JPH11509730A

JPH11509730A - 早発性アルツハイマー病遺伝子および遺伝子産物

Info

Publication number: JPH11509730A
Application number: JP9505854A
Authority: JP
Inventors: ハーディ，ジョン・エイ
Original assignee: University of South Florida
Current assignee: University of South Florida
Priority date: 1995-07-13
Filing date: 1996-06-26
Publication date: 1999-08-31
Also published as: EP0842189A4; WO1997003086A1; AU6401696A; EP0842189A1; CA2226658A1; US6010874A

Abstract

(57)【要約】本発明は、早発性アルツハイマー病遺伝子（ＥＯＡＤ遺伝子という）のポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列に関する。より詳細には、本発明は、アルツハイマー病の素質の同定またはアルツハイマー病の診断のためのプローブおよび増幅プライマーとして有用なＥＯＡＤ遺伝子のフラグメントおよび変種に関する。

Description

【発明の詳細な説明】早発性アルツハイマー病遺伝子および遺伝子産物発明の分野本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、かかるポリリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造に関する。より詳細には、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは早発性アルツハイマー病（本明細書において「ＥＯＡＤ」という）遺伝子、その遺伝子産物および変異体およびフラグメントである。また本発明は、かかるポリペプチドの作用の阻害に関する。より詳細には、本発明は、アルツハイマー病の素質の同定またはアルツハイマー病の診断のためのプローブおよび増幅プライマーとして有用な、ＥＯＡＤ遺伝子およびＥＯＡＤ遺伝子のセグメントに関する。発明の背景アルツハイマー病（ＡＤ）は、米国において、心臓疾患、癌および卒中に次いで４番目に最も普通の死因である。現在４００万人以上の人々が罹病しており、この数は人口の老齢化に伴い、今後４０年間で２倍になると予想されている。現在、ＡＤは不治であり、治療といってもほとんどが疾病の原因を治療するというよりもむしろ疾病を軽減するものである。National Institute of Agingから発表された目標は、今後５年のうちにその発病年齢を５年遅らせ、さらに今後１０年以内に１０年遅らせて、ＡＤ罹病人口を有意に減少させることである。高齢およびダウン症候群は別として、伝染病学的調査において同定されたＡＤの発病についての一貫した危険因子は、陽性の疾病の家族歴の存在であった。とりわけ、早発ケースのＡＤについては遺伝学的因子を支持する最も衝撃的な証拠が存在し、その家族において該疾病は十分に浸透性のある常染色体優性疾患として遺伝する（Nee et al.,Arch.Neurol.40:203-208）。遺伝形態のＡＤを有する大家族の存在により、遺伝学的連関（genetic linkage）の手法を用いて疾病遺伝子の位置決定が可能となった。老齢ダウン症候群（ＤＳ）患者におけるＡＤの神経病理学の観察により、研究者は遺伝形態のＡＤを有する家族の染色体２１を分析するようになった。ＦＡＤ染色体２１の長い腕上のマーカーとの間の遺伝学的連関が１９８７年に初めて報告された（St.George-Hysop,et al.,Nature,347:194-197(1990)）。その時以来、早発性ＦＡＤが遺伝学的に異質のものであり、多くの家系は染色体２１マーカーに対する連関を示さないことが示されてきた（St.George-Hysop,et al.,Natur e Genetics,2:330-334(1992)およびSchellenberg,et al.,Annals of Neurology 31:223-227(1992)）。遺伝学的連関の研究により、早発性ＦＡＤ（本明細書において、「早発性アルツハイマー病」または「ＥＯＡＤ」という）を引き起こす第２の遺伝子座が染色体１４の長い腕上において同定された（Schellenberg,et al.,Annals of Neurol ogy 31:223-227(1992);Van Broeckhoven,et al.,Nature Genetics 2:335-339(19 92);St.George-Hyslop,et al.,Nature Genetics,2:330-334(1992)）。連関は、まずＤ１４Ｓ４３において報告され、それはＤ１４Ｓ５２およびＤ１４ＳＳ３の間の約２３ｃＭの領域に位置していた。さらなる遺伝学的マーカーの単離により、Ｄ１４Ｓ２８９およびＤ１４Ｓ６１の間の６.４ｃＭの距離に絞り込まれた候補領域が得られた（Cruts,et al.,Human Molecular Genetics）。欠陥遺伝子を同定するための位置的クローニング法が我々のｔａｂその他において現在用いられている。研究された大多数のＥＯＡＤ家族はこの遺伝子座に対する連関を示しているが、早発性ＦＡＤを引き起こす少なくとも１またはそれ以上の遺伝子座が存在するはずである。なぜなら、ボルガ・ジャーマン（Volga German）の家族はＡＰＰ遺伝子およびＦＡＤ遺伝子に強く関連したマーカーとの組み換えを示すからである（Schellenberg,et al.,Science 25:668-671(1992)）。発病年齢は別として、異なるＦＡＤの原因を識別する表現型または神経病理学的マーカーは同定されていない。６.４ｃＭのＤＮＡは数百の候補遺伝子を含んでいる可能性があるので、減数分裂マッピングおよび連関不均衡法（いずれも目的領域を絞り込むことができる）を成功させるための染色体１４に連関した新たな家族の同定は、この遺伝子の迅速同定における重要なファクターとなる可能性があった。まずＡＤ３遺伝子座が染色遺体１４に位置した場合、２つの遺伝子が当該染色体のこの領域にマッピングされることが知られていた。２つの遺伝子とは、熱ショック蛋白ＨＳＰＡ２およびプロトオンコジーンｃｆｏｓである。ＨＳＰＡ２のマッピングの整備およびＡＤ家族におけるさらなる組み換えの同定により、現在、ＨＳＰＡ２遺伝子は候補領域からはずれ、ｃｆｏｓは候補領域に入っている。しかしながら、いくつかの群によりコーディング領域のさらなる配列決定によっては病因となる変異が明らかにならなかったが、いくつかの多型性およびが同定され、染色体１４ｑ２４.３上の早発性アルツハイマー病のＡＤ３遺伝子座の物理的特性が同定された。また、２種の発現配列によりタグを付された部位（ＥＳＴ）が候補領域のすぐ外側にマッピングされた。該部位は、Ｄ１４Ｓ２８９とＤ１４Ｓ２５１との間にマッピングされるＤ１４Ｓ１Ｏ２ＥおよびＤ１４Ｓ６１とＤ１４Ｓ５９との間にマッピングされるＤ１４Ｓ１Ｏ１Ｅである。他の２つの遺伝子および１つの偽遺伝子が候補領域中にマッピングされている。既知遺伝子は形質転換増殖因子ベータ（ｔｇｆ−β）およびＫｒｅｂｓ回路の酵素ジヒドロリポアミドサクシニルトランスフェラーゼ（ＤＬＳＴ）である。ｔｇｆ−βはＡＰＰ発現を転調させることが知られているので、もっともらしい候補遺伝子である。現在に至るまで、染色体１４連関ＦＡＤケースの患者のこの遺伝子において変異は見つかっていない。ＡＤケースの脳において、さらには染色体１４連関ＡＤケースの線維芽細胞においてＤＬＳＴ活性の低下が報告されている。しかしながら、現在に至るまで、染色体１４連関ＦＡＤケースの患者のこの遺伝子において変異は見つかっていない。非スプライス形態のＥＯＡＤ蛋白のアミノ酸配列が最近開示された（Sherring ton,Nature 375:754(1995)）。ＥＯＡＤ遺伝子のスプライス変種も、ＥＯＡＤの全長の遺伝子も、開示されていなかった。この疾病の治療に対して明らかな必要性が存在し、本発明は、治療化合物および方法に関するものである。そのうえ、かかるＥＯＡＤの同定は、便利な診断材料および方法が利用できないことにより妨げられている。よって、ＥＯＡＤの診断の助けとなる迅速、鋭敏かつ特異的な試験に対する必要性もある。ＤＮＡに基づく診断試験は鋭敏かつ特異的であるのみならず、迅速であるという利点を有する。ＥＯＡＤの早期検出および同定は、迅速かつ適切な治療およびケアを容易にする。本発明は、ＥＯＡＤに対してユニークであり、核酸変異を含んでいるＤＮＡ配列である具体例を包含し、それはＥＯＡＤまたはＥＯＡＤの素質の検出のための診断プローブとして有用である。本発明は、ＥＯＡＤ遺伝子変異の検出に有用な、そしてＥＯＡＤまたはＥＯＡＤの素質の検出のためのプライマーおよびプローブとして特に有用なＤＮＡ配列のユニークで新規なセットを提供する。発明の簡単な説明１の態様において、本発明は、図１および２において同定されるＤＮＡ配列および分子（および対応ＲＮＡ配列）のそれぞれ、ならびに少なくとも１５塩基、好ましくは少なくとも５０塩基を含むかかる配列のフラグメントまたは部分、ならびにそれらに対して少なくとも９５％、好ましくは９７％同一である配列、ならびに図１および２の配列と同じポリペプチドをコードしているＤＮＡ（ＲＮＡ）配列、ならびにそれらのフラグメントおよび部分に関する。さらに、本発明は、少なくとも１５塩基、好ましくは少なくとも４０塩基、より好ましくは少なくとも５０塩基を含む単離ＤＮＡ配列（および対応ＲＮＡ配列）のフラグメントまたは部分、ならびにそれらに対して少なくとも９７％同一である配列、ならびに同じポリペプチドをコードしているＤＮＡ（ＲＮＡ）配列に関する。本明細書の用語「第１のＤＮＡ（ＲＮＡ）配列」は、互いに正しく並べられた場合、例えば、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡにより並べられた場合、第１の配列と他の配列との塩基間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９５％または９７％の同一性がある場合、当該他のＤＮＡ（ＲＮＡ）配列に対して少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％同一である。さらにもう１つの態様において、本発明は、少なくともヒト・遺伝子（詳細には、発現ヒト・遺伝子）のコーディング領域（あるいはかかるコーディング領域と同じポリペプチドをコードするＤＮＡ配列）を含む単離ＤＮＡ（ＲＮＡ）配列または分子に関し、該ヒト・遺伝子は、図１および２に掲載されるＤＮＡ配列、あるいはそれらに対して少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％同一であるＤＮＡ配列、ならびに当該コーディング領域によりコードされるポリペプチドと類似の機能を有するポリペプチドをコードしているコーディング領域のフラグメントまたは部分を含む。よって、単離ＤＮＡ（ＲＮＡ）配列は、発現遺伝子のコーディング領域のみ（または上記のごとく、そのフラグメントまたは部分）を含むことができ、あるいはさらに発現したヒト・遺伝子の非コーディングＤＮＡの全部もしくは部分を含むことができる。さらなる態様において、本発明は、かかるコーディング領域と同じペプチドをコードしているＤＮＡ（ＲＮＡ）配列であるヒト・遺伝子（詳細には、発現ヒト・遺伝子）のコーディング領域を少なくとも含んでいる単離ＤＮＡ配列（ＲＮＡ）に関し、該ヒト・遺伝子（コーディング領域または非コーディング領域いずれかにあり、一般的にはコーディング領域にある）は、図１および２に示すＤＮＡ配列と同じＤＮＡ配列を含む。さらに本発明は、コーディング領域によりコードされるポリペプチドと類似の機能を有するポリペプチドをコードしているかかるコーディング領域のフラグメントまたは部分に関する。さらに本発明は、かかる上記ＤＮＡ（ＲＮＡ配列）によりコードされるポリペプチド、ならびにかかるポリペプチドおよび同じ機能および用途を有するそのフラグメント、誘導体および構造上の修飾物、ならびにかかるポリペプチドに対する抗体の製造および使用に関する。本発明はまた、かかるＤＮＡ（ＲＮＡ）配列を含むベクターまたはプラスミド、ならびにそのＤＮＡ（ＲＮＡ）配列の使用に関する。全長のＥＯＡＤ遺伝子およびスプライス変種の配列を、それぞれ図１および図２に示す。図１および２はＥＯＡＤ遺伝子の全コーディング領域を含み、図２はスプライス変種である。本発明の種々の態様は、ＥＯＡＤＥＳＴ、対応部分および完全ＥＯＡＤｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンス鎖、三重ヘリックスプローブ、ＰＣＲプライマー、コーディング領域、および構築物のそれぞれを包含する。発現ベクターおよびポリペプチド発現産物も、かかる発現生成物に対する抗体、特にモノクローナル抗体とともに本発明の範囲内である。本発明は、図１および２として本明細書中に示される配列の群から選択される配列を有する単離ポリペプチド配列に関する。さらに本発明は、図１および２に示される配列の群から選択される配列を含む遺伝子に関する。もう１つの態様において、本発明は、図１または２から選択されるＤＮＡ配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡを含む単離ＤＮＡ配列に関する。さらにもう１つの態様において、本発明は、図１または２のＤＮＡ配列またはフラグメントのいずれかに対応するＲＮＡを含む単離配列に関する。さららなる態様において、本発明は、図１または２に示す配列を有する単離ポリヌクレオチドに関し、それは、それぞれＥＯＡＤ遺伝子およびＥＯＡＤ遺伝子スプライス変種であり、それぞれＥＯＡＤ遺伝子産物およびＥＯＡＤスプライス変種遺伝子産物をコードしている。本発明の１の態様によれば、ＥＯＡＤ遺伝子である新規成熟ポリペプチドならびにそのフラグメント、アナログおよび誘導体が提供される。本発明ポリペプチドはヒト起源である。本発明の１の態様によれば、ヒト遺伝子（そのコーディング領域は図１および２）のヌクレオチド配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む）と同じ成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドが提供される。本発明のもう１つの態様によれば、かかるポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が提供される。本発明のさらなる態様によれば、組みかえ法によりかかるポリペプチドを製造する方法が提供される。本発明のさらなる態様によれば、アルツハイマー病、特にＥＯＡＤの治療のための、かかるポリペプチド、またはかかるポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの使用方法が提供される。本発明のさらなる態様によれば、かかるポリペプチドに対する抗体が提供される。本発明のさらなる態様によれば、かかるポリペプチドに対するアンタゴニスト／阻害剤が影響され、それらをかかるポリペプチドの作用を阻害するために、例えば、アルツハイマー病の治療、特にＥＯＡＤの治療のために使用してもよい。本発明のこれらの態様および他の態様は本明細書の教示から当業者に明らかなはずである。以下の図面は本発明の具体例の説明であり、請求の範囲により画定される本発明の範囲を限定するものと解してはならない。図面の簡単な説明図１はＥＯＡＤ遺伝子の全長のｃＤＮＡ配列を示す。図２はＥＯＡＤスプライス変種遺伝子の全長のｃＤＮＡ配列を示す。発明の詳細な説明臨床試料を用いるヒトの疾病またはヒトの疾病についての素質を検出するための、核酸に基づく方法は、２つの大きなカテゴリーに分類することができ、それらは主として標的核酸の低い検出限界において異なっている。第１のカテゴリーは慣用的な分子的方法を用いて臨床試料から直接標的核酸を検出するものである。第２のカテゴリーは、核酸増幅法に基づくものであり、検出前に標的配列を迅速に豊富化させるものである。いずれのアプローチを検出し使用するかは、迅速に結果を得るための費用、労力および臨床的必要事項のごとき因子に左右される。本発明核酸分子は、上記２つのシステムのいずれにおいても有利かつ簡単に使用することがきる。核酸検出のための慣用的方法は、分子の可視化を可能にする物理化学的方法に依存するか、または分析において検出可能な試薬で標識された核酸プローブを用いるハイブリダイゼーション法に依存する。例としては：エンドヌクレアーゼ消化されたＤＮＡをニトロセルロースのごとき支持体に固定化し、次いで、分析できるように標識された核酸でプローブして特定の相補的配列を検出するサザンブロッティングが挙げられる。この目的のための分析的に検出可能な試薬は、放射性同位元素（例えば、¹⁴Ｃおよび³²Ｐ）および化学発光物質のごとき非放射活性試薬が包含される。また、いずれかの慣用的手段により多くの臨床単離物からＤＮＡを抽出し、当該分野で知られた多くの方法（減圧濾過があるがこれに限らない）によりこれを支持体に写し取り、サザンブロットの場合と同様にプローブするＤＮＡドットブロット；および臨床単利物に由来するヒト・ｇＤＮＡまたはｃＤＮＡを含むコロニーを寒天プレート上で培養し、濾紙に写し取り、プローブする前にin situで溶解するコロニードットブロットも挙げられる。増幅システムは、標的領域に隣接した長さ約１０〜３０ヌクレオチドのプライマー核酸分子の存在に依存する。プライマーは、隣接プライマーにより画定される領域上での複数サイクルのＤＮＡ複製の開始点として作用する。ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（Mullis et al.,Meth． Enzymol.155:335-350(1987)）は、増幅システムの古典的な例である。本発明において、図１および２中の文字Ｎで示されるヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、ＧおよびＴからなる群より選択されうる。組み換え製造法および精製「実質的に同等」とは、核酸およびアミノ酸配列の両方をいい、例えば、１個またはそれ以上の置換、欠失または付加により元の配列とは異なっている変異配列であり、その正味の効果が元の配列と対象配列との間の有害な機能上の非類似性を生じないものである。本発明の目的からすると、同等の生物学的活性および同等の発現特性を有する配列は実質的に同等であると考えられる。同等であることを決定する目的では、成熟配列の末端切断を無視すべきである。本発明の１の態様によれば、図１および２からなる群より選択されるポリペプチドフラグメントを含む成熟ポリペプチドをコードしている単離核酸（ポリヌクレオチド）が提供される。本発明ポリヌクレオチドはＲＮＡ形態またはＤＮＡ形態であってよく、ＤＮＡはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、および合成ＤＮＡを包含する。ＤＮＡは２本鎖または１本鎖であってよく、１本鎖の場合、コーディング鎖または非コーディング鎖（アンチセンス鎖）であってよい。成熟ポリペプチドをコードしているコーディング配列は、図１または２に示すコーディング配列と同じであってもよく、あるいは遺伝コードの縮重の結果異なったコーディング配列となっているが、図１または２のＤＮＡ配列を含む野生型ＤＮＡと同じ成熟ポリペプチドをコードしているものであってもよい。成熟ポリペプチドをコードしている図１または２の配列を含むポリヌクレオチドは以下のものを包含する：成熟ポリペプチドに関するコーディング配列のみ；成熟ポリペプチドならびにリーダーもしくは分泌配列のごときさらなるコーディング配列またはプロ蛋白配列に関するコーディング配列；成熟ポリペプチド（およびさらなるコーディング配列を含んでもよい）に関するコーディング配列ならびにイントロンまたは成熟ポリペプチドに関するコーディング配列の５'および／または３'側の非コーディング配列のごとき非コーディング配列。よって、用語「ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド」は、ポリペプチドに関するコーディング配列のみを含むポリヌクレオチド、ならびにさらなるコーディングおよび／または非コーディング配列を含むポリヌクレオチドを包含する。さらに本発明は、上記ポリヌクレオチドの変種に関し、該変種は、図１または２の推定アミノ酸配列を含むポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体をコードする。ポリヌクレオチドの変種は、ポリヌクレオチドの天然に存在する対立遺伝子変種またはポリヌクレオチドの天然に存在しない変種であってよい。よって、本発明は、図１または２と同じポリペプチドを含む成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド、ならびにかかるポリヌクレオチドの変種であって図１または２のポリペプチドを含むポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログをコードしている変種を包含する。かかるヌクレオチド変種は、欠失、置換変種、ならびに付加または挿入変種を包含する。上記のごとく、ポリヌクレオチドは、図１または２に示すポリヌクレオチドのコーディング配列を含む遺伝子の天然に存在する対立遺伝子変種であるコーディング配列を有していてもよい。当該分野において知られているように、対立遺伝子変種は、コードされるポリペプチドの機能を実質的に変化させない、１個またはそれ以上の置換、欠失または付加を有していてもよいポリヌクレオチド配列の別形態である。また本発明は、成熟ポリペプチドに関するコーディング配列が、同じ読み枠において、宿主細胞からのポリペプチドの発現および分泌を促進するポリヌクレオチド配列（例えば、宿主細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）に融合していてもよいポリヌクレオチドを包含する。リーダー配列を有するポリヌクレオチドはプレ蛋白であり、宿主細胞により開裂されて成熟形態のポリペプチドを生じるリーダー配列を有していてもよい。ポリペプチドはプロ蛋白をコードしていてもよく、プロ蛋白は成熟蛋白にさらなる５'側のアミノ酸残基が付いたものである。プロ配列を有する成熟蛋白はプロ蛋白であり、当該蛋白の不活性形態である。プロ配列が開裂されると、活性成熟蛋白が残る。よって、例えば、本発明ポリヌクレオチドは、成熟蛋白、あるいはプロ配列を有する蛋白、あるいはプロ配列およびプレ配列（リーダー配列）の両方を有する蛋白をコードしていてもよい。本発明ポリヌクレオチドは、本発明ポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に、イン−フレーム（in-frame）で融合しているコーディング配列を有していてもよい。マーカー配列は、細菌宿主の場合にはマーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を可能にするｐＱＥ−９ベクターにより提供されるヘキサ−ヒスチジンタグであってもよく、あるいは例えば、哺乳動物宿主、例えばＣＯＳ−７細胞を用いる場合にはマーカー配列はヘマグルチニン（ＨＡ）タグであってもよい。ＨＡタグはインフルエンザのヘマグルチニン蛋白（Wilson,I.,et al.,Cell, 37:767(1984)）由来のエピトープに対応する。さらに本発明は、配列間に少なくとも５０％、好ましくは７０％の同一性がある場合に、上記配列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。本発明は、特に、厳密な条件下で、上記ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。本明細書の用語「厳密な条件」は、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。好ましい具体例において上記ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドは、図１または２のポリヌクレオチドによりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持しているポリペプチドをコードしている。用語「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」を図１または２のポリペプチドに用いる場合、該用語はかかるポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを意味する。よって、アナログは、プロ蛋白部分の開裂により活性化されて活性成熟ポリペプチドを生じうるプロ蛋白を包含する。本発明ポリペプチドは組み換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってもよいが、好ましくは組み換えポリペプチドである。図１または２のポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログは以下のものである：（i）１個またはそれ以上のアミノ酸残基が保存的または非保存的アミノ酸残基（好ましくは、保存的アミノ酸残基）で置換されており、かかる置換アミノ酸残基は遺伝コードによりコードされているものであっても、コードされていないものであってもよく、あるいは（ii）１個またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、あるいは（iii）ポリペプチドの半減期を延長させるような別の化合物（例えば、ポリエチレングリコール）にポリペプチドが融合しているもの、あるいは（iv）リーダーまたは分泌配列、またはポリペプチドの精製に用いられる配列、またはプロ蛋白配列のごときさらなるアミノ酸がポリペプチドに融合しているもの。かかるフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の範囲内であると考えられる。好ましくは、本発明ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは単離形態で提供され、好ましくは均一にまで精製される。用語「単離」は、物質がその本来の環境（例えば、物質が天然に存在するものであれば、天然環境）から取り出されることを意味する。例えば、天然に存在する生きた動物中に存在する核酸配列またはポリペプチドは単離されていないが、天然系における共存物質のいくつかまたはすべてから分離されている同じ核酸配列またはポリペプチドは単離されたものである。かかる核酸配列はベクターの一部であってもよく、そして／またはかかる核酸配列またはポリペプチドは組成物の一部であってもよく、かかるベクターまたは組成物はその天然環境の一部でないという点において、やはり単離されたものである。また本発明は、本発明ポリヌクレオチドを含むベクター、本発明ベクターを用いて遺伝子工学的に得られる宿主細胞、ならびに組み換え法による本発明ポリペプチドの製造に関する。例えばクローニングベクターまたは発現ベクターであってもよい本発明ベクターを用いて宿主細胞を遺伝子工学的に得る（トランスダクションまたは形質転換またはトランスフェクションする）。ベクターは、例えばプラスミド、ウイルス粒子、ファージ等の形態であってもよい。プロモーター活性化、形質転換体の選択またはＥＯＡＤ遺伝子の増幅に適するように改変された慣用的な栄養培地中で、遺伝子工学的に得られた宿主細胞を培養することができる。温度、ｐＨ等のごとき培養条件は発現用に選択された宿主細胞について以前から使用されているものであり、当業者に明らかである。本発明ポリヌクレオチドを、組み換え法によるポリペプチドの製造に使用してもよい。核酸配列は、ポリペプチド発現のための種々の発現ベクターのいずれかに含まれていてもよい。かかるベクターは、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０誘導体；細菌プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡ、ワクシニア、アデノウイルス、フォウル・ポックスウイルスおよび偽狂犬病のごときウイルスＤＮＡとの結合により得られたベクターを包含する。しかしながら、宿主中で複製可能で生存可能である限り、他のいずれのベクターであっても使用できる。種々の方法により、適当なＤＮＡ配列をベクター中に挿入することができる。一般的には、当該分野において知られた方法によりＤＮＡ配列を適当な制限エンドヌクレアーゼ部位中に挿入する。かかる方法および他の方法は当業者の知識の範囲内であると考えられる。発現ベクター中のＤＮＡ配列を適当な発現制御配列（プロモーター）に作動するように連結してｍＲＮＡ合成を指令する。かかるプロモーターの典型例として、ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、イー・コリ（E.coli）のｌａｃもしくはｔｒｐ、ファージラムダのＰ_Lプロモーターおよび原核細胞または真核細胞またはそれらのウイルスにおいて遺伝子発現を制御することが知られている他のプロモーターが挙げられる。また発現ベクターは、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写ターミネーターを含んでいる。ベクターは、発現増強に適した配列を含んでいてもよい。さらに、好ましくは、発現ベクターは、真核細胞培養用にはジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性、E.coliにおいてはテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性のごとき形質転換宿主細胞の選択のための表現型特性を提供する１つまたはそれ以上の選択可能マーカー遺伝子を含む。所望ポリペプチドの宿主中での発現に適した種々の既知方法を用いて、上記のような適当なＤＮＡ配列ならびに適当なプロモーター、さらに他の適当な制御配列を含むベクターを適当な宿主中に導入することができる。適当な宿主の典型例は、E.coli、ストレプトミセス（Streptomyces）およびサルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）細胞のごとき細菌細胞；酵母細胞のごとき真菌細胞；ショウジョウバエ（Drosophila）Ｓ２およびスポドプテラ（Spodoptera）Ｓｆ９細胞のごとき昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳおよびボウズ（Bowes）メラノーマ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞を包含する。当業者は本開示により本発明のこの態様におけるポリペプチドの発現のための宿主を容易に選択することができよう。より詳細には、本発明は、発現構築物のごとき組み換え構築物も包含し、それらは１種またはそれ以上の上記配列を含んでなる。構築物は、本発明配列が挿入されたプラスミドまたはウイルスベクターのごときベクターを含む。配列を順方向または逆方向に挿入することができる。本発明の特定の好ましい具体例において、構築物はさらに、例えば該配列に作動可能に連結されたプロモーターを包含する調節配列を含んでなる。多数の適当なベクターおよびプロモーターが当業者に知られており、本発明における使用に適した多くのベクターが市販されている。例えば下記ベクターがある。細菌用：ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０およびｐＱＥ− ９（Qiagen）；ｐＢＳ、phagescript、ｐｓｉＸ１７４、pbluescript SK、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Stratagene）；ｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ph armacia）；真菌用：ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、ｐＳＧ（Stratagene）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ（Pharmaci a）。しかしながら、宿主中で複製可能で生存可能である限り、他のいずれのプラスミドまたはベクターであっても使用できる。ＣＡＴ（クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたは選択可能マーカーを有する他のベクターを用いて所望遺伝子からプロモーター領域を選択することができる。２つの適当なベクターはｐＫＫ２３２−８およびｐＣＭ７である。特に列挙すべき細菌プロモーターには、ｌａｃＩ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびｔｒｐがある。真核プロモーターは、ＣＭＶ即時初期、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来のＬＴＲ、およびマウス・メタロチオネイン−Ｉを包含する。適当なベクターおよびプロモーターの選択は当業者のレベルの範囲内である。さらなる具体例において、本発明は、上記構築物を含有する宿主細胞に関する。宿主細胞は哺乳動物細胞のごとき高等真核細胞であってもよく、あるいは酵母細胞のごとき下等真核細胞であってもよく、またあるいは宿主細胞は細菌細胞のごとき原核細胞であってもよい。宿主細胞中への構築物の導入を、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストランにより媒介されるトランスフェクション、またはエレクトロポレーション（Davis,L.,Dibner,M.,Battey,I.,B asic Methods in Molecular Biology,(1986)）により行うことができる。慣用的方法で宿主細胞中の構築物を用いて組み換え配列によりコードされた遺伝子産物を得ることができる。別法として、慣用的なペプチド合成装置によりポリペプチドを合成的に得ることもできる。成熟蛋白は、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または適当なプロモーターの制御下の他の細胞において発現されうる。本発明ＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用い、無細胞翻訳系を用いてかかる蛋白を得ることもできる。原核宿主および真核宿主への使用に適するクローニングおよび発現ベクターはSambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Second Edition,Cold Spring Harbor,N.Y.,(1989 )に記載されており、参照によりその開示が本明細書に記載されているものとみなす。蛋白をコードしているＤＮＡの高等真核生物による転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することにより促進される。エンハンサーはＤＮＡのｃｉｓ作用性エレメントであり、通常には約１０ないし３００ｂｐであり、プロモーターに作用してその転写を促進する。例は、複製開始点の後期側１００ないし２７０ｂｐにあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーを包含する。一般的には、組み換え発現ベクターは、宿主細胞の形質転換を可能にする複製開始点および選択可能マーカー（例えば、E.coliのアンピシリン耐性遺伝子およびS.cerevisiaeのＴＲＰ１遺伝子）、ならびに下流構造配列の転写を指令するための高発現遺伝子由来のプロモーターを含むであろう。かかるプロモーターは、とりわけ、３−ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のごとき解糖蛋白、ａ− 因子、酸性ホスファターゼ、または熱ショック蛋白をコードしているオペロン由来のものであってもよい。異種構造配列を、翻訳開始および終結配列、および好ましくはペリプラズム空間または細胞外培地中への翻訳蛋白の分泌を指令しうるリーダー配列とともに適当な相をなすように結合する。異種配列は、所望特性（例えば、発現組み換え産物の安定化またはその精製の単純化）を付与するＮ末端同定ペプチドを含む融合蛋白をコードしていてもよい。適当な翻訳開始および終結シグナルとともに所望蛋白をコードしている構造ＤＮＡ配列を機能的プロモーターとの関係において作動可能に読むことができるように挿入することにより、細菌に有用な発現ベクターを構築する。ベクターは、１またはそれ以上の表現型の選択可能マーカーならびにベクター維持を確実にし、所望ならば宿主中での増幅を提供する複製開始点を含むであろう。形質転換に適する原核宿主は、E.coli、Bacillus subtilis、Salmonella typhimuriumおよびPseudomonas、StreptomycesおよびStaphylococcus属の種々の種を包含するが、他のものも選択の対象でありうる。典型的であるが限定的でない例として、細菌に有用なベクターは、選択可能マーカーならびによく知られたクローニングベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝学的エレメントを含む市販プラスミド由来の複製開始点を含んでいてもよい。かかる市販ベクターは、例えば、ｐＫＫ２２３−３（Pharmacia Fi ne Chemicals,Uppsala,Sweden）およびＧＥＮ１（Promega Biotec,Madison,WI,U SA）を包含する。これらのｐＢＲ３２２「骨格」部分を適当なプロモーターおよび発現すべき構造配列と結合する。適当な宿主株の形質転換、次いで適当な細胞密度に至る宿主株の増殖の後、適当な手段（例えば、温度シフトまたは化学的誘導）により選択プロモーターを誘導し、細胞を適当時間培養する。典型的には、遠心分離により細胞を集め、物理的または化学的手段により細胞を破壊し、次いで、得られた粗抽出物をさらなる精製に供する。凍結融解サイクリング、ソニケーション、機械的破壊、または溶解剤の使用を包含する慣用的方法により蛋白発現に用いた微生物細胞を破壊することができ、かかる方法は当業者によく知られている。種々の哺乳動物細胞培養系を用いて組み換え蛋白を発現させることができる。哺乳動物発現系の例は、Gluzman et al.,Cell 23:175(1981)に記載されたサル・腎臓線維芽細胞ＣＯＳ−７細胞系を包含する。適合するベクターを発現させうる他の細胞系は、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、Ｈｅｌａ、ヒト・腎臓２９３およびＢＨＫ細胞を包含する。哺乳動物発現ベクターは、複製開始点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、ならびに必要なリボソーム結合部位、ポリアデニレーション部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終止配列、および発現に必要とされる５'隣接非転写配列を含んでなる。この点において、ＳＶ４０プライス部位およびポリアデニレーション部位由来のＤＮＡ配列を用いて所望の非転写遺伝学的エレメントを提供してもよい。硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含するよく知られた方法により、ポリペプチドを組み換え細胞培養物から回収し、精製することができる。精製の間、低濃度（０.１５〜５ｍＭ）のカルシウムイオンを存在させることが好ましい（Price et al.,J.Biol.Chem.,244:917(1969)）。成熟蛋白の配置を完成させる際に、必要に応じて蛋白再生工程を用いることができる。最終的には、最後の精製工程に高品質液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精製に用いる。本発明ポリペプチドは本来的に精製された生成物であってもよく、あるいは化学合成法生成物であってもよく、原核宿主または真核宿主（例えば、培養された細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞）から組み換え法により製造されるものであってもよい。組み換え生産法に用いる宿主の性質によっては、本発明ポリペプチドは糖鎖付加されているかもしれず、あるいはされていないかもしれない。本発明ポリペプチドは最初のメチオニン残基を含んでいてもよい。生物学的材料の寄託物なしでも３５ＵＳＣ§１１２の要件を満たすが、公衆の便宜および利益のためだけにヒト・脳ライブラリー由来のＳ１８２の全長のｃＤＮＡクローンが、ブダペスト条約の定めるところにより１９９５年７月２８日にＡＴＣＣに受託番号９７２３８として寄託された。このクローンは、特許付与によりＣＦＲ１．８０８（ｂ）による条件を除き、何ら制限なく利用可能となるであろう。寄託先は、American Type Culture Collection,12301 Parklawn Dr ive,Rockville,Maryland 20852,USAである。キット、治療方法および組成物ポリペプチドをインビボで発現させることにり本発明ポリペプチドを用いてもよく、しばしば、「遺伝子治療」と呼ばれる。よって、例えば、エクスビボにおいて、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）で患者からの細胞を処理し、次いで、処理細胞を患者に与えて該ポリペプチドにより患者を治療してもよい。かかる方法は当該分野においてよく知られている。例えば、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を用いることにより、当該分野で知られた方法により細胞を処理してもよい。同様に、例えば、当該分野で知られた方法により、細胞をインビボにて処理してポリペプチドをインビボで発現するようにしてもよい。当該分野で知られているように、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含んでいるレトロウイルス粒子を産生するためのプロデューサー細胞を患者に投与して細胞を処理し、インビボでポリペプチドを発現させてもよい。これらの方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明らかなはずである。例えば、細胞処理用の発現ビヒクルはレトロウイルス以外のもの、例えば、適当な送達担体との連結後にインビボで細胞を処理するために用いることのできるアデノウイルスであってもよい。本発明ポリペプチドを適当な医薬担体と組み合わせて使用してもよい。かかる組成物は、治療上有効量のポリペプチドならびに医薬上許容される担体または賦形剤を含んでなる。かかる担体はセイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの混合物を包含するが、これらに限らない。処方は投与経路に適合すべきである。また本発明は、本発明組成物の１またはそれ以上の成分を入れた１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パックまたはキットを提供する。かかる容器には、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定された形式の注意書きが添えられ、その注意書きは、ヒトへの投与についての製造、使用または販売についての当局の認可が反映されている。さらに、本発明ポリペプチドを他の治療化合物と組み合わせて用いてもよい。経口、局所、静脈、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または経皮的経路のごとき慣用的様式で医薬組成物を投与してもよい。本発明ＥＯＡＤポリペプチドの投与量は、投与様式、治療すべき症状の性質および処方箋を書く医師の判断のごとき多くの要因に依存する。一般的に言えば、例えば、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重の治療上有効量で投与し、たいていの場合、１日につき約８ｍｇ／ｋｇ体重を超えない量で投与し、好ましくは、投与経路、徴候等を考慮して、毎日約１０ｍｇ／ｋｇ体重ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重の用量とする。さらに本発明は、アンチセンス法を用いることによる、インビボにおけるアルツハイマー病、好ましくはＥＯＡＤの抑制に関する。アンチセンス法を用い、３重ヘリックス形成あるいはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡにより遺伝子発現を制御することができ、両方の方法ともＤＮＡもしくはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく。例えば、本発明成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５'側のコーディング配列を用いて、長さ約１０ないし４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるようにＤＮＡオリゴヌクレオチドを設計し（３重ヘリックス −Lee et al.,Nucl.Acids Res.,6:3073(1979);Cooney et al,Science,241:456(1 988);およびDervan et al.,Science,251:1360(1991)）、そのことにより変異ＥＯＡＤ遺伝子産物の転写および生成を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボにおいてｍＲＮＡにハイブリダイゼーションし、ｍＲＮＡ分子のＭＣＰ−４への翻訳をブロックする（アンチセンス−Okano,J.Neurochem.,5 6:560(1991);Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expres sion,CRC Press,Boca Raton,FL(1988)）。別法として、当該分野における方法により上記オリゴヌクレオチドを細胞に送達し、その結果アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをインビボにて発現させて上記様式で変異ＥＯＡＤ遺伝子産物の生成を阻害することもできる。したがって、ＥＯＡＤに対するアンチセンス構築物を用いてＥＯＡＤを治療することができる。また本発明は、本発明ポリペプチド配列を含む、成熟ポリペプチドに対するアンタゴニスト／阻害剤に関する。アンタゴニスト／阻害剤は成熟ポリペプチドの機能を抑制または除去するものである。よって、例えば、アンタゴニストは本発明成熟ポリペプチドに結合し、その機能を阻害または除去する。例えば、アンタゴニストは、ポリペプチドに結合する、ポリペプチドに対する抗体であってよく、あるいはいくつかの場合にはオリゴヌクレオチドであってよい。阻害剤の例は、成熟ポリペプチドの触媒部位または結合部位に結合し、これを占領し、そのことにより触媒部位または結合部位が基質またはリガンドにアクセスできないようにして正常な生物学的活性を妨害する小型分子である。小型分子の例は、小型ペプチドまたはペプチド様分子を包含するが、これらに限らない。別法として、本発明ポリペプチドを含む遺伝子およびポリペプチドに対するアンタゴニスト（本発明ポリペプチドが通常結合する受容体に結合する）を用いてもよい。アンタゴニストは密接に関連した蛋白であってもよく、その結果、それらは天然蛋白の受容体部位を認識し、これに結合するが、それらは当該ポリペプチドの不活性形態であり、それゆえ受容体が占領されることによりＥＯＡＤポリペプチドの作用が妨害される。このようにして、アンタゴニスト／阻害剤を用いてアルツハイマー病、好ましくはＥＯＡＤを治療してもよい。アンタゴニスト／阻害剤を、例えば上記の医薬上許容される担体とともに組成物中に使用してもよい。さらに本発明を下記実施例を参照して説明するが、かかる実施例は本発明を限定するものと解してはならない。特記しない限り、すべての部または量は重量である。ＥＯＡＤプライマー、プローブおよび使用方法有利には、本発明は、種々の変異ＥＯＡＤ遺伝子を検出するプローブならびにプライマーを提供する。本発明プローブはＥＯＡＤまたはＥＯＡＤ素質の初期スクリーニングに有用であり、患者の行動の観察および分析を用いる、伝統的に行われている行動からのＥＯＡＤの診断（他の痴呆との混同により誤診を招く可能性がある）の別法を提供する。１本鎖または２本鎖により、左から右へ５'から３'方向へとヌクレオチド配列を本明細書に示す。当業者は、本発明方法ならびに当該分野で知られた他の方法を用い、２本鎖および１本鎖プローブをハイブリダイゼーション分析に使用することができる。本明細書に用いる１文字ヌクレオチドシンボルＡ、Ｃ、ＧおよびＴは、IUPAC-IUB Biochemical nomenclature CommissionおよびPatent Office R ulesの推奨により当該分野における通常の意味を有する。本明細書開示のヌクレオチドシンボルＮはヌクレオチドＡ、Ｃ、ＧまたはＴのいずれかを示す。本明細書中の特定の配列の変種のすべては本発明の具体例であり、本発明方法において有用である。本明細書の用語「相補物」は、当該分野で用いられる用語「相補的」な配列をいう。本明細書の用語「増幅ペアー」は、後でより詳細に説明するポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、または鎖置換増幅のごとき方法による選択ＥＯＡＤ遺伝子核酸の増幅において一緒にして用いるのに適するように選択された本発明オリゴヌクレオチドプローブをいう。本発明の実施のための核酸（すなわち、ＤＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡ）試料をいずれの源から得てもよい。典型的には、核酸試料は、変異ＥＯＡＤ遺伝子を含有する可能性のある生物学的液体または生物学的組織の試料の形態として得られ、ならびに／あるいはＥＯＡＤまたはＥＯＡＤ素質を有する可能性のある患者から得られるであろう。適当な生物学的液体としては、血液、リンパ液、脳脊髄液および唾液が挙げられるがこれらに限らない。適当な組織試料としては、皮膚および神経組織および脳組織のごとき軟組織が挙げられるがこれらに限らない。本発明オリゴヌクレオチドプライマーおよびプローブは本発明配列由来のものであってもよく、かかる配列のフラグメントであり、適当な長さのものであり、それらは使用アッセイフォーマットによる。一般的には、オリゴヌクレオチドプライマーは少なくとも約１０ないし約３０ヌクレオチドの長さである。例えば、ＥＯＡＤの検出に使用するオリゴヌクレオチドプライマーは、好ましくは１５ないし２０ヌクレオチドの長さである。オリゴヌクレオチドプローブは鎖置換増幅ペアーのエレメントを含んでいてもよく、好ましくは長さは５０ないし１５０ヌクレオチドである。開示配列より、当業者は、例えばフラグメントの核酸含量を考慮して、いかなる長さのフラグメントを個々の分析に使用するのかを容易に決定することができる。本明細書開示の特定核酸配列にハイブリダイゼーションする核酸配列について、標準的ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、厳密さを減じた条件下で、媒体の厳密さを上昇させて、あるいは厳密な条件下（例えば、プローブの融解温度よりも２０または３０℃低い温度での０.５ｘＳＳＣおよび０.１％ＳＤＳという厳密さの洗浄条件、あるいは標的ＤＮＡ配列の融解温度よりも１０℃低い温度での０.１ｘＳＳＣおよび０.１％ＳＤＳという厳密さの洗浄条件）で、ハイブリダイゼーションを行ってもよい。J.Sambrook et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(2d Ed.1989)(Cold Sprong Harbor Laboratory)参照。一般的には、本明細書開示のＤＮＡにハイブリダイゼーションする核酸配列は、本明細書開示のＤＮＡ配列に対して少なくとも６５％、７０％さらには７５％またはそれ以上の配列類似性を有するであろう。天然に存在する糖−ホスフェート骨格ならびにホスホロチオエート、ジチオネート、アルキルホスホネートおよびα−ヌクレオチドをはじめとする修飾骨格とともに本発明プローブを用いることができる。一般的には、修飾糖−ホスフェート骨格はMiller and T'so,Ann.Reports Med.Chem.,23:295(1988)およびMoran et al.,Nuc.Acids Res.,14:5019(1987)により説明されている。リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のいずれからでも本発明プローブを構築することができるが、ＤＮＡが好ましい。検出方法におけるプローブの使用としては、上記ノーザンブロット（ＲＮＡ検出）、サザンブロット（ＤＮＡ検出）、ウェスタンブロット（蛋白検出）およびドットブロット（ＤＮＡ、ＲＮＡまたは蛋白）が挙げられる。他の検出方法としては、ディップスティック（dipstick）形状物上のプローブ等が挙げられる。本発明プローブを用いることにより形成されたハイブリッド分子を検出するためには、典型的には、分析により検出可能なマーカーをプローブの１つに付加する。いくつかの方法によりプローブを標識することができる。プローブを放射性標識し、オートラジオグラフィーにより検出することができる。オートラジオグラフィー用のかかる標識としては、³Ｈ、¹²⁵Ｉ、³⁵Ｓ、¹⁴Ｃおよび³²Ｐが挙げられる。典型的には、放射性同位元素の選択は、合成の容易さ、安定性、および同位元素の半減期等による。他の検出可能マーカーとしては、リガンド、発色団、化学発光剤、センサーによる電気化学的方法、経時的な蛍光、酵素、および抗体が挙げられる。例えば、抗体をリガンドで標識することができる。本発明プローブとともに使用する他の検出可能マーカーとしては、ビオチン、放射性ヌクレオチド、酵素阻害剤、補酵素、ルシフェリン、常磁性金属、スピン標識、およびモノクローナル抗体が挙げられる。標識の選択は、プローブへの標識の結合様式により決定される。いくつかの手段により、放射性ヌクレオチドを本発明プローブ中に含めることができる。かかる手段としては、２本鎖プローブのニックトランスレーション、放射性ｄＮＴＰ存在下でE.coliのＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウフラグメントまたは他のかかるＤＮＡポリメラーゼを用いる特異的インサートを有する１本鎖Ｍ１３プラスミドのコピー、放射性ｄＮＴＰ存在下で逆転写酵素を用いるＲＮＡ鋳型からのｃＤＮＡの転写、放射性ｄＮＴＰ存在下でＳＰ６またはＴ７ＲＮＡポリメラーゼを用いるＳＰ６またはＴ７プロモーターのごとき強力なプロモーターを有するベクターからのＲＮＡの転写、ターミナルトランスフェラーゼを用いる放射性ヌクレオチドでのプローブ３'末端のテイリング、ならびにガンマ³²ＰＡＴＰおよびポリヌクレオチドキナーゼを用いるプローブ５'末端のホスホリレーションが挙げられる。選択核酸配列または標的核酸配列の増幅を、いずれの適当な手段によっても行うことができる。一般的には、D.Kwoh and T.Kwoh,Am.Biotechnol.Lab.8:14-25( 1990)参照。適当な増幅方法の例としては、ポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅、転写に基づく増幅（D.Kwoh et al.,Proc.Nat'l.Acad.Sci. USA 86:1173-1177(1989)参照）、自続的配列置換（J.Guatelli et al.,Proc.Nat l.Acad.Sci.USA 87:1874-1878(1990)参照）、ならびにＱβレプリカーゼ系(P.Li zardi et al.,BioTechnology 6:1197-1202(1988)参照）が挙げられるがこれらに限らない。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を既知方法により行う。例えば、米国特許第４６８３１９５号；第４６８３２０２号；４８００１５９号および第４９６５１８８号参照（ここに引用したすべての米国特許文献の開示を参照により本明細書に記載されているものとみなす）。一般的には、ＰＣＲは、まず、ハイブリダイゼーション条件下で検出される特定配列のそれぞれの鎖に対する１のオリゴヌクレオチドプライマーで核酸試料を処理して（例えば、耐熱性ポリメラーゼ存在下で）、各核酸鎖に対して相補的な各プライマーの伸長生成物が合成されるようにすることが必要であり（プライマーは、それらにハイブリダイゼーションする特定配列の各鎖に対して十分に相補的であり、その結果、各プライマーから合成された伸長生成物が、その相補物から分離された場合に、他のプライマーの伸長生成物の合成のための鋳型として役立ちうるものである）、次いで、配列または検出すべき配列が存在するならば、変性条件下において試料を処理して鋳型からプライマー伸長生成物を分離することが必要である。これらの工程をサイクル的に繰り返し行って、所望程度の増幅を得る。反応生成物にハイブリダイゼーションしうるオリゴヌクレオチドプローブ（例えば、本発明オリゴヌクレオチドプローブ）を反応生成物に添加し（プローブは検出可能標識を担持している）、次いで、既知方法により標識を検出することにより増幅配列の検出を行ってもよい。リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）を既知方法により行う。例えば、R.Weiss,Scienc e 254:1292(1991)参照。一般的には、２ペアーのオリゴヌクレオチドプローブを用いて反応を行う。１ペアーが検出すべき配列の一方の鎖に結合する。他のペアーが検出すべき配列の他方の鎖に結合する。各ペアーは一緒になって対応鎖と完全に重複する。まず、検出すべき配列の鎖を変性（例えば分離）し、次いで、耐熱性リガーゼ存在下で鎖を２ペアーのオリゴヌクレオチドプローブと反応させてオリゴヌクレオチドプローブの各ペアーが一緒に連結されりようにし、次いで、反応生成物を分離し、次いで、プロセスをサイクル的に繰り返して配列を所望程度にまで増幅することにより反応を行う。その後、ＰＣＲについて説明したのと同様の方法で検出を行ってもよい。鎖置換増幅（ＳＤＡ）も、既知方法により行う。G.Walker,et al.,Proc.Nat'l .Acad.Sci.USA 89:392-396(1992);G.Walker et al.,Nucleic Acids Res.20:1691 -1696(1992)参照。１個の増幅プライマーまたは１ペアーの増幅プライマーを用いてＳＤＡを行ってもよく、後者を用いると指数的増幅が得られる。一般的には、ＳＤＡ増幅プライマーは、５'から３'方向へ、隣接配列(重要でないＤＮＡ配列)、反応に使用する制限酵素の制限部位、および増幅および／または検出される標的配列にハイブリダイゼーションするオリゴヌクレオチド配列（例えば、本発明オリゴヌクレオチドプローブ）を含んでいる。隣接配列は認識部位への制限酵素の結合を容易にするだけであり、好ましくは約１５ないし２０ヌクレオチドの長さである。制限部位はＳＤＡ反応において機能的である（すなわち、プライマー鎖中に含まれるホスホロチオエート結合はその後行われるニッキング（nick ing）を阻害しない−非回文認識部位の使用により満足されうる条件）。好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブ部分は約１３ないし１５ヌクレオチドの長さである。下記のごとく、１個の増幅プライマーを用いてＳＤＡを行う：ＤＮＡ試料を１種またはそれ以上の制限酵素で消化することにより、検出される配列を含む制限フラグメント（好ましくは約５０ないし１００ヌクレオチドの長さであり、好ましくは低ＧＣ含量）を調製する。制限フラグメントを含有する反応混合物にＳＤＡ増幅プライマーを添加して、制限フラグメントと増幅プライマーとの間に２本鎖（各末端に５'オーバーハングを有する）が形成されるようにする。増幅プローブ上の制限部位に結合する制限酵素（例えばＨｉｎｃII）を反応混合物に添加し、エキソヌクレアーゼ欠損ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、E.coli ＤＮＡポリメラーゼＩのエキソヌクレアーゼ欠損形態、V.Derbyshire,Science 240:199-201(198 8)参照）を反応混合物に添加し、３種のｄＮＴＰおよび１種のｄＮＴＰ［αＳ］を反応混合物に添加する（使用される特定の制限酵素の制限部位においてプライマー鎖中にホスホロチオエート結合が含まれるようにｄＮＴＰ［αＳ］を選択する）（例えば、制限酵素がＨｉｎｃIIである場合、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＤＤＰ、およびｄＡＴＰ［αＳ］）。ＤＮＡポリメラーゼはｄＮＴＰを用いて２本鎖の３'末端を伸長させて標的鎖に対する下流相補物を形成し、制限酵素は増幅プライマー上の制限部位にニックを入れ、ＤＮＡポリメラーゼはニックにおいて増幅プライマーの３'末端を伸長して、先に形成された標的鎖の下流相補物を置換する。プロセスは本質的に繰り返される。なぜなら、新たな相補鎖が制限部位から形成されると制限酵素は連続的に新たな相補鎖にニックを入れ、ＤＮＡポリメラーゼは連続的に新たな相補鎖をニックの入った制限部位から形成するからである。２本鎖標的ＤＮＡ配列上の１ペアーのプライマーを用いてＳＤＡを行うことができる。第２のプライマーは相補鎖の５'末端に結合し、その結果、２セットの繰り返し反応が同時に起こる。プロセスは指数的に進行する。なぜなら、一方のセットの反応の生成物は、他方のセットの反応における増幅プライマーのための標的として役立つからである。さらに、ＤＮＡポリメラーゼの鎖置換活性を用い、各増幅プライマーが結合する位置の５'側の隣接位置において基質に結合する「バンパー（bumper）」プライマーを添加することにより、制限フラグメントを得るための最初のＤＮＡ試料消化の工程を除くことができる。各バンパープライマー伸長生成物は対応増幅プライマー伸長生成物に取って代わり、２種の置換された相補的な増幅プライマー伸長生成物は互いに結合して、当該ＳＤＡプライマーペアーを用いる指数的ＳＤＡのための基質として役立ちうる。ＳＤＡを用いる場合、好ましくは、グアニンとシトシンの合成含量が少なくなるよう、好ましくは、プローブの全ヌクレオチド組成の７０％未満となるように本発明オリゴヌクレオチドプローブを選択する。同様に、標的配列は、２次構造の形成を回避するために低ＧＣ含量であるべきである。核酸試料中の変異ＥＯＡＤ遺伝子核酸を検出するためのキットは、本発明配列由来の少なくとも１種のプローブフラグメント、およびプローブと核酸試料との間のハイブリダイゼーションを可能にするための溶液を含み、プローブは溶液に懸濁されているか、または凍結乾燥形態として別個に提供される。適当なハイブリダイゼーション溶液の一例は、６ｘＳＳＣ（０.０９Ｍクエン酸ナトリウム，ｐＨ７.０）、０.１ＭＥＤＴＡｐＨ８.０、５ｘデンハーツ溶液［０.１％（ｗ／ｖ）フィコールタイプ４００、０.１％（ｗ／ｖ）ポリビニルピロリドン、０. １％（ｗ／ｖ）ウシ・血清アルブミン］、および１００μｇ／ｍｌ剪断変性サケ・精子ＤＮＡ（Bethesda Research Laboratories,Gaithersburg,Md.20877 USAから、カタログ番号５５６５ＵＡとして入手できる）からなる。さらにT.Maniatis et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,387-388(1982)(Cold Spring Harbor Laboratory)参照。キット成分を一緒にして通常の容器（例えば、破ることのできるシールでシールされた容器）にパッキングする。典型的には、キットは、本発明の特定の具体例を実施するための説明書が添付される。キットのさらなる任意成分としては、使用アッセイフォーマットにもよるが、上記ＰＣＲを行うための第２のプローブ（あるいは検出工程を行うためのキットの場合には例えば検出可能マーカーで標識された本発明プローブ、および検出可能マーカーが酵素である場合には酵素基質であってもよい）が挙げられる。図１および２に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、それらのフラグメントまたは他の誘導体またはそれらのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞を免疫原として用いてそれらに対する抗体を得ることができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であってよい。また本発明は、キメラ、１本鎖、およびヒト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントまたはＦａｂ発現ライブラリーの生成物を包含する。当該分野で知られた種々の手順をかかる抗体およびフラグメントの製造に用いてもよい。動物へのポリペプチドの直接注射により、あるいは動物、好ましくは非ヒトへのポリペプチドの投与により、本発明配列の対応するポリペプチドに対して生成する抗体を得ることができる。次いで、そのようにして得られた抗体はポリペプチド自体に結合するであろう。このようにして、ポリペプチドのフラグメントのみをコードしている配列を用いたとしても、もとのポリペプチド全体に結合する抗体を得ることができる。次いで、かかる抗体を用いて、ポリペプチドを発現する組織からそのポリペプチドを単離することができる。モノクローナル抗体の調製のために、連続的な細胞系培養により製造される抗体を提供する方法を用いることができる。例としては、ハイブリドーマ法（Kohl er and Milstein,1975,Nature,256:495-497）、トリオーマ法、ヒト・Ｂ細胞ハイブリドーマ法（Kozbor et al.,1983,Immunology Today 4:72）、ならびにヒト・モノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Cole et al .,1985,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,pp.77-9 6）が挙げられる。１本鎖抗体の製造について記載された方法（米国特許第４９４６７７８号）を用いて本発明の免疫原性ポリペプチド生成物に対する１本鎖抗体を製造することができる。蛋白試料中の変異ＥＯＡＤ蛋白検出のためのキットは、本発明ポリペプチドに対する少なくとも１種の抗体、および抗体とポリペプチド試料との間の結合を可能にするための蛋白結合溶液を含み、抗体は溶液に懸濁されているか、または凍結乾燥形態として別個に提供される。また本発明配列は染色体の同定にも価値がある。配列は特異的に標的化され、個々のヒト・染色体上の特定の位置とハイブリダイゼーションしうる。そのうえ、染色体上の特定の部位を同定することについて、現在のところ必要性がある。実際の配列のデータ（繰り返し多型性）に基づく染色体マーキング試薬は、染色体マーキングに使用可能なものが現在少ない。本発明による染色体へのＤＮＡのマッピングは、遺伝子を疾病と関連づける重要な第１工程である。簡単に説明すると、ｃＤＮＡからＰＣＲプライマー（好ましくは１５ないし２５ｂｐ）を調製することにより、配列を染色体にマッピングすることができる。ｃＤＮＡのコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡ中の１個よりも多いエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し、かくして、増幅プロセスを複雑にする。次いで、個々のヒト・染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのこれらのプライマーを用いる。プライマーに対応するヒト・遺伝子を含むハイブリッドのみが増幅フラグメントを生じるであろう。体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体への特定のＤＮＡの帰属のための迅速な方法である。同じオリゴヌクレオチドプライマーについて本発明を用い、特定の染色体由来のフラグメント群あるいは同様の方法で大きなゲノムクローンのプールを用いてサブローカライゼーション（sublocalization）を行うことができる。染色体へのマッピングのために同様に使用可能な他のマッピング方法としては、in situハイブリダイゼーション、標識されフロー−ソートされた（flow-sorted）染色体を用いるプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレクションが挙げられる。中期染色体スプレッドに対するｃＤＮＡクローンの蛍光in situハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、１工程で正確な染色体位置を得ることができる。５００または６００塩基程度の短いｃＤＮＡについてこの方法を用いることができる。しかしながら、２０００ｂｐよりも長いクローンは、簡単に検出できる十分なシグナル強度でユニークな染色体位置に結合する可能性が高い。ＦＩＳＨには、ＥＳＴが由来するクローンの使用が必要であり、長ければ長いほどよい。例えば、２０００ｂｐが好ましく、４０００ｂｐがより好ましいが、時間のわりに合理的かつ良好な結果を得るには４０００ｂｐよりも長いものはおそらく必要ない。この方法の概説としては、Verma et al.,Human Chromosomes:A Manual of Basic Techniques,Pergamon Press,New York(1988)。配列を正確な染色体位置にマッピングしたならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的マッピングのデータと関連づけることができる。かかるデータは、例えば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns Hopkins Universit y Weich Medical Libraryからオンラインで利用できる）において見いだされる。次いで、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関連を、連関（物理的に隣接した遺伝子の同時遺伝）の分析により確認する。次に、罹病および未罹病個体間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定することが必要である。変異が罹病個体のいくつかまたは全部に観察されるが、正常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の原因である可能性がある。現在の物理的マッピングおよび遺伝学的マッピング法の分解能によれば、疾病に関連した染色体領域に正確に位置決めされるｃＤＮＡは、５０ないし５００個の潜在的に病因である遺伝子のうち１つであろう（１メガベースのマッピング分解能であり、２０キロベースにつき１個の遺伝子があると過程した場合）。罹病および未罹病個体の比較には、一般的には、まず、染色体スプレッドから見ることができ、あるいはｃＤＮＡ配列に基づくＰＣＲを用いて検出できる欠失またはトランスロケーションのごとき染色体における構造変化を探すことが必要である。最終的には、変異の存在を確認し、多型性と変異とを識別するためにはいくつかの個体由来の遺伝子の完全な配列決定が必要である。当業者は、本発明ヌクレオチドおよびアミノ酸配列を用いて正常ヒト個体からＥＯＡＤ遺伝子を容易に得ることができる。本発明ヌクレオチドおよびアミノ酸配列を用いてＥＯＡＤ個体由来の遺伝子配列と正常配列とを比較することにより遺伝子の変異を決定することができる。ＥＯＡＤ遺伝子に関する本明細書開示のすべての方法、組成物およびキットはＥＯＡＤスプライス変種についても有用である。実施例実施例１ＥＯＡＤＥＳＴに対応するＤＮＡ配列からのＥＯＡＤ遺伝子発現ヒト・ＥＯＡＤ遺伝子産物の一部をコードしている本発明ＥＯＡＤ遺伝子配列を、慣用的方法を用いて発現ベクター中に導入する（哺乳動物における蛋白翻訳を指令する発現ベクター中へクローン化配列を移行させる方法）。市販ベクターおよび発現系は、Stratagene(La Jolla,California)、Promega(Madison,Wiscons in)、およびInvitrogen(San Diego,California)をはじめとする種々の供給元から得ることができる。所望ならば、発現を増強し、正しい蛋白フォールディングを容易にするために、Hatfieldらの米国特許第５０８２７６７号（参照により本明細書に記載されているものとみなす）により説明されるようなコドン文脈（codon context）およびコドン発現生物を用いてもよい。対象ペプチドに関するコーディング領域を含み、そのＥＯＡＤｃＤＮＡ配列が本発明ＥＳＴの使用により得られるものであるクローン化ＥＯＡＤｃＤＮＡ配列からのポリペプチド取得のための１の典型的方法を以下に示す。ポリＡ配列を欠くＥＯＡＤｃＤＮＡ配列については、例えば、ＢｇｌIおよびＳａｌI制限エンドヌクレアーゼ酵素を用いてｐＳＧ５（Stratagene）からポリＡ配列を切り出し、それを哺乳動物発現ベクターｐＸＴ１（Stratagene）中に導入することにより、この配列を構築物に付加することができる。ｐＸＴ１は、Moloney Murine 白血病ウイルス由来のＬＴＲおよびｇａｇ遺伝子の一部を含んでいる。構築物中のＬＴＲの位置によっては有効で安定なトランスフェクションが可能である。該ベクターは、単純ヘルペスのチミジンキナーゼプロモーターおよび選択可能なネオマイシン遺伝子を含んでいる。ｃＤＮＡに対して相補的であり、５'プライマー中にＰｓｔI用制限エンドヌクレアーゼ配列を含み、対応ｃＤＮＡ３'プライマーの５'末端にはＢｇｌII制限部位を含むオリゴヌクレオチドプライマーを用い、ポリＡ配列に続いてｃＤＮＡが位置するように注意を払いながら、ＥＯＡＤｃＤＮＡを得る。ＰＣＲ反応により得られる精製フラグメントをＰｓｔIで消化し、エキソヌクレアーゼを用いて平滑末端化し、ＢｇｌIIで消化し、精製し、ｐＸＴ１に連結して、ポリＡ配列を含むようにし、次いで、ＢｇｌIIで消化する。製品の説明書に概説された条件下でリポフェクチン（Life Technologies,Inc. ,Grand,Island,New York）を用いて連結生成物をマウス・ＮＩＨ３Ｔ３細胞中にトランスフェクションする。トランスフェクションした細胞を６００μｇ／ｍｌのＧ４１８（Sigma,St.Louis,Missouri）中で増殖させた後、陽性のトランスフェクション体を選択する。好ましくは、蛋白を上清中に遊離させる。しかしながら、蛋白が膜結合ドメインを有する場合、蛋白は細胞中に残存し、細胞表面への発現は制限されるかもしれない。トランスフェクション生成物を精製し局在化させることが必要であるので、推定ｃＤＮＡ配列から合成された１５量体ペプチドをマウスに注射してそのｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドに対する抗体を得る。抗体産生を可能にする方法において、さらにＥＯＡＤｃＤＮＡ配列を真核発現ベクター中に取り込ませ、例えば、β−グロビンとのキメラとして発現させる。β−グロビンに対する抗体を用いてキメラを精製する。次いで、β−グロビン遺伝子とｃＤＮＡとの間に作成した対応プロテアーゼ開裂部位を用いて翻訳後、２つのポリペプチドに分離する。β−グロビンキメラを得るための有用な発現ベクターはｐＳＧ５（Stratagene）である。このベクターはウサギ・β−グロビンをコードしている。ウサギ・β−グロビン遺伝子のイントロンIIは、発現された転写物のスプライシングを容易にし、構築物中に取り込まれたポリアデニレーションシグナルは発現レベルを向上させる。説明したこれらの方法は分子生物学の当業者によく知られている。Davidらの方法の教科書において標準的方法が公表されており、多くの方法は、Stratagene、Life Technologies,Inc.、またはProm egaからの技術援助の典型例から得られる。さらに、In vitro Express^TM翻訳キット（Stratagene）のごときインビトロ翻訳系を用いていずれの構築物からでもポリペプチドを得ることができる。実施例２ヒト・ＥＯＡＤ蛋白に対する抗体の製造当該分野で知られた方法または本明細書記載の方法を用いて、実質的に純粋な蛋白またはポリペプチドをトランスフェクションまたは形質転換された細胞から単離する。また、E.coliのごとき組み換え原核発現系において蛋白を製造することができ、あるいは化学合成することができる。例えば、Amiconのフィルター装置により濃縮して数マイクログラム／ｍｌのレベルにすることにより、最終調合物中の蛋白濃度を調節する。次いで、蛋白に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体を以下のようにして調製する。説明したように同定され単離されたいずれかのペプチドのエピトープに対するモノクローナル抗体を、Kohler,G.and Milstein,C.,Nature,256:495(1975)の古典的方法またはその方法の変法に従ってネズミ・ハイブリドーマから調製することができる。簡単に説明すると、数マイクログラムの選択蛋白を数週間にわたりマウスに繰り返し注射する。次いで、マウスを屠殺し、脾臓の抗体産生細胞を単離する。ポリエチレングリコールを用いることにより脾臓細胞をマウス・ミエローマ細胞と融合させ、アミノプテリンを含む選択培地（ＨＡＴ培地）上での系の増殖により過剰の未融合細胞を破壊する。うまく融合した細胞を希釈し、希釈物の一部をマイクロタイタープレートのウェルに入れ、培養を継続する。本来的にはEngvall,E.,Meth.Enzymol.,70:419(1980)により記載されたようにして、ＥＬＩＳＡおよびその変法のごときイムノアッセイ手順によりウェルの上清中の抗体を検出することにより、抗体産生クローンを同定する。選択された陽性クローンを増殖させ、それらのモノクローナル抗体生成物を使用のために集める。モノクローナル抗体製造のための詳細な手順は、Davis,L.et al.Basic Methods in Mol ecular Biology,Elsvier,New York.Section 21-2(1986)に記載されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 45/00 ＡＥＤ 45/00 ＡＥＤ 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＭ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．図１および図２のポリペプチド配列からなる群から選択されるポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して配列が少なくとも７０％同一である領域を含む単離ポリヌクレオチド。２．ＡＴＣＣ受託番号９７２３８中のヒト・ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して配列が少なくとも７０％同一である領域を含む単離ポリヌクレオチド。３．作動するように連結された請求項１記載のポリヌクレオチドを宿主細胞中で発現させるシス−作用性制御エレメントを含む発現ベクター。４．請求項３の発現ベクターを発現可能に含んでいる宿主細胞。５．請求項１記載のポリヌクレオチドを細胞中で発現させる工程を含む、ポリペプチドの製造方法。６．図１および図２のポリペプチドからなる群より選択されるアミノ酸配列に対して配列が少なくとも７０％同一である領域を含むポリペプチド。７．ＡＴＣＣ受託番号９７２３８中のヒト・ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列の連続した領域に対して配列が同一である１５個またはそれ以上のアミノ酸からなるポリペプチド。８．試料中のＥＯＡＤポリヌクレオチドを調べる方法であって、該ポリヌクレオチドに特異的なプローブが該ポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイゼーションする条件下で該プローブを試料とハイブリダイゼーションさせること、次いで、該試料中のポリヌクレオチドへの該プローブのハイブリダイゼーションを調べることを特徴とし、該プローブが図１および図２のポリヌクレオチド配列からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％同一である２０個またはそれ以上の塩基対からなる領域をその配列中に含むものである方法。９．図１および図２のポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのアミノ酸に対して配列が少なくとも９０％同一である領域を含むポリペプチドに特異的に結合する抗体。１０．試料中の図１および図２のポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのアミノ酸に対して配列が少なくとも９０％同一である領域を含むポリペプチドを検出する方法であって、特異的結合をさせる条件下で該ポリペプチドに特異的に結合する試薬を試料とともにインキュベーションすること、次いで、試料中の該ポリペプチドへの該試薬の結合を調べることを特徴とする方法。１１．ＥＯＡＤポリヌクレオチドの異常な発現により特徴づけられる疾病の診断方法であって、特異的ハイブリダイゼーションをさせる条件下で図１および図２のポリペプチドからなる群より選択されるアミノ酸をコードしているＲＮＡまたはＤＮＡに対して配列が少なくとも７０％同一である領域を含むポリヌクレオチドに特異的なプローブをハイブリダイゼーションさせること、次いで、試料中の該ポリヌクレオチドへの該プローブのハイブリダイゼーションを調べることを特徴とする方法。１２．請求項６のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。１３．ＥＯＡＤポリペプチドを必要とする患者の治療方法であって、治療上有効量の請求項６のポリペプチドを患者に投与することを特徴とする方法。１４．ＥＯＡＤポリペプチドを阻害することが必要な患者の治療方法であって、治療上有効量の請求項１２の化合物を患者に投与することを特徴とする方法。