JPH11512284A

JPH11512284A - 単クローン性リンパ球及び利用方法

Info

Publication number: JPH11512284A
Application number: JP9511421A
Authority: JP
Inventors: ゲオルゴポウロス，スティーア
Original assignee: ザジェネラルホスピタルコーポレイション
Priority date: 1995-09-05
Filing date: 1996-09-04
Publication date: 1999-10-26
Also published as: EP0873399A4; US6063983A; WO1997009419A1; EP0873399A1; AU6969096A

Abstract

(57)【要約】リンパ球の単クローン性調製物及びリンパ球の単クローン性調製物を生成する方法を記載する。これらのリンパ球は、標的組織又は標的細胞の調節に有用である。これらのリンパ球は又、造血細胞の増殖を促進するためにも有用である。

Description

【発明の詳細な説明】単クローン性リンパ球及び利用方法発明の背景この発明は、国立衛生研究所からの政府の支持を受けて為されたものである。従って、政府は、この発明に一定の権利を有する。この発明は、リンパ球の調製物、好ましくは単クローン性調製物、それらの生成及び利用に関係する。発明の要約一般に、この発明は、増殖統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性又は多能性幹細胞、或は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばトランスフォームされたリンパ球を供給する方法を特徴とする。この方法は：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球を有する哺乳動物を用意し；増殖統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばトランスフォームされたリンパ球をその哺乳動物から単離することを含む。好適具体例において：この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、この方法は、更に：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞を分割させて増殖統制解除された細胞例えばトランスフォームされたリンパ球を生じさせ；この哺乳動物からの多数の増殖統制解除された例えばリンパ球又はトランスフォームされたリンパ球を与えることを含む。好適具体例において：この増殖統制解除された細胞例えばリンパ球例えばトランスフォームされたリンパ球を、哺乳動物のリンパ腫から単離する。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に変異を、例えば、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分における点突然変異又は欠失を、例えば、ＤＮＡ結合領域における突然変異を、例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分における点突然変異又は欠失を有し；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分における点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この哺乳動物は、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有する。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば、転写活性化若しくはその蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；この哺乳動物は、Ｃ末端欠失を有する。好適具体例において：増殖統制解除された細胞は、ホモ接合変異Ｉｋａｒｏｓ細胞例えばリンパ球であり；増殖統制解除されたリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８− リンパ球であり；増殖統制解除された細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この細胞は、リンパ球であり：ヘルパーＴ細胞であり；細胞溶解性Ｔ細胞であり；サプレッサーＴ細胞であり；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞であり；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞であり；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：哺乳動物を抗原で免疫し；細胞を外来的に供給し且つこの哺乳動物又は細胞を提供する哺乳動物の一方又は両方を抗原で免疫する。この抗原は、同種抗原；異種抗原；自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えばリンパ球を哺乳動物に、例えばホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物に又はＩｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異（例えば、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分についての点突然変異又は欠失）を有する哺乳動物に、外来的に供給する。もし外来的に供給されるならば、その細胞は、ヒトの又は非ヒト例えばブタの、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスのリンパ球であってよい。他の面において、この発明は、細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性又は多能性幹細胞、又は幹細胞の子孫例えばリンパ球のクローン性集団を供給する方法を特徴とする。この方法は：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えばリンパ球を有する哺乳動物を供給すること；１つ以上の細胞例えばリンパ球をその哺乳動物から単離する（但し、もし一細胞が単離されたならば、その細胞をリンパ球細胞のクローン性集団に増殖させる）ことを含む。好適具体例において：この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において：細胞のクローン性集団を、この哺乳動物のリンパ腫から単離する。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された動物であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子突然変異例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分の点突然変異又は欠失、例えばＤＮＡ結合領域における突然変異例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の１つ以上の全部又は部分の点突然変異又は欠失を有し；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の１つ以上の全部又は部分の点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この哺乳動物は、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的な発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有する。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば、転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；この哺乳動物は、Ｃ末端欠失を有する。好適具体例において：このクローン性集団は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；このクローン性集団は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞よりなり；このクローン性集団は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓ細胞を含み又は該細胞よりなり；このクローン性集団は、ヘテロ接合の又はホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓ細胞例えばリンパ球を含み又は該細胞よりなり；このリンパ球のクローン性集団は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８ −、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球を含み又は該細胞よりなる。好適具体例において、これらの細胞は、リンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞であり；細胞溶解性Ｔ細胞であり；サプレッサーＴ細胞であり；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞であり；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞であり；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この哺乳動物を抗原で免疫し；このリンパ球を外来的に供給し且つこの哺乳動物又はこのリンパ球を提供する哺乳動物を抗原で免疫する。この抗原は、同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えばリンパ球を、哺乳動物例えばホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物又は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異（例えば、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有する哺乳動物に、外来的に供給する。もし外来的に供給するならば、その細胞は、ヒトの又は非ヒト例えばブタの、非ヒト霊長類例えばサルの、ヤギの、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスのリンパ球であってよい。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、選択した抗原を認識するリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団を供給する方法を特徴とする。この方法は：Ｉｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球を有する哺乳動物を用意し；その哺乳動物から１つ以上のリンパ球を単離することを含む。好適具体例において：この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において：このリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団を、この哺乳動物のリンパ種から単離する。他の好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された動物であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域内に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域に、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じる突然変異を有する。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有する。好適具体例において：このリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合のリンパ球を含み；このリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球を含み；このリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓリンパ球を含み；このリンパ球の実質的に均質な集団は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球とホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓリンパ球の混合物を含み；このリンパ球又はリンパ球の実質的に均質な集団は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−又はＣＤ４＋ＣＤ８＋リンパ球を含む。好適具体例において、このリンパ球は、ヘルパーＴ細胞であり；細胞溶解性Ｔ細胞であり；サプレッサーＴ細胞であり；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞であり；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞であり；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞である。好適具体例において：Ｉｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球を、哺乳動物に、例えばホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物又はＩｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を有する哺乳動物に、外来的に供給する。もし外来的に供給するならば、このリンパ球は、ヒトの又は非ヒト例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスのリンパ球であってよい。好適具体例において：この哺乳動物を抗原で免疫し；このリンパ球を外来的に供給し且つこの哺乳動物又はリンパ球を提供する哺乳動物の一方又は両方を抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原若しくは自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、増殖統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球、又は好ましくはこの発明の方法により生成されたかかる細胞の集団若しくは実質的に純粋な調製物を特徴とする。他の面において、この発明は、細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球、又は好ましくはここに記載のこの発明の方法により生成される細胞の単クローン性集団又は実質的に純粋な調製物を特徴とする。好ましくは、これらの細胞は、増殖統制解除された又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞である。他の面において、この発明は、好ましくはここに記載のこの発明の方法により生成されたリンパ球又はその実質的に均質な集団又は実質的に純粋な調製物であって、選択した抗原を認識する当該リンパ球又は集団を特徴とする。好ましくは、これらのリンパ球は、増殖統制解除された又はＩｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球（例えば、トランスフォームされたもの）である。他の面において、この発明は、増殖若しくはＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの突然変異した対立遺伝子を有する細胞を特徴とする。この方法は：この細胞を哺乳動物に導入し（好ましくは、この哺乳動物は、元々この細胞を単離した動物以外の動物である）；この細胞を培養することを含む。好適具体例において、この方法、更に：この細胞をこの哺乳動物において増殖させることを含む。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を有し；この哺乳動物は、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス又は免疫無防備状態のマウス若しくはヌードマウスである。他の好適具体例において：ドナーは、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されており；この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝しに突然変異を、例えばＤＮＡ結合領域に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；ドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有しこの細胞のドナーは、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；この細胞のドナーは、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。Ｉｋａｒｏｓ野生型ドナー例えばヒトドナーの場合、Ｉｋａｒｏｓ障害をイン・ビトロで生成することができる。好適具体例において：これらの細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；これらの細胞のドナーは、Ｃ末端欠失を有する。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；これらのリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において、この細胞は、リンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し若しくは結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、増殖若しくはＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球その他の細胞を培養する方法を特徴とする。この方法は：その細胞を、サイトカイン例えばＩＬ−２（好ましくは、外来的に投与されたサイトカイン）の存在下でイン・ビボ又はイン・ビトロで培養することを含む。好適具体例において：この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合部位に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝しに突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域内に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；この細胞のドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有し；このリンパ球のドナーは、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；この哺乳動物は、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。Ｉｋａｒｏｓ野生型ドナー例えばヒトドナーの場合には、Ｉｋａｒｏｓ障害をイン・ビトロで生成することができる。好適具体例において：この細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば、転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；この細胞のドナーは、Ｃ末端欠失を有する。他の好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；この細胞は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ細胞であり；これらのリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において、この細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し若しくは結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、標的組織又は細胞例えば標的リンパ球の活性を調節する方法を特徴とする。この方法は：標的を供給し、その標的を増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの突然変異した対立遺伝子を有するリンパ球にさらすことを含み（但し、この標的はＩｋａｒｏｓ統制解除されていない）；この標的及び細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；この標的及び細胞は、異なる動物に由来し；この標的及び細胞は、異なる種に由来し；この標的の活性は、レシピエント哺乳動物において調節され且つこの標的又は細胞の何れかはレシピエント哺乳動物以外のドナー哺乳動物に由来し；又はこの標的は、イン・ビトロ系においてこの細胞にさらされる。好適具体例において：このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり、このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；このドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域内の突然変異を有し；このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えば、ヒトドナーの場合、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば、転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；このＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｃ末端欠失を有する。他の好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；この細胞は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において、この細胞は、リンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この方法は、イン・ビトロ系において実施され；この方法は、イン・ビボで、例えば哺乳動物例えばゲッ歯類例えばマウス若しくはラット又は霊長類例えば非ヒト霊長類若しくはヒトにおいて実施される。もしこの方法を、イン・ビトロで実施するならば、標的細胞又は組織及びリンパ球のドナーは、同じであっても異なってもよい。もしこの方法をイン・ビボで実施するならば、一のレシピエント動物及び一以上のドナーがある。好適具体例において：この方法は、イン・ビボで、標的細胞又は組織の一以上のレシピエント、ドナーにて実施され、細胞のドナーは、抗原で免疫され；この方法は、イン・ビトロで、標的細胞又は組織の一以上のドナーにて実施され、細胞のドナーは、抗原で免疫される。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において：この標的は、Ｔ若しくはＢリンパ球、マクロファージ、炎症性白血球例えば好中球若しくは好酸球、単核食細胞、ＮＫ細胞又はＴリンパ球よりなる群から選択され；この標的は、抗原提示細胞例えば専門の抗原提示細胞又は非専門的抗原提示細胞であり；この標的は、脾臓組織、骨髄組織、リンパ節組織又は胸腺組織である。他の好適具体例において、この標的は、哺乳動物例えばヒト由来であり；この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、調節される標的の活性は：サイトカインの産生；免疫系細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性に対する標的の効果；寿命に対する標的の効果；体重に対する標的の効果；免疫系の組織若しくは器官の存在、機能若しくは形態に対する標的の効果；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系の成分の能力に対する標的の効果；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力に対する標的の効果である。好適具体例において：この標的及び細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；この標的及び細胞は、異なる動物に由来し；この標的は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されていない。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、標的組織又は細胞例えば標的リンパ球の活性を調節する細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球の能力に対する処理の効果を評価する方法を特徴とする。この方法は：増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球及び標的を含有する反応混合物を形成し；処理を施し；標的の活性を調節するリンパ球の能力に関係するパラメーターに対するその処理の効果を測定することを含む。好適具体例において：この標的及び細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；この標的及び細胞は、異なる動物に由来し；この標的及び細胞は、異なる種に由来し；この標的の活性は、レシピエント哺乳動物において調節され且つこの標的又は細胞の何れかは、レシピエント哺乳動物以外のドナー哺乳動物に由来し；又はこの標的は、イン・ビトロ系においてこの細胞にさらされ；この標的は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されていない。好適具体例において：このドナーは、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されており；この増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この増殖又はＩｋａｒｏｓ制御解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；このドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有し；この増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球のドナーは、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えば野生型ドナー例えばヒトドナーの場合には、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：この増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えば、転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガーの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有し；この増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナーは、Ｃ末端欠失を有する。他の好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；このリンパ球は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；この細胞は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球であり、例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において、この細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この方法を、イン・ビトロ系において実施し；この方法を、イン・ビボで例えば哺乳動物例えばゲッ歯類例えばマウス若しくはラット又は霊長類例えば非ヒト霊長類又はヒトにおいて実施する。もしこの方法を、イン・ビボで実施するならば、一のレシピエント動物及び一以上のドナーがある。このレシピエントは、種若しくは遺伝子型が一方の若しくは両方のドナー（２ドナーである場合）と異なってよく、又は異なる動物由来であってよい。これらのドナー（２ドナーである場合）は、遺伝子型又は種が異なってよく、又は異なる動物由来であってよい。好適具体例において：この方法をイン・ビボで実施し且つ一以上のレシピエント、標的細胞若しくは組織のドナー、この細胞のドナーを抗原で免疫し；この方法をイン・ビトロで実施し且つ標的細胞若しくは組織のドナーの一方若しくは両方、この細胞のドナーを抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において：この標的を、Ｔ若しくはＢリンパ球、マクロファージ、炎症性白血球例えば好中球若しくは好酸球、単核食細胞、ＮＫ細胞又はＴリンパ球よりなる群から選択し；この標的は、抗原提示細胞例えば専門の抗原提示細胞又は非専門抗原提示細胞であり；この標的は、脾臓組織、骨髄組織、リンパ節組織又は胸腺組織である。他の好適具体例において、この標的は、哺乳動物例えばヒト由来であり；この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、この処理は：薬物、化学物質又は他の物質の投与；イオン化放射の施与；抗体例えば免疫系の分子又は細胞に対する抗体の投与；免疫系を抑制する物質又は他の処理の施与；又は免疫系の機能を促進し、活性化し又は阻止する物質又は他の処理の施与；核酸例えば遺伝子産物（例えば、免疫系の成分）をコードし又は発現する核酸の導入；蛋白質例えば免疫系の成分である蛋白質の導入を含んでよい。好適具体例において、標的の活性を調節する細胞の能力に関係するパラメーターは：サイトカインの産生；免疫系の細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；免疫系の組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系成分の能力；同種抗原又は異種抗原に対して免疫寛容を示す能力の何れかである。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、哺乳動物における免疫応答に対する細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球の機能の効果を評価する方法を特徴とする。この方法は：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された造血細胞例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球を哺乳動物に（好ましくは、外来的に）供給し；その哺乳動物における免疫応答に関連したパラメーターに対するその造血細胞機能の効果を評価することを含む。好適具体例において：この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；この哺乳動物は、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有し；この哺乳動物は、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；この哺乳動物は、非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス又は免疫無防備状態のマウス若しくはヌードマウスであり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において：このドナーは、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されており；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてホモ接合又はヘテロ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域内に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；この造血細胞のドナーは、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；このドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域内の突然変異を有し；この造血細胞のドナーは、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えばＩｋａｒｏｓ野生型ドナー例えばヒトドナーの場合には、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子における突然変異例えば、転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失についてホモ接合又はヘテロ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｃ末端欠失についてホモ接合又はヘテロ接合である。好適具体例において：免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、異なる動物に由来し；又は免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、異なる種に由来する。他の好適具体例において：この造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失をＤＮＡ結合領域に有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ造血細胞であり；この造血細胞は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ造血細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子における突然変異例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失についてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞は、Ｃ末端欠失についてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この造血細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この方法をイン・ビボで実施し且つ一以上のレシピエント哺乳動物、この造血細胞のドナーを抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において：免疫応答に関係するパラメーターは：サイトカインの産生；免疫系細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；免疫系組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系成分の能力；抗原を提示する能力；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力の何れかであってよい。好適具体例において：この哺乳動物は、非ヒト霊長類例えばサル、ブタ、ヤギ又はゲッ歯類例えばマウス若しくはラットであり；この哺乳動物は、野生型であり；この哺乳動物は、ヒトの病気のモデル動物例えばＮＯＤマウスであり；この哺乳動物は、照射、化学療法又は遺伝的欠陥により免疫無防備状態である（例えば、それは、ＳＣＩＤマウス又はヌードマウスである）。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、イン・ビトロ系における免疫応答に対する細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球の機能の効果を評価する方法を特徴とする。この方法は：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された造血細胞例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球をイン・ビトロ系に供給することにより機能を供給し；このイン・ビトロ系における免疫応答に関係したパラメーターに対する造血細胞機能の効果を評価することを含む。他の好適具体例において：このドナーは、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されており；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に点突然変異又は欠失を、例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有し；この造血細胞のドナーは、ホモ接合の野生型Ｉｋａｒｏｓ哺乳動物であり；このドナーは、ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域における突然変異を有し；この造血細胞のドナーは、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えばＩｋａｒｏｓ野生型ドナー例えばヒトドナーの場合には、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作を、イン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：この造血細胞のドナーは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子における突然変異例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失についてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞のドナーは、Ｃ末端欠失についてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において：免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において異なり；免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、異なる動物に由来し；又は免疫応答を示す免疫系の成分の細胞とこの造血細胞は、異なる種に由来する。他の好適具体例において：この造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ造血細胞であり；この造血細胞は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ造血細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この造血細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＣ末端欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この造血細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この変異したＩｋａｒｏｓ造血細胞のドナー又は免疫系の成分のドナー又は両者を、抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において、免疫応答に関係するパラメーターは：サイトカインの産生；免疫系細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；免疫系組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系の成分の能力；抗原を提示する能力；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力の何れかであってよい。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、患者例えば患者の哺乳動物例えば霊長類（例えばヒト又は非ヒト霊長類）、例えばブタ、非ヒト霊長類（例えば、サル）、ヤギ又はゲッ歯類（例えば、ラット又はマウス）の免疫応答を調節（例えば、促進又は阻止）する方法を特徴とする。この方法は：患者に、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性又は多能性幹細胞或は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ幹細胞又はリンパ球（ここに記載のもの）を有するドナー哺乳動物からのリンパ球を導入することを含む。好適具体例において、この方法は、更に：患者への細胞の導入前に、その細胞を例えば照射することにより処理して増殖を阻止することを含む。他の好適具体例において：このドナーは、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されており；このドナー哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座においてヘテロ接合であり；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分に欠失を有し；この哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。他の好適具体例において：このドナー哺乳動物は、ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えばＩｋａｒｏｓ野生型ドナー例えばヒトドナーの場合には、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；この細胞はホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４−ＣＤ８− リンパ球である。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化するか又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＣ末端欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において：この方法を、イン・ビボで実施し且つＩｋａｒｏｓ細胞を生成するドナー哺乳動物又は患者の哺乳動物又は両者を抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。他の面において、この発明は、免疫系を再構成する方法を特徴とする。この方法は：レシピエントの哺乳動物例えばヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスを用意して、この動物に、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された（例えば、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有する）ドナー哺乳動物例えばヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス由来の免疫系成分を、好ましくは外来的に導入することを含む。好適具体例において、例えばもしドナー哺乳動物がヒトであるならば、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロですることができる。好適具体例において、この成分は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球である。好適具体例において、この成分は、ドナー哺乳動物例えばヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスに由来する。好適具体例において、この方法は、更に：患者への成分の導入の前に、例えばその成分を照射することによりリンパ球を処理して増殖を阻止することを含む。好適具体例において、このドナー哺乳動物は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子に突然変異を、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分の欠失を有する。他の好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織、又は胸腺組織の何れかである。好適具体例において：免疫系成分は、レシピエント哺乳動物と同じ種に由来し；免疫系成分は、レシピエント哺乳動物の種と異なる種に由来する。好適具体例において：レシピエント動物は、野生型動物であり；ヒトの病気のモデル動物例えばＮＯＤマウスであり；この動物は、照射、化学療法又は遺伝的欠陥により免疫無防備状態であり（例えば、この動物は、ＳＣＩＤマウス又はヌードマウスである）；このレシピエントは、免疫機能不全であり（例えば、このレシピエントは、胸腺摘出され、免疫系成分例えば細胞又は抗体が涸渇している）；このレシピエントは、化学療法又は照射を施されたものである。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋又はＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＣ末端欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球である。好適具体例において、この免疫系成分は：ヘルパーＴ細胞；又は細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞；抗原非特異的Ｔ細胞であるリンパ球である。好適具体例において：この方法を、イン・ビボで実施し、且つレシピエント哺乳動物又はドナー哺乳動物又は両者を抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において、この方法は、更に：免疫系機能に関係するパラメーターの値を測定することを含む。この免疫系機能に関係するパラメーターは：サイトカインの産生；この免疫系の細胞の増殖又は活性；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；この免疫系の組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系成分の能力；抗原を提示する能力；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力の何れかであってよい。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球の免疫系成分との相互作用を評価する方法を特徴とする。この方法は：動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類ラット若しくはマウスを用意し；この細胞及び免疫成分をこの動物に導入して；Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞と免疫系成分との相互作用を評価することを含む。好適具体例において、この方法は、更に：患者への細胞の導入の前に、リンパ球を、例えばその細胞を照射することにより処理して増殖を阻止することを含む。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織又は胸腺組織の何れかであり；この免疫系成分は、この動物と同じ種に由来し；この免疫系成分は、この動物の種と異なる種に由来し；この免疫系成分は、このリンパ球と同じ種に由来し；この免疫系成分は、このリンパ球が得られた種と異なる種に由来する。他の好適具体例において：この細胞は、この動物と同じ種に由来し；この細胞は、この動物の種と異なる種に由来する。他の好適具体例において：このレシピエント哺乳動物は、野生型動物であり；ヒトの病気のモデル動物例えばＮＯＤマウスであり；この動物は、照射、化学療法又は遺伝的欠陥により免疫無防備状態であり（例えば、この動物は、ＳＣＩＤマウス又はヌードマウスである）；このレシピエントは、免疫機能不全であり（例えば、このレシピエントは、胸腺摘出されており、免疫系成分例えば細胞又は抗体が涸渇している）；このレシピエントは、化学療法又は照射を施されたものである。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域内に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋ＣＤ４ −ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化するか又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＣ末端欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において、評価することは：サイトカインの産生；免疫系の細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；免疫系の組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系成分の能力；抗原を提示する能力；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力の何れかを評価することを含むことができる。好適具体例において：この方法を、イン・ビボで実施し且つ一以上の動物、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞のドナー、免疫系成分のドナーを抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するリンパ球の免疫系成分との相互作用を評価する方法であって：この細胞及び免疫系成分を供給し；この細胞をイン・ビトロでこの免疫系成分にさらし；この細胞と免疫系成分との相互作用を評価することを含む該方法を特徴とする。好適具体例において、このリンパ球のドナーは：ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス（Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するもの）である。好適具体例において、これらの免疫系成分のドナーは：ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス（Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するもの）である。好適具体例において、例えばもしドナー哺乳動物がヒトであるならば、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織又は胸腺組織の何れかであり；この免疫系成分は、この動物と同じ種に由来し；この免疫系成分は、この動物の種と異なる種に由来し；この免疫系成分は、このリンパ球と同じ種に由来し；この免疫系成分は、このリンパ球が得られた種と異なる種に由来する。他の好適具体例において：この細胞は、この動物と同じ種に由来し；この細胞は、この動物の種と異なる種に由来する。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓ細胞であり；この細胞は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓ細胞であり；このリンパ球は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４−ＣＤ８ −リンパ球である。好適具体例において：この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であり；この細胞は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＣ末端欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合である。好適具体例において、この細胞はリンパ球であり且つ：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。好適具体例において、評価することは：サイトカインの産生；免疫系の細胞の増殖又は活性化；抗体の産生；抗原提示細胞の溶解又は細胞溶解性Ｔリンパ球の活性化；感染抵抗性；寿命；体重；免疫系の組織又は器官の存在、機能又は形態；刺激（例えば、拡散性物質例えばサイトカイン、免疫系の他の細胞、又は抗原）に応答する免疫系成分の能力；抗原を提示する能力；同種抗原又は異種抗原に対する免疫寛容を示す能力の何れかを評価することを含むことができる。好適具体例において：この方法を、イン・ビトロで実施し且つ変異したＩｋａｒｏｓ細胞のドナー又は免疫系成分のドナー又は両者を抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。他の面において、この発明は、外来的に導入された免疫系成分を有する哺乳動物例えば非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス（該成分は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された又はＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有するヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス、又は細胞培養に由来する）を特徴とする。好適具体例において、例えば、もし免疫系成分が野生型動物例えばヒトに由来するならば、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで行なうことができる。好適具体例において、この成分は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されたヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスに由来する。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４− 、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｃ末端欠失についてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球である。好適具体例において、この免疫系成分は：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ −１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。他の好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織又は胸腺組織の何れかであり；この免疫系成分は、この動物と同じ種に由来し；この免疫系成分は、この動物の種と異なる種に由来する。好適具体例において：この免疫系成分を生成する哺乳動物又はドナー動物又は両者を、抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除され又はＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有する動物又は細胞培養に由来する免疫系成分並びに標的組織又は細胞例えば標的リンパ球を含有する反応混合物、好ましくはイン・ビトロ反応混合物（好ましくは、この免疫系成分と標的はＩｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；この成分と標的は異なる種に由来し且つこの標的は異なる動物に由来する）を特徴とする。好適具体例において、この成分は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された動物又は細胞培養に由来する。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＤＮＡ結合領域に突然変異（例えば、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の一つ以上の全部又は部分に点突然変異又は欠失）を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、ホモ接合の突然変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４−ＣＤ８−リンパ球である。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えば転写活性化若しくはこの蛋白質の半減期を減じる２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｃ末端欠失についてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球である。好適具体例において、この免疫系成分は：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上の抗炎症性サイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ −１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。他の好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織又は胸腺組織の何れかであり；この免疫系成分は、標的細胞と同じ種に由来し；この免疫系成分は、標的細胞の種と異なる種に由来する。好適具体例において：この標的を、Ｔ若しくはＢ細胞、マクロファージ、炎症性白血球例えば好中球若しくは好酸球、単核食細胞、ＮＫ細胞又はＴリンパ球よりなる群から選択し；この標的は、抗原提示細胞例えば専門の抗原提示細胞又は非専門抗原提示細胞であり；この標的は、脾臓組織、リンパ節組織、骨髄組織又は胸腺組織である。好適具体例において：この免疫系成分のドナー又は標的のドナー又は両者を、抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。好適具体例において、これらの成分のドナーは：ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。好適具体例において、例えば、野生型ドナー例えばヒトの場合には、Ｉｋａｒｏｓ統制解除例えばＩｋａｒｏｓ障害を生じる操作をイン・ビトロで導入することができる。好適具体例において、この標的のドナーは：ヒト又は非ヒト哺乳動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除され又は少なくとも１つのＩｋａｒｏｓ遺伝子座に変異した対立遺伝子を有するヒト又は非ヒト哺乳動物例えば動物例えばブタ、非ヒト霊長類例えばサル、ヤギ、又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウス、又は細胞培養に由来する免疫系成分及び外来的に導入したサイトカイン例えばＩＬ−２を含有する反応混合物好ましくはイン・ビトロ反応混合物を特徴とする。もしドナーがヒトであるならば、Ｉｋａｒｏｓ障害をイン・ビトロで生成することができる。好適具体例において：この免疫系成分は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーン例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つの全部又は部分に点突然変異又は欠失を有するトランスジーンについてヘテロ接合又はホモ接合であるリンパ球であり；この免疫系成分は、ヘテロ接合のＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、ホモ接合の変異したＩｋａｒｏｓリンパ球であり；この免疫系成分は、Ｔリンパ球例えばＣＤ４＋ＣＤ８−、ＣＤ８＋ＣＤ４−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４−ＣＤ８＋リンパ球である。好適具体例において、この免疫系成分は：ヘルパーＴ細胞；細胞溶解性Ｔ細胞；サプレッサーＴ細胞；一種以上のサイトカイン例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＩＬ−１３を分泌するＴ細胞；抗原又はイディオタイプ特異的であるＴ細胞；自己抗体につき又は同種移植片若しくは異種移植片組織を認識する抗体につき抗イディオタイプであるサプレッサーＴ細胞であり；このリンパ球は、抗原非特異的Ｔ細胞である。他の好適具体例において：この免疫系成分は、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、分化全能性造血幹細胞、多能性造血幹細胞、Ｂ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞前駆細胞、骨髄組織、脾臓組織又は胸腺組織の何れかである。好適具体例において：この免疫系成分のドナーを、抗原で免疫する。この抗原は：同種抗原；異種抗原又は自己抗原；蛋白質；又は抗イディオタイプリンパ球を生じる抗原であってよい。他の面において、この発明は、細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球の増殖を促進する方法を特徴とする。この方法は：非増殖性Ｉｋａｒｏｓ２量体（ＮＰＩＤ）の形成を阻止する化合物を細胞に投与することを含む。好適具体例において、この化合物は：ＮＰＩＤサブユニットの会合の競争又は非競争インヒビターであり；この化合物は、Ｉｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３イソ型に好ましくはこのイソ型のエキソン７のＦ５及びＦ６領域に結合し；Ｉｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメント例えばＦ５及びＦ６を含むフラグメント又はそのＩｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３結合部分に結合し；この化合物は、１５０、１００、７０、５８、５２、５０、４０又は３０アミノ酸長以下のＩｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメントであり；エキソン７のＣ末端１５０アミノ酸残基好ましくは５８のＣ末端アミノ酸残基を含むＩｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメントであり；Ｆ５及びＦ６の最初の２０アミノ酸残基を含むフラグメントであり；Ｆ５及びＦ６の最初の２２アミノ酸残基を含むフラグメントであり；相互作用欠損Ｉｋａｒｏｓ種であり；Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つが非機能的であるか欠失しているＩｋａｒｏｓペプチドであり；ＩＫ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３の何れかと結合して、野生型レベルより低い活性化を可能にするＩｋａｒｏｓ蛋白質又はフラグメント（例えば、ここに記載の１３変異体）である。好適具体例において、この細胞はＴ細胞レセプターを発現し且つこの細胞は、その細胞をＴ細胞レセプターと相互作用し又は結合する因子（例えば、抗原又は抗Ｔ細胞レセプター抗体）と接触させることにより刺激され又は活性化される。好適具体例において、この化合物は：蛋白質又はペプチド；ペプトミメチック、小さい分子；インヒビターをコードする核酸である。他の面において、この発明は、レシピエント動物例えばゲッ歯類例えばラット若しくはマウス、ブタ又はヒト又は非ヒト霊長類における、自家移植の、同種の又は異種の造血幹細胞の植付け又は増殖を促進する方法を特徴とする。この方法は、造血幹細胞好ましくはＩｋａｒｏｓ統制解除された幹細胞をレシピエントに投与することを含む。好適具体例において、この方法は、更に、幹細胞又はレシピエント又は両者に、ＮＰＩＤサブユニットの会合の競争又は非競争インヒビターである化合物；Ｉｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３イソ型好ましくはこのイソ型のエキソン７のＦ５及びＦ６領域に結合する化合物を投与することを含み；Ｉｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメント例えばＦ５及びＦ６を含むフラグメント又はそのＩｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３結合部分は、１５０、１００、７０、５８、５２、５０、４０又は３０アミノ酸長以下のＩｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメントであり；エキソン７のＣ末端１５０アミノ酸残基一層好ましくはＣ末端アミノ酸残基５８Ｃ末端アミノ酸残基を含むＩｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメントであり；Ｆ５及びＦ６の最初の２０アミノ酸残基を含むフラグメントであり；Ｆ５及びＦ６の最初の２２アミノ酸残基を含むフラグメントであり；相互作用欠損Ｉｋａｒｏｓ種であり；Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の１つ以上が非機能的であり又は欠失しているＩｋａｒｏｓペプチドであり；ＩＫ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３の何れかと結合して、野生型レベルより低い活性化を可能にするＩｋａｒｏｓ蛋白質又はフラグメント（例えば、ここに記載の１３変異体）である。好適具体例において、この化合物は：蛋白質又はペプチド；ペプトミメチック、小さい分子：インヒビターをコードする核酸である。他の面において、この発明は、細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えば統制解除されたＩｋａｒｏｓ遺伝子座を含む増大された増殖を有するリンパ球を用意する方法を特徴とする。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞例えば造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹才能の子孫例えばリンパ球の精製された調製物を特徴とする。他の面において、この発明は、変異例えば転写活性化若しくは２量体形成の一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化し、この蛋白質の半減期を減じ、又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化する点突然変異又は欠失（例えば、Ｃ末端欠失又はエキソン７の全部又は部分の欠失）の何れかを有する組換えの又は実質的に純粋なＩｋａｒｏｓポリペプチドの調製物を特徴とする。ヒト及びマウスＩｋａｒｏｓの配列は、Molnar et al.,J.Immunol.156:585-592,1996に見出すことができる（参考として、本明細書中に援用する）。好適具体例において：このポリペプチドは、生物学的活性を有し；このポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドと少なくとも６０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％相同であるアミノ酸配列を含み；このポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドと本質的に同じアミノ酸配列を含み；このポリペプチドは、少なくとも２０、５０、１００又は１５０アミノ酸長であり；このポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドに由来する少なくとも２０の最も好ましくは少なくとも５０、１００又は１５０の連続アミノ酸を含み；このポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの生物学的活性のアゴニスト又はアンタゴニストの何れかである。例えば、このポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストであり；このポリペプチドは、脊椎動物例えば哺乳動物例えば霊長類例えばヒトのＩｋａｒｏｓポリペプチドである。好適具体例において：このＩｋａｒｏｓポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの核酸によりコードされ又は天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの核酸と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％相同性を有する核酸によりコードされる。好適具体例において、このＩｋａｒｏｓポリペプチドは、アミノ酸配列において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列と最大１、２、３、５又は１０残基異なる。他の好適具体例において、このＩｋａｒｏｓポリペプチドは、アミノ酸配列において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列と最大１、２、３、５又は１０％異なる。好ましくは、これらの差異は：このＩｋａｒｏｓポリペプチドがＩｋａｒｏｓの生物学的活性を示すようなもの、例えばこのＩｋａｒｏｓポリペプチドが天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの生物学的活性を保持するかこのポリペプチドが天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアンタゴニストであるようなものである。好適具体例において、このＩｋａｒｏｓポリペプチドは、リーディングフレームにて、更なるアミノ酸配列（好ましくは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列をコードするゲノムＤＮＡの５’側のゲノムＤＮＡによりコードされる残基）に融合された天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアミノ酸配列の全部又はフラグメントを含む。更に他の好適具体例において、このＩｋａｒｏｓポリペプチドは、第１のＩｋａｒｏｓ部分及び第２のポリペプチド部分（例えば、Ｉｋａｒｏｓポリペプチドと無関係のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド部分）を有する組換え融合蛋白質である。この第２のポリペプチド部分は、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＤＮＡ結合ドメイン又はポリメラーゼ活性化ドメインの何れかであってよい。好適具体例において、この融合蛋白質は、２−ハイブリッドアッセイにおいて用いることができる。この発明のポリペプチドは、同義遺伝子、選択的転写事象、選択的ＲＮＡスプライシング事象、並びに選択的翻訳及び翻訳後事象の存在の結果として生じる。このポリペプチドを、発現されるＩｋａｒｏｓポリペプチドが天然の細胞において発現されるときに存在するのと実質的に同じ翻訳後修飾を生じる系、又は天然の細胞において発現されるときに存在する翻訳後修飾の省略を生じる系例えば培養細胞にて発現させることができる。この発明は、免疫学的調製物中にＩｋａｒｏｓポリペプチドを含む免疫原を含み、この免疫原は、Ｉｋａｒｏｓポリペプチドに特異的な免疫応答（例えば、体液性応答、抗体応答又は細胞性応答）を誘出することができる。好適具体例において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドにより表される蛋白質に由来する抗原決定基例えばユニークな決定基を含む免疫原。本発明は又、Ｉｋａｒｏｓ免疫原の又は一般にＩｋａｒｏｓポリペプチドのエピトープと特異的に反応性の抗体調製物をも含む（好ましくは、エピトープは、抗体と結合したときに、生物学的活性の調節を生じる）。本発明には又、Ｉｋａｒｏｓポリペプチド（又は、それをコードする核酸）及び一種以上の更なる成分例えばキャリアー、希釈剤又は溶剤を含む組成物も含まれる。この更なる成分は、この組成物をイン・ビトロ、イン・ビボ製薬用途又は獣医学用途において有用なものとすることができる。他の面において、この発明は、アミノ酸配列が、突然変異例えば転写活性化若しくは２量体形成の一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化し、この蛋白質の半減期を減じ、又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化する点突然変異又は欠失（例えば、Ｃ末端欠失又はエキソン７の全部若しくは部分の欠失）の何れかを有するＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列を含み又は該配列であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し又は含む実質的に純粋な核酸を提供する。好適具体例において：コードされるポリペプチドは、生物学的活性を有し；コードされるポリペプチドは、アミノ酸配列において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドと少なくとも６０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％相同であるアミノ酸配列を含み；コードされるポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドと本質的に同じアミノ酸配列を含み；コードされるポリペプチドは、少なくとも２０、５０、１００又は１５０アミノ酸長であり；コードされるポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドからの少なくとも２０、最も好ましくは少なくとも５０、１００又は１５０の連続するアミノ酸を含み；コードされるポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの生物学的活性のアゴニスト又はアンタゴニストの何れかである。例えば、コードされるポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストであり；コードされるポリペプチドは、脊椎動物例えば哺乳動物例えば霊長類例えばヒトのＩｋａｒｏｓポリペプチドである。好適具体例において：このコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの核酸により、又は天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの核酸と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％の相同性を有する核酸によりコードされる。好適具体例において、このコードされるポリペプチドは、アミノ酸配列において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列と最大１、２、３、５又は１０残基異なる。他の好適具体例において、このコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドは、アミノ酸配列において、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列と最大１、２、３、５又は１０％異なる。好ましくは、これらの差異は、このコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドがＩｋａｒｏｓの生物学的活性を示すようなものであり、例えばこのコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドが天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの生物学的活性を保持し又はこのコードされるポリペプチドが天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアンタゴニストであるようなものである。好適具体例において、このコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドは、リーディングフレームにて、更なるアミノ酸残基に、好ましくは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの配列をコードするゲノムＤＮＡの５’側のゲノムＤＮＡによりコードされる残基に融合した天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドのアミノ酸配列の全部又はフラグメントを含む。更に別の好適具体例において、このコードされるＩｋａｒｏｓポリペプチドは第１のＩｋａｒｏｓ部分及び第２のポリペプチド部分（例えば、Ｉｋａｒｏｓポリペプチドと無関係のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド）を有する組換え融合蛋白質である。この第２のポリペプチド部分は、例えば、グルタチオン− Ｓ−トランスフェラーゼ、ＤＮＡ結合ドメイン又はポリメラーゼ活性化ドメインの何れかであってよい。好適具体例において、この融合蛋白質は、２−ハイブリッドアッセイにおいて用いることができる。好適具体例において、この主題のＩｋａｒｏｓ核酸は、転写調節配列、例えばＩｋａｒｏｓ遺伝子配列を発現ベクターとしての使用に適したものにするようにＩｋａｒｏｓ遺伝子配列に操作可能に結合された転写プロモーター又は転写エンハンサー配列の少なくとも１つを含む。尚更なる好適具体例において、この発明のＩｋａｒｏｓポリペプチドをコードする核酸は、厳しい条件下で、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの少なくとも１２の連続したヌクレオチドに、一層好ましくは、天然のＩｋａｒｏｓポリペプチドの少なくとも２０の連続したヌクレオチドに対応する核酸プローブとハイブリダイズする。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンを含むか或はＩｋａｒｏｓ遺伝子を誤発現する細胞又は精製された細胞調製物を特徴とする。この細胞調製物は、ヒト又は非ヒト細胞例えばゲッ歯類細胞例えばマウス若しくはラット細胞、ウサギ細胞又はブタ細胞よりなってよい。好適具体例において、これらの細胞は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子例えば異種形態のＩｋａｒｏｓ遺伝子例えばヒトに由来する遺伝子を含む（非ヒト細胞の場合）。このＩｋａｒｏｓトランスジーンは、誤発現され、例えば、過剰発現又は過少発現され得る。他の好適具体例において、これらの細胞は、内因性Ｉｋａｒｏｓ遺伝子を誤発現する遺伝子例えば発現が破壊された遺伝子（例えば、ノックアウト）を含む。かかる細胞は、変異した若しくは誤発現されるＩｋａｒｏｓ対立遺伝子に関係する病気の研究のため又は薬物スクリーニングにおける使用のためのモデルとして働くことができる。他の面において、この発明は、トランスジェニックＩｋａｒｏｓ動物例えばゲッ歯類例えばマウス若しくはラットウサギ又はブタを特徴とする。好適具体例において、このトランスジェニック動物は、異種形態のＩｋａｒｏｓ遺伝子例えばヒトに由来する遺伝子を含む（好ましくは、発現する）。他の好適具体例において、この動物は、誤発現される内因性Ｉｋａｒｏｓ遺伝子（例えば、ノックアウト）を有する。かかるトランスジェニック動物は、変異した若しくは誤発現されるＩｋａｒｏｓ対立遺伝子に関係する病気の研究のための又は薬物スクリーニングにおける使用のためのモデルとして働くことができる。突然変異例えば転写活性化若しくは２量体形成（この蛋白質の半減期を減じる）の一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメインの一方若しくは両方を（完全に又は部分的に）不活性化する点突然変異又は欠失（例えば、Ｃ末端欠失又はエキソン７の全部若しくは部分の欠失）の何れかを有するＩｋａｒｏｓポリペプチドを、ここに記載の任意の方法又は同時係属中の米国出願第０８／２３８，２１２号（１９９４年５月２日出願）、米国出願第０８／２８３，３００号（１９９４年７月２９日出願）及び仮出願第６０／０１７，６４６号（１９９６年５月１４日）（これらを、参考として本明細書中に援用する）に記載の任意の方法において用いることができる。他の面において、この発明は、細胞の分裂速度若しくは増幅、又は細胞が細胞周期に入ることを調節する方法を特徴とする。この方法は、細胞に、有効量のＩｋａｒｏｓポリペプチド又はＩｋａｒｏｓポリペプチドをコードする核酸を投与することを含む。この方法は、エキス・ビボ、イン・ビボ又はイン・ビトロにて行なうことができる。好適具体例において、この細胞は、造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球である。好適具体例において、この細胞は、ヒト、ブタ、ウサギ、又はゲッ歯類例えばマウス若しくはラットの細胞である。好適具体例において、この分裂若しくは増幅又は細胞周期へ入ることを、促進する。一般に、正常の非増殖性Ｉｋａｒｏｓ機能（例えば、Ｉｋ−１イソ型の機能）を阻害し又は拮抗するＩｋａｒｏｓ突然変異は、細胞分裂を増大させる。かかる突然変異は：ＤＮＡ結合を阻害する突然変異例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つの全部又は部分における点突然変異又は欠失；エキソン１／２、３、４、５又は６の少なくとも１つの全部又は部分における点突然変異又は欠失；非増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体サブユニットと対照的に増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体サブユニットの優先的発現を生じる突然変異；又はＤＮＡ結合性を欠損しているが機能的２量体形成ドメインを有する変異体を含む。転写活性化若しくは２量体形成の一方若しくは両方を不活性化し、この蛋白質の半減期を減じ、又はＣ末端ジンクフィンガードメイン（Ｆ５又はＦ６）の一方若しくは両方を不活性化する突然変異は、好ましさが一層低く；又は突然変異は、Ｃ末端欠失である。Ｉｋａｒｏｓ蛋白質の２量体形成を阻害するＩｋａｒｏｓのフラグメント又は他の変異体（即ち、Ａｉｏｌｏｓ）（例えば、Ｃ末端２量体形成領域を含むフラグメント例えば、ジンクフィンガーＦ５及びＦ６を含むフラグメント）を用いて細胞分裂を促進することもできる。増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体のサブユニットは又、分裂、増幅又は細胞周期へ入ることを増大させることもできる。細胞分裂を増大させる方法は、細胞分裂を増大させることが望ましい手順（例えば、腫瘍その他の細胞増殖性疾患の化学療法又は放射線療法等の治療）と組み合わせることができる。好適具体例において、この分裂、増幅又は細胞周期へ入ることは、減少する。非増殖促進性のＩｋａｒｏｓ２量体のサブユニット例えばＩｋ−１は、分裂、増幅又は細胞周期へ入ることを減少させることができる。この発明の方法により処理された細胞例えば幹細胞を、哺乳動物例えばヒト非ヒト霊長類その他の哺乳動物例えばゲッ歯類に導入することができる。好適具体例において、この処理を、エキソ・ビボで実施し且つ：この細胞は、自己由来であり、例えば、それが導かれた同じ個体に戻され；この細胞は、同種のものであり、即ち、それが投与される哺乳動物と同じ種に由来し；この細胞は、異種のものであり、即ち、それが投与される哺乳動物と異なる種に由来する。他の面において、この発明は、細胞分化の状態を調節する方法を特徴とする。この方法は、その細胞に、Ｉｋａｒｏｓポリペプチド又はＩｋａｒｏｓポリペプチドをコードする核酸を、例えばその細胞の分化の状態の維持を促進し又は分化を促進するように調節するのに十分な量で投与することを含む。この方法は、エキソ・ビボ、イン・ビボ又はイン・ビトロで実施することができる。好適具体例において、この細胞は、造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球である。好適具体例において、この細胞は、ヒト、ブタ、ウサギ、又はゲッ歯類例えばマウス若しくはラットの細胞である。好適具体例において、この細胞の分化の状態を維持し、例えば分化を阻害して一層原始的且つ一層多型潜在性の状態を促進する。これは、野生型の非増殖性機能を有するＩｋａｒｏｓポリペプチド例えばＩｋ−１イソ型の機能を有するＩｋａｒｏｓポリペプチドを供給することにより達成することができる。非増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体のサブユニットは、この細胞の分化状態の維持を促進することができる。特に好適な具体例において、野生型のＩｋａｒｏｓ機能をヒトの造血細胞好ましくは幹細胞に供給して、それらの分化した状態を維持し、或は、それらの細胞の培養を促進する。好適具体例において、細胞周期へ入ることを通常伴う細胞の分化を促進する。一般に、正常の非増殖性Ｉｋａｒｏｓ機能（例えば、Ｉｋ−１イソ型の機能）を阻害し又は拮抗するＩｋａｒｏｓ突然変異は、分化を促進する。かかる変異体には：ＤＮＡ結合を阻害する突然変異例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つの全部又は部分における点突然変異又は欠失；エキソン１／２、３、４、５又は６の少なくとも１つの全部又は部分における点突然変異又は欠失等の突然変異；非増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体サブユニットと対照的に増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体サブユニットの優先的発現を生じる突然変異；又は不完全なＤＮＡ結合を有するが機能的２量体形成ドメインを有する変異体が含まれる。転写活性化若しくは２量体形成（この蛋白質の半減期を減じる）の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメイン（例えば、Ｆ５又はＦ６）の一方若しくは両方を不活性化する突然変異は、分化を促進するための好ましさは一層低く；突然変異は、Ｃ末端欠失である。非増殖性Ｉｋａｒｏｓ蛋白質の２量体形成を阻害するＩｋａｒｏｓのフラグメント又は他の変異体（即ち、Ａｉｏｌｏｓ）、例えばＣ末端の２量体形成領域例えばジンクフィンガーＦ５及びＦ６を含むフラグメントを用いて、分化を促進することもできる。増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体のサブユニットを用いて、分化を促進することができる。この発明の方法により処理された細胞例えば幹細胞を、哺乳動物例えばヒト、非ヒト霊長類その他の哺乳動物例えばゲッ歯類に導入することができる。好適具体例において、この処理を、エキソ・ビボで行ない且つ：この細胞は、自己由来であり、例えば、それが導かれた同じ個体に戻し；この細胞は、同種のものであり、即ち、それを投与する哺乳動物と同じ種に由来し；この細胞は、異種のものであり、即ち、それを投与する哺乳動物と異なる種に由来する。他の面において、この発明は、Ｉｋａｒｏｓ突然変異及びＩｋａｒｏｓ突然変異以外の突然変異例えばリンパ系の調節に関与する遺伝子における突然変異（例えばＡｉｏｌｏｓ突然変異）を有する細胞を特徴とする。好適具体例において、Ｉｋａｒｏｓ突然変異は：Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つの全部又は部分の点突然変異又は欠矢であり；ＤＮＡ結合領域内の突然変異例えばＦ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つの全部又は部分の点突然変異又は欠失であり；ＮＰＩＤサブユニットと対照的にＰＰＩＤサブユニットの優先的発現を生じるＩｋａｒｏｓ遺伝子の制御領域内の突然変異であり；転写活性化若しくは２量体形成（この蛋白質の半減期を減じる）の一方若しくは両方を不活性化し又はＣ末端ジンクフィンガードメイン（例えば、Ｆ５又はＦ６）の一方若しくは両方を不活性化する点突然変異又は欠失であり；突然変異は、Ｃ末端欠失である。他の好適具体例において、この細胞は、造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球である。増殖統制解除された細胞は、ここで用いる場合、Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞のクローン性の子孫をいう。Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞は、ここで用いる場合、「非増殖性のＩｋａｒｏｓ２量体」（ＮＰＩＤ）例えばＩｋ−１／Ｉｋ−１、Ｉｋ−１／Ｉｋ−２、Ｉｋ−１／Ｉｋ−３、Ｉｋ−２／Ｉｋ−２、Ｉｋ−２／Ｉｋ−３又はＩｋ−３／Ｉｋ−３の濃度又は活性が、細胞の増大した増殖を与えるだけ十分に減少するように操作された細胞である。増大した増殖は：この操作を受けていない点を除いて同じである細胞と比較して増大した増殖、又は野生型細胞と比較して増大した増殖を意味することができる。ＮＰＩＤの濃度又は活性を、当分野に公知の任意の手段によって操作することができる。ＮＰＩＤの濃度又は活性を、ＮＰＩＤを形成することのできる一以上の単量体種の利用可能性を低減させることにより、例えばＩｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３の少なくとも１つの利用可能性を低減させることにより減じることができる。かかる低減を、Ｉｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３の産生を減じる突然変異により、Ｉｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３発現を阻害するアンチセンス分子の発現により、又はＮＰＩＤのサブユニットの２量体形成を阻害する化合物により達成することができる。ＮＰＩＤの濃度又は活性を、少なくとも１つの機能的Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４ジンクフィンガー領域を欠くＩｋａｒｏｓ種を供給することにより、例えばＩｋ−４、Ｉｋ −５、Ｉｋ−６又はＩｋ−７イソ型を生成することにより低減させることができる。かかる種は、増殖促進性Ｉｋａｒｏｓ２量体（ＰＰＩＤ）を形成することができる。ＰＰＩＤは、サブユニットの少なくとも１つが４未満の機能的Ｎ−末端ジンクフィンガー（これらのＮ末端ジンクフィンガーは、ジンクフィンガーＦ１、Ｆ２、Ｆ３及びＦ４である）を有する２量体である。従って、ＮＰＩＤの濃度又は活性を、例えばＰＰＩＤ中の利用可能なＩｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３を封鎖することにより減じる操作を用いて、Ｉｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球を提供することができる。Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞には、増殖がＮＰＩＤのＰＰＩＤに対する比により影響される任意の細胞が含まれる（ＮＰＩＤのＰＰＩＤに対する比が操作された造血細胞例えば幹細胞例えば分化全能性若しくは多能性幹細胞又は幹細胞の子孫例えばリンパ球が含まれる）。Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞には、次の特徴の少なくとも１つを有する細胞が含まれる：Ｉｋ−１、Ｉｋ−２及びＩｋ −３のＩｋ−４、Ｉｋ−５、Ｉｋ−６及びＩｋ−７に対する比が１０、５、４、２、１、０．５、０．２５以下であり；ＮＰＩＤのＰＰＩＤに対する比が１０、５、４、２、１、０．５、０．２５以下であり；この細胞は、４未満のＮ末端ジンクフィンガーをコードする少なくとも１つのＩｋａｒｏｓをコードする核酸配列を含み（例えば、それは、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つをコードする配列につき欠失している）；この細胞は、非機能的Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３又はＦ４の少なくとも１つをコードする少なくとも１つのＩｋａｒｏｓをコードする核酸配列を含み；この細胞は、Ｉｋａｒｏｓフラグメント例えばＦ５及びＦ６を含むフラグメント（例えば、Ｆ５／Ｆ６領域とＮＰＩＤのサブユニットとの間の相互作用を競争的に阻害することによりＮＰＩＤの形成を阻害することができる）をコードする核酸を含み；この細胞は、Ｉｋ−１、Ｉｋ−２又はＩｋ−３をコードするＲＮＡにハイブリダイズすることができるが、好ましくはＩｋ−５、Ｉｋ−６又はＩｋ−７ＲＮＡにハイブリダイズすることはできないアンチセンス分子をコードする核酸配列を含む。Ｉｋａｒｏｓ細胞は、好ましくは、胎児細胞以外である。Ｉｋａｒｏｓ統制解除された動物は、ここで用いる場合、少なくとも１つの好ましくは実質的にすべての細胞がＩｋａｒｏｓ統制解除された動物である。Ｉｋａｒｏｓ動物は、好ましくは、胎児動物以外である。Ｉｋａｒｏｓ統制解除された成分又は組織は、ここで用いる場合、少なくとも１つの好ましくは実質的にすべての細胞がＩｋａｒｏｓ解除された組織又は成分である。Ｉｋａｒｏｓ成分又は組織は、好ましくは、胎児以外である。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座における突然変異は、ここで用いる場合、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子又はその産物の発現、構造又は活性を変える任意の突然変異を含む。これらは、Ｉｋａｒｏｓコード領域又はその制御領域の全部又は部分における点突然変異及び特に欠失を含む。外来的に供給された細胞、組織又は細胞生成物例えばサイトカインは、ここで用いる場合、それが供給され又は投与される動物以外の動物に由来する細胞、組織又は細胞生成物である。それは、それが供給される動物と同じか又は異なる種に由来してよい。リンパ球のクローン性集団は、ここで用いる場合、次の特徴の１つ以上を有する２以上のリンパ球の集団である：それらは、共通の幹細胞先祖を共有し；それらは、共通のプレ胸腺細胞先祖を共有し；それらは、共通の胸腺細胞先祖を共有し；それらは、同じＴ細胞レセプターのゲノム再配置を共有し；それらは、共通のＣＤ４＋ＣＤ８＋先祖を共有し；それらは、共通のＣＤ４＋先祖を共有し；それらは、共通のＣＤ８＋先祖を共有し；それらは、共通のＣＤ４−ＣＤ８−先祖を共有し；それらは、同じ抗原を認識する。実質的に均質な２以上の細胞例えばリンパ球の集団は、ここで用いる場合、これらの細胞の少なくとも５０％一層好ましくは少なくとも７０％一層好ましくは少なくとも８０％最も好ましくは主題の細胞型例えばリンパ球の少なくとも９０％、９５％又は９９％細胞の集団を意味する。しかしながら、このＩｋａｒｏｓ遺伝子座に関して、これらの細胞は、すべて（＋／−）、すべて（−／−）、又は（＋／−）と（−／−）細胞の混合物であってよい。培養することは、ここで用いる場合、細胞又は組織を、その細胞又は組織の生存力を支持し、好ましくは、その細胞又は組織の増殖を支持する環境と接触させることを意味する。実質的に純粋な細胞例えばリンパ球の調製物は、ここで用いる場合、それらの細胞の少なくとも５０％一層好ましくは少なくとも７０％一層好ましくは少なくとも８０％最も好ましくは主題の細胞のそれらの細胞の少なくとも９０％、９５％又は９９％が例えばリンパ球である細胞の集団を意味する。しかしながら、このＩｋａｒｏｓ遺伝子座に関して、これらの細胞は、すべて（＋／−）、すべて（−／−）、又は（＋／−）と（−／−）細胞の混合物であってよい。免疫無防備状態は、ここで用いる場合、免疫系の少なくとも１つの面が野生型哺乳動物において認められるレベルより低い哺乳動物をいう。この哺乳動物は、化学処理により、照射により、又は遺伝的障害により免疫無防備にして、例えばヌード、ベージュ、ヌード−ベージュ又はＩｋａｒｏｓ−表現型を生じることができる。この動物は又、後天的疾患により、例えばウイルス（例えば、ＨＩＶ）により免疫無防備となり得る。用語「Ｉｋａｒｏｓ」は、遺伝子、トランスジーン又は核酸に言及するためにここで用いる場合、天然のＩｋａｒｏｓ遺伝子又はその部分と（例えば、Georgo poulos等(1992)Science258:808-812又はMolnar及びGeorgopoulos(1994)Mol.Cell Biol.14:8292-8303に記載されたヒトのＩｋａｒｏｓの核酸配列と）少なくとも約５０％好ましくは少なくとも約６０％一層好ましくは少なくとも約７０％更に一層好ましくは少なくとも約８０％最も好ましくは少なくとも約９０％〜１００％相同である核酸配列をいう。ここで用いる場合、用語「トランスジーン」は、技術により、細胞に挿入された核酸配列（例えば、少なくとも１つのＩｋａｒｏｓ蛋白質をコードするもの）をいう。このトランスジーンは、その細胞から全身又は部分が発生する動物のゲノムの部分となることができる。もしこのトランスジーンがゲノムにインテグレートされれば、それは、それが挿入されたゲノムの核酸配列の変化を生じる。トランスジーンは、部分的に又は完全に、種相同性であり、即ち、トランスジーン又はその一部分は、それが導入される細胞と同じ種に由来してよい。もしトランスジーンが、それが導入される細胞の内因性遺伝子と（配列又は種相同性の意味において）相同であるならば、そのトランスジーンは、好ましくは、次の特徴の少なくとも１つを有する：それは、挿入された細胞のゲノムの配列を変えるような細胞のゲノムへの挿入のために（又は、挿入されるように）デザインされ（例えば、それは、内因性遺伝子の位置と異なる位置に挿入され、又はその挿入は、内因性遺伝子の配列に変化を生じる）；それは、突然変異例えばトランスジーンの誤発現を生じる突然変異を含み；挿入によって、それは、挿入された遺伝子の誤発現を生じることができ、例えば、その挿入は、それが挿入された遺伝子のノックアウトを生じることができる。トランスジーンは、１つ以上の転写調節配列及び任意の他の核酸配列例えばイントロン（選択した核酸の所望のレベル又はパターンの発現に必要であり得る）を含むことができる（すべて、操作可能に選択した核酸に結合されている）。このトランスジーンは、エンハンサー配列を含むことができる。このトランスジーンは、典型的には、動物又は動物の先祖に出生前に例えば胎児期に導入する。ここで用いる場合、Ｉｋａｒｏｓトランスジーンは、Ｉｋａｒｏｓコード配列又は調節配列の全部又は部分を含むトランスジーンである。この用語は又、ゲノムにインテグレートされたときにＩｋａｒｏｓ遺伝子座を破壊し或は突然変異を誘発するＤＮＡ配列をも包含する。インテグレートされたときにＩｋａｒｏｓ遺伝子の全部又は部分の欠失を生じるＩｋａｒｏｓトランスジーン配列。挿入に際して内因性Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の誤発現を生じ；挿入に際して細胞中にＩｋａｒｏｓ遺伝子の更なるコピーを生じ；挿入に際して非Ｉｋａｒｏｓ遺伝子をＩｋａｒｏｓ調節領域の制御下に置くトランスジーンは含まれる。（野生型と比較して）トランスジーンの誤発現を生じる欠失その他の突然変異を有するＩｋａｒｏｓ遺伝子のコピーを含み；Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の機能的コピー（即ち、野生型の活性例えばＴ、Ｂ又はＮＫ細胞の発生を支持する能力の少なくとも５％を有する配列）を含み；機能的（即ち、野生型の活性の少なくとも５％を、例えば野生型の転写レベルの少なくとも５％を有する）又は非機能的（即ち、野生型の活性の５％未満を、例えば野生型の転写レベルの５％未満を有する）Ｉｋａｒｏｓ調節領域（該領域は、野生型若しくは変異したＩｋａｒｏｓ遺伝子産物又はＩｋａｒｏｓ遺伝子産物以外の遺伝子産物をコードする核酸配列例えばレポーター遺伝子、毒素遺伝子若しくは、Ｉｋａｒｏｓが発現される組織若しくは発生ステージにおいて発現されるべき遺伝子に、適宜、操作可能に結合され得る）を含むトランスジーンも含まれる。好ましくは、このトランスジーンは、天然のＩｋａｒｏｓ配列と少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９５又は９９％相同性を有する少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、５００、１，０００又は２，０００塩基対を含む。好ましくは、このトランスジーンは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子のエキソン３及び４の全部若しくは幾らかの欠失又はエキソン７の幾らか若しくは全部の欠失を含む。ここで用いる場合、用語「トランスジェニック細胞」は、トランスジーンを含む細胞をいう。ここで用いる場合、「トランスジェニック動物」は、その動物の少なくとも１つの好ましくは本質的にすべての細胞がトランスジーンを含む任意の動物例えば非ヒト哺乳動物例えばブタ、サル、ヤギ又はゲッ歯類例えばラット若しくはマウスである。このトランスジーンは、細胞に、その細胞の前駆体への導入により、意図的な遺伝子操作により、例えばマイクロインジェクションにより若しくは組換えウイルスの感染により、直接又は間接に導入する。この用語遺伝子操作は、組換えＤＮＡ分子の導入に向けられている。この分子は、染色体にインテグレートされ得るか又はそれは染色体外で複製するＤＮＡであってよい。誤発現は、ここで用いる場合、非野生型パターンの遺伝子発現をいう。それは：非野生型レベルでの発現（即ち、過剰若しくは過少発現）；遺伝子が発現される時期又はステージに関して野生型と異なる発現パターン、例えば、予め決められた発生の期間又はステージにおける増大した又は減少した発現（野生型と比較して）；発現の組織特異性に関して野生型と異なる発現パターン、例えば、予め決めた細胞型又は組織型における増大した又は減少した発現（野生型と比較して）；Ｉｋａｒｏｓ遺伝子産物のサイズ、アミノ酸配列、翻訳後修飾又は生物学的活性に関して野生型と異なる発現パターン；遺伝子発現に対する環境刺激又は細胞外刺激の効果に関して野生型と異なる発現パターン、例えば、刺激の強さの増大又は減少の存在下での増大した又は減少した発現のパターン（野生型と比較して）；又は野生型と異なるイソ型発現のパターンを含む。精製したＤＮＡは、この発明のＤＮＡが由来した生物の天然のゲノム中で直接隣接している両側のコード配列（即ち、５’側のもの及び３’側のもの）と直接隣接していないＤＮＡである。それ故、この用語は、例えば、ベクター；自律的に複製するプラスミッド若しくはウイルス；又は原核生物若しくは真核生物のゲノムＤＮＡに取込まれているか、又は他のＤＮＡ配列と独立した分離した分子（例えば、ＰＣＲ又は制限エンドヌクレアーゼ処理により生成されたｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡフラグメント）として存在する組換えＤＮＡを含む。それは又、更なるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の部分である組換えＤＮＡをも包含する。相同は、２つのポリペプチド分子間の又は２つの核酸分子間の配列類似性をいう。これら２つの比較される配列の両者の内のある位置が同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットにより占められるならば、例えば、もし２つのＤＮＡ分子の各々のある位置がアデニンにより占められているならば、この分子は、その位置で相同である。これら２つの配列の間の相同性は、これら２つの配列により共有されるマッチングし又は相同である位置の数の関数である。例えば、２つの配列中の位置の１０の内の６がマッチし又は相同であるならば、これらの配列は、６０％相同である。例えば、ＤＮＡ配列ATTGCCとTATGGCは、５０％相同性を共有する。用語ペプチド、蛋白質及びポリペプチドは、ここでは、交換可能に用いる。発生におけるＩｋａｒｏｓの中心的及び多面的役割並びにＩｋａｒｏｓ統制解除された動物により及びＩｋａｒｏｓ統制解除され且つ増殖統制解除されたリンパ球細胞により示される様々な表現型は、これらの動物及び細胞を、例えば種々のアッセイ、スクリーニングその他の方法において有用なものとする。例えば、この発明の動物、細胞及び方法を用いて、免疫系の機能、発生の機構、免疫系の成分が相互作用する仕方、細胞周期が調節される仕方、免疫寛容の機構及び免疫又は神経組織の病気の発達の機構を解明し、特性決定することができる。この発明の細胞、動物及び方法は又、例えば、免疫又は神経組織の病気を治療するために用いることのできる治療剤を評価し又は発見するために、例えば移植された組織に対する免疫寛容を誘導する処理又は方法を発見し又は評価するためにも有用である。リンパ腫の発育したＩｋａｒｏｓマウスは、これらの病気の分子的基礎を研究するためだけでなく、かかる病気を治療する能力につき治療剤をスクリーニングするためにも有用である。この免疫系の少なくとも１つの成分を欠くＩｋａｒｏｓマウスは、種々の再構成実験において有用である。この発明の動物、細胞及び方法は又、リンパ球のクローン性集団を生成するためにも有用である。この発明の他の特徴及び利点は、下記の説明及び請求の範囲から明らかとなろう。詳細な説明先ず図面を簡単に説明する。図面図１は、１及び２月齢のＩｋａｒｏｓヘテロ接合マウスの胸腺細胞プロフィルの描写である。Ｉｋａｒｏｓヘテロ接合（＋／−）及び野生型対照（＋／＋）マウスからの胸腺細胞を、次のモノクローナル抗体の組合せを用いて染色した：抗ＣＤ４^PE／抗ＣＤ８^FITC、抗ＣＤ８^PE／抗ＴＣＲａｂ^FITC、抗ＣＤ４^PE／抗ＴＣＲａｂ^FITC、及び抗ＣＤ３^PE／抗ＣＤ２５^FITC。それぞれのボックスで囲んだ陽性集団中に入る細胞のパーセンテージを示してある。図２は、リンパ増殖性疾患を有するＩｋａｒｏｓヘテロ接合体におけるリンパ系器官のフローサイトメトリー分析の描写である。明白なコレセプター表現型（ＭＵ１、ＣＤ８⁺ＣＤ４^-及びＭＵ２、ＣＤ８⁺ＣＤ４⁺）を示す２つのＩｋａｒｏｓヘテロ接合体の胸腺細胞（Ａ）及び脾臓細胞（Ｂ）集団のプロフィル。ＭＵ１からの骨髄及びリンパ節中の細胞のプロフィルも示してある。細胞を、次のモノクローナル抗体の組合せを用いて染色した：抗ＣＤ４^PE／抗ＣＤ８^FITC、抗ＣＤ８^PE／抗ＴＣＲａｂ^FITC、抗ＣＤ４^PE／抗ＴＣＲａｂ^FITC及び抗ＣＤ３^PE／抗ＣＤ２５^FITC。それぞれのボックスで囲んだ集団に入る細胞のパーセンテージを示してある。図３は、一のＩｋａｒｏｓヘテロ接合体の胸腺細胞及び脾臓細胞集団（上段パネル）及び第２の脾臓細胞集団（下段パネル）におけるＶβ使用のフローサイトメトリー分析を描写するグラフである。白いヒストグラムは、イソ型対照用抗体を用いた染色を表している。図４は、血液リンパ球生成における機能のＩｋａｒｏｓ喪失の効果を描写する概略図である。リンパ系列特定化及びＴ細胞ホメオスタシスにおける明確な役割が示されている。図５（Ａ）は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の構造及びすべてのＩｋａｒｏｓイソ型により共有される活性化ドメインを描写する概略図である。（Ｂ）Ｉｋａｒｏｓ活性化ドメインをマップするために用いられたβ−ｇａｌ及び成長アッセイ。図６（Ａ）は、蛋白質−蛋白質相互作用に関与するＩｋａｒｏｓＦ５及びＦ６ドメインを描写する概略図である。（Ｂ）２ハイブリッドアッセイを用いてＩｋａｒｏｓイソ型間の蛋白質−蛋白質相互作用を研究した。（Ｃ−Ｄ）互いに相互作用するＩｋａｒｏｓイソ型の能力を、２９３Ｔ上皮細胞系統にて研究した。図７は、別個のＩｋａｒｏｓイソ型間の蛋白質−蛋白質相互作用が転写におけるそれらの活性を調節することを描写するグラフである。図８は、如何にして別個のＩｋａｒｏｓイソ型間のホモ／ヘテロ２量体複合体形成が血液リンパ球生成系での増殖対分化を制御することができるのかの図解モデルである。図９は、最後の翻訳されるエキソンを標的とすることによるＩｋａｒｏｓ遺伝子の機能的不活性化を描写する概略図である。エキソン７の５’コード領域を包含する１．３５ｋＢのゲノムフラグメントの欠失のターゲティングのための組換えストラテジー。図１０は、細胞蛍光定量分析である。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは、胎児及び成体のＢ細胞発生の両方がブロックされる。Ｅ−１６胎児肝（Ａ）；及び４週齢のＩｋａｒｏｓＣ−／−マウス並びに野生型の同腹子の腹膜（Ｂ）、骨髄（Ｃ）及び脾臓（Ｄ）より得られた細胞を、次のｍＡｂの組合せを用いて分析した：（Ａ）抗ＣＤ４５Ｒ^PE／抗ＣＤ４３^FITC、（Ｂ）抗ＣＤ５^PE／抗ＣＤ４５Ｒ^FI ^TC 、（Ｃ）抗ＣＤ４５Ｒ^PE／抗ＣＤ４３^FITC、（Ｄ）抗ＣＤ４５Ｒ^PE／抗ＩｇＭ^FITC 。陽性に染色された集団をボックスで囲んでパーセンテージを示してある。胎児肝プレＢ細胞前駆体（ＣＤ４５Ｒ⁺）及びそれらの子孫、腹膜のＢ−１ａＢ細胞（ＣＤ５⁺／ＣＤ４５Ｒ⁺）は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスには存在しなかった。骨髄プロＢ細胞及び脾臓Ｂ細胞も又、試験したすべてのＣ−／−マウスから失われていた。図１１Ａは、生後ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺におけるＴ細胞発生を描写する細胞蛍光定量分析である。５日及び３週齢の動物の細胞蛍光定量分析を示してある。生後５日目に、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺は、同齢の野生型胸腺より１００〜３００倍少ない胸腺細胞しか含んでいない。ＣＤ４単一陽性の胸腺細胞の割合の増加は、胸腺細胞発生のこの初期ステージにおいてさえ検出される（上段パネル）。ＣＤ４単一陽性胸腺細胞の割合の増加は、胸腺細胞の総数がほぼ正常レベルに到達した成体のＣ−／−胸腺にて存続する（中段パネル）。単一陽性のＣＤ４及びＣＤ８胸腺細胞は、脾臓に輸出される（下段パネル）。胸腺細胞及び脾臓の集団を、ＦＩＴＣ及びＰＥ結合したイソ型対照用抗体又は抗ＣＤ４^PE及びＣＤ８^FITC で染色した。陽性に染色された集団をボックスで囲んでパーセンテージを示してある。図１１Ｂは、生後ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺におけるＴ細胞発生を描写する細胞蛍光定量分析である。ＣＤ４⁺／ＣＤ８⁺（Ｒ１）、ＣＤ４⁺／ＣＤ８^int（Ｒ２）、ＣＤ４⁺／ＣＤ８⁺（Ｒ３）、ＣＤ４^int／ＣＤ８⁺（Ｒ４）及びＣＤ４^-８⁺（Ｒ５）集団を、ＴＣＲ複合体及び活性化マーカーＣＤ６９の発現について分析した。ＴＣＲ発現のレベルは、野生型とＩｋａｒｏｓ変異体マウスの間で類似した。ＣＤ６９を発現する大多数の野生型の推定の過渡的ステージの胸腺細胞（Ｒ２及びＲ４）と対照的に、対応するＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞集団は、発現しなかった。ＣＤ６９発現の類似の欠如は、単一陽性ＣＤ４変異体胸腺細胞間で認められた（Ｒ３）。対照的に、ＣＤ８単一陽性細胞におけるＣＤ６９のレベルは、野生型に類似した（Ｒ５）。図１２は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスにおけるγδＴ細胞の発生における選択的欠損の描写である。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の涸渇した胸腺細胞（Ａ）及び脾臓集団（Ｂ）及び系列細胞を、それぞれ、γδＴ細胞含量について分析した。γδＴ細胞は、変異体マウスの胸腺において検出されたが、有意に減少したレベルであった。それらは、脾臓中に如何なる測定可能数でも存在しなかった。腸上皮内リンパ球（Ｃ）を、αβ及びγδＴ細胞組成につき分析した。大多数のＩｋａｒｏｓＣ−／−ＩＥＬは、αβＴ細胞であった。測定可能数のγδＴ細胞は、存在しなかった。図１３は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスがＮＫ細胞を欠き且つ胸腺樹状ＡＰＣの発生において欠陥を有するという描写である。ＩｋａｒｏｓＣ−／−及び野生型マウスからの系列涸渇脾臓細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドの成熟ＮＫ細胞にて発現されるＮＫ１．１に対する抗体を用いて染色した（Ａ）。野生型においてはＬｉｎ^-脾臓細胞の３〜５％は、ＮＫ１．１⁺であった。ＩｋａｒｏｓＣ−／−脾臓においてはＮＫ１．１⁺細胞は検出されなかった。破線のヒストグラムは、イソタイプの対照を示し、単純線及び肉太線のヒストグラムは、各野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−脾臓細胞のＮＫ１．１染色を示す。ＩｋａｒｏｓＣ −／一及び野生型対照におけるＮＫ細胞機能を、脾臓細胞を５００単位／ｍｌのＩＬ−２の存在下で４日間培養することにより試験した（Ｂ）。野生型マウスにおいて、これらの条件は、Ｙａｃ−１ターゲットを容易に溶解する活性化ＮＫ細胞を生成することが知られている。野生型マウス由来の脾臓細胞は、広範囲のエフェクター対標的細胞比にわたって、クロム標識したＹａｃ−１を溶解した。対照的に、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウス由来の脾臓細胞は、最も高いエフェクター対標的細胞比においてさえ、ＮＫ標的を溶解することができなかった。ＩｋａｒｏｓＣ−／−及び野生型マウス由来の系列涸渇胸腺細胞を、成熟樹状ＡＰＣ上に発現されたクラスＩＩ及びＣＤ１１ｃ抗原に対する抗体を用いて染色した（Ｃ）。ＣＤ１１ｃ⁺／クラスＩＩ^int-highＡＰＣは、ＩｋａｒｏｓＣ−／−脾臓には存在しなかった。興味深いことに、ＣＤ１１ｃ⁺／クラスＩＩ^high細胞は、存在した。これらの細胞は、抗原提示細胞の成熟の明確なクラス又は状態を表すことができる。図１４は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスにおけるミエロイド及びエリスロイド分化の胎児及び生後の曲線を描写している。Ｅ−１６胎児肝から得られた細胞（Ａ）並びに３週齢の野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの骨髄（Ｂ）及び脾臓（Ｃ）から得られた細胞を、それぞれ、抗Ｍａｃ−１^PE／抗Ｇｒ−１^FITC、抗ＴＥＲ−１１９^PE及び抗ＴＥＲ−１１９^PE／抗ＣＤ６１^FITCを用いて染色した。陽性に染色された集団をボックスで囲んでパーセンテージを示してある。同様のパーセンテージの顆粒球（Ｍａｃ−１＋／Ｇｒ−１＋）細胞が、野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの胎児肝において検出された。この顆粒球集団は、Ｉｋａｒｏｓ変異体マウスの骨髄において有意に減少した。Ｍａｃ−１⁺／Ｇｒ−１^- 細胞（分化決定されたミエロイド前駆体、成熟単球及びマクロファージを含む）のパーセンテージは、Ｉｋａｒｏｓ変異体マウスの脾臓及び骨髄の両方において有意に増加した。分化決定されたエリスロイド前駆体（ＴＥＲ−１１９⁺）のパーセンテージは、ＩｋａｒｏｓＣ−／−及び野生型マウスの胎児及び成体の造血部位において類似していた。図１５は、リンパ球の発生を描写する概略図である。Ｉｋａｒｏｓを伴わないリンパ球の発生：この調節ネットワークにおける必須及び余剰は、胎児及び成体の血液リンパ球の先祖の明確な分子的構成を規定する。ＨＳＣ＝造血幹細胞、ＧＭ＝顆粒球−単球先祖、Ｅｒ＝エリスロイド、ＴＣＲ＝Ｔ細胞レセプター、ＮＫ＝ナチュラルキラー、ＡＰＣ＝抗原提示細胞。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスにおける様々な血液リンパ球系列に沿った発生を研究するために用いられる分化抗原を示してある。矢印は、提示した分化経路を画定する。矢印上の×は、分化のブロックを示す。ＨＳＣを指している垂直の矢印は、胎児対成体ＨＳＣの潜在的に別個の起源を示す。胎児と成体ＨＳＣの間の破線矢印は、推定上の関係を描いたものである。ＣＤ４Ｔ細胞を指している太い矢印は、それらのＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺における過剰生成を示す。Ｔ細胞経路における破線の矢印は、γδ Ｔ細胞の分化における部分的ブロックを記すものである。ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞におけるアスタリスクは、それらの過剰増殖性を記すものである。白色の領域は、胎児及び成体の胸腺の分化を含んでいる。灰色及び黒色の領域は、胎児及び成体の血液リンパ系におけるＩｋａｒｏｓ及びＡｉｏｌｏｓ発現を表す。Ｉｋａｒｏｓ：造血分化のマスターレギュレーター適当な微細環境において、造血幹細胞は、多くの細胞系列の内の１つに分化決定され且つ分化する。この発生経路中の別個のチェックポイントで作用するシグナル変換分子及び転写因子は、初期先祖細胞の運命を特定する。かかる分子は、発生におけるマスターレギュレーターとして作用し、初期の造血の比較的乏しく規定されたステージについてのマーカーとして働くこともできる。このＩｋａｒｏｓ遺伝子は、ディフェレンシャルスプライシングにより、マウス及びヒトの発生中の血液リンパ生成系において差異的（differentially）に発現される少なくとも６つのリンパ系限定されたジンクフィンガー蛋白質をコードしている（Georgopoulos等(1992)Science258:808-812; Molnar及びGeorgopoulos (1994)Mol.Cell Biol.14:8292-8303）。これらのＩｋａｒｏｓイソ型は、それらのＮ末端ジンクフィンガー組成並びにそれら全体のＤＮＡ結合及び転写活性化特性において異なる。Ｎ末端領域に２〜４個のジンクフィンガーモジュールを含むＩｋａｒｏｓ蛋白質の内の４つは、ＤＮＡに差異的に結合して別個の転写活性化及び核局在化特性を示す（Molnar及びGeorgopoulos(1994)Mol.Cell Biol.14:829 2-8303）。２つ未満のＮ末端ジンクフィンガーを有する２つのＩｋａｒｏｓ蛋白質は、高い親和性でＤＮＡと結合することができず、転写を活性化しない（Moln ar及びGeorgopoulos(1994)Mol.Cell Biol.14:8292-8303）。Ｉｋａｒｏｓイソ型のすべては、それらの自動会合を媒介する２つのＣ末端ジンクフィンガーを共有している。これらのＩｋａｒｏｓイソ型間で形成し得る２０のホモ及びヘテロの複合体は、それらのＤＮＡ結合及び転写活性化特性において異なるはずである。これは、発生中のリンパ球における遺伝子発現の多層を調節する遺伝子と矛盾しない。初期胚では、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、造血肝において発現されるが、妊娠中期から後期では、胸腺に限定されてくる。ＩｋａｒｏｓｍＲＮＡを有する他の胚部位は、線条体中の小領域だけである。成体においては、ＩｋａｒｏｓｍＲＮＡは、胸腺及び脾臓においてのみ検出される（Georgopoulos等(1992)Science258:808 -812）。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、非リンパ系細胞において異所的に発現される場合には、転写エンハンサーとして機能する。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、初期リンパ球及びＴ細胞分化において重要な役割を演じる。このＩｋａｒｏｓ遺伝子は、初期胚造血部位において多量に発現され、後期には発生中の胸腺に限定される。胸腺は、脾臓と共に、成体における発現の主要部位である。この高度に富化されたＩｋａｒｏｓ遺伝子の発現は又、初期の及び成熟したＴ細胞及び細胞系統においても見出された。このＩｋａｒｏｓ遺伝子の、胚及び成体のＴ細胞の先祖が初期Ｔ細胞分化抗原の調節ドメインからの転写を活性化するコードされた蛋白質の能力を伴って生じる部位に限定された発現パターンは、Ｔ細胞特定化において決定する役割を支持した。Ｔ細胞個体発生中のＩｋａｒｏｓイソ型の差異的発現、それらの重複するが又ユニークでもある結合特異性及びそれらの多様な転写ポテンシャルは、ステージ特異的なＴ細胞分化マーカーの順序正しい活性化に関与している。発生中のリンパ球における多層の遺伝子発現は、これらのＩｋａｒｏｓ蛋白質の制御下にある。Ｉｋａｒｏｓファミリーのメンバーと他の転写因子との間の共同的相互作用及び／又は競争は、これらの細胞において、定性的に類似する別個の標的部位にて、この複合体を指図し、分化し活性化されたリンパ球における遺伝子発現をずっと変えるよう命ずる。このＩｋａｒｏｓ遺伝子の機能的吟味は、それがリンパ球におけるマスター遺伝子として、並びに初期造血及びＢ及びＴ細胞の発生に関する重要な遺伝的スイッチとして機能することを強く示唆する。最近、初期胎児造血中及び同定可能なリンパ系先祖の出現前に多量に発現されるＩｋａｒｏｓ遺伝子は、マウスのリンパ球生成系の発生に必須であるということが示された（Georgopoulos等(1992)Science 258:808-812及びGeorgopoulos （1994）Cell 78:143-156）。ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合ドメインの突然変異についてホモ接合であるマウスは、成熟Ｔ及びＢリンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のみならず、それらの最初期に同定可能な先祖をも欠いている（Georgo poulos等(1994)Cell 78:143-156）。これらのＩｋａｒｏｓ変異体マウスにおける規定されたリンパ系先祖の完全な不在は、Ｉｋａｒｏｓについての、マウスのリンパ球生成系の発生の非常に初期のステージにおける重大な役割を確実にする。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、ヒトの第７染色体の近腕に、Ｅｒｂｂに隣接して、ｐ１１．２とｐ１３の間にマップされている。マウスでは、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、第１１染色体の近腕に、Ｅｒｂｂに強く連鎖して、マップされている。マウスにおいてＩｋａｒｏｓ遺伝子座に連鎖した他の遺伝子は、白血病阻止因子（Ｌｉｆ）及びオンコジーンＲｅ１（ＮＦＫ−Ｂファミリーの一員）である。マウスにおいてＩｋａｒｏｓに連鎖したこれらの遺伝子の３つすべては、造血系の発生において重要な役割を演じるようである。マウス及びヒトにおけるシンテニック遺伝子座でのＥｒｂｂとＩｋａｒｏｓ遺伝子との間の強い連鎖は、それらの遺伝子構造及び調節と関連し得る。それにもかかわらず、公知の突然変異は、マウスにおいてＩｋａｒｏｓ遺伝子座にマップされなかった。しかしながら、これは、リンパ球形成系に対するＩｋａｒｏｓ遺伝子の重要性を排除しない。免疫系の発生に影響する天然の突然変異は、マウスにおいては、かかる変異体動物が特別注意した条件下でしか成長し得ないので容易に得ることができない。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、リンパ系列の特定化における最初のステップに必要であるだけでなく、Ｔ細胞成熟の一層後期のステージにおいても必要な因子である。一生の最初の一か月の間正常のリンパ球の細胞表面抗原表現型を示す、Ｉｋａｒｏｓ変異についてヘテロ接合であるマウスは、少し後に、Ｔ細胞集団に劇的な変化を受ける。一般的なリンパ球増殖は、胸腺及び末梢において検出される。この増殖には、Ｔ細胞白血病／リンパ腫の発生が続く。Ｔリンパ球のクローン性拡張は、先ず、胸腺で検出され、成熟中の胸腺細胞を新生物トランスフォーメーションのための標的集団として巻き込む。すべてのリンパ系組織中の細胞集団を置き換え且つすべての主な臓器に浸潤するこれらの悪性の胸腺細胞クローンは、単一のＩｋａｒｏｓ野生型対立遺伝子を失っている。Ｉｋａｒｏｓ変異体マウスにおけるリンパ増殖性疾患の開始及び進行は、胸腺及び／又は末梢で起きるＴ細胞レセプターライゲーション事象に従属するものであり得る。この仮説の支持において、１月齢の動物に由来するヘテロ接合の胸腺細胞集団（フローサイトメトリーによれば、正常の表現型であるらしい）は、イン・ビトロで、増大したＴ細胞レセプター媒介の増殖性応答を受け、末梢Ｔ細胞は、自律増殖性である。これらの観察を合わせると、明らかに、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、リンパ系列の特定化のレギュレーターであるだけでなく、Ｔ細胞の増殖性応答及びホメオスタシスをも制御しているということを示している。このＴ系列における漸進的なＩｋａｒｏｓの喪失は、成長制御の漸進的喪失及び成熟する胸腺の悪性トランスフォームと一致し得る。ここに記載の実験は、それ故、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子がリンパ球分化における初期及び後期事象の両方に必要であることを示している（図４）。この発生プロセスの種々のステージにおけるＩｋａｒｏｓ活性の喪失は、劇的に、種々の効果を有する。初期造血先祖におけるＩｋａｒｏｓ活性の欠乏は、そのリンパ系列への分化決定を阻害する（図４）。対照的に、Ｔ細胞成熟の後期ステージにおけるＩｋａｒｏｓ活性の喪失は、Ｔ細胞トランスフォーメーションと強く相関している（図４）。更に、このＩｋａｒｏｓ変異についてヘテロ接合である胸腺細胞及び成熟Ｔ細胞は、機能的に正常でない。胸腺細胞は、増大したＴＣＲ媒介の増殖性応答を示し、末梢Ｔ細胞は、自律増殖性である。これらのリンパ球集団における過剰のリンパ球増殖は、第２のＩｋａｒｏｓ野生型対立遺伝子の喪失により白血病トランスフォーメーションを受けるのに利用することのできる細胞の数を増加させることができる。しかしながら、これらの結果は、Ｉｋａｒｏｓヘテロ接合の喪失及び悪性トランスフォーメーションは、胸腺において起きるが末梢では起きない事象であることを示しており、Ｉｋａｒｏｓ突然変異が、未成熟な胸腺細胞の成長に対して質的に異なる効果（成熟末梢Ｔ細胞に対して）を有することを示唆している。Ｉｋａｒｏｓ活性の別個の域値が、リンパ球発生の種々のステージにおいて必要とされ得る。成熟リンパ球で必要とされるのと比べて一層高いＩｋａｒｏｓ活性の域値が、発生中の胸腺細胞の調節された増殖に必須であり得る。この仮説は、マウス及びヒトの両者において、成熟中の胸腺細胞において検出されるＩｋａｒｏｓｍＲＮＡが末梢Ｔ及びＢ細胞と比較して一層高レベルであることと一致する。最近、Ｉｋａｒｏｓ蛋白質中のＣ末端ジンクフィンガーがそれらの自律的会合を媒介し且つそれらのＤＮＡ結合及び転写活性化ポテンシャルを調節するということが示された。それ故、Ｉｋａｒｏｓの変異した対立遺伝子から生じた蛋白質は、変化したＤＮＡ結合特性を有するヘテロ２量体の野生型のイソ型を封鎖することにより、ドメインネガティブな様式で作用し得る。野生型と変異体Ｉｋａｒｏｓ蛋白質との間の複合体形成は、転写を活性化する前者の能力を邪魔する。ヘテロ接合のリンパ球における野生型−変異体Ｉｋａｒｏｓ複合体の形成のために、Ｉｋａｒｏｓ野生型複合体の濃度は、野生型細胞中に存在するものの１／４にまで減少することが予想される。Ｉｋａｒｏｓ野生型複合体のかかる甚しい減少は、リンパ球の発生を邪魔しないが、リンパ球のホメオスタシスに劇的に影響を与え得る。意味ありげなことには、Ｉｋａｒｏｓヘテロ接合胸腺細胞中の悪性Ｔ細胞クローンの出現は、Ｉｋａｒｏｓヘテロ接合性の喪失と強く相関しており、ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合活性の完全な喪失の結果として又は変異Ｉｋａｒｏｓ蛋白質に帰せられる機能の獲得の結果の何れかとして解釈することができよう。この野生型Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子は、Ｎ末端ＤＮＡ結合ドメイン（Ｉｋ−５及びＩｋ−６）を欠く変異体蛋白質と構造的に似ているスプライシング変異物をコードしている。これらの変異物は、野生型リンパ球では非常に低レベルで発現されている。短いＩｋａｒｏｓイソ型は、発生中の胸腺細胞及び成熟Ｔ細胞における増殖性応答の制御を調節する因子と相互作用することができる。これらの正常に発現される蛋白質の統制解除された発現は、ヘテロ接合体、Ｔ細胞過剰増殖及び悪性トランスフォーメーションにおいて認められるのと類似した表現型を生じ得る。Ｉｋａｒｏｓがヘテロ接合であるマウスについてのこれらの研究から、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、リンパ系列の特定化と引き続くＴ系列における増殖及び分化との両者に対する必須のレギュレーターであるということを結論することができる。胸腺細胞成熟の後期ステージにおけるＩｋａｒｏｓ活性の欠乏は、制御されないリンパ球増殖及び悪性のＴ細胞白血病／リンパ腫の急速な発達へと導く。Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスにおけるリンパ球集団ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合ドメインでの標的にされた欠失は、突然変異について異型接合であるマウスにおけるリンパ球の発生の早期停止へと導く。このＩｋａｒｏｓ突然変異について異型接合であるマウスは、当初は、正常なリンパ球像を示す。したがって、一野生型の欠如、及び一突然変異Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の存在は、Ｔ及びＢ細胞系統の早期の発生を阻害しない。ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合突然変異について異型接合であるマウスは、その生涯の最初の１ケ月間は、胸腺及び脾臓集団で正常な細胞表面表現型を示す（図１）。単独（ＣＤ４⁺ＣＤ８^-及びＣＤ８⁺ＣＤ４^-）及び二重（ＣＤ４⁺／ＣＤ８⁺）に陽性である胸腺細胞と、成熟脾臓Ｔ細胞（ＣＤ４⁺／ＴＣＲａｂ⁺及びＣＤ８⁺／ＴＣＲａｂ⁺）及びＢ細胞（ＣＤ45Ｒ⁺／ＩｇＭ⁺）との数は、その野生型姉妹のそれと同様である。更に、Ｔ及びＢ細胞分化抗原（ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ25、ＴＣＲａｂ、ＣＤ45Ｒ及びＩｇＭ）の発現レベルは、正常である。骨髄集団も、生後１ケ月の異型接合体では一見正常である。しかし、生後２ケ月目と３ケ月目との間で、胸腺区画内に変化が検出される。単独及び二重陽性段階（ＣＤ４⁺／ＣＤ８^lo及びＣＤ４^lo／ＣＤ８⁺）の間の細胞中間体が蓄積し、胸腺細胞集団は、その別個の単独及び二重陽性の態様を失う（図１）。これらの二重陽性の異型接合胸腺細胞の圧倒的多数は、中間的レベルのＴＣＲ複合体を発現する。野生型胸腺では、二重陽性集団の40％が低レベルのＴＣＲ複合体を発現し、それは選択の過程で促進調節されるようになる［Chan et al．（1993）Cell 73: 225-236］。異型接合胸腺に蓄積する、表現型が類似する三重陽性胸腺細胞は、野生型胸腺では、移行期中間体として同じ発生段階から派生し得る。脾臓細胞の数の２〜５倍の増加も、生後２〜３ケ月の異型接合体で観察される。すべての場合に、これは、脾臓におけるＴリンパ球のポリクローナルな膨張に起因した。ある動物では、Ｂリンパ球の数の僅かな増加（２倍未満）も観察された（データは示さず）。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。Ｉｋａｒｏｓ異型接合突然変異マウスを、年齢を合わせた野生型の対照と平行して分析した。混合した遺伝的背景（129ＳＶｘＣ57ＢＬ／６及び129ＳＶｘＢＡＬＢ／Ｃ）で、動物を調べた。胸腺、脾臓、リンパ節及び骨髄からのリンパ球を、以前に記載のとおり調達した［Georgopoulos et al．（1994）Cell 78: 143-156］。細胞を、完全培地（ 10％ウシ胎児血清、２mMのＬ−グルタミン、５ｘ10^-5モルのｂ−メルカプトエタノール及び50mg／mlのゲンタマイシンで強化したＲＰＭＩ1640）中で２回洗浄し、計数し、約0.5〜１ｘ10⁶細胞／30mlとして再懸濁させた。細胞のアリコートを 96穴プレートに採り（30ml／ウエル）、等量の、ＰＢＳへの正常ラット血清の１：20希釈液を用いて氷上で30分間ブロックし、次いで、フィコエリトリン（ＰＥ）及びフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を結合したモノクローナル抗体とともに30分間温置した。次いで、細胞を３回洗浄し、固定し（ＰＢＳへの１％パラホルムアルデヒド、0.5％ＢＳＡ及び0.05％アジ化ナトリウム）、４ ℃で貯蔵した。一色及び二色のフローサイトメトリー分析を、あるFACScan（Bec ton-Dickinson，San Jose，CA）で実施した。イソタイプ適合対照抗体を負の対照として用いた。各試料について、５千〜１万の細胞を分析した。系統特異的分化抗原に対する下記の抗体（カッコ内）を用いた（別途指示がない限り、抗体は PharMingenから入手した）：赤血球（ＴＥＲ−119）、Ｍａｃ−１（Ｍ１／70.15 ，Caltag）、Ｇｒ−１（ＲＢ６−８Ｃ５）、ＣＤ45Ｒ（ＲＡ３−６Ｂ２）、ＩｇＭ（Ｒ−６−60.2）、ＣＤ８（53−6.7及び53−5.8）、ＣＤ３−ｅ（145−２Ｃ1 1）、ＣＤ４（ＲＭ−４−４）、ＣＤ25（７Ｄ４）、ＴＣＲａｂ（Ｈ57−597）、Ｖｂ２（Ｂ20.6）、Ｖｂ３（ＫＪ−25）、Ｖｂ5.1，5.2（ＭＲ９−４）、Ｖｂ６（ＰＲ４−７）、Ｖｂ8.1，8.2（ＭＲ５−２）、Ｖｂ９（ＭＲ10-２）、Ｖｂ10 （Ｂ21.5）、Ｖｂ11（ＰＲ３−15）、Ｖｂ12（ＭＲ11−１）、Ｖｂ13（ＭＲ12− ３）、Ｖｂ14（14−２）及びＶｂ17a（ＫＪ−23）。Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスにおける胸腺細胞及び末梢Ｔ細胞の増殖性応答表現型が正常なＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの胸腺集団は、Ｔ細胞受容体を介した強い増殖性応答を示す。極めて対照的に、野生型マウスからの胸腺細胞は、この方式で誘発すると弱く応答する。ＴＣＲと共受容体との複合体の発現レベルは、健康なＩｋａｒｏｓ異型接合胸腺細胞と野生型のそれとで類似すると思われることから、ＴＣＲ複合体のシグナリングの下流は、これらの細胞では失調しているはずである。分化の別個の段階に胸腺細胞を送り込むには、ＴＣＲ複合体の一時的な結合が必要である（Anderson及びPerlmutter、1995年の総説）。ＣＤ４^- ／ＣＤ８^-二重陰性胸腺細胞へのプレＴＣＲ複合体の結合は、ＣＤ４⁺／ＣＤ８⁺ 二重陽性段階へのそれらのクローンの膨張と分化とを仲介する。対照的に、二重陽性胸腺細胞の表面でのＴＣＲ複合体の差別的架橋結合は、アポトーシスによる細胞死（負の選択）、又は膨張なしの単独陽性段階への成熟（正の選択）のいずれかを仲介する。誘発された胸腺細胞をどの運命、すなわち生又は死が待っているかは、異なるエフェクター分子を通じて導入されたシグナルに依存し得る。成熟Ｔ細胞の活性化の際に作動するのと類似のシグナリング回路は、この過程を仲介し得る。シグナリング分子の失調した発現又は活性が、Ｉｋａｒｏｓ異型接合胸腺細胞の増強された増殖性応答の基盤であり得る。胸腺細胞集団の変化は、末梢でのリンパ球の細胞表面抗原の発現でのいかなる変化よりも前に検出される。ＴＣＲ複合体を発現する中間的な二重陽性細胞（ＣＤ４⁺／ＣＤ８^lo／ＴＣＲ^int及びＣＤ８⁺／ＣＤ４^lo／ＴＣＲ^int）が、支配的集団になる。野生型胸腺中に少数で存在する中間的胸腺細胞の集団は、単独陽性段階へと移行中であり、選択の過程にあると思われる。二重陽性の胸腺細胞の正常な成熟の際は、ＴＣＲ複合体の促進調節が、その共受容体の一つの同時的な抑制調節とともに生じる。不適切なＴＣＲ発現がある細胞は、アポトーシスによって死ぬ運命にある。二重陽性から単独陽性への段階の移行を制御する過程の失調は、Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスにおける二重陽性胸腺細胞の中間体の蓄積へと導き得る。この細胞集団での追加の遺伝学的事象（すなわち、第二Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の喪失）は、それらの形質転換へと導き得る。生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの末梢Ｔ細胞も、異常な増殖特性を示す。脾臓Ｔ細胞は、in vitroで培養したときに自己増殖し、ＴＣＲ複合体を通じて刺激したときは、野生型対照細胞より高レベルの³Ｈチミジン取込みを示す。これは、胸腺選択過程の破壊による、末梢での自己免疫Ｔ細胞の蓄積に起因する可能性がある。形質転換されなかった異型接合末梢Ｔ細胞の異常な増殖は、活性化されたＴ細胞の排除を仲介する死の経路の潜在的損傷とともに、生後２〜３ケ月の異型接合体でしばしば検出される、脾臓の大きさの程々の増加を説明し得る。このポリクローナルＴ細胞の増殖は、より年長の異型接合マウスでの脾臓の大きさの大規模な増加の原因である悪性Ｔリンパ球のクローン膨張に先行する。上記に考察したＩｋａｒｏｓ異型接合胸腺細胞と末梢Ｔ細胞との増殖性応答を、胸腺細胞像の最初の変化の前に決定した。生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合体と野生型の対照とからの胸腺細胞及び脾臓細胞を、ＴＣＲ複合体のｂ鎖の不変部領域に対して誘導した抗体で被覆したウエルに異なる濃度で接種した。ＴＣＲ刺激の48時間後に、異型接合胸腺細胞は、増殖性応答の尺度である³Ｈチミジン取込みの、基底（ｈＩｇＧ）に比しての劇的な増加を示した（表１Ａ）。³Ｈチミジン取込みの平均して200倍の増加が検出された。極めて対照的に、同じ条件下で、野生型胸腺細胞は、低い増殖性応答を示した（基底の平均7.7倍の³ Ｈチミジン取込み）（表１Ａ）。異型接合脾臓細胞は、ＴＣＲ刺激（ｈＩｇＧ）の不在下でも増殖した。³Ｈチミジン取込みは、野生型の対照脾臓細胞で観察されたのより平均2.6 倍多かった（表１Ｂ）。ＴＣＲ刺激の際は、異型接合脾臓細胞も、野生型の対照より高レベルの³Ｈチミジンを取り込んだ（表１Ｂ）。しかし、異型接合脾臓細胞の比較的高い基底増殖を考慮すると、それらの平均刺激指数は、野生型と同様であった。野生型及び異型接合体の脾臓細胞では、基底に比して、それぞれ平均27及び35倍の³Ｈチミジン取込みが検出された（表１Ｂ）。異型接合及び野生型の脾臓Ｔ細胞の増殖性応答のこれらの差は、平均して類似する、これらの器官でのＴ細胞の絶対数の差によっては説明できない。１ケ月の胸腺で観察された、ＴＣＲ刺激に対する異常な増殖性応答が、成熟中の二重陽性集団の固有の性質であるか否かを決定するため、17.5日目の胎児の胸腺を試験した。胎児の発生のこの段階では、胸腺細胞は、均質な二重陽性集団として存在し、検出できる単独陽性細胞は、皆無である。これらの二重陽性の胎児胸腺細胞は、ＴＣＲ再配置を完了する過程にあり、これらの細胞の下位画分、すなわちフローサイトメトリーで測定した限りで約10％（データは示さず）は、低レベルのＴＣＲａｂを発現する。異型接合の胎児胸腺細胞も、それらの野生型姉妹からの胸腺細胞に比して高レベルの³Ｈチミジン取込みを示した（表１Ｃ）。しかし、異型接合の胎児胸腺細胞の増殖性応答の強さは、生後１ケ月の異型接合胸腺細胞で観察されたそれより劇的ではなかったが、おそらく、17.5日目の胎児胸腺中のＴＣＲ陽性細胞の百分率の方が低いためである。生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合体（＋／−）と野生型（＋／＋）のマウスからの胸腺細胞（Ａ）及び脾臓細胞（Ｂ）、並びに17.5日目の胚の胸腺細胞（Ｃ）の増殖活性を、プレートに結合した抗ＴＣＲａｂ、又はハムスターＩｇＧイソタイプの対照抗体（基底と考える）に応答して取り込まれた³Ｈチミジンの毎分カウント数（cpm）によって表わす。（Ａ）及び（Ｂ）については、独立した５下位の実験の結果を、それぞれ三重の培養の平均を表わす値で示す。培養体あたりの細胞数は、２〜４ｘ10⁵の範囲にわたった。（Ｃ）については、一回の実験からの結果を、それぞれ、10⁵細胞／培養体を有する二重の培養の平均を表わす値で示す。基底に対する刺激の比＝プレートに結合した抗ＴＣＲａｂに応答して取り込まれた³Ｈチミジン／ハムスターのＩｇＧイソタイプの対照に応答して取り込まれた³Ｈチミジンである。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。平底９６穴微量滴定プレートを、20mg／mlの抗ＴＣＲａｂモノクローナル抗体（Ｈ57−597、Pharmingen）又はハムスターＩｇＧイソタイプの対照抗体（Pharmingen）で、４℃で終夜被覆した。Ｉｋａｒｏｓ異型接合体と、年齢を合わせた野生型対照動物とから器官を無菌的に取り出し、上記のとおり単細胞懸濁液を作成した。細胞を、10％ウシ胎児血清、２mMのＬ−グルタミン、５ｘ10^-5モルのｂ−メルカプトエタノール及び 50mg／mlのゲンタマイシンで強化したＲＰＭＩ1640への異なる二様の細胞濃度（ 0.5〜４ｘ10⁵細胞／ウエル）で三重に接種した。胚の研究については、10⁵細胞／ウエルを二重に接種した。48時間後、細胞を仕込み、２mCi／ウエルの³Ｈメチルチミジンで６〜12時間パルス標識した。次いで、自動細胞採集装置（Harveste r 96、TomTec）を用いて、細胞をフィルターに移し、1205Betaplateシンチレーション計数装置（Wallace）で計数した。白血病／リンパ腫は、Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスに必ず発症する生後３〜６ケ月の間に、調べたＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの100％が、致命的な白血病／リンパ腫を発症した。悪性のリンパ芽球性のＴ細胞クローンが、リンパ組織の正常な細胞に取って代わる。しかし、クローンＴ細胞集団の外殖は、胸腺で最初に検出され、形質転換の標的は、二重陽性から単独陽性への段階の移行の際に不適切な増殖性応答を生じた胸腺細胞であるという仮説を裏付ける。異常なＴ細胞クローンはすべて、ＣＤ３／ＴＣＲａｂ複合体を発現するが、異なる動物に別個のＴＣＲ特異性が出現し、形質転換の事象が確率論的であることを示唆する。ＣＤ25（ＩＬ−２受容体ａ鎖）活性化マーカーも、これらのリンパ芽球性Ｔ細胞で発現されるが、その百分率は、動物間で変動し、リンパ芽球性クローンＴ細胞によるリンパ系器官の完全な支配によって定義されるような、疾病の後期で最高である。これらの細胞の表面でのＣＤ25活性化マーカーの発現は、これらの細胞では、おそらく、自己分泌経路が活性化されていることを示唆し、ヒト白血病のいくつかの症例で報告されたそれらの自律増殖を裏付ける。これらの悪性Ｔ細胞の自律増殖と腫瘍形成の特性とは、養子免疫伝達によって確認された。ヌードマウスへの移入後直ちに、移入された細胞と同じ細胞表面表現型及び遺伝学的構成を有する細胞を含むリンパ系腫瘍が形成された。Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスでのＴ細胞リンパ腫／白血病の遺伝学的解析は、これらの細胞での野生型Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の喪失を明らかにした。核型分析は、染色体の正常な定数を示した。したがって、野生型Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の喪失は、二つの突然変異した染色分体の有糸分裂の際の不法な分離か、遺伝子転換の事象か、又はＩｋａｒｏｓ遺伝子の欠失による。これらのいずれの場合も、野生型Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の喪失は、異型接合胸腺細胞の悪性の形質転換に直接結び付いている可能性がある。これに代えて、Ｉｋａｒｏｓ異型接合性の喪失は、これらの細胞に増殖上の利点を与え、それらは、形質転換する前に追加の遺伝学的事象を経験する可能性がある。ｐ53及び網膜芽細胞腫の腫瘍抑制遺伝子に突然変異がある細胞における異型接合性の喪失は、腫瘍形成状態へのそれらの進行とも符合する。生後数ケ月の直後に、調べたＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの100％が、視認できるリンパ腺病態を発症した。頚部、腋窩及び腸間膜リンパ節は、正常な大きさのおよそ20〜50倍に肥大している。加えて、これらのマウスは巨脾症を発症する。脾臓細胞数の平均10倍の増加があり、脾臓は、腹腔内の支配的器官としての外見を呈する。胸腺も肥大し、その明確な二葉性の形態を失う。これらのリンパ系器官の組織学的検査は、大型のリンパ芽球性リンパ球の均一な集団の蓄積によって生じた、正常な構造の消滅を明らかにした。皮質−髄質構造の完全な削除が胸腺で観察される。脾臓の白色髄域の増加と赤色髄域の減少とが一貫して観察された。Ｂリンパ小節はもとより皮質及び髄質領域も、リンパ節に不在であった。これらの動物の末梢血には、非常に多くの循環リンパ球も認められた。これらの細胞は、外見がリンパ芽球様であり、大型の核を微細な染色質構造、傑出した仁、及び乏しい細胞質とともに有した。冒されたＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの非リンパ系器官も、リンパ芽球様細胞に大規模に浸潤された。リンパ増殖症候群のＩｋａｒｏｓ異型接合マウスの肝及び腎臓は、青白く、大きさが増大した。肝、腎及び肺の切片の組織学的検査は、リンパ芽球様細胞の蓄積する数によって、それらの正常な組織構造の完全な削除を明らかにした。これらのリンパ球による大規模な侵襲は明白であった。同じＩｋａｒｏｓ突然変異を有する二つの無関係の胚幹（ＥＳ）細胞系から誘導された異型接合動物では、リンパ増殖症候群及び白血病／リンパ腫が同じ頻度で出現する［Georgopoulos et al．（1994）Cell 78: 143-156］。意義深いことに、中ないし高レベルのＩｋａｒｏｓＥＳ細胞の寄与があるキメラ動物も、その疾病を発症するが、異型接合集団と比較すると、約２ケ月の遅延期間がある。２系統のＩｋａｒｏｓ異型接合マウスとＩｋａｒｏｓキメラとでの白血病／リンパ腫の発症は、根拠となる機序にＩｋａｒｏｓ突然変異が介在するという仮説を証明する。実験は、基本的には下記のとおり実施した。安楽死させた野生型及びＩｋａｒｏｓ突然変異のマウスから採集した組織を、４％緩衝ホルマリンで固定し、処理し、パラフィンに包埋した。切片を５mmの厚さに切り、スライドガラスに載せ、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。光学検鏡を、Olympus BMax-50の顕微鏡で20ｘ〜600ｘの倍率で実施した。成熟し、活性化されたＴ細胞の均質集団は、すべてのリンパ系器官で支配的である冒されたＩｋａｒｏｓ異型接合マウスのリンパ球集団の表現型を、フローサイトメトリーによって決定した。これらの動物の胸腺、リンパ節、脾臓及び骨髄から得た細胞を、多数の初期及び後期リンパ球分化マーカーに対する抗体を用いて分析した。骨髄を包含するすべてのリンパ系器官に蓄積するリンパ球は、分析したすべての動物でＴ細胞であった。これらのＴ細胞は、大型で（前方散乱像によって決定した限りで）、ＣＤ３／ＴＣＲａｂ複合体を発現した（図２）。蓄積Ｔ細胞集団の共受容体組成は、与えられた動物の中では均一であったが、マウス間では異なった（図２、ＭＵ１及びＭＵ２）。ＣＤ８⁺／ＴＣＲ⁺集団が最高頻度で出現したが（動物の14／23）、ＣＤ４⁺／ＴＣＲ⁺（動物の２／23）、ＣＤ４⁺／ＣＤ８⁺／ＴＣＲ⁺（動物の４／23）及びＣＤ４^-／ＣＤ８^-／ＴＣＲ⁺（動物の３／23）も検出された。異常なＴ細胞集団の５〜100％が、ＣＤ25（ＩＬ−２受容体ａ鎖）活性化マーカーを発現した（図２）。この集団内の、より高い百分率のＣＤ25⁺は、疾病の後期との強い相関関係があった。異常Ｔ細胞集団は、ＩＬ−２の存在下では、in vitroで無限に増殖させることができた。いくつかの場合で、これらの細胞は、加えた成長因子の不在下でも増殖した。Ｂ細胞集団は、冒された動物の脾臓、リンパ節又は骨髄で検出できなかった。脾臓と骨髄との赤血球及び骨髄球区画の大きさの相対的減少も、認められた（図２Ｂ）。急速に蓄積するリンパ芽球性Ｔ細胞による、Ｂ細胞区画と引き換えのこれらの器官のリンパ領域の支配は、これらの結果を説明すると思われ、これらのマウスでのリンパ系組織の均一な組織学的外見との相関関係がある。異常Ｔ細胞集団は、クローン的性質であり、胸腺に現われる分析した異常Ｔ細胞集団のすべてがＴＣＲａｂ複合体を発現したことから、それらのＴ細胞受容体組成を調べることによって、そのクローン性を決定した。この分析は、二つの方法で実施した。これらのＴ細胞集団でのＤｂ−Ｊｂのセグメント再配置を定義することによって、Ｔ細胞受容体ｂ鎖遺伝子の構造を調べた［例えば、Anderson et al．（1992）EMBO J 11:4866-4877を参照されたい］。加えて、細胞表面でのＶｂ発現を、フローサイトメトリーによって研究した。七つのＤｂ２−Ｊｂ２再配置、及びｂ鎖遺伝子の生殖系列配置に対応する一帯域が、野生型と、生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合とのマウスからの胸腺細胞及び脾臓細胞で検出された。これらの結果は、これらの器官での胸腺細胞と成熟Ｔ細胞との集団の通常はポリクローナルである性質を反映する。胸腺と脾臓との間で検出されたＤｂ２−Ｊｂ２組成の差は、定住する細胞集団の差を反映する。脾臓のｂ鎖の遺伝子座での生殖系列配置に対応する帯域の強度の増大は、この器官に通常存在する非Ｔ細胞集団の存在に対応する。逆に、より年長のＩｋａｒｏｓ異型接合マウスのＴ細胞集団は、一つ又は二つの支配的なＤｂ２−Ｊｂ２再配置を示したが、それは胸腺と脾臓との双方で同じであった。これらの異常Ｔ細胞のクローン性も、ＴＣＲＶｂ領域に特異的な一群のモノクローナル抗体を用いて、細胞表面ＴＣＲＶｂの発現を決定することによって調べた。図３に示した二つの代表的な例では、Ｔ細胞の大多数は、単一のＶｂ特異性を有した。１体の動物では、胸腺及び脾臓のＴ細胞集団の90％が、Ｖｂ5.1，5.2 を発現したのに対して、第二の動物では、脾臓細胞のみ分析したにすぎなかったが、細胞の80％がＶｂ11を発現した。第三の動物では、胸腺及び脾臓の異常Ｔ細胞は、Ｖｂ３を発現した（データは示さず）。まとめると、これらの結果は、これらの攻撃的に増殖するＴ細胞集団のクローン性の起源を強く暗示する。これらの悪性Ｔ細胞クローンが最初に発生する起源を決定するために、切開する前はリンパ増殖の視認できる発現のない、生後２〜３ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合体のリンパ球集団を分析した。クローンＴ細胞集団の膨張の後、やはり胸腺及び脾臓におけるＤｂ２−Ｊｂ２再配置の範囲を調べた。クローンＴ細胞集団の外殖は、Ｄｂ２−Ｊｂ２再配置の範囲の減少として発現し、胸腺では明らかであるが、脾臓では明らかでない。これらの結果は、悪性の胸腺起源を示唆する。実験は、基本的には下記のとおり実施した。以前に記載のとおり［Laird et a l．（1991）Nuc．Acids Res．19: 4293］、胸腺細胞及び脾臓細胞からＤＮＡを調製した。Rodewaldら（1994）が記載したとおりにＰＣＲを実施したが、下記の変更を加えた。35周期にわたって、試料を変性させ（94℃、45秒）、アニールし（63℃、45秒）、そして伸長させた（72℃、１分）。各試料からのアリコートを、1.2％アガローストリス−ホウ酸−ＥＤＴＡゲル上で電気泳動させ、0.4モルＮａＯＨ中でHybond-Ｎ＋（Amersham）の膜にブロットした。サザン分析のためのプライマー（Ｄｂ2.1及びＪｂ2.7）及び内部プローブ（ＤｂＩＮＴ）として用いた合成ヌクレオチドの配列（5'〜3'）は、下記のとおりである：Ｄｂ2.1 ：GTA GGC ACC TGT GGG GAA GAA ACT （SEQ ID NO:１）Ｊｂ2.7 ：TGA GAG CTG TCT CCT ACT ATC GATT （SEQ ID NO:２）ＤｂＩＮＴ：ATT GTG GGG ACT GGG GGG GC （SEQ ID NO:３）生殖系列配置のための期待されたＰＣＲ産物は、1,858塩基対であり、Ｄｂ2.1 からＪｂ2.1、Ｊｂ2.2、Ｊｂ2.3、Ｊｂ2.4、Ｊｂ2.5、Ｊｂ2.6 又はＪｂ2.7のいずれかへの再配置のためのそれは、1,279〜224塩基対である。増幅したＰＣＲ産物はすべて、内部オリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイズさせて、それらの特異性を確認した。分析したＤＮＡは、野生型、生後１ケ月の異型接合体、生後２〜３ケ月の異型接合体３体、及び視認できるリンパ増殖疾患を有する生後３ケ月を超える異型接合体４体からの胸腺及び脾臓であった。用いた分子量マーカーは、１kBのＤＮＡラダー（Gibco ＢＲＬ）であった。Ｉｋａｒｏｓ異型接合マウスからのクローンＴ細胞集団は、ヌードマウスにリンパ系腫瘍を容易に形成する白血病／リンパ腫を有するＩｋａｒｏｓ異型接合体の胸腺から単離したＴ細胞を、ヌード／ベージュの遺伝的背景のマウスに皮下注射した。局所的な腫瘍外殖の最初の徴候は、注射後第１週で認められた。第３週までには、腫瘍は直径２〜３cmにまで成長した。この時点で、動物を犠牲にし、腫瘍とともに、ある場合には脾臓、骨髄及びリンパ節集団をフローサイトメトリーによって分析した。腫瘍から単離した細胞は、注射したＴ細胞と同じ細胞表面表現型（ＣＤ４^-ＣＤ８⁺ＴＣＲａｂ⁺ＣＤ25⁺）であり、同じ単一Ｄｂ２−Ｊｂ２再配置を示した。加えて、この同じＴ細胞集団は、これらのヌードマウスの脾臓、リンパ節及び骨髄で支配的であった。Ｉｋａｒｏｓ異型接合体からのクローンＴ細胞集団が、皮下注射によって容易に腫瘍を形成できることと、宿主のリンパ系器官の正常な細胞集団に侵入かつ置き換わり得ることとは、その悪性の性質を立証する。実験は、基本的には下記のとおり実施した。リンパ増殖症候群を有する生後３ケ月を超える異型接合体と、野生型の対照マウスとから、胸腺を、以前に記載のとおり、無菌的に調達した。細胞を、Ｎ：ＮＩＨ-bg-nu-xidＢＲの遺伝的背景のヌードマウス（Charles River）に皮下注射した。マウスを、それぞれ５体の動物からなる３群に分けた。一群には２ｘ10⁶の、第二群には６ｘ10⁶の異型接合胸腺細胞を、そして第三群には６ｘ10⁶の野生型胸腺細胞を与えた。以前に記載のとおり、モノクローナル抗体の下記の組合せで染色することによって、細胞表面表現型を決定した：抗ＣＤ４^PE／抗ＣＤ８^FITC、抗ＣＤ８^PE／抗ＴＣＲａ^FITC 、抗ＣＤ４^PE／抗ＴＣＲａｂ^FITC、及び抗ＣＤ３^PE／抗ＣＤ25^FITC。悪性Ｔ細胞クローンにおけるＩｋａｒｏｓ異型接合性の喪失野生型及び／又は突然変異の対立遺伝子によって発生したＩｋａｒｏｓイソ型の発現を、健康な、及び疾病の異型接合マウスのリンパ系集団で分析した。以前に記載のとおり［Molnar and Georgopoulos（1994）Mol．Cell Biol．14:8292-8 303］、ＲＴ−ＰＣＲを用いて、生後１〜３ケ月の動物の胸腺及び脾臓でのＩｋａｒｏｓ野生型と突然変異体とのメッセージの発現を調べた。突然変異体と野生型の双方の対立遺伝子から生成されたＩｋａｒｏｓ転写物が、生後１ケ月の異型接合マウスの胸腺及び脾臓で検出された。しかし、白血病／リンパ腫の異型接合マウスからのリンパ系器官と、ヌードマウス腫瘍からの細胞とでは、Ｉｋａｒｏｓ突然変異対立遺伝子から誘導された転写物のみが検出されたにすぎない。この結果が、より短い突然変異ｃＤＮＡの優先的増幅によるものである可能性を排除するために、野生型ｃＤＮＡのみを増幅する異なるセットのプライマーを用いた。これらのプライマーでは、増幅産物が全く検出されず、野生型Ｉｋａｒｏｓのメッセージは、これらの悪性Ｔ細胞では発現されないことが示唆された。野生型Ｉｋａｒｏｓ転写物は、生後２〜３ケ月の異型接合体の胸腺で、最初に検出されたのに対し、これらのマウスの脾臓及び骨髄は、野生型及び突然変異の形態をともに発現した。Ｉｋａｒｏｓ野生型対立遺伝子からの胸腺による発現のこの見かけの欠如は、この器官でのクローンＴ細胞集団の蓄積と符合する。これらの細胞でのＩｋａｒｏｓタンパク質発現に関する研究は、これらの結果を確認した。実験は、基本的には下記のとおり実施した。野生型及び突然変異のマウスからの胸腺と脾臓とから調製した総ＲＮＡの逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）分析を、以前に記載のとおり［Molnar and Georgopoulos（1994）Mol．Cell Biol．14:82 92-8303］実施したが、下記の変更を加えた。35周期にわたって、試料を変性させ（94℃、15秒）、アニールし（60℃、20秒）、そして伸長させた（72℃、30秒）。各組織から調製したｃＤＮＡの相対濃度を、生成物増幅の線形の範囲内で多数の周期にわたってＧＡＰＤＨｃＤＮＡを増幅すると思われた１セットのプライマーを用いて決定した。調整した量のｃＤＮＡを、欠失領域の内側及び外側のエキソンに由来する４セットのプライマーで、35周期にわたって増幅した。プライマーのこれらのセットすなわちＥｘ２Ｆ／Ｅｘ７Ｒ、Ｅｘ２Ｆ／Ｅｘ６Ｒ、Ｅｘ３Ｆ／Ｅｘ７Ｒ、Ｅｘ４Ｆ／Ｅｘ７Ｒは、Ｉｋａｒｏｓ転写物によるエキソンの用法の決定を可能にする。プライマーとして用いた合成オリゴヌクレオチドの配列（５’〜３’）は、下記のとおりである：Ｅｘ２Ｆ：CAC TAC CTC TGG AGG AGC ACA GCA GAA（SEQ ID NO:４）Ｅｘ３Ｆ：AGT AAT GTT AAA GTA GAG ACT CAG（SEQ ID NO:５）Ｅｘ４Ｆ：GGT GAA CGG CCT TTC CAG TGC（SEQ ID NO:６）Ｅｘ６Ｒ：TCT GAG GCA TAG AGC TCT TAC（SEQ ID NO:７）Ｅｘ７Ｒ：CAT AGG GCA TGT CTG ACA GGC ACT（SEQ ID NO:８）。Ｉｋａｒｏｓ異型接合体のリンパ系器官で発現されたＩｋａｒｏｓ転写物のＲＴ−ＰＣＲ分析も、実施した。生成物の予測された大きさは下記のとおりである：Ｉｋ−１、750bp；Ｉｋ−２、490bp；Ｉｋ−４、365bp；突然変異ＩＫ−１及びＩｋ−２、325bp；及び突然変異Ｉｋ−４、200bp［Gergopoulos et al．（199 4）Cell 78: 143-156に記載のとおり］。分析したｃＤＮＡは、生後１ケ月の野生型、１ケ月の異型接合体、２ケ月の異型接合体、３ケ月の異型接合体、ヌードマウスのＴ細胞腫瘍、Ｉｋａｒｏｓ異型接合体の胸腺、脾臓及び骨髄、並びにＤＮＡなしの対照のものであった。リンパ増殖疾患の視認できる身体的発現を有する、生後３ケ月より年長の動物４体の胸腺、脾臓及び骨髄からの細胞は、プールした。Ｉｋａｒｏｓ野生型対立遺伝子が、依然として健全であるか否かを決定するため、サザン分析によってＩｋａｒｏｓ遺伝子座の構造を調べた。白血病／リンパ腫のマウスの胸腺からのＤＮＡを分析したとき、突然変異Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座に由来する、13.5kBの単一のBamHIフラグメントが検出された。この突然変異ゲノムのフラグメントは、これらの動物の脾臓から調製したＤＮＡでも支配的であった。これらのマウスの脾臓で検出された、野生型遺伝子座に由来する18.5kBの BamHIフラグメントの低レベルは、この器官での少数集団を提示する赤血球及び骨髄球性の細胞によって説明することができる。野生型Ｉｋａｒｏｓ対立遺伝子の喪失は、ヌードマウス腫瘍からの細胞でも明白であった。しかし、ポリクローナルの胸腺細胞及び脾臓細胞集団を有する（ＴＣＲＤｂ−Ｊｂ再配置によって決定した限りで）生後３ケ月の異型接合体では、野生型及び突然変異のＩｋａｒｏｓ対立遺伝子が、これらのリンパ系器官の双方で類似のレベルで検出された。実験は、基本的には下記のとおり実施した。上記のとおり、胸腺細胞及び脾臓細胞からＤＮＡを調製した。消化は、BamHIを用いて37℃で終夜実施した。試料を、0.5％アガローストリス−ホウ酸−ＥＤＴＡゲル上で、50Ｖで終夜電気泳動させ、Hybond−Ｎ＋（Amersham）の膜に移した。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子のエキソン２と３との間のイントロン配列からなる870bpのフラグメントをプローブとして、フィルターを検索した［Georgopoulos et al．（1994）Cell 78: 143-156］。Ｉｋａｒｏｓドメインの分析Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、別個のＤＮＡ結合特性を有する亜鉛フィンガータンパク質の一族をコード化している。ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合ドメインでの欠失は、この突然変異について同型接合であるマウスにリンパ球の発生の早期停止を生じる。加えて、Ｉｋａｒｏｓ異型接合体は、致命的なＴ細胞白血病及びリンパ腫を急速に発症する。突然変異及び野生型の対立遺伝子が生成する別個のＩｋａｒｏｓイソ型は、それらの安定的な相互作用を（ＤＮＡの不在下で）仲介し、細胞内でのそれらの局在を指図する、亜鉛フィンガーのモチーフをＣ末端に共有している。健全なＤＮＡ結合ドメインを有するＩｋａｒｏｓイソ型間のホモ及びヘテロ二量体形成は、それらの結合親和性及び転写活性化能を強く刺激する。極めて対照的に、ＤＮＡ結合ドメインを保有しないＩｋａｒｏｓタンパク質と保有するそれとの間の相互作用は、後者が転写に参加できる能力を、優性陰性の方式で干渉する。機能的に別個のＩｋａｒｏｓイソ型間の調節された発現と相互作用とは、発生中の造血リンパ系での増殖か分化かを決定する。胎児及び成体の造血リンパ系での発現が制限されたＩｋａｒｏｓ遺伝子は、マウスリンパ系のすべての系統の発生に不可欠である。それは、交互スプライシングによって、少なくとも７種類の機能的に別個の亜鉛フィンガー含有タンパク質をコード化する［Molnar and Georgopoulos（1994）Mol．Cell Biol．14:8292-8 303、参照により本明細書に組み込まれる］。これらのイソ型のうち４種類（Ｉｋ−１、Ｉｋ−２、Ｉｋ−３及びＩｋ−４）は、２〜４個の亜鉛フィンガーのモチーフをＮ末端ドメインに有し、中核モチーフのGGGAを共有する。しかし、それらの全体的な配列特異性と、ＤＮＡと結合する親和性とは別個である。４種類の差別的に利用されるＮ末端亜鉛フィンガーとは対照的に、高親和性ＤＮＡ結合に関与しない２種類のＣ末端フィンガーのモチーフは、すべてのＩｋａｒｏｓイソ型に共有される。Ｉｋａｒｏｓイソ型のうち３種類（Ｉｋ−５、Ｉｋ−６及びＩｋ−７）は、不可決のＮ末端亜鉛フィンガーを欠くが、Ｃ末端のを欠くことはなく、ＤＮＡと結合しない。マウス生殖系列での４種類のＮ末端亜鉛フィンガーのうち３種類をコード化している２エキソンを標的にした欠失は、リンパ球発生の早期の、かつ完全な停止を招いた。Ｉｋａｒｏｓ同型接合の突然変異マウスは、成熟Ｔ及びＢリンパ球とＮＫ細胞ばかりでなく、最も早期に画定されたリンパ系始原細胞も欠く。極めて対照的に、このＩｋａｒｏｓ突然変異について異型接合であるマウスは、Ｔ細胞の表現型の白血病及びリンパ腫を急速に発症する。生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ異型接合体の胸腺細胞は、正常な細胞表面表現型を有するが、Ｔ抗原受容体の結合後に、in vitroリンパ増殖性応答の増強を生じる。分娩後２ケ月目と３ケ月目との間の胸腺細胞像の劇的な変化は、それらのＴ抗原受容体を介したin vivo刺激と一致する。その後の胸腺における悪性Ｔ細胞クローンの蓄積は、Ｉｋａｒｏｓ異型接合性の喪失と同時に発生する。したがって、胸腺細胞を成熟させるＩｋａｒｏｓ活性の進行性の喪失が、休止期から増殖期、更には形質転換期への段階的な移行の根底にある。異型接合胸腺細胞の突然変異対立遺伝子が生成するＩｋａｒｏｓタンパク質は、野生型対立遺伝子が代わりに切断した生成物としても、低頻度で生成される。これらのＩｋａｒｏｓイソ型（すなわちＩｋ−６及びＩｋ−７）は、主として野生型遺伝子が生成したタンパク質（すなわちＩｋ−１及びＩｋ−２）の機能に支配的に干渉し、リンパ球の形質転換への第一歩を踏み出す。活性化ドメイン様々なＩｋａｒｏｓイソ型とそれらの活性との相互作用を調べた。あり得る相互作用領域の決定の前に、Ｉｋａｒｏｓタンパク質のすべてに存在する強力な活性化ドメインを、エキソン７の初めの81アミノ酸内にマッピングした（図５Ａ）。このドメインは、それぞれαヘリックス及びβシート構造への傾向がある、アミノ酸の酸性及び疎水性の範囲を含む（図５Ａ）。このドメインの３’からのプロリン残基の欠失は、その活性に干渉しなかったのに対し、疎水性アミノ酸以降の欠失は、その能力を著しく減少させた（図５Ｂ）。５’酸性アミノ酸の除去は、その機能を全く排除した（図５Ｂ）。すべてのＩｋａｒｏｓタンパク質は、必須の酸性領域と、最大活性に必要な疎水性のアンモニア化領域とで構成される、この二分された活性化ドメインを共有する。しかし、Ｉｋａｒｏｓタンパク質（Ｉｋ−１、Ｉｋ−２、Ｉｋ−３、Ｉｋ−４及びＩｋ−５）は、それらの単離された二裂活性化ドメインより弱い活性化剤であったが、その酸性アミノ酸の下位領域と類似する活性化能を示した。分子内及び分子間相互作用によって制御されるＩｋａｒｏｓタンパク質の立体配座は、この活性化ドメイン及びその下位領域の利用可能性を指図し、その結果、これらのタンパク質の全体的転写能を決定する可能性がある。タンパク質−タンパク質相互作用酵母の二つの雑種系で、Ｉｋａｒｏｓイソ型間のタンパク質−タンパク質相互作用を調べた。エキソン７の最もＣ末端の150のアミノ酸で、強力な相互作用が得られた（図５Ａ及び図６Ｂ）。この領域の５’及び３’欠失分析は、最もＣ末端の58アミノ酸を相互作用ドメインとして画定した（図６Ａ）。このドメインは、Ｉｋａｒｏｓイソ型のすべてに存在する二つのKruppel様亜鉛フィンガーモチーフを含有した（Ｆ５及びＦ６）。Ｆ５又はＦ６のシステイン又はヒスチジンをグリシン残基と置き換えることは、Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用を排除した（図６Ａ及び６Ｂ、それぞれＭ１、Ｍ５及びＭ２）。Ｆ６の第２ヒスチジン以降の欠失は、これらのタンパク質相互作用を弱めたが、排除しはしなかった（図６Ａ及び６Ｂ）。しかし、このフィンガーモチーフの最初のヒスチジン以降の欠失は、この領域の相互作用能を廃絶した（図６Ａ及び６Ｂ）。 Kruppelの亜鉛フィンガー構造が、Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用に不可欠であるか否かを決定するため、このフィンガーモチーフのαヘリックスに参加すると思われるアミノ酸に、非保存的置換を導入した（図６Ｂ、Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ11及びＭ13）。これらの非保存的なアンモニア化置換はいずれも、Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用に対して効果がなかった。したがって、53アミノ酸のＣ末端相互作用ドメインでのシステイン及びヒスチジン残基は、Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用に不可決の新規な亜鉛フィンガー構造の形成に参加し得る。これに代えて、Ｆ５、及び部分的にはＦ６も、Kruppel型亜鉛フィンガーに特徴的なβシート／αヘリックスの二次構造をとり得る。しかし、ＤＮＡと接触させることに専ら関与するこのフィンガーモチーフのαヘリックス領域は、それがタンパク質−タンパク質相互作用に参加できることに影響されないでいる可能性がある。Ｉｋａｒｏｓイソ型が相互に作用し合えることを、哺乳動物細胞で調べた。インフルエンザエピトープ（ＨＡ）でタグ付けしたＩｋ−２イソ型を、293Ｔという上皮細胞系に他のＩｋａｒｏｓイソ型（Ｉｋ−１、Ｉｋ−４、Ｉｋ−６、Ｉｋ −７）とともに同時トランスフェクションした。マウス抗ＨＡモノクローナル抗体を用いて、トランスフェクションした細胞の溶解物からＨＡ−Ｉｋ−２イソ型を免疫沈降させた。免疫沈降物を、Ｉｋａｒｏｓ抗体とのウエスタンハイブリダイゼーションによって分析した。化学量論量のＩｋａｒｏｓイソ型（Ｉｋ−１、Ｉｋ−４及びＩｋ−６）が、ＨＡ−Ｉｋ−２変異体と同時免疫沈降した（図６Ｃ、列２、４及び６）。免疫沈降したＩｋ−６の一見少ない量は、アッセイに用いたＩｋａｒｏｓポリクローナル抗体に対して比較的少量のエピトープを含む、その短いＮ末端領域のためであった（図６Ｃ、列６）。ＨＡ−Ｉｋ−２免疫沈降と同様の結果は、ＨＡ−Ｉｋ−１イソ型でも得られた。しかし、その二つのＣ末端亜鉛フィンガーモチーフ中のシステインをグリシン残基に代えた、ＨＡ−Ｉｋ− １イソ型は、Ｉｋａｒｏｓイソ型と相互作用かつ同時免疫沈降することができなかった（図６Ｃ、列７及び８）。亜鉛フィンガーモチーフが、Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用に関与するか否かを決定するため、免疫沈降の前に、Ｚｎキレート化剤のＥＧＴＡをトランスフェクションした細胞の溶解物に加えた。ＥＧＴＡの添加は、Ｉｋａｒｏｓタンパク質間の相互作用を完全に排除した（図６Ｃ、列３及び５）。Ｉｋａｒｏｓタンパク質が相互作用できる能力は、増加する量の亜鉛イオンをＥＧＴＡ処理溶解物に加えた後で回復した（図６Ｄ、列３〜５）。これらのデータは、酵母の二つの雑種系でのＩｋａｒｏｓ相互作用ドメインの突然変異分析と相まって、安定的なＩｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用を仲介することへの亜鉛フィンガー境界面の関与を強く裏付ける。細胞での局在別個のＩｋａｒｏｓイソ型が、核又は細胞質への優先的な局在を示す。ＤＮＡの不在下でのそれらの安定した相互作用を考慮して、細胞質形のＩｋａｒｏｓが、核外でも核形を保持し、それ故それらの機能に干渉できるか否かを調べた。細胞質イソ型のＩｋ−６又はＩｋ−７を、核形Ｉｋ−１又は相互作用欠如イソ型のＩｋ−１ｍとともにＮＩＨ−３Ｔ３細胞に同時トランスフェクションした。これらのタンパク質の細胞内の局在は、Ｉｋａｒｏｓに対する抗体で監視した。Ｉｋ −６及びＩｋ−７タンパク質は、Ｉｋ−１及びＩｋ−１ｍの不在下で細胞質中に見出された。Ｉｋ−１を同時トランスフェクションしたときは、すべてのＩｋａｒｏｓタンパク質が核内で検出された。しかし、Ｉｋ−１ｍを同時トランスフェクションしたときは、Ｉｋ−６及びＩｋ−７は細胞質中に見出されたが、Ｉｋ− １ｍは核内に見出された。類似の結果は、他の細胞質イソ型Ｉｋ−３及びＩｋ− ４についても得られた。したがって、核形及び細胞質形Ｉｋａｒｏｓタンパク質は、相互作用によって複合体を形成し、主として核内に局在する。タンパク質−タンパク質相互作用とＤＮＡ結合Ｉｋａｒｏｓタンパク質−タンパク質相互作用、及びＤＮＡ結合に対するそれらの効果を調べた。野生型及び相互作用欠如のＩｋ−１タンパク質（Ｉｋ−１及びＩｋ−１ｍ）を用いて、単一高親和性認識配列に対するゲル遅延アッセイを実施した。野生型Ｉｋ−１は、大部分は二量体としてＤＮＡと結合するが、より少量の単量体性及び三量体性複合体も検出された。野生型Ｉｋ−１とは対照的に、相互作用欠如のＩｋ−１突然変異体は、単量体としてＤＮＡと結合した。加えて、等量の野生型及び突然変異Ｉｋ−１をこのアッセイに用いたときは、より少量の突然変異体タンパク質がＤＮＡと結合するのが見出された。Ｉｋａｒｏｓタンパク質の濃度の上昇は、それぞれＩｋ−１二量体、及び突然変異Ｉｋ−１単量体タンパク質とＤＮＡとの複合体を増加させた。より高次のタンパク質−ＤＮＡ複合体の形成は、相互作用欠如Ｉｋ−１イソ型によっては検出されなかった。多くの生理学的なＩｋａｒｏｓ結合部位（例えばＮＦｋｂ、ＥＢＦ等々）が反復されること、そしてＩｋａｒｏｓタンパク質は、高頻度で二量体認識配列に選ぶことから、二重認識部位に対比しての単一のそれに対する親和性を調べた。Ｉｋ−１及び突然変異Ｉｋ−１を有するそれぞれ単一及び二重の認識配列の双方で、支配的な二量体及び単量体性の同じＩｋａｒｏｓタンパク質−ＤＮＡ複合体が検出された。結合したＩｋａｒｏｓタンパク質による立体障害は、近位結合部位での第二のタンパク質複合体の装着を妨げる可能性がある。ＤＮＡ結合ドメインを有するＩｋａｒｏｓイソ型と、それを有しないもの（Ｉｋ−１とＩｋ−６）との相互作用、及び配列特異的結合に対するその結果的な効果を決定した。Ｉｋ−１がＤＮＡに結合できる能力は、Ｉｋ−６イソ型の存在下で顕著に低下した。以前に記載のとおり、４種類のＮ末端亜鉛フィンガーを有するＩｋａｒｏｓイソ型（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３及びＦ４を有するＩｋ−１）のホモ二量化は、おそらくはこのタンパク質複合体に二つのＤＮＡ結合ドメインを導入することによって、配列特異的ＤＮＡ結合に対するその親和性を高めた。しかし、ＤＮＡ結合ドメインを有するＩｋａｒｏｓイソ型と、それを有しないものとの相互作用は、唯一のＤＮＡ結合モジュールと、ＤＮＡに対する低い親和性とを有するタンパク質複合体を生成する。Ｉｋａｒｏｓホモ及びヘテロ二量体形成とそれらの転写能とを決定した。以前に示したとおり、Ｉｋ−１は、ＮＩＨ−３Ｔ３の線維芽細胞で異所的に発現されたとき、強力な転写活性剤として機能することができる（図７、20倍の刺激）。対照的に、相互作用欠如Ｉｋ−１タンパク質は、弱い活性剤であった（図７、２〜３倍の刺激）。野生型と突然変異体のＩｋ−１の活性のこの顕著な差は、それらのＤＮＡ結合親和性の差を反映している可能性がある。加えて、Ｉｋ−１ホモ二量体の二つの活性化ドメインの存在は、比較的高いその転写活性に寄与する可能性がある。Ｉｋａｒｏｓイソ型が、ホモ及びヘテロ二量体形成の双方に深く関与することから、増加する量のＩｋ−２、Ｉｋ−３、Ｉｋ−４、Ｉｋ−５、Ｉｋ −６又はＩｋ−７と、一定量のＩｋ−１とを同時トランスフェクションした。等量以上のモル比で観察される効果は、Ｉｋａｒｏｓヘテロ二量体の形成を反映し続ける。Ｉｋ−１と、Ｉｋ−４、Ｉｋ−６又はＩｋ−７との同時発現は、前者のイソ型が転写を活性化できる能力に強く干渉した（図７）。低下したＤＮＡ結合親和性を有するＩｋ−１ヘテロ二量体（Ｉｋ−１／Ｉｋ−６、Ｉｋ−１／Ｉｋ− ７及びＩｋ−１／Ｉｋ−４）の形成は、Ｉｋ−１ホモ二量体より弱いそれらの活性化特性を説明し得る（図７）。しかし、これらのＩｋ−１ヘテロ二量体は、転写についてはＩｋ−１単量体（Ｉｋ−１ｍ）より活性であり、おそらくそれは、このタンパク質複合体に第二の活性化ドメインが存在するためである。Ｉｋ−１の活性化能に対する負の効果は、増加する量の比較的弱い活性剤であるＩｋ−２では全く検出されなかった。Ｉｋ−２で検出された、より高レベルのリポーター遺伝子の発現は、ともに核内に局在するＩｋ−１／Ｉｋ−２ヘテロ及びＩｋ−２ホモ二量体の併合した活性を反映し得る（図７）。Ｉｋ−３ホモ二量体は、核に進入できないことから、Ｉｋ−３の過剰で検出された効果は、Ｉｋ−１／Ｉｋ− ３ヘテロ二量体によるものと予測される。Ｉｋ−１／Ｉｋ−３ヘテロ二量体は、転写についてはＩｋ−１ホモ二量体と同程度に活性であった（図７）。別個のＤＮＡ結合ドメインを有するＩｋａｒｏｓイソ型（例えばＩｋ−１、Ｉｋ−２及びＩｋ−３）間のタンパク質−タンパク質相互作用は、ＤＮＡに対するそれらの親和性を増大させるが、これらの因子によって制御される調節性要素の範囲も拡大し得る。加えて、そのような相互作用（例えばＩｋ−１／Ｉｋ−３）は、得られたヘテロ二量体の核局在及び転写能を指図することができる。しかし、転写について適格であるこれらのＩｋａｒｏｓイソ型の活性は、健全なＤＮＡ結合ドメインを欠＜、同じ一族の別個の成員（例えばＩｋ−４、Ｉｋ−５、Ｉｋ −６、Ｉｋ−７）による負の調節を受ける。これらの機能的に別個のＩｋａｒｏｓイソ型間で形成されたヘテロ二量体は、ＤＮＡに対する低い親和性、及び低下した活性化能を有する。リンパ球における自動調節性Ｉｋａｒｏｓイソ型の失調した発現は、異常なリンパ球増殖、及び急速な形質転換へと導くことがある（図８）。そのような効果は、これらのイソ型を独占的に発生する、一つの野生型と一つの突然変異体との対立遺伝子を有するリンパ球では、容易に発現する。同じ効果は、これらの負の調節を行なうＩｋａｒｏｓイソ型が、形質転換したマウスのリンパ系列で過剰に発現されたときにも観察される。したがって、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、交互スプライシングによって、腫瘍サプレッサー形態であるＩｋ−１、Ｉｋ−２及びＩｋ−３を形成し、それらがリンパ球の分化を促進し、増殖を阻害する。それは、負の調節タンパク質であるＩｋ− ４、Ｉｋ−５、Ｉｋ−６、Ｉｋ−７も生成し、それらは、前者のイソ型の機能に干渉することによって、リンパ球の増殖及び形質転換を支援する。健全な遺伝子が低頻度で生成した、これらの優性陰性のＩｋａｒｏｓイソ型の失調した発現が、異常かつ悪性のリンパ増殖へと導くのに対し、リンパ球の発生の際のそれらの調節された発現は、早期の造血及びリンパ系の始原細胞の増殖と分化とを制御し得る。例えば、Ｅ14胎児胸腺でのみ比較的高レベルで発現されるにすぎないＩｋ −４イソ型は、早期のリンパ系始原細胞の増殖性拡大に必要であり得る。血リンパ系始原細胞の純化された集団でのＩｋａｒｏｓイソ型の発現はもとより、これらの細胞での潜在的な遺伝学的標的に対するこれ以上の研究は、造血リンパ系での発生とホメオスタシスとを調節する複雑な分子的過程を解明し始める可能性がある。Ｉｋａｒｏｓ無効突然変異血リンパ系の発生の際のＩｋａｒｏｓタンパク質相互作用の役割を調べるため、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子のＣ末端での異なる欠失を標的にした。この欠失は、活性化、二量化その他のタンパク質相互作用に関与するドメインを含む、翻訳される最後のエキソンを除去する。この突然変異遺伝子座が生成した機能的に無効のタンパク質は、不安定であり、細胞レベルでは検出されない。ＩｋａｒｏｓＣ末端突然変異（Ｃ−／−）マウスには、胎児に由来するＢ−１ａ細胞、及び成体に由来する従来からのＢ細胞が、ともに不在である。しかし、胎児及び成体に由来するＴ細胞系統は、差別的に影響される。分娩の間は終始、かつ産後１日目の間、胸腺は、胸腺細胞、及びそれらの特定できるいかなる前駆細胞も欠いている。明確な胸腺細胞は、産後３〜５日の出生後の胸腺で検出される。これらの胸腺細胞は、膨張して、成体でのほぼ正常な数に達する。ＩｋａｒｏｓＣ−／−新生児胸腺は、主として慣例のαβＴ細胞へと分化し、激しく減少した数の成体由来γδ Ｔ細胞を生じる。胎児胸腺細胞の発生の不在と一致して、ＩｋａｒｏｓＣ−／− マウスでは、樹状表皮性Ｖγ３Ｔ細胞を検出することが全くできない。これらのマウスでは、ＮＫ細胞も不在である。腸の上皮内γδＴ細胞、及び胸腺の樹状抗原提示細胞（ＡＰＣ）の数は、激しく減少している。更に、αβＴ細胞系統に沿った分化が正常ではない。胸腺のＴ細胞像は、ＣＤ４⁺８^-の細胞と、この表現型へと移行する細胞の方に傾いている。胸腺細胞は、増強されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）介在増殖性応答を示し、その出現の数週間後には、オリゴクローナルな膨張が検出される。加齢中の同型接合体では、モノクローナルな集団が、胸腺を支配し、末梢へと輸出される。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは、Ｂ及びＴリンパ系区画の一貫した欠損が発現されるにも拘らず、骨髄及び脾臓では、正常ないし増大した数の赤血球性及び骨髄球性細胞が検出される。このＩｋａｒｏｓ無効突然変異の表現型は、胎児及び出生後ＨＳＣのリンパ系分化の際のＩｋａｒｏｓ遺伝子族の役割を確定させる。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の翻訳される最後のエキソンの欠失は、その機能的不活性化へと導くＮ末端ＤＮＡ結合ドメインの欠失によって生じるＩｋａｒｏｓタンパク質の優性陰性の効果を回避するため、その５’スプライス供与部位を含むエキソン７のコーディング領域の大部分を有する、1.35kBのゲノムフラグメントを、相同組換えによってネオマイシン耐性発現カセットで置換するように、ベクターを設計した（図９）。この欠失は、Ｉｋａｒｏｓ転写体からのエキソン７の利用を無力化する。エキソン７は、Ｉｋａｒｏｓタンパク質どうし、及びＩｋａｒｏｓタンパク質とＡｉｏｌｏｓタンパク質との間の相互作用に必要な、Ｃ末端亜鉛フィンガー二量化ドメインをコードしている。欠失したドメインは、Ｉｋａｒｏｓタンパク質が転写を活性化できる能力に不可欠である、二裂活性化ドメインも含む。二量化ドメインが開裂されているか、又は翻訳された最後のエキソンを欠く突然変異Ｉｋａｒｏｓタンパク質でのin vitro及びin vivoの研究は、それらが、転写について不活性であり、転写に対して優性陰性の効果を示さないことを示した。標的ベクターは、マウスの生殖系列が１：８の頻度で相同組換えされていた。正統の相同組換え事象を有する独立した二つの胚幹細胞系を用いて、Ｃ末端欠失について生殖系列の伝達があるマウスを形成した。同型接合Ｃ末端突然変異マウスが、期待されたメンデル頻度で誕生し、それらの野生型同腹仔と区別できた。４ケ月まで生存し、雄は交配することができた。それらの長命は、そのほとんどが出産後の最初の３週間で死亡する、ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合欠失突然変異体［ Georgopoulos et al．（1994）Cell 79: 143-156］とは対照的である。Ｎ末端ＩｋａｒｏｓｃＤＮＡプローブを用いてＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞から調製したＲＮＡのノーザンハイブリダイゼーションは、エキソン７の翻訳されない長いコーディング領域を欠く、短い700〜900bpのメッセージのレベルの低下を明らかにした。Ｉｋａｒｏｓタンパク質のＮ末端ドメインに対して生成した抗体を用いたＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞の免疫組織化学的分析は、特徴的な斑点を有する核のＩｋａｒｏｓ染色、又は上記の遺伝的背景のいかなる染色も明らかにすることができなかった。にも拘らず、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞は、Ｉｋａｒｏｓ相同Ａｉｏｌｏｓに対する抗体で容易に染色された。突然変異Ｉｋａｒｏｓタンパク質は、Ｃ−／−胸腺細胞溶解物のウエスタンブロットで検出されたが、野生型胸腺細胞溶解物中に存在する野生型Ｉｋａｒｏｓタンパク質より100倍も低い濃度であった。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。図９に記載の組換えベクターを、Ｉｋａｒｏｓゲノムフラグメントと、ネオマイシン及びチミジンキナーゼ発現カセットとを用いて構成し、以前に記載のとおり［Georgopoulos et al．（ 1994）Cell 79: 143-156 ；Li et al．（1992）Cel1 69: 915-926］、Ｊ１胚幹細胞内に標的化した。ＤＮＡを調製し、KpnI及びEcoRVで消化し、相同組換え部域の外部からのＤＮＡプローブ（プローブＡ）を用いたサザンブロットによって分析した。ネオマイシン遺伝子から誘導したプローブ（プローブＢ）を用いて、単一の統合された事象を採点した。この突然変異について異型接合である二つの別個のＥＳ細胞系を別々の芽細胞注入に用いて、細胞系突然変異から生じた表現型を除外した。別個の遺伝的背景でのあり得る表現型変異性を調べるため、C57B L/6及びBalb/cマウスからの芽細胞に突然変異ＥＳ細胞を注入した。プローブＡか、又はネオマイシンから（Neol）、及びＩｋａｒｏs遺伝子から（Int-7F及びEx7 R）設定した適切なプライマーかのいずれかを用いて、Ｆ１〜Ｆ３マウスの遺伝子型を決定した。 Int-7F：GGG CCT TTG GGG ACA TCG AAG GTC（SEQ ID NO:９） Ex7R：CAT AGG GCA TGT CTG ACA GGC ACT TGT（SEQ ID NO:10） Neol：CCA GCC TCT GAG CCC AGA AAG CGA（SEQ ID NO:11）以前に記載のとおり［Sun et al.，1996，EMBO J．］、野生型及び突然変異胸腺細胞でのＩｋａｒｏｓ及びＡｉｏｌｏｓタンパク質の発現を実施した。Ｎ末端Ｉｋａｒｏｓ及びＡｉｏｌｏｓ抗体を１：300 の希釈で用いた。染色した細胞は、100ｘ倍の対物レンズを備えたLeica共焦点表面蛍光顕微鏡で視覚化した。安楽死させた野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスから採集した組織を、４％緩衝ホルマリンで１〜２日間固定した。次いで、それらを処理し、パラフィンに包埋した。切片を５ミクロンの厚さに切り、スライドグラスに載せ、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。Olympus BMax-50顕微鏡により２〜40ｘの倍率で、光学検鏡を実施した。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスを、年齢を合わせた野生型姉妹と平行して分析した。混合した遺伝的背景（SV129ｘC57BL/6及びSV129ｘBalb/c）のそれぞれについて、少なくとも20群の動物を調べた。胸腺、脾臓又は骨髄細胞の単細胞懸濁液を調製し、それらのリンパ系、骨髄系及び赤血球系集団について、以前に記載のとおり［Georgopoulos et al．（1994）Cell 79: 143-156；Winandy et al．Cel l 83，289-99，1995］分析した。フィコエリトリン、フルオレセイン又はシトクロムと結合したモノクローナル抗体を、二色又は三色のフローサイトメトリーでの分析に用いた。胎児及び成体由来のＢ細胞は、双方ともＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスに不在であるＢ細胞及びそれらの前駆細胞は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの発生の胎児及び出生後の段階の双方に不在であった。胎児肝Ｂ細胞前駆細胞（ＣＤ45Ｒ^-）は、不在であった（図10Ａ）。これらの細胞は、通常、Ｂ１−ａというＢ細胞に出現する［Hardy et al．（1994）Immunological Reviews 137，92-118；Hardy et al．（1991）J．Exp．Med．173，1213-1225；Kantor et al．（1992）Ann．NY A cad．Sci．651，168-9］。そのとおりに、Ｂ１−ａＢ細胞（ＣＤ５⁺／ＣＤ45Ｒ⁺ ）は、成体同型接合体の腹腔内に検出されなかった（図10Ｂ）。原Ｂ細胞（ＣＤ 45Ｒ⁺／ＣＤ43⁺）及び前Ｂ細胞（ＣＤ45Ｒ⁺）は骨髄に不在であり、成熟Ｂ細胞（ＣＤ45Ｒ⁺／ＩｇＭ⁺）は、成体ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの脾臓に不在であった（図10Ｂ〜10Ｄ）［Hardy et al．（1991）J．Exp．Med．173，1213-1225； Li et al．J．Exp．Med．178，951-960，1993］。胸腺細胞分化の出生後ではなく胎児期の波は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは損なわれている胸腺細胞分化の出生後ではなく胎児期の波は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスに不在である。野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−の胸腺の構造は、ヘマトキシリン及びエオシン染色によって２〜４ｘの倍率で明らかにされる。胸腺細胞の前駆細胞は、野生型のＥ−16での胸腺で検出されるが、突然変異体のそれでは検出されない。２種類の胸腺間での大きさの差は、胸腺細胞発生のこの早期の段階で、既に明白である。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの胸腺は、胎児生活では終始、また出生後の最初の数日間は、特定できるリンパ系前駆細胞を欠いた。新生児の同型接合突然変異体の胸腺では、皮質又は髄質の構造が全く識別できなかった。すべての面で、新生児ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺は、造リンパ部位としてのその発生の開始時にある第13〜第14日の胎児性器官に、外見が非常に類似した。全く対照的に、野生型新生児の胸腺は、能動的に分化している胸腺細胞区画を示す、精緻な皮質及び髄質の構造を形成していた。出生後３〜６日の間に、胸腺細胞は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺で検出されたが、年齢が見合う野生型器官より100〜300倍少ない数であった（0.3〜１ｘ10⁶対 0.5〜１ｘ10⁸）。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの胸腺は、出生後１週間以内に皮質及び髄質の構造を発生し始めた。分娩後第２週と第６週との間に、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞の数の劇的な増加が検出された。胸腺細胞の数は、生後４〜６週の同型接合体では、正常ないし野生型より２〜５倍少数の範囲にわたった。数の増加にも拘らず、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞は、正常な分化の経路を追わなかった。ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺には、野生型より高い比率のＣＤ４⁺ ８^-単独陽性細胞が存在した（図11Ａ）。ＣＤ４単独陽性Ｔ細胞は、総胸腺細胞がそれらの野生型姉妹より50〜100倍少ないこれらの幼若動物での胸腺集団の50 ％以下を占めた（図11Ａ）。ＣＤ４⁺８^-／ＴＣＲ⁺集団のこの増加は、胸腺細胞発生の早期の時点から成体まで検出され、二重陽性胸腺細胞の比率の同時的上昇を伴った（図11Ａ）。ＣＤ８単独陽性細胞の比率は、野生型に見出されたのと類似した（図11Ａ）。ＣＤ４集団の増加は、ＣＤ４単独陽性とＣＤ４⁺／ＣＤ８^int-lo中間体との双方の連合膨張を包含する（図11Ａ）。これらのＣＤ４⁺／ＣＤ８^int-lo及びＣＤ４単独陽性の胸腺細胞は、それぞれ中ないし高レベルのＴＣＲを発現し、これらの細胞が正常な成熟経路を追うことを示唆した（図11Ｂ、ＴＣＲのヒストグラム）。陽性選択の際に促進調節されるようになる、表面マーカーの発現（von Boeh merら、1993による総説）についても、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞を試験した。ＣＤ69抗原の発現を、二重陽性、中間体及び単独陽性の胸腺細胞で試験した。陽性に選択された、胸腺細胞と活性化された末梢Ｔ細胞とは、ＣＤ69抗原を一過的に発現する［Bendelac et al．（1992）J．Exp．Med．175: 731-742；Swat et al．Eur．J．Immunol．23: 739-746，1993］。それらの野生型の相手とは対照的に、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスのＣＤ４⁺／ＣＤ８^-及びＣＤ４⁺／ＣＤ８ⁱ ^nt 胸腺細胞の大部分は、ＣＤ69活性化マーカーを発現しなかった（図11Ｂ、ＣＤ 69のヒストグラム）。これらの突然変異マウスのＣＤ８胸腺細胞は、野生型ＣＤ８⁺胸腺細胞と類似のレベルのＣＤ69を発現した。にも拘らず、ＣＤ４⁺８^-胸腺細胞は、それらのＴＣＲによって、in vitroでのそれらの刺激後にＣＤ69を発現することができた。これらのデータは、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞の前駆細胞が、適切な陽性選択のシグナルを受けることなく、ＣＤ４単独陽性段階へと移行できることを示唆する。機能的なＩｋａｒｏｓ遺伝子の不在下で、増加したＣＤ４単独陽性胸腺細胞の集団は、不適切に選択されたＴ細胞クローンを含む可能性がある。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの出生後の脾臓で検出されたＴ細胞の絶対数は、当初は少ないが、年齢とともに増加する。特にC57BL/6の遺伝的背景の動物では、ある場合には、脾臓Ｔ細胞の絶対数は、野生型に比して著しく減少したままであった。脾臓ＣＤ４対ＣＤ８のＴ細胞の比は、野生型と同程度から２〜３倍までの増加にまで変動した（図11Ａ）。次に、ＩｋａｒｏｓＣ−／−及び野生型の胸腺細胞と脾臓Ｔ細胞とが、それらのＴＣＲを通じて刺激されたときに増殖できる能力を比較した。ＩｋａｒｏｓＣ −／−胸腺細胞は、それらのＴＣＲ複合体を刺激すると、野生型胸腺細胞より多く増殖した（表２）。ＣＤ４⁺とＣＤ８⁺とのＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞は、ともに高度の増殖を示した。ａ．胸腺細胞又は脾臓細胞の二重の試料を、プレートに結合した抗ＴＣＲmAb（Ｈ５７）で刺激し、同系ＡＰＣを48時間照射し、³Ｈチミジンで４時間パルス標識し、採集かつ計数した。バックグラウンドの³Ｈチミジン取込み（同一のプレート結合ハムスターＩｇとの培養、及びＡＰＣ照射）は100〜775の範囲にわたった。ｂ．＋／＋胸腺は、それぞれ8.8％及び3.5％のＣＤ４⁺８^-及びＣＤ４^-８⁺細胞を含み、−／−胸腺は、それぞれ31％及び3.4％のＣＤ４⁺８^-及びＣＤ４^- ８⁺細胞を含んだ。ｃ．ＣＤ４⁺８^-及びＣＤ４^-８⁺細胞は、Coulter Eliteでの分類によって95％まで分離された。ｄ．＋／＋及び−／−脾臓は、それぞれ22％及び10％のＴ細胞を含んだ。Ｔ細胞集団は、生後３週間の動物から分析した。クローン集団は、早期のＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺で検出され、成体の器官で支配的であるＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞が、ＴＣＲ刺激で過剰増殖したことから、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺での、クローンが膨張した胸腺細胞集団の存在を試験した。Ｔ細胞受容体β鎖遺伝子のＤβ−Ｊβセグメントの再配置を、野生型及び突然変異集団で調べた。７ケ所のＤβ−Ｊβ再配置と、β鎖遺伝子の生殖系列配置に対応する１帯域とが、野生型マウスの胸腺及び脾臓で検出された。これらの結果は、これらの器官での胸腺及び成熟Ｔ細胞の正常なポリクローナルな性質と整合する。対照的に、一定のＤβ２−Ｊβ２再配置は、生後５日という早期のＩｋａｒｏｓ突然変異胸腺での強度の増大を示し、一定の胸腺クローンの膨張を示す。生後４週間より年長のＣ−／−動物の大多数の胸腺では、単一のＤβ２−Ｊβ２再配置が支配的であり、膨張する胸腺細胞クローンの存在を反映している。より年長の突然変異体の脾臓では、より遅い時点で異常なクローンＴ細胞集団が検出された。胸腺細胞の発生の、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞クローンが、膨張を開始する段階を、胸腺細胞をＣＤ４、ＣＤ８、及び一団のＶβ特異的モノクローナル抗体に対する抗体で染色することによって調べた。Ｃ−／−胸腺の大多数に、別個のＴＣＲＶβの語法を有する胸腺クローンが認められた。与えられたＴＣＲＶβ を発現する膨張した胸腺細胞の集団が、二重陽性（ＣＤ４⁺８^-）及び単独陽性（ＣＤ４⁺８^-又はＣＤ４^-８⁺）のウィンドウの双方で検出され、それらの異常なクローン膨張は、未成熟二重陽性の段階という早期に生じるが、これらの細胞は、単独陽性のＣＤ４⁺及びＣＤ８⁺胸腺細胞として移行し、更に増殖することを示した。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。以前に記載のとおり［Wina ndy et al．Cell 83，289-99，1995］、胸腺細胞及び脾臓細胞からＤＮＡを調製した。サザン分析のためのプライマー（Ｄβ2.1及びＪβ2.7）及び内部プローブ（ＤβＩＮＴ）として用いた合成オリゴヌクレオチドの配列（５’〜３’）は、下記のとおりである：Ｄβ2.1 ：GTA GGC ACC TGT GGG GAA GAA ACT（SEQ ID NO:12）Ｊβ2.7 ：TGA GAG CTG TCT CCT ACT ATC GAT T（SEQ ID NO:13）ＤβＩＮＴ：TAT TG GGG ACT GGG CG（SEQ ID NO:14）。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスおけるγδＴ細胞の選択的欠損ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでの胎児性胸腺細胞の発生の欠如のため、γδＴ細胞サブセットの数及び分布は、特に関心が持たれた。野生型表皮で容易に特定されるγδＴＣＲを発現する樹状表皮Ｔ細胞（ＤＥＴＣ）は、ＩｋａｒｏｓＣ− ／−マウスでは検出されなかった。分析した８体の突然変異マウスでは、Ｔｈｙ −１抗原の発現についてプローブで調べたときでさえ、見出されたＤＥＴＣは皆無であった。対照的に、膣上皮γδＴ細胞は、調べた８体のマウス中８体で正常な分布及び密度で存在した。胸腺γδＴ細胞は、それでも、減少した数で存在したが、成体のＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの脾臓では、γδＴ細胞の有意な集団は全く検出されなかった（図12Ａ及び12Ｂ）。γδＴ細胞を有し、ＣＤ８αα共受容体を発現する腸上皮内リンパ球（ＩＥＬ）は、分析したマウス６体で不在であったか、又は有意に少なかった（図12Ｃ）。ＣＤ８^-γδＩＥＬの数も、劇的に減少した（図12Ｃ）。全く対照的に、αβＩＥＬの数は、野生型マウスとＣ− ／−マウスとで同様であった（図12Ｃ）。それらのクラスIIの発現によって特定された上皮及び膣ランゲルハンス細胞は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは正常な数及び分布で存在した。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。チオシアン酸アンモニウムで分離した表皮又は膣シートを、１：20希釈のヤギ血清と共に温置し、次いでｍＡＢであるＧＬ３（γδＴＣＲに特異的）で、その後ビオチン結合ヤギ抗ハムスターＩｇ、アビジン−ビオチン複合体で染色し（Vectastain Perioxidase Stand ard ABC Kit）、３−アミノ−９エチルカルバゾールで顕色した［Bigby et al．（1987）J．Invest．Dermatol．89: 459-9］。陽性に染色された樹状細胞を、光学顕微鏡測定によって特定した。別のシートを、ＰＥを結合したＴｈｙ−１というｍＡＢ（53−2.1）、又は未結合ｍＡＢのＭ５／114（クラスII抗原に特異的）で、その後、記載のとおりＦＩＴＣを結合したヤギ抗ラット抗体で染色し、免疫蛍光顕微鏡測定によって評価した。陽性に染色された樹状細胞を表面蛍光顕微鏡測定によって特定した。ＧＬ３、Ｔｈｙ−１及びＭ５／114には、それぞれハムスターＩｇ、ＰＥ結合ラットＩｇＧ_2a及び未結合ラットＩｇＧ_2b対照抗体を用いた。胸腺又は脾臓をγδＴ細胞及びＮＫ細胞に富ませるため、それらをｍＡＢの混合物（胸腺に対してはＣＤ４及びＣＤ８、脾臓に対してはＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、Ｍａｃ−１、Ｇｒ−１及びＴｅｒ119）で被覆することによって、単細胞懸濁液を除去し、抗ラットＩｇを被覆した磁気ビーズで被覆細胞を除去した［Ar davin et al．（1993）Nature 362: 761-763］。富裕化した胸腺を、上記のとおり、二色蛍光分析のために染色した。ＮＫ細胞及び胸腺樹状ＡＰＣは、Ｃ−／−マウスでは不在であるか、又は有意に少ない成体胸腺に存在する共通のリンパ系始原細胞（ＣＤ４^lo／c-kit／ＣＤ44⁺）は、胸腺樹状ＡＰＣ、ＮＫ細胞、並びに慣例のαβ及びγδＴ細胞を生じ得る［Ar davin et al．（1993）Nature 362: 761-763］。胸腺樹状ＡＰＣとともにＮＫ細胞も、この多能リンパ系始原細胞の分化の早期の段階から派生する。これに代わる仮説は、これらの系統は、類似の表面表現型を共有する別個の胸腺前駆細胞から生じるというものである［Shortman，K．& Wu，L．（1996）Annu．Rev．Immun ol．14: 29-47］。クラスII及びＣＤ11ｃ抗原を発現する胸腺樹状ＡＰＣの存在を、野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−の胸腺で調べた。系統除去の後、胸腺ＡＰＣ（ＣＤ11ｃ⁺／クラスII^int/high）は、野生型胸腺で非常に富裕化された（51 ％）（図６Ａ）。対照的に、系統除去した突然変異胸腺では、ＣＤ11ｃ⁺／クラスII^intの表面表現型を有する細胞は全く、またＣＤ11ｃ⁺／クラスII^highのそれを有する細胞は非常に僅かしか（３％）検出されなかった（図13Ａ）。野生型及びＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでのＮＫ細胞の存在を、系統除去した脾臓細胞に対するＮＫ1.1のマーカーに対する抗体を用いて評価した。ＮＫ1.1 細胞の小集団は、野生型脾臓細胞間に存在した（ＳＶ129ｘＣ57ＢＬ／６の遺伝的背景で決定して２〜５％）。ＮＫ1.1を発現する細胞は、ＩｋａｒｏｓＣ−／ −脾臓細胞間には存在しなかった。機能性アッセイも用いて、ＮＫ細胞の存在に決定的に取り組んだ。野生型対照マウスからの脾臓細胞は、クロム標識ＮＫ細胞の標的（Ｙａｃ−１）を、広範囲のエフェクター対標的比にわたって効果的に溶解した（図13Ｃ）。しかし、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスからの脾臓細胞は、最高のエフェクター対標的比でさえ、ＮＫ標的を溶解できなかった（図13Ｃ）。Ｔ細胞分化経路の最も早い分岐点から派生する胸腺樹状ＡＰＣ及びＮＫ細胞の発生は、Ｉｋａｒｏｓ活性の不在下で損なわれる。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスは、末梢リンパ中枢も欠く。鼠径、頚部、腋窩及び腸間膜のリンパ節、パイエル板、並びに胃腸管のリンパ小節が不在であった。後期の胎児生活の間に出現するリンパ節は、それらの適正な発生を樹状ＡＰＣに依存する。ＩｋａｒｏｓＣ−／ −マウスでの健全な樹状ＡＰＣ区画の不在は、それらの末梢リンパ中枢の発生における遮断を説明し得る。上記の実験は、基本的には下記のとおり実施した。胸腺を樹状細胞に富ませるために、プールした細片化した胸腺をコラゲナーゼで消化し、ＥＤＴＡで処理した。密度遠心分離によって、低密度の細胞を捕集し、非樹状細胞系統の細胞を、ｍＡＢの混合物で被覆し、被覆した細胞を、抗ラットＩｇＧで被覆した磁気ビーズで除去することによって、除去した［Ardavin et al．（1993）Nature 362: 7 61-763］。富裕化した胸腺細胞懸濁液を、上記のとおり、二色蛍光分析に向けて染色した。 500単位／mlの組換えＩＬ−２を用いてin vitroで４日間、脾臓細胞を刺激した。刺激された細胞がＹａｃ−１標的を溶解できる能力を、標準的な４日間のクロム放出アッセイで測定した［Garni et al．（1990）J．Immunol．144: 796-80 3］。赤血球形成と骨髄細胞の分化とは、胎児及び成体双方の発生の際に比較的影響されない胎児の肝ＨＳＣは、赤血球及び骨髄球系統の細胞を主として発生する。これらの細胞型は、ともに、ＩｋａｒｏｓＣ−／−胎児の妊娠中後期の肝臓に正常な数で存在した（図14Ａ）。脾臓は、後期の胎児の造血部位であって、出生後は、Ｔ及びＢリンパ球で占められるが、成体の生涯でも終始その造血能を多少とも保持している。成体での主要な造血部位は骨髄であって、赤血球及び骨髄系前駆細胞は、ここで発生する。幼若及び成体双方のＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは、赤血球及び骨髄系前駆細胞は、骨髄及び脾臓の集団の大多数を含む。これらの骨髄及び赤血球系細胞は、正常ないし有意に増加した絶対数の範囲にわたる（図14Ｂ）。赤血球数及びヘマトクリットは、生理的範囲内であった。骨髄系細胞の間では、Ｍａｃ−１と高レベルのＧｒ−１マーカーとの同時発現が、最終的に分化した成熟好中球を特定する（図14Ｂ）。胎児性肝顆粒球の集団は、ＩｋａｒｏｓＣ −／−マウスでは野生型と同様であったのに対し、幼若な突然変異同型接合体の骨髄では、正常より少数の顆粒球が検出された（図14Ａ及び14Ｂ）。骨髄由来のＭａｃ−１⁺／Ｇｒ−１⁺細胞でのこの損傷は、出生後の骨髄系始原細胞でのＩｋａｒｏｓ突然変異の効果であり得る。これに代えて、これらの幼若突然変異動物の骨髄でのＢ及び成熟Ｔリンパ球の不在下での、不適切な細胞相互作用によることもあり得る。造血幹細胞のレベルでの細胞の運命の決定を制御する分子的機序の解明は、我々が血液及び免疫系の発生の仕方を理解する上で枢要である。多能性幹細胞区画から様々な多能性始原細胞を通じて成熟リンパ球に至るまで発現される、調節遺伝子Ｉｋａｒｏｓは、リンパ球の特異性の中心的調節因子として特定された［Ge orgopoulos et al．（1994）Cell 79: 143-156］。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子のＤＮＡ結合ドメインでのＮ末端欠失（ＤＮ−／−）は、胎児及び成体の造血系でのすべてのリンパ球の発生における早期の、かつ完全な遮断を招いた。このＮ末端突然変異について異型接合であるマウスでは、突然変異Ｉｋａｒｏｓの遺伝子座が生成するタンパク質は、野生型Ｉｋａｒｏｓイソ型に対する優性の干渉効果を示して、白血病及びリンパ腫の急速な発症を示した［Winandy et al．Cell 83，289- 99，1995］。このＮ末端欠失について同型及び異型接合であるマウスで検出された重篤なリンパ系欠損は、Ｉｋａｒｏｓ活性の併発的欠如はもとより、その突然変異タンパク質から、Ｉｋａｒｏｓがリンパ系の正体を特定し、ホメオスタシスを維持するよう作用し合うその他の因子への優性干渉にも起因し得る。この可能性を検証し、血液−リンパ系でのＩｋａｒｏｓ活性の喪失の直接的効果を決定するため、その翻訳される最後のエキソンを欠失させた。このエキソンは、Ｉｋａｒｏｓタンパク質のすべてが共有する亜鉛フィンガー二量化及び活性化ドメインを包含する。これらのドメインなしでは、Ｉｋａｒｏｓタンパク質は、機能的に不活性であり、転写に対する優性陰性の効果を示さない。その上、これらの断端形態は、不安定であり、それらが生成される細胞内で急速に分解される。したがって、このＣ末端Ｉｋａｒｏｓ欠失について同型接合であるマウスは、いかなるＩｋａｒｏｓタンパク質についても実質的に無効である。胎児及び成体のリンパ系統をすべて欠くＤＮ−／−マウスとは対照的に、ＩｋａｒｏｓＣ− ／−マウスは、胎児及び成体のリンパ系区画での選択的欠損を示す。これらの結果は、Ｉｋａｒｏｓタンパク質は、リンパ系統への胎児ＨＳＣの発生又は分化に絶対的な必要条件であるが、それらの作用は、何らかのリンパ系統への成体ＨＳＣの発生又は分化には部分的に過剰である直接的な証拠を与える。胎児及び出生後のＢ細胞の発生は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは完全に遮断された。妊娠中期の胎児肝で通常は検出されるＢ細胞前駆細胞は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−造血器官では不在であった［Hardy et al．（1991）J．Exp．Med．17 3，1213-1225］。Ｔ細胞始原細胞を発生できるそれらの能力にも拘らず、ＩｋａｒｏｓＣ−／−突然変異マウスの出生後ＨＳＣは、野生型動物の骨髄に通常は見出される、最も早期の原Ｂ細胞さえも生じ得なかった。したがって、Ｂリンパ球の分化は、胎児及び出生後ＨＳＣ双方のレベルで完全に遮断される。胎児の発生の際は、大動脈生殖腺中腎部域又は肝原基に由来するＨＳＣ、及びその直接の子孫は、胸腺に移住する［Dieterlen-Lievre et al．（1994）Annals of the New York Academy of Sciences 718，140-6；Dzierzak et al．（1995 ）Trends in Genetics 11，359-66］。正常な胎児胸腺でのリンパ系前駆細胞の膨張は、波として生じる。最初の波は、13日目までに胎児胸腺に進入し、胎児リンパ球の連続する２集団を生じる［Havran et al．（1988）Nature 335，443-44 5］。第一の集団は、Ｖγ３ＴＣＲを発現し、14日目と16日目との間のＴＣＲ発現胸腺細胞の大多数を含む。これらの細胞は、皮膚に移動し、ｖγ３ＤＥＴＣ区画を構成する。第二の集団は、Ｖγ４ＴＣＲを発現し、妊娠16日と19日との間のＴＣＲ発現胸腺細胞の大多数を含む［Havran et al．（1988）Nature 335，443- 445］。これらは、雌の生殖管及び舌の粘膜上皮に移動する。19日以後の胎児胸腺には、Ｖγ３又はＶγ４ＴＣＲのいずれかを発現する胸腺は、全く明らかでなくなり、成体器官では、実質的に不在となる［Havran et al．（1988）Nature 3 35，443-445］。リンパ系前駆細胞の第二の波は、15日以後に胎児胸腺に進入する。それらは、胎児後期及び出生後早期の胸腺のＴＣＲ発現胸腺細胞の大多数を生じる。胸腺前駆細胞の胎児後期及び出生後の波は、脾臓及びリンパ節で集団形成するγδ Ｔ細胞を生じる。これらのγδＴ細胞は、Ｖγ２ＴＣＲを優先的に発現する。それらは、僅かな百分率（0.5〜２％）の脾臓及びリンパ節Ｔ細胞を構成する［Ito et al．（1989）Proceedings of the National Academy of Sciences of the U nited States of America 86，631-5］。胸腺外起源であり得る第四の型のγδ Ｔ細胞が、出生後に発生する［Lefrancois，L．（1991）Immunol．Today 12，43 6-8；Lefrancois et al．（1990）Cell 63，333-340］。これらのγδＴ細胞は、Ｖγ５ＴＣＲ及びＣＤ８α／α共受容体を発現し、腸上皮にのみ定住するにすぎない［Guy et al．（1991）J．Exp．Med．173，471-81］。胎児胸腺細胞の移住又は膨張の第一及び第二の波は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは生じない（図15）。したがって、これらの突然変異マウスの胸腺は、胎児生活の間終始、また生後最初の数日間、リンパ系区画を欠く。胎児で発現したリンパ系分化における早期の、かつ完全な遮断とは対照的に、ＩｋａｒｏｓＣ− ／−胸腺では、出生の数日後に、胸腺細胞前駆細胞が検出される。これらの胸腺細胞集団は、生後１ケ月のＩｋａｒｏｓ突然変異体では、ほぼ正常な数に達する。ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは、出生後のαβＴ細胞前駆細胞が、ＣＤ４⁺ ８^-及びＣＤ４⁺８⁺のαβＴ細胞を生じる。しかし、突然変異胸腺でのＴ細胞分化の開始から、ＣＤ４⁺／αβＴ細胞の比率の２〜３倍の上昇が検出された（図1 5）。ＣＤ４⁺Ｔ細胞のこの増加は、同時に、ＣＤ８単独陽性胸腺細胞の見かけの変化なしの二重陽性胸腺細胞の減少を伴う。機能性Ｉｋａｒｏｓ遺伝子の不在下では、ＣＤ４胸腺細胞の増加は、ＣＤ４系統の関与の失調による可能性がある。これに代えて、それらの選択の際のＣＤ４Ｔ細胞の不適切な蓄積に結果として生じる可能性もある。未成熟胸腺細胞の表面へのＴＣＲ複合体の拘束は、タンパク質キナーゼ回路と、ＣＤ69抗原の発現を誘発する［Testi et al．（1989）Journ al of Immunology 143，1123-8］。移行期中間体、及び成熟した単独陽性胸腺細胞の多くは、それらの表面にＣＤ69活性化マーカーを発現する［Bendelac et al ．J．Exp．Med．175，731-742，1992；Swat et al．Eur．J．Immunol．23，739- 746，1993］。ＩｋａｒｏｓＣ−／−突然変異胸腺細胞のうちで、ＣＤ４単独陽性のものと、それらの移行期中間体（ＣＤ４⁺ＣＤ８^lo/int）との圧倒的多数は、ＣＤ69を発現せず、このαβＴ系統での不適切な選択を示唆した。この欠損は、野生型でさえ、より低レベルのＣＤ69を発現するＣＤ８⁺Ｔ細胞については観察されなかった。したがって、αβＴ細胞前駆細胞におけるＩｋａｒｏｓタンパク質の欠如は、それらがＣＤ４及びＣＤ８αβＴ系統を生じ得る能力を遮断しないが、ＣＤ４Ｔ細胞の経路に沿った選択に干渉する可能性はある（図15）。ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺細胞集団は、それらのＴＣＲを通じて誘発したとき、それらの野生型の相手より有意に多く増殖した（表２）。同じＴＣＲ特異性を有する二重及び単独陽性の胸腺細胞の失調した膨張は、前ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体の結合後に生じ得る。年長のＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの胸腺では、オリゴクローナル及びモノクローナルな胸腺細胞集団が支配的である。ＩｋａｒｏｓＤＮＡ結合突然変異について異型接合であるマウスでも、白血病及びリンパ腫の急速な発症へと続く、Ｔ細胞増殖性応答の強化が観察された［Winandy et al．Cel l 83,289-99，1955］。これらの突然変異マウスでは、優性陰性のＩｋａｒｏｓタンパク質が、野生型イソ型の活性に、しかしＴ細胞ホメオスタシスの失調を招くその他の因子に干渉することがある。二つの別個のＩｋａｒｏｓ突然変異（ＤＮ−／−及びＣ−／−）の過剰増殖性の表現型の比較は、Ｉｋａｒｏｓ活性の傑出した増大又は欠如が、Ｔ細胞の過剰増殖、胸腺クローンの異常な膨張、及びＴ細胞の新形成へと導くことを示唆する（図15）。これらの結果は、分化中のＴ細胞と成熟したそれとの双方に不可欠の腫瘍抑制遺伝子としてのＩｋａｒｏｓを、議論の余地なく確定する。Ｉｋａｒｏｓの不在下では、胸腺細胞及び成熟Ｔ細胞は、おそらくそれらのＴＣＲ複合体の結合後に、異常な膨張を生じる。そのような増殖中の突然変異Ｔ細胞から新形成状態への移行は、ＴＣＲシグナリングと同時又は直後のいずれかで生じる。いくつかのγδＴ細胞が、早期のＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺に見出されて、Ｔ細胞分化でのこの分岐点が、部分的に不健全であることを示唆した（図15）。ＤＥＴＣを発生するＶγ３Ｔ細胞は、胎児の始原細胞、及び胎児の胸腺の微環境の関係においてのみ発生するにすぎない［Ikuta et al．（1991）J．Exp．Med．17 4，1279-1282；Ikuta et al．（1990）Cell 62: 863-874］ことから、ＤＥＴＣは、突然変異マウスの表皮で見出された（図15）。ＩｋａｒｏｓＣ−／−胸腺で出生後に成熟する胸腺細胞の始原細胞は、ＤＥＴＣを生じない。全く対照的に、胎児Ｔ細胞の始原細胞の早期の波に主として由来すると提唱されている、膣上皮γ δＴ細胞（Ｖγ４）は、Ｉｋａｒｏｓ突然変異マウスに正常な分布及び密度で存在した（図15）。したがって、Ｖγ４Ｔ細胞は、出生後のＴ細胞始原細胞から容易に発生することができる［Ikuta et al．（1991）J．Exp．Med．174，1279-12 82］。γδＴ細胞は、胸腺で少数ながら検出されたが、成体ＩｋａｒｏｓＣ−／ −マウスの脾臓では、有意なγδＴ細胞集団は全く認められなかった。加えて、 γδＴＣＲを有し、ＣＤ８αα共受容体を発現するＩＥＬは、不在又は有意に少数であった。ＣＤ８^-γδＩＥＬの数も、劇的に減少した。これらの研究は、別個の型のγδＴ細胞のための別個の移動及び膨張の必要性の存在を示唆する。野生型胸腺では、最も早期のＴ細胞始原細胞（ＣＤ44⁺／c-kit⁺／ＣＤ４^lo/- ）が、ＮＫ細胞及び胸腺樹状ＡＰＣを生じる［Wu et al．（1995）Eur．J．Immu nol．25，418-425］。ＮＫ細胞及び胸腺樹状ＡＰＣは、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスでは、不在又は有意に少数であり、これら二つの経路への早期の分岐点が、Ｉｋａｒｏｓの不在下で遮断されたことを示唆する（図15）。Ｉｋａｒｏｓ突然変異マウスのリンパ系区画で観察された多数の欠損にも拘らず、胎児及び出生後のＨＳＣは、ともに赤血球系及び骨髄系の経路沿いに分化し、成熟したそれらの子孫のいくつかを生じる。顆粒球の百分率は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−骨髄での方が野生型より低い。この結果は、Ｉｋａｒｏｓ突然変異が、骨髄系経路の、より後の段階に対する効果を有し得ることを示唆する。この効果は、健全な微環境によって通常は与えられる成長因子の欠如によって生じた顆粒球成熟の遮断を反映し得る。骨髄でのリンパ球の不在が、幼若同型接合体でのこの骨髄系統の成熟欠損の原因であり得る。これに代えて、出生後の骨髄系始原細胞でのＩｋａｒｏｓ活性の欠如が、顆粒球の分化に直接影響する可能性もある。ＩｋａｒｏｓＣ−／−骨髄での成熟顆粒球の欠如が、それらの早期放出によって生じるとは思われない。成熟顆粒球は、ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスの脾臓又は末梢血中には見出されなかった（図14Ｃ）。２種類のＩｋａｒｏｓ突然変異間に観察される出生後Ｔ細胞系統の発生の差は、Ｉｋａｒｏｓが、成体造血系での少なくともＴ細胞の分化を決定するには、もう一つの因子と協力して働くことを強く示唆する。Ｉｋａｒｏｓとの強い構造的及び機能的類似性を有する遺伝子であるＡｉｏｌｏｓが、最近記載されている。Ｉｋａｒｏｓとは対照的に、Ａｉｏｌｏｓは、胚及び胎児の造血部位、又は妊娠中期の胸腺では、Ｔ細胞分化の第一波の際に発現されない（図15）。Ａｉｏｌｏｓの発現は、妊娠後期の胸腺で初めて検出され、成体器官では高レベルであり続ける。Ａｉｏｌｏｓは、Ｂリンパ球、及びそれらの直接の前駆細胞でも発現される。骨髄由来の多能始原細胞内では、Ａｉｏｌｏｓの発現は、よりリンパ系に傾いた幹細胞区画（Sca-1⁺／c-kit⁺／Sca-2⁺）に限定される。Ａｉｏｌｏｓの発現は、これらの始原細胞が明確なＴ及びＢリンパ球前駆細胞になるときに、強く促進調節される。Ａｉｏｌｏｓタンパク質は、Ｉｋａｒｏｓイソ型とは高度に保存されたＣ末端亜鉛フィンガーを介して二量化し、転写の際にそれらの活性を調節する。Ａｉｏｌｏｓが、優性陰性のＩｋａｒｏｓＮ−／−マウスの骨髄集団で発現されることは、これらの動物における早期の血リンパ系始原細胞の存在を示唆する。機能的Ｉｋａｒｏｓの欠如とともに、血リンパ系始原細胞でＩｋａｒｏｓの突然変異形態が発揮するＡｉｏｌｏｓ干渉も、すべての胎児及び成体リンパ系統の発生における完全で早期の遮断を説明し得る。対照的に、Ａｉｏｌｏｓを発現するが、機能的なＩｋａｒｏｓを全く、又はその干渉形態のいずれをも有しない、出生後のＣ−／−血リンパ系始原細胞は、Ｔ細胞経路へと分化することができる。しかし、これらの始原細胞集団でのＡｉｏｌｏｓ活性は、Ｔ細胞の適正な分化、又はＢ細胞及びＮＫ系統への救済発生を可能にするには不充分である。ＩｋａｒｏｓとＡｉｏｌｏｓとのホモ及びヘテロ二量体の機能的な差は、成体ＩｋａｒｏｓＣ−／−マウスにおけるＴ細胞分化でのこの部分的救済を説明し得る。Ｉｋａｒｏｓ無効マウスで発現されるリンパ系欠損は、胎児及び成体の造血系でのリンパ球の分化とホメオスタシスを制御する、複雑な調節のネットワークに対する独自の洞察を与える。Ｉｋａｒｏｓ遺伝子は、胎児の造血の際の全リンパ系統の特異化に不可欠であるが、成体リンパ球では部分的に過剰である。その不在下では、通常はＩｋａｒｏｓと協力して働く他の因子（例えばＡｉｏｌｏｓ）が、リンパ系統の特異化、分化及びホメオスタシスにおけるその機能のいくつかを、しかしすべてではなく代替する可能性がある。上記に引用した参考文献及び刊行物はすべて、参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims

【特許請求の範囲】１．増殖統制解除された細胞を用意する方法であって：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞を有する哺乳動物を用意して、その哺乳動物から増殖統制解除された細胞を単離することを含む該方法。２．前記のＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞が造血細胞である、請求項１に記載の方法。３．前記の統制解除された細胞がリンパ球である、請求項１に記載の方法。４．前記の哺乳動物がゲッ歯類である、請求項１に記載の方法。５．Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞を分裂させて増殖統制解除された細胞を生じさせることを更に含む、請求項１に記載の方法。６．哺乳動物が、Ｃ末端ジンクフィンガードメインの一方又は両方を不活性化する突然変異を有する、請求項１に記載の方法。７．哺乳動物が、ＩｋａｒｏｓのＤＮＡ結合領域に突然変異を有する、請求項１に記載の方法。８．細胞のクローン性集団を用意する方法であって：Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞を有する哺乳動物を用意して、その哺乳動物から一以上の細胞を単離することを含み、但し、一細胞が単離されれば、その細胞を細胞のクローン性集団に増殖させる該方法。９．前記のＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞が造血細胞である、請求項８に記載の方法。１０．前記のクローン性集団がリンパ球のクローン性集団である、請求項８に記載の方法。１１．前記の哺乳動物がゲッ歯類である、請求項８に記載の方法。１２．Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞を分裂させて増殖統制解除された細胞を生じさせることを更に含む、請求項８に記載の方法。１３．哺乳動物が、Ｃ末端ジンクフィンガードメインの一方又は両方を不活性化する突然変異を有する、請求項８に記載の方法。１４．哺乳動物が、ＩｋａｒｏｓのＤＮＡ結合領域に突然変異を有する、請求項１に記載の方法。１５．選択した抗原を認識するリンパ球又は実質的に均質なリンパ球集団を用意する方法であって：Ｉｋａｒｏｓ統制解除されたリンパ球を有する哺乳動物を用意して、その哺乳動物から一以上のリンパ球を単離することを含む該方法。１６．前記の哺乳動物を前記の抗原で免疫する、請求項１５に記載の方法。１７．前記のＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞が造血細胞である、請求項１５に記載の方法。１８．増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞を培養する方法であって：その細胞を、その細胞が元々単離された哺乳動物以外の哺乳動物に導入してその細胞を培養することを含む該方法。１９．前記のＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞が造血細胞である、請求項１８に記載の方法。２０．標的組織又は細胞の活性を調節する方法であって：その標的を供給して、その標的を増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞にさらすことを含む該方法。２１．前記の標的が免疫系の細胞である、請求項２０に記載の方法。２２．前記の増殖又はＩｋａｒｏｓ統制解除された細胞がリンパ球である、請求項２０に記載の方法。２３．前記の標的及び前記の細胞が、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座において遺伝子型が異なる、請求項２０に記載の方法。２４．前記の標的及び前記の細胞が、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なる、請求項２０に記載の方法。２５．前記の標的及び前記の細胞が、異なる動物に由来する、請求項２０に記載の方法。２６．前記の標的及び前記の細胞が、異なる種に由来する、請求項２０に記載の方法。２７．Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞の、免疫系成分との相互作用を評価する方法であって：動物を調達し；その動物にこの細胞及び免疫系成分を導入し；Ｉｋａｒｏｓ統制解除された細胞と免疫系成分との間の相互作用を評価することを含む該方法。２８．Ｉｋａｒｏｓ統制解除され又はＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの突然変異した対立遺伝子を有する、外来的に導入された免疫系成分を有する哺乳動物。２９．Ｉｋａｒｏｓ統制解除され又はＩｋａｒｏｓ遺伝子座に少なくとも１つの変異した対立遺伝子を有する動物又は細胞培養に由来する免疫系成分と標的組織又は細胞とを含む反応混合物であって、この免疫系成分と標的は、Ｉｋａｒｏｓ遺伝子座以外の遺伝子座において遺伝子型が異なり；この成分と標的は異なる種に由来し、又はこの成分と標的は異なる動物に由来する、該反応混合物。３０．造血細胞の増殖を促進する方法であって：非増殖性Ｉｋａｒｏｓ２量体（ＮＩＰＤ）の形成を阻害する化合物をその細胞に投与することを含む該方法。３１．前記の化合物が、ＮＰＩＤサブユニットの会合の競争又は非競争インヒビターである、請求項３０に記載の方法。３２．前記の化合物が、Ｉｋａｒｏｓ蛋白質のフラグメントである、請求項３０に記載の方法。３３．前記の化合物が、Ｆ５及びＦ６を含むＩｋａｒｏｓフラグメントである、請求項３０に記載の方法。