a microscope. Staining agents may be used to stain plant cell components, where the term "plant" includes fungi, bacteria, and the like present in water and other environmental samples. Conventionally, a smear sample is prepared by first placing blood on a slide, drying in the air, immersing the blood sample in a bath such as methanol (to fix the cells), and finally staining the blood sample. ing. Conventional dyes and methods involve a complex and time-consuming series of steps. As a result, it takes some time, for example one hour, for the entire dyeing process to be completed, and the operator must be skilled and experienced to achieve satisfactory results. During the smearing process, cells and microparticles in the blood are not evenly spread or damaged and are therefore difficult or impossible to detect during screening. In addition, many conventional dyes are stable for only a short period of time, for example, 2-3 days when the components are mixed, and are easily contaminated when purchased in bulk unless used quickly. In addition, some stains only stain certain types of blood cells and / or only effect the staining of certain types of animal blood cells. In view of the problems and complications mentioned above, it is not possible to prepare small samples in the manner described above or to be prepared by non-specialists such as, for example, surgeries or clinics. Not suitable. As a result, blood may be sent to a remote contracted laboratory for analysis. This is expensive, requires a relatively large blood sample to be provided, and involves a considerable time delay. In addition, blood may change during the transfer, and particulates and cells in the blood may be damaged. It is an object of the present invention to provide a method by which an unskilled person can produce a high quality test specimen without difficulty. According to one aspect, the present invention provides the following components: (i) an acidic or basic buffer solution whose osmotic pressure can be changed according to the properties of a test substance; and (ii) a fixed organic membrane conditioner. And (iii) a compound that stains cell nucleus and cytoplasmic components in the sample, and (iv) a solvent. Preferably, the buffer solution is a trisodium citrate dihydrate of molecular weight 294.1 (wherein C 6 H 5 O 7 Na 3 · 2H 2 O). Preferably, said membrane modifier is 2-ethoxyethanol molecular weight 90.12 (ethylene glycol monoethyl ether) (Formula C 2 H 5 OCH 2 CH 2 OH). Preferably, the dye compound is azure B having a molecular weight of 305.8 (cl52010; Azul 1 for staining cellular RNA and DNA in plant tissue, identified by BSC) (formula C 15 H 16 CIN 3 S), or Azure B Is a derivative of Preferably, said Azure B, or a derivative thereof, has a dye content of about 80%. Preferably, the solvent is deionized water or distilled water. Typically, a stain can be used to stain blood samples taken from humans or animals, and to stain cells and / or the type of microparticles in said cells. The staining agent of the present invention has an advantage that good stability can be obtained even at room temperature, gives a good contrast to blood cell types and intracellular structures, and is effective for blood staining of various different types of animals. Will be used. From another aspect, the invention provides a volume of liquid and the following components: (i) an acidic or basic buffer solution whose osmotic pressure can be changed depending on the properties of the test substance; and (ii) immobilization. (Iii) a compound that stains cell nuclei and cytoplasmic components in the sample, and (iv) a solvent, and a staining process comprising: and a process of allowing the mixture to stand. And a staining method comprising: Preferably components of the dyeing agent is less, (i) and trisodium citrate dihydrate having a molecular weight 294.1 (wherein C 6 H 5 O 7 Na 3 · 2 H 2 O), (ii) 2 molecular weight 90.12 - and ethoxyethanol (ethylene glycol monoethyl ether) (formula C 2 H 5 OCH 2 CH 2 OH), (iii) Azure B of molecular weight 305.8 (cl52010; was identified by BSC, cellular RNA and DNA in plant tissue Azure 1) (formula C 15 H 16 CIN 3 S) to be dyed, and (iv) deionized water and / or distilled water. Preferably, said Azure B has a dye content of about 80%. Typically, the liquid may be blood. The staining method according to the invention has the advantage that it has a quick and simple one-step process and can be used for staining fresh blood samples. Typically, the blood and the stain may be mixed at a ratio of 1: 4, or may be mixed with gentle agitation. Preferably, the mixture may be allowed to stand at a temperature between 15 ° C and 60 ° C for between 1 minute and 60 minutes. In yet another aspect, the present invention provides a slide adapted to draw liquid into itself by capillary action. Typically, the liquid is a stained or unstained blood sample. The advantage of the slide according to the present invention is that the smear is formed by simply introducing a drop of blood into one end of the capillary chamber and allowing it to flow along the length of the chamber by capillary action, forming a monolayer of cells. This means that a high quality monolayer blood film can be made without the need to make it. The slides according to the invention are therefore easy to use and facilitate the quick and simple preparation of fresh blood samples for analysis in a conventional manner. Preferably, said slide comprises a base and a cover arranged together, forming a capillary chamber. A further advantage of the slide according to the invention is that the capillary chamber provides a controlled or known amount of the test sample to be analyzed, such as blood, so that a quantitative analysis is possible. Conventional slides could only be used for qualitative analysis. Preferably, the base and the cover are made of glass and / or plastic material. Preferably, the glass is very flat glass, such as float glass. Typically, the cover is secured to the base by an adhesive to act as a seal for the capillary chamber. Small spheres may be used during the manufacturing stage, separating the cover from the base to provide a gap of a known distance between the cover and the base. The globules have a diameter between 5 and 20 microns and are made of vinylbenzene and / or polystyrene. Preferably, the microspheres comprise an aqueous solution, are insoluble in the adhesive, and are mixed with the adhesive before being applied to the base or the cover. The capillary chamber is contoured by providing a groove in the base to prevent the flow of adhesive from entering the chamber, preferably the groove is a controlled volume. Additionally, the glass or plastic base and / or the cover may be treated or coated to assist or prevent the flow of the test sample through the slide. Additionally, the slide includes a plastic base having a fixed volume recess or recess formed by either an extrusion or molding process, and a flat or planar cover. As a fourth aspect, the present invention provides a blood sample preparation comprising the steps of staining a volume of blood and introducing the stained blood to a slide adapted to draw liquid into itself by capillary action. Provide a way. The preparation method according to the invention has the advantage that it is quick and simple, produces a high quality monomolecular blood film membrane and facilitates, for example, the counting of blood cell numbers. It requires no special skills or techniques and is suitable for small-scale use, for example, in general practitioner surgery. In addition, only a small volume of blood is required, thus reducing trauma when blood is collected from small animals. As a last aspect, the present invention provides the following components: (i) an acidic or basic buffer solution whose osmotic pressure can be changed according to the characteristics of a test substance; and (ii) preparation of a fixed organic membrane. An agent; (iii) a compound that stains the cell nucleus and cytoplasmic components in the sample; and (iv) a stain having: a solvent; and a slide adapted to draw liquid into itself by capillary action. A kit comprising: EXAMPLES A dye according to the present invention is prepared by the following procedure. Trisodium citrate (16.0 g) is dissolved in distilled water to 1.01 (corresponding to 50% of the isotonic pressure of mammalian red blood cells). 2-ethoxyethanol (200 ml) and the trisodium citrate aqueous solution (800 ml) are mixed by stirring (this is referred to as a first buffer solution). The pH of the buffer solution is 8.9 (unadjusted). Add Azure B (1.0 g) to 500 ml of the first buffer solution and adjust to 1.01 (this is the standard stain). The standard stain is centrifugally filtered through Watmans 11 3V wet filter paper. A blood sample is collected from the animal and mixed so that the volume ratio of the blood to the stain is 1: 4. The blood and stain are mixed with gentle agitation, and the mixture is incubated at a temperature between 15 ° C and 60 ° C for 1 minute to 60 minutes. An embodiment of the present invention will be described with reference to the drawings. FIG. 1 is a side view of a preferred embodiment of a slide according to the present invention. FIG. 2 is a top view of the slide shown in FIG. FIG. 3 is a side view of another embodiment of the slide of FIG. FIG. 4 is a top view of the slide of FIG. Referring first to FIGS. 1 and 2, a slide 1 has a base 2 and a cover 3, both of which are made of glass material. The dimensions of the base 2 and the cover 3 are 25 mm × 40 mm × 1.1 mm and 15 mm × 5 mm × 0.3 to 0.6 mm, respectively. The slide 1 is also provided by a globule 4 acting as a spacer located along the edge of the cover 3. These spacers have a thickness of about 5.0 μm, but may have a thickness of 4.0 to 25.0 μm in other embodiments of the present invention. The cover 3 is fixed to the base 2 along the edge of the cover 3 by an adhesive 5 to form a capillary chamber 6. Grooves 7 are provided to prevent the flow of adhesive 5 from entering capillary chamber 6. A drop (1.0-5.0 μl) of stained blood (not shown) is introduced into any of the openings 8 in the capillary chamber 6. Blood is drawn into the capillary chamber 6 by capillary action, forming a good layer between the cover 3, the base 2 and the spacer. The adhesive strip 5 acts as a sealant for the capillary chamber 6 to prevent leakage. Slide 1 containing the stained blood is analyzed by any suitable method. 3 and 4, the base 2 is made from a plastic molding. The capillary chamber 6 is provided by a recess formed in a part of the molded base 2. The cover 3 is glass or plastic. An adhesive or tape 5 for fixing the cover 3 and the base 2 is shown.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 バロン ロナルド イギリス国 グラスゴー ジー20 ０エス ピー ウエスト オブ スコットランド サイエンス パーク ケルビン キャンパ ス ユニット ６．03────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page    (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, S Z, UG), UA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD , RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, AZ , BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, H U, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ , LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, R O, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM , TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN (72) Inventor Baron Ronald             United Kingdom Glasgow G200 00S             Pea West of Scotland             Science Park Kelvin Campa             Unit 6.03

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．以下の構成要素、 （ｉ）被検査物質の特性に応じてその浸透圧が変更可能な酸性又は塩基性の緩 衝溶液と、 （ｉｉ）固定性の有機膜調整剤と、 （ｉｉｉ）サンプル中の細胞核及び細胞質成分を染色する化合物と、及び （ｉｖ）溶媒と、 を含む、動物又は植物サンプルの染色剤。 ２．請求項１記載の染色剤において、前記緩衝溶液が分子量 294.1 のクエン酸 ３ナトリウム２水和物（式Ｃ6Ｈ5Ｏ7Ｎａ3・２Ｈ2Ｏ）である染色剤。 ３．請求項１又は２記載の染色剤において、前記膜調整剤が分子量 90.12 の２ −エトキシエタノール（エチレングリコールモノエチルエーテル）（式Ｃ2Ｈ5Ｏ ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）である染色剤。 ４．前記請求項のいずれかに記載の染色剤において、前記染料化合物が分子量30 5.8のアズールＢ（c.l.52010;ＢＳＣによって特定された、植物組織中の細胞Ｒ ＮＡ及びＤＮＡを分染するアズール１）(式Ｃ15Ｈ16ＣＩＮ3Ｓ)、又はアズール Ｂの誘導体である染色剤。 ５．請求項４記載の染色剤において、前記アズールＢ、又はその誘導体が、約８ ０％の色素含有量を有する染色剤。 ６．前記請求項のいずれかに記載の染色剤において、前記溶媒が脱イオン水又は 蒸留水である染色剤。 ７．ヒト、又は動物から採取された血液サンプルの染色に使用されることと、並 びに細胞及び／又は前記細胞中の微粒子の種類によって分染することと、に適し た前記請求項のいずれかに記載の染色剤。 ８．一容量の液体と前記請求項のいずれかに記載の染色剤とを混合する過程と、 混合物を静置する過程と、を含む染色方法。 ９．請求項８記載の染色方法において、前記液体が血液である染色方法。 10．請求項９記載の染色方法において、前記血液と前記染色剤が１：４の割合で 混合される染色方法。 11．請求項８乃至１０のいずれかに記載の染色方法において、前記液体と前記染 色剤が緩やかな攪拌で混合される染色方法。 12．請求項８乃至１０のいずれかに記載の染色方法において、前記混合物が１分 から６０分の間１５℃から６０℃の間の温度で、静置される染色方法。 13．毛管作用によって液体をそれ自身の中に引き入れるように改造したスライド 。 14．請求項１３記載のスライドにおいて、前記液体が染色されている、又は染色 されていない血液サンプルであるスライド。 15．請求項１３又は１４記載のスライドがベースとカバーとを含み、前記ベース と前記カバーとが共に配置されて毛管チャンバーを形成するスライド。 16．請求項１５記載のスライドにおいて、前記ベース及び前記カバーがガラス及 び／又はプラスチック素材で造られたスライド。 17．請求項１５記載のスライドにおいて、前記ベース及び前記カバーがフロート ガラス等の極めて平坦なガラスであるスライド。 18．請求項１５乃至１７のいずれかに記載のスライドにおいて、前記カバーが前 記毛管チャンバーの密封剤として働くように、接着剤によって前記ベースに固定 されたスライド。 19．請求項１５乃至１８のいずれかに記載のスライドにおいて、小球体を使用し て、前記カバーを前記ベースから分離するスライド。 20．請求項１９記載のスライドにおいて、前記小球体が、大きさが直径５ミクロ ンから２０ミクロンの間で、ビニルベンゼン及び／又はポリスチレンから造られ ているスライド。 21．請求項１９又は２０記載のスライドにおいて、前記小球体が水溶液を含むス ライド。 22．請求項１５乃至２１のいずれかに記載のスライドにおいて、前記毛管チャン バーが前記ベースに溝を与えることによって輪郭付けられ、前記溝が 水溶液の流れがチャンバーに入り込むのを防ぐスライド。 23．請求項１５乃至２２のいずれかに記載のスライドにおいて、前記ベース及び ／又は前記カバーを処理又はコートして、スライド中でのテストサンプルの流れ を補助又は阻止するスライド。 24．請求項１３記載のスライドが、押出加工法又は鋳型加工法のいずれかによっ て造られたベースと平坦又は平面状のカバーとを含み、前記ベースが定容量のく ぼみ又は引っ込み部分を有するプラスチック製であるスライド。 25．請求項９乃至１２のいずれかに記載の方法によって一容量の血液を染色する 過程と、前記染色された血液を請求項１３乃至２４のいずれかに記載のスライド に導入する過程と、を含む血液サンプルの準備方法。 26．以下の構成要素、 （ｉ）被検査物質の特性に応じてその浸透圧が変更可能な酸性又は塩基性の緩 衝溶液と、 （ｉｉ）固定性の有機膜調整剤と、 （ｉｉｉ）サンプル中の細胞核及び細胞質成分を染色する化合物と、及び （ｉｖ）溶媒と、 を有する染色剤と、並びに毛管作用によって液体をそれ自身の中に引き入れる ようにしたスライドと、を含むキット。[Claims] 1. The following components: (i) an acidic or basic buffer solution whose osmotic pressure can be changed according to the properties of the test substance; (ii) a fixed organic membrane modifier; and (iii) A stain for animal or plant samples, comprising: a compound that stains cell nuclei and cytoplasmic components; and (iv) a solvent. 2. In dye of claim 1, wherein the buffer solution is a trisodium citrate dihydrate of molecular weight 294.1 (wherein C 6 H 5 O 7 Na 3 · 2H 2 O) stain. 3. In dye according to claim 1 or 2, wherein 2 of said membrane modifier molecular weight 90.12 - ethoxy ethanol (ethylene glycol monoethyl ether) (Formula C 2 H 5 O CH 2 CH 2 OH) stain. 4. The dye according to any one of the preceding claims, wherein the dye compound is azure B having a molecular weight of 305.8 (cl52010; azure 1 for staining cellular RNA and DNA in plant tissue, identified by BSC) (formula C 15 H 16 CIN 3 S) or a dye which is a derivative of Azure B. 5. 5. The dye of claim 4, wherein said Azure B, or a derivative thereof, has a dye content of about 80%. 6. The dye according to any of the preceding claims, wherein the solvent is deionized water or distilled water. 7. The method according to any of the preceding claims, suitable for being used for staining blood samples taken from humans or animals, and for staining according to the type of cells and / or microparticles in said cells. Stain. 8. A dyeing method comprising: mixing one volume of the liquid with the dye according to any one of the preceding claims; and allowing the mixture to stand. 9. The staining method according to claim 8, wherein the liquid is blood. Ten. The staining method according to claim 9, wherein the blood and the staining agent are mixed at a ratio of 1: 4. 11． The dyeing method according to any one of claims 8 to 10, wherein the liquid and the dye are mixed with gentle stirring. 12． The dyeing method according to any of claims 8 to 10, wherein the mixture is allowed to stand at a temperature between 15 ° C and 60 ° C for between 1 minute and 60 minutes. 13. A slide that has been modified to draw liquid into itself by capillary action. 14. 14. The slide of claim 13, wherein the liquid is a stained or unstained blood sample. 15． 15. A slide according to claim 13 or claim 14, comprising a base and a cover, wherein the base and the cover are arranged together to form a capillary chamber. 16． The slide according to claim 15, wherein the base and the cover are made of glass and / or plastic material. 17． The slide of claim 15, wherein the base and the cover are extremely flat glass, such as float glass. 18． 18. A slide according to any one of claims 15 to 17, wherein the cover is secured to the base by an adhesive such that the cover acts as a sealant for the capillary chamber. 19. 19. The slide according to any one of claims 15 to 18, wherein the cover is separated from the base using small spheres. 20. 20. A slide according to claim 19, wherein the globules are between 5 and 20 microns in diameter and made of vinylbenzene and / or polystyrene. twenty one. 21. The slide according to claim 19 or 20, wherein the globules comprise an aqueous solution. twenty two. 22. A slide according to any one of claims 15 to 21, wherein the capillary chamber is contoured by providing a groove in the base, the groove preventing a flow of aqueous solution from entering the chamber. twenty three. 23. The slide according to any of claims 15 to 22, wherein the base and / or the cover are treated or coated to assist or prevent the flow of a test sample through the slide. twenty four. 14. A slide according to claim 13, comprising a base made by either an extrusion process or a molding process, and a flat or planar cover, said base being made of plastic having a constant volume recess or recess. slide. twenty five. A blood comprising a step of staining a volume of blood by the method according to any one of claims 9 to 12, and a step of introducing the stained blood into the slide according to any one of claims 13 to 24. How to prepare samples. 26. The following components: (i) an acidic or basic buffer solution whose osmotic pressure can be changed according to the properties of the test substance; (ii) a fixed organic membrane modifier; and (iii) A kit comprising: a compound that stains cell nuclei and cytoplasmic components; and (iv) a solvent having: and a slide adapted to draw liquid into itself by capillary action.
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