JPH11507024A - 尿失禁の治療のためのアルファ−１ｃ−選択的アドレナリン受容体作動薬の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を該患者に投与することを具備した方法を提供する。本発明は更に、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の効果的に収縮を誘導する量を該尿管及び膀胱頚部組織に接触させることを具備した方法を提供する。加えて、本発明は尿失禁の治療のため、並びに尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導するのに使用するための化合物を含む。

Description

【発明の詳細な説明】尿失禁の治療のためのアルファ−１Ｃ−選択的アドレナリン受容体作動薬の使用 本出願を通して、種々の参照文献をかっこ内に引用する。これら刊行物の記載 は、本発明の属する分野の状態をより完全に説明するために、これら全体を参照 文献として本出願の一部とする。これら参照文献の書籍解題の完全な記述は請求 の範囲の直前に示されている。発明の背景 名称「α_1A」は、１９９５年、受容体及びイオンチャンネル命名法増補版（th e 1995 Ｒeceptor and Ｉon Ｃhannel Ｎomenculature Ｓupplement）（Ｗatson and Ｇirdlestone，1995）で概説されたように、先に命名された「α_1C」クロ ーン化サブタイプに対して、ＩＵＰＨＡＲ命名法委員会により最近是認された名 称である。しかし、名称α_1Cを、最近改名された受容体サブタイプ「α_1A」とみ なして本出願並びに補助としての表及び図面中で使用する。旧命名法及び新命名 法の両方で、α_1Cと命名された１種類の唯一の受容体サブタイプのみが存在する （即ち、現在の命名法では、α_1Cは存在しない。）ので、「α_1C」 はこの唯一 の受容体サブタイプの明白な記述である。 失禁は、尿の不髄意的なロスによって特徴づけられる症状である。これは、一 般に２種類のタイプに分けられる。第一のタイプには、潜在的な原因である不安 定な膀胱が含まれ、第二のタイプには、安定な膀胱が存在するが、膀胱の出口の 閉鎖圧の不全が含まれる。この症状は、種々の異なった病理学的、解剖学的又は 神経学的因子で起こりうる（Ｌundberg，1989）。女性の罹患率は、２倍以上高 いが、男性もこれに罹る（Ｌandberg，1989）。最も顕著な発病は、閉経後の女 性に見られる。少なくとも一千万人のアメリカ人が尿失禁に悩んでいると評価さ れている（Ｓand et al.，1990）。失禁は、外科的及び非外科的手法で治療する ことができる。保守的なアプローチには、理学療法（ケーゲルエクササイズ（Ｋ egel exercises））及び尿管周囲筋の強化を目的とした機能性電気的刺激が含ま れる （Ｗalters et al.，1992）。ポリテトラフルオロエチレンを尿管周囲へ注射す ることは、尿管の支持の増加を目的としたより転化した手段である(Ｓand et al ，1990)。圧迫性失禁に対する最も基本的な治療は、膀胱、尿管、及び周囲組織 の配列を改善することを目的とした種々の技術を含めた外科手術である。 尿失禁の治療に対しては、種々の医薬が使用されているが、うまくいったいり いかなかったりしている。膀胱の収縮を低下させるのに使用される医薬には、抗 コリン作用薬、β−ブロッカー、カルシウムチャンネルブロッカー、及び三環性 抗鬱薬が含まれる。エストロゲンは、特に閉経後の女性で、膀胱出口の抵抗を増 大させるのに使用されており、一部成功している。その活性は、尿管粘膜細胞の 増殖を起こす「粘膜密閉効果(mucosal seal effect)」に起因している(Ｗein，198 7)が、現在、尿管でのα−アドレナリン受容体発現の回復にもこれが寄与してい るという幾つかの提案がある（Ｗein，1987）。 膀胱出口の抵抗を増大するための最も一般的な薬剤は、α−アドレナリン受容 体作動薬である。これらは、近位尿管及び膀胱頚部（bladder neck）の平滑筋細 胞に局在するα−アドレナリン受容体を活性化し（Ｓourander，1990; Ｗein，1 987）、収縮を起こし、閉鎖圧を高める。この治療に現在使用されている化合物 には、非選択的アドレナリン受容体薬フェニルプロパノールアミン、エフェドリ ン、及びフェニレフリンがある（Ｗein，1987; Ｌundberg，1989）。これらの医 薬の作用は、部分的にはアドレナリン受容体の直接の活性化、及び神経末端に取 り込まれた後に交感神経ニューロンからの内因性ノルエフェドリンを置換するこ れらの能力、いわゆる非直接的な交感神経興奮作用に一部寄与しうる（Ａnderss on 如（以下の表３を参照）及びこれらの化合物の非直接的作用は、ＣＮＳ及び末梢 でこれらの活性化したα₁−、α₂、及びβ−アドレナリン受容体を生じる。結果 として、これらの薬剤の何れかの所望の治療効果には、望まない副作用が付随す る。失禁にこれらを使用する場合の１つの主要な副作用は、血圧の増加である。 この影響は、投与量依存性であり、治療に効果的な該医薬の循環濃度を達成する は、一部の患者に、ＣＮＳでのこれらの刺激作用による不眠、不安及びめまいを 尿失禁で評価されている他の化合物には、in vinoで活性なフェニルエチルア ミン ＳＴ−１０５９に変換されるミドドリン（midodrine）がある。ミドドリ ン 上記化合物と同様に、その薬効は他のアドレナリン受容体との交差反応性（表３ 参照）によって制限され、達成しうる最大投与量が制限されうる。α−アドレナ リン受容体のサブタイプ、及び種々の生理学的プロセスでのこれらの関わり合い をよりよく理解することは、失禁の治療のためのより効果的な医薬の開発の助け となる。 α−アドレナリン受容体は、末梢及び中枢神経系、並びに体全体の組織に局在 する特異的神経受容体タンパクである。この受容体は、多くの生理学的機能を制 御するための重要なスイッチであり、従って、医薬の開発の重要な標的となる。 これらの受容体と相互作用する医薬は、主要な２種類のクラスを包含する。即ち 、この受容体を活性化することができる内因性リガンド（ノルエピネフリン及び エピネフリン）を摸倣する作動薬：及び内因性リガンドの作用をブロックするよ うに働く拮抗薬である。両方のクラスの多くのα−アドレナリン受容体薬が過去 ４０年間以上にわたって開発されている。先に示したものに加えて、αアドレナ リン受容体の刺激に対するこれらの作用の少なくとも一部を負うものの例には、 クロニジン（作動薬；高血圧）、プラゾシン（拮抗薬；高血圧）、オキシメタゾ リン （作動薬；鼻部鬱血緩和）、及びメトキサミン（上室性頻拍の発現の治療 ）が含まれる。多くのこれらの医薬は効果的であるが、これらはまた、治療の投 与量で望まない副作用を起こす（例えば、クロニジンは抗高血圧効果に加えて乾 燥口、鎮静及び起立性低血圧を起こす。）。 過去１５年間、α−アドレナリン受容体及びα−アドレナリン受容体を標的に した医薬に対して多くの正確な理解がなされている。１９７７年以前には、１つ のアドレナリン受容体が知られているのみであった。１９７７年から１９８８年 の間には、少なくとも２種類のα−アドレナリン受容体α₁及びα₂が、中枢及び 末梢神経系に存在することが科学界に受けいられた。１９８８年からは、分子生 物学の新しい技術で、中枢神経系及び末梢神経系全体に分布する少なくとも６種 類のα−アドレナリン受容体タンパク：α_1A、α_1B、α_1C、α_2A、α_2B及びα_2C が同定された（Ｂylund，1992）。クローニングされたα−アドレナリン受容体 に加えて、最近、幾つかの推定のα₁アドレナリン受容体サブタイプが、種々の 哺乳動物組織の機能的研究を基に開示された。クローニングされていないこれら の受容体は、α_1H、α_1L及びα_1N（Ｍurmamatsu，1995）又は「異型性α₁」(Ａbel ，1995)アドレナリン受容体と記載される。種々の生理学的応答におけるこれら サブタイプの各々の正確な役割は理解され始めたばかりであるが、別個のサブタ イプが作用薬及び拮抗薬に対する個別の生理学的応答を媒介することは明かであ る。例えば、ヒト前立腺の、ノルエピネフリンで誘導される収縮が、α_1C−アド レナリン受容体で媒介されることが示されている（Ｆorray et al.，1994）。１ ９９２年以前に開発された多くのアドレナリン受容体薬は、個々の何れのα−ア ドレナリン受容体サブタイプに対しても選択性がない。この受容体サブタイプ選 択性の欠如は、これらの医薬の不適切な副作用の根元的な原因であることが次第 に明かになっている。 膀胱の貯蔵機能における交感神経性アドレナリン様神経系の役割は良く認識さ れている（Ｗein，1987; Ｌatifpour et al.，1990）。同様に、単離された尿管 及び膀胱組織のアドレナリン受容体メカニズムの研究は、失禁の治療に応用する ことができる（Ｌatifpour et al.，1994; Ｔsujimoto et al.，1986）。多くの グループが、結合及び機能性の研究を通して、ヒト、ウサギ、及びラットの尿管 におけるα₁受容体サブタイプの同定を試みている（Ｙoshida et al.，1991; Ｔ esta et al.，1993; Ｃhess-Ｗilliams et al.，1994）。これらの努力によって も、個々のα₁−アドレナリン受容体サブタイプが尿管でのアドレナリン受容体 作動薬の効果に応答してしまうために、今日まで決定的な証拠をもたらすには至 っていない。 本発明は、α_1C−作動薬が、副作用を低減させる可能性を有しながら尿失禁の 治療に有効であることを見出したことに関連する。α_1C−アドレナリン受容体が α−作動薬及び拮抗薬の心臓血管作用に、有意に影響を与えないことを示すデー タがすでに存在する（Ｆorray et al.，1994）。従って、α_1C−アドレナリン受 容体に対して、他のα₁−アドレナリン受容体、α₂−アドレナリン受容体、β− アドレナリン受容体、並びにヒスタミン受容体及びセロトニン（５−ＨＴ）受容 体 を越える十分な結合性及び機能の選択性を示す作動薬が、現在利用されうる治療 に関連して、尿失禁を治療するためのより効果的な医薬であると考えられる。発明の概要 本発明は、患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容 体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりもヒトα_1Cアドレナリン受 容体を少なくとも１０倍活性化するα_1C選択的作動薬の治療に効果的な量を患者 に投与することを具備した方法を提供する。 本発明は更に、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、尿管及 び膀胱頚部組織を、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容 体を活性化するよりもヒトα_1Cアドレナリン受容体を少なくとも１０倍活性化す るα_1C−選択的作動薬と、効果的に収縮を誘導する量で接触することを具備した 方法を提供する。 加えて、本発明は、尿失禁の治療のため、及び尿管及び膀胱頚部組織の収縮の 誘導に使用するための化合物を包含する。図面の簡単な説明 図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃは、クローニングされたヒトα_1A−アドレナリン受容 体(Ａ)、α_1B−アドレナリン受容体(Ｂ)、及びα_1C−アドレナリン受容体(Ｃ)を 用いる結合試験で測定されたｐＫ_Iに対する、ヒト尿管の機能性の研究で決定さ れた拮抗剤のｐＫ_B値の相関関係を示す。線形回帰分析に対する傾斜及び相関関 係係数（ｒ）を各図に示した。 図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃは、クローニングされたヒトα_1A−アドレナリン受容 体(Ａ)、α_1B−アドレナリン受容体(Ｂ)、及びα_1C−アドレナリン受容体(Ｃ)を 用いる結合試験で測定されたｐＫ_Iに対する、メスウサギ尿管の機能性の研究で 決定された拮抗剤のｐＫ_B値の相関関係を示す。線形回帰分析に対する傾斜及び 相関関係係数（ｒ）を各図に示した。 図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃは、クローニングされたヒトα_1A−アドレナリン受容 体(Ａ)、α_1B−アドレナリン受容体(Ｂ)、及びα_1C−アドレナリン受容体(Ｃ) を用いる結合試験で測定されたｐＫ_Iに対する、オスウサギ尿管の機能性の研究 で決定された拮抗剤のｐＫ_B値の相関関係を示す。線形回帰分析に対する傾斜及 び相関関係係数（ｒ）を各図に示した。 図４Ａ、４Ｂ、及び４Ｃは、クローニングされたヒトα_1A−アドレナリン受容 体(Ａ)、α_1B−アドレナリン受容体(Ｂ)、及びα_1C−アドレナリン受容体(Ｃ)を 用いる結合試験で測定されたｐＫ_Iに対する、メスイヌ尿管の機能性の研究で決 定された拮抗剤のｐＫ_B値の相関関係を示す。線形回帰分析に対する傾斜及び相 関関係係数（ｒ）を各図に示した。 図５Ａ、５Ｂ、及び５Ｃは、クローニングされたヒトα_1A−アドレナリン受容 体(Ａ)、α_1B−アドレナリン受容体(Ｂ)、及びα_1C−アドレナリン受容体(Ｃ)を 用いる結合試験で測定されたｐＫ_Iに対する、オスイヌ尿管の機能性の研究で決 定された拮抗剤のｐＫ_B値の相関関係を示す。線形回帰分析に対する傾斜及び相 関関係係数（ｒ）を各図に示した。 図６は、ＳＫ＆Ｆ１０２６５２、Ａ−６１６０３、ＳＤＺ ＮＶＩ ０８５、 プラゾシン、５−メチルウラピジル、アバノキル、化合物１、及びＳＴ−１０５ ９の化学構造を示す。発明の詳細な説明 以下の説明は、本発明の理解の補助のためのものである。 受容体の活性化は、化合物が細胞の表面に在る場合に、受容体への化合物の結 合が細胞内での代謝応答に繋がるプロセスを説明する。このような代謝応答は、 アデニルイルシクラーゼの活性化、グアニルイルシクラーゼの活性化、Ｉのしト ールリン脂質の加水分解、細胞膜を通過するイオンの移動、又は受容体が発現さ れる細胞内の組織の収縮を含むが、これらに限定されない。 有効性は、作用薬の最大活性化の半分を引き出す作用薬の濃度を意味する（Ｅ Ｃ₅₀又はＥＣ₅₀の逆対数（negative log）、即ちｐＥ₅₀として表される。） 固有活性は、個々の作用薬が対照の全作用薬によって引き出される最大活性に 比較して引き出すことができる細胞又は組織の最大活性の大きさを意味し、全作 用薬に対する１と拮抗剤に対する０との間の範囲の値として表される。最初に定 義された固有活性（Ａriens，1960）が、測定される受容体系に依存すると認識 されている（Ｋenakin，1987）ので、本明細書中での固有活性は、以下に説明す るクローニングされた受容体系を使用して行われる測定を基準にする。 受容体活性の選択性は、１の受容体を他の受容体に関して選択的に活性化する 作用薬の能力に関連する。このような選択性は、（ａ）他の受容体を活性化する のに必要な濃度よりも非常に低い濃度で１の受容体を活性化する作用薬の能力（ 即ち、有効性の差）、又は（ｂ）濃度とは独立に、他の受容体よりも非常に高い 割合で１つの受容体を活性化する作用薬の能力（即ち、固有活性の差）、又は両 方の組み合わせを反映する。 従って、「以下の（受容体）何れかを活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1C−アドレナリン受容体を活性化する」の形式の表現は、これが有効性の差、 又は固有活性化の差、又はその両方の値による何れであっても、このような何れ かの差を意味し、これらを含むものである。 上記定義を考慮すれば、本発明は、患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒ トα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも 少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の 治療に効果的な量を患者に投与することを具備した方法を提供する。 本発明は更に、ヒト尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受 容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも５０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を患 者に投与することを具備した方法を提供する。 本発明は、ヒト尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体 及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも１００倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を患者 に投与することを具備した方法を提供する。 本発明は、ヒト尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体 及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも２００倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を患者 に投与することを具備した方法を提供する。 尿失禁を治療する方法を実施するのに使用されるα_1C選択的作用薬は、これが ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体に拮抗しないとい う特徴を更に有する。 望ましくは、尿失禁を治療する方法を実施するのに使用されるα_1C選択的作用 薬は、これが、何れかのα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受 容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化 する。α₂アドレナリン受容体の幾つかの例には、α_2A、α_2B、及びα_2C受容体 が含まれる。 本発明はまた、尿失禁を治療する方法を実施するのに使用されるα_1C選択的作 用薬が、何れかのα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を 拮抗しないという特徴を有することを備える。 望ましくは、尿失禁を治療する方法を実施するのに使用されるα_1C選択的作用 薬がヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する。 本発明は更に、ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよ りも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化することを備える。 本発明ではまた、尿失禁を治療する方法を実施するのに使用されるα_1C選択的 作用薬は、これがヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−Ｈ_{1D β}、５− ＨＴ_1E、５−Ｈ_1F、５−ＨＴ₂、又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なく とも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化することが規定される。 本発明は更に、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、尿管及 び膀胱頚部組織を、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容 体を活性化するより少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する α_1C選択的作用薬の効果的に収縮を誘導する量と接触することを具備した方法を 提供する。 本発明は更に、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、尿管及 び膀胱頚部組織を、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容 体を活性化するより少なくとも５０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する α_1C選択的作用薬の効果的に収縮を誘導する量と接触することを具備した方 法を提供する。 本発明は、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、尿管及び膀 胱頚部組織を、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を 活性化するより少なくとも１００倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C 選択的作用薬の効果的に収縮を誘導する量と接触することを具備した方法を提 供する。 本発明はまた、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、尿管及 び膀胱頚部組織を、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容 体を活性化するより少なくとも２００倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化す るα_1C選択的作用薬の効果的に収縮を誘導する量と接触することを具備した方法 を提供する。 尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法を実施するのに使用されるα_1C選 択的作用薬は、これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受 容体を拮抗しないという特徴を更に有する。 望ましくは、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法を実施するのに使用 されるα_1C選択的作用薬は、何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかの βアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリ ン受容体を活性化する。α₂アドレナリン受容体の幾つかの例にはα_2A、α_2B、 及びα_2C受容体が含まれる。 本発明ではまた、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法に使用されるα_1C 選択的作用薬は、こらが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβ アドレナリン受容体を拮抗しないという特徴を更に有することが規定される。α₂ アドレナリン受容体の幾つかの例には、α_2A、α_2B、及びα_2C受容体が含まれ る。 望ましくは、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法を実施するのに使用 されるα_1C選択的作用薬は、これがヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化す るよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する。 本発明では更に、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法を実施するのに 使用されるα_1C選択的作用薬が、ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容 体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化す ることが規定される。 本発明ではまた、尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法を実施するのに 使用されるα_1Cアドレナリン受容体が、ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α} 、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−ＨＴ_1F、５−ＨＴ₂、又は５ＨＴ₇受容体を 活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するこ とが規定される。 一態様では、本発明は、尿失禁を治療する方法であって、治療に効果的な量の 下式の化合物を患者に投与することを具備した方法を提供する。 但し、ｎは１から６の整数であり、ＲはＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキルであり； Ｒ₁は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、フェニル、ナフチル、置換されたフェニル又はナフ チルであって、置換基がハロゲン、又はＣ₁−Ｃ₆アルキル又はアルコキシ基であ りものであり； は、アミノ基又はヘテロ環基であり、該ヘテロ環基は、ピペリジン、モルホ リン、ピペラジン、ピロリジン、ヘキサメチレン、又はチオモルホリンであり、 該ヘテロ環基は、これらの窒素原子を介して（ＣＨ₂）_n基に結合されており；ア ミノ基は、Ｒ₂がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ベンジル、又はベンズヒドリルであり 、Ｒ₃がＨ；Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル；Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル；Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキ ル又はシクロアルケニルであるものである。 本発明ではまた、化合物は下記構造を有する。 本発明では更に、化合物は下記構造を有する。 本発明の他の態様は、尿失禁を治療するための方法であって、治療に効果的な 量の下記構造を有する化合物又はこれらの薬学的に許容しうる塩を患者に投与す ることを具備した方法を提供する。 但し、ｍは０から２の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、及びＲ₇は独立に、Ｈ ；ＯＨ；Ｃ₁−Ｃ₆アルキル又はアルコキシ；ハロ；アミノ；アセトアミドまたは ＮＨＳＯ₂Ｒ（但し、ＲはＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキルである。）であり；Ｒ₁及びＲ₂ 、又はＲ₂及びＲ₃、又はＲ₃及びＲ₇は、一緒になってメチレンジオキシ、エチ レンジオキシ、ベンズイミダゾール又はインドール環を形成し、Ｒ₄及びＲ₅の各 々は独立にＨであるか、一緒になって下式を有する。 但し、破線は単結合又は二重結合を表し、Ｒ₆はＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキル である。 本発明ではまた、化合物は下記構造を有する。 本発明では更に、化合物は下記構造を有する 本発明はまた、尿失禁を治療する方法であって、治療に効果的な量の下記構造 を有する化合物を遊離の塩基又は酸付加塩の形態で患者に投与することを具備し た方法を提供する。 但し、Ｒ₁及びＲ₂は各々独立に、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₄アルキルであり；Ｒ₃は ＯＨ又はＣ₁−Ｃ₄アルコキシであり；Ｒ₄はＣ₁−Ｃ₄アルキルチオ、アルキルス ルホキシド又はアルキルスルホン；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ又はＣＦ₃であり；ＸはＯ、 Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＨ、ＮＲ₁又はＮＣ（Ｏ）Ｒ₁である。 本発明では更に化合物は下記構造を有する。 典型的には、本発明では化合物は下記構造を有する。 本発明はまた、上記化合物の光学異性体に向けられる。本発明にはまた、本明 細書で説明される本願の全ての化合物の（−）及び（＋）エナンチオマーが含ま れる。本発明には、薬学的に許容しうる塩及び全ての先に説明した化合物の錯体 が含まれる。該塩には、以下の酸及び塩基が含まれるがこれらに限定されない。 以下の無機酸；塩酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸及びホウ 酸。有機酸；酢酸、トリフルオロ酢酸、蟻酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、 フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメ タンスルホン酸、安息香酸、グリコール酸、乳酸及びマンデル酸。以下の無機塩 基；アンモニア、ヒドロキシエチルアミン及びヒドラジン。以下の有機塩基；メ チルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン 、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチレンジアミン、ヒドロキシエチル アミン、モルホリン、ピペラジン及びグアニジン。本発明は更に上記全ての化合 物の水和物、同形体及び多形体を含む、 従って、本発明は、尿失禁を治療する方法であって、尿失禁に対して効果的な 量で、本明細書中に定義した何れかのα_1C受容体の所定量を投与することを具備 した方法を提供する。 本医薬は、何れかの従来の投与経路により尿失禁に悩まされている患者に投与 されうる。該経路には、静脈内、筋肉内、経口、皮下、腫瘍内、皮内、及び腸管 外が含まれるが、これらに限定されない。尿失禁に対する効果的な量は、患者の 体重１kgあたり０．００１mgから１０．０mgの間である。本発明で開示された尿 失禁を治療する方法は、本明細書で定義した何れかのα_1C受容体作用薬及び薬学 的に許容しうる担体を含有する薬学的組成物を用いて行うこともできる。該組成 物は、０．０５mgから５００mgの間のα_1C受容体作用薬を含有することができ、 選択された投与方法に適切な何れかの形態に形成されうる。経口投与に適した組 成物には、ピル、カプセル、顆粒、錠剤、及び粉末のような固体形態、 溶液、シロップ、エリキシール、及び懸濁液のような液体形態が含まれる。非経 口投与に使用しうる形態には、無菌溶液、エマルジョン、及び懸濁液が含まれる 。 この他には、本医薬は、無菌水、食塩水、又は他の適切な無菌注射用媒体を使 用して投与するときに溶解又は懸濁されうる無菌固体組成物として調製されうる 。担体は、必要なもので、且つ不活性なバインダー、懸濁剤、潤滑剤、着香剤、 甘味料、防腐剤、色素、及びコーティング剤を含むことが考慮される。本医薬は また、経皮用パッチとして製剤化されうる。 投与される最適投与量は、当業者によって容易に決定され、使用される個々の α_1C受容体作用薬、製剤の強さ、投与の方法、及び疾患の症状の進行により変化 しうる。患者の年齢、体重、食事療法（diet）、及び投与の時間を含めた、治療 される個々の患者に依存した追加の因子により、投与量を調節する必要がある。 本明細書で使用される「治療に効果的な量」の語は、組織、系、動物又はヒト 、において、研究者、獣医師、医者又は他の臨床医によって調査される生物学的 応答又は薬物応答（該応答には、治療される疾患の症状の緩和を含む。）を引き 出す医薬の量を意味する。本明細書で使用される「患者（subject）」の語は、 動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトであって、治療、観測又は試験 の対象となるものを意味する。 異なったヒト受容体での化合物の結合及び機能性は、注目の受容体を選択的に 発現する培養細胞系を用いて、in vitroで決定される。これらの細胞系は、クロ ーニングされたｃＤＮＡ又はクローニングされたゲノムＤＮＡ、又は以下の例１ ０で更に詳細に説明するヒトα−アドレナリン受容体をコードするゲノムＤＮＡ 及びｃＤＮＡの両方を含有する構築物をトランスフェクションすることによって 調製される。本発明に関連して、プラスミド、又は安定にトランスフェクション された細胞系として本明細書で議論される多くのクローニングされたヒト受容体 を、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従い、及 びこれを満足して行い、アメリカンタイプカルチャーコレクション、１２３０１ 、パークローンドライブ、ロックヴィル、メリーランド、２０８５２に寄託した 。特に、これらの寄託で、以下の表１のＡＴＣＣアクセス番号が付与された 細胞のトランスフェクション ＣＯＳ-7細胞の種々のプラスミドでの一時的トランスフェクションを、当業者 に周知の方法であるＤＥＡＥ−デキストラン法を用いて行った。手短に説明すれ ば、注目の受容体に対する発現ベクターを含有するプラスミドを、ＤＥＡＥ−デ キストラン溶液に浸したＣＯＳ-7細胞の単層に加えた。典型的には、トランスフ ェクションの効率を上げるために、Ｌopataの方法（Ｌopata，et al.，1984）に 従ってジメチルスルホキシドも加えた、次に、細胞を制御した条件下で成長させ 、約７２時間後に試験に使用した 安定な細胞系を当分野で周知の方法を用いて得た。例えば、典型的には、安定 な宿主細胞を、リン酸カルシウム法を用いて注目の受容体に対する発現ベクター を含有するプラスミド、及びトランスフェクションした細胞をうまく選択できる 遺伝子を含有するプラスミドで協同トランスフェクション(cotransfection)した 。次に、細胞を制御した環境で成長させ、注目の受容体の発現に対して選別した 。細胞を成長させ、選択させることを続けることにより、本明細書で説明し、使 用する受容体を発現する安定な細胞系を得た。結合アッセイ 一般には、注目の受容体への試験化合物の結合を、受容体を発現した細胞から 誘導される膜調製物を用いて競争結合アッセイで評価した。第一に、受容体に結 合することが知られている化合物の特異的結合を測定できる条件を決定した。次 に、膜調製物中の受容体への該公知化合物の結合を、幾つかの異なった濃度の試 験化合物の存在下で評価した。受容体への試験化合物の結合は、受容体に結合さ れた公知化合物の量を減少させる。注目の受容体に対して高い親和性を有する試 験化合物は、該試験化合物が注目の受容体に対して低い親和性を持っていたとし た場合に要求される濃度よりも低い濃度で、結合された公知化合物の所定のフラ クションを置き換えるであろう。 表２に示されたデータは、これが、動物、特にヒトの尿管でのアドレナリン受 容体作用薬に対して収縮反応を媒介するための応答をしうるα_1C−アドレナリン 受容体であることを示す。このin vitroの特性は、in vivoでの尿失禁の治療で の有効性に相関すると当分野で認識されている。 本発明は、以下の実験の詳細によりよりよく理解されるであろう。しかし、当 業者は、特別な方法及び議論された結果が実験の詳細の後の請求の範囲でより完 全に説明される本発明を単に例示するのみであることを容易に認識するであろう 。実験の詳細 フェニレフリン、プラゾシン、５−メチルウラピジル、及びＢＭＹ７３７８を 、リサーチバイオケミカルズ社（Ｒesearch Ｂiochemicals，Ｉnc.）から得た。 他の化合物は、以下の例に従って調製した。 例１ （±）−Ｎ−［５−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２ −ヒドロキシ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル］メタンス ルホンアミド（Ａ−６１６０３）の合成 ５−ニトロ−６−メトキシ−１−テトラロン １００mlの７０％ＨＮＯ₃の溶液に、６−メトキシテトラロン（Ａldrich Ｃhe mical Ｃo.，Ｍilwaukee，Ｗisconsin、４．０ｇ、２３mmol）を０℃で１時間以 上かけて加えた。得られた溶液を、２５℃で２４時間攪拌した。次に反応混合物 を水にあけ、黄色の沈殿を得た。これをカラムクロマトグラフィー（４０％−Ｅ ｔＯＡｃ−ヘキサン）にかけ、２．２ｇ（４３％）の所望の生成物を得た。 （±）−６−メトキシ−５−ニトロ−１−トリメチルシリルオキシ−１，２，３ ，４−テトラヒドロナフタレン−１−カルボニトリルの合成 ５−ニトロ−６−メトキシ−１−テトラロン（０．９３ｇ、４．２mmol）の２ ０ml ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液に、ＺｎＩ₂（１００mg、０．３１mmol）及びＴＭＳＣＮ（ ０．８４ml、６．３mmol）を加え、得られた溶液を２５℃で２時間攪拌した。反 応混合物を減圧下に濃縮し、無色の油状物として所望の生成物を得た。これを精 製することなく次のステップで使用した。 （±）−６−メトキシ−５−ニトロ−３，４−ジヒドロナフタレン−１−カルボ ニトリルの合成 ６−メトキシ−５−ニトロ−１−トリメチルシリルオキシ−１，２，３，４− テトラヒドロナフタレン−１−カルボニトリル（１．３ｇ、４．０mmol）及びＡ ｃＣｌ（１．０ml）の２０ml ＡｃＯＨ溶液を８０〜１００℃で２時間攪拌した 。得られた反応混合物を減圧下に濃縮し、無色の油状物として所望の生成物を得 た（０．８６ｇ、４．０mmol、２段階で９６％）。これを何れの更なる精製をす ることなく以下のステップにかけた。 （±）−６−メトキシ−５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン −１−カルボニトリルの合成 ６−メトキシ−５−ニトロ−３，４−ジヒドロナフタレン−１−カルボニトリ ル（０．４１ｇ、１．８mmol）の１０ml ＥｔＯＨ溶液に、ＮａＢＨ₄（０．２０ ｇ、５．３mmol）を加え、得られた反応混合物を２５℃で３０分攪拌した。溶媒 を減圧下に除去し、油状の残渣を得た。これをＥｔＯＡｃに溶解し、食塩水で洗 浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮して無色の油状物として所 望の生成物を得た（０．４２ｇ、＞９５％）。これを更に精製することなく以下 の反応にかけた。 （±）−６−メトキシ−５−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン −１−カルボニトリルの合成 ６−メトキシ−５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１− カルボニトリル（０．４２ｇ、１．８mmol）及び触媒量の１０％Ｐｄ／Ｃの１０ ０ml ＭｅＯＨ溶液をＨ₂下、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、 減圧下に濃縮して無色の油状物として所望の生成物を得た(０.３６ｇ、＞９５％ )。 （±）−Ｎ−（５−シアノ−２−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロナフ タレン−１−イル）メタンスルホンアミドの合成 ６−メトキシ−５−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１− カルボニトリル（１．７ｇ、８．３mmol）の２０ml無水ピリジン溶液に、メタン スルホニルクロライド（１．９ml、１．２mmol）を加えた、得られた溶液を２５ ℃で２時間攪拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、油状の残渣を得た。これを ＥｔＯＡｃに溶解し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮して油状の残渣を得た 。これをカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃのみ）で精製し、１．５ｇ（６ ５％）の所望の生成物を得た。 （±）−Ｎ−［５−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２ −メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル］メタンスル ホンアミドの合成 Ｎ−（５−シアノ−２−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン −１−イル）メタンスルホンアミド（１．５ｇ、５．４mmol）を２００mlのＭｅ ＯＨに溶解し、０℃に冷却した。次に、この溶液を乾燥ＨＣｌガスで２時間処理 し、密封し、２５℃で１２時間保存した。溶媒を除去し、残渣を１００mlのＭｅ ＯＨに再溶解し、次いでエチレンジアミン（０．６７ml、１０mmol）を加えた。 得られた溶液を１２時間還流温度で攪拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、油 状の残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（２５％のＮＨ₃を飽和させ たＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃）にかけ、１．３ｇ（７６％）の所望の生成物を得た。 （±）−Ｎ−［５−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２ −ヒドロキシ−５，６，７，８，−テトラヒドロナフタレン−１−イル］メタン スルホンアミド（Ａ−６１６０３）の合成 Ｎ−［５−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２−メト キシ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル］メタンスルホンア ミド（０．３０ｇ、０．９mmol）の１００ml ＣＨＣｌ₃溶液へ、−７８℃でＢＢ ｒ₃（２．０ml、２．０mmol）を加えた。得られた反応混合物を２５℃で１２時 間攪拌した。次に、反応混合物を−７８℃に再冷却し、２mlのＭｅＯＨを加えた 。反応混合物を２５に暖め、更に３時間攪拌した。次に、これを減圧下に濃縮し 、淡黄色の固体（０．３５ｇ、＞９５％）を得た。これは、所望の生成物のＨＢ ｒ塩であると同定された。ｍｐ＝２６３〜２６５℃。 例２ Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［２−メチルアミノ）エチル］フェノル］メタンス ルホンアミド（ＳＫ＆Ｆ１０２６５２）の合成 ４−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−３−ニトロベンゼンアセトアミド ５ｇ(２５.３８mmol)の３−ニトロ−４−ヒドロキシフェニル酢酸(Ａldrich Ｃhemical Ｃo，Ｍilwaukee，Ｗisconsinから入手)の２０ml塩化チオニル混合物 を４５分間還流温度で加熱した。反応混合物を冷却し、８０mlのヘキサンにあけ た。得られた沈殿を濾過によって集め、ヘキサンで洗浄し、空気乾燥して黄色 の固体を得た。この酸塩化物の１００mlジクロロメタン溶液を氷浴中で冷却し、 過剰のメチルアミンを蒸留しながら滴下しつつ攪拌した。混合物を室温で一夜攪 拌した。沈殿した固体を濾過により集め、水に溶解した。これを３ＮＨＣｌでｐ Ｈ２まで酸性化し、ジクロロメタンで抽出して黄色の固体４．２ｇ（８０％）を 得た。表題化合物を更に精製することなく、次のステップに使用した。 ４−メトキシ−Ｎ−メチル−３−ニトロベンゼンアセトアミドの合成 ４．２ｇ（１９．８mmol）の４−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−３−ニトロベンゼ ンアセトアミドの５０ml ＤＭＦ（５．５ｇの無水炭酸カリウムを含有する。） 溶液に、５．６mlのジメチル硫酸を加えた。混合物を６０〜７０℃で４５分間加 熱し、更に３．０mlのメチル硫酸で処理した、混合物を冷却し、２００mlの水に あけ、ジクロロメタンで抽出した。抽出物を水で冷却し、乾燥し、蒸発させて固 体を得た。これをエタノール−水から再結晶し、３．７ｇの黄色がかった固体を 得た（８２％）。 ４−メトキシ−Ｎ−メチル−３−［（メチルスルホニル）アミノ］ベンセンアセ トアミドの合成 ３．６ｇ（１６．３mmol）の４−メトキシ−Ｎ−メチル−３−ニトロベンゼン アセトアミドの４０ml ＥｔＯＨ溶液を、５０psiの水素ガスを用いて、２００mg のＰｄ／Ｃ（１０％）上で６時間水素化した 触媒を濾過によって除き、溶媒を 蒸発させ、２．９ｇの白色の固体を得た。この固体を３０mlのぴりにンに溶解し 、１．５ml（１９．４mmol）のメタンスルホニルクロライドの５mlピリジン溶液 を滴下して処理した。反応混合物を３０分間６５℃に暖め、次いで 室温で一夜攪拌した。ピリジンを蒸発させ、残渣を４０mlの水にとり、ｐＨを６ ．７に調節し、氷浴で冷却した。得られた沈殿を濾過により除去し、乾燥して１ ．７ｇの灰色がかった白色の固体を得た（４２％）。ＭｅＯＨから再結晶して白 色の結晶を得た。 Ｎ−［２−メトキシ−５−［２−メチルアミノ）エチル］フェニル］メタンスル ホンアミドの合成 ０．８ｇ（２．８９mmol）の４−メトキシ−Ｎ−メチル−３−［（メチルスル ホニル）アミノ］ベンゼンアセトアミドの２０ml乾燥ＴＨＦ溶液を攪拌し、氷で 冷却し、これにボランの１ＭＴＨＦ溶液（１５ml）を滴下した。滴下が完了した 後、混合物を６時間６５℃に暖めた。これを冷却し、２５mlのメタノール、次い で６ＮＨＣｌで処理した、混合物を蒸発させ、白色の残渣を得た、これを最小量 の熱メタノールに溶解し、濾過し、曇るまで酢酸エチルで処理し、結晶化させた 。固体を濾過により除去し、乾燥して０．５４ｇの白色の結晶を得た(７２％)。 Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［２−メチルアミノ）エチル］フェニル］メタンス ルホンアミド（ＳＫ＆Ｆ１０２６５２）の合成 ０．２ｇのＮ−［２−メトキシ−５−［２−メチルアミノ）エチル］フェニル ］メタンスルホンアミドの１０mlジクロロメタン懸濁液を、ドライアイス−２− プロパノール浴中で、４mlの１ＭＢＢｒ₃のジクロロメタン溶液で処理した。こ れを室温まで暖め、一夜攪拌した。この混合物を５０mlのメタノールで処理し、 １時間攪拌し、蒸発させ、再度メタノールで処理し、乾固させた。この残渣を最 小容積の熱メタノールにとり、酢酸エチルで処理して結晶化させ。０．１７ｇ( ６ ７％)の褐色の結晶を得た。ｍｐ＝１８８〜１８９℃。 例３ （±）−４−メチル−６−メトキシ−９−チオメトキシ−３，４，４ａ，５，１ ０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン （ＳＤＺ ＮＶＩ ０８５）の合成 １，４−ジヒドロ−５−メトキシナフタレン １−メトキシナフタレン（Ａldrich Ｃhemical Ｃo.，Ｍilwaukee，Ｗisconsi n、５５ｇ、３４mmol）の８０ml ＥｔＯＨ還流溶液に、Ａｒ下でナトリウム（５ ．７ｇ、２５０mmol）を小片として加えた。全てのナトリウムが消費されたとき 、反応物を２５℃に冷却し、更に３時間攪拌した。注意深く１００mlの水を加え て反応を停止し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下 に濃縮し、油状残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（３０％ＥｔＯＡ ｃ−ヘキサン）で精製し、２．８ｇ（５２％）の所望の生成物を無色の油状物と して得た。 （±）−６−メトキシ−１ａ，２，７，７ａ−テトラヒドロ−１−オキサシクロ プロパン［ｂ］ナフタレンの合成 １，４−ジヒドロ−５−メトキシナフタレン（２．８ｇ、１７．５mmol）の５ ０ml ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液にＭＣＰＢＡ（８．５ｇ、５０mmol）を一度に加えた。得 られた溶液を０℃で３時間攪拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、氷(５ ０ｇ)と飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（１５０ml）の混合物にあけた。有機層を分離し 、水層をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ₃水溶液で洗浄し 、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮して油状物を得た。これをカラムクロマト グラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂のみ）にかけ、１．７ｇ（５９％）の所望の生成物を無 色の油状物として得た。 （±）−３−アジド−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン −２−オールの合成 ６−メトキシ−１ａ，２，７，７ａ−テトラヒドロ−１−オキサシクロプロパ ン［ｂ］ナフタレン（１．７ｇ、９．７mmol）の２０ml ＤＭＳＯ溶液に、ナト リウムアジド（５．６ｇ、８６mmol）及びＨ₂ＳＯ₄（０．２ml）を加えた。得ら れた懸濁液を２５℃で１７時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、食 塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮し、油状物を得た 。これをカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃのみ）にかけ、１．９ｇ（８９ ％）の２種類の位置異性体の１：１混合物を得た。この２種類の異性体は、ヘキ サンで分別再結晶することにより分離され、０．６ｇの所望の生成物を得た。ｍ ｐ＝８３〜８４℃。 （±）−３−アミノ−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン −２−オールの合成 ３−アジド−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２− オー ル（１．８ｇ、８．０mmol）の１５０ml ＭｅＯＨ溶液を、Ｈ₂（１８psi） 下、１０％Ｐｄ／Ｃ（２０mg）と４時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下 に濃縮して１．４ｇ（９１％）の所望の生成物を無色の油状物として得た。これ を更に精製することなく次の反応に使用した。 （±）−６−メトキシ−４ａ，５，１０，１０ａ−テトラヒドロ−４Ｈ−ナフト ［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン−３−オンの合成 ３−アミノ−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２− オール（１．７ｇ、８．８mmol）及びトリエチルアミン（１．５ml、１１mmol） の１００mlＣＨ₂Ｃｌ₂溶液に、塩化クロロアセチル（１．０ｇ、８．９mmol）の １０ml ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を０℃で滴下した。得られた溶液を１．５時間２５℃で 攪拌した。次に、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮＨＣｌで洗浄した。有 機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に乾燥してアミドに対応する油状物を得た。 この油状残渣を２０mlのＴＨＦに再溶解し、ＮａＨ(０.２５ｇ、０．６７mmol) を０℃でこの溶液に加えた。反応混合物を２５℃で１２時間攪拌した。これをＥ ｔＯＡｃで希釈し、食塩水で洗浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に 濃縮して油状残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（５０％ＣＨ₂Ｃｌ₂ −ＥｔＯＡｃ）で精製し、１．４ｇ（６８％）の所望の生成物を得た。 （±）−６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ −ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジンの合成 （±）−６−メトキシ−４ａ，５，１０，１０ａ−テトラヒドロ−４Ｈ−ナフ ト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン−３−オン（１．４ｇ、６．０mmol）の １００ml ＴＨＦ溶液に、１０mlの、ＬｉＡｌＨ₄のＴＨＦ溶液（１０ml）を 加えた。得られた溶液を２時間還流温度で加熱した。氷で反応を停止し、次に反 応混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。反応混合物を濾過し、透明な有機層を得た。 これを減圧下に濃縮し、１．２ｇ（９２％）所望の生成物を無色の油状物として 得た。 （±）−６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ −ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン−４−カルボン酸 ベンジルエス テルの合成 （±）−６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２ Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン（０．６２ｇ、２．７mmol）の １０ml ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液に、トリエチルアミ ン（１ml、７．２mmol）及びクロロ 蟻酸ベンジル（０．６ml、４．１mmol）を加えた。得られた混合物を２５℃で３ 時間攪拌した。次のこれを１００mlのＥｔＯＡｃで希釈し、食塩水で洗浄した. 。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮して油状残渣を得た。これをカラ ムクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）にかけ、０．４６ｇ（ ４８％）の所望の生成物を得た。 （±）−４−メチル−６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサ ヒドロ−２Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジンの合成 ６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ナフ ト[２，３−ｂ]［１，４］オキサジン−４−カルボン酸 ベンジルエステル(０ ． ４０ｇ、１．１mmol )のＴＨＦ溶液に、２．８mlの、ＬｉＡｌＨ₄のＴＨＦ溶液 （１．０Ｍ）を加えた。得られた溶液を還流温度で３時間攪拌した。氷で反応を 停止し、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトを通して濾過した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄ で乾燥し、減圧下に濃縮し、油状残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー (５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）にかけ、０．１９ｇ（７５％）の所望の生成物を 得た （±）−４−メチル−６−メトキシ−９−ヨード−３，４，４ａ，５，１０，１ ０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ナフト−［２，３−ｂ］［１，４］オキサジンの合 成 ４−メチル−６−メトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ −２Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン(０．３７ｇ、１．６mmol) を７mlのＡｃＯＨに溶解し、この溶液を５０℃に加熱した。このアミンの溶液に Ｈｇ（ＯＡｃ）₂（０．６２g、１９mmol）及びＩ₂（１．０ｇ、３.８mmol）の３ ０ml ＡｃＯＨ溶液を加えた。得られた溶液を５０℃で１時間、２５℃で１．５ 時間攪拌した。反応混合物を濾過して水銀塩を除去し、減圧下に濃縮して、油状 残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（５％のＮＨ₃を飽和させたＭｅ ＯＨ−ＥｔＯＡｃ）にかけ、０．２５ｇ（４４％）の所望の生成物を得た。 （±）−トランス−４−メチル−６−メトキシ−９−チオメトキシ−３，４，４ ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］ オキサジ ン(ＳＤＺ ＮＶＩ ０８５）の合成 ＣＨ₃ＳＬｉ（０．３ｇ、５．５mmol）の６ml ＤＭＳＯ懸濁液に、４−メチル −６−メトキシ−９−ヨード−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ −２Ｈ−ナフト［２，３−ｂ］［１，４］オキサジン（０．２５ｇ、０．７mmol ）及びＣｕ₂Ｏ（１．３ｇ、９．１mmol）を加えた。反応混合物を８０℃で５時 間攪拌した。これをＥｔＯＡｃで希釈し、４ＮＮＨ₄ＯＨで数回洗浄した。有機 層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮して油状残渣を得た。これをカラムクロ マトグラフィー（５％ＭｅＯＨ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）にがけ、０．１５ｇ(７９％)の所 望の生成物を得た。 得られた生成物をＨＣｌ塩に変換し、ＥｔＯＡｃ−Ｅｔ₂Ｏから再結晶して(０． １７ｇの生成物を白色固体として得た。 ｍｐ ２１５〜２１７℃; 元素分析:C₁₅H₂₁NO₂S.1.0 HClに対する計算値 C，5 6.9; H，6.69; N，4.43．実測値: C，56.5; H; 6.77; N，4.38． 例４ １−（６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル ）エタノンの合成 ６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（３．００ ｇ、１５．４mmol、１．００等量）の無水ピリジン溶液を室温、アルゴンかで攪 拌したものに、無水酢酸（１４．５ml、１５４mmol、１０等量）を１５分以上か けて加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、次いで６時間還流温度で攪 拌した。揮発分を高真空下、８０℃でロータリーエバポレーターにより除去した 。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ−ＣＨ₂Ｃｌ₂ ８：９２）にかけ、３．１２ｇ（８９％）の粘稠な茶色の油状物を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、室温において１．２：１の比でゆっくり内部変換を起 こす２種類の配座異性体の存在を示した。 ２−［１−（６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２ −イル）−エチリジンアミノ］−４，５−ジメトキシベンゾニトリルの合成 １−（６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イ ル）エタノン（１．００ｇ、４．２５mmol、１．００等量）のＣＨＣl₃溶液に、 室温、アルゴン下で、ＰＯＣｌ₃（１４３μｌ、１．５３mmol、０．３６等量） を加えた。１０分後、２−アミノ−４，５−ジメトキシベンゾニトリル（７６３ mg、４．２８mmol、１．０１等量）を加え、混合物を一夜還流温度で加熱した。 この混合物を室温に冷却し、１ＭＮａＯＨ水溶液（５０ml）にあけ、水層をＣＨ₂ Ｃｌ₂で抽出した（３×５０ml）。合わせた有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮 した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ−ＣＨ₂Ｃ ｌ₂ ５：９５）にかけ、４８２mg（２８％）の黄色の固体を得た。 ２−（６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル ）−６，７−ジメトキシキノリン−４−イルアミン 半蟻酸塩水和物の合成 ２−［１−（６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン− ２−イル）エチリジンアミノ］−４，５−ジメトキシベンゾニトリル（４７１mg 、１．１９mmol、１．００等量）の、還流させた無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセ トアミド（２４ml）溶液をアルゴン下、攪拌させたものに、ＺｎＣｌ₂（３３９m g、２．４９mmol、２．１０等量）を３回に分けて１時間以上かけて加えた。溶 媒を高真空下、７０℃で蒸留して除いた。エーテル（４０ml）を残渣に加え、こ れを攪拌棒で粉砕し、混合物を０℃で攪拌し、生成物を沈殿させた。上澄みをデ カンテーションし、沈殿を０℃でもう２回エーテルで洗浄した。固体残渣を１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（２５ml）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ml）で１０分間攪拌し 、水層をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した（２×２５ml）。合わせた有機層をＭｇＳＯ₄で 乾燥し、濃縮して４９３mgの茶色の油状物を得た。これをシリカゲルのフラッシ ュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ−ＣＨ₂Ｃｌ₂ １２：８８、次いで２−プロパ ノールアミン−ＣＨ₂Ｃｌ₂ ５：９５）にかけ、１５１mg（３８％）の２−(６ ，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル)−６， ７−ジメトキシキノリン−４−イルアミンを褐色の固体として得た。 ２−(６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル) −６，７−ジメトキシキノリン−４−イルアミン（１５０mg）の熱ＣＨ₂Ｃｌ₂（ ４．５ml）とＭｅＯＨ（１．５ml）混合溶液に、フマル酸（２．２８mg、０．１ ９６mmol、０．５等量）の熱ＭｅＯＨ（３．０ml）溶液を加えた。得られた混合 物を濃縮し、生成物をＭｅＯＨで再結晶し、熱いまま濾過して、濾過の後８５mg の淡茶色固体を得た。 ｍ．ｐ． ２３９〜２４０℃、C₂₂H₂₅N₃O₄・0.5C₄H₄O₄・0.75H₂Oに対する計算値 ：C，61.73; H，6.15; N，9.00．実測値：C，61.77; H，6.17; N，8.91． 例５ （±）−２，６−ジメチル−４−（４−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピ リジン−３，５−ジカルボン酸 ［３−（４，４−ジフェニルピペリジン−１− イル）プロピル］エステルメチルエステルの合成 ３−アミノクロトン酸メチル（２６５mg、２．３mmol、１．０等量）、４−ニ トロベンズアルデヒド（３４８mg、２．３mmol、１．０等量）、及びアセト酢酸 ３−［４，４−ジフェニルピペリジン−１−イル）プロピル］エステル（８７ ２mg、２．３mmol、１．０等量；Ｆlockerzi，Ｄ.; Ｕlrich，Ｗ.-Ｒ.米国特許 ４，９７５，４４０、１９９０年）のイソプロパノール溶液をアルゴン下、攪拌 しながら６８時間還流した。冷却し、溶媒を除去して残渣を得、これをフラッシ ュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＥｔＯＡｃ−ヘキサン １：１及び２：１、 次いでＥｔＯＡｃ）で精製し、７１７mg（５１％）の黄色の固体を得た。 （±）−２，６−ジメチル−４−（４−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピ リジン−３，５−ジカルボン酸 ［３−（４，４−ジフェニルヒペリジン−１− イル）プロピル］エステルメチルエステル塩酸塩（化合物１）の合成 ２，６−ジメチル−４−（４−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン −３，５−ジカルボン酸 ［３−（４，４−ジフェノルピペリジン−１−イル） プロピル］エステルメチルエステル（７１０mg、１．１６mmol、１．０等量）の ＥｔＯＨ（５ml）溶液に、ＨＣｌのエーテル溶液（１．０Ｍ、１．５ml、１．５ mmol、１．３等量）を加えた。溶媒を除去し、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解したこの 溶液を２５mlのエーテルに滴下し、濾過した後に５００mgの黄色の結晶性固体を 得た。 ｍ．ｐ． １５２〜１５３℃。C₃₆H₃₉N₃O₆・HClに対する計算値：C，66.92; H ，6.24; N，6.50.実測値：C，66.70; H，5.99; N，6.27． 例６ （±）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシフェニル）エタノール（ＳＴ− １０５９）の合成 （２，５−ジメトキシフェニル）−ヒドロキシアセトニトリル ４．０ｇ（２４mmol）の２，５−ジメトキシベンズアルデヒドの４０mlジクロ ロメタン（０．０７８ｇ（５％mmol）のＫＣＮ及び０．３１ｇ（５％mmol）の１ ８−クラウン−６を含有する。）溶液に、トリメチルシリルシアニド２．６２ｇ （２６．４mmol）を滴下した。反応混合物を濃縮し、クロロホルムに溶解し、水 で洗浄して乾燥（硫酸ナトリウム）し、減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグ ラフィー（シリカゲル；ヘキサン；酢酸エチル、８：２）で精製して２．８５ｇ （６６％）の所望の化合物を黄色の油状物として得た。 （±）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシフェニル）エタノール（ＳＴ− １０５９）の合成 ２．８４ｇ（１４．７mmol）の（２，５−ジメトキシフェニル）ヒドロキシア セトニトリルの１０ml乾燥ＴＨＦ溶液を攪拌し、氷浴を用いて冷却した。これに ボランの１ＭＴＨＦ溶液（９０ml）を滴下した。添加が完了した後、混合物を２ ０時間還流した。これを冷却し、４０mlの６Ｎ塩酸で処理し、酢酸エチルで洗浄 した。水層を１Ｎ水酸化ナトリウムで中和し、酢酸エチルで抽出し、濃縮して所 望の生成物を白色の固体として得た。１．５ｇ（５２％）。 例７ 異なったヒト受容体における化合物の結合及び機能性特性を、注目の受容体を 選択的に発現する培養細胞系を用いてin vitroで決定した。これらの細胞系は、 クローニングされたｃＤＮＡ又はクローニングされたゲノムＤＮＡ、又はヒトα −アドレナリン受容体をコードするゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡの両方を含有する 構築物を以下のようにトランスフェクションすることによって調製される。 ヒトα_1Aアドレナリン受容体。 ５’非翻訳配列（５’ＵＴ）の１５０の塩基 対及び３００ｂｐの３’非翻訳配列（３’ＵＴ）を含有するα１Ａ受容体の全コ ード領域（１７１９ｂｐ）を、ＥＸＪ.ＨＲと呼ばれるポリリンカーで修飾され た真核生物性発現ベクターpＣＥＸＶ-３のＢamＨＩ及びＣlaＩ部位にクローニン グした。この構築物は、部分的にオーバーラップしたヒトリンパ球ゲノム及び海 馬ｃＤＮＡクローンの結紮に関与する。これは、５’配列に１．２ｋｂのＳmaＩ -ＸhoＩゲノムフラグメントを含有し（ベクターに由来するＢamＨＩ部位は、内 部の挿入に由来するＳmaＩ部位に代わってサブクローニングに使用される。）、 ３’配列に、１．３ｋｂのＸhoＩ-ＣlaＩ ｃＤＮＡフラグメントを含有する（Ｃ laＩ部位はベクターポリリンカーからのものである。）。安定な細胞系は、プラ スミドα１Ａ／ＥＸＪ(α１Ａ受容体遺伝子を含有する発現ベクター)及びプラス ミドpＧＣcos3neo(アミノグリコシドトランスフェラーゼ遺伝子を含有するプラ スミド)を、ＬＭ(tk^-)、ＣＨＯ、及びＮＩＨ3Ｔ3細胞にリン酸カルシウム法を用 いて協同トランスフェクションして得られた。細胞は制御された環境（３７℃、 ５％ＣＯ₂）で、２５mＭのグルコースを含有し、１０％ウシ胎児血清、１００単 位／mlのペニシリンｇ及び１００μｇ／mlの硫酸ストレプロマイシンを追加した ダルベッコの修飾イーグル培地（ＧＩＢＣＯ，Ｇrand Ｉsland，ＮＹ）中で単層 として成長させた。次に、安定なクローンを抗生物質Ｇ−４１８（１mg/ml）に 対する耐性に対して選別し、膜を集め、以下に示すような［³Ｈ］プラゾシンを 結合するこれらの能力に対してアッセイした（「放射性リガンド結合アッセイ（ Ｒadiolignd Ｂinding Ａssay）」参照） ヒトα_1Bアドレナリン受容体。 ２００塩基対及び５’非翻訳配列(５’ＵＴ) 及び６０ｂｐの３’非翻訳配列（３’ＵＴ）を含有するα１Ｂ受容体の全コード 領域（１５６３ｂｐ）をpＣＥＸＶ-3真核性発現ベクターのＥcoＲＩ部位にクロ ーニングした。この構築物は、λＺapIIからのＥcoＲＩ脳幹ｃＤＮＡフラグメン トを含有する全長を該発現ベクターに結紮することに関与する。安定な細胞系は 上記のようにして得られる。 ヒトα_1Cアドレナリン受容体。 ４００塩基対の５’非翻訳配列(５’ＵＴ)及 び２００ｂｐの３’非翻訳配列（３’ＵＴ）を含有するα１Ｃ受容体の全コード 領域を、ポリリンカーで修飾されたpＣＥＸＶ-3由来の真核性発現ベクター、Ｅ ＸＪ.ＲＨのＫpnＩ部位にクローニングした この構築物は、部分的にオーバー ラップした３つのフラグメント、即ち５’０．６ｋｂのＨincIIゲノムクローン 、中央の１．８ＥcoＲＩ海馬ｃＤＮＡクローン、及び３’０．６Ｋｂ ＰstＩゲ ノムクローンを結紮することに関与する。海馬ｃＤＮＡフラグメントは、ｃＤＮ Ａクローンの５’及び３’末端でそれぞれＨincII及びＰstＩ部位が結紮に用い られるように５’及び３’ゲノムクローンとオーバーラップする。この全長クロ ーンは、ベクター(即ち、pＢluescript)及び３’−非翻訳配列からそれぞれ誘導 される、フラグメントの５’及び３’ＫpnＩ部位を用いて発現ベクターのＫpnＩ 部位にクローニングされる、安定な細胞系は上記のようにして得られる。放射性リガンド結合アッセイ ヒトα₁アドレナリン受容体。培養フラスコから得たトランスフェクションし た細胞を、５mlの、５mＭトリス−ＨＣｌ、５mＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５にまき 、超音波によって溶解した。細胞溶解物を４℃で５分間１０００rpmで遠心し、 上清を４℃で２０分間３０，０００×ｇで遠心した。ペレットを５０mＭトリス −ＨＣｌ、１mＭ ＭｇＣｌ₂、及び０．１％アスコルビン酸、ｐＨ７．０に懸濁 した。α₁拮抗薬[³Ｈ]プラゾシン(０．５nＭ、特異的活性:約７６．２Ｃi/mmol) の、ＬＭ(tk-)細胞の膜調製物への結合を０．２５mlの採取容積で行い、２０分 間３７℃でインキュベートした。非特異的結合を、１０μＭのフェントラミン（ 何れかのヒトα−アドレナリン受容体におけるフェントラミンの親和性よりも少 なくとも１００倍大きい濃度）の存在下で維持されるその結合として定義される 。 反応を、細胞ハーベスターを用いるＧＦ／Ｂフィルターを通して濾過することに よって停止した。平衡競争結合アッセイ（これは通常７つの異なった濃度の試験 化合物からなる。）を、線形回帰で曲線をフィットさせるコンピュータプログラ ムを用いて分析し、ＩＣ₅₀値を得た、ＩＣ₅₀値を、Ｃheng及びＰrusoff(1973)の 方法によって親和性定数（ｐＫ_I）に変換した。 ヒトα₂−アドレナリン受容体。α₂受容体での化合物の親和性を決定するため に、α２Ａ、α２Ｂ、及びα２Ｃ受容体をコードする遺伝子で安定にトランスフ ェクションされるＬＭ(tk-)細胞系を使用した。細胞溶解物を上記のように調製 し(放射性リガンド結合アッセイ参照)、２５ｍＭグリシルグリシンバッファー( 室温でｐＨ７．６)に懸濁した。平衡競争結合アッセイを、［³Ｈ］ラウウォルス シン（rauwolscine）（０．５nＭ）を用いて行い、非特異的結合を１０μＭフェ ントールアミン（Ｐhentolamine）とインキュベートして決定した。結合された 放射性リガンドを、細胞ハーベスターを用いるＧＦ／Ｂフィルターを通して濾過 することによって分離した。 ヒトヒスタミンＨ₁受容体。ウシＨ₁受容体に相同的なヒトヒスタミンＨ₁受容 体をヒト海馬ｃＤＮＡライブラリーから得、真核性発現ベクターpＣＥＸＶ-3ニ ックローニングした。Ｈ₁受容体に対するプラスミドＤＮＡをpcＥＸＶ-Ｈ1と命 名し、ＡＴＣＣアクセス番号７５３４６として１９９２年１１月６日に寄託した 。この構築物をＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ-7細胞にトランスフェクショ ンした。７２時間後、細胞を集め、５mＭトリス−ＨＣｌ、５mＭ ＥＤＴＡ、ｐ Ｈ７．５中で超音波にかけて溶解した。細胞様怪物を４℃で５分間１０００rpm で遠心し、上清を４℃で２０分間３０，０００×ｇで遠心した。ペレットを３７ ．８mＭ ＮａＨＰＯ₄、１２．２mＭ ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．５中に懸濁した。ヒ スタミンＨ₁拮抗薬［³Ｈ］メピラミン（mepyramine）（１nＭ、特異的活性：約 ２４．８Ｃi/mＭ）の結合を最終容積０．２５mlで行い、室温で６０分インキュ ベートした。非特異的結合を１０μＭのメピラミンの存在下で決定した。結合し た放射性罹患度を細胞ハーベスターを用いるＧＦ／Ｂフィルターを通して濾過す ることによって分離した。 ヒトヒスタミンＨ₂受容体。ヒトＨ₂受容体のコード配列をヒト胎盤ゲノムライ ブラリーから得、ＰＣＥＸＶ-3真核性発現ベクターのクローニング部位にクロー ニングした。Ｈ₂受容体に対するプラスミドＤＮＡをpcＥＸＶ-Ｈ2と命名し、Ａ ＴＣＣアクセス番号７５３４５として１９９２年１１月６日に寄託した。この構 築物を、ＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ-7細胞にトランスフェクションした 。７２時間後に細胞を集め、５mＭトリス−ＨＣｌ、５mＭ ＥＤＴＡ、Ｈ７．５ 中で超音波をかけることによって溶解した。細胞溶解物を４℃で５分間１０００ rpmで遠心し、上清を４℃で２０分間３０，０００×ｇで遠心した。ペレットを ３７．８mＭ ＮａＨＰＯ₄、１２．２mＭ Ｋ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．５に懸濁したヒス タミンＨ₂拮抗薬［³Ｈ］チオチジン（tiotidine）（５nＭ、特異的活性：約７０ Ｃi/mＭ）の結合を０．２５mlの最終容積で行い、室温で６０分インキュベート した。非特異的結合を、細胞ハーベスターを用いるＧＦ／Ｂフィルターを通して 濾過することにより分離した。 ヒトセロトニン受容体。５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−ＨＴ_1F 及び５−ＨＴ₇受容体：これら５−ＨＴ受容体サブタイプの各々をコードする 遺伝子で安定にトランスフェクションされたＬＭ(tk-)クローン細胞系を、上記 のように調製した。Ｌtk-8-30-84と命名した５−ＨＴ_{1D α}受容体に対する細胞系 を１９９０年４月１７日に寄託し、ＡＴＣＣアクセス番号ＣＲＬ 10421が付与さ れた。Ｌtk-11と命名した５−ＨＴ_{1D β}受容体に対する細胞を１９９０年４月１ ７日に寄託し、ＡＴＣＣアクセス番号ＣＲＬ 10422が付与された。５−ＨＴ_1E− ７と命名した５−ＨＴ_1E受容体に対する細胞系を１９９１年１１月６日に寄託し 、ＡＴＣＣアクセス番号ＣＲＬ 10913が付与された。Ｌ−５−ＨＴ_1Fと命名した ５−ＨＴ_1F受容体に対する細胞系を１９９１年１２月２７日に寄託し、ＡＴＣＣ アクセス番号ＣＲＬ 10957が付与された。Ｌ−５−ＨＴ−４Ｂと命名した５−Ｈ Ｔ₇受容体に対する細胞系を１９９２年１０月２０日に寄託し、ＡＴＣＣアクセ ス番号ＣＲＬ 11166が付与された。これらの調製物を、１０mＭ ＭｇＣｌ₂、０ ．２mＭ ＥＤＴＡ、１０μＭパルギリン（pargyline）、及び０．１％アスコル ビン酸塩を含有する５０mＭトリス−ＨＣｌバッファ（３７℃でｐＨ７．４）に 懸濁した。化合物の親和性は、５nＭ［³Ｈ］セロトニンの存在下において３７℃ で３０分インキュベートすることによる平衡競争結合アッセイで決定した。非特 異的結合を、 １０μＭのセロトニンの存在下で決定した。結合した放射性リガンドを細胞ハー ベスターを用いるＤＦ／Ｂフィルターを通して濾過することにより分離した。 ヒト５−ＨＴ₂受容体。ヒト５−ＨＴ₂受容体のコード配列をヒト脳皮質ｃＤＮ Ａライブラリーから得、pＣＥＸＶ-3真核性発現ベクターのクローニング部位に クローニングした。この構築物をＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ-7細胞にト ランスフェクションした。７２時間後に細胞を集め、５mＭトリス−ＨＣｌ、５m Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５中で超音波をかけて溶解した。Ｌ−ＮＧＣ−５−ＨＴ₂ と命名した５−ＨＴ₂受容体に対する細胞系を１９８９年１０月３１日に寄託し 、ＡＴＣＣアクセス番号ＣＲＬ 10287が付与された 細胞様怪物を４℃で５分間 １０００rpmで遠心し、上清を４℃で２０分間３０，０００×ｇで遠心した。ペ レットを１０mＭ ＭｇＳＯ₄、０．５mＭ ＥＤＴＡ、及び０．１％アスコルビン 酸塩を含有する５０mＭトリス−ＨＣｌバッファ（室温でｐＨ７．７）に懸濁し た。５−ＨＴ₂受容体での化合物の親和性は、［³Ｈ］ケタンセリン（１nＭ）を 用いた平衡競争結合アッセイで決定した。非特異的結合を、１０μＭのミアンセ リンの添加で規定した。結合した放射性リガンドを細胞ハーベスターを用いるＤ Ｆ／Ｂフィルターを通して濾過することにより分離した。 ５−ＨＴ_1A受容体。５−ＨＴ１Ａ−３と命名した５−ＨＴ_1A受容体に対する細 胞系を、１９９５年５月１１日に寄託し、ＡＴＣＣアクセス番号ＣＲＬ 11889が 付与された。５−ＨＴ１Ａ受容体オープンリードフレーム及び可変非コード５’ −及び３’−領域に対応するｃＤＮＡを真核性発現ベクターpＣＥＸＶ-3にクロ ーニングした。これらの構築物を、ＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ-7細胞に トランスフェクションし、７２時間後に細胞を集めた。放射性結合アッセイを、 ［³Ｈ］−８−ＯＨ−ＤＰＡＴを放射性リガンドとして使用し、非特異的結合を １０μＭのミアンセリンを添加して決定した以外、５−ＨＴ₂受容体に対して先 に説明したように行った。 ヒトドーパミンＤ₂受容体。Ｄ２受容体での化合物の親和性を、ヒトＤ₂受容体 をコードする遺伝子でトランスフェクションしたＣＯＳ-7細胞から得た膜調製物 を用いて決定した。ヒトＤ₂受容体に対するコード領域をヒト線条ｃＤＮＡライ ブラリーから得、ＰＣＤＮＡ１真核性発現ベクターのクローニング部位にクロー ニングした。Ｄ₂受容体に対するプラスミドＤＮＡを、pcＥＸＶ-Ｄ2と命名し、 ＡＴＣＣアクセス番号７５３４４として１９９２年１１月６日に寄託した。この 構築物を、ＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ-7細胞にトランスフェクションし た。７２時間後に細胞を集め、５mＭトリス−ＨＣｌ、５mＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７ ．５中で超音波にかけることにより溶解した。細胞溶解物を、４℃で５分間１０ ００rpmで遠心し、４℃で２０分間３０，０００×ｇで遠心した。ペレットを１m Ｍ ＥＤＴＡ、５mＭ ＫＣｌ、１．５mＭ ＣａＣｌ₂、及び０．１％アスコルビン 酸を含有する５０mＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に懸濁した。細胞溶解物を 、１０μＭの（＋）ブタクラモール（Ｂutaclamol）を用いて、［³Ｈ］スピペロ ン（２nＭ）とインキュベートし、特異的結合を決定した。 他のドーパミン受容体を、公知の方法で調製した(Ｄ₁:Ｄearry et al.，Ｎatu re，347，72，(1990)、欧州分子生物学研究所（ＥＭＢＬ）ジーンバンクにＸ５ ５７６０として寄託した；Ｄ₃：Ｓokoloff，Ｐ．et al.，Ｎature，347，146(19 90)、欧州分子生物学研究所（ＥＭＢＬ）ジーンバンクにＸ５３９４４として寄 託した；Ｄ₅Ｓunahara，Ｒ.Ｋ.，et al.，Ｎature，350，614(1991)、欧州分子 生物学研究所（ＥＭＢＬ）ジーンバンクにＸ５８４５４−ＨＵ ＨＤ ５ＤＲと して寄託した。）。機能性アッセイ 細胞培養系におけるα₁アドレナリン受容体で媒介されるホスホイノシチドの 蓄積 試験化合物の作用約活性を、クローニングされた３種類のヒトα₁−アドレナ リン受容体サブタイプの各々で安定にトランスフェクションされた細胞について 、ホスホイノシチドの産生を起こすこれらの能力を測定することでアッセイした 。細胞を９６−ウェルプレートに置き、集塊するまで成長させた。アッセイする 前日に、成長媒体を、１％血清及び０．５μＣiの［³Ｈ］myo−イノシトールを 含有する１００μｌの培地に変え、プレートをＣＯ₂インキュベータ（３７℃５ ％ＣＯ₂）中で一夜インキュベートした。アッセイの直前に、培地を除去し、１ ０mＭ ＬｉＣｌを含有する２００μｌのＰＢＳで置き換え、細胞を新たな培地で ２０分間平衡化した。このインターバルの間に、細胞を、ＰＢＳ中で２０倍の濃 度 にした溶液の１０μｌのアリコートとして加えた拮抗薬でも平衡化した。 ［³Ｈ］イノシトール−リン酸塩（ＩＰ）の蓄積は、作用薬を含有する溶液の １０μｌを添加することによって開始した。最初のウェルに１０μｌを加え、基 礎蓄積を測定し、１１の異なった濃度の作用薬を、各プレートの横行の、次の１ １のウェルでアッセイした 全てのアッセイを、連続した２つの横行に同様の添 加を繰り返すことによって、２回行った。プレートをＣＯ₂インキュベータで１ 時間インキュベートした。１５μｌの５０％（ｖ／ｖ）トリクロロ酢酸(ＴＣＡ) を加え、次いで４℃で４０分インキュベーションして反応を停止した。 ４０μｌの１ＭトリスでＴＣＡ中和した後、ウェルの内容物を、Ｄowex ＡＧ1 -Ｘ8（２００〜４００メッシュ、蟻酸塩型）を含有するマルチスキャンＨＶフィ ルタープレート(ミリポア)に移した。フィルタープレートを、２００μｌのＤow ex ＡＧ1-Ｘ8懸濁液（５０％ｖ／ｖ、水：樹脂）を加えて調製した。フィルター プレートを真空マニホルドに置き、樹脂床を洗浄又は溶出した。各ウェルを、２ ００μｌの水、次いで２×２００μｌの５mＭ四ホウ酸ナトリウム／６０mＭ蟻酸 アンモニウムで洗浄した。［³Ｈ］ＩＰｓを、２００μｌの１．２mＭ蟻酸アンモ ニウム／０．１mＭ蟻酸で空の９６−ウェルプレートに溶出した。ウェルの内容 物を、３mlのシンチレーションカクテルに加え、放射能を液体シンチレーション カウントによって決定した。 フォルスコリンで刺激されたアデニルイルシクラーゼの、α₂−アドレナリン 受容体で媒介される阻害 試験化合物の作用薬活性を、三種類のクローニングされたヒトα₂−アドレナ リン受容体の各々で安定にトランスフェクションされた細胞について、アデニル イルシクラーゼを阻害するこれらの能力を測定することによってアッセイした。 α_2A−又はα_2C−アドレナリン受容体を発現するＬＭ(tk-)細胞、並びにα_2B− アドレナリン受容体を発現するＹ１細胞を使用した。Ｙa2Ｂ-2と命名したα_2B− アドレナリン受容体に対する細胞系を、１９９５年５月１１日に寄託し、ＡＴＣ Ｃアクセス番号ＣＲＬ 11888が付与された。サイクリックＡＭＰの形成を、１m Ｍセオフィリン（theophylline）を含有するＤＭＥＭでインキュベートされた培 養物で測定した。１２の濃度の試験化合物（１０pＭから１００μＭ）をインキ ュ ベートした媒体に加え、２０分間３７℃でインキュベートした.。このインキュ ベートステップの後、１０μＭのフォルスコリンを加え、サイクリックＡＭＰの 生成を刺激し、培養物を更に１０分間インキュベートした。インキュベーション 培地を１００mＭ ＨＣｌに置き換えて反応を停止した。サイクリックＡＭＰの細 胞内レベルをラジオイムノアッセイで測定した。濃度−応答曲線から得たデータ を、非線形回帰分析により、４種のパラメータの対数式にフィットさせ、ｐＥＣ₅₀ 及び固有活性を決定した。単離された組織のアッセイ 機能性研究による哺乳動物尿管内のα₁−アドレナリン受容体の同定のための プロトコール α₁−アドレナリン受容体サブタイプの中に選択性を示す一群の作用薬及び拮 抗薬を使用して、ヒト男性、並びにオス及びメスのイヌ及びウサギの尿管でα− 作用薬に対して収縮反応を媒介する受容体の薬学的プロフィールを決定した。加 えて、同様の研究をメスイヌから得た膀胱頚部組織を用いて行った。各々の組織 内の特異的受容体サブタイプを同定するために、薬学的プロフィールを、クロー ニングされたα_1A、α_1B、又はα_1Cサブタイプでの、同じこれらの医薬に対する プロフィールと比較した。 方法 ヒト男性、及びオス及びメスウサギの近位尿管から得た組織サンプル、並びに オス及びメスイヌの近位尿管及び膀胱頚部の両方から得た組織サンプルを横方向 の小片（３×１０mm）に切断し、クレブスの生理緩衝液中、３７℃において０． ５ｇの張力下で吊した。作用薬の強さ（ｐＥＣ₅₀）及び拮抗薬の親和性定数(ｐ Ｋ_B)を決定するために、非選択的作用薬、フェニレフェリンに対する濃度−効果 曲線を、増加した濃度の拮抗薬の存在下又は非存在下で作成した。４本までの連 続した曲線を各組織で作成した。各濃度−効果曲線の前に１時間拮抗剤を平衡化 し、連続した曲線間で医薬を完全に洗浄した。各実験で、１の組織を「時間対照 （time control）」とした この場合、拮抗薬を、組織の感度の変化が時間の関 数となるように加えた。ほとんどの場合、拮抗薬のｐＫ_B値をシルド分析 （Ｓchild analysis）（Ａrunlakshana and Ｓchild，1959）によって決定した 。拮抗薬の単一濃度を使用する場合、ｐＫ_B値は以下の式によって決定される、 ｐＫ_B＝ｌｏｇ（（ＣＲ−１）／［拮抗薬］）。但し、ＣＲは拮抗薬のない場合 に対する、拮抗剤の存在する場合の作用薬のＥＣ₅₀の割合として定義される。拮 抗剤の研究に加えて、α_1C−選択的作用薬、Ａ−６１６０３及びＳＫ＆Ｆ１０２ ６５２を使用し、メスイヌ尿管内の受容体サブタイプを特徴づけ、膀胱頚部の受 容体プロフィールと、尿管内の受容体プロフィールを比較した。これらの実験で 、２つの濃度効果曲線を各組織で作成した。１つはプラゾシンが存在しない場合 であり、２つ目はプラゾシンが存在する場合である。作用薬としてＡ−６１６０ ３及びＳＫ＆Ｆ１０２６５２を使用してプラゾシンに対して誘導されたｐＫ_B値 を、作用薬としてフェニレフリンを使用してプラゾシンに対して得られたｐＫ_B と比較し、各作用薬が共通のα₁−アドレナリン受容体部位で相互作用すること を確認した。 単離されたラット右心房でのβ−アドレナリン受容体活性の決定 右心房をラットから取り出し、迅速に３７℃で、酸化されたクレブス溶液に置 いた。クレブス溶液を５分間隔で３回置換し、組織を０．５ｇで３回伸長した。 自発的に鼓動する心房で、イソプレナリンに対する対照濃度効果曲線を作成した 。β−アドレナリン受容体で媒介される心房の鼓動の割合（atrial rate）の増 加を応答として測定した。イソプレナリンを完全に洗浄除去した後、濃度効果曲 線を、作用薬、Ａ−６１６０３、ＳＫ＆Ｆ１０２６５２、及びＳＤＺ ＮＩＶ ０８５を用いて、１００μＭの濃度まで行った。応答が観測されない場合、イソ プレナリンに対する別の濃度−効果曲線を生じさせる間、医薬を浴に残した。作 用薬に対するｐＥＣ₅₀値を、対数曲線にフィットさせて計算した。試験化合物の 拮抗効果を、イソプレナリンに対するｐＥＣ₅₀のシフトを比較することによって 投与量−比法を用いて測定した。結果 表２は、クローニングされたヒトα₁−アドレナリン受容体サブタイプでの、 種々の拮抗薬に対する結合アッセイから決定されたｐＫ_I値、及びヒト、イヌ、 及びウサギから得た尿管及び膀胱頚部組織での収縮試験から決定された対応する ｐＫ_B値を示す。 図１〜５は、表２のデータをグラフで表したものである。各哺乳動物組織では 、各拮抗薬（横座標）に対するｐＫ_B値を、３種類のクローニングされたヒトα −アドレナリン受容体サブタイプ（縦座標）の各々に対して決定されたｐＫ_I値 に対してプロットした。線形回帰分析に対する傾斜及び相関係数（ｒ）を各図に 示した。各場合で、機能性の実験から誘導される拮抗薬のデータは、α_1C−サブ タイプと最も良く相関した。 表３は、種々の作用薬に対する、クローニングされたα₁−及びα₂−サブタイ プにおけるｐＫ_I、ｐＥＣ₅₀、及び固有活性を示す。特に、Ａ−６１６０３及び ＳＫ＆Ｆ１０２６５２は、各々、ヒトα_1C−アドレナリン受容体でトランスフェ クションされた細胞について、イノシトールリン酸塩の産生を十分に刺激したが 、α_1A−及びα_1B−サブタイプでは実質的に不活性であった。表３はまた、Ａ− ６１６０３及びＳＫ＆Ｆ１０２６５２の両方がα₁−アドレナリン受容体の中で 選択的であるが、これらの化合物はまた、α₂−アドレナリン受容体に関しても 十分に活性であることを示している。これらの医薬と他の作用薬の交差反応性結 合プロフィールを表４に示した。 α_1C−を十分に刺激するが、α_1A−又はα_1B−サブタイプを刺激しない、Ａ− ６１６０３及びＳＫ＆Ｆ１０２６５２の能力により、これらの化合物を、拮抗薬 ベースの薬学的特徴づけを行うためにメスイヌ組織に使用した。加えて、これら ２種類の化合物を使用して、尿管内のα₁−サブタイプが膀胱頚部内のα₁−サブ タイプと同一であることを確立した。これらの作用薬の強さ、及びプラゾシンが 各組織でこれらの効果に拮抗するプラゾシンに対するｐＫ_B値は以下の通りであ る。 各組織で、Ａ−６１６０３及びＳＫ＆Ｆ１０２６５２によりもたらされる収縮の 大きさは、フェニレフリンによってもたらされる収縮の大きさと同様であった。 加えて、Ａ−６１６０３及びＳＫ＆Ｆ１０２６５２によってもたらされる収縮は 、プラゾシンに対して感度が高く、これらのα_1C−アドレナリン受容体部位での 作用を確認した。α_1A及びα_1Bサブタイプ以上のα_1C−サブタイプに対するこれ らの高い選択性は、これが、尿管並びに膀胱頚部の収縮を媒介するα_1C−サブタ イプであることを示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ // Ｃ０７Ｄ 211/90 Ｃ０７Ｄ 211/90 233/24 233/24 265/34 265/34 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，Ｓ Ｅ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 グルチョウスキー、チャールズ アメリカ合衆国、ニュージャージー州 07470、ウェイン、ショパン・ドライブ 153 (72)発明者 ブランチェック、テレサ・エー アメリカ合衆国、ニュージャージー州 07666、ティーネック、スタンディッシ ュ・ロード 518

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及 びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍α_1Cアドレ ナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を該患者に投与 することを具備した方法 ２． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、これ がヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しないと いう特徴を更に有する方法。 ３． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、何れ かのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性化す るよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ４． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、これ が何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を拮 抗しないという特徴を更に有する方法。 ５． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒト ヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアド レナリン受容体を活性化する方法。 ６． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒト ドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍 ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ７． 請求の範囲第１項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒト セロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−ＨＴ_1F 、５−ＨＴ₂、又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ８． 患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体及 びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも５０倍ヒトα_1Cア ドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を該患者に 投与することを具備した方法。 ９． 請求の範囲第８項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、これ がヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しないと いう特徴を更に有する方法。 １０． 請求の範囲第８項記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、何れ かのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性化す るよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 １１． 請求の範囲第８項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、こ れが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体又は何れかのヒトβアドレナリン受容 体を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 １２． 請求の範囲第８項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒ トヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C受 容体を活性化する方法。 １３． 請求の範囲第８項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒ トドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１０ 倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 １４． 請求の範囲第８項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、ヒ トセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−Ｈ_1E、５−ＨＴ_1F 、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 １５． 患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体 及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりもの少なくとも１００倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を該 患者に投与することを具備した方法。 １６． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 １７． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのヒトβアドレナリン受容体を 活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する 方法。 １８． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのヒトβアドレナリン受 容体を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 １９． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ２０． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくととも １０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ２１． 請求の範囲第１５項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ２２． 患者の尿失禁を治療する方法であって、ヒトα_1Aアドレナリン受容体 及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも２００倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の治療に効果的な量を該患 者に投与することを具備した方法。 ２３． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 ２４． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性 化するよりも少なくとも１０倍α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ２５． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体 を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 ２６． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_{1 C} アドレナリン受容体を活性化する方法。 ２７． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１ ０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ２８． 請求の範囲第２２項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ２９． 尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、ヒトα_1Aアド レナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも １０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の効果的に収 縮を誘導する量を該尿管及び膀胱頚部組織に接触することを具備した方法。 ３０． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 ３１． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性 化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ３２． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体 を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 ３３． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ３４． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１ ０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ３５． 請求の範囲第２９項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ３６． 尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、ヒトα_1Aアド レナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも ５０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の効果的に収 縮を誘導する量を該尿管及び膀胱頚部組織に接触することを具備した方法。 ３７． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 ３８． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性 化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ３９． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体 を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 ４０． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ４１． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１ ０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ４２． 請求の範囲第３６項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ４３． 尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、ヒトα_1Aアド レナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも １００倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の効果的に 収縮を誘導する量を該尿管及び膀胱頚部組織に接触することを具備した方法。 ４４． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 ４５． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性 化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ４６． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体 を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 ４７． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ４８． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１ ０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ４９． 請求の範囲第４３項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ５０． 尿管及び膀胱頚部組織の収縮を誘導する方法であって、ヒトα_1Aアド レナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を活性化するよりも少なくとも ２００倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化するα_1C選択的作用薬の効果的に 収縮を誘導する量を該尿管及び膀胱頚部組織に接触することを具備した方法。 ５１． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これがヒトα_1Aアドレナリン受容体及びヒトα_1Bアドレナリン受容体を拮抗しな いという特徴を更に有する方法。 ５２． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体を活性 化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ５３． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬は、 これが何れかのヒトα₂アドレナリン受容体及び何れかのβアドレナリン受容体 を拮抗しないという特徴を更に有する方法。 ５４． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトヒスタミンＨ₁又はＨ₂受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒトα_1C アドレナリン受容体を活性化する方法。 ５５． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトドーパミンＤ₁、Ｄ₂、Ｄ₃、又はＤ₅受容体を活性化するよりも少なくとも１ ０倍ヒトα_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ５６． 請求の範囲第５０項に記載の方法であって、該α_1C選択的作用薬が、 ヒトセロトニン５−ＨＴ_1A、５−ＨＴ_{1D α}、５−ＨＴ_{1D β}、５−ＨＴ_1E、５−Ｈ Ｔ_1F、５−ＨＴ₂又は５−ＨＴ₇受容体を活性化するよりも少なくとも１０倍ヒト α_1Cアドレナリン受容体を活性化する方法。 ５７． 患者の尿失禁を治療する方法であって、下記構造を有する化合物の治 療に効果的な量を該患者に投与することを具備した方法。 但し、ｎは１から６の整数であり、ＲはＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、 Ｒ₁はＣ₁−Ｃ₆アルキル、フェニル、ナフチル、置換されたフェニル又はナフチ ルであって、置換基がハロゲン、又はＣ₁−Ｃ₆アルキル若しくはアルコキシ基で あり、 は、アミノ基又はヘテロ環基であり、該ヘテロ環基は、ピペリジン、モルホ リン、ピペラジン、ピロリジン、ヘキサメチレン、又はチオモルホリンであり、 該ヘテロ環基は、これらの窒素原子を介して（ＣＨ₂）_n基に結合しており、アミ ノ基は、Ｒ₂がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ベンジル、又はベンズヒド リルであり、Ｒ₃がＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シ クロアルキル又はシクロアルケニルであるものである。 ５８． 請求の範囲第５７項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を有 する方法。 ５９． 請求の範囲第５８項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を有 する方法。 ６０． 尿失禁を治療する方法であって、治療に効果的な量の下記構造を有す る化合物、又はこれらの薬学的に許容しうる塩を患者に投与することを具備した 方法。 但し、ｍは０から２の整数であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃及びＲ₇は独立に、Ｈ； ＯＨ；Ｃ₁−Ｃ₆アルキル若しくはアルコキシ；ハロ；アミノ；アセトアミド若し くはＮＨＳＯ₂Ｒ（但し、ＲはＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキルである。）であり、Ｒ₁及 びＲ₂、又はＲ₂及びＲ₃、又はＲ₃及びＲ₇は一緒になってメチレンジオキシ、エ チレンジオキシ、ベンズイミダゾール又はインドール環を形成し、Ｒ₄及びＲ₅の 各々は、独立にＨであるか、又は一緒になって下式となる。 但し、破線は単結合又は二重結合を表し、Ｒ₆はＨ又はＣ₁−Ｃ₆アルキル である。 ６１． 請求の範囲第６０項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を有 する方法。 ６２． 請求の範囲第６１項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を有 する方法。 ６３． 患者の尿失禁を治療する方法であって、治療に効果的な量の下記構造 を有する化合物を、遊離の塩基又は酸付加塩の形態で該患者に投与することを具 備した方法。 但し、Ｒ₁及びＲ₂の各々は、独立に、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₄アルキルであり、Ｒ₃ はＯＨ又はＣ₁−Ｃ₄アルコキシであり、Ｒ₄はＣ₁−Ｃ₄アルキルチオ、アルキル スルホキシド又はアルキルスルホン；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ；又はＣＦ₃で あり、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＨ、ＮＲ₁又はＮＣ（Ｏ）Ｒ₁である。 ６４． 請求の範囲第６３項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を有 する方法。 ６５． 請求委の範囲第６４項に記載の方法であって、該化合物が下記構造を 有する方法。