JPH11514207A

JPH11514207A - 組換えｃ１４０リセプター、そのアゴニストおよびアンタゴニスト、並びに該リセプターをコードする核酸

Info

Publication number: JPH11514207A
Application number: JP8523054A
Authority: JP
Inventors: サンデリン，ヨハン; スカーボロー，ロバート・エム
Original assignee: シーオーアール・セラピューティックス・インコーポレーテッド
Priority date: 1995-01-25
Filing date: 1996-01-25
Publication date: 1999-12-07
Also published as: NZ302524A; CA2211176A1; NO973422D0; WO1996023225A1; KR19980701637A; EP0870198A1; NO973422L; NZ334998A; EP0870198A4

Abstract

(57)【要約】Ｃ１４０細胞表面リセプターをコードする核酸分子をクローン化して配列決定した。Ｃ１４０リセプターＤＮＡの利用可能性は、卵母細胞を含む細胞表面上に生成されうるＣ１４０リセプターの組換え生成を可能にする。該核酸分子は、Ｃ１４０リセプター活性に影響するリセプターアゴニストまたはアンタゴニストの何れかの物質を検出するためのアッセイに有用である。さらに、Ｃ１４０リセプター構造の解明によりそのようなアッセイにおいて有用なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物のデザインが可能になる。Ｃ１４０リセプターの利用可能性は、Ｃ１４０リセプターのひとつまたはそれ以上の抗原性エピトープに特異的に免疫反応性である抗体の生成も可能にする。

Description

【発明の詳細な説明】組換えＣ１４０リセプター、そのアゴニストおよびアンタゴニスト、並びに該リセプターをコードする核酸技術分野本発明は、Ｇ蛋白質と対のリセプタースーパーファミリーのメンバーである新たに発見されたリセプターに関する。該リセプターは血管内の内皮細胞において発現される。このリセプターへの作用の回避は、このファミリー内の他のリセプターを刺激するのに投与される薬剤の副作用を限定する本質的な要素である。本発明は、リセプター蛋白質またはペプチドをコードする核酸配列にも関する。従来の技術多くの治療用および予防用薬剤に対する動物の応答は細胞表面上に存在する該リセプターを通して達成される。そのようなリセプターの一つのクラスはＧ蛋白質と対のリセプターからなり、該リセプターの生理作用はＧ蛋白質と呼ばれる３つのサブユニット蛋白質複合体により達成され、続くサブユニットの放出を伴ってこの種のリセプターに結合し、即ち、移動しながら付加的な細胞内事象を設定する。このサブクラスのリセプターは、とりわけ、アドレナリンリセプター、神経ペプチドリセプター、トロンビンリセプターおよび本発明の対象物であるＣ１４０リセプターを含む。このクラスのリセプターは、細胞表面内にリセプターをとどめる７つの膜貫通領域の存在により特徴付けられる。治療用物質のデザイナーにとって忘れやすい到達点は、副作用の不在下で所望の応答をもたらすことである。したがって、特定のリセプター、例えばトロンビンリセプターを標的とするようにデザインされた薬剤はトロンビンリセプターに特異的に反応して関連リセプターに作用を有さないべきである。本発明のＣ１４０リセプターは血圧の制御に関与し、そしてこのリセプターの不注意による刺激またはブロッキングは予言し得ない、即ち不所望な結果を有するはずである。したがって、例えばトロンビンリセプターを標的とするようにデザインされた治療剤がＣ１４０リセプターと不所望な副作用の反応性を有するか否かを予め決定することが有用である。便利なアッセイ系においてＣ１４０リセプターの生産のための組換え材料を提供すること並びに該アッセイにおける使用のためのアゴニストおよびアンタゴニストを提供することにより、本発明は、候補の薬剤中のＣ１４０リセプターとの副作用反応性の存在または不在のあらかじめの決定を可能にする。Ｃ１４０リセプターが外傷性および免疫性障害に関連したセリンプロテアーゼ等の酵素に対して応答すると信じられているとおり、この副作用は通常反応性不所望であろう。発明の開示本発明は、不所望な副作用を及ぼす候補の薬剤の性質を決定するためのアッセイ系に有用な方法および材料を提供する。Ｃ１４０リセプターの単離、組換え生成、および特徴付けにより、このリセプターを基質として使用し且つアッセイにおける制御剤として該リセプターのアゴニストおよびアンタゴニストを用いるアッセイのデザインが可能になる。即ち、一つの側面において、本発明はＣ１４０リセプターの生成に関連した組換え材料類に向けられる。これらは、例えば、表面上にＣ１４０リセプターを有するように培養されうるトランスフェクト細胞を含み、即ち、天然Ｃ１４０リセプターと物質の相互作用に関するアッセイ系を提供する。通常、これらのアッセイ系に有用な宿主細胞の制限は、細胞が表面上にリセプターを発現し且つ細胞内応答に対する介在物としてＧ蛋白質を含む適切な機構を有することである。（しかしながら、単に結合を評価するアッセイはＧ蛋白質を必要としない。）ほとんどの動物はこの要求を満たす。他の側面において、本発明は、Ｃ１４０リセプター蛋白質の細胞外領域の活性化形態を真似たＣ１４０リセプターアゴニスト類に向けられる。これらのアゴニスト類は、アッセイ系の実用性を評価するための上記アッセイにおいて対照として有用である。さらに、Ｃ１４０リセプターのアゴニストはインビボにおいて低血圧作用を示す。したがって、該アゴニスト類はそれら自体、抗高血圧症薬でもある。さらに他の側面において、本発明は、Ｃ１４０リセプターアンタゴニスト類に向けられる。これらのアンタゴニスト類は、リセプターの活性化に必要な本質的特徴を欠くＣ１４０リセプターアゴニストペプチドの修飾形態からなる。これらのアンタゴニスト類はリセプターに結合するが活性化はせず、そして、アゴニストおよび天然リセプター結合リガンドによるリガンド活性化を阻害する。アンタゴニスト類の第２の群は、リセプター蛋白質の特定部分に結合するようにデザインされた抗体を含む。通常、これらは、Ｃ１４０リセプターのあらゆる所望の領域に極めて特異的なモノクローナル抗体調製物である。本発明の抗体は、リセプター蛋白質の免疫アッセイ、例えば組換え系における連続発現の評価にも有用である。本発明の他の側面は、そのようなＣ１４０リセプターポリペプチドをコードする核酸の提供、および造血または免疫応答制御における診断用途または潜在的治療用途のための組換え細胞培養物中のポリペプチドの生成のための該核酸の使用に関する。さらに別の側面において、本発明は単離されたＣ１４０リセプターコード核酸分子であって、標識されているかまたは未標識であり、Ｃ１４０リセプターをコードする核酸配列に相補的かまたはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列を提供する。本発明の単離核酸分子は、Ｃ１４０リセプターではない他の公知のＧ蛋白質と対のリセプター、例えばアドレナリンリセプター、神経ペプチドリセプター、トロンビンリセプター等をコードする核酸配列または該配列と相補的な核酸配列を除外する。さらに、本発明は、複製可能なベクターであって該ベクターにより形質転換された宿主により認識される制御配列に作用可能なように連結したＣ１４０リセプターコード核酸分子、該ベクターで形質転換された宿主細胞、およびＣ１４０リセプターの生成をもたらすためのＣ１４０リセプターコード核酸分子の使用法であって、形質転換された宿主細胞の培養物中で核酸分子を発現させて宿主細胞培養物からＣ１４０リセプターを回収する工程からなる方法を提供する。上記核酸配列は、Ｃ１４０リセプターコード核酸分子のためのハイブリダイゼーションアッセイにも有用である。さらなる態様において、本発明は、Ｃ１４０リセプターコード配列の転写に影響するように該配列に十分近接して配向した転写変調要素をＣ１４０リセプターコード核酸配列を含む細胞のＤＮＡに挿入し、任意に該転写変調要素およびＣ１４０リセプターコード核酸配列を含む細胞を培養する工程からなる、Ｃ１４０リセプター生成方法を提供する。さらなる態様において、本発明は、Ｃ１４０リセプターコード配列およびＣ１４０リセプターコード配列の転写に影響するように該配列に十分近接して配向した外来転写変調要素をＣ１４０リセプターコード核酸配列を含む細胞、および宿主細胞により認識される外来対照配列に作用可能なように連結したＣ１４０リセプターコード核酸配列を含む宿主を提供する。さらに提供されるのは、Ｃ１４０リセプターコード核酸分子の転写を上昇させるかまたは低下させる細胞を得る方法であって、以下の工程：（ａ）該核酸分子を含む細胞を提供し、（ｂ）該細胞に転写変調要素を導入し、そして（ｃ）該核酸分子の転写を上昇させるかまたは低下させるような細胞をスクリーニングすることからなる方法である。他の側面において、本発明は候補の薬剤のアゴニストおよびアンタゴニスト活性をスクリーンするために組換えＣ１４０リセプターを利用するアッセイ系に関する。このアッセイは、治療剤がＣ１４０リセプターの活性化または阻害により引き起こされる不所望な副作用を有するか否かを評価するのに特に有用である。幾つかの場合、このリセプター系におけるアゴニスト活性は治療用途を有するかもしれない。これらアッセイ系の幾つかは陽性対照としてのアゴニストペプチドの使用を含む。該アッセイを用いてアゴニスト作用を阻害するアンタゴニストのスクリーンもできる。本発明の他の側面は、リセプターが活性化された場合の、流体、例えば血液または尿中のＣ１４０リセプターから分割されたペプチドの検出によるＣ１４０リセプターの特徴付けられる症状の診断に関する。本発明に含まれる他の診断方法は、活性化リセプターに特異的な抗体をインサイチュで用いた活性化リセプターに対する造影剤の局所化によるリセプターの活性化形態の可視化である。本発明のさらに他の側面は、Ｃ１４０リセプターをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ分子の翻訳の転写を干渉することによりＣ１４０リセプターの発現をブロックまたは変調するためのさまざまな技術の治療用、予防用および研究用用途に関する。これは、細胞内においてＣ１４０リセプターの発現を阻害するかまたは制御する方法であって、Ｃ１４０リセプターの発現を阻害または制御するのに十分な量でＣ１４０リセプターをコードするＤＮＡまたはＣ１４０リセプターの発現を制御するＤＮＡに対してアンチセンスであるかまたは３重鎖を形成するオリゴヌクレオチド分子を細胞に提供して、それにより発現を阻害または制御することからなる方法を提供する。また、対象中のＣ１４０リセプターの発現を阻害または制御する方法であって、対象においてＣ１４０リセプターの発現を阻害または制御するのに十分な量でＣ１４０リセプターをコードするＤＮＡまたはＣ１４０リセプターの発現を制御するＤＮＡに対してアンチセンスであるかまたは３重鎖を形成するオリゴヌクレオチド分子を対象に投与して、それにより発現を阻害または制御することからなる方法を提供する。上記方法におけるアンチセンス分子または３重鎖形成分子は好ましくはＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドである。本発明の他の側面は、本発明のアゴニストおよびアンタゴニストを含む薬剤組成物に向けられる。本発明のアゴニストは抗高血圧症薬であり、逆に、アンタゴニストは所望であれば血圧を上昇させうる。本発明の他の側面は、転写または翻訳レベルにおいて細胞または対象中のＣ１４０リセプター発現を阻害または制御するのに有用な薬剤組成物を含み、該組成物は上記のとおりＣ１４０リセプターコード核酸配列の一部に対応するアンチセンスまたは３重鎖形成分子を含む。図面の簡単な説明図１Ａ−１Ｂは、マウスのＣ１４０リセプターのＤＮＡおよび推定アミノ酸配列を示す。図２Ａ−２Ｂは、ヒトのＣ１４０リセプターのＤＮＡおよび推定アミノ酸配列を示す。図３は、ヒトのＣ１４０リセプターおよびマウスのＣ１４０リセプターのアミノ酸配列の比較を示す。図４は、推定されたアミノ酸配列に基づくＣ１４０リセプター活性化の提案されたモデルを示す。図５は、マウスのＣ１４０リセプターとヒトのトロンビンリセプターのアミノ酸配列の比較を示す。図６は、さまざまあなマウス組織におけるＣ１４０リセプターコードｍＲＮＡの存在を検出するためのノーザンブロットの結果を示す。図７は、Ｃ１４０アゴニストペプチドのインビボにおける低血圧作用を示す血圧のトレースを示す。図８ａ−８ｂは、Ｃ１４０リセプターアゴニストペプチドにより誘導されたラット大腿動脈中の血管拡張を示す。図８ｂは、内皮細胞の固定化血管除去の結果を示す。図９ａ−９ｃは、プラスミン、カリクレインまたはトリプシンによるカエル卵母細胞により発現されたＣ１４０リセプターの活性化アッセイの結果を示す。図９ａはプラスミンの結果であり、図９ｂはカリクレインの結果であり、そして図９ｃはトリプシンの結果を示す。図１０Ａ−１０Ｂは、マウスのＣ１４０リセプターをコードするｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を示す。図１１Ａ−１１Ｂは、ヒトのＣ１４０リセプターをコードするｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を示す。図１２は、マウスＣ１４０リセプターのプローブを用いた切片化された新生マウスのインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。図１３は、ヒトＣ１４０リセプタープローブにハイブリダイズさせたヒト細胞系からの全ＲＮＡのノーザンブロットを示す。発明を実施するための様式本発明により明らかにされるＣ１４０リセプターの特徴は図１Ａ／１Ｂ−４に要約される。図１Ａ−１Ｂは、マウスリセプターをコードするクローンの全ＤＮＡ配列、並びに推定アミノ酸配列を示す。本明細書において使用される「Ｃ１４０リセプター」なる用語は、実施例１に記載されるクローンＣ１４０中に含まれるマウスリセプターに相当するあらゆる動物種中のリセプターを意味する。このリセプターのマウス型をコードする天然ＤＮＡを用いることにより、ヒトを含む他の種中の対応リセプターが例示される通りに得られうる。図２Ａ−２Ｂは、ヒトリセプターの対応ＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示す。マウスリセプターの完全アミノ酸配列は３９５アミノ酸からなり、２７アミノ酸のシグナルペプチドヲ含むが該ペプチドヲの分断により３６８アミノ酸のマウスリセプター蛋白質がもたらされる。同様に、ヒトリセプターはおそらく２９アミノ酸からなるシグナルペプチドヲ配列を含む３９８アミノ酸に対応する解読枠によりコードされており、図２Ａ−２Ｂに示されるとおり３６９アミノ酸の成熟リセプター蛋白質をもたらす。図３は、ヒトとマウスのアミノ酸配列の比較を示すが、示されるとおり、これらの配列は高程度の相同性を示す。図１Ａ−１Ｂおよび図２Ａ−２Ｂに示された配列の疎水性／親水性プロットが示すことは、マウスＣ１４０リセプターが、その細胞への作用がＧ蛋白質により介される７−膜貫通ドメインリセプターファミリーのメンバーであることである。マウスＣ１４０リセプターはアスパラギン結合グリコシレーションのための幾つかのコンセンサス部位を含む相対的に長い細胞外アミノ酸伸長を有する。それは、第一膜貫通領域において保存されたアスパラギンを含み、第二膜貫通領域においてモチーフＬｅｕ−Ａｌａ−Ｘ−Ｘ−Ａｓｐを含み、第四膜貫通領域においてＴｒｐを含み、そして多数のセリンおよびスレオニン残基を含むカルボキシル末端テイルを含む。インサイチュリセプターの提案されたモデルを図４に示す。図５を参照すると、トロンビンリセプターとの類似性が容易に見て取れる。図５はマウスＣ１４０とトロンビンリセプターのアミノ酸配列を比較する。トロンビンリセプターは４１および４２位におけるＡｒｇ−Ｓｅｒ結合の蛋白質分解酵素による分断により活性化され、新たに形成されたアミノ末端を通してリセプターのリフォールディングおよび活性化を可能にする活性化ペプチドを放出することが知られている。類似の様式において、Ｃ１４０リセプターは３４および３５位のＡｒｇ−Ｓｅｒ結合の分断により活性化されて、分断部位に対する推定成熟蛋白質の１位から伸びる活性化ペプチドを放出する。Ａｒｇ−２８は成熟蛋白質のアミノ末端アミノ酸残基であると信じられ、活性化ペプチドは配列ＲＮＮＳＫＧＲを有する。このペプチドは即ち、Ｃ１４０リセプターの活性化の指標として用いることができる。何れにせよ、成熟蛋白質のＮ−末端の正確な位置は、アゴニストおよびアンタゴニストのデザインには重要でない。活性化ペプチドは腎臓により自由に濾過されるらしく、尿中で濃縮される可能性があり、そしてＣ１４０リセプターの活性化の指標として用いることができる。活性化ペプチドの放出は、リセプターを活性化するようにリセプター蛋白質がリフォールディングされることを許容する。これは図４において図解により示されるが、活性化ペプチドの放出によるコンフォメーションの変化およびリフォールディングがリセプターの細胞内のコンフォメーションの変化をもたらすことも示す。この仮説は、活性化により創造された新たなアミノ末端を模倣したペプチドによりＣ１４０リセプターが活性化されうるとの発見により確認される。したがって、活性化リセプター上の新たなアミノ末端のＮ−末端の模倣物はそのアゴニストとして振る舞う。リセプターの活性化のためのリフォールディング中の新たな創造されたアミノ末端中の最初の５アミノ酸の重要性も以下において確認された。この情報に基づくこと、並びにトリプシンに対するトリプシノーゲンによる活性化およびトロンビンリセプターの活性化を経る機構を用いた類推により、リガンドがリセプターから分断されたときに新たに露出されたセリン上の陽性荷電アミノ基がリセプターの活性化において重要な役割を果たすらしい。Ｃ１４０リセプターには結合するが遊離のＩ−アミノ基を欠くように修飾された、アゴニストペプチド配列に基づくペプチドは、このリセプターのアンタゴニストとして機能することができる。即ち、特異的活性化相互作用のための能力を欠くアゴニストペプチドの修飾物は、Ｃ１４０リセプターアンタゴニストとして働く。通常は、請求の範囲に記載されたＣ１４０リセプターおよびその類似物は、「共通」Ｃ１４０リセプター配列（図１Ａ−１Ｂまたは図２Ａ−２Ｂに示されたような配列）と少なくとも７５％のアミノ酸の同一性、より好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは少なくとも９０％そして最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。共通配列に関する同一性および相同性は、必要であれば最大のパーセント相同性を達成するために配列を並べてギャップを導き入れた後、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しなかった場合の、公知のＣ１４０リセプターと同一の候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書中で定義される。Ｃ１４０リセプター配列への、Ｎ末端、Ｃ末端または内部の伸長、欠失または挿入は相同性に影響するものとして解釈されるべきである。即ち、本発明の対象である請求の範囲に記載されたＣ１４０リセプターおよびその類似分子は、Ｃ１４０リセプターアミノ酸配列を有する分子、共通Ｃ１４０リセプター配列からの少なくとも１０、１５、２０、２５、３０または４０アミノ酸残基の連続配列を有するその断片、上記定義されたＣ１４０リセプター配列またはその断片のＮ末端またはＣまたはまたは内部にアミノ酸残基が挿入された、共通Ｃ１４０リセプター配列のアミノ酸配列変更物、他の残基により置換された上記定義された共通Ｃ１４０リセプターまたはその断片のアミノ酸配列変更物を含む。Ｃ１４０リセプターポリペプチドは、例えば相同組換え、部位特異的変異導入またはＰＣＲ変異導入により予め決定された変異を含むポリペプチド、限定されないがウサギ、ラット、マウス、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、および非ヒト霊長類種等の他の動物種のＣ１４０リセプターポリペプチド、および対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅｓ）または前記種およびヒト配列のＣ１４０リセプターの他の天然に生じる変更物、置換、化学物質、酵素または他の適切な手段により天然に生じるアミノ酸以外のモイエティ（例えば、酵素または放射性標識等の検出可能なモイエティ）で共有結合によりＣ１４０リセプターまたはその断片が修飾された共通に公知のＣ１４０リセプターまたはその断片の誘導体、Ｃ１４０リセプターのグリコシレーション変更物（適切なアミノ酸の欠失、挿入または置換によりあらゆるグリコシレーション部位の挿入または欠失）、およびＣ１４０の可溶化形態を含む。本発明の新規な蛋白質およびペプチドは、限定されないが例えば、エフェクターまたはリセプター機能または交差反応性の抗原性を含む、Ｃ１４０リセプターと共通の生物学上の活性を有する。そのような断片および変更物は、らゆる動物種のあらゆる公知の蛋白質またはポリペプチドを含むこれまでに公知のあらゆるＣ１４０リセプターポリペプチドを除外し、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１０２のもとに他に予測されず、並びに３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１０３のもとにそのような公知の蛋白質またはポリペプチドから自明なポリペプチドである。特に、本発明のＣ１４０リセプター蛋白質、類似物、断片および変更物は、他の公知のＧ蛋白質と対のリセプターであってＣ１４０リセプターではないリセプター、例えばアドレナリンリセプター、神経ペプチドリセプター、トロンビンリセプター等を除外する。本発明の化合物本発明のペプチド化合物を記載するために用いられる命名法は慣用的な習慣に従い、Ｎ末端のアミノ基を左にしてペプチド中の各アミノ酸をカルボキシル基に向けて右側にする。本発明の選択された特定の態様を表す式においては、しばしば特に示さないが、アミノ基およびカルボキシル基は、他に特記しない限り生理的ｐＨ値における形態であると認識されるはずである。即ち、生理的ｐＨにおけるＨ⁺ ₂およびＣ末端のＯ^-は必ずしも特定したり示したりはしないが特定例または一般式の何れかにおいて表されるものと理解される。アミノ酸残基の側鎖上の遊離官能基は、アミド化、アシル化または他の置換により修飾することができ、例えばそれらの活性に影響しないように化合物の可溶性を変化させうる。示されたペプチドおいては、適切な場合には、各遺伝子でコードされた残基は、アミノ酸の日常的命名法に対応する一文字標記により表され、以下の慣用的なリストに基づく。１文字と３文字遺伝子によりコードされないアミノ酸は、以下の議論中で示される略字を用いた。本発明に示される特定のペプチドにおいては、Ｄ型を短剣の記号（†）により表現される場合を除いて、光学異性体を有するあらゆるアミノ酸のＬ型を意図する。本発明の化合物は、デザインされたクラスのアミノ酸残基に関して位置部定義されたペプチドである。アミノ酸残基は、通常は以下の４つのサブクラスに分類されうる。酸性：この残基は生理的ｐＨにおけるＨイオンの損失により陰性荷電を有し、水性溶液により引き付けられることにより、含有するペプチドが生理的ｐＨにおいて水性媒体の中に存在する場合に、該ペプチドのコンフォメーション中では表面位置を求める。塩基性：この残基は生理的ｐＨにおけるＨイオンとの関連により陽性荷電を有し、水性溶液により引き付けられることにより、含有するペプチドが生理的ｐＨにおいて水性媒体の中に存在する場合に、該ペプチドのコンフォメーション中では表面位置を求める。中性／非極性：この残基は生理的ｐＨにおいて荷電されておらず水性溶液中で反発することにより、含有するペプチドが生理的ｐＨにおいて水性媒体の中に存在する場合に、該ペプチドのコンフォメーション中では内部位置を求める。これらの残基は「疎水性」とも呼ばれる。中性／極性：この残基は生理的ｐＨにおいて荷電されていないが、水性溶液中で引き付けられることにより、含有するペプチドが生理的ｐＨにおいて水性媒体の中に存在する場合に、該ペプチドのコンフォメーション中では外部位置を求める。もちろん理解されるとおり、個々の残基分子の統計上のコレクション中においては、幾つかの分子が荷電しており、そして幾つかは荷電されておらず、より大きいかまたはより小さい範囲で水性媒体からの引き付けまたは反発があるであろう。「荷電している」との定義に適合させるために、個々の分子の顕著なパーセンテージ（少なくとも約２５％）は生理的ｐＨにおいて荷電している。極性または非極性としての分類に必要な引き付けまたは反発の程度は独断的なものではなく、したがって、本発明により特別に意図されるアミノ酸は一方と他方に分類された。特別に命名されていないほとんどのアミノ酸は公知の挙動を基にして分類されうる。アミノ酸残基はさらに、環状か非環状、芳香族か非芳香族、残基の側鎖の置換基に関する自己釈明的な分類、小さいか大きいかとしてサブクラスに分類される。カルボキシル末端を含んで全部で４炭素原子またはそれ以下のみを含む残基は、小さいと判断される。もちろん、小さい残基はいつも非芳香族である。天然に生じる蛋白質のアミノ酸に関して、前記のスキムに従うサブクラス化は以下のとおりである。酸性：アスパラギン酸およびグルタミン酸；塩基性／非極性：アルギニン、リジン；塩基性／環状：ヒスチジン；中性／極性／小さい：グリシン、セリン、システイン；中性／非極性／小さい：アラニン：中性／極性／大きい／非芳香族：スレオニン、アスパラギン、グルタミン；中性／非極性／大きい／芳香族：チロシン；中性／非極性／大きい／非芳香族：バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン；中性／極性／大きい／芳香族：フェニルアラニン、およびトリプトファン技術的には中性／非極性／大きい／環状および芳香族の群に含まれるが、遺伝子によりコードされる二次アミノ酸プロリンは、ペプチド鎖の二次コンフォメーションに公知の作用を及ぼすから特別なケースであり、したがってこの定義群からは除外される。遺伝子コードによりコードされない特定の共通に遭遇するアミノ酸は、例えば、ベータ−アラニン（ベータ−Ａｌａ）または他のオメガアミノ酸、例えば３− アミノプロピオン酸、２，３−ジアミノプピオン酸（２，３−ｄｉａＰ）、４− アミノブチル酸等、アルファアミンイソブチル酸（Ａｉｂ）、ザルコシン（Ｓａｒ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ −ＢｕＡ）、ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧ）、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ −ＭｅＩｌｅ）。フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、およびシクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、システイン酸（Ｃｙａ）、２−ナフチルアラニン（２−Ｎａｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシル酸（Ｔｉｃ）、Ｊ−２−チェニルアラニン（Ｔｈｉ）、およびメチオニンスルフォキシド（ＭＳＯ）を含む。これらは、慣用的には特定のカテゴリーに含まれる。上記定義に基づき、Ｓａｒ，ベータ−Ａｌａ、２，３−ｄｉａＰおよびＡｉｂは中性／非極性／小さい；ｔ−ＢｕＡ，ｔ−ＢｕＧ，Ｎ−ＭｅＩｌｅ，Ｎｌｅ，ＭｖｌおよびＣｈａは中性／非極性／大きい／非芳香族；Ｏｒｍは塩基性／非環状；Ｃｙａは酸性；Ｃｉｔ，アセチルＬｙｓおよびＭＳＯは中性／極性／大きい／非芳香族；そしてＰｈｇ，Ｎａｌ，ＴｈｉおよびＴｉｃは中性／非極性／大きい／芳香族。さまざまなオメガアミノ酸は大きさから中性／非極性／小さい（ベータ−Ａｌａ、即ち３−アミノプロピオン酸、４−アミノブチル酸）または大きい（他の全て）に分類される。遺伝子によりコードされる他のアミノ酸置換体は本発明の範囲に含まれるペプチド化合物にも含まれ、これらの構造によりこの一般的なスキムの範囲で分類されうる。アミノ酸がＣ末端を形成する場合に本発明の化合物の全ては薬学上受容可能な塩またはエステルの形態である。塩は、例えばＮａ⁺，Ｋ⁺，Ｃａ⁺²，Ｍｇ⁺²等であり、エステルは一般的に１−６Ｃのアルコールのエステルである。本発明の全てのペプチドにおいて、ひとつまたはそれ以上のアミド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）は任意にイソステル（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）である他の結合、例えばＣＨ₂ＮＨ−，−ＣＨ₂Ｓ−，−ＣＨ₂ＣＨ₂−，−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）により置換されてよい。この置換は当業界において公知の方法により作成可能である。以下の文献はこれらの別の結合モイエティであるペプチド類字物の製造を記載する。Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，ＶｅｇａＤａｔａ（１９９３年３月），Ｖｏｌ．１，Ｉｓｓｕｅ３，「ペプチドバックボーンの修飾」（一般的な総評）；Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，「アミノ酸ペプチドおよび蛋白質の化学および生化学」の中、Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，ｅｄｓ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐ．２６７（１９８３）（一般的な総評）；Ｍｏｒｌｅｙ，Ｊ．Ｓ．，ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍＳｃｉ（１９８０）ｐｐ．４６３−４６８（一般的な総評）；Ｈｕｄｓｏｎ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＰｅｐｔＰｒｏｔＲｅｓ（１９７９）１４：１７７−１８５（−ＣＨ₂ ＮＨ−，−ＣＨ₂ＣＨ₂−）；Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＬｉｆｅＳｃｉ（１９８６）３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ₂−Ｓ−），Ｈａｎｎ，Ｍ．Ｍ．，ＪＣｈｅｍＳｏｃＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓＩ（１９８２）３０７−３１４（−ＣＨ−ＣＨ−，シスおよびトランス）；Ａｌｍｑｕｉｓｔ，Ｒ．Ｇ．，ｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ（１９８０）２３：１３９２−１３９８（−ＣＯＣＨ₂−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ（１９８２）２３：２５３３（ −ＣＯＣＨ₂−）；Ｓｚｅｌｋｅ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，欧州出願ＥＰ４５６６５（１９８２）ＣＡ：９７：３９４０５（１９８２）（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂− ）；Ｈｏｌｌａｄａｙ，Ｍ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ（１９８３）２４：４４０１−４４０４（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ₂−）；およびＨｒｕｂｙ，Ｖ．Ｊ．，ＬｉｆｅＳｃｉ（１９８２）３１：１８９−１９９（−ＣＨ₂−Ｓ−）。Ａ．アゴニスト本発明のアゴニストは式：ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−Ｚ（１）（式中、ＡＡ₁は小さいアミノ酸またはスレオニンであり；ＡＡ₂およびＡＡ₃はそれぞれ別個に中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₄は小さいアミノ酸であり；ＡＡ₅は塩基性アミノ酸であり；ＡＡ₆は存在してもしなくてもよく、存在する場合には中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₇はＡＡ₆が存在しない場合には存在せずＡＡ₆が存在する場合には存在してもしなくてもよく、酸性アミノ酸であり；そしてＺはアゴニストの活性を干渉しない置換体である）を有する一連のペプチドからなる。式１のペプチドは非干渉置換体からなるアミノ酸配列（Ｚに含まれるように示される）をさらにＣ末端に（Ｎ末端ではなく）連結することにより伸長することができる。式１の化合物のＣ末端において、カルボキシル基は非誘導化型の中にあるかまたはアミド化されているかまたはエステルであり、非誘導化形態の場合には、カルボキシルは遊離の酸であるかまたは塩であり、好ましくは薬学上受容可能な塩である。Ｃ末端がアミド化されているならば、Ｃ末端においてカルボニルの炭素に共有結合したアミノ基の窒素原子はＮＲ’Ｒ’であり、式中各Ｒ’は個別に水素または１−６Ｃの直鎖または分枝鎖アルキルであり、そのようなアルキルは１−６Ｃの直鎖または分枝鎖で飽和されたヒドロカルビル残基、例えばメチル、エチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル等である。そのようなアミノ基の代表は、とりわけ −ＮＨ₂，−ＮＨＣＨ₃，−Ｎ（ＣＨ₃）₂，−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃，−ＮＨＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂および−ＮＨＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃である。さらに、何れかまたは両方のＲ’は任意にひとつまたはそれ以上の置換基、例えば−ＯＲ’，− ＮＲ’Ｒ’，ハロ、−ＮＲ’ＣＮＲ’ＮＲ’Ｒ’等により置換されてよいが、式中、各Ｒ’は別個に上記のとおりに定義される。即ち、Ｚは−ＯＨであるかまたはエステル（ＯＲ’）であるかまたはそれらの塩であるかまたは−ＮＲ’Ｒ’であり、Ｒ’は上記定義のとおりである。ＡＡ₁の好ましい態様は、２，３−ジアミノプロピオニル（２，３−ｄｉａＰ）上のＳｅｒである。ＡＡ₂およびＡＡ₃の好ましい態様はＶａｌ，Ｉｌｅ，ＣｈａおよびＬｅｕである。式（１）の化合物の残りの残基に関する好ましい態様は、ＡＡ₄がＧｌｙであり、ＡＡ₅がＬｙｓ，ＡｒｇまたはＨａｒであり、もし存在するならばＡＡ₆はＶａｌ，Ｉｌｅ，ＣｈａまたはＩｌｅであり、そしてもし存在するならばＡＡ₇はＡｓｐまたはＧｌｕである化合物である。特に好ましいのは、ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰＩＴ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰＩ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱ，ＳＬＩＧＲＬＥＴ，ＳＬＩＧＲＬＥ，ＳＬＩＧＲＬ，ＳＬＩＧＲ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨＶＴ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨＶ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴ，ＳＬＬＧＫＶＤＧ，ＳＬＬＧＫＶＤ，ＳＬＬＧＫＶ，ＳＬＬＧＫ，Ｓ（Ｃｈａ）ＩＧＲ，Ｓ（Ｃｈａ）ＬＧＫ，（２，３−ｄｉａＰ）−ＩＧＲ，（２，３−ｄｉａＰ）ＬＬＧＫ，ＳＬＬＧＫＲ−ＮＨ₂，ＳＬＩＧＲＲ−ＮＨ₂，Ｓ（Ｃｈａ）ＬＧＫＫ−ＮＨ₂，Ｓ（Ｃｈａ）ＩＧＲＫ−ＮＨ₂，（２，３−ｄｉａＰ）−ＬＩＧＲＫ−ＮＨ₂，（２，３−ｄｉａＰ）−ＬＬＧＬＬ−ＮＨ₂およびそれらのアミド化形態からなる群から選択される式（１）の化合物である。Ｂ．アンタゴニストＣ１４０リセプターにより介される活性を干渉する本発明の化合物は、Ｎ末端のセリン残基を欠く修飾されたアゴニストペプチド、およびＣ１４０リセプター上のさまざまな決定的な位置と免疫反応性である抗体を含む。ペプチドアンタゴニスト大位置群のアンタゴニスト−−修飾アゴニストは式：Ｘ−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−Ｚ（式中、Ｘはｓｅｒ，ａｌａ，ｔｈｒ，ｃｙｓ，２，３−ｄｉａＰまたはｇｌｙ意か儀のアミノ酸残基であるかまたはデスアミノまたはアルキル化またはアシル化アミノ酸であり；ＡＡ₂およびＡＡ₃は各々個別に中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₄は小さいアミノ酸であり；ＡＡ₅は塩基性アミノ酸であり；ＡＡ₆は存在しても存在しなくてもよく、存在するならば中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₇はＡＡ₆が存在しない場合には存在せず、ＡＡ₆が存在してもＡＡ₇ は存在しても存在しなくてもよく、酸性アミノ酸であり；そしてＺはアゴニストの活性を干渉しない置換基である）により表される。好ましいアシル基は式ＲＣＯ−であって、式中Ｒは１−６Ｃの直鎖または分枝鎖アルキルである。アセチルは特に好ましい。Ｘの好ましい態様は、３−メルカプトプロピオン酸（Ｍｐｒ）、３−メルカプトバレリアン酸（Ｍｖｌ）、２−メルカプトベンゼン酸（Ｍｂａ）およびＳ−メチル−３−メルカプトプロピオン酸（ＳＭｅＭｐｒ）の残基を含む。ＡＡ₂からＡＡ₇までの好ましい態様はアゴニストに関して前に記載されたとおりであり、Ｚも即ち記載されたとおりである。このクラスのアンタゴニストペプチドのうち特に好ましいのは、Ｍｐｒ−ＬＬＧＫ，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲ，Ｍｐｒ−（Ｃｈａ）ＬＫＧ，Ｍｐｒ−（Ｃｈａ）ＩＧＲ，Ｍｐｒ−ＬＬＧＫＫ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲＫ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲＫＥＴＱＰ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＬＧＫＫＤＧＴＳ−ＮＨ₂，（ｎ−ペンチル）₂ −Ｎ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂および（Ｍｅ−Ｎ−（ｎ−ペンチル）−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂からなる群から選択される。抗体Ｃ１４０リセプターの決定的部分と免疫反応性の抗体であるアンタゴニストは、該抗体により標的とされることを意図されたＣ１４０リセプターの上記決定的部分を抗原性領域として含むペプチドで適切な哺乳動物対象物を免疫することにより得られる。決定的領域は、蛋白質分解酵素の分断領域、活性化に決定的な細胞外セグメントのセグメント（これは分断部位を含む）、および細胞外ループを形成する配列部分、特に活性化されたリセプターの細胞外領域のＮ末端と相互作用する領域を含む。本発明のアゴニストペプチドはこの場合免疫源として用いられる。即ち、蛋白質分解酵素の分断領域、即ち、例えばＳＫＧＲＳＬＩＧＲＬＥＴ、細胞外ループ、例えばＩＳＹＨＬＨＧＮＮＷＶＹＧＥＡＬＣ；ＱＴＩＹＩＰＡＬＮＩＴＴＣＨＤＶＬＰＥＥＶＬＶＧＤＭＦＮＹＦＬ；およびＨＹＦＬＩＫＴＱＲＱＳＨＶＹＡを含むペプチドである。以下に記載されるアゴニストペプチドは免疫源としても有用である。抗体は、ペプチドハプテンが十分に長ければペプチドハプテンのみを用いて適切な免疫プロトコルにより適切な哺乳動物宿主を免疫するか、または所望であるかまたは免疫源性を高める必要があれば適切なキャリアーと複合させて調製される。キャリアー、例えばＢＳＡ，ＫＬＨまたは他のキャリアー蛋白質を含む免疫源複合体を調製する方法は当業界において公知である。幾つかの状況において、例えば、カルボジイミド試薬を用いた直接の複合体化は効果的であり、他の例としては、結合試薬、例えばＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌ社により提供される試薬を用いてハプテンに接近可能性を提供することが望まれる。ハプテンペプチドはＣｙｓ残基でアミノまたはカルボキシル末端を伸長するかまたはシステイン残基をところどころに散りばめることができ、それにより例えばキャリアーへの結合を促進する。免疫源の投与は適切な時間間隔で適当なアジュバンドを用いて注射により実施されるのが一般的であり、当業界においてはよく知られている。免疫スケジュールの間、抗体の力価を測定して抗体の形成が十分であることを知る。この方法により生成したポリクローナル抗体は幾つかの応用を満たすが、薬剤組成物のためには、モノクローナル抗体に使用が好ましい。所望の抗体を分泌する免疫細胞系は、ケラーとミルスタインの標準法または一般的に知られているリンパ球または脾臓細胞の固定化をもたらす修飾法を用いて調製される。所望の抗体を分泌する固定化細胞系は、抗原がペプチドハプテンまたは組換え宿主細胞上で発現されるＣ１４０リセプター自身である免疫アッセイによりスクリーンされる。所望の抗体を分泌する固定化細胞培養物を同定した場合は、細胞はインビトロまたは腹水中の生成の何れかにより培養されうる。所望のモノクローナル抗体は、次に培養物の上清または腹水の上清から回収される。免疫上顕著な部分を含むモノクローナル抗体またはポリクローナル血清の断片は、アンタゴニストとして、並びに完全な抗体として用いることができる。免疫上反応性の断片、例えばＦａｂ，Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）₂断片の使用がしばしば好ましく、本質的に治療用コンテクスト（ｃｏｎｔｅｘｔ）においては、３つの断片は完全免疫グロブリンよりも免疫源性が低い。抗体または断片は、現在の技術を用いて組換え手段により生成してもよい。リセプターの所望の領域に特異的に結合する領域は複数種起源のキメラのコンテクスト中に生成することもできる。そのようにして生成された抗体は、本発明のアッセイにおいてアンタゴニストの役割を満たす、リセプターに関して可能性のあるアンタゴニストであるばかりでなく、活性化リセプターの検出のための免疫アッセイにも有用である。そのようにこれらの抗体は対象に投与される造影剤にカップリングされて、局限された抗体の検出により、活性化または非活性化形態の何れかにおいてＣ１４０リセプターの位置を確かめることを可能にする。さらに、これらの試薬は、例えば組換え宿主細胞の表面に配置されたＣ１４０リセプターの首尾よい生成をインビトロにおいて検出するのに有用である。ペプチドアゴニストおよびアンタゴニストの調製本発明のペプチドアゴニストおよびアンタゴニストは、当業界において公知のとおり、標準固相（または液相）ペプチド合成法を用いて調製されうる。さらに、これらのペプチドをコードするＤＮＡは市販のオリゴヌクレオチド合成装置を用いて合成して標準組換え生成系を用いて組換えにより生成される。固相ペプチド系を用いる生成は、非遺伝子コードアミノ酸が含まれる場合に必要である。Ｃ１４０リセプターの核酸の調製Ｃ１４０リセプターの「核酸」は、Ｃ１４０リセプターをコードするか、またはＣ１４０リセプターをコードする核酸に相補性であるか、またはそのような核酸にハイブリダイズするＲＮＡまたはＤＮＡとして定義され、ストリンジェントな条件においては安定に結合したまま残るか、あまたは図３、１０Ａ−１０Ｂまたは１１Ａ−１１Ｂに示される翻訳されたアミノ酸配列と少なくとも７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、そしてより好ましくは少なくとも８５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。典型的には、少なくとも約１０ヌクレオチドの長さであり、そして生物活性または免疫活性を有するＣ１４０リセプターが好ましく、図４に示されるヌクレオチド配列を有する活性化ペプチドをコードする核酸を含む。特に意図されるのは、ゲノミックのＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびアンチセンス分子、並びに天然源または合成に由来する変更可能なバックボーンまたは変更可能な塩基を含む核酸である。そのようなハイブリダイズする核酸または相補性の核酸は、しかしながら、ストリンジェントな条件下で公知のＧ蛋白質と対のリセプターをコードするかまたはハイブリダイズする従来技術の核酸、または公知のＧ蛋白質と対のリセプターをコードする核酸に相補性の従来技術の核酸からは新規且つ自明なものとしてさらに定義される。「ストリンジェントな条件」は、（１）洗浄のための低イオン強度並びに高温を採用し、例えば０．０１５ＭＮａＣｌ／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ＮａＤｏｄＳＯ₄を５０℃において用いるか、または（２）ハイブリダイゼーションの間変性剤、例えばホルムアミドを用い、例えば５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．５）並びに７５０ｍＭＮａＣｌ，７５ｍＭクエン酸ナトリウムを４２℃において用いる。他の例は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭＮａＣｌ，０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、および１０％硫酸デキストランを４２℃において用い、０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中において４２℃において洗浄する。「単離した」核酸は、同定され、且つ核酸の源からの他のポリペプチドをコードする汚染核酸から分離された核酸であろう。核酸は、公知であって診断アッセイに関連して有用なものとして当業界において記載されたあらゆる標識法を用いて診断目的および調査目的で標識されてよい。特に興味があるのは、必要ではないが天然のシグナル配列を含む完全長の分子をコードするＣ１４０リセプターの核酸である。完全長の蛋白質をコードする核酸は、最初に本明細書に開示された推定アミノ酸配列を用い、そして必要であればその５’末端が完全なＤＮＡを手に入れるための慣用的プライマー伸長法を用いて、選択されたｃＤＮＡ（腎臓ではなく）またはゲノミックライブラリーをスクリーニングすることにより得られる。そのようなクローンは、基の配列の解読枠内の開始コドンの存在により容易に同定される。Ｃリセプターのアミノ酸配列変更物をコードするＤＮＡは、以下の記載のとおりに、あるいは当業界において公知のさまざまな方法により調製される。これらの方法は、限定されないが、天然源からの単離（天然に生じるアミノ酸変更物の場合）、またはＣ１４０リセプターの以前に調製された変更物または非変更物のオリゴヌクレオチド介在（または部位特異的）変異導入、ＰＣＲ変異導入、およびカセット変異導入による調製を含む。核酸を単離して操作する技術は以下の刊行物に例示として開示されている：米国特許第５，０３０，５７６号および国際特許公開ＷＯ９４／１１５０４号およびＷＯ９３／０３１６２号。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９，およびＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔａｌ．ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７。これら刊行物の開示のすべては引用により本明細書の一部をなす。アッセイに使用するためのＣ１４０リセプターの組換えによる生成本発明は、組換え細胞上において発現されるＣ１４０リセプターの生成のための組換え体材料を提供する。これらの組換え法を用いたリセプターの生成は、候補の薬剤がＣ１４０リセプターに結合するか、該リセプターを活性化するかまたは該リセプターと拮抗する能力を測定するために有用な試薬を提供する。これらの特性の測定は、他の関連リセプターの結合を意図する薬剤の特異性を評価する場合に必須である。この組換え生成のために、図１Ａ−１Ｂおよび２Ａ−２Ｂに示したようなＣ１４０リセプターのＤＮＡ配列、それらの実質的な均等物またはそれらの縮重類似物を、以下のとおりに天然配列の検索によるか、または公知の天然配列の実質的な部分をプローブとして用いるかの何れかにより調製され、或いは標準法を用いてデノボにおいて合成されうる。該ＤＮＡは、所望の宿主に適切な発現ベクターに連結されて、適合可能な細胞中に形質転換される。細胞は、Ｃ１４０リセプターコーディング遺伝子の発現をもたらす条件下で培養されて、その表面上にリセプターを発現する細胞をアッセイに使用するために回収する。宿主細胞は典型的には動物細胞であり、もっとも好ましくは哺乳動物細胞である。アッセイにおいて有用となすためには、細胞は図４において一般的に示す構造で細胞表面上においてリセプターが発現されるような細胞内機構を有さねばならない。そのアッセイが検出系として活性化されたリセプターに対する細胞応答を用いるならば、細胞はリセプターの活性化に対する応答のためのＧ蛋白質連動機構も含まねばならない。ほとんどの哺乳動物および他の動物細胞はこれらの資格を満たす。本発明の方法において使用されるために特に有用な細胞はゼノパスレビスのカエル卵母細胞であり、所望の蛋白質をコードするＤＮＡからの標準組換え発現系の方法よりむしろ、典型的にはｃＲＮＡを利用する。キャップを有するＲＮＡ（５’末端において）は、典型的にはリセプターコーディングＤＮＡ配列を含む直鎖状ベクターから生成される。反応は、ＲＮＡポリメラーゼおよび標準試薬を用いて実施される。ｃＲＮＡを回収して、典型的にはエタノールを用いたフェノール／クロロホルム沈殿を用いて、卵母細胞に注入する。Ｃ１４０リセプターコーディングＤＮＡを発現する動物宿主細胞およびｃＲＮＡ注入卵母細胞を次に培養して、コーディング核酸配列の発現をもたらすことにより、図４に示すのと類似の様式において表面上に発現させたＣ１４０リセプターを生成する。次にこれらの細胞は、候補の薬剤のリセプターへの結合、拮抗または活性化の評価のためのアッセイにおいて直接使用される。アッセイ容易に実施可能な１種類のアッセイにおいて、アゴニストまたは公知の結合アンタゴニストの何れかとリセプターの結合に関して候補の薬剤の競合を試験することができる。ひとつの方法において、競合アゴニストまたはアンタゴニストは標識されていてよく、リセプターに結合することが知られている標識物質は、もちろん合成ペプチドでありうる。一つの典型的なプロトコルにおいて、候補の濃度の変更を一定濃度の標識アゴニストまたはアンタゴニストと共に供給して、公知技術を用いて、リセプターへの標識の結合阻害を評価できる。いくらか洗練されたアプローチにおいては、アゴニストにより誘導される応答への候補化合物の作用は、以下に記載されるとおりにしてＣ１４０リセプターを組換え発現する細胞内で測定することができる。これら細胞へのリセプターの活性化の作用に関するアッセイ系は、本明細書においてさらに詳細に記載されるカルシウム流動および電圧クランプを含む。これらのアッセイにより、リセプターへの単なる結合能力よりむしろリセプター活性に対する候補薬剤の作用の評価を可能にする。Ｃ１４０リセプターコードｃＲＮＡを発現する卵母細胞または他のＣ１４０リセプター生成組換え細胞による⁴⁵Ｃａ放出のアゴニストの誘導による増加は、公表された技術により評価される（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ（１９８８）８５：４９３９− ４９４３）。簡単に言えば、５０ＴＣｉ⁴⁵ＣａＣｌ₂（１０−４０ｍＣｉ／ｍｇＣａ；アムステルダム）を含む３００Ｔｌカルシウム不含修飾バース（Ｂａｒｔｈ'ｓ）溶液（ＭＢＳＨ）中において４時間室温で３０卵母細胞群をインキュベートすることにより、細胞内のカルシウムのプールを標識する。標識された卵母細胞または細胞を洗浄して、次に抗体を含まないＭＢＳＨＩＩ中で９０分間インキュベートする。５卵母細胞の群を選択して、抗体を含まない０．５ｍｌ／ウエルのＭＢＳＨＩＩを含む２４ウエルの組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ３０４７）中の個々のウエルに入れる。１０分ごとに、この溶媒を除去して新鮮な溶媒に置き換え、回収された溶媒をシンチレーションカウンティングにより分析して、各１０分間の間の卵母細胞による⁴⁵Ｃａの放出を測定する。１０分間のインキュベートは、ユニット時間あたりの⁴⁵Ｃａ放出の安定なベースラインに達するまで続ける。さらなる２つの１０分間回収物を得て、次にアゴニストを含む溶媒を加えて、アゴニストにより誘導された⁴⁵Ｃａ放出を測定する。上記アッセイを用いることにより、候補の薬剤がリセプターを活性化する能力を直接試験することができる。この場合、本発明のアゴニストを対照として用いる。さらに、組換えリセプターを活性化する本発明のアゴニストを用いることにより、この活性化に対する候補薬剤の作用を直接試験することができる。該リセプターをコードする核酸を発現する組換え細胞を、アゴニストの存在下で候補化合物の存在下または不在下でアッセイにおいてインキュベートする。候補の存在下における活性化の減少はアンタゴニスト作用を示唆する。逆に、本発明のアンタゴニストの拮抗作用を逆転させるような候補薬剤の能力も試験される。カルシウム流動を測定する別法においては、電圧クランプアッセイをリセプター活性化の指標として用いることができる。アゴニストにより誘導された内部への塩素の流れは、本質的にはｃＲＮＡをコードするＣ１４０リセプターを発現する電圧クランプされた卵母細胞またはＤＮＡ発現細胞中において、以前に記載された（Ｊｕｌｉｕｓ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８）２４１：５５８−５６３）組換え発現系から測定されるが、但し単一電極電圧クランプ技術を用いる。活性化されたリセプターの検出一つの態様において、組換えＣ１４０リセプター蛋白質の能力により、インビボにおいて活性化されたリセプターを診断造影するのに使用されうる活性化形態のリセプターに対して免疫特異性である抗体の生成を可能にする。これらの抗体は、組換えにより生成された活性化形態のリセプターまたは本明細書において記載された「新規アミノ末端」ペプチドを表すペプチドの何れかに対して生成される。その結果得られる抗体、またはそれらの免疫特異的断片、例えばＦａｂ，Ｆａｂ’，Ｆａｂ’₂断片を、次に公知技術により検出される標識に結合させるが、標識は例えばテクネチウム⁹⁹およびインジウム¹¹¹または当業界において公知の他の放射性標識を含む放射性標識である。インビボにおいて注入する場合、これらの抗体は活性化されたリセプターの部位に進み、即ち活性化されたリセプターを含むエリアの位置を決定することを可能にする。他の態様において、体液中または培養溶媒中の活性化ペプチドの存在が検出および測定されうる。上記のとおりに活性化ペプチドに対する抗体を作成して、標準ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡアッセイにおいて用いることにより、例えば尿中の活性化ペプチドの過剰量を検出することができる。薬剤としてのアゴニストおよびアンタゴニストの投与アゴニストとしてふるまう本発明のペプチドは、当業界において公知の系統化された投与法のための慣用的製剤に含ませて投与される。典型的なそのような製剤は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，ＥａｓｔｏｎＰＡ，最終版に見いだされる。ペプチドの系統化投与の好ましい形態は注射であり、典型的には静脈注射である。他の注射ルート、例えば皮下、筋肉内、または腹腔内も使用できる。ごく最近、ペプチドの系統化投与の別の手段が工夫され、浸透剤、例えば胆汁酸塩またはフシジン酸または他の洗浄剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ）を用いた経粘膜および経皮投与を含む。さらに、腸内で正確に製剤化されるかまたは封入により製剤化するならば、経口投与も使用可能である。これら化合物の投与は局所および／または局在であって、軟膏、ペースト、ゲル等の形態であってよい。必要な投薬量は、ペプチドの選択、投与のルート、製剤の性質、患者の症状の性質、および治療する外科医の判断に依存する。適切な投与の範囲は、しかしながら、対照の体重ｋｇあたり０．１−１００Ｔｇの範囲である。必要な投与の広範囲の変化は、しかしながら、利用可能なペプチドのバライエティおよびさまざまな投与ルートの効率の違いに関しては期待されるべきである。例えば、経口投与は静脈注射による投与よりも高い投薬量を必要とすることが期待されるはずである。これらの投薬量レベルの変化は、当業界において公知のとおり最適化のための標準の経験ルートを用いて調節されうる。以下に示されるとおり、本発明のアゴニストは抗高血圧症薬として振る舞い、アンタゴニストは逆の作用を有する。即ち、血圧を上げるかまたは下げる必要のある患者は、適切なペプチドの投与により利益を得る。さらに、アゴニストは抗炎症作用を有し、癒合特性を有するはずである。アンチセンス、３重鎖および遺伝子治療の側面細胞内におけるアンチセンスＲＮＡの構成的発現が哺乳動物および植物における約２０の異なる遺伝子の発現を阻害することが示され、そしてそのリストは膨らみ続ける（Ｈａｒｂｏｒ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８：１２３７−１２４５（１９８８）；Ｈｏｌｔ，Ｊ．Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８３：４７９４−４７９８（１９８６）；Ｉｚａｎｔ，Ｊ．Ｇ．ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ３６：１００７−１０１５（１９８４）；Ｉｚａｎｔ，Ｊ．Ｇ．ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：３４５−３５２（１９８５）およびＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｉ，Ａｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６５８−６６２（１９８７））。アンチセンス作用の起こり得る機構は、翻訳のブロックまたはスプライシングの妨害であり、両者はインビトロにおいて観察され、スプライシングの干渉はイントロン配列の使用を許容するが（Ｍｕｎｒｏｅ，Ｓ．Ｈ．，ＥＭＢＯ．Ｊ．７：２５２３−２５３２（１９８８））、イントロン配列はあまり保存されておらず、したがって、一つの種の蛋白質の発現を阻害する大きな特異性をもたらすが他の種の類似物は阻害しない。治療用遺伝子制御は、ＤＮＡ、好ましくは特定の標的遺伝子の発現を阻害するのに特異的に作用するアンチセンスＲＮＡをコードするオリゴヌクレオチドのトランスヘクションにより細胞内または生物内の標的遺伝子の機能がブロックされるような「アンチセンス」のアプローチを用いて達成される。アンチセンスＤＮＡの配列は、阻害を意図する遺伝子またはｍＲＮＡのセグメントに実質的に相補的な完全または好ましくは部分アンチセンスＲＮＡ転写物をもたらすようにデザインされる。作用がスプライシングのレベルか転写のレベルかまたは翻訳のレベルであるか否かに拘わらず、アンチセンスＲＮＡが標的遺伝子（またはｍＲＮＡ）にハイブリダイズできて標的遺伝子の機能を阻害できるように、相補性は十分でなければならない。阻害の程度は、過度な実験を要さずに当業者には容易に識別でき、標的遺伝子を阻害するかまたは細胞の発現を阻害するのに十分でなければならない。当業者には認識されるとおり、アンチセンスＲＮＡのアプローチは特定の遺伝子の発現をブロックするために用いられうる幾つもの公知技術の一つにすぎない。用語「アンチセンス」はＲＮＡ配列並びにそれをコードするＤＮＡ配列を意図し、ｍＲＮＡの翻訳が阻害されるようにアンチセンスＲＮＡとｍＲＮＡの間の分子ハイブリダイゼーションを引き起こすのに特異的なアンチセンスＲＮＡであるように特定のｍＲＮＡ分子に十分に相補的である。そのようなハイブリダイゼーションは、インビボ条件下、即ち細胞内部で起こらねばならない。アンチセンスＲＮＡの作用は細胞内の遺伝子発現の特定の阻害をもたらす。（Ａｌｂｅｒｓ，Ｂ．ｅｔａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹＯＦＴＨＥＣＥＬＬ，第２版、ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（１９８９），特に１９５−１９６頁を参照されたい。）本発明のアンチセンスＲＮＡは、コーディング配列、３’または５’非翻訳領域または他のイントロン配列を含む標的ｍＲＮＡの任意の幾つかの部分にハイブリダイズする。好ましいアンチセンスＲＮＡはヒトＣ１４０リセプターのｍＲＮＡに相補的なものである。当業者には容易に識別されるとおり、本発明により必要とされる相同性の最小量は、特定の標的ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションをもたらし且つその翻訳または機能の阻害をもたらすが、他のｍＲＮＡ分子の機能および他の遺伝子の発現には影響しないのに十分な量である。アンチセンスＲＮＡは、プロモーターを含む適切な制御配列と共にアンチセンスＲＮＡをコードするＤＮＡを含むベクターで形質転換またはトランスフェクトすることにより細胞に到達して、宿主細胞内でのアンチセンスＲＮＡの発現をもたらす。「３重鎖」または「トリプレックス」のアプローチは、共に直鎖状のトリプレックスを形成するように２重鎖のＤＮＡの主要な溝部分に結合する合成オリゴヌクレオチドの生成を含む。そのようなトリプレックス形成は細胞の成長を制御および阻害することができる。例えば、Ｈｏｇａｎｅｔａｌ．，米国特許第５，１７６，９９６号；Ｃｏｈｅｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ａｍｃｒ．，１９９４年１２月、ｐ．７６−８２；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．，ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ６：５６９−５８４（１９９１）；ＭａｈｅｒＩＩＩ，Ｌ．Ｊ．ｅｔａｌ．，ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＲｅｓ．Ｄｃｖｅｌ．１：２２７−２８１（１９９１秋）；Ｃｏｏｋ，Ｓ．Ｔ．ｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＡＮＴＩＳＥＮＮＳＥＲＥＳＥＡＲＣＨＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，ＣＲＣｐｒｅｓｓ，１９９３を参照されたい。一部には、ＤＮＡオリゴヌクレオチドがトリプレックス形成により遺伝子制御領域内の２重鎖ＤＮＡ標的に結合でき、それにより転写の開始を抑圧するとの発見に基づく（Ｃｏｏｎｅｙ，Ｍ．ｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｃｎｃｅ２４１：４５６）。本発明は、Ｈｏｇａｎら（前記）（全開示を引用により編入する）のような方法を利用することにより、２重鎖ＤＮＡ標的に強く且つ特異的に結合するであってＣ１４０リセプターコーディングＤＮＡまたはその制御配列の一部からなるオリゴヌクレオチドをデザインする。そのようなトリプレックスオリゴヌクレオチドは、したがって、この遺伝子の発現を選択的に操作するためのあるクラスの薬剤分子として使用されうる。即ち、本発明は、オリゴヌクレオチドがＤＮＡ２重鎖に結合して共に直鎖状のトリプレックスを形成するように、標的Ｃ１４０リセプターコーディングＤＮＡ配列またはその制御配列のＤＮＡ２重鎖に結合する、細胞取り込みに十分な量の合成オリゴヌクレオチドを細胞に提供するかまたは対象に投与することに向けられる。この方法を用いることにより、インビトロまたはインビボにおいて細胞上のリセプターの発現を阻害する。好ましくは、標的配列をＲＮＡの転写開始部位に隣接したＤＮＡドメイン内に配置する。この方法を用いることにより、このリセプターの発現に依存した細胞成長を阻害することもできる。この方法を用いて、そのようなトリプレックス形成合成オリゴヌクレオチドを投与することにより、細胞または組織上で発現されるＣ１４０リセプターの相対量および比を変えてもよい。以下の実施例は本発明の例示であって本発明を限定することを意図しない。実施例１マウスＣ１４０リセプターをコードする遺伝子の単離Ｒ．Ａ．Ｗｅｔｓｅｌ博士、ワシントン医大、セントルイス、ミズーリから供与され、Ｗｅｔｓｅｌ，Ｒ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ（１９９０）２６５：２４３５−２４４０に記載された）マウスコスミッドゲノミックライブラリーを、ウシサブスタンスＫリセプターｃＤＮＡのそれぞれ塩基番号１９０−２４９および７４２−８０１に対応する２つの³²Ｐ標識オリゴヌクレオチドでスクリーニングした（Ｍａｓｕ，Ｙ．ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８７）３２９：８３６−８３８）。ハイブリダイゼーションの条件は５×ＳＳＣ、５×デンハルト、０．１％ＳＤＳ、０．１ｍｇ／ｍｌ精子ＤＮＡ、１０⁶ｃｐｍ／ｍｌの標識オリゴヌクレオチド、６０℃一晩であり、１×ＳＤＳ、０．１％ＳＤＳを用いて６０℃において洗浄した。単離されたクローンの一つ（Ｃ１４０）において、ハイブリダイズする領域は３．７ｋｂのＰｓｔＩ断片中に位置した。この断片を市販のｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターにサブクローン化した。ハイブリダイズし且つ隣接する領域はサンガーのチェインターミネーション法により両方向から配列決定した。図１Ａ−１Ｂは両者のヌクレオチド配列および推定されるＣ１４０リセプターのアミノ酸配列を示す。仮のシグナル配列（ＳＰ）および７つの膜貫通領域は下線が引いてあり、可能性のあるアスパラギン結合グリコシレーション部位は太い矢印でマークしてあり、そしてＡｒｇ３４−Ｓｅｒ３５の仮想プロテアーゼリセプター分断部位は白の矢印でマークしてある。実施例２ヒトＣ１４０リセプターをコードする遺伝子の単離マウスプロテアーゼＣ１４０リセプターをコードするゲノミックＤＮＡの利用性は対応するヒト遺伝子の検索を可能にする。マウスクローンの完全コーディング領域をプローブとして用いて実施例１と全く同じ条件で、ベクターＥＭＢＬ３中にクローン化されたヒトゲノミックライブラリーをスクリーニングした。ＤＮＡ配列を含む回収されたヒト遺伝子および推定されるアミノ酸配列を図２Ａ−２Ｂに示す。次の実験から、ヒトＣ１４０遺伝子は、ヒトトロンビンリセプター遺伝子に関して報告されたとおり、染色体番号５の長腕の同じ領域（５ｑ１２−５ｑ１３）に位置した。さらに、ヒトＣ１４０リセプター蛋白質コーディング領域の３５０ヌクレオチドに及ぶ断片を生じるプライマー対でＰＣＲ陽性であったとおり、１．１ｋｂのゲノミックＤＮＡ断片をＧｅｎｏｍｅＳｙｓｔｅｍｓ社の商業スクリーニングサービスから得た。１．１ｋｂのＢａｍＨＩ断片をサブクローン化して配列決定したところ８００ヌクレオチドのプロモーター配列を含むことを見いだした。このプロモーターはＴＡＴＡボックスおよびＣＡＡＴボックスの両者を欠くがＧおよびＣが豊富であり、この特徴は多くのハウスキーピング遺伝子のプロモーターに共通である。ＳＰ１およびＡＰ２に特異的な２つの結合要素が同定された。実施例３関連するＧ蛋白質リセプターの比較図３に示すとおり、ヒトプロテアーゼＣ１４０リセプターの推定されるアミノ酸配列は、マウス配列に対して広い類似性（＞９０％）を示す。図５は、マウスＣ１４０リセプターと関連するＧ蛋白質リセプターであるヒトトロンビンリセプター（Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｓ．Ｃｅｌｌ）の間のアミノ酸配列の並びを示す。仮のシグナル配列（ＳＰ）、膜貫通領域およびプロテアーゼ分断部位をマークする。実施例４マウスＣ１４０のｃＤＮＡの回収マウスの腹部からのｃＤＮＡライブラリーをＳｇｔ１０内で構築してＣ１４０ゲノミックＤＮＡを包含するプローブでスクリーニングした。単一のファージクローンを単離してＥｃｏＲＩで切断した。内容物はｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔおよびｐＳＧ５にクローン化して配列決定した。単離されたｃＤＮＡは２７３２ヌクレオチドの長さであり、１６塩基のポリＡストレッチを含んだ。５’ＲＡＣＥにより５’末端へのたった２７塩基の付加がもたらされた。見かけ上のコーディング領域の５’末端はゲノミックＤの解読枠の５’末端とは異なり、該ｃＤＮＡの５’末端は正確であると信じられる。Ｃ１４０をコードするマウスのｃＤＮＡの完全ヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を図１０Ａ−１０Ｂに示す。実施例５Ｃ１４０をコードするヒトｃＤＮＡの回収ヒト腸腫瘍ｃＤＮＡライブラリーを、実施例２のゲノミッククローンからデザインされたプライマーを用いたＰＣＲに供し、増幅された断片をｐＳＧ５にクローン化して配列決定した。ヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を図１１Ａ −１１Ｂに示す。図１１Ａ−１１Ｂに示すとおり、配列によりコードされるｃＤＮＡとゲノミックＤＮＡによりコードされる配列との間には４アミノ酸の相違がある。実施例６卵母細胞内のプロテアーゼＣ１４０リセプターの活性化天然Ｃ１４０リセプターおよび変異Ｃ１４０リセプターの両者を卵母細胞中で生成して新たなアミノ末端を模倣したペプチドを用いるか、または蛋白質分解酵素トリプシン（細胞外領域を分断する）により活性化した。天然リセプターは、該リセプター遺伝子のコーディング領域の発現ベクター内へのポリメラーゼチェイン反応によるクローン化により生成した（Ｇｒｅｅｎ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ（１９８８）１６：３６９）。クローン化したコーディング領域の配置と完全性は、サンガーのチェインターミネーション法を用いたヌクレオチド配列決定により確認した。部位特異的変異導入を用いてｐＳＧ５内で変異リセプターを構築した。３つの変異リセプターを作成したが、それぞれ３５番目のセリンをプロリン、アルギニン、およびヒスチジンに置換した。これら３つの変異体のヌクレオチド配列を上記のとおりに確認した。卵母細胞の表面においてリセプターを生成するために、該リセプターをコードするｃＲＮＡを以下のとおりに生成した。ＸｂａＩによる切断によりｐＳＧ５Ｃ１４０プラスミドＤＮＡを作成し、Ｔ７のＲＮＡポリメラーゼを用いたキャップを有するｃＲＮＡをインビトロにおいて生成した（ＫｒｉｅｇａｎｄＭｅｌｔｏｎ，ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ（１９８７）１５５：３９７−４１５、全開示を引用により編入する）。公表された技術を用いて（Ｃｏｌｃｍａｎ，Ａ．，ｉｎＨａｍｃｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄＨｉｇｇｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．，ｅｄｓ，ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，ｐｐ．２７１−３０２；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ（１９８８）８５：４９３９−４９４３）、ゼノパスレビスの卵母細胞を回収して調製した。濾胞細胞を除去するために、卵母細胞を１．５時間撹拌しながら各２ｍｇ／ｍｌのコラーゲナーゼ１Ａおよびヒアルウロニダーゼ１Ｓを含むカルシウム不含バース（Ｂａｒｔｈ’ｓ）中でインキュベートした。次に、卵母細胞を５回普通のバース中で洗浄して１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００Ｔｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２．５ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むバース溶媒中で１８ ℃においてインキュベートした。ステージＶの卵母細胞を選択して３０ｎｌのｃＲＮＡ（０．３３Ｔｇ／Ｔｌ水）または水のみで注射して、次に９６ウエルの培養プレート中において４群／ウエルで０．２５ｍｌの溶媒と共にインキュベートした。３６時間後、卵母細胞を⁴⁵Ｃａ（２５０ＴＣｉ／ｍｌ）と共にインキュベートした。インキュベート１２時間後、卵母細胞を洗浄して０．２ｍｌの溶媒を加えて５分毎に交換した。回収された溶媒をシンチレーションカウンティングにより分析した。⁴⁵Ｃａのベースライン放出を測定するための５回の置換後、アゴニスト、例えば、ＳＬＩＧＲＬを含む試験溶媒を加えて、誘発された⁴⁵Ｃａ放出を測定した。野生型Ｃ１４０リセプター（ＷＴ）または３つの変異リセプター３５Ｐｒｏ，３５Ａｒｇおよび３５Ｈｉｓの何れかをコードするキャップｃＲＮＡ（計算上１０ｎｇ）を卵母細胞に注射した。３６時間後、ｃＲＮＡを注射したかまたは対照の水を注射した卵母細胞を⁴⁵Ｃａで負荷して、１２時間後に上記のとおりにしてペプチドまたはトリプシン誘導による⁴⁵Ｃａ放出を測定した。ペプチドＳＬＩＧＲＬを１００ＴＭで加えて、トリプシンを３００ＴＭで加えた。ペプチドを用いた刺激は、トリプシンを用いた刺激後に卵母細胞の同じ群上で行った。表１に示されるデータは３つほ複製物の測定結果の平均を示し、水を注射した卵母細胞に比して増加が示される。表１に示すとおり、アゴニストペプチドのＳＬＩＧＲＬは野生型および変異リセプターの両方を活性化できた。一方、細胞外ドメインの分断のみにより活性化することができるトリプシンは野生型リセプターノミを活性化できる。実施例７異なるアゴニストペプチドによるＣ１４０リセプターの活性化卵母細胞で発現された野生型マウスＣ１４０リセプターを用いて上記アッセイ中で１００ＴＭにおいてさまざまなペプチドを試験した。結果を表２に示す。「天然」ペプチドのＳＬＩＧＲＬは最も効果的であり、６番目のＬのアラニンによる置換が低くいが活性は消失させない。２番目および３番目はより感受性である。１番目はアラニンによる置換に寛容であるが１０倍活性を低下させ、このアゴニストの活性が類似トロンビンリセプターアゴニストＳＦＦＬＲＷに匹敵する。実施例８さまざまな組織中でのＣ１４０リセプターの発現マウス組織からポリ（Ａ）＋ＲＮＡを調製して５０％ホルムアミドを含む１．２％アガロースゲル上で分離してＨｙｂｏｎｄＣエクストラ膜（アマシャム）上でブロットした。ブロットは、マウスＣ１４０リセプターの完全コーディング領域に対する³²Ｐ標識された「ランダムプライミングプローブ」とハイブリダイズさせた。該プローブを４２℃において４８時間ハイブリダイズさせて、２０℃ において１×ＳＳＣ、０．１×ＳＤＳで２回５分毎に連続洗浄して、次に６５℃ において１×ＳＤＳ中で２０分毎に洗浄し、そして次に１×ＳＳＣ、０．１×ＳＤＳで２０分間洗浄した。その結果得られた膜を５日間−８０℃において増強スクリーンを用いてオートラジオグラフを行った。図６に示された結果から、腎臓および小腸はＣ１４０コーディングｍＲＮＡを含み、脾臓は含まないことが示される。図６において、各レーンは１０ＴｇのＲＮＡを含み、レーンＡは脾臓由来であり、レーンＢは腎臓由来であり、そしてレーンＣは小腸由来である。実施例９マウスにおけるＣ１４０転写物の発現 ³⁵ＳＲＮＡを用いたインサイチュハイブリダイゼーションを使用することにより、マウス胚形成および成体マウス組織におけるＣ１４０転写物を位置決めした。強いシグナルは１１．５日目の胃腸管内において見いだされ、１４日目には大きな容器中の鼻咽頭内の上皮構造、腹部−腸、皮膚および内皮細胞において強いハイブリダイゼーションがあった。肝臓および硬節（ｓｃｌｅｒｏｔｏｍａ）においていくらかのハイブリダイゼーションがあったが、筋肉またはＣＮＳ内ではシグナルはなかった。１７日後、硬節のシグナルは消滅し、食道、腎臓糸球体、肺、毛髪の濾胞および表皮を含む付加的な上皮構造がハイブリダイゼーションを示した。新たなこととして、１７日後に見いだされたシグナルは保持され、付加的なシグナルが胸腺髄質および腎臓髄質に見いだされた。成体は腹部粘膜、腸および結腸、脾臓の白色髄、胸腺髄質および腎臓髄質内の転写物を示した。再び、ＣＮＳの肝臓、肺または甲状腺においてはシグナルはなかった。図１２はこれらのプローブを用いた切片化新生マウス内のインサイチュハイブリダイゼーションの結果を示す。実施例１０ヒト組織内のＣ１４０転写物の発現図１３は、ヒトＣ１４０イセプタープローブにハイブリダイズさせたヒト細胞系からの全ＲＮＡのノーザンブロットの結果を示す。１０ｍｇの全ＲＮＡを用いた。ハイブリダイゼーションは腹部（レーン１）、Ｃａ−Ｃｏ−２細胞（レーン２）、ＨＴ−２９細胞（レーン３）、Ａ４９８細胞（レーン５）、５６３７細胞（レーン８）、皮膚ケラチノサイト（レーン１２）、およびＨＵＶＥＣ（レーン１３および１４）において得られた。ＨｕＴｕ８０細胞、Ｊ８２細胞、ＭＣＦ− ７、ＨｅＬａまたはＮＣＩ１２細胞（レーン４、６、９および１０）においてはハイブリダイゼーションは検出されなかった。実施例１１Ｃ１４０リセプターの低血圧活性の測定Ｃ１４０アゴニストＳＬＩＧＲＬを０．２ｍｌ中でさまざまな濃度においてラットの大腿脈に注射して動脈圧を監視した。さまざまな濃度における結果を図７に示す。図７のトレースからは、０．１ｍＭにおいてさえ検知できる血圧の低下が生じ、１ｍＭ濃度においてはより大きな低下が観察された。この作用は、上記アゴニストを用いたラット大腿の刺激の結果として血管各腸を観察することによっても示された。成体ＳＤラットはジエチルエーテルの麻酔の間に放血により殺し、大腿脈を取り出して脂肪および結合組織を分離した。脈の環状調製物を２つのＬ型金属ホルダー（０．２ｍｍ直径）上の器官浴（ｏｒｇａｎｂａｔｈ）（５ｍｌ）に入れた。金属ホルダーの一方は、ＧｒａｓｓＦＴＯＣ強制置換変換器（ｆｏｒｃｅｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）のレベラーの一つにネジどめした。浴液は１１８ｍＭＮａＣｌ、４．７ｍＭＫＣｌ、２．５ｍＭＣａＣｌ₂、１．２ｍＭＭｇＳＯ₄、２４．８ｍＭＮａＨＣＯ₃、１．２ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄および５６ｍＭグルコースを含むクレブスリンゲル（Ｋｒｅｂ’ｓＲｉｎｇｅｒ）であった。この浴液は８８．５％酸素−１１．５％ＣＯ₂で連続処理し、温度は３７℃に維持した。内皮は容器を通してＣＯ₂を泡立たせて除去した。基部の張力は７．５から１２ｍＮであった。調製物は、アゴニストおよび対照物質の適用前少なくとも１時間、平衡化した。これらの測定の結果は図８ａおよび８ｂに示す。図８ａに示すとおり、３×１０^-5においてＰＧＦ_2Iの適用により誘導された収縮は、１０^-5Ｍアゴニストの投与により弛緩した。図８ａに示す結果はまだ存在する内皮細胞を伴う血管を用いて得られた。図８ｂにおいては、内皮細胞を除いた。類似実験において、３×１０^-5のＰＧＦ_2Iにより誘導された収縮は１０^-5Ｍアゴニストまたは１０^-5Ｍアセチルコリンによって相殺されない。実施例８プラスミンおよびカリクレインによる組換えＣ１４０リセプターの活性化図９ａおよび９ｂは、Ｃ１４０のｃＲＮＡ（白丸）または対照としての水（黒丸）を注射された卵母細胞をプラスミンおよびカリクレイン各々が活性化する能力を示す。図９ｃは、Ｃ１４０リセプターｃＲＮＡ（黒丸）またはサブスタンスＫのｃＲＮＡ（白丸）を注射されたカエル卵母細胞をトリプシンが活性化する能力を示す。トリプシンは、Ｃ１４０リセプター注射卵母細胞に対して明らかに異なる作用を有する。特許、刊行物およびテキストを含む前記のすべての引用文献は、引用されたか否かを記載していない場合も、引用により編入される。本発明を今完全に記載してきたが当業者には理解されるとおり、本発明の精神および範囲から逸脱する事なくそして過度な実験を要さずに、均等のパラメーター、濃度、および条件の広い範囲内で同じことが実施されうる。本発明は特定の太陽に関連して記載されたが、さらなる修飾がなされてよいことは認識されるであろう。本出願は、一般的な本発明の原理に従い、あらゆる変更、使用、または適合を包含することを意図するが、発明が属する分野内で公知または習慣の実施の範囲内に含まれ、且つ請求の範囲の範囲の本質的な特徴に適用されるような本開示からの逸脱を含むことを意図する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 7/02 Ｃ０７Ｋ 7/02 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者スカーボロー，ロバート・エムアメリカ合衆国カリフォルニア州94002, ベルモント，ベルモント・キャニオン・ロード 2544

Claims

【特許請求の範囲】１．組換え宿主内に形質転換された場合に宿主の細胞表面上にＣ１４０リセプターを生成することができる発現系からなるＤＮＡ分子であって、但し、該発現系はＣ１４０リセプターをコードするヌクレオチド配列および制御配列からなり、制御配列は該コード配列に作用可能なように連結した該コード配列とは異種であって上記宿主細胞中で作用可能である、上記ＤＮＡ分子。２．請求項１記載の発現系を含むように修飾された細胞。３．Ｃ１４０リセプターをコードするヌクレオチド配列の発現をもたらして、Ｃ１４０リセプターを表面上に配置するように含む細胞を得る条件下で、請求項２記載の細胞を培養することからなる、表面上に配置されたＣ１４０リセプターを含む細胞を生成する方法。４．Ｃ１４０リセプターをコードするｃＲＮＡ分子。５．請求項４記載のｃＲＮＡを含むように修飾された卵母細胞。６．Ｃ１４０リセプターをコードするｃＲＮＡの発現をもたらして、Ｃ１４０リセプターを表面上に配置するように含む細胞を得る条件下で、請求項５記載の卵母細胞を培養することからなる、表面上に配置されたＣ１４０リセプターを含む細胞を生成する方法。７．候補の物質のＣ１４０リセプター活性を測定するための方法であって、該物質の存在下および不在下にて請求項３または６記載の細胞をインキュベートし、そして該物質の存在下と不在下を比較してＣ１４０リセプターの活性化の存在、不在または量を検出して、該物質の不在下に比較した場合の存在下の活性化の増加が該物質のアゴニスト活性を示すことからなる、測定方法。８．候補の物質がＣ１４０アンタゴニストとして振る舞う能力を評価するための方法であって、Ｃ１４０アゴニストの存在下および該物質の存在下および不在下にて請求項３または６記載の細胞をインキュベートし、そして該候補の存在下と不在下のＣ１４０リセプター活性化を測定して、該候補の存在下の活性化の低下が該候補のアンタゴニスト活性を示すことからなる、評価方法。９．候補の物質がＣ１４０リセプターに結合する能力を評価するための方法であって、Ｃ１４０アゴニストまたは公知のＣ１４０アンタゴニストの存在下および該候補の存在下および不在下にて請求項３または６記載の細胞をインキュベートし、そして該候補の存在下と不在下の細胞表面へのＣ１４０アゴニストまたはＣ１４０アンタゴニストの結合を測定して、該候補の存在下の結合の低下が該候補のリセプターへの結合能力を示すことからなる、評価方法。 10．Ｃ１４０リセプター蛋白質の細胞外領域またはその一部分と特異的に免疫反応する抗体組成物。 11．該領域がリガンド結合領域であるか、または活性化Ｃ１４０リガンドと特異的に免疫反応性であるか、またはリセプター配列ＳＬＩＧＲＬ内のエピトープを認識するか、またはＣ１４０リセプターの分断された活性化ペプチドと特異的に反応性である、請求項10記載の抗体組成物。 12．インサイチュにてＣ１４０リセプターの位置を決定する方法であって、活性化されたＣ１４０リセプターを有する可能性のある対象に、活性化リセプターに結合するのに効果的な活性化リセプターに特異的な抗体量を投与し、そして、抗体の位置を検出することからなる、決定方法。 13．哺乳動物対象中の活性化Ｃ１４０リセプターの存在を検出する方法であって、Ｃ１４０リセプターの分断された活性化ペプチドの存在、不在または量を測定する検出系に、対象の体液サンプルを接触させ、そして分断されたペプチドの存在、不在または量を検出することからなる、検出方法。 14．Ｃ１４０リセプターを活性化することができるアゴニストペプチドであって、該ペプチドは、式：ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−Ｚ（１）（式中、ＡＡ₁は小さいアミノ酸またはスレオニンであり；ＡＡ₂およびＡＡ₃はそれぞれ別個に中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₄は小さいアミノ酸であり；ＡＡ₅は塩基性アミノ酸であり；ＡＡ₆は存在してもしなくてもよく、存在する場合には中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₇はＡＡ₆が存在しない場合には存在せずＡＡ₆が存在する場合には存在してもしなくてもよく、酸性アミノ酸であり；そしてＺはアゴニストの活性を干渉しない置換体である）である、アゴニストペプチド。 15．ＡＡ₁がｓｅｒ，ａｌａ，ｇｌｙ，ｔｈｒまたは２，３−ジアミノプロピオニル（２，３−ｄｉａＰ）であり；および／またはＡＡ₂およびＡＡ₃の各々が別個にｉｌｅ，ｖａｌ，ｌｅｕおよびＣｈａからなる群から選択され；および／またはＡＡ₄がＧｌｙであり；および／またはＡＡ₅がＡｒｇ，ＬｙｓまたはＨａｒであり；および／またはＺがＯＲ’またはＮＲ’Ｒ’からなるが、但し、各Ｒ’は別個にＨであるかまたは１−６Ｃの直鎖状または分枝状アルキルであるが、但し各Ｒ’はＯＲ’ ，ＮＲ’Ｒ’および−ＮＲ’ＣＮＲ’ＮＲ’Ｒ’（式中、各Ｒ’は別個にＨであるかまたは１−６Ｃの直鎖状または分枝状アルキルである）からなる群から選択されるひとつまたはそれ以上の置換体により任意に置換されている請求項14記載のペプチド。 16．ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃がＳＬＩ，ＳＬＬ，ＳＣｈａＩ，ＳＣｈａＬ，（２，３−ｄｉａＰ）ＬＩおよび（２，３−ｄｉａＰ）ＬＬからなる群から選択され、および／またはＺが１−５アミノ酸の付加的ペプチド配列を含む、請求項15記載のペプチド。 17．ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰＩＴ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰＩ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰＰ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱＰ，ＳＬＩＧＲＬＥＴＱ，ＳＬＩＧＲＬＥＴ，ＳＬＩＧＲＬＥ，ＳＬＩＧＲＬ，ＳＬＩＧＲ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨＶＴ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨＶ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳＨ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴＳ，ＳＬＬＧＫＶＤＧＴ，ＳＬＬＧＫＶＤＧ，ＳＬＬＧＫＶＤ，ＳＬＬＧＫＶ，ＳＬＬＧＫ，Ｓ（Ｃｈａ）ＩＧＲ，Ｓ（Ｃｈａ）ＬＧＫ，（２，３−ｄｉａＰ）−ＩＧＲ，（２，３−ｄｉａＰ）ＬＬＧＫ，ＳＬＬＧＫＲ−ＮＨ₂，ＳＬＩＧＲＲ−ＮＨ₂，Ｓ（Ｃｈａ）ＬＧＫＫ−ＮＨ₂，Ｓ（Ｃｈａ）ＩＧＲＫ−ＮＨ₂，（２，３ −ｄｉａＰ）−ＬＩＧＲＫ−ＮＨ₂および（２，３−ｄｉａＰ）−ＬＬＧＬＬ− ＮＨ₂からなる群から選択される、請求項14記載のペプチド。 18．Ｃ１４０リセプターの機能を阻害することができるペプチドであって、該ペプチドは、式：Ｘ−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−Ｚ（式中、Ｘはｓｅｒ，ａｌａ，ｔｈｒ，ｃｙｓ，２，３−ｄｉａＰまたはｇｌｙ意か儀のアミノ酸残基であるかまたはデスアミノまたはアルキル化またはアシル化アミノ酸であり；ＡＡ₂およびＡＡ₃は各々個別に中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₄は小さいアミノ酸であり；ＡＡ₅は塩基性アミノ酸であり；ＡＡ₆は存在しても存在しなくてもよく、存在するならば中性／非極性／大きい／非芳香族のアミノ酸であり；ＡＡ₇はＡＡ₆が存在しない場合には存在せず、ＡＡ₆が存在してもＡＡ₇ は存在しても存在しなくてもよく、酸性アミノ酸であり；そしてＺはアゴニストの活性を干渉しない置換基である）である、ペプチド。 19．ＸがＭｖｌ，Ｍｐｒ，Ｍｂａ，またはＳＭｅＭｐｒであり；および／またはＡＡ₂およびＡＡ₃の各々が別個にｉｌｅ，ｖａｌ，ｌｅｕ，Ｎｌｅ，Ｎｖａ，シクロペンチルアラニンおよびＣｈａからなる群から選択され；および／またはＡＡ₄がＧｌｙであり；および／またはＡＡ₅がＡｒｇ，Ｌｙｓ，ＯｒｎまたはＨａｒであり；および／またはＺがＨまたはエステルまたはその塩、またはＮＲ’Ｒ’からなるが、但し、各Ｒ’は別個にＨであるかまたは１−６Ｃの直鎖状または分枝状アルキルであるが、但し各Ｒ’はＯＲ’，ＮＲ’Ｒ’および−ＮＲ’ＣＮＲ’ＮＲ’Ｒ’（式中、各Ｒ’は別個にＨであるかまたは１−６Ｃの直鎖状または分枝状アルキルである）からなる群から選択されるひとつまたはそれ以上の置換体により任意に置換されている請求項18記載のペプチド。 20．ＡＡ₂−ＡＡ₃がＬＩ，ＬＬ，ＣｈａＩおよびＣｈａＬからなる群から選択され；および／またはＺがＺが１−５アミノ酸の付加的ペプチド配列を含む、請求項19記載のペプチド。 21．Ｍｐｒ−ＬＬＧＫ，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲ，Ｍｐｒ−（Ｃｈａ）ＬＫＧ，Ｍｐｒ−（Ｃｈａ）ＩＧＲ，Ｍｐｒ−ＬＬＧＫＫ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲＫ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＩＧＲＫＥＴＱＰ−ＮＨ₂，Ｍｐｒ−ＬＬＧＫＫＤＧＴＳ−ＮＨ₂ ，（ｎ−ペンチル）₂−Ｎ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂ および（Ｍｅ−Ｎ−（ｎ−ペンチル）−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂およびそれらのアミド化またはアシル化形態からなる群から選択される、請求項18記載のペプチド。 22．Ｃ１４０リセプターポリペプチドをコードするかまたはＣ１４０リセプターポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ分子の相補的な、単離された核酸。 23．Ｃ１４０リセプターがヒトＣ１４０リセプターである、請求項22記載の核酸分子。 24．Ｃ１４０リセプターコードＤＮＡまたはＣ１４０リセプターコードＤＮＡの発現を制御するＤＮＡにアンチセンスであるかまたはトリプレックスを形成するオリゴヌクレオチド分子を、Ｃ１４０リセプターの発現を阻害するのに十分な量細胞に提供して、それにより発現を阻害することからなる、細胞中のＣ１４０リセプター発現の阻害方法。 25．Ｃ１４０リセプターコードＤＮＡまたはＣ１４０リセプターコードＤＮＡの発現を制御するＤＮＡにアンチセンスであるかまたはトリプレックスを形成するオリゴヌクレオチド分子を、対象中でＣ１４０リセプターの発現を阻害するのに十分な量対象に提供して、それにより発現を阻害することからなる、対象中のＣ１４０リセプター発現の阻害方法。 26．請求項25記載のオリゴヌクレオチド分子および薬学上受容可能なキャリアーまたは賦型剤を含む薬剤組成物。