JPH11505504A

JPH11505504A - ホウ素を含有するホルモン類似体及びホルモン受容体を有する細胞をイメージング若しくは殺すためにこれらを使用する方法

Info

Publication number: JPH11505504A
Application number: JP8503138A
Authority: JP
Inventors: ホーソーン、エム・フレデリック; グラウディン、マーク・ティー
Original assignee: イオニックス・コーポレーション
Priority date: 1994-06-27
Filing date: 1995-05-15
Publication date: 1999-05-21
Also published as: US6074625A; DE69529665D1; WO1996000090A1; EP0729363A4; AU2640795A; EP0729363A1; EP0729363B1; CA2170400A1; DE69529665T2; ATE232743T1; AU696788B2

Abstract

(57)【要約】ホウ素含有化合物が、細胞の細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたホウ素含有部分よりなる複合体と細胞を接触することによってホルモンに応答する細胞にターゲッティングされる。該複合体は、ホルモンに応答しうる腫瘍細胞のようなホルモンに応答する細胞をイメージング若しくは殺傷するために使用される。標的細胞を殺すためには、細胞の細胞内ホルモン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分と該細胞を接触する。¹⁰Ｂ含有部分は細胞のホルモン受容体部部と結合し、次いでこれを中性子で照射してホウ素中性子捕捉により該細胞を殺す。標的細胞をイメージングするためには、細胞の細胞内ホルモン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹¹Ｂ含有部分と該細胞を接触し、次いで細胞のホルモン受容体に結合したホウ素を磁気共鳴イメージング技術を用いて画像化する。

Description

【発明の詳細な説明】ホウ素を含有するホルモン類似体及びホルモン受容体を有する細胞をイメージング若しくは殺すためにこれらを使用する方法本発明の分野本発明は、ホウ素イメージング及び中性子捕捉療法に使用するための新規な試薬に関する。特に、本発明は、ホウ素中性子捕捉又はイメージング試薬であって、ホウ素含有部分が、細胞のホルモン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたものに関する。本発明の背景１９３０年代に始まった量子力学、核物理学及び関連化学の発展によりJames Chadwick（Nature 129:312，1932）は１９３２年に中性子を発見した。中性子と種々の物質の相互作用の研究は、原子核、特にＨ−原子のプロトンとの弾性衝突による中性子散乱（J.R．Dunning et al.，Phys．Rev．47:325，1935）の現象をカバーしていなかった。幾つかの核による低速（又は熱エネルギー）中性子の捕捉は、Fermi et al.,Proc.Roy．Soc．London，146:483(1934)に開示されており、熱中性子との相互作用による他の特異的な核の崩壊は、J.R．Dun-ning et al. ，Phys．Rev.，48:265(1935)に開示されている。１９３５年には、多数の実験報告が集積され、これらの報告から中性子を捕捉する原子核の能力は、標的核の質量だけでなく、実際のその核の構造にも関連するように思われた。バーン単位として知られる１０^-24cm²の単位で表される特徴的な効果のある断面積を有する核の概念は、この先の研究で導入された。中性子を捕捉するためのホウ素の効果的な核断面積は、周期律表の隣の原子、即ち窒素及び炭素がこれと比較すると非常に小さい核断面積を示すにもかかわらず、非常に大きいことが知られている。 Taylor，Proc．Roy．Soc.，A47:873(1935)には、¹⁰Ｂ核による熱中性子の捕捉と、これに続く⁴Ｈｅ²⁺（α粒子）及び⁷Ｌｉ³⁺と、これら２種類の重イオン生成物間に分配される約２ＭｅＶの動力学的エネルギーの生成が開示されている。生成したイオンの遷移範囲は、写真用ゼラチンで約７.６μ及び空気中で１.１cmと特に短い。従って、リチウムイオンとα粒子生成物は短命の、イオン化プロセスを介して有機物質に非常に局所的なダメージを与えることができるエネルギーの高い種である。ペンシルバニア州フィラデルフィアのフランクリン研究所のBartol研究財団（ Bartol Research Foundation）のGordon L．Locherは、Am．J．Roentgenol．and Radium Therapy，36:1(1936)において、中性子及びホウ素中性子補足の医療への応用の可能性を示している。Locherの考えは、二成分から成る治療方法を基礎とした、簡単なホウ素中性子補足反応に因っている。この反応では、腫瘍に特異的に局在化する化合物に含まれる¹⁰Ｂ核が熱中性子と反応し、エネルギーの高い細胞毒性反応生成物、即ちα−粒子及びリチウムイオンを生じる。この方法では、放射性物質は全く含まれず、この治療方法は、腫瘍部位への中性子の供給をコントロールすることによって調節することができる。ホウ素中性子補足（ＢＮＣ）法の２種類の必要な成分、利用しうる高い流動性を持った低エネルギー中性子の制御しうる供給源、及び腫瘍に局在化するのに適したホウ素化合物は、１９３６年には知られておらず、Locherの考えは、核反応が利用でき、熱中性子を用いた初期の実験的な試験が維持されるまで予言のままであった。この初期の試験は、１９５４年まで現れなかった。このときには、Sw eet、Farr及び彼らの共同研究者（M．Javid et al.，J．Clin．Invest.，31:603 (1952);W.H．Sweet，N．Engl．J．Med.，245:875(1954);W.H．Sweet and M．Jav id，J．Neurosurg.，9:200(1952)；L.E．Farr et al.，Am．J．Roentgenol.，71 :279(1954): J.T．Godwin et al.，Cancer，8:601(1955)）は、末期患者に¹⁰Ｂ標的種として¹⁰Ｂを富化したボレートを使用して人脳腫瘍（グリオブラストーマ多形型）を治療した。これらの最初に実験で、通常の外科手段の後に腫瘍部位に残っている悪性グリオーム細胞を殺すという課題にＢＮＣＴを応用した。熱、２９３Ｋ（０.０２５eV）中性子で得られるホウ素中性子補足（ＢＮＣ）反応は、式（Ｉ）に示されるように表すことができる。 ¹¹Ｂ核は、ＢＮＣ反応を受けることができないが、¹⁰Ｂの有効な核断面積は３８３７バーンである。他の２つの核種、¹Ｈ及び¹⁴Ｎは、組織に豊富に存在し、ＢＮＣＴの間に起こる重要な中性子補足副反応に関与する。従って、対照への重要なバックグラウンド放射の線量に寄与する。これらの二種類の中性子補足反応は、標的核の核断面積を増加させること、並びにこれらが組織内で高濃度であることによっても役割を果たしている。H．HatanakaがBoron-Neutron Capture Therapy for Tumors（H ．Hatanaka編）、Nichamura Co．Ltd.，Nigata，Japan，p.5(1986)に開示しているように、¹Ｈと¹⁴Ｎの中性子補足反応は式（２ａ）及び（２ｂ）にそれぞれ示されるとおりである。組織のような水素の豊富な媒体を中性子が通過すると、Ｈ−原子の核プロトンと衝突することによってこれらの核の減速及び散乱が起こる。時折、ゆっくり移動する中性子が、このようなプロトンによって補足され、全放射線量に寄与する特徴的なガンマ線を伴って重陽子を生じる。他の競争的補足反応では、組織内で利用可能な窒素原子が、低エネルギーの中性子を補足し、¹⁴Ｃと０.６３MeV（動力学的エネルギー）プロトンを生成しうる。この動力学的エネルギーは、ＢＮＣ反応で誘導される⁷Ｌｉ³⁺及び⁴Ｈｅ²⁺に与えられ、（２ａ）及び（２ｂ）で示されるように生成されるプロトンやγ−フォトンを伴ったこのエネルギーは回りの媒体に伝達される。γ−フォトンを除いたこれらのエネルギーの高い核反応生成物は全て重い粒子であるので、この動力学的エネルギー移動は迅速であり、長さの非常に短い経路に沿って起こる。これらの粒子の線形エネルギー移動（ＬＥＴ）の割合は特徴的に高く、従ってこれらの反応の莫大なエネルギーが非常に小さな容積内に供与される。例えば、ＢＮＣ反応で生じた⁷Ｌｉ³⁺及び⁴Ｈｅ²⁺イオンは約０.０１mmの長さ又はほぼ１つの細胞の直径と等価なイオン化トラック（tracks）を生じる。従って、細胞内で起こる核反応によって生じる粒子に特徴的な高ＬＥＴは、供与されるエネルギーが高密度であるので羅患した細胞を特に致死に至らしめる。理想的には、大量の¹⁰Ｂ核を有するこれらの細胞は、ＢＮＣによって破壊されるが、¹⁰Ｂを含まない隣接細胞は影響を受けない、即ちバックグラウンドの¹Ｈ（ｎ，γ）²Ｈ及び¹⁴Ｎ（ｎ，ｐ）¹⁴Ｃ反応の影響を受けない。腫瘍細胞への10 Ｂの輸送がＢＮＣＴのこの所望の効果を達成するので、正常組織に対する腫瘍組織（これは中性子照射を受ける。）へのホウ素輸送の選択性は可能な限り大きくあるべきである。加えて、先に示した¹Ｈ（ｎ，γ）²Ｈ及び¹⁴Ｎ（ｎ，ｐ）¹⁴Ｃ中性子補足過程によってもたらされるバックグラウンド放射線量よりも十分高い局在化された二成分治療効果をもたらすように、腫瘍内の¹⁰Ｂの実際の濃度は十分高くなければならない。効果的なＢＮＣに必要な一般に受け入れられている最小の¹⁰Ｂ濃度は、腫瘍細胞構造の生命維持に必要な成分に関連した¹⁰Ｂの正確な位置に依存して１０から３０μｇ¹⁰Ｂ／腫瘍であると一般に信じられている。¹⁰Ｂ核の位置は、細胞質までの外細胞壁から細胞の核に向けて変化するので、効果的なＢＮＣＴのための¹⁰Ｂの必要な濃度は予想通り減少する。従って、細胞壁に結合する¹⁰Ｂは、３０ppm以上の濃度を必要とするが、腫瘍細胞の核内に局在化した¹⁰Ｂはわずか１０ppm以下の濃度が必要なだけである。追加のファクターとして、標的の組織の容積内の熱中性子の定常状態濃度がある。これは、効果的な治療のための必要な数のＢＮＣ現象を生ずるためには非常に低い中性子強度で比例して長い照射時間が必要となるからである。ホウ素が結合した腫瘍細胞の基礎レベルを達成する必要性により、腫瘍細胞へのホウ素の輸送を増加させるという先の試みがなされ、中性子照射でバイスタンダー細胞若しくは組織のダメージを起こしうる相対的に低い量のバックグラウンドホウ素を残したままであるが、効果的なホウ素中性子捕捉療法のための細胞内の十分に高いホウ素濃度が得られる。例えば、幾つかの腫瘍ターゲッティング戦略では、４−（ジヒドロキシボリル）フェニルアラニン（ＢＰＡ）若しくはメルカプトウンデカヒドロ−closo−ドデカボレートジアニオン（Ｂ₁₂Ｈ₁₁ＳＨ^2-；ＢＳＨ）のような腫瘍に対して若干の自然の親和性を有するホウ素化合物を利用するか、又はポルフィリンのような他の分子へのホウ素含有種の結合を利用することが行われる。加えて、¹⁰Ｂを富化したホウ素を腫瘍関連抗原に特異的な抗体と複合体形成させ、ＢＮＣ療法の治療の有効性を高めることが先に提案されている。例えば、D.Goldenferg et al.，「ＧＷ−３９腫瘍モデル系における癌胎児抗原へのホウ素−１０で標識された抗体の腫瘍局在化に関するin vivoでの結果」、Proc．Nat′l Acad．Sci．81:560-563(1 984); R．Barth et al.，「中性子捕捉治療に使用するためのホウ素化されたモノクローナル抗体の複合体形成、精製及び特徴化」、Strahlenther．Onkol．165(2/ 3):142-145(1989); S．Tamat et al.，「悪性メラノーマ及び白血病細胞の可能な中性子捕捉療法のためのホウ素化されたモノクローナル抗体」、Strahlenther．O nkol．165(2/3):145-147(1989);R．Abraham et al.，「中性子捕捉療法のためのホウ素化された抗体」、Strahlenther．Onkol．165(2/3):148-151(1989);A．Vara darajan et al.，「新規なカルボラニルアミノ酸及びペプチド：抗体修飾及びこれに続く中性子捕捉の研究のための試薬」、Bioconjugate Chem．2(4):242-253(1 991);及びR．Paxton et al.，「中性子捕捉療法のためのカルボラニルペプチド− 抗体複合体：調製、特徴化、及びin vivoでの評価」、Bioconjugate Chem．3(3): 241-247(1991)を参照。この他には、ホウ素試薬をリポソーム小胞に取り込ませ、該試薬の循環寿命を延ばすこと、正常な生理学的物質による攻撃から該試薬を保護すること、及び可能な毒性副反応を軽減することが提案されている。幾つかのリポソームはまた、新生物組織を特異的にターゲッティングする。例えば、「癌のホウ素中性子捕捉療法に向けられたモデル研究：リポソームを用いたネズミ腫瘍へのホウ素の輸送」、Proc．Natl．Acad．Sci．U SA，89:9039-9043(1993)を参照。ホウ素輸送法でなされた進歩にもかかわらず、低い循環寿命、最適以下のリポソーム組成、可能性として存在する毒性副作用及び／又は最適以下の細胞膜相互作用の問題により、これらの方法は、治療で望まれる濃度で標的腫瘍細胞へホウ素を高い特異性で輸送することを達成できないでいる。従って、ホウ素中性子捕捉療法及びイメージングを目的とした、ホウ素を標的腫瘍細胞に輸送するための新規なビヒクル(vehicle)及び改良されたビヒクルに対する強いニーズが当分野に存在する。幾つかのホルモンは、特異的な細胞内受容体に結合し、これを活性化し、細胞内の遺伝子活性のパターンを変化することが知られている。遺伝子活性のホルモン調節において、リガンド（これはホルモンであっても、合成類似体であってもよい。）は、促進された拡散によって細胞内に移動する。一度細胞内に入り込むと、該リガンドはその細胞内受容体に結合し、リガンド／細胞内受容体複合体を形成する。該複合体は、該受容体の形の変化を誘導し、該受容体を活性化して細胞内で他の機能を行う。リガンド／細胞内受容体複合体が、ホルモン感受性遺伝子の制御領域内のＤＮＡの特に短い配列を認識し、これに結合し、これによって遺伝子活性を媒介することが一般に知られている。このようなメカニズムの特性に関して学ぶべき多くのことが残されているにもかかわらず、ホルモンのような外来性誘導物質が、ホルモン感受性要素として知られる細胞内受容体及び分離したＤＮＡを含めた分子内成分と共に作用することによって遺伝子の転写を調節していることが知られている。特に、グルココルチコイド、性及び甲状腺ホルモンのようなホルモンは、促進された拡散によって細胞に入り込む。ホルモンは、次に特異的な受容体タンパクに結合し、これによってホルモン／受容体複合体を形成することも知られている。ホルモンの受容体への結合は、受容体タンパクのアロステリックな変化を開始させると信じられている。この変化の結果として、ホルモン／受容体複合体が、クロマチンＤＮＡ上の幾つかの特異的部位に高い親和性で結合することができると信じられている。当分野において種々の名前で呼ばれているこのような部位は、近傍の標的遺伝子プロモーターの発現（ＲＮＡの転写）を調節する。タンパク若しくはペプチド治療とは異なって、分子内受容体に対する天然及び合成リガンドは、経口若しくは局所投与に対する適正を含めた薬学的な薬剤の多くの魅力的な特性の一部を担う小さな有機分子である。非ペプチド性ホルモンに対する受容体は、タンパクの上科の一員に密接に関連する。この受容体のタンパクの上科は、細胞の原形質膜に位置する神経伝達物質及びタンパク若しくはペプチドホルモン及び成長因子に対する受容体とは異なって、受容体が標的細胞の内側に位置しているので細胞内受容体と呼ばれている。本発明の概要ホウ素含有化合物は、ホウ素含有試薬と細胞を接触することによって、分子内ホルモン受容体の少なくとも１種を有するホルモンに感受性な細胞にターゲッティングされる。該ホウ素含有試薬は、細胞の分子内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されるホウ素含有部分を具備する。現在の特に好ましい態様では、本発明の方法は、ホルモンに感受性な腫瘍細胞のようなホルモンに感受性な細胞を殺すために使用され、この方法は、細胞の分子内ホルモン受容体に対して結合特異性を有するリガンドと複合体を形成する¹⁰Ｂを含有する部分を具備したホウ素中性子捕捉剤と、細胞を接触することによって行われる。¹⁰Ｂを含む部分は、細胞のホルモン受容体に結合され、これは次に、中性子で照射され、ホウ素中性子捕捉によって細胞を殺す。照射の標的部分の外側での細胞活性化を防止するために、本発明のリガンドは、細胞内受容体には結合するが、細胞内受容体を活性化できず、且つ受容体の天然のホルモンへ引き続きさらされることにより受容体が活性化されることを防ぐ抗受容体試薬若しくは拮抗薬であることが好ましい。この他の態様として、標的細胞は、本発明のホウ素含有複合体と接触し、ホウ素と該標的細胞が結合され、次いで該標的細胞が、例えば磁気共鳴イメージング技術を用いて視覚化されうる。本発明のこの態様の代表的な態様では、該標的細胞は、例えば転位性肺癌細胞を包含しうる。またホウ素中性子捕捉剤は、エストロゲン受容体に対して結合特異性を有するタモキシフェン残基若しくはこの類似体のようなリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂを含有する部分を具備する。他の代表的な態様では、標的細胞は、前立腺癌細胞を包含しうる。またホウ素中性子捕捉剤は、アンドロゲン受容体に結合特異性を有する４’−置換若しくは３’，４’−二置換アニリド残基のようなリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂを含有する部分を具備しうる。更に代表的な態様では、標的は、白血病細胞を包含しうる。またホウ素中性子捕捉剤は、グルココルチコイド受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成される¹⁰Ｂを含有する部分を具備しうる。標的は腎カルチノーマ細胞を包含し得、ホウ素中性子捕捉剤は、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体又はグルココルチコイド受容体に結合特異性を有するリガンドに複合体形成される¹⁰Ｂ含有部分を具備しうる。標的細胞は、子宮内膜癌細胞を包含し得、ホウ素中性子捕捉剤は、エストロゲン受容体若しくはプロゲストロン受容体に結合特異性を有するリガンドに複合体形成される¹⁰Ｂ含有部分を具備しうる。標的細胞は、卵巣癌細胞を包含し得、ホウ素中性子捕捉剤は、エストロゲン受容体若しくはプロゲストロン受容体に結合特異性を有するリガンドに複合体形成される¹⁰Ｂ含有部分を具備しうる。或いは、標的細胞は、子宮頚、膣又は陰門のカルチノーマ細胞を包含し得、ホウ素中性子捕捉剤は、エストロゲン受容体若しくはプロゲステロン受容体に結合特異性を有するリガンドに複合体形成される¹⁰Ｂ含有部分を具備しうる。本発明の他の側面では、標的細胞の細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した新規な化合物を提供する。本発明の該化合物の代表的な具体例にはグルココルチコイド及び電解質コルチコイド受容体；プロゲステロン受容体、エストロゲン関連受容体、及びアンドロゲン受容体のような性ステロイド受容体；並びにビタミンＤ３、甲状腺、レチノイン酸受容体に対して結合特異性を示すリガンドを有する複合体が含まれる。本発明の複合体の10Ｂ含有部分は、硼酸のような１つの硼酸を含有しうるが、好ましくは１以上の¹⁰Ｂ、より好ましくは少なくとも９個の¹⁰Ｂ原子、最も好ましくは少なくとも１８個の¹⁰Ｂ原子を含有しうる。適切なホウ素中性子捕捉剤は、clos o−Ｂ₁₂Ｈ₁₂ ^2-、closo−Ｂ₁₀Ｈ₁₀ ^2-又はＢＳＨ(Ｂ₁₂Ｈ₁₂ＳＨ^2-)のような多面体ホウ素アニオン誘導体、お互いにかご結合した２つの体面体ボランアニオンを含有し、２０のホウ素原子を含有する構造を形成する誘導体、式closo−Ｃ₂Ｂ_n-2 Ｈ_n又はcloso−ＣＢ_n-1Ｈ_n、の用は多面体カルボラン、ホウ素を富化したα−アミノ酸から構成されるオリゴマーペプチド、又はホウ素を富化したオリゴホスフェートを基にしている。本発明の例示化合物は一般に下式で表されるか、又はこれらの薬学的に許容しうる塩である。但し、Ｂｏはホウ素含有部分であり、Ｌは結合基であり、Ｌｉｇはリガンドであり、ｍは０又は１であり、ｎは１以上の整数である。図面の簡単な説明本発明の前述の側面及び他の利点は、以下の詳細な説明及び添付の図面を参照してより容易に認識することができるであろう。図１Ａは、例１及び２で説明されるnido−カルボラニルフルタミン誘導体、Ｎ −（２’−nido−カルボラニルアセチル）−３−トリフルオロメチル−４−ニトロアニリン４を合成するための合成経路の概略図である。図１Ｂは、例３で説明されるｏ−nido−カルボラニルフルタミン誘導体、Ｎ− （４’−カルボラニルブタノイル）−３−トリフルオロメチル−４−ニトロアニリン６を合成するための合成経路の概略図である。図２Ａは、例４で説明されるＢ₁₀フルタミン誘導体、Ｎ−（closo−２−Ｂ₁₀ Ｈ₉）−Ｎ’−（３’−トリフルオロメチル−４’−ニトロアニリン）尿素８を合成するための合成経路の概略図である。図２Ｂは、例５で説明されるＢ₂₀フルタミン誘導体、テトラナトリウム−（アピカル，アピカル−１−［２’−Ｂ₁₀Ｈ₉］−２−ＮＨ−［３”−トリフルオロメチル− ４”−ニトロフェニル］−Ｂ₁₀Ｈ₈ １０を合成するための合成経路の概略図である。図３Ａは、例６で説明されるcloso−カルボラニルオリゴホスフェートトレーラーフルタミン誘導体、１−Ｎ−（closo −ＣＢ₁₀−ヘキシルアミン）−６−Ｎ−（３’−トリフルオロメチル−４’−ニトロアニリン）サベリルジアミン１３を合成するための合成経路の概略図である。図３Ｂは、例７で説明されるnido−カルボラニルオリゴホスフェートトレーラーフルタミン誘導体、１−Ｎ−（nido−ＣＢ₁₀−ヘキシルアミン）−６−Ｎ−（３’−トリフルオロメチル−４’−ニトロアニリン）サベリルジアミン１６を合成するための合成経路の概略図である。図４Ａは、例８及び９で説明されるnido−カルボラニルタモキシフェン誘導体、cis−１−（４’−β−（Ｎ−２”−nido−カルボラニルアセチル）−アミノエトキシフェニル）−１，２−ジフェニルブテン１９を合成するための概略図である。図４Ｂは、例１０で説明されるnido−カルボラニルタモキシフェン誘導体、ci s−１−（４’−β−（Ｎ−４”−nido−カルボラニルアセチル）−アミノエトキシフェニル）−１，２−ジフェニルブテン２０を合成するための概略図である。図５Ａは、例１１で説明されるＢ₁₀タモキシフェン誘導体、Ｎａ₂(Ｎ−［clos o−２−Ｂ₁₀Ｈ₉］−Ｎ’−［cis−１−（４’−β−アミノエトキシフェニル） −１，２−ジフェニルブテン］尿素)２１を合成するための合成経路の概略図である。図５Ｂは、例１２で説明されるＢ₂₀タモキシフェン誘導体、Ｎａ₄（アピカル，アピカル −１−［２’−Ｂ₁₀Ｈ₉］−２−［Ｎ−cis−１−（４’−β−アミノエトキシフェニル）−１，２−ジフェニルブテン］−Ｂ₁₀Ｈ₈）２２を合成するための合成経路の概略図である。図６は、例１３で示されるcloso−カルボラニルオリゴホスフェートトレーナータモキシフェン誘導体、Ｎ₁−（closo−ＣＢ₁₀−ヘキシルアミン）−Ｎ₆−（c is−１−［４’−β−アミノエトキシフェニル］−１，２−ジフェニルブテン）スベリルジアミン２３を合成するための合成経路の概略図である。図７は、例１４で説明されるnido−カルボラニルオリゴホスフェートトレーナータモキシフェン誘導体、Ｎ₁−（nido−ＣＢ₁₀−ヘキシルアミン）−Ｎ₆−（ci s−１−［４’−β−アミノエトキシフェニル］−１，２−ジフェニルブテン）スベリルジアミン２４を合成するための合成経路の概略図である。好ましい態様の詳細な説明本発明に従えば、ホウ素は、少なくとも１タイプの細胞の細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたホウ素含有部分を具備する複合体と細胞を接触することによって細胞内受容体を含む細胞をターゲッティングする。本出願で使用される「分子内受容体を含む細胞」の語は、天然若しくは合成ホルモン又はホルモン類似体に対する１以上の分子内受容体を含む細胞を意味する。現在の特に好ましい態様では、該受容体は、グルココルチコイド及び電解質コルチコイドのような副腎ステロイド受容体；プロゲステロン、エストロゲン関連、及びアンドロゲン受容体のような性ステロイド受容体；並びにビタミンＤ３、甲状腺、及びレチノイン酸受容体を含めた受容体のステロイドホルモン上科から選択されうる。例えば、Evans et al.，Sc ience240:889 et seq．(1988)を参照。本発明のホウ素含有試薬は、細胞の細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたホウ素含有部分を具備する。従って、本発明の試薬は、下式によって一般に表されうる。但し、Ｂｏはホウ素含有部分であり、Ｌは結合基であり、Ｌｉｇはリガンドであり、ｍは０又は１であり、ｎは１以上の整数である。ここで使用される、ホウ素含有試薬の語は、リガンドとの反応の後に本発明の複合体を形成するホウ素化合物の残基を意味する。本発明の実施に有用な適切なホウ素化合物には、硼酸のような１分子あたり１つのホウ素原子を含有する化合物、並びに１分子あたり１よりも多いホウ素原子を含有する化合物が含まれる。例えば、該ホウ素化合物は、closo−Ｂ₁₂Ｈ₁₂ ^2-（Pitochelli，A．et al.，J．A m．Chem．Soc．82:3228et seq．(1960); Miller，H．J．Am．Chem．Soc．85:388 5 et seq．(1963)）、又はcloso−Ｂ₁₀Ｈ₁₀ ^2-（Hawthorne，M.F．et al.，J．Am ．Chem．Soc．81:5519 et seq．(1959); LipscombA.，J．Am．Chem．Soc．81:58 33 et seq．(1959)）のような多面体ホウ素アニオン誘導体を基にしうる。現在の特に好ましい多面体ボランアニオンのこのクラスの代表的な誘導体には、ＢＳＨ（Ｂ₁₂Ｈ₁₂ＳＨ^2-；Knoth，W.，J．Am．Chem．Soc．86:3973 et seq ．(1964); Tolpin，E．et al.，Inorg．Chem．17:2867(1978)）が含まれ、これは血清及び腫瘍タンパクに存在するチオール基と共有結合性ジスルフィド結合が可能なチオール基を含有する。この他として、本発明のホウ素化合物は、お互いに結合され、例えば２０のホウ素原子を含有する結合されたケージ構造を形成した２つの多面体ボランアニオンケージ（これ以後「Ｂ₂₀化合物」と称する;M.F．Hawthorne，Angewandte Chem ie，International Edition in English，32:950-984(1993)参照。）を包含しうる。本発明のＢ₂₀化合物は、以下の一般式、及びこれらの誘導体によって表すことができる。また、本発明のＢ₂₀化合物は式Ｍ_nＢ₂₀Ｈ₁₇Ｌの化合物を含む。但し、Ｍはカチオン、例えばアルカリ金属若しくはテトラアルキルアンモニウムイオンであり、ｎは１から４の整数であり、Ｌは２電子供与体である。好ましくは、ＭはＮａ、Ｋ、Ｃｓ若しくはＲｂであり、アルカリには、メチル、エチル及び得られた塩が不溶性とならない他のアルキルが含まれる。Ｌは２電子供与体であり、好ましくは、 −ＮＨＲ₁Ｒ₂ 但し、Ｒ₁及びＲ₂は同じか又は異なっており、水素、ベンジル、アルキル及びジアミン（例えばエチレンジアミン）より成る群から選択される； −ＳＲ₁Ｒ₂ 但し、Ｒ₁は水素、ベンジル、アルキル及びジアミンより成る群から選択され、Ｒ₂は水素、アルキル、−ＸＣＮ、−ＸＣＯ、−ＸＮＣＯ、−ＸＣＯ₂ＯＨ、 −ＸＣＯ₂ＯＲ、−ＸＮＨＣＯＮＨＲ₁、−ＸＣＯＯＨ、及び−ＸＣＯＮＨＲ₁（但し、Ｘは１から２０の炭素原子を有するアルキル若しくはアリールアルキルである。）より成る群から選択される；より成る群から選択される。好ましくは、Ｌは−ＮＨ₃、−ＮＨ₂−ＣＨ₂−Ｐｈ、−ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂及び−ＮＨ₂(ＣＨ₂)₇ＮＨ₃より成る群から選択される。最も好ましくは、Ｌは−ＮＨ₃である。ホウ素化合物は、式closo−Ｃ₂Ｂ_n-2Ｈ_nの化合物（Dunks，G．et al.，Accts ．Chem．Res．6:124 et seq．(1973)；Grafstein，J.，J．Inorg．Chem．2:1128 et seq．(1963)）、又はcloso−ＣＢ_n-1Ｈ_n ^-（Knoth，W.，J．Am．Chem．Soc． 86:3973 et seq． (1964); Morris，J．et al.，Proceedings of the Fourth Internatioal Sympos ium on Neutron Caputre Therapy of Cancer in Progress in Neutron Capture Therapy of Cancer，B．Allen et al.，Ed.，Plenum Press，New York，pp215 e t seq．(1992)）並びにこれらの対応するnido−誘導体、例えば式nido−Ｃ₂Ｂ_n- ₃ Ｈ_n ^-のような多面体カルボランも基にしうる。ｏ−closo−Ｃ₂Ｂ₁₀Ｈ₁₂カルボランは以下の構造（これらの誘導体を含む。）によって一般に表される。一方、ｏ−nido−Ｃ₂Ｂ₉Ｈ₁₂ ^-カルボラン及びこれらの誘導体は下式によって表される。キルアンモニウムカチオンのようなカチオンを表す。より好ましくは、本発明のホウ素化合物は、Merrifieldの固相合成法（Varada rajan，M et al.，Bioconj．Chem．2:2421991)及びPaxton，R．et al.，Bioconj ．Chem．3:243(1992)に開示されており、これらの開示は参照文献として本明細書の一部をなす。）を用いて、ホウ素が富化されたα−アミノ酸から構築されるオリゴマーペプチドのような複数のカルボランかご構造を含有しうる。特に、本発明のホウ素含有試薬は、カルボランで誘導体化されたオリゴホスフェートを包含しうる。例えば、該オリゴホスフェートは、Kane．R．et al.，「カルボランで誘導体化された均一なオリゴホスフェートの自動合成：癌の、免疫タンパクで媒介されるホウ素中性子補足治療に使用しうる試薬」、J．Am．Chem．Soc．115(19) :8853-8854(1993); Kane．R．et al.，「ホウ素が富化されたホスフェートの液相合成」、J．Org．Chem．58(12):3227-3228(1993);及びKane．R．et al.，「新規なカルボラニルジオール及びこれらで誘導体化されたホスフェートエステル」、Adv ances in Neutron Capture Therapy，A.H．Soloway et al.，Ed.，Plenum Press ，New York(1993)（これらの開示は、参照文献として本明細書の一部をなす。）に開示されたものである。このクラスの代表的な化合物には、下式の化合物が含まれる。但し、Ｍ⁺は先に定義したとおり、アルカリ金属カチオン又はテトラアルキルアンモニウムであり、Ｒ¹及びＲ²はリガンド、標的部分及び化合物の所望の特性を伝達するための他の官能基に結合するのに適切な基から独立に選択される。ｍは１〜１０の整数であり、ｎは２から１５０間での整数、好ましくは２０から１００の整数であり得る。上式で使用される基は、以下のような構造的な配置を有するカルボラニルかご構造を表すことを意図している。本発明の試薬に使用されるホウ素の同位体含量は、天然量の約１９.７％¹⁰Ｂから濃縮率９５％以上の¹⁰Ｂまでの範囲であり得る。ホウ素中性子捕捉療法に使用する場合は、¹⁰Ｂが高度に濃縮された物質を使用することが好ましい。ホウ素含有化合物との複合体形成に適したリガンドには、本発明の標的細胞内受容体に特異的に結合できる非ペプチド性の小さな有機分子化合物が含まれる。天然に存在するホルモン又は天然に存在するホルモンの拮抗剤は、該標的分子内受容体に結合し、細胞内受容体の形及び機能の変化を誘導する。エストロゲン及びプロゲステロンのような純粋な作動薬は、これらに対応する受容体に結合するが、本発明の実施において純粋な作動薬を使用することにより、中性子照射で標的となる組織範囲の内側又は外側にかかわらず、幾つかの腫瘍細胞の成長が刺激される。中性子照射の標的領域の外側の腫瘍細胞は、ホウ素中性子捕捉による細胞の殺傷を受けないので、幾つかの場合において、本発明の実施において純粋な作動薬を使用することにより、離れた部位での腫瘍成長の刺激が起こりうる。従って、本発明のリガンドは、細胞内受容体には結合するが、細胞内受容体を活性化できず、受容体の天然ホルモンに引き続きさらされることによる受容体の活性をブロックする抗受容体薬若しくは拮抗薬であることが好ましい。細胞内受容体の拮抗剤は当業者に周知である。例示として、標的細胞内受容体がアンドロゲン受容体である場合、本発明の代表的なリガンドには、米国特許第３，９９５，０６０、４，１９１，７７５、４，３２９，３６４、４，３８６，０８０、４，６３６，５０５、４，４７４，８１３、及び４，９２１，９４１、並びにＥＰ公開第０２５３５０３Ｂ１（これらの開示は参照文献として明細書の一部をなす。）に開示された抗アンドロゲン性のＮ−フェニルアミド誘導体のような抗アンドロゲン薬が含まれる。この目的に対して現在の特に好ましい抗アンドロゲン性物質は、フルタミドとして知られる２−メチル−Ｎ−［４−ニトロ−３−トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミドである。リガンドがフルタミド残基である本発明の態様の更なる例示として、アンドロゲン受容体に対して結合特異性を有する本発明のホウ素含有化合物には、下式の化合物、又はこれらの薬学的に許容しうる塩が含まれる。但し、Ｂｏは¹⁰ホウ素含有部分であり、Ｌは結合基であり、ｎは０若しくは１である。更なる例示として、標的細胞内受容体がエストロゲン受容体である場合、本発明の代表的なリガンドには、米国特許第４，１９８，４３５、４，２０６，２３４、４，３０７，１１１、４，３１０，５２３、４，６２３，６６０、４，８３９，１５５、５，０４７，４３１、５，１９２，５２５及び５，２１９，５４８（これらの開示は参照文献として明細書の一部をなす。）に開示された抗エストロゲン性のＮ−トリフェニルアルケン誘導体のような抗エストロゲン薬が含まれる。現在の特に好ましいこのタイプの抗エストロゲンリガンドには、例えばタモキシフェンとしても知られる１−（ｐ−β−ジメチルアミノエトキシフェニル） −trans−１，２−ジフェニル−２−フェニル−ブタ−１−エン、ナフォキシジンとしても知られる１−［２−（ｐ−（３，４−ジヒドロ−６−メトキシ−２− フェニル−１−ナフチル）−フェノキシ］ −エチル］−ピロリジン、及びクロミフェンとしても知られる２−［ｐ−（２− クロロ−１，２−ジフェニルビニル）フェノキシ］−トリエチルアミン、又はこれらの薬学的に許容しうる塩が含まれる。上記のアンドロゲン及びエストロゲン拮抗剤に加えて、適切なリガンドには、当業者に明かであるグルココルチコイド及び電解質コルチコイド受容体のような副腎ステロイド受容体、ビタミンＤ３受容体、甲状腺受容体、及びレチノイン酸受容体に対する拮抗剤が含まれる。本発明のホウ素含有試薬は、有利の薬剤として又はリポソームを含む単層若しくは多層の小胞のような他の輸送ビヒクルと組み合わせて投与される。ドラッグデリバリーの応用として小胞を調製および使用することは、周知であり、当分野で報告されている。例えば、Shelly，K．etal.，PNAS89:9039et seq．(1989)（この開示は、参照文献として本明細書の一部をなす。）を参照。本発明の一態様では、本発明の腫瘍治療薬をカプセルに内包したリポソームには、単層若しくは多層のリポソームが含まれうる。この場合、該リポソームには少なくとも１つのカプセル化した二重構造体が含まれ、該カプセル化した二重構造体によって仕切られた内部空間を有する。次に、本発明のホウ素含有試薬は、外内部空間又はリポソームの層の間にカプセル化されうる。広範囲の脂質粒子が本発明のこの側面で使用しうる輸送ビヒクルを形成しうる。例えば、ＥＰ特許公開ＥＰ０２７２０９１に開示されたようなリン脂質の脂質ビヒクル（この開示は参照文献として本明細書の一部をなす。）は、本発明のホウ素含有試薬に使用されうる。このリン脂質ビヒクルは、両親媒性化合物と結合された物質を伴った一の被包性リン脂質膜からなる。このタイプのリポソームは当分野の従来の方法によって調製することができる。例えば水和されたリン脂質懸濁液は、撹拌されると１〜１０μｍの直径を有する水で分離された多くの二重構造体として多層小胞を形成する。多層懸濁液へ超音波のような剪断加工又は均質化を行うことにより、平均直径で、約３０から約２５０nm、より好ましくは約５０から約１００nmの範囲のサイズの小さな単層小胞が得られる。この範囲は、in vjvoでの最適な循環時間及び標的細胞特異性をを得るのに好ましいと考えられる。ここで使用される「単層」の語は、１から３、より好ましくは１の二重構造体を一般に意味する。本発明のリポソームにカプセル化されたホウ素含有試薬の平均直径は、リン脂質懸濁液の超音波処理時間、使用される脂質物質の組成、リポソームが調製される方法及び他の関連因子を含めた多くのファクターに依存する。リポソームの二重構造に埋包された本発明のホウ素含有試薬を含有するリポソームは、M.F．Hawthorne，Angewandte Chemie，International Edition in English，32:950-984(1993)に開示された方法により得ることができる。例えば、乾燥されたフィルムは、クロロホルム中に本発明の親油性ホウ素含有試薬とコレステロール：リン脂質混合物を溶解し、次いで減圧下に溶媒を除去することによって調製されうる。次に得られた乾燥フィルムを超音波処理して均質化し、得られた小胞を遊離のホウ素含有試薬から、例えば等張のリン酸塩で緩衝された飽和食塩水又はラクトースを用いてセファーデックスＧ−２５（medium）のカラムを通して溶出することにより分離される。リポソーム二重構造に埋包されたホウ素の量は、最初の混合物に添加されたホウ素含有試薬の量に依存し、所望のようにコントロールすることができる。本発明のホウ素含有試薬は、細胞内受容体を含む標的細胞を殺すか又はイメージングするためにin vitro又はin vivoで使用されうる。標的細胞をホウ素中性子捕捉で殺すために、該細胞は、熱中性子、エピサーマル中性子又は高速中性子を放射する当業者に公知の供給源から中性子照射を受ける。in vivoでの適用に対して、本発明のホウ素含有試薬の組成物は、ヒト若しくは他の動物対象に投与された場合に、標的組織部位で十分な量のホウ素が局在化し、この後の中性子照射、ホウ素中性子捕捉及び標的細胞を殺すことが可能な効果的な量、又は標的組織のイメージングが可能な効果的な量のホウ素を薬学的に許容しうる担体と共に含有する。何れの薬学的に許容しうる担体でも、該担体が本発明のホウ素含有試薬の安定性又は生物適用可能性を有意に妨害しない限り、この目的に一般に使用できる。標的細胞のホウ素イメージングに対しては、少なくとも１種の本発明のホウ素含有試薬と同様に接触し、該細胞若しくは組織を磁気共鳴イメージング技術を用いて画像化する。該イメージング技術は、例えば、Progress In Neutron Captur e Therapy For Cancer，B.J．Allen et al.，Eds.，Plenum Press， New York，NY 1992，pp 321-323のKabalka，G.W．et al.，「in vivoでＢＮＣＴ試薬をイメージングするための新規なホウ素ＭＲＩ法」；及びProgress In Neutr on Capture Therapy For Cancer，B.J．Allen et al.，Eds.，Plenum Press，Ne w York，NY 1992，pp 325-329のBradshaw，K.H．et al.，「分光法及びイメージングにおいて磁気共鳴化合物を用いたホウ素化合物のin vivoでの薬動力学的評価」に開示されている。ホウ素含有試薬組成物は、ヒト及び他の動物対象を含めた温血動物に、何れかの効果的な薬学的に許容しうる形態、例えば局所、洗浄、経口、坐薬、直腸、或いは局所、バッカル若しくは鼻腔内スプレーのような注入しうる投与形態で、又は標的細胞の部位にホウ素含有試薬を輸送するのに効果的な他の何れかの方法で投与されうる。投与の経路は、試薬を標的細胞に最適に輸送及び局在化するように設計されることが好ましい。局所投与に対しては、薬学的に許容しうる担体は、液体、クリーム、ローション、又はゲルの形態をとり得、更に有機溶媒、乳化剤、ゲル化剤、加湿剤、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、防腐剤、時間放出剤、及びマイナー量の保湿剤、隔離剤（sequestering agents）、色素、香料、及び局所投与のための薬学的組成物に一般に使用される他の成分を含有しうる。注入のために設計された組成物は、薬学的に許容しうる無菌の水性若しくは非水性溶液、懸濁液又はエマルジョンを包含しうる。適切な非水性担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、及びオレイン酸エチルのような注入可能な有機エステルが含まれる。このような組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のようなアジュバントを含有しうる。これらは、例えば細菌を保持するフィルターを通して濾過することによって、又は組成物に無菌化剤を含めることによって無菌化されうる。これらはまた、投与の前に無菌の水、飽和食塩水、又は他の注入可能な媒体に溶解若しくは懸濁することができる無菌の固体組成物の形態で製造されうる。経口又は局所投与のための固体投与量形態には、カプセル、錠剤、ピル、坐薬、粉末、及び顆粒が含まれる。固体投与量形態では、組成物は、蔗糖、ラクトース、又は澱粉のような少なくとも１種の不活性希釈剤と混合され得、更に潤滑剤、緩衝剤、腸溶性コーティング剤、及び当業者に周知の他の成分を含有しうる。本発明の組成物内のホウ素含有試薬の実際の投与量レベルは、標的細胞、特に腫瘍細胞の部位で、所望の治療、予防又は診断の応答を得るのに効果的な量のホウ素含有試薬が得られるように変化しうる。従って、選択された投与量レベルは、細胞の性質及び位置、効果的な中性子捕捉又はイメージングの目的に対して標的細胞において必要な所望量のホウ素、使用されるホウ素含有試薬の性質とホウ素含量、投与経路、及び他の因子に依存するであろう。一般に、十分な量のホウ素含有試薬が、標的細胞組織１ｇあたり少なくとも約１μｇ、より好ましくは標的細胞１ｇあたり少なくとも約１０μｇ、最も好ましくは標的細胞１ｇあたり少なくとも２０μｇのホウ素含量を達成するように使用される。上述のことは、以下の代表的な例と組み合わせてよりよく理解されるであろう。これらの例は、例示の目的で提供されるものであり、制限を意味するものではない。実施例実施例Ｉ： closo-カルボラニルフルタミン誘導体、即ちN-(2'- Closo-カルボラニルアセチル)-3-トリフルオロメチル-4-ニトロアニリン３の合成図１Ａを参照して説明すると、まず、化合物１（2-closo-カルボラニル酢酸、 0.50g，2.5mmol）を、オーブン中で乾燥した 25mlの丸底フラスコ中の塩化チオニル（5ml、8.2g，68.5mmol）中に溶解した。この丸底フラスコには、マグネチックスターラー、凝縮器および該凝縮器の頂部の乾燥管を取り付けた。この混合物を、窒素雰囲気下で４時間加熱還流し、次いで揮発性物質を減圧下で除去した。その残渣を10mlの乾燥エチルエーテル（水素化リチウムアルミニウムから新たに蒸留したもの）中に溶解し、これをオーブン中で乾燥した100mlの丸底フラスコ中の5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド２（0.51g，2.5mmol）および2 5mlのエチルエーテルの溶液に滴下した。この丸底フラスコにはマグネチックスターラーおよび凝縮器を設け、更に窒素導入口および氷／水浴を設けた。この氷／水浴を取り除き、混合物を６時間加熱還流し、次いで室温に冷却して一晩攪拌した。沈殿した固体（塩化トリエチルアンモニウム）を濾過して取り除き、減圧下で溶媒を除去して、黄褐色の油状物を得た。¹⁹Ｆ分析によって、この油状物は、化合物３：２が60：40の比率で含まれる混合物であることが分かった。ジクロロメタン：ヘキサン（４：１v/v）を用いたカラムクロマトグラフィー（60Ａ、230-4 00メッシュのシリカゲル、20cm×2cm）により、0.301g（0.77mmol、31％）の所望の化合物３が得られ、これを更にトルエン：ヘキサン（１：１v/v）からの再結晶によって精製した。ＮＭＲ特性： ¹⁹Ｆ NMR（外部参照；フレオン−１１、０ppm）： δ -64.3ppm ¹Ｈ NMR（ｄ₆アセトン／CDCl₃）： δ 10.03(s，NH)，7.94-7.82(m，芳香族Ｈ)， 4.49(br.s.，カルボランCH)，3.29(s，CH₂C=0)， 4.0-0.5（v.br.，B10H10） ¹³Ｃ NMR（ｄ₆アセトン／CDCl₃）： δ 165.4，143.1，141.8，126.7，125.0，124.3， 122.4，118.4，68.6，58.7，43.3 実施例II： nido-カルボラニルフルタミン誘導体、即ちN-(2'O- nido-カルボラニルアセチル)-3-トリフルオロメチル -4-ニトロアニリン４の合成以下の合成は、図１Ａを参照することによって最も良く理解される。周知の方法（Varadarajan，A．and Hawthorne，M.F.，Bioconjugate Chem.，2 :242，1991）に従って、上記のcloso-カルボラン化合物３をnidoカルボランに変換する。N-(2'-closo-カルボラニルアセチル)-3-トリフルオロメチル-4-ニトロアニリン３（0.250g，0.64mmol，実施例１で合成したもの）を、マグネチックスターラーを備えた25mlの丸底フラスコ中で、ピロリジン（10ml）中に溶解した。この混合物を室温で１時間攪拌し、その際に溶媒を減圧下で除去して褐色の油状物を得る。この残渣を無水エタノール10ml中に溶解し、無水エタノール中の臭化テトラエチルアンモニウム飽和溶液１mlを滴下して、化合物４のテトラエチルアンモニウム塩を沈殿させる。この塩をトルエン：ヘキサン（１：１v/v）から再結晶させた後、アセトニトリル：水の１：１混合物(v/v)に溶解し、ナトリウム型イオン交換カラム（2×20cmのDowex50W-A2，アセトニトリル：水の25:75( v.v)混合物200mlで予め平衡化したもの）にかける。次いで、試料をアセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlでカラムから溶出させて、10mlづつの画分を回収する。目的生成物を含んだこれらの画分を減圧下で乾燥して、化合物４のナトリウム塩を得る。実施例III： nido-カルボラニルフルタミン誘導体、即ちN-(4'-カルボラニルブタノイル)-3-トリフルオロメチル-4-ニトロアニリン６の合成以下の合成は、図１Ｂを参照することによって最も良く理解される。フッ化4-nido-カルボラニルブタノイル５(1.25g，2.5mmol; Ng，Lai-Ling，UC LA Dissertation，1993)を、オーブン中で乾燥した100mlの丸底フラスコ中において、5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド２（0.51g，2.5mmol）、エチルジイソプロピルアミン（1.74ml，1.29g，10mmol，窒素かで水素化カルシウムから新たに蒸留したもの）および25mlの乾燥エチルエーテルの溶液に一度に添加する。この丸底フラスコには、マグネチックスターラー、窒素導入口、および氷／水浴を設けておく。氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で１２時間攪拌する。次いで、この混合物をジエチルエーテルで100mlに希釈し、200mlの分液漏斗に移す。この溶液を、100mlの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、100mlの飽和塩化アンモニウム水溶液および100mlの飽和塩化ナトリウム水溶液で連続して洗浄することにより抽出する。次いで、エーテル層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して褐色の油状物を得る。この褐色の油状物を、ジクロロメタン：エタノール（1:0〜9:1(v/v)の勾配で5 00ml）を用いることによりクロマトグラフ（60A，230-400メッシュのシリカゲル，20cm×2cmのカラム）にかけ、トリフェニルメチルホスホニウム塩として純粋な化合物６を得る。この塩をアセトニトリル：水の１：１(v/v)混合物に溶解し、ナトリウム型イオン交換カラム（2×20cmのDowex 50W-A2，アセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlで予め平衡化したもの）にかける。次いで、試料をアセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlでカラムから溶出させ、減圧下で乾燥して、ナトリウム塩６を得る。実施例IV：Ｂ₁₀フルタミン誘導体、即ちN-(closo-2-B₁₀H₉)-N'- (3'-トリフルオロメチル-4'-ニトロアニリン)尿素８の合成以下の合成は、図２Ａを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム（鉱油中の60％懸濁液、0.32g，8mmol）を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド２（1.53g、7.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml中溶液を、シリンジを用いて滴下する。氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。この混合物を再度氷／水浴中に入れ、化合物７（closo-2-B₁₀H₉NCO^2-・[Et₃NH⁺]₂; Shelly，K．et al.，Inorg．C hem.，31(13):2889-2892; 0.91g，2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン５ml中溶液を、１０分間に亘って滴下する。次いで氷／水浴を除去し、混合物を室温で２４時間攪拌する。次いで、減圧下で揮発物を除去し、残渣を２mlのジクロロメタン：エタノール（8:2v/v）中に溶解する。この溶液を、ジクロロメタン:エタノール(8:2〜1:I(v /v)の勾配で500ml)を用いてクロマトグラフィー（60A，230-400メッシュのシリカゲル，20cm×2cmのカラム）にかけ、10mlづつの画分を回収する。過剰のアミン２が最初に溶出し、続いて目的の生成物８が溶出する。化合物８を含む画分をプールし、減圧下で溶媒を除去する。アセトン：ペンタン（1:1v/v）から再結晶させることにより、純粋な化合物８が得られる。実施例Ｖ：Ｂ₂₀フルタミン誘導体、即ち四ナトリウム-(apical， apical-1-[2'-B₁₀H₉]-2-NH-[3”-トリフルオロメチル- 4”-ニトロフェニル]-B₁₀H₈ 10の合成以下の合成は、図２Ｂを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム(0.10g，鉱油中の60％懸濁液、2.5mmol)を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド２（0.51g、2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml中溶液をシリンジを用いて滴下する。氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。この混合物を再度氷／水浴中に入れ、化合物９（n-B₂₀H₁₈ ^2-・[Et₄ ⁺]₂; Hawthorne，M.F．et al.，J．Am．Chem．So c.，85:3740(1963); Hawthorne，M.F．et al.，J．Am．Chem．Soc.，87:4740-47 46(1965); 1.24g，2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン中５ml中溶液を一度に添加する。次いで氷／水浴を除去し、混合物を室温で２４時間攪拌する(Feakes，D .A．et al.， Proc．Natl．Acad．Sci．USA，91:3029-3033(1994)。次いで、減圧下で揮発物を除去し、残渣を５mlの無水エタノール中に溶解する。無水エタノール中の臭化テトラメチルアンモニウムの飽和溶液を用いて析出させることにより生成物を単離し、アピカル／エカトリアルおよびアピカル／アピカルの結合異性体の混合物として粗成生物を得る。この固体を、マグネチックスターラーおよび乾燥窒素導入口を有するオーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ中で、10mlの無水アセトニトリル中に溶解し、新たに蒸留した0.5mlの三フッ化酢酸を添加する。得られた溶液を室温で２時間攪拌し、次いでアセトニトリルおよび三フッ化酢酸を減圧下で除去する。その残渣をアセトン：ペンタン(8:2v/v)から再結晶させることにより、tetra-テトラエチルアンモニウム塩として純粋な化合物１０を得る。この塩をアセトニトリル:水の１：１(v/v)混合物に溶解し、ナトリウム型のイオン交換カラム（2×20cmのDowex 50W-A8; アセトニトリル：水の25:75(v/v)混合物200mlで予め平衡化したもの）にかける。アセトニトリル：水の25:75(v/v)混合物200mlで試料を溶出させ、10mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分をプールし、減圧下で乾燥して、四ナトリウム塩１０を得る。実施例VI： closo-カルボラニルオリゴホスフェート・トレイラー・フルタミン誘導体、即ち1-N-(closo-CB₁₀-ヘキシルアミン)-6-N-(3'-トリフルオロメチル-4'-ニトロアニリン)スベリルジアミド１３の合成以下の合成は、図３Ａを参照することによって最も良く理解される。 closo-CB₁₀-ヘキシルアミン１１（Kene，R.R．et al.，J．Am．Chem．Soc.，1 55:8853-8854(1993)；70mg，20μmol）を、10mlの遠心管内で50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)中に溶解し、最終濃度を10mM(2ml)とした。1.5mLのミクロ遠心管内において、氷冷したジメチルホルムアミド（DMf、1ml、200μmol）中のスベリン酸ジスクシンイミジル（DSS;ピアス社）の200mM溶液を調製し、上記のc loso-CB₁₀-ヘキシルアミンに添加する。次いで、この遠心管を室温で２時間、穏やかに渦を巻かせて攪拌する。７mlの酢酸エチル（50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液で予め飽和されたもの、ｐＨ7.0）を上記の遠心管に添加し、この２相混合物を激しく渦を巻かせて１分間攪拌し、これにより完全に混合する。室温で３分間、静かに放置して相を完全に分離させ、望ましくないDSSを含む酢酸エチルを遠心管からデカントする。この手順を更に４回繰り返し、架橋剤を完全に除去する（目的の活性化されたエステル、即ち化合物１２は水層中に残留する）。化合物２（5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド、20mg、100μmol）を、100μｌの氷冷したDMF中に溶解し、遠心管内の化合物１２の水溶液に添加する。得られたミルク状の懸濁液を室温で６時間、渦を巻かせて攪拌する。次いで、全体の反応混合物をPD-10カラム（ファルマシア社、50mlのMilli-Q水で予め平衡化させたセファデックスG-25の10mlゲル床）にかけ、生成物（即ち複合体１３）を20mlの蒸留水で溶出させて、0.5mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分から溶媒を除去して、白色粉末として化合物１３を得る。実施例VII： nido-カルボラニルオリゴホスフェート・トレイラー・フルタミン誘導体、即ち1-N-(nido-CB₁₀-ヘキシルアミン)-6-N-(3'-トリフルオロメチル-4'-ニトロアニリン）スベリルジアミド１３の合成以下の合成は、図３Ｂを参照することによって最も良く理解される。 nido-CB₁₀-ヘキシルアミン１４（Kene，R.R．et al.，J．Am．Chem．Soc.，15 5:8853-8854(1993);70mg，20μmol）を、10mlの遠心管内で50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)中に溶解し、最終濃度を10mM(2ml)とした。1.5mLのミクロ遠心管内において、氷冷したジメチルホルムアミド（DMF、1ml、200μmol）中のスベリン酸ジスクシンイミジル（DSS;ピアス社）の200mM溶液を調製し、上記のnid o-CB₁₀-ヘキシルアミンに添加する。次いで、この遠心管を室温で２時間、穏やかに渦を巻かせて攪拌する。７mlの酢酸エチル（50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液で予め飽和されたもの、ｐＨ7.0）を上記の遠心管に添加し、この２相混合物を激しく１分間渦を巻かせて攪拌して完全に混合する。室温で３分間、静かに放置して相を完全に分離させ、望ましくないDSSを含む酢酸エチルを遠心管からデカントする。この手順を更に４回繰り返し、DSSを完全に除去する（目的の活性化されたエステル、即ち化合物１５は水層中に残留する）。化合物２（5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオライド、20mg、100μmol）を、100μｌの氷冷したDMF中に溶解し、遠心管内の化合物１５の水溶液に添加する。得られたミルク状の懸濁液を室温で６時間、渦を巻かせて攪拌する。次いで、全体の反応混合物をPD-10カラム（ファルマシア社、50mlのMilli-Q水で予め平衡化させたセファデックスG-25の10mlゲル床）にかけ、生成物（即ち複合体１３）を20mlの蒸留水で溶出させて、0.5mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分から溶媒を除去して、白色粉末として化合物１６を得る。実施例VIII： closo-カルボラニルタモキシフェン誘導体、即ち、 cis-1-(4'-β-(N-2”-closo-カルボラニルアセチル)- アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１８の合成以下の合成は、図４Ａを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム（鉱油中の60％懸濁液、0.32g，8mmol）を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン（O.Stanciuc and A.T．Balaban，「ピリリウム塩の救核剤との反応 23;オキシアルキレンアミノ側鎖またはオキシアルキレン-N-ピリジニウム側鎖を含むトリアルキレン誘導体」，J.Ph am．Sci.，82(9):927-933，17，2.68g，7.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml 中溶液を、シリンジを用いて滴下する。次いで氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。マグネチックスターラー、凝縮器および該凝縮器の頂部に取り付けた乾燥管を設けた、オーブン乾燥した25mlの第二の丸底フラスコ内において、化合物１（2- closo-カルボラニル酢酸、0.50g、2.5mmol）を塩化チオニル（５ml，8.2g，68.5 mmol）に溶解する。この混合物を、乾燥した窒素雰囲気下で４時間加熱還流させ、次いで減圧下で揮発性物質を除去する。この残渣を10mlの乾燥エチルエーテル（新たに水素化リチウムアルミニウムから蒸留したもの）中に溶解し、次いでフラスコを氷／水浴中に親戚して０℃に冷却されている上記で製造したcis-1-(4'- β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテンのナトリウム塩に10分間に亘って滴下する。氷／水浴を取り外し、混合物を６時間加熱還流させ、次いで室温に冷却して一晩攪拌する。減圧下で溶媒を除去して、黄色／褐色の油状物を得る。ジクロロメタン：ヘキサン（4:1(v/v)，500ml）を用いてクロマトグラフィー（60A，230-400メッシュのシリカゲル，20cm×2cmのカラム）にかけて化合物１８を得る。これは、更にトルエン：ヘキサン（1:1v/v）から再結晶させることによって精製することができる。実施例IX： nido-カルボラニルタモキシフェン誘導体、即ちcis- 1-(4'-β-(N-2”-nido-カルボラニルアセチル)-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１９の合成以下の合成は、図４Ａを参照することによって最も良く理解される。周知の方法（Varadarajan，A．and Hawthorne，M.F.，Bioconjugate Chem.，2 :242(1991)）に従って、上記のcloso-カルボラン化合物１８をnido-カルボランに変換する。cis-1-(4'-β-(N-2”-closo-カルボラニルアセチル)-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１８（0.347g，0.64mmol，実施例VIIIで製造したもの）を、マグネチックスターラーを備えた25mlの丸底フラスコ中で、ピロリジン（10ml）中に溶解した。この混合物を室温で１時間攪拌し、その際に溶媒を減圧下で除去して褐色の油状物を得る。この残渣を無水エタノール中に溶解し、無水エタノール中の臭化テトラエチルアンモニウム飽和溶液１mlを滴下して、化合物１９のテトラエチルアンモニウム塩を沈殿させる。この塩をアセトン：ヘキサン（１：１v/v）から再結晶させた後、アセトニトリル：水の１：１混合物（v/v）に溶解し、ナトリウム型イオン交換カラム(2×20cmのDowex 50W-A2，アセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlで予め平衡化したもの)にかける。次いで、試料をアセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlでカラムから溶出させて、10mlづつの画分を回収する。目的生成物を含んだこれらの画分を減圧下で乾燥して、ナトリウム塩１９を得る。実施例Ｘ： nido-カルボラニルタモキシフェン誘導体、即ちcis- 1-(4'-β-(N-4”-nido-カルボラニルブタノイル)-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン２０の合成以下の合成は、図４Ｂを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム（鉱油中の60％懸濁液、0.32g，8mmol）を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１７（2.68g，7.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml中溶液を、シリンジを用いて滴下する。次いで氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。再度、この混合物を氷／水浴中に置き、化合物５、即ち、フッ化5,4-nido-カルボラニルブタノイル（1.25g、2.5mmol，Ng，Lai-Ling，UCLA Dissertation，1993）の乾燥テトラヒドロフラン５ml中溶液を10分間に亘って滴下する。次いで、氷／水浴を取り外し、混合物を室温で24時間攪拌する。次に、反応混合物をジエチルエーテルで100mlにまで希釈し、250mlの分液漏斗に移す。この溶液を100mlの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、100mlの飽和塩化アンモニウム水溶液および100mlの飽和塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄して抽出する。次いで、エーテル相を10gの無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して褐色の油状物を得る。次に、この褐色の油状物を、ジクロロメタン：エタノール（1:0〜9:1(v/v)勾配で500ml）を用いてクロマトグラフィー（60A，230-400メッシュのシリカゲル，20cm×2cmのカラム）にかけることにより、トリフェニルメチルホスホニウム塩として純粋な化合物２０を得る。この塩をアセトニトリル：水の１：１（v/v ）混合液に溶解し、ナトリウム型イオン交換カラム（2×20cmのDowex 50W-A2，アセトニトリル：水の25:75(v.v)混合物200mlで予め平衡化したもの）にかける。次いで、試料をアセトニトリル:水の25:75(v.v)混合物200mlでカラムから溶出させ、減圧下で乾燥してナトリウム塩２０を得る。実施例ＸＩ：Ｂ₁₀タモキシフェン誘導体、即ちＮａ₂（N-[closo- 2-B₁₀H₉]-N'-[cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン]尿素）２１の合成以下の合成は、図５Ａを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム（鉱油中の60％懸濁液、0.32g，8mmol）を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。cis-1-(4 '-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１７（2.68g，7.5mmlol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml中溶液を、シリンジを用いて滴下する。次いで氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。再度、この混合物を氷／水浴中に置き、化合物７（closo-2-B₁₀H₉ NCO^2-・[Et₃NH⁺]₂;Shelly K．et al.，Inorg．Chem.，31(13):2889-2892(1992); 0.91g，2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン５ml中溶液を10分間に亘って滴下する。次いで、氷／水浴を取り外し、混合物を室温で24時間攪拌する。次に、減圧下で揮発性物質を除去し、その残渣をジクロロメタン：エタノール（8:2v/v）の２ml中に溶解させる。この溶液を、ジクロロメタン：エタノール（ 8:2〜1:1(v/v)勾配で500ml）を用いてクロマトグラフィー（60A，230-400メッシュのシリカゲル，20cm×2cmのカラム）にかけ、10mlづつの画分を回収する。まず過剰のアミン１７が溶出し、続いて目的の生成物が溶出する。化合物２１を含む画分をプールし、減圧下で溶媒を除去する。次いで、アセトン：水（1:1(v.v) ）から再結晶させれば、純粋な化合物２１が得られる。実施例ＸII：Ｂ₂₀タモキシフェン誘導体、即ち、Ｎａ₄（apical， apical-1-[2'-B₁₀H₉]-2-[N-cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン]-B₁₀H₈）２２の合成以下の合成は、図５Ｂを参照することによって最も良く理解される。水素化ナトリウム（0.10g，鉱油中の60％懸濁液，2.5mmol）を、マグネチックスターラー、隔壁および窒素導入口が設けられた、オーブン乾燥した25mlの丸底フラスコ内に入れる。この灰色の粉末を、鉱油を除去するためにシリンジを用いて５×10mlの乾燥ヘキサンで洗浄し、次いで10mlの乾燥テトラヒドロフランを添加して、該混合物を氷／水浴で０℃にまで冷却する。cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン１７（0.89g，2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン5ml中溶液を、シリンジを用いて滴下する。次いで氷／水浴を取り外し、得られた混合物を室温で４時間攪拌する。その間に水素の発生が停止する。再度、この混合物を氷／水浴中に置き、化合物９（n-B₂₀H₁₈ ^2-・[Et₄N⁺]₂;Hawthor ne，M.F．et al.，J．Am．Chem．Soc.，85:3740(1963);Hawthorne，M.F．et al. ，J．Am．Chem．Soc.，87:4740-4746(1965); 1.24g，2.5mmol）の乾燥テトラヒドロフラン５ml中溶液を一度に添加する。次いで氷／水浴を除去し、混合物を室温で２４時間攪拌する（Feakes，D.A．et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，9 1:3029-3033(1994)。次いで、減圧下で揮発物を除去し、残渣を５mlの無水エタノール中に溶解する。無水エタノール中の臭化テトラメチルアンモニウム飽和溶液を用いて析出させることにより生成物を単離し、アピカル／エカトリアルおよびアピカル／アピカルの結合異性体の混合物としての粗成生物を得る。この固体を、マグネチックスターラーおよび乾燥窒素導入口を有する乾燥した25mlの丸底フラスコ中で、10mlの無水アセトニトリル中に溶解し、新たに蒸留した0.5mlの三フッ化酢酸を添加する。得られた溶液を室温で２時間攪拌し、次いでアセトニトリルおよび三フッ化酢酸を減圧下で除去する。その残渣をアセトン:ペンタン( 8:2v/v)から再結晶させることにより、tetra-テトラエチルアンモニウム塩として純粋な化合物２２を得る。この塩をアセトニトリル：水の１：１(v/v)混合物に溶解し、ナトリウム型のイオン交換カラム（2×20cmのDowex 50W-A8；アセトニトリル：水の25:75(v/v)混合物200mlで予め平衡化したもの）にかける。アセトニトリル：水の25:75(v/v)混合物200mlで試料を溶出させ、10mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分をプールし、減圧下で乾燥して、四ナトリウム塩２２を得る。実施例ＸIII： closo-カルボラニルオリゴホスフェート・トレイラー・タモキシフェン誘導体、即ち、N₁-(closo-CB₁₀- ヘキシルアミン)-N₆-(cis-1-[4'-β-アミノエトキシフェニル]-1,2-ジフェニルブテン)-スベリルジアミド２３の合成以下の合成は、図６を参照することによって最も良く理解される。 closo-CB₁₀-ヘキシルアミン１１（Kene，R.R．et al.，J．Am．Chem．Soc.，1 55:8853-8854(1993)；70mg，20μmol）を、10mlの遠心管内で50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)中に溶解し、最終濃度を10mM(2ml)とした。1.5mLのミクロ遠心管内において、氷冷したジメチルホルムアミド(DMF、1ml、200μmol)中のスベリン酸ジスクシンイミジル（DSS；ピアス社）の200mM溶液を調製し、上記のcl oso-CB₁₀-ヘキシルアミンに添加する。次いで、この遠心管を室温で２時間、穏やかに渦を巻かせて攪拌する。７mlの酢酸エチル（50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液で予め飽和されたもの；ｐＨ7.0）を上記の遠心管に添加し、この２相混合物を激しく渦を巻かせて１分間攪拌し、これにより完全に混合する。室温で３分間、静かに放置して相を完全に分離させ、望ましくないDSSを含む酢酸エチルを遠心管からデカントする。この手順を更に４回繰り返し、架橋剤を完全に除去する（目的の活性化されたエステル、即ち化合物１２は水層中に残留する）。化合物１７（cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン，36mg，100μmol）を、100μｌの氷冷したDMF中に溶解し、遠心管内の化合物１２の水溶液に添加する。得られたミルク状の懸濁液を室温で６時間、渦を巻かせて攪拌する。次いで、全体の反応混合物をPD-10カラム（ファルマシア社、50ml のMilli-Q水で予め平衡化させたセファデックスG-25の10mlゲル床）にかけ、生成物（即ち複合体２３）を20mlの蒸留水で溶出させて、0.5mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分から溶媒を除去して、白色粉末として化合物２３を得る。実施例ＸIV： nido-カルボラニルオリゴホスフェート・トレイラー・タモキシフェン誘導体、即ち、N₁-(nido-CB₁₀-ヘキシルアミン)-N₆-(cis-1-[4'-β-アミノエトキシフェニル]-1,2-ジフェニルブテン)-スベリルジアミド２４の合成以下の合成は、図７を参照することによって最も良く理解される。 nido-CB₁₀-ヘキシルアミン１４（Kene，R.R．et al.，J．Am．Chem．Soc.，15 5:8853-8854(1993)；70mg，20μmol）を、10mlの遠心管内で50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)中に溶解し、最終濃度を10mM(2ml)とした。1.5mLのミクロ遠心管内において、氷冷したジメチルホルムアミド（DMF、1ml、200μmol）中のスベリン酸ジスクシンイミジル（DSS；ピアス社）の200mM溶液を調製し、上記のni do-CB₁₀-ヘキシルアミンに添加する。次いで、この遠心管を室温で２時間、穏やかに渦を巻かせて攪拌する。７mlの酢酸エチル（50mMのホウ酸ナトリウム緩衝液で予め飽和されたもの; ｐＨ7.0）を上記の遠心管に添加し、この２相混合物を激しく１分間渦を巻かせて攪拌して完全に混合する。室温で３分間、静かに放置して相を完全に分離させ、望ましくないDSSを含む酢酸エチルを遠心管からデカントする。この手順を更に４回繰り返し、DSSを完全に除去する（目的の活性化されたエステル、即ち化合物１５は水層中に残留する）。化合物１７（cis-1-(4'-β-アミノエトキシフェニル)-1,2-ジフェニルブテン; 36mg; 100μmol）を、100μｌの氷冷したDMF中に溶解し、遠心管内の化合物１５の水溶液に添加する。得られたミルク状の懸濁液を室温で６時間、渦を巻かせて攪拌する。次いで、全体の反応混合物をPD-10カラム（ファルマシア社; 50ml のMilli-Q水で予め平衡化させたセファデックスG-25の10mlゲル床）にかけ、生成物を20mlの蒸留水で溶出させて、0.5mlづつの画分を回収する。生成物を含む画分から溶媒を除去して、白色粉末として化合物２４を得る。実施例ＸＶ：レセプターとの結合アンドロゲン受容体に対する実施例Ｉの化合物の特異性を、標準のアンドロゲン受容体試験で測定した。次の文献を参照されたい：Schilling et al.，「アンドロゲン受容体の試験における放射性７α,17α-ジメチル-19-ノルテストステロン（Mibolerone）の使用」，The Prostate，5:581-588(1984)；Traish et al. ，「ヒトおよび動物組織におけるアンドロゲン受容体およびプロゲステロン受容体に対する７α,17α-ジメチル-19-ノルテストステロン（Mibolerone）の結合」，Endocrinology 118:1327-1333(1986)。ラット腹側前立腺から調製した細胞質ゾルを、４℃で１８時間、２nMの［³Ｈ］ミボレロン(mibolerone)（ＤＭＮＴ）と共にインキュベートした。次いで、この反応混合物を、実施例Ｉで得た種々の濃度（下記の表に示す）のN-(2'-closo- カルボラニルアセチル)-3-トリフルオロメチル-4-ニトロアニリン３を含む水酸化アパタイトスラリーと共にインキュベートした。次いで、この混合物をガラス繊維フィルターを通して濾過し、３回洗浄し、計数して、アンドロゲン受容体へのミボレロンの結合の阻害を測定した。その結果を下記の表１に示す。本発明の好ましい態様を例示して説明したが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、本発明に種々の変更を加え得ることが理解されるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＧ０１Ｎ 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/566 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．細胞内受容体を含有する細胞へホウ素をターゲッティングする方法であって、該細胞の少なくとも１つの細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたホウ素含有部分を含む複合体と細胞を接触することを具備した方法。２．細胞内受容体を含む細胞を殺す方法であって、該細胞の少なくとも１つの分子内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を含むホウ素中性子捕捉剤と該細胞を接触し、次いで中性子で該細胞を照射することを具備した方法。３．細胞内受容体を含有する標的細胞をイメージングする方法であって、該細胞の少なくとも１つの分子内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成されたホウ素含有部分を含む複合体と該細胞を接触し、次いで該細胞に結合したホウ素の磁気共鳴画像を形成させることを具備した方法。４．該細胞が腫瘍細胞である請求の範囲第１項に記載の方法。５．該細胞が転位性の肺癌細胞であり、該リガンドがエストロゲン受容体に対して結合特性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。６．該リガンドがタモキシフェンに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備する請求の範囲第５項に記載の方法。７．該細胞が前立腺癌細胞であり、該リガンドがアンドロゲン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。８．該リガンドが４’−置換若しくは３’，４’−二置換アニリド残基に複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第７項に記載の方法。９．アニリド残基が、４’−ニトロ−３’−トリフルオロメチル−イソブチルアニリド残基である請求の範囲第８項に記載の方法。１０．該リガンドがサイプロテロン（cyproterone）アセテート残基に複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第７項に記載の方法。１１．該細胞が白血病細胞であり、該リガンドがグルココルチコイド受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。１２．該細胞が腎カルチノーマ細胞であり、該リガンドがプロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体又はグルココルチコイド受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。１３．該細胞が子宮内膜癌細胞であり、該リガンドがエストロゲン受容体又はプロゲステロン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。１４．該細胞が、卵巣カルチノーマ細胞であり、該リガンドがエストロゲン受容体又はプロゲステロン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。１５．該細胞が、子宮頚、膣又は陰門のカルチノーマ細胞であり、該リガンドがエストロゲン受容体又はプロゲステロン受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰Ｂ含有部分を具備した請求の範囲第２項に記載の方法。１６．該¹⁰Ｂ含有部分が１よりも多い¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第２項に記載の方法。１７．該¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも９の¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第１６項に記載の方法。１８．該¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも１のカルボラン残基を含有する請求の範囲第１７項に記載の方法。１９．該¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも１８の¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第１６項に記載の方法。２０．該¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも２のカルボラン残基を含有する請求の範囲第１９項に記載の方法。２１．該細胞が熱中性子で照射される請求の範囲第２項に記載の方法。２２．該細胞がエピサーマル中性子で照射される請求の範囲第２項に記載の方法。２３．該細胞が高速中性子で照射される請求の範囲第２項に記載の方法。２４．細胞内受容体に対して結合特異性を有するリガンドに複合体形成された¹⁰ Ｂ含有部分を具備した化合物。２５．¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも２つの¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第２４項に記載の化合物。２６．¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも９つの¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第２５項に記載の化合物。２７．¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも１つのカルボラン残基を含有する請求の範囲第２６項に記載の化合物。２８．¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも１８の¹⁰Ｂ原子を含有する請求の範囲第２５項に記載の化合物。２９．¹⁰Ｂ含有部分が少なくとも２つのカルボラン残基を含有する請求の範囲第２８項に記載の化合物。３０．該細胞内受容体が、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体及びグルココルチコイド受容体よりなる群から選択される請求の範囲第２４項に記載の化合物。３１．下式の化合物、又はこれらの薬学的に許容しうる塩。但し、Ｂｏは¹⁰ホウ素含有部分であり、Ｌは結合基であり、ｎは０若しくは１である。３２．¹⁰ホウ表含有部分であるＢｏが、硼酸、ＢＳＨ、カルボラン及びこれらの多量体若しくはポリマーである請求の範囲第３１項に記載の化合物。３３．ＬがＣＨ₂であり、ｎが１である請求の範囲第３１項に記載の化合物。