JPH11514329A

JPH11514329A - 標識化ペプチド化合物

Info

Publication number: JPH11514329A
Application number: JP7521978A
Authority: JP
Inventors: メルテンス、ジョン; トゥルウェ、ディルク; セウステルス、マルク
Original assignee: マリンクロット・メディカル・インコーポレイテッド
Priority date: 1994-02-18
Filing date: 1995-02-21
Publication date: 1999-12-07
Also published as: WO1995022341A1; CA2183421A1; EP0752873A4; EP0752873A1; US6194386B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ペプチドが選択的ニューロテンシン受容体親和性を有し、かつ一般式式中：Ｒ₁は(Ｃ₁−Ｃ₃)アルカノイル基、アリールカルボニル基、アリール(Ｃ₁−Ｃ₃)アルカノイル基、または、アミド基によりまたはスペース化基を介してペプチド分子に結合しているキレート化基であり；ＸaaおよびＸｂｂはそれぞれ独立してＡrgまたはＬysであり；Ｘccは不飽和または飽和の環状アミノ酸であって、好ましくはＰroおよびＨypから選ばれるものであり；ＸddはＴyr、ＴrpまたはＰheであり；ＸeeはＬeu、Ｉleまたはｔ−ブチルアラニンであり；そしてｎは０または１である、で表され、さらに、該ペプチドが、(ｉ)もし標識が金属アイソトープであるなら、Ｒ₁は該アイソトープをキレート化するキレート化剤であり；さらに(ii)もし標識が放射性ハロゲンアイソトープであるなら、該ハロゲンアイソトープがフェニル環の２−位で⁴Ｔyr、⁴Ｔrp、または置換基Ｒ₁のアリール基に結合している、との条件下に(ａ)金属アイソトープ、または(ｂ)放射性ハロゲンアイソトープ、で標識されている、標識化ペプチド化合物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】標識化ペプチド化合物本発明は標識化ペプチド化合物、本化合物の製造法、本化合物を含む医薬組成物、診断および治療における本化合物の使用および放射性医薬組成物を製造するためのキットに関する。ニューロテンシンは１３個のアミノ酸ペプチドであり、１９７３年にウシ視床下部から単離された。以下の構造を有する：ｐＧlu-Ｌeu-Ｔyr-Ｇlu-Ａsn-Ｌys-Ｐro-Ａrg-Ａrg-Ｐro-Ｔyr-Ｉle-Ｌeu-ＯＨ高濃度のニューロテンシンは、啼乳類中枢神経系の分離領域に見られる。加えて、ニューロテンシンは末梢の特異的受容体と相互作用する。この１０年間、ニューロテンシン受容体が、小細胞肺癌、ヒト大腸癌およびヒト髄膜腫のような多くの癌細胞で発見されている。２個の放射性ヨウ素化ニューロテンシン誘導体が文献に記載されている。ニューロテンシン配列中のチロシン残基の存在のために、非常に異なる生物学的特性および、更に、異なる純度を有するニューロテンシンのヨウ素化は放射性ペプチドの錯体混合物を形成する。したがって、Ｍazella et al．(Ｊ．Ｂiol．Ｃhem ．1983，258，3476-3781)は、チロシン−１１がトリプトファン残基で置換されているニューロテンシンアナログを合成した：[Ｔrp¹¹]ニューロテンシン。ヨウ素化(チロシン−３の芳香族環で求電子条件下で１２５−ヨウ素による)は、ラット脳シナプス膜に対する結合について０.１nmのＫ_dを示すモノヨウド誘導体をもたらす。同じグループの研究者の予備実験(Ｓadoul et al.；Ｂiochem．Ｂiophy s．Ｒes．Ｃommun．1984，120，812-819)は、ヒト脳におけるニューロテンシン受容体がモノヨウド−[Ｔrp¹¹]−ニューロテンシンに低い親和性を示すことを示唆し、この化合物が結合実験には適さないとされた。同じグループの研究者は、後に、ニューロテンシンそれ自身のモノヨウド誘導体の製造に成功した；本方法において、チロシン−３のみを１２５−ヨウ素でヨウ素化した。この放射性ヨウ素化アナログは、ラット脳シナプス膜の結合について０.２nmのＫ_dおよびヒト脳ニューロテンシン受容体の結合について０.２６nmのＫ_dを有する。標識天然ニューロテンシンおよび標識トリプトファン−１１ニューロテンシンアナログは、しかしながら、ペプチド結合の開裂による酵素的破壊を受け、インビボ半減期が僅か数分となる難点があった。構造活性研究(Ｇranier et al.；Ｅur．Ｊ．Ｂiochem．1982，124，117-125) は、ニューロテンシン分子の右手部分が、そのα−アミノ末端基がアセチル化により保護されている限り、完全な配列を模倣するための構造的要求を満たすことを明らかにした。このアナログの結合親和性は、２つの結合検定、すなわち、ラット脳シナプス膜およびＨＴ２９細胞上でのものでニューロテンシンのものと同等である。このアナログは、１つの残存チロシン残基を含み、これは容易に、フェノール基のオルト位の水素の求電子置換を使用して放射性ヨウ素化できる。しかしながら、構造活性研究は、このアナログのチロシン残基の３位のヨウ素化は、即ち、２０の因子(Ｍazella et al.；上記参照)との受容体親和性の著しい損失をもたらすことを明らかにした。ニューロテンシン自身と同等なニューロテンシン受容体親和性を有し、診断および治療上の使用を可能にする充分な酵素耐性を有する標識化ペプチド化合物を提供するのが本発明の目的である。この目的は、ペプチドが選択的ニューロテンシン受容体親和性を有し、かつ一般式Ｒ₁−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（Ｉ）式中：Ｒ₁は（Ｃ₁−Ｃ₃）アルカノイル基、アリールカルボニル基、アリール（Ｃ₁− Ｃ₃）アルカノイル基、または、アミド基によりまたはスペース化基を介してペプチド分子に結合しているキレート化基であり；ＸaaおよびＸbbはそれぞれ独立してＡrgまたはＬysであり；Ｘccは不飽和または飽和の環状アミノ酸であって、好ましくはＰroおよびＨyp から選ばれるものであり；ＸddはＴyr、ＴrpまたはＰheであり；ＸeeはＬeu、Ｉleまたはｔ−ブチルアラニンであり；そしてｎは０または１である、で表され、さらに、該ペプチドが、（ｉ）もし標識が金属アイソトープであるなら、Ｒ₁は該アイソトープをキレート化するキレート化基であり；さらに（ii）もし標識が放射性ハロゲンアイソトープであるなら、該ハロゲンアイソトープがフェニル環の２−位で⁴Ｔyr、⁴Ｔrp、または置換基Ｒ₁のアリール基に結合している、との条件下に（ａ）^99mＴｃ、²⁰³Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁷⁷Ａｓ、⁹ ⁰ Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹Ａｕ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹Ｇｄ、¹⁶⁶Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇから成る群から選ばれる金属アイソトープ、または（ｂ）放射性ハロゲンアイソトープ、で標識されている、標識化ペプチド化合物によって達成される。Ｒ₁のアリール基の好適な例は：フェニル、ハロ置換フェニルまたはインドリル；好ましくはフェニル、４−フルオロフェニル、２−または４−ブロモフェニル、２−ヨウドフェニル、４−フルオロ−２−ブロモフェニルおよび４−フルオロ−２−ヨウドフェニルである。放射活性ハロゲンアイソトープの好適な例は：¹²³ Ｉ、¹²⁴Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、⁷⁷Ｂｒおよび⁸²Ｂｒである。上記標識化ペプチド化合物において、１個またはそれ以上のアミノ酸は、通常のＬ−配置の代わりにＤ−配置を有し得る。本発明の標識化ペプチド化合物は、いわゆる疑似ペプチド結合、即ち−ＣＨ₂−ＮＨ−結合を、天然アミド結合、即ち−ＣＯ−ＮＨ−に加えて含み得る。ペプチドにおける天然発生アミノ酸のこのような修飾は本発明の範囲内である。本発明により、キレート化基を伴って、上記した金属アイソトープで、直接またはスペース化基を経由して標識されたペプチド化合物が提供されるが、該キレート化基は、アミド結合により該ペプチド化合物のアミノ基に結合しているものである。キレート化基は、好ましくは、エチレンジアミンテトラ酢酸(ＥＤＴＡ)、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(ＤＴＰＡ)、シクロヘキシル１,２−ジアミンテトラ酢酸(ＣＤＴＡ)、エチレングリコール−Ｏ,Ｏ'−ビス(２−アミノエチル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラ酢酸(ＥＧＴＡ)、Ｎ,Ｎ−ビス((ヒドロキシベンジル)−エチレンジアミン−Ｎ,Ｎ'−ジ酢酸(ＨＢＥＤ)、トリエチレンテオラミンヘキサ酢酸(ＴＴＨＡ)、１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ,Ｎ',Ｎ ",Ｎ"'−テトラ酢酸(ＤＯＴＡ)、ヒドロキシエチルジアミンテトラ酢酸(ＨＥＤＴＡ)、１,４,８,１１−テトラアザシクロ−テトラデカン−Ｎ,Ｎ',Ｎ",Ｎ"'− テトラ酢酸(ＴＥＴＡ)、置換ＤＴＰＡ、置換ＥＤＴＡから、または、一般式式中、Ｒは分枝または非分枝の、所望により置換されているヒドロカルビル基であり、該基は１つまたはそれ以上のＮ，Ｏ，およびＳから選ばれるヘテロ原子、および／または１つまたはそれ以上のＮＨ基が介在してもよく、そして、Ｙは、ペプチドのアミノ基と反応し得る基であり、好ましくはカルボニル、カルブイミドイル、Ｎ−(Ｃ₁−Ｃ₆)アルキルカルブイミドイル、Ｎ−ヒドロキシカルブイミドイル、およびＮ−(Ｃ₁−Ｃ₆)アルコキシカルブイミドイルから成る群から選ばれるものである、から誘導されるものである。一般式IIIの好適なキレート化基は、非置換または置換２−イミノチオランおよび２−イミノチオアセクロヘキサン、特に２−イミノ−４−メルカプトメチルチオランである。所望により存在してもよいスペース化基は、好ましくは一般式式中、Ｒ₅はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン基、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキリデン基、またはＣ₁−Ｃ₁₀ アルケニレン基であり、Ｘはチオカルボニル基またはメチルカルボニル基である、を有する。その生物学的特性、特にそのニューロテンシン受容体への結合親和性およびインビボ安定性、およびその合成容易性との関連で、以下の本発明の標識化ペプチド化合物が好適なものである： (１)(２−*Ｉ−フェニル)アセチル−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌe u−ＯＨ (２)(４−*Ｉ−フェニル)アセチル−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌe u−ＯＨ (３)２−*Ｉ−ベンゾイル−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (４)４−*Ｉ−ベンゾイル−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (５)(４−Ｆ−２−*Ｉ−フェニル)アセチル−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉ le−⁶Ｌeu−ＯＨ (６)(４−Ｆ−２−*Ｉ−ベンゾイル)−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶ Ｌeu−ＯＨおよび、¹Ａrgが疑似ペプチド結合により³Ａrgに結合している化合物(１)から( ６)の変種、 (７)(２−*Ｉ−フェニル)アセチル−¹Ｌys−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌe u−ＯＨ (８)(２−*Ｉ−フェニル)アセチル−¹Ａrg−²Ｌys−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌe u−ＯＨ (９)Ａc−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴(２−*Ｉ−Ｔyr)−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１０)Ａc−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴(２−*Ｉ−Ｔrp)−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１１)Ａｃ−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴(５−*Ｉ−Ｔrp)−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１２)Ａｃ−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴(７−*Ｉ−Ｔrp)−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１３)(*Ｍ−ＤＴＰＡ)−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１４)(*Ｍ−ＥＤＴＡ)−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ (１５)(*Ｍ−(２−イミノチオラン))−¹Ａrg−²Ａrg−³Ｐrｏ−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶ Ｌeu−ＯＨ (１６)(*Ｍ−(４−メルカプトメチル−２−イミノチオラン))−¹Ａrg−²Ａrg−³ Ｐro−⁴Ｔyr−⁵Ｉle−⁶Ｌeu−ＯＨ；式中、*Ｉは¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉまたは¹³¹Ｉおよび*Ｍは¹¹¹Ｉｎ、^99mＴｃ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁶⁶ Ｈｏ、¹⁵³Ｓｍまたは¹⁶¹Ｔｂである。上記標識化ペプチド化合物は、インビボ適用を予測した多くの好適なモデル実験で試験された。これらの実験は実施例に記載する。これらの実験の結果から、本発明の標識化ペプチド化合物が、それらを診断および治療目的に適する特性を有することが明白であろう。診断目的に好適なアイソトープで標識した場合、このペプチド化合物は、例えば、標識が分離することによる破壊を示すことなく、標的器官または組織の造影を可能にするために投与後充分長期間無傷のままである。治療のために好適な放射性アイソトープで標識した場合、このような標識化ペプチドは、小細胞肺癌、大腸癌および髄膜腫のような、ニューロテンシンが結合する場所に関係する多くの悪性腫瘍の処置のための確実な治療剤である。本発明の新規放射性ハロゲン化ペプチド化合物は、関連化合物についてそれ自体既知の方法により製造できる。従って、本発明は、一般式Ｒ₁−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（Ｉ）式中、Ｘaa、Ｘbb、Ｘcc、Ｘdd、Ｘee、ｎおよびＲ₁は、上記での定義と同一の意味を有し、かつ該化合物は、フェニル環の２−位で⁴Ｔyrに、⁴Ｔrpに、または置換基Ｒ₁のアリール基に結合している；で表される化合物を、銅(Ｉ)イオン、水溶性酸、および還元剤の存在下に、¹²³ Ｉ^-、¹²⁴Ｉ^-、¹²⁵Ｉ^-、¹³¹Ｉ^-、⁷⁵Ｂｒ^-、⁷⁶Ｂｒ^-、⁷⁷Ｂｒ^-、および⁸²Ｂｒ^-から選ばれる水溶性ハロゲン化物と反応させることをを特徴とする、上記で定義の放射性ハロゲン化ペプチド化合物の製造方法にも関する。このようなハロゲン交換反応は、欧州特許第１６５６３０号に記載されている。好適な水溶性酸の例は、クエン酸；好適な還元剤の例はＳｎ(III)塩、ゲンチシン酸、イソアスコルビン酸、モノサッカライドおよび亜硫酸塩である。また本発明の新規金属標識化ペプチド化合物は、関連化合物についてそれ自身既知の方法により製造できる。この目的のために、ペプチド分子は、上記に定義のキレート剤、例えばＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ等で、上記のように直接またはスペース化基の導入後に誘導体化し、その後、一般式Ｒ₂−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（II）式中、Ｘaa、Ｘbb、Ｘcc、Ｘdd、Ｘee、ｎおよびＲ₁は、上記での定義と同一の意味を有し、Ｒ₂はアミド基によりまたはスペース化基を介してペプチド分子に結合しているキレート化基である、を上記定義の金属アイソトープと、塩または、錯体を形成させるために比較的に弱いキレート化剤と結合したキレートの形態で反応させる。所望の金属アイソトープの好適な塩またはキレートの例は：¹¹¹Ｉｎ−オキシネート、^99mＴｃ−タートレート等である。錯体形成反応は、一般に単純な方法で、ペプチドに有害でない条件下で行うことができる。本発明は、更に、製薬的に許容可能な担体物質に加えて、所望より、少なくとも一つの製薬的に許容可能なアジュバント、活性物質として前記で定義の標識化ペプチド化合物を含む医薬組成物に関する。本発明は、また、温血動物の生体中の、ニューロテンシン受容体を有する組織を検出並びに特定化する方法であって、 (ｉ)該生体に、(ａ)^99mＴｃ、²⁰³Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、¹¹³ ^m Ｉｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒから成る群から選ばれる金属アイソトープ、または(ｂ)¹²³Ｉ、¹³¹Ｉ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒおよび⁷⁷Ｂｒから成る群から選ばれる放射性ハロゲンアイソトープで標識化されている、標識化ペプチド化合物を、外部イメージングに充分量含む組成物を投与すること、さらに、 (ii)該生体中の標的部位を、背景活性との関連において決定するために該生体を外部イメージング処理すること、を含んで成る方法にも関する。本発明は、また温血動物の生体中の、ニューロテンシン受容体を有する組織を手術中に検出並びに特定化する方法であって、 (ｉ)該生体に、標識化ペプチド化合物を、ガンマ検出プローブによる検出に充分量含む組成物を投与すること、但し、該ペプチド中の放射性アイソトープは¹⁶¹ Ｔｂ、¹²³Ｉ、または¹²⁵Ｉ、好ましくは¹⁶¹Ｔｂまたは¹²⁵Ｉであり、さらに、 (ii)有効物質を該組織中に取り込ませた後、かつ血液の放射活性を除去した後、該生体の適切な領域を、ガンマ検出プローブを用いて放射性免疫測定技術で処理すること、を含んで成る方法にも関する。上記放射性アイソトープ、すなわち、特に¹⁶¹Ｔｂまたは¹²⁵Ｉは、このような標識化ペプチド化合物の放射能先導手術の技術における使用を可能にし、患者体内の適切な那組織を手術中に、ガンマ検出プローブの手段により検出および位置決定できる。外科医は、手術中にこのプローブを使用し、低エネルギーガンマ光子エミッターである放射性アイソトープで標識された化合物の取り込みが行われている領域を見付けられる。上記のように、小細胞肺癌、大腸癌および髄膜腫のようなある種の癌細胞が、その表面にニューロテンシン受容体を有することは文献から知られている。故に、本発明のペプチド化合物は、それらをその目的に適したアイソトープで放射性標識した場合、これら腫瘍の治療的処置に用いることができる。従って、本発明はさらに、腫瘍の表面に高密度のニューロテンシン受容体部位を有する、温血動物の生体中の腫瘍の治療的処置法であって、該生体に、腫瘍を攻撃し制御するのに有効量のペプチド化合物、それらのペプチド化合物は、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁷⁷ Ａｓ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹Ａｕ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹ Ｇｄ、¹⁶⁶Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇから成る群から選ばれる金属アイソトープで標識されたものである、を含む組成物を投与することを含んで成る方法にも関連する。放射活性標識化ペプチド化合物を診断剤として使用する場合、多くの放射性標識化合物の貯蔵寿命が短いことおよび／または放射性核種の半減期が短いことの故に、使用者がいつでも任意に使用可能な状態の組成物とすることはしばしば不可能である。このような場合、使用者は放射性核種との標識反応を病院または研究室で行う。それ故、この目的のために、種々の反応成分が、いわゆる“キット ”の形で使用者に提供される。明らかに所望の反応を行うのに必要な操作は、使用者が自由に使用できる設備を使用して、可能な限り単純にキットから放射性標識組成物を調製可能であるべきである。したがって、本発明はまた放射性医薬組成物を製造するためのキットにも関連する。このような本発明のキットは、(ｉ)ニューロテンシン受容体に選択的親和性を有し、かつ上記で定義の一般式IIを有するペプチド化合物、但し該化合物には、必要に応じて不活性な医薬的に許容され得る担体および／または調剤用剤および／またはアジュバントを加えてある、(ii)塩溶液または好適な金属アイソトープのキレート溶液還元剤、さらに、(iii)キットの成分反応の処方並びに使用法指示書、を含んで成る。上記キットのための好適な放射性核種は、以下の金属アイソトープである：²⁰ ³ Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、^99mＴｃ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒ、⁷⁷Ａｓ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷ Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹Ａｕ、¹⁶¹ Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹Ｇｄ、¹⁶⁶ Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇ。好ましくは、上記キットの成分として用いられるペプチド化合物は、上に定義したキレート化剤との反応によって修飾される。得られたペプチドコンジュゲートは、簡単な方法で放射性核種をしっかりと固着せしめるのを容易にする。ペプチドを修飾せしめるのに適切なキレート剤は詳細に上記した。上記したようなＮ −含有ジ−またはポリ酢酸またはその誘導体は、Ｉn−１１１およびＩn−１１３ mのような種々の金属放射性核種をペプチド分子に固着せしめるのに非常に適切であることが明らかになった。ユーザーに供給されるキットは、上記sub（ｉ）で定義された成分と使用説明書を含み、上記sub（ii）で定義された放射性核種の塩またはキレートの溶液は、限定的な保存期間があり、別個に個々にユーザーの処分自由とされ得る。キットを、Ｔc−９９m、Ｒe−１８６またはＲe−１８８で標識された放射性医薬組成物の製造に用いる場合、本発明による該キットは、上記（ｉ）で定義された成分に加えるに、（ii）還元剤、所望すればキレーターおよび（iii）キットの成分と過テクネテートの形でのＴc−９９mまたは過レネートの形でのＲe−１８６あるいはＲe−１８８とを反応させるための方法の使用説明書を含み得る。所望すれば、キットの成分は、適合する限り結合せしめ得るキットは、過テクネテート（pertechnetate）または過レネート（perrhenate）を還元するための還元剤、例えばジチオナイト、金属性還元剤または複合−安定化還元剤、例えばＳ nＣl₂、Ｓn(II)−タルトレート、Ｓn(II)−ホスフェートあるいはピロホスフェート、またはＳn(II)−グルコヘプトネートを含む。過テクネテートまたは過レネートの溶液は、適当な製造業者からユーザーが入手できる。望ましい実施態様において、本発明のキットは、上に定義されたペプチドをキレート剤との処理により修飾せしめて得た修飾ペプチドすなわちペプチドコンジュゲートを含む。適当なキレート剤は上述した。放射性核種がキット自体中に存在するとき、ペプチドコンジュゲートとの反応を形成する複合体は中性媒体中で成分を結合せしめ、反応せしめることにより、簡単に製造することができる。この目的のために放射性核種は、上記したように、比較的弱いキレーターと結合したキレートの形において、ペプチドコンジュゲートに提供され得る。キットが上に定義したペプチドコンジュゲートを含み、Ｔc−９９m、Ｒe−１８６またはＲe−１８８で標識した放射性医薬組成物の製造を意図するときは、放射性核種は過テクネテートまたは過レネートの形で別個に望ましくは加えられる。その場合、キットは適当な還元剤および、所望すれば、キレート剤を含み、還元剤は過テクネテートまたは過レネートを還元する。使用し得る還元剤としては、例えばジチオナイトまたは金属還元剤がある。成分は、適合する限り、選択的に結合せしめ得る。このような一成分系のキットは、結合した成分が望ましくは凍結乾燥されており、ユーザーによって放射核種溶液と反応せしめられるのに非常に適切である。上記のキットについての還元剤としては好ましくは金属還元剤、例えばＳn(II)、Ｃe(III)、Ｆe(II)、Ｃu(Ｉ)、Ｔi(III)またはＳb(III)が用いられ、Ｓn(II)が非常に適切である。上記キットのペプチド構成体、すなわち好ましくはペプチドコンジュゲートは、溶液として例えば生理食塩水の形態あるいは何らかの緩衝液として供給され得るが、好ましくは乾燥状態、例えば凍結乾燥で提供される。注射液の成分として用いられるときは、液体は滅菌されていなければならず、成分が乾燥状態である場合、使用者は好ましくは滅菌生理食塩水を溶媒として使用する。所望ならば、上記成分は既知の方法で、既知の安定剤、例えばアスコルビン酸、ゲンチシン酸またはこれらの酸の塩により安定化してもよく、または他の補助剤、例えばグルコース、ラクトース、マンニトール等の充填剤を含んでいてもよい。本発明は以下の具体的実施例を参考にしてより詳細に記載する。実施例Ｉ放射性標識化ペプチド化合物(１)、(２)、(３)および(４)の製造 (ａ)対応するブロモ−置換ペプチド化合物の合成。出発ブロモ置換ペプチド、すなわちブロモ置換ベンゾイルＡrg−Ａrg−Ｐro−Ｔyr−Ｉle−Ｌeu−ＯＨまたはフェニルアセチル−Ａrg−Ａrg−Ｐro−Ｔyr−Ｉle−Ｌeu−ＯＨを、固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)法により、Ｎ−α−tert.−ブチルオキシカルボニル(Ｂoc)保護アミノ酸を使用して合成する。合成中、Ａrgの側鎖をトシル(Ｔos)基で保護し、チロシンのフェノール性側鎖ｏ−ブロモーベンジルオキシカルボニル(ｏ−Ｂr −Ｚ)基で保護する。最初のアミノ酸を樹脂(クロモメチルポリスチレン、１％の１,４−ジビニルベンゼンと架橋)と、所望のアミノ酸、即ちロイシンのＣｓ−塩を介して結合させる。置換率(０.６０mmol／ｇ樹脂)をピクリン酸法により測定する。ペプチドを下記のような反復サイクルにより集合させる： −トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)溶液(ＴＦＡ／ジクロロメタン／アニソール)による主鎖保護基、即ちＢoc基の脱保護； −ＴＦＡ塩のジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)による中和； −遊離アミノ酸と次のアミノ酸のカルボキシ官能基の結合；Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)および１−ヒドロキシベンズトリアゾール(ＨＯＢt)を結合剤として使用する。サイクルをペプチド鎖が集合するまで行う。ペプチドを樹脂から液体ＨＦとの反応により開裂する。酢酸抽出を使用してペプチドを樹脂から分離する。凍結乾燥後、ペプチドを、勾配ｘ＝１５％→４０％(０−２０分)のアセトニトリル／Ｈ₂Ｏ／ＴＦＡ−ｘ／(１００−ｘ)／０.００１を使用したＲＰ−ＨＰＬＣおよびＶydac(商標)ＲＰ−Ｃ₁₈カラムにより精製する。最後にペプチドの純度は分析用ＲＰ−ＨＰＬＣおよび薄層クロマトグラフィーにより確認される。ペプチドはＦＡＢ質量分光測定により特徴づけられる。４個のブロモ−置換化合物が３１−６１％の収率で得られる。（ｂ）¹³¹Ｉによる放射ヨード化欧州特許第１６５６３０に記載の方法に従い、ペプチドをヨード¹³¹によるブロムの求核変位により放射ヨード化する。典型的な例として、原料溶液：１mg ＳnＳＯ₄ ２５mg ２,５−ジヒドロ安息香酸（ゲンチシン酸）３５mg クエン酸１水和物２.５ml １０％ＡcＯＨ水溶液（v／v）中；Ｃu²⁺溶液：１０ml水中（０．０１３Ｍ）３２.５mg ＣuＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏペプチド（１mg）を原料溶液５００μlおよびＣu²⁺溶液６０μlに溶かす。すべての溶質が溶けるまで、溶液を超音波処理する。透明液に５分間Ｎ₂を流す。Ｎa¹³¹Ｉ１０μl（１３２μＣi）を加えた後、反応混合物を１時間１４０℃ で加熱する。混合物を最終的に室温にまで冷やす。ＰＲ−ＨＰＬＣを行い、ヨード化収量を計算する。アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ／ＴＦＡ−Ｘ／(１００−Ｘ)／０. ００１、Ｘの変化＝１５％→４０％（０−２０分）；Ｌichrospher(商標)１００ＲＰ−１８（５μm）コラム；流速１ml／min。意図した放射ヨード化ペプチド( １)、(２)、(３)および(４)が夫々の収率８４％、５４％、８６％および５５％で得られる（最適化ではない）。実施例II 生物学的試験結合検定試験結合検定をモルモットの前脳膜に結合している[³Ｈ]ノイロテンシンの阻害を調べて行う。標識していないアセチル化合物Ａc−Ａrg−Ａrg−Ｐro−Ｔyr−Ｉl e−Ｌeu−ＯＨ(a)を対照として用いて、下記の結果を得る。親和物はpＩＣ₅₀価（５０％の阻害をもたらすペプチド同族体の濃度）として示す。上の数値から、放射ヨード化同族体(１)−(４)は、本結合検定においてニューロテンシン受容部位に対する親和性を示し、それは標識していない化合物に匹敵することが明らかである。酵素安定性４つの放射ヨード化同族体(１)、(２)、(３)および(４)の酵素安定性を通常の方法でヒト血清でインビトロで調べ、その安定性は充分である。ニューロテンシンおよびその同族体の構造−活性研究は、同じ関係すなわち構造対活性が腫瘍受容体と同様にラット脳受容体に存在することを示している。ラット脳の受容体が腫瘍細胞のそれと同じであることを表している。従って、上記試験は、試験化合物がニューロテンシン受容体に関連する悪性腫瘍の診断において有望な武器であることを示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 1/13 Ｃ０７Ｋ 5/06 5/06 Ａ６１Ｋ 43/00 (72)発明者セウステルス、マルクベルギー、ベー−1050ブリュッセル、プラインラーン２番

Claims

【特許請求の範囲】１．ペプチドが選択的ニューロテンシン受容体親和性を有し、かつ一般式Ｒ₁−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（Ｉ）式中：Ｒ₁は(Ｃ₁−Ｃ₃)アルカノイル基、アリールカルボニル基、アリール(Ｃ₁−Ｃ₃ )アルカノイル基、または、アミド基によりまたはスペース化基を介してペプチド分子に結合しているキレート化基であり；ＸaaおよびＸbbはそれぞれ独立してＡrgまたはＬysであり；Ｘccは不飽和または飽和の環状アミノ酸であって、好ましくはＰroおよびＨyp から選ばれるものであり；ＸddはＴyr、ＴrpまたはＰheであり；ＸeeはＬeu、Ｉleまたはｔ−ブチルアラニンであり；そしてｎは０または１である、で表され、さらに、該ペプチドが、 (ｉ)もし標識が金属アイソトープであるなら、Ｒ₁は該アイソトープをキレート化するキレート化基であり；さらに (ii)もし標識が放射性ハロゲンアイソトープであるなら、該ハロゲンアイソトープがフェニル環の２−位で⁴Ｔyr、⁴Ｔrp、または置換基Ｒ₁のアリール基に結合している、との条件下に (ａ)^99mＴｃ、²⁰³Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁷⁷Ａｓ、⁹⁰ Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹Ａｕ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹Ｇｄ、¹⁶⁶Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇから成る群から選ばれる金属アイソトープ、または (ｂ)放射性ハロゲンアイソトープ、で標識されている、標識化ペプチド化合物。２．該ペプチドが、¹²³Ｉ、¹²⁴Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、⁷⁷Ｂｒおよび⁸²Ｂｒから成る群から選ばれる放射性ハロゲンアイソトープ、で標識されている、請求の範囲第１項に記載の標識化ペプチド化合物。３．該ペプチドが、エチレンジアミンテトラ酢酸(ＥＤＴＡ)、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(ＤＴＰＡ)、シクロヘキシル１,２−ジアミンテトラ酢酸(ＣＤＴＡ)、エチレングリコール−Ｏ,Ｏ'−ビス(２−アミノエチル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ' −テトラ酢酸(ＥＧＴＡ)、Ｎ，Ｎ−ビス((ヒドロキシベンジル)−エチレンジアミン−Ｎ,Ｎ'−ジ酢酸(ＨＢＥＤ)、トリエチレンテオラミンヘキサ酢酸(ＴＴＨＡ)、１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ,Ｎ',Ｎ",Ｎ"'−テトラ酢酸(ＤＯＴＡ)、ヒドロキシエチルジアミンテトラ酢酸(ＨＥＤＴＡ)、１,４,８ ,１１−テトラアザシクロ−テトラデカン−Ｎ,Ｎ',Ｎ",Ｎ"'−テトラ酢酸(ＴＥＴＡ)、置換ＤＴＰＡ、置換ＥＤＴＡから、または、一般式式中、Ｒは分枝または非分枝の、所望により置換されているヒドロカルビル基であり、該基は１つまたはそれ以上のＮ，Ｏ，およびＳから選ばれるヘテロ原子、および／または１つまたはそれ以上のＮＨ基が介在してもよく、そして、Ｙは、ペプチドのアミノ基と反応し得る基であり、好ましくはカルボニル、カルブイミドイル、Ｎ−(Ｃ₁−Ｃ₆)アルキルカルブイミドイル、Ｎ−ヒドロキシカルブイミドイル、およびＮ−(Ｃ₁−Ｃ₆)アルコキシカルブイミドイルから成る群から選ばれるものであり；さらに、所望により存在するスペース化基は、一般式式中、Ｒ₅はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン基、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキリデン基、またはＣ₁−Ｃ₁₀ アルケニレン基であり、Ｘはチオカルボニル基またはメチルカルボニル基である、で表される化合物から誘導されるキレート化基Ｒ₁でキレート化された金属アイソトープ、で標識されている、請求の範囲第１項に記載の標識化ペプチド化合物。４．一般式Ｒ₁−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（Ｉ）式中、Ｘaa、Ｘbb、Ｘcc、Ｘdd、Ｘee、ｎおよびＲ₁は、請求の範囲第１項での定義と同一の意味を有し、かつ該化合物は、フェニル環の２−位で⁴Ｔyrに、⁴Ｔ rpに、または置換基Ｒ₁のアリール基に結合している；で表される化合物を、銅(Ｉ)イオン、水溶性酸、および還元剤の存在下に、¹²³ Ｉ^-、¹²⁴Ｉ^-、¹²⁵Ｉ^-、¹³¹Ｉ^-、⁷⁵Ｂｒ^-、⁷⁶Ｂｒ^-、⁷⁷Ｂｒ^-、および⁸²Ｂｒ^-から選ばれる水溶性ハロゲン化物と反応させることをを特徴とする、請求の範囲第２項に記載の放射性ハロゲン化ペプチド化合物の製造方法。５．一般式Ｒ₂−(¹Ｐro) _n −²Ｘaa−³Ｘbb−⁴Ｘcc−⁵Ｘdd−⁶Ｘee−⁷Ｌeu−ＯＨ（II）式中、Ｘaa、Ｘbb、Ｘcc、Ｘdd、Ｘee、ｎおよびＲ₁は、請求の範囲第１項での定義と同一の意味を有し、Ｒ₂はアミド基によりまたはスペース化基を介してペプチド分子に結合しているキレート化基である、を請求の範囲第１項に記載の金属アイソトープと、塩または、錯体を形成させるために比較的に弱いキレート化剤と結合したキレートの形態で、反応させることを特徴とする、請求の範囲第３項に記載の金属標識化ペプチド化合物の製造方法。６．医薬的に許容され得る担体物質、および必要に応じて、少なくとも１種の医薬的に許容し得るアジュバントに加えて、有効物質として請求の範囲第１、２または３項に記載の標識化ペプチド化合物を含んで成る、医薬組成物。７．温血動物の生体中の、ニューロテンシン受容体を有する組織を検出並びに特定化する方法であって、 (ｉ)該生体に、請求の範囲第１、２、または３項に記載の標識化ペプチド化合物を、外部イメージングに充分量含む組成物を投与すること、但し、該ペプチドは (ａ)^99mＴｃ、²⁰³Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒから成る群から選ばれる金属アイソトープ、または(ｂ)¹²³Ｉ、¹³¹Ｉ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒおよび⁷⁷Ｂｒから成る群から選ばれる放射性ハロゲンアイソトープで標識化されており、さらに、 (ii)該生体中の標的部位を、背景活性との関連において決定するために該生体を外部イメージング処理すること、を含んで成る方法。８．温血動物の生体中の、ニューロテンシン受容体を有する組織を手術中に検出並びに特定化する方法であって、 (ｉ)該生体に、請求の範囲第１項に記載の標識化ペプチド化合物を、ガンマ検出プローブによる検出に充分量含む組成物を投与すること、但し、該ペプチド中の放射性アイソトープは¹⁶¹Ｔｂ、¹²³Ｉ、または¹²⁵Ｉ、好ましくは¹⁶¹Ｔｂまたは¹²⁵ Ｉであり、さらに、 (ii)有効物質を該組織中に取り込ませた後、かつ血液の放射活性を除去した後、該生体の適切な領域を、ガンマ検出プローブを用いて放射性免疫測定技術で処理すること、を含んで成る方法。９．腫瘍の表面に高密度のニューロテンシン受容体部位を有する、温血動物の生体中の腫瘍の治療的処置法であって、該生体に、腫瘍を攻撃し制御するのに有効量の請求の範囲第３項に記載のペプチド化合物、それらのペプチド化合物は²⁰ ³ Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶²Ｃｕ、^99mＴｃ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒ、⁷⁷Ａｓ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷ Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹Ａｕ、¹⁶¹ Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹Ｇｄ、¹⁶⁶ Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇから成る群から選ばれる金属アイソトープで標識されたものである、を含む組成物を投与することを含んで成る方法。１０．放射性医薬組成物の製造用キットであって、 (ｉ)ニューロテンシン受容体に選択的親和性を有し、かつ一般式ＩＩを有するペプチド化合物、但し該化合物には、必要に応じて不活性な医薬的に許容され得る担体および／または調剤用剤および／またはアジュバントを加えてある、(ii)塩溶液、または²⁰³Ｐｂ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁷²Ａｓ、¹¹¹Ｉｎ、^113mＩｎ、⁹⁷Ｒｕ、⁶² Ｃｕ、^99mＴｃ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁶⁴Ｃｕ、⁵²Ｆｅ、^52mＭｎ、⁵¹Ｃｒ、⁷⁷Ａｓ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、¹⁶⁹Ｅｒ、¹²¹Ｓｎ、¹²⁷Ｔｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁴³Ｐｒ、¹⁹⁸Ａｕ、¹⁹⁹ Ａｕ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁰⁹Ｐｄ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁵¹Ｐｍ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵⁷Ｇｄ、¹⁵⁹ Ｇｄ、¹⁶⁶Ｈｏ、¹⁷²Ｔｍ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁰⁵Ｒｈおよび¹¹¹Ａｇから成る群から選ばれる金属アイソトープのキレート溶液、および (iii)キット中に存在する成分反応の処方並びに使用法指示書、を含んで成るキット。１１．放射性医薬組成物の製造用キットであって、 (ｉ)ニューロテンシン受容体に選択的親和性を有し、かつ一般式IIを有するペプチド化合物、但し該化合物には、必要に応じて不活性な医薬的に許容され得る担体および／または調剤用剤および／またはアジュバントを加えてある、(ii)還元剤、および必要に応じて、キレーター、但し、成分(ｉ)および(ii)は所望により混合されており、さらに、 (iii)過テクネテート溶液の形態での⁹⁹Ｔｃ、または過レネート溶液の形態での¹ ⁸⁶ Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅについてのキットの成分反応の処方並びに使用法指示書を含んで成るキット。