JPH11504915A

JPH11504915A - 組織エントラップメント

Info

Publication number: JPH11504915A
Application number: JP8533133A
Authority: JP
Inventors: フランシス，ジリアン・エリザベス; フィッシャー，デレク
Original assignee: ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1995-05-03
Filing date: 1996-05-03
Publication date: 1999-05-11
Also published as: AU5509796A; WO1996034598A1; EP0825850A1; CA2218932A1; GB9509016D0; AR001858A1

Abstract

(57)【要約】診断薬または治療薬の皮膚または充実性腫瘍へのデリバリーは、該薬剤を被包化する脂質含有高分子分子構造（例えば、リポソーム）および該高分子構造の外部に結合した親水性部分のタイプおよび量ならびに該高分子構造を形成する種々の脂質または他の疎水性本体の相対的な割合の至適化によって改良される。

Description

【発明の詳細な説明】組織エントラップメント本発明は診断用および治療用物質を腫瘍および皮膚にデリバリーするための脂質基剤組成物ならびにかかる組成物の医薬における使用に関する。リポソームの処置は、循環寿命を高めるために、またはその循環からのリポソームの浄化を調節するために、さもなければリポソームおよびエントラップされた診断用または治療用試薬を腫瘍にデリバリーすることを容易にするために、リポソームに安定性を与えることを意図として、種々の開示が、以前より、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基を有するまたはポリエチレングリコールおよび類似するポリマーに関与するリポソーム処方に関連してなされていた。これらの開示は、暗黙のうちにまたは明らかに診断または治療剤の腫瘍吸収を高める、以下、「プッシュ」機構と称される機構に依存している。簡単に言えば、「プッシュ」機構によれば、リポソームが血流中に多くあり、そのリポソームが血流中に長く留まっていればいるほど、「ペイロード」（エントラップされた治療もしくは診断剤または複数の治療もしくは診断剤）が腫瘍にデリバリーされる機会は多くなる。本発明は、脂質基剤組成物中のペイロードを充実性腫瘍にデリバリーすることを高める別の機構に到達したものであり、その機構を、以下、「トラップ」機構と称する。一言では、「トラップ」機構は、特に、脂質基剤組成物が腫瘍から喪失することを減少させ、デリバリーされたペイロードを腫瘍中により多くの量留めることで作用する。以下にその２つの機構をさらに詳細に説明する：「プッシュ」機構腫瘍局在化法について記載するＰＣＴ／ＵＳ９０／０６２１１（Ｌiposome Ｔ echnology Ｉnc）は、第４節、２０行で以下のように述べている：「詳述したごとく、本発明のリポソームは、血流中のリポソームの寿命を延ばすこと、および腫瘍への溢出、相対的に高い薬剤担持能、およびリポソームを腫瘍に分配し、そこに入るのに必要な時間（注射後、最初の２４ないし４８時間）の間にエントラップされた薬剤の漏出を最小限とすることを可能とするリポソームの大きさにより充実性腫瘍領域に特異的に局在化させるのに効果的である。」このどのようにして腫瘍局在化が起こるかについての見解は、その同一特許出願に示されているデータを考慮すれば正しいことは明らかである。物質の血流中にある寿命が延び、その物質が腫瘍部位への溢出能を有する場合、リポソームの溢出は、その機構に対する現時点での意見を考慮して満足のいくプロセスであるとは考えられず、血中濃度と同じ歩調で増加するであろうから、物質の腫瘍へのデリバリー（単位時間当たりにデリバリーされる絶対量に換算して）は自動的に増加するであろう。事実、漏出性腫瘍の血管構造はよく知られているため、このことは漏出能を有するいずれのリポソームも血中濃度に依存する絶対速度で溢出するであろうことを意味する。この局在化方法は、単に、より多くのリポソームを製造すること、すなわち、単位時間当たりに利用できるペイロードを増やすことによって循環時間を高め、より多くの物質を腫瘍に「プッシュ」するのに利用するものである。ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６２１１の表１０はこの解釈を支援している。表１０を用いて腫瘍：血液比を計算すると、対照となる通常のリポソームでは、腫瘍：血液の比率が２時間で０.１：１であり、２４時間で０.５：１であって、４８時間で１.４：１であることがわかった。これは、初めの２つの時点で腫瘍よりも血液中に多くの物質があるように、対照のリポソームが（血液のクリアニンス時間との関連で）ゆっくりと腫瘍の中に入ることを意味する。血中レベルが落ちた後に物質が存続していることは、腫瘍中の物質の浄化速度が血液からのクリアニンス速度よりも遅いことを示す。血液のクリアニンス速度は組織分布速度と通常の排泄および破壊／代謝過程による循環からの排除速度の混成であること；前者は初めの時点で、後者は後の時点で優勢であることに注意すべきである。ＰＥＧ化リポソームの表１０に示す例（ＤＳＰＣ＝１０：Ｃｈｏｌ＝３：ＰＥＧ−ＰＥ＝１モル比）では、腫瘍：血液比は２時間で０.１：１であり、２４時間で０.３：１であって、４８時間で０.６：１である、すなわち、後の２つの時点で、非ＰＥＧ化対照との関連で、その比率は低下している。対照と比較して、後の時点でのこの腫瘍：血液の比率の減少は、１またはそれ以上の体内のリポソーム排除器官への進入がポリマー誘導化により減少し、循環時間が高められる場合の、ほとんどの状況にて考えられることである(以下の腫瘍：血液比の検討を参照のこと) 。同一特許出願の別の例（非ＰＥＧ化対照との比較はない）ではまた、腫瘍：血液比が非常に低いことを示した（リポソームのドキソルビシン含量の比較に基づく）：４時間３.８：２３２＝０.０１６（ドキソルビシンμg／mlの比率）２４時間２３：１１８＝０.１９（ドキソルビシンμg／mlの比率）４８時間２９.１：８４＝０.３５（ドキソルビシンμg／mlの比率）これらのかかるデータは、より多くの化合物を腫瘍に押し出すためには、リポソームが血中に最大限保持され、血液／腫瘍のバリアーを横切るのにリポソームが十分に小さいことを保証する必要があるとする基本原理の解釈を支持している。この見解は、血液循環時間が長ければ長い程、腫瘍にデリバリーされるリポソームの量が多いことを暗に示している。したがって、これらポリマー被覆したリポソームの最適処方は、循環の保持時間を最大限とすることにより得られるはずである。このために、コレステロール関連の改良物と他の脂質組成物関連の改良物の組み合わせの半減期をＰＥＧ化することでさらに改良した。同特許出願の請求項９は、（誘導化していないリポソームよりも「数倍大きな」）血漿中での半減期の増加が達成されたと強調している。数冊の別の刊行物はポリマー被覆リポソームを開示し、その腫瘍局在化特性を検討している。データでその計算をすることができるかまたはその値が与えられている場合、これらのすべてのケースで、腫瘍：血液比は、ポリマー誘導化のリポソームについて、対照の非誘導化リポソームよりも小さく、２４時間と４８時間の間の期間の数箇所またはすべての間で、その比率は１よりも小さい。例えば、Papahadjopoulousら（PNAS、88:11460-11464、(1991)）は図４にて、ドキソルビシンの腹水にある腫瘍細胞への吸収を加えて、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６２１１に掲載されているのと同じデータを示す：ＰＥＧ化ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０.２）：ＨＳＰＣ（２）：Ｃhol（１）；［ＰＥＧ−ＤＳＰＥ＝脂質の６.２５モル％］リポソーム、（非ＰＥＧ化対照はなし）：腫瘍：血液４時間＜１：２３２＝＜０.００４２４時間０.５：１１８＝０.００４２４８時間２：８４＝０.０２４加えて、Ｈwangら（Cancer Res.、52:6774-6781(1992)）は、図２において、ＰＥＧ化と非修飾化の対応物を比較し、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０.２）：ＤＳＰＥ（２）：Ｃhol （１）［ＰＥＧ−ＤＳＰＥ＝脂質の６.２５モル％］vs ＤＳＰＣ（２）：Ｃhol（１）について、４８時間での腫瘍の血液に対する比率を示す：腫瘍：血液３：５＝０.６（ＰＥＧ化）２：１＝２（非ＰＥＧ化）「トラップ」機構多くの状況で、高い腫瘍：血液濃度比（すなわち、１の数倍）が非常に望ましいことに注意すべきである。例えば、血管の腫瘍イメージング、薬物および放射性核種のデリバリーが挙げられる。しかし、本発明者らは腫瘍：血液比が減少する代わりに腫瘍の局在化を高めることは望ましくないと認識している。本発明者らによってなされたＰＥＧ化リポソームを用いる実験で、意外にも、腫瘍：血液比が減少することを回避する別の最適化方法によって、腫瘍吸収をさらに大きく高める可能性が明らかにされた。本発明の基礎は腫瘍：血液比に影響を及ぼす因子を試験することである。その理論に縛られたくないが、本発明者らは、親水基を有する脂質をベースにした構造物中のペイロードとしてデリバリーされる、診断薬および治療薬の腫瘍吸収の強化は、ペイロード物質が腫瘍内でトラップされるようになるように、脂質をベースにした構造物の破壊速度またはその腫瘍からの喪失速度に影響を及ぼすことにより達成されると信じている。発明者らは皮膚が充実性腫瘍と同様に作用する器官であることを明らかにした。詳細には、本発明の最適操作にて腫瘍：血液比を変える因子が、皮膚：血液比と同様の効果を有することに注目した。これは他の器官では観察されなかった。以下にＰＥＧ化リポソームについて論議するが、腫瘍および皮膚の吸収作用を強化する原理は、他のＰＥＧ化された脂質をベースにした構造物およびＰＥＧ基以外の親水性ポリマー基を有する脂質をベースにした構造物にまで広げることができる。さらに、明瞭に説明するために、吸収作用の最適化を、以下、主として腫瘍について論じる；それでも、その原理は、同様に、皮膚への吸収にも適用できる。リポソームの生体分布が排除組織（すなわち、リポソームを破壊する器官または細胞型）によるその吸収の減少によって変えられる場合、循環の半減期は、必然的に拡張され、さらに多くのリポソームで被包した物質が腫瘍にデリバリーされる。これらの環境下で、リポソームで被包した物質の腫瘍：血液比は非修飾（対照）リポソームと比べて変化する。しばしば、腫瘍：血液濃度比が対照と比べて、特に後の時点（例えば、２４ないし１４４時間）で減少し、循環寿命を向上させたことによる、腫瘍の吸収作用を向上させたリポソーム処方のそのような腫瘍：血液比の減少は前記したいくつかの報告書にて明らかであろう。しかし、生体分布の数学実験でのシミュレーション（表Ａ）は、排除器官または複数の排除器官による吸収が減少すると、腫瘍：血液比が必然的に低下するものではないことを示す。このことは４種のコンパートメント実験（コンパートメント１＝血液；コンパートメント２＝腫瘍；コンパートメント３＝残りの組織；コンパートメント４＝排除器官）ならびに非修飾リポソームおよび試験リポソームをボーラス静脈内注射した後、腫瘍：血液濃度比が排除コンパートメントによる吸収の減少に伴って変化することを考慮することで説明される。４種のコンパートメント実験を構成し、シミュレーションをＳＣＯＭＰ（Ｍ.Ｓ．ＬeaningおよびM.A.Boroujerdi（１９９１）により作成されたIBM PC'ｓ用パスカルプログラム）［１］を用いて行った。該実験はコンパートメント間のフラックスの速度についてのオプションを有する。排除器官（複数でも可）を除き、すべてのコンパートメントにて線形速度を有するようにフラックスおよび（満足いく浄化機構をシミュレーションするために）後者にてLangmuirフラックスを設定することで、自己および他人のデータの現実的シミュレーションが得られた。表に示される速度はコンパートメント間の移動速度を定める。時間０での仮定のボーラス入力は各ケースで１００であった。腫瘍：血液の比率を経時的に４種のコンパートメントにおける濃度に関する実験出力を用いて計算した。［１］Ｌeaning ＭＳ，Boroujerdi ＭＡ：分類実験およびシミュレーションのためのシステム、コンピューター・メソッド＆プログラム・イン・バイオメディスン（１９９１）：３５：７１−９２。コンパートメント間の移動速度定数についての変数の設定に応じて、この変数（低級Ｋ４.１）は腫瘍：血液比を増加、減少、または複合的変化（例えば、始めの時点で増加し、終わりの時点で減少する）させることができる。腫瘍と残りの組織との排除速度の比率（ＫＯ，２／ＫＯ，３）が高い（例えば、１０）場合、腫瘍：血液比は落ち易く、その比率が低い（≪１）場合、腫瘍：血液比は逆に上がる傾向にあり、その比率が中間の値では複合的変化が観察される。加えて、残りの組織と排除器官（複数でも可）とについての排除速度の比率（ＫＯ，３／ＫＯ，４）が低いまたは高い場合、腫瘍：血液比は、低級Ｋ４.１で、各々、低下または上昇する傾向にある。しかしながら、この比率が＞１の場合、コンパートメント４は目立った排除器官ではなく、かくしてこの概要はＲＥＳよりリポソームを除外するリポソーム修飾に対しては適当でないことに留意すべきである。低級Ｋ４.１で腫瘍：血液比が上昇するか低下するかに影響を及ぼす他の因子は、残りの組織と排除組織（複数でも可）ついての受け入れ速度の比率（Ｋ３，１／Ｋ４，１）であり、結果はＫ４.１の調整の前後の比率に依存する。この比率は腫瘍：血液比に対してほとんど予想できない効果を有する（すなわち、この比率を同方向にて変える種々の変数は、腫瘍：血液比の変化の方向について異なる効果を有することができる）が、対照リポソームの行動に適合するマルチコンパートメントモデルにて変数を用いた場合、他の変数が付随して変化することなく、Ｋ４.１を低級とすると、腫瘍：血液比を減少させる傾向にある。すなわち、腫瘍が他の「非排除」器官よりもかなり低い破壊速度を有する場合（ＫＯ，２≪ ＫＯ，３）を除いて、排除器官（複数でも可）によるリポソームの吸収速度が低下するにつれて、腫瘍：血液比は落ちる傾向にある。これはプッシュ機構を利用するリポソームの修飾の望ましくない効果であり、撤回されるであろう。前記した概要とは反対に、腫瘍組織によるリポソームの破壊速度を減少させるか、または腫瘍から血液へ逆に出て行く速度を減少させるいずれの修飾も、腫瘍：血液比を増加させるであろう。リポソーム修飾を行い、（リポソームの腫瘍中の濃度を上昇させると同時に）腫瘍：血液の比率を常に上昇させる３種の概要は、以下のとおりである：１）腫瘍によるリポソームの破壊速度を修飾により減少させる場合；２）腫瘍から血液へ逆にリポソームを輸送する速度を修飾により減少させる場合；３）排除器官（複数でも可）への吸収速度が修飾されたリポソームで減少し、修飾および非修飾リポソームの両方で、腫瘍が他の「非排除器官」よりもかなり低い破壊速度を有する場合（ＫＯ，２≪ＫＯ，３）。これらの概要は、各々、腫瘍：血液比の増加を提供するものであり、それらは、単独でまたは一緒になって、排除器官（複数でも可）へのエントリーの減少が前記した変化と同じに起こる場合に、腫瘍：血液比の低下傾向を減少または排除することができる。排除器官（複数でも可）へのエントリーが減少した場合でも、腫瘍：血液比が低下しない場合があり、腫瘍内での破壊または腫瘍からの流出の減少がある場合、「プッシュ」および「トラップ」の原理の重要な弁別手段である。以前の薬物動態学の研究は、通常のリポソームがリポソームに関する分解速度定数および吸収速度定数の両方について類似する用量依存性を示し、したがって吸収および分解の両方について同一の基本的機構があることを示唆した[Harashi maら、Biopharmaceutics and Drug Disposition，14:265-270，(1993)]。すなわち、従来の文献は、異なる用量および／または異なる処方でＰＥＧのリポソームが吸収および分解プロセスの両方に対して独立した影響を及ぼし得るという概念に反対しており；事実、その２つのプロセスは、今では、独立して調節されるとみなされるため、それらは同じ基本機構を有することができない。従来技術と対照的に、本発明の原理は、別のリポソームの最適化方法を導き、プッシュ原理により単に作用するリポソーム修飾とトラッピング機構を介して腫瘍：血液比を増加させるものとを区別するための方法を提供する。かくして、本発明に関連する最適化は、改良された循環時間および修飾リポソーム機能の仲介者として細網内皮細胞系（肝臓および脾臓）からの排除を放棄する。腫瘍（または皮膚）デリバリーがトラップ機構を利用することによって増強されるリポソーム（または他の脂質をベースにした構造）を製造するために、リポソーム（または他の脂質をベースにした構造）物質の種々の互いに依存する態様を考慮し最適化することが必要である。概して、リポソームについて、少なくとも以下の特徴に関連して決定が必要とされる：１．リポソームの大きさ。２．単層または多層リポソームを使用するか。３．使用しようとする脂質の個々の種およびその相対的な割合の両方に関する脂質成分の組成。４．ＰＥＧ修飾の程度および性質。これらの特徴は、以下に、より徹底的に検討されるであろう。今、最適化が、ある程度は、各標的組織（腫瘍タイプまたは皮膚）、診断薬および治療薬ならびにＰＥＧ修飾リポソーム（または他の親水性部分修飾された脂質をベースにした構造）処方についての試行錯誤の問題であるということを言えば充分である。しかしながら、本発明の後ろにある原理の解説は、同定しようとする一連の試験ならびに行おうとする必要な最適化およびリポソームまたはトラップ機構を利用する他の脂質をベースにした構造とプッシュ原理に従って単に作用するものとの区別を可能にするであろう確立された基準を可能にする。本発明のトラップ機構を利用する脂質をベースにした構造と利用しないものとを区別するために、問題の脂質をベースにした構造（試験種）の性能間の比較を行う必要があり、全ての態様において試験種に同一である２つの対照物は、以下のとおりである：（ａ）第１対照物：これは、親水性部分修飾を欠いているという点でのみ試験種と異なっている。（ｂ）第２対照物：これは、親水性部分修飾を欠いているという点および試験種における親水性部分の結合によって修飾される能力を有する脂質成分を欠いているという点で試験種と異なっている。これらの要求は、例によって説明されるのが最良である。試験種は、ＰＥＧ化することができる２つの脂質種（ＡおよびＢ）と、ＰＥＧ化される能力を有しており、かつ試験リポソームにおいてはＰＥＧ化されている脂質種（Ｃ）との混合物から形成された所定の大きさの単層小胞中にエントラップされた治療薬からなるリポソームである。したがって、第１対照物は、試験リポソームと同一の大きさおよび治療薬含量の、同一の脂質種Ａ、ＢおよびＣ（しかし、種Ｃは、ＰＥＧ化されていない）の混合物から形成される単層リポソームであろう。したがって、第２対照物は、同一の大きさおよび治療薬含量の単層リポソームであろうし、試験リポソームのＡおよびＢに関する限りでは同一の相対的な割合の脂質種ＡおよびＢのみの混合物から形成されるであろう。別の例では、リポソームは、ＰＥＧ化され易い単一の脂質種またはＰＥＧ化され易い２種類以上の脂質種からなる。試験リポソームにおける脂質の一部のみがＰＥＧ化される。この場合、第１対照物は、試験リポソームと同一脂質種または脂質種の混合物から形成されるが、ここではＰＥＧ化はない。第２対照物は、これらの特定のタイプの場合、比較試験で第１対照物と置き換えられる。試験は、種々のリポソーム生成物にエントラップされた診断薬または治療薬（以下、「薬剤」と記す）の標準的な用量を、適当なモデル充実性腫瘍を有する試験動物に静脈内注射することによって行われる。薬剤の血液および腫瘍濃度は、注射後２４時間目および４８時間目に測定する。本発明のリポソームについて、２４時間目および４８時間目のいずれかまたはその両方で達成された薬剤の血液濃度に対する薬剤の腫瘍濃度の比率は、単体よりも大きいであろう。さらにまた、本発明のリポソームによって達成された血液濃度に対する腫瘍濃度の比率は、２４時間目または４８時間目のいずれかで、第１対照物によって達成された腫瘍：血液濃度比よりも有意には低くないであろう。さらに、本発明のリポソームによって達成された２４時間目および４８時間目の各々での腫瘍濃度は、第１対照物によって達成された同一時点での腫瘍濃度よりも大きいであろうし、第２対照物と比較するのが適切である場合には、第２対照物によって達成された同一時点での腫瘍濃度よりも大きいであろう。先に記載したとおり、親水性部分を有する他の脂質をベースにした構造による診断学的および治療学的に有効な薬剤の腫瘍または皮膚へのデリバリーの最適化は、薬剤の腫瘍へのデリバリーのためのＰＥＧ化リポソームの使用に関して上記したと同様にこれらの原理の適用によって行われる。したがって、本発明は、充実性腫瘍または皮膚への血流を介する投与のための診断学的または治療学的に有効な薬剤の組成物であって、該組成物が脂質含有多分子構造からなり、該薬剤が脂質含有多分子構造中に優先的に存在し、脂質含有多分子構造が共有結合した親水性ポリマー部分を有する１つ以上の疎水性本体からなり、脂質含有多分子構造の物理的形態、疎水性本体の性質、親水性ポリマー部分の性質、血流に暴露された非誘導疎水性本体に対するポリマー担持疎水性本体の比率、ならびに２つ以上の疎水性本体がある場合の疎水性本体の相対的割合が全て以下のように選択されることを特徴とする組成物を提供するものである：（ｉ）モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への該組成物の静脈内注射について、注射後２４時間目および４８時間目のいずれかまたは両方で達成された薬剤の血液濃度に対する腫瘍濃度の比率または血液濃度に対する皮膚中濃度の比率が単体よりも大きくなるように、（ii）モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への該組成物の静脈内注射後２４時間目および４８時間目に達成された薬剤の血液濃度に対する腫瘍濃度の比率または血液濃度に対する皮膚濃度の比率が、第１対照物が疎水性本体の親水性ポリマー修飾を欠いていること以外は該組成物と同一である第１対照物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射後の同時間に達成された薬剤の血液濃度に対する腫瘍濃度の比率または血液濃度に対する皮膚濃度の比率よりも有意には低くならないように、および（iii）該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合以外は、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への該組成物の静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍濃度または皮膚濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、第２対照生成物が親水性ポリマー修飾を欠いており、かつ、該組成物中におけるポリマー修飾によって誘導化される疎水性本体を欠いている第２対照物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍濃度または皮膚濃度よりも高くなるように、または、該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合は、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への該組成物の静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍濃度または皮膚濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、前記定義と同じである第１対照物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍濃度または皮膚濃度よりも高くなるように。もちろん、薬剤は充実性腫瘍の治療または診断のいずれかにおいて有効なものであり、腫瘍に対する薬剤のデリバリーについて組成物が最適化されており、あるいは組成物が皮膚にデリバリーされた場合には皮膚の疾病または障害の治療または診断用であるという点を除けば、本発明組成物によりデリバリーされうる治療上および診断上有効な薬剤に対する制限はない。例えば、本発明組成物に入れて投与してもよい薬剤は、薬物、例えば細胞毒性薬および静細胞性薬、ならびに核酸、詳細にはＤＮＡを包含する。意図した試料または診断において有効であるように本発明組成物中の薬剤の量を選択する。一般的には、その薬剤についての慣用的な治療または診断組成物と同じ用量で、あるいは可能ならば、組成物により達成される「トラッピング（tr apping）」が薬剤の有効性を増大させる場合にはより少ない用量で標的に与える。臨床的に必要である場合、ならびに本発明組成物にはない毒性効果により、あるいは慣用的投与形態が標的組織に対する薬剤の所望用量をデリバリーできないことにより慣用的用量が制限されている場合には、慣用的用量よりも多い用量をデリバリーしてもよい。本明細書の用語「多分子構造（multi-molecular structure）」は、類似分子または非類似分子の集合を含んでなる構造を意味し、該構造は共有結合または非共有結合、例えば水素結合または疎水性相互作用により安定化される。多分子構造は、少なくとも１の脂質種を含まなければならず、この要件は、「脂質含有多分子構造（lipid-containing multi-molecular structure）」なる用語に反映されている。１の脂質種がこれらの構造中に存在するための最小の要件は、本発明構造体の一部としても要求される親水性ポリマー部分を有する「疎水性本体（hy drophobic entity）」としての脂質種の存在によって満たされうる。リポソームのごとき本発明組成物に用いる多分子構造の性質を以下に述べるが、それらは例えば脂質、詳細にはリン脂質のごとき疎水性本体の性質ならびにポリエチレングリコール残基のごとき親水性部分の性質である。簡単のために、本明細書において本発明の脂質含有多分子構造一般を「脂質をベースにした構造（lipid-based structures）」と呼び、それゆえ、２つの用語は混用されてしかるべきである。多分子構造の物理的形態については、本発明による特別な制限はない。しかしながら、物理的形態は、しばしば、治療すべき標的組織の性質または組成物中に用いる選択された疎水性本体の性質により決定されるであろう。ある場合には、構造の物理的形態は、治療または診断剤と疎水性本体との間の相互作用により決定されるであろう。よって、例えば、ある種の薬物については、脂質はリボン状または円盤状の薬物−脂質複合体を形成する傾向がある。それゆえ、薬剤は、例えば脂質をベースにした構造中にエントラップされて存在してもよく、あるいは脂質をベースにした構造に結合して存在してもよい。誘導体化されていない、あるいは親水性ポリマー部分を用いて誘導体化されている疎水性本体の相対的割合は、患者の組織に見られるような多分子構造の表面特性に影響する。したがって、本発明組成物の品質に影響するのは、これら２つのタイプの成分の割合である。血流に暴露されない多分子構造の一部分におけるこれらの異なるタイプの成分の割合について課される本発明による特別な要件はない。よって、例えば本発明リポソームの場合には、血流に暴露されるリポソームの外表面脂質層およびリポソームの内表面脂質層の成分間に不均衡が生じることが許される。本発明組成物中に２種またはそれ以上の疎水性本体が存在する場合には、疎水性部分の種々の種の相対的割合を調節し最適化して、腫瘍または皮膚における作用剤の所望の「トラッピング」を提供することができる。疎水性本体の異なる種の数にも、組成物中のそれぞれの種の特性についても、特別な制限はない。モデル腫瘍については、通常には、組成物の最適化のための実験をヒトについて行うことができないので、本発明の原理に従って腫瘍治療または診断剤の組成物の最適化に用いるために、実験動物（本発明の最適化された組成物により治療すべきヒトの腫瘍の典型例である充実性腫瘍を有する）を選択する必要があろう。同様に、皮膚科学的疾病および欠陥の治療または診断のための組成物の最適化のために、ヒトの皮膚の良好なモデルである皮膚を有する実験動物を選択する必要があろう。標的組織への組成物のデリバリーに用いる経路に関して、そして治療または診断剤の除去および破壊に関して、すべての実験動物はヒトの良好なモデルであるはずである。このことは、しばしば、必要な試験を行うための実験動物の選択を強制するであろう。上記動物は動物の適当な種および株であり、好ましくは、本発明が意図する薬剤および組成物に関してヒトの治療または診断用に選択されたモデルとしての齧歯類または霊長類のごとき慣用的な実験動物である。もちろん、本発明組成物の投与ならびに第１対照物の投与、そして適当な場合には第２対照物の投与に用いる動物は実質的に同じものであり、通常の研究室の慣習に確実に合致したものであろう。通常には、適当数の動物群について動物試験を行って、統計学的に有意なデータを実験から得るようにする。上記項目（ii）について、もちろん、本発明組成物を用いて達成される測定濃度の比率が、２４時間目および４８時間目のいずれかまたは両方において、最初の製品を用いて達成される測定濃度の比率よりも大きいことがありうる。このことが好ましい。しかしながら、本発明組成物は、２４時間目および４８時間目のいずれかまたは両方において、第１対照物を用いて達成される測定濃度の比率よりも数値的に小さい測定濃度の比率を示すこともありうる。このことは本発明において許容されることであるが（あまり好ましくないが）、本発明組成物および第１対照物を用いて達成される測定濃度の比率の間の相違が統計学的に有意でないことが条件となる。当業者は有意性に関する適当な統計学的試験を容易に利用することができるが、薬剤の濃度を測定するための実験プロトコールに関して試験を選択すべきである。本発明組成物の投与により達成される診断上または治療上有効な薬剤の腫瘍または皮膚濃度が、投与後２４ないし４８時間の期間中組成物の投与により達成される血液濃度よりも高いままであるということが特に好ましい。上記項目（iii）における例外は、上で定義したすべての誘導体化可能な疎水性本体を欠いている「第２対照物」は必然的に脂質成分を欠いているので、本発明のすべての可能な具体例について利用可能な適当な比較が存在するということを確実にする。本発明によれば、上記候補組成物を試験し、次いで、組成物の１またはそれ以上の特徴を修飾し、再試験し、再試験の結果により示されるさらなる修飾を行うという工程を繰り返すことにより、特定の薬剤を特定のタイプの充実性腫瘍または皮膚にデリバリーするための組成物を最適化してもよい。最適化の目的は、問題とされる薬剤の意図された使用にある程度左右される。治療剤の場合、最も重要なパラメーターは治療剤の腫瘍または皮膚濃度である。なぜなら、これを最大にすることは腫瘍または皮膚へのより効果的なデリバリーを生じさせるからである。薬剤が腫瘍または皮膚に止まっている期間も、薬剤の１回の投与によりデリバリーされる正味の用量を最大にすることにおいて考慮すべき因子である。診断剤の場合、正味の投与量はあまり重要でないかもしれず、薬剤が腫瘍または皮膚に止まっている期間もほとんど重要でないかもしれない。通常には、最も重要なことは、腫瘍と腫瘍組織周辺の非腫瘍組織との間、あるいは皮膚と他の組織との間の対比を大きくすることであり、通常には、このことは、高い腫瘍：血液濃度比または皮膚：血液濃度比を得るための最適化により達成される。それゆえ、腫瘍または皮膚のいずれかに対する組成物を最適化することにおいて、一般的には２つの特性を試験する：１）適当ならば、腫瘍：血液比または皮膚：血液比；および２）腫瘍中濃度または腫瘍グラム当たりの注射用量％、選択された適当な時点 (例えば、３時間、２４時間、４８時間、７２時間、１４４時間)、または適当ならば皮膚についての対応する測定値。別法として、適当な動物モデルが利用できる場合には、腫瘍または皮膚の破壊速度を直接測定することができる。以下の議論において、本発明に使用しうる脂質をベースにした構造の例としてリポソーム、および本発明に使用しうる親水性部分の例としてＰＥＧ部分に言及する。以下の議論は、特に、診断および治療剤の腫瘍へのデリバリーに言及するが、その議論は、例えば皮膚科学的疾病の検出または治療を行うための皮膚への診断および治療剤のデリバリーにも適用できる。直接的測定値がない場合、修飾が「トラッピング」を促進する（そして排除器官への進入速度の低下によっては循環時間を改善しない）という証拠は、以下の２つのことに由来する：１）第１対照物と比較した場合、腫瘍：血液比、または皮膚：血液比の低下がないこと；および２）血液レベルを最大にするリポソームの修飾の程度が、しばしば、所定時点における腫瘍中の用量％を最大にするリポソームの修飾の程度および／または腫瘍：血液比を最大にするリポソームの修飾の程度とは異なるという観察結果、あるいは皮膚についての同等な観察結果。基礎となる処方（ＰＥＧによる修飾有りまたは無し）がトラッピングを促進する場合、ＰＥＧ修飾による解毒器官中への進入の減少は、腫瘍：血液比を増加させるであろう。よって、トラッピングを最大にするための未修飾リポソームの最適化は、解毒器官中への進入を減少させる修飾の影響についての試験による（なぜなら、良好なトラッピングであれば、このことは修飾に伴って腫瘍：血液比を増大させるが、良好でないトラッピングであれば、これらの比が低下する）。同じ関係が皮膚にもあてはまる。脂質含有多分子構造本発明組成物は、リポソームまたは他の脂質をベースにした構造、詳細には以下に述べるミセルおよび他の構造のごときリン脂質をベースにした構造の形態であってもよい脂質をベースにした構造を含んでなる。カチオン性リポソームに暴露されたＤＮＡは、経時的にリポソームから押し出されるように見える「スパゲッティ様構造」の形態を示す（フィラメント状類脂質ＤＮＡ）。この構造は、ＤＮＡ周囲のリポソーム二重層の融合の結果、２本鎖ＤＮＡの鎖が脂質二重層で被覆されるためと考えられる。ＤＮＡ／脂質複合体の他の形態も観察されており、それらはヘキサゴナル II フェイズ（hexagonal II phase）の脂質に類似すると考えられるが、六辺形の脂質管の５nmの小胞中に存在するＤＮＡを伴う。これらの管はそれらの疎水性表面と一緒に接触して充填されており、管の各束は水性環境に対面しているそれらの親水性表面とともに方向付けられた外部脂質皮膜を有する（かかる構造がリポソームの脂質二重層中に存在してもよい）。非リポソーム性薬剤複合体についても説明する。抗真菌剤アンホテリシン−Ｂは、ＤＭＰＣおよびＤＭＰＧ（７：３）とともにリボン状構造（ＡＢＬＣ^TM、ザ・リポソーム・カンパニー（Ｔhe Ｌipospme Ｃompany））を形成し、硫酸コレステロールとともに円盤状構造を形成することが示されている。よって、すべての薬物／脂質複合体がリポソームであるとはかぎらない。しかしながら、外部脂質表面のサイズおよび性質によっては、かかる非リポソーム脂質担体は多くのリポソーム的特性を有するであろう。リポソームにポリマーを結合させるのに用いる方法を、適当な脂質複合体にポリマーを結合させるために容易に適用することができる。疎水性本体本発明における使用が考えられる疎水性本体は一般的には脂質であるが、他のタイプの疎水性本体、例えば疎水性ペプチド、ポリペプチドおよび蛋白もある。主な要件は、本体は十分に疎水性であり本発明組成物の脂質をベースにした構造中に保持され、しかるに治療剤または診断剤がデリバリーされ、標的組織中にエントラップされるということである。本発明組成物中の疎水性分子のいくつかは、組成物の血流に接触する表面上に存在する親水性ポリマー部分のためのアンカーとして作用することも要求される。これらについては、親水性ポリマー部分に関連して以下に議論する。親水性ポリマー部分ポリマー部分は、脂質をベースにした構造中に統合されて脂質をベースにした構造中にポリマーを固定しうる疎水性分子に結合していてもよいが、そのことにより脂質をベースにした構造が破壊されないこと、およびアンカー分子がポリマーに共有結合する適当な反応性基を有していること、さらにアンカー分子が容易には脂質をベースにした構造から失われないことが条件となる。好ましくは、ポリマー部分を固定するのに用いる分子はリン脂質である。知られている共有結合法、好ましくはポリマーをアンカー分子のアミノ基に結合させることを包含する方法によりポリマーをアンカー分子に結合させてもよい。結合は、共有結合であること以外に、正常な血液または血清中において意図された血流中残留時間内（通常は少なくとも２４時間、好ましくは４８時間）に生分解できないこと、無毒であること、そして免疫原性でないことが必要である。親水性部分がアンカー分子としてのリン脂質に結合している場合には、好ましくは、リン脂質および親水性部分への結合はホスホリパーゼ耐性とすべきである。リン脂質へのＰＥＧ部分のカップリングにはＴＭＰＥＧ（WO-A-90/04384、WO-90/04606、WO-A-90/04650 およびWO-A-95/06058参照）が好ましい。選択される個々の方法の適性および所望生成物によっては、リポソームまたは他の脂質をベースにした構造の組み立ての前または後にこれらの方法を適用してもよい。ポリマー部分を有するリポソームを用いる場合、リポソーム形成前にポリマー部分を付加してもよいが、このことはペイロードの担持に利用可能な内部空間を減少させ、所望の外部表面の被覆を行うのに必要なポリマー量を増加させる。もちろん、それは分散相を形成するリポソームまたは他の脂質をベースにした構造の外部表面における血流または組織に暴露されるポリマーの量であり、それは主にペイロードの腫瘍における局在化に影響する。本発明は、意図された使用のための組成物の最適化により課される要件以外には、脂質をベースにした構造の血液に接触する表面に表される親水性ポリマー部分の量を制限するものではない。しかしながら、一般的には、脂質をベースにした構造の血液に接触する表面における疎水性分子の少なくとも２％が親水性部分を用いて誘導体化されていることが好ましい（特にリポソームの場合）。もしそれらがすべて誘導体化可能であるとすれば、治療または診断目的の達成上望まれるかまたは必要な場合には脂質をベースにした構造の血液に接触する表面において露出している疎水性本体の１００％までをそのように誘導体化してもよい。血液に接触する表面において露出している疎水性本体のごく一部が誘導体化される場合には、誘導体化可能な疎水性本体の量および誘導体化の程度は、血液に接触する表面において露出している全疎水性本体の少なくとも２％が親水性部分を用いて誘導体化されるようにする。より好ましくは、誘導体化可能な疎水性本体の２０ないし１００％が実際に誘導体化される［本明細書において、特に断らないかぎり、親水性部分による疎水性本体の誘導体化の程度はモル％で表される］。脂質をベースにした構造の血液に接触する表面に露出していない疎水性本体上の親水性部分の量はあまり重要でない。親水性ポリマー部分を用いて誘導体化されている疎水性本体の割合は、本発明の脂質をベースにした構造全体にわたって実質的に一定であり、脂質をベースにした構造の組み立て前に疎水性本体のすべての誘導体化が行われる場合には、保護プロセスは、脂質をベースにした構造の組成が脂質をベースにした構造全体にわたって実質的に一定となることをほとんど不可避なものとする。好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、特に分子量２５０ないし１２０００のＰＥＧ、より好ましくはＰＥＧ５０００を用いるが、ポリマー部分は適当な親水性ポリマーであってもよい。本発明組成物において、診断または治療剤は脂質をベースにした構造に少なくとも部分的に結合している。好ましくは、例えば、脂質二重層中もしくはその間、またはリポソーム中の閉じた水性環境中へのエントラップメント、またはリポソームの脂質二重層中への取り込みにより、少なくとも５０重量％の診断剤または治療剤が脂質をベースにした構造に結合している。リポソームの具体例およびポリマーとしてのＰＥＧについて本発明をさらに以下に説明するが、上記原理および以下に用いられる原理を本発明の他のリン脂質をベースにした組成物に等しく適用することができる。以下の実験例は、血中での保持および解毒器官からの排除のための最適化（先行技術に開示されている）によっては、腫瘍中での滞留に関して十分に最適化されたリポソームが得られないことを示すものであり、先行技術は、ポリマーが腫瘍：血液比を実際に悪化させうることを示す。実験例は、腫瘍におけるリポソーム濃度に関連した腫瘍：血液比についての経験的な研究、または腫瘍からのフラックス速度および腫瘍内での排除速度についての直接的測定のいずれかに基づく最適化を説明し、かくして、腫瘍内での最適な滞留および許容される腫瘍：血液比を有するリポソームにエントラップされた化合物を構築させる。腫瘍は量的に変化し、血液／腫瘍バリアーは常に同じであるとは限らないので、最適特性を有する単一処方を開示することは可能ではない。異なるタイプの腫瘍について個々にこれを決定しなければならない。しかしながら、上記あるいは以下に説明する原理が与えられ、実施例においてそれらの原理の適用が示されたならば、いずれの特定の腫瘍についても最適な腫瘍中での滞留時間および腫瘍：血液比を達成することができる。 i）ＰＥＧ用量実施例９（図２および４）において、２１モル％および４０モル％までのＰＥＧ−ＰＥが外部表面上に存在する(ＰＥＧ化されたＰＥの割合に左右される)。実施例４において、５％〜１００％の範囲が調べられる。初期の報告［Tilcock ら,Biochem.Biophys Acta 110:193-198,(1992)］は、２０モル％のホスファチジルエタノールアミン（全表面脂質のわずか７モル％）がＰＥＧ化された（特定の条件下で）ことを示した。しかしながら、Blume & Cevc（Biochim.Biophys.Acts ,1146:157-168,(1993)）が取り込みにより１００％ＰＥＧ−ＰＥリポソームの製造に成功して以来、反応時間を延長し、ＴＭＰＥＧ添加量を増大させて加水分解を克服し、そして／または大モル過剰のＴＭＰＥＧを添加すると、すべてのＰＥがＰＥＧされないという理由はなくなった。このことは、１００％充填が実行可能であるが、表面へのＰＥＧ鎖の表出における反応論的問題を排除することができないということを示した。腫瘍に対する薬剤をデリバリーするためのＰＥＧ−リポソームのすでに報告されているすべての使用は、ＰＥＧ−脂質の取り込みによりリポソームを製造するものである。Allenら(Biochem.Biophys.Acta,1066:29-26,(1991))には、脂質組成物に添加されたよりも少量のＰＥＧがリポソーム中に取り込まれたことが示された。１０％のＰＥＧ−１９００−ＰＥを用いた場合、わずか５.７、５.０、６ .８、６.５モル％がリポソーム中に取り込まれ、比較としてのＰＥＧ−５０００については６.９％および７.３モル％であった。高モル％のＰＥＧ（１９００） −ＤＳＰＥでは脂質混合物の発泡が起こり、発泡はクロマトグラフィーにより除去できることが記載されて以来、Allen et al(1991)によってすべてのＰＥＧ− ＰＥの取り込みについての失敗はＰＥＧ−ＤＳＰＥミセルが原因とされた。実際には、発泡は潜在的に重要な環境を提供し、そこでは空気／水界面は、二重層環境に代わる環境を提供することによって、泡にトラップされた遊離のＰＥＧ−脂質の二重層中への取り込みを妨害する。この推定上の泡にトラップされたＰＥＧ −脂質または推定上のＰＥＧ−ＰＥのミセルがより重要であるかどうかを確証すべきである。ＰＥＧ−７５０、ＰＥＧ−１９００およびＰＥＧ−５０００を用いるＰＥＧ化およびＰＥＧ−１９００を用いた場合の最大血中保持について同様な限界が観察された下記実施例に示した結果がAllenら(1991)の結果と対照をなすことは注目すべきである。本発明者は、より広範囲のＰＥＧ置換を試験することができ、ＰＥＧ化のための標的ＰＥを５％から４０％に増加させた後、同時に起こる血中レベルの変化を伴う肝臓での取り込みの有意な減少を観察した。 ii）ＰＥへのＰＥＧの結合１）好ましい結合は、エステラーゼおよびアミダーゼそれぞれによる開裂を受けるエステルまたはアミド結合よりも酵素的分解に対して安定なものである。コハク酸エステル結合はさらに加水分解を受ける（Carter and Meyerhoff,J.Immun ol.Methods,1995,81,245-257）。生分解されうる結合を有する場合、腫瘍環境中の分解が確実にされうる。種々の結合が血清中の安定性について評価された［Pa rrら,Biochem.Biophys.Acts,1995:21-30,(1994)］。エステル結合を含むコハク酸結合ＰＥＧ−脂質はＰＥＧ損失の対して最も感受性があった。カルバメート結合ＰＥＧ−脂質はあまり安定ではないが、２４時間たっても非常に少量しか失われなかった。アミド結合はこれらの条件（おそらくアミダーゼが存在しないと考えられる）において安定であるように思われるが、ポリマーがホスファチジン酸のリン酸先頭基に直接結合しているＰＥＧ−脂質は、エステル結合脂質とカルバメート結合脂質の中間の安定性を示した。４種すべてのＰＥＧ−脂質はやはりアシル鎖の１つまたは両方の損失を経る分解を受ける(Parrら,1994)。これらのことを考慮する以外にも、ＰＥＧ−脂質の二重層中への固定の安定性もまた重要であり、脂肪のアシル鎖の性質に関連することが理解されるはずである。Pa rrら(1994)により報告された結果によれば、ＰＥＧ−脂質は、実施例のＤＳＰＥ：ＤＳＰＣリポソームよりも急速にＤＯＰＥ：ＤＯＰＣリポソームから失われるであろうと予想される。２）Woodleら(Biophysical Journal,61:902-910,(1992))に示されたカルバメート結合のような他の結合とは対照的に、好ましい結合は、アミノ基が置換された場合に、ＮＨ₂基の正電荷を消費し、正味の負電荷を有するホスファチジルエタノールアミンを残すような正味の負の電荷を生じるものであってはならない。重要なことに、カルバメート結合ＰＥＧ−脂質を用いる基は、実質的にミセル形成を行うことが報告されており（Allenら,(1991)）、これらの研究者によれば、リポソーム中に取り込まれうるＰＥＧ−ＰＥ量を制限するものとされている。 Beddu-Addoら(Liposome Research Days Conference,Abstract A-19(1994))には、相分離およびミセル形成が報告されており、さらに、無傷のリポソーム中に取り込まれうるＰＥＧ−脂質量の制限も報告されている。対照的に、塩化シアヌル法により得られたＰＥＧ−脂質を用いた場合、取り込まれうるＰＥＧ−脂質量が制限されず、さらにミセル形成の問題もないことが報告されている(Blume and C evc,(1993))。またBlume and Cevc(1993)は、彼らの結果とAllen（1991年）の結果との相違はコレステロールまたは脂質濃度のいずれかの効果によるものとしているが、本発明の下記結果には、高い比率のＰＥＧ化ＤＳＰＥまたはＤＯＰＥの取り込みを妨害する不十分な発泡が示されている（Allenの知見はミセル形成によるものと思われる）。ＴＭＰＥＧの使用により得られる結合および塩化シアヌル法により得られるトリアジン環結合は共通してＰＥ先頭基の正電荷を保存し、かくして正味の負電荷を生じないのであるが、文献においてはこの点につきいくぶんかの混乱が生じている：Blume and Cevc,(Biochem.Biophy.Acta,1029:91- 97,(1990));Blume and Cevc(1993)。ＰＥ先頭基の正味の負電荷を生じることによるカルバメート法は有効なサイズを変化させ、先頭基を閉鎖充填する能力を減じる（静電気的反発による）。ミセル形成は相対的に円錐形の脂質にとり好ましいので（先頭基が円錐の底にある）、必然的に円筒形の脂質の先頭基の相対的な大型化（そのことは二重層形成傾向があろう）はミセル形成を促進すると予想されるであろう。大きな曲率にとり好ましい正味の負電荷の効果についてのこの考えは、コレステロールはより負に荷電したＰＥＧ−ＰＥの取り込みを可能にするという観察結果（Beddu-Addoら,(1994)）により示唆される。これらを考慮する以外に、ＰＥＧ化による脂質上の正味の負電荷の発生もまた不利なものでありうる。なぜなら、正味の負電荷の発生は、マクロファージ（負電荷を有するリポソームに結合するスキャベンジャー受容体を有する）による解毒に対してリポソームを感受性にしうるからである［Nishikawaら,L.Biol.Chem. ,265:5226-5231,(1990)］。よって、ＰＥＧ化のいくつかの利益（それはマクロファージの摂取を妨害する）は、脂質上に正味の負電荷を生じたＰＥＧ化法により相殺されるかもしれない。リポソームの腫瘍での保持に影響する因子は、血中クリアランスを遅延させる因子とは異なる：１）血中クリアランス速度の低下は、リポソームの脂質組成を変化させることにより行われうるが、このことはそれ自体必ずしも腫瘍における有意なトラップを生じるものではない（たとえそうであろうとも、リポソームのサイズが適切な場合には、急速にクリアランスされる同じサイズのリポソームより多くのリポソーム内容物が腫瘍に送達される）。２）ポリエチレングリコールのごときポリマーがリポソーム外表面（または両表面）に結合している場合には、循環時間の著しい増大にとり適切である。しかしながら、ＰＥＧ化の効果は短命なリポソームほど大きいのであるが、おそらく半減期はＰＥＧ化された長命なリポソーム（すなわち、脂質組成が最適化されており、かつ、ポリマーが付加されているリポソーム）の半減期を超えないであろう。よって、非常に長命なリポソームを得るためには、適切な脂質組成およびＰＥＧ化の両方を用いるべきである。長命なリポソームを生じる典型的な脂質組成を用いた場合、表面へのＰＥＧの結合はほとんど半減期を改善しないので（そしてこのことは相対的に少ないＰＥＧ置換を要する）、最大の半減期を得るためのＰＥＧ化として比較的中程度のＰＥＧ化（外表面上において１〜２０モル％のＰＥＧ−脂質）が選択された。しかしながら、血中クリアランス速度および腫瘍中クリアランス速度は異なる因子を含んでいるので、個々の脂質組成およびポリマー置換の程度の結果は、それら２つの速度に異なった影響を与えるかもしれない。３）リポソームによりトラップされた作用剤の血中クリアランスは、詳細に論評された複数の因子［Senior,Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.3(2):123-193( 1987)］に依存する。（i）ＨＤＬの吸着、その後起こる脂質交換および結果としての漏出。ＶＬＤＬまたはＬＤＬは同じ機能を有するとは思われない。液状リポソームは、固体リポソームと比較してこの変換を受けやすい。３７℃において比較的液状であり、コレステロールを含有すると流動性の減少を示すリポソーム中のコレステロールも、ＨＤＬにより誘発される漏出の減少を示す。またこのことは、流動性を低下させるために含有された脂質を含む他の処方においても起こる。リポソームとＨＤＬとの間の直接輸送のほかに、他のいくつかの因子がＨＤＬへのこの破壊性の脂質輸送に関与している可能性がある：（１）リン脂質輸送因子；（２）アポ蛋白；（３）レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ii）他の血清蛋白の吸着。おそらくこれには抗体、補体および凝血因子が包含される（負に帯電したリポソームに結合するが、後者はインビボにおいて凝血因子レベルに有意な影響を及ぼさないかもしれない）。抗体または補体での自己性赤血球の被覆は、それらをそれぞれ脾臓および肝臓に配向させる。（iii）網状内皮系は解毒のための主要な経路の１つであり、飽和可能なプロセスである（ＲＥＳ遮断についての容量により示されるように）。（iv）白血球食細胞作用（マクロファージ、単球）および受容体により媒介されるエンドサイトーシス（リンパ球）。（v）リパーゼによる酵素的攻撃も考えられる。（vi）組織への分配速度も血中クリアランス時間に影響するであろう（他の医薬にもあることだが）。（vii）ＨＤＬによらない脂質交換（例えば、血漿／二重層交換。細胞膜／二重層交換）。（viii）非食細胞作用性細胞中へのエンドサイトーシスも観察されている。ＰＳ：Ｃｈｏｌ２：１のリポソームは、エンドソームを経て低ｐＨコンパートメント中に侵入することが示されている［Straubinger et al,Cell,32:1069,(1983 )］。（vi）の点は、「腫瘍局在化リポソーム」（ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６２１１）に関して開示された、すでに推奨されている最適化方法について特に重要である。この因子は潜在的に半減期に大きな影響を及ぼすが、組織中への侵入を遅延させ、それゆえ組織への分配速度を低下させる因子も同様に、腫瘍中への侵入速度を低下させ、その結果、血中対腫瘍比を低下させうる。４）対照的に、血漿クリアランスに作用する多くの因子は、腫瘍への分配および／または排出速度にはほとんど影響しないであろう。さらに、相当する正常細胞と比較すると、腫瘍細胞膜は脂質組成および固縮性がいくぶん異なっていることが報告されている。Physiology of Membrane Fluidity,ed.M Shinitzky(volII )page 53-83(1984),CRC Press Inc.Boca Raton,Florida中においてこのことを論評しているBlitterawijkは、膜脂質流動性の増加および低下の両方がなぜ報告されたのかについての説明を示している。しかしながら、表面積あたりのコレステロールの相違およびコレステロール：リン脂質比の相違があるように思われる。結果として、腫瘍環境における脂質交換は血中におけるのと同じ結果を生じるとは考えられない。よって、血中寿命が一部には脂質組成により長くなるのであれば、脂質組成は腫瘍環境において実質的に変化するであろう（例えば、コレステロールの損失により）。５）２つの部位（血中および腫瘍）に関するクリアランス速度に対する主な影響が異なる機構を有する場合には、ＰＥＧ化の影響が異なる可能性がある。皮膚のごとき大型の器官による摂取は組織への分配速度に大きな影響を及ぼし、それゆえ、早い時点において血中レベルに大きな影響を及ぼすが、肝臓および脾臓のごとき解毒器官による摂取は全体的な解毒速度体に影響し、それゆえ、血中レベルに影響する。以前の実験は、長命なリポソームを用いた場合、３.５〜３.７モル％のＰＥＧ−脂質により肝臓への取り込みが最適に低下させられ、血中における最適保持が行われたことが報告されている［Klivanov et al,Biochim.Biophys .Acta.,1062:142-148,(1991)］。ＰＥＧ−脂質で８０％まで置換されたリポソームを用いた場合、Blume and Cevc(1993)は、ＤＳＰＣリポソーム中１５モル％およびスフィンゴミエリン含有リポソームについて２０％の場合において半減期が最大となり、置換が多くなっても少なくなっても半減期は短くなるることを示した。両方の観察結果は、このＰＥＧ置換の程度が肝臓での広範な取り込みを減少させるに十分であるが、基礎となる脂質組成に関連した半減期の相違に関する情報は、やはり脂質成分が肝臓での取り込みまたは血中クリアランスに影響する１つもしくはそれ以上の他の因子のいずれかに影響することを示す［Klibanovら,( 1991)］。この最適化原理により推奨されるやや散在的なＰＥＧ化は、腫瘍中でのトラップについての最適化には不十分であるかもしれない。例えば、ほとんどすべての表面との疎水性相互作用を防止することが重要であるかもしれない。しかしながら、Cevcは、高レベルのポリマー置換を用いた場合、ポリマー末端は、蛋白が結合する親水性表面を再構築し（低密度で充填されたポリマー鎖に対する比較的可動性の被覆に対するものとして）、それゆえ血中クリアランスと表面におけるポリマーの置換程度との関係は、はじめは疎水性相互作用が減少し、次いで、親水性相互作用が増加するために、Cevcの実験においては少なくとも単純なものではない（すなわち、ポリマー置換の増大に伴う改善、次いで、低下）。よって、先行技術は、比較的少量のＰＥＧ置換により最大の利益が得られることを教示するのみならず、さらなるＰＥＧ付加が有害であろうということを実際に主張するものである。リポソームのサイズ範囲：３個の主要タイプの毛細管は、リポソームに対する質的に異なるバリヤーを提供する[Hwang in Liposomes: Biophysics to Therapeutics，page 109，(1987) ，ed．M.J.Ostro，Marcel Dekker]。連続毛細管は、内皮を通る３つの経路：ｉ）飲作用胞シャトル（５０ｎｍ粒子）； ii）細胞間結合（２〜６ｎｍ幅）； iii)内皮輸送チャネル５０ｎｍ径および５〜１０ｎｍサイズの細孔を有する基底薄膜を提供する。有窓毛細管は、内皮を通る４つの経路：ｉ）飲作用胞シャトル（５〜３０ｎｍ粒子）； ii）隔膜窓（diaphragm fenestrae）（未知の孔）； iii)開窓（４０〜６０ｎｍ）および iv）細胞間結合（４ｎｍ）を提供する。不連続毛細管は、２つの経路：ｉ）飲作用胞（５０ｎｍ）および ii）細胞間隙（１００〜１０００ｎｍ）を提供し、基底薄膜はない。６０ｎｍＳＵＶおよび４００ｎｍＭＬＶでの実験において、リポソームは、肺または骨格筋の連続毛細管を通らなかった。該分析は、腫瘍の漏出孔のある管を利用して、リポソームを大きすぎて漏出孔のない管を通れなくさせることによって、選択的にいくつかの腫瘍を得ることができることを示唆する。しかしながら、大きなリポソームは、粒子として除去される傾向がある。従って、いくつかの妥協が必要であり、決定因子は、腫瘍が異常な漏出孔のある管を有するかどうかであろうし、広がるものに関しては、修飾されたリポソームは粒子の除去システムから割愛される。本発明の組成物は、いずれかの従来の医薬上許容される方法における投与のために提供する。例えば、組成物は、滅菌水または注射用の水で再構成する乾燥粉末、例えば凍結乾燥リポソームとして提供され得る。別法で、組成物は、注射用の水性分散液または懸濁液として、あるいは、注射可能な産物を形成するために例えば滅菌水または注射用の水で希釈するのに適当な濃縮物として提供され得る。本発明の組成物は、注射で処方したとき、典型的に、従来の希釈剤または担体、抗酸化剤および保存剤、抗バクテリアまたは抗菌剤、ならびに賦形剤、形成補助剤、緩衝液、組成物のｐＨおよび強壮を調整するための試薬および医薬の分野において使用される従来の補助成分を含有するであろう。注射可能な産物を形成するための再構成または希釈用の乾燥粉末あるいは濃縮物として提供される本発明の組成物は、また、その再構成または希釈を補助する従来の付加剤を含有してもよい。本発明の組成物は、必然的に再構成または希釈後に、それを必要とする患者、例えば固形腫瘍または皮膚疾患もしくは皮膚障害を有する、あるいは有すると思われる患者に対して、標的部位での治療または診断を成すために適当な量を所望期間、臨床上容認しがたい副作用を引き起こさずに投与する。組成物は、多分子構造および付随した治療または診断試薬のために、血流への接近を提供するであろういずれかの従来の経路による注射によって投与される。典型的に、組成物は、静脈注射、筋肉注射または非経口経路によって投与されるであろう。組成物は、一度に注射してもよく、それは、分割投与または数分ないし数時間もしくは同等な日数の期間にわたる点滴による投与と同じくらい適当である。本発明は、添付図面で図解されるであろう：図１は、投与したＰＥＧ化リポソームのＤＳＰＥ含量に対する棒グラフとしてプロットした、腫瘍組織グラム当たりの注射用量パーセントを示す（実施例４参照）。図２は、投与したＰＥＧ化リポソームのＤＳＰＥ含量に対する棒グラフとしてプロットした、肝臓、脾臓および腫瘍組織グラム当たりの注射用量パーセントを示す（実施例４参照）。図３は、腫瘍グラム当たりの注射用量パーセントと肝臓（ａ）または脾臓（ｂ）グラム当たりの注射用量パーセントの相関を示す（実施例６参照）。図４は、リポソームのＤＳＰＥ含量に対する貯蔵１３（ａ）、１９（ｂ）、２２（ｃ）および４９（ｄ）日での棒グラフとしてプロットした、保持された¹¹¹ インジウムのパーセントを示す（実施例６参照）。図５は、クエン酸エステル化した新鮮な凍結血漿に暴露後１時間および２４時間での投与したリポソームのＰＥＧ化ＤＳＰＥ含量に対する棒グラフとしてプロットした、保持された¹¹¹インジウムのパーセントを示す（実施例６参照）。図６は、（ａ）腫瘍組織グラム当たりの注射用量パーセントの、ヒト血漿で２４時間インキュベーションした後の潜状能（保持された¹¹¹インジウムのパーセント）に対するプロットおよび、（ｂ）ＮＴＡ−インジウム複合体またはＤＳＰＥ（モル％）に対してプロットした肝臓（上方パネル）および血液（下方パネル）グラム当たりの¹¹¹インジウムの注射用量％の棒グラフを示す（実施例６参照）。図７および８は、それぞれ、様々なタイプの血漿に１時間（Ａ）かまたは２４〜２５時間暴露したＰＥＧ化リポソーム中のＤＳＰＥパーセントに対する保持された¹¹¹インジウムのパーセントのプロットを示す（実施例６参照）。図９は、保持された¹¹¹インジウムのパーセントを新鮮な凍結クエン酸エステル化血漿への暴露時間（分）に対してプロットする（実施例６参照）。図１０は、血漿中で１時間（Ａ）および２４時間（Ｂ）インキュベーションした後の保持された¹¹¹インジウムのパーセントを非ＰＥＧ化およびＰＥＧ化リポソームにおけるＤＳＰＥ含量に対してプロットする（実施例６参照）。図１１は、腎臓組織グラム当たりの注射用量パーセントを１時間（上方パネル）および２５時間（中央パネル）にて、マウス血漿に暴露することによってイン・ビトロで除去された¹¹¹インジウムに対してプロットし（全パーセント）、棒グラフとして、リポソームのＤＳＰＥ含量（モル％）に対してプロットする（下方パネル）（実施例６参照）。図１２は、腎臓グラム当たりの¹¹¹インジウムの注射用量パーセントを、ＰＥＧ化（斜線）および非ＰＥＧ化（白抜き）リポソームのＤＳＰＥ（モル％）および遊離のＮＴＡ−インジウム複合体に対してプロットする（実施例６参照）。図１３は、様々な臓器の組織グラム当たりの¹¹¹インジウムの注射用量パーセントを、投与したＰＥＧ化リポソームのＤＳＰＥ含量（モル％）に対してプロットし（グラフの左手）、用量の臓器：血液比をＤＳＰＥ含量（モル％）に対してプロットする（グラフの右手）（実施例７参照）。図１４は、リポソーム中に負荷された¹¹¹インジウムのパーセントをリポソームのＤＳＰＥ含量（モル％）に対してプロットする（実施例８）。図１５は、¹¹¹インジウム含量をリポソームの様々なＤＳＰＥ含量での溶出容量（ｍｌ）に対してプロットする（実施例８参照）。図１６は、リポソーム中でエントラップされた¹¹¹インジウムのパーセントをリポソームのＤＳＰＥ含量（モル％）に対してプロットする（実施例８参照）。図１７は、血液グラム当たりの¹²⁵Ｉの注射用量パーセントを注射後の様々な時間（時）でプロットする（実施例９参照）。図１８は、ＰＥＧ化（黒塗り●）および非ＰＥＧ化（白抜き○）リポソームの臓器グラム当たりの注射した125Ｉのパーセントを、リポソーム注射後の様々な時間（時）でプロットし（グラフの左手）、対応する組織対血液比をプロットする（グラフの右手）（実施例９参照）。図１９は、ＰＥＧ化（斜線）および非ＰＥＧ化（白抜き）リポソームの、図１８のグラフから得られた１〜１４４時間にわたる曲線（ＡＣＵ）下の面積を示し（上方パネル）、様々な試験組織の対応する腫瘍対臓器比を示す（下方パネル）（実施例９参照）。図２０は、臓器グラム当たりの¹¹¹Ｉｎの投与量パーセントを、５％ＤＳＰＥおよび３３％コレスレロール（三角形）ならびに４０％ＤＳＰＥおよびコレステロール無し（四角形）を含有するリポソーム注射後の時間（ｈ）に対してプロットし（グラフの左手）、対応する臓器：血液比をプロットする（グラフの右手）（実施例９参照）。図２１は、様々なリポソーム組成物の、および遊離¹¹¹Ｉｎ−ＮＴＡ複合体の血液（上方パネル）および腫瘍（下方パネル）組織グラム当たりの注射用量パーセントを示し、対応する腫瘍対血液比（下方パネル）を与える(実施例１０参照) 。図２２は、ＤＭＳＯにおけるＴＭＰＥＧ−５０００の¹⁹Ｆ−ｎｍｒトレースを示す（実施例１１参照）。図２３は、ホウ酸緩衝液（四角形）およびＨＥＰＥＳ緩衝液（三角形）で処理したＴＭＰＥＧの、−６２.５ｐｐｍおよび−６３.５ｐｐｍ（％）での２つのトリプレットの強度に関して表した６２.５ｐｐｍ（ＴＭＰＥＧ−５０００）での¹ ⁹ Ｆシグナルの様々な時間での強度のグラフである（実施例１１参照）。図２４は、全ての無傷ＴＭＰＥＧが消失したとき、２５０ｍＭスクロースを含む５０ｍＭホウ酸ｐＨ９．３中で８０分インキュベーション後のＴＭＰＥＧ−５０００の¹⁹Ｆ−ｎｍｒトレースを示す（実施例１１参照）。図２５は、ＴＭＰＥＧ−５０００をａ）２５０ｍＭスクロースを含む５０ｍＭホウ酸ｐＨ９．３およびｂ）２９０ｍＭスクロースを含む２０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４に暴露したとき、¹⁹Ｆ−ｎｍｒによって検出された様々な種の時間に対する相対シグナル強度のグラフである（実施例１１参照）。図２６は、リポソーム中に投与された¹¹¹Ｉｎ（丸）および¹²⁵Ｉ−ＴＩ（四角形）の、注射後の時間（ｈ）に対してプロットした血液（上方パネル）および腫瘍（下方パネル）組織グラム当たりの注射用量パーセントを示す。実施例実施例１取り込まれたホスファチジルエタノールアミンの外部ＰＥＧ化を介するＰＥＧ修飾ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥリポソームの製造リポゾームは、典型的には、１０mg／mlリポソーム懸濁液の押出しによって製造した。１０mg／mlリン脂質懸濁液５mlを製造するために、表１に示すように、所定量（表１に示す、μl）のＤＳＰＣ（クロロホルム中濃度１００mg／ml）およびＤＳＰＥ（クロロホルム／メタノール（２：１）中濃度１００mg／ml）を混合することによってリン脂質（ＰＬ）全含量５０mgを有する脂質フィルムを製造した。イオノフォアＡ２３８１７を全リン脂質５０mg当たり０.１μmolのモル濃度（リン脂質５０,０mg当たり５４.４μg）で脂質二重層中に取り込んだ。選択された実験において、交換不可能な脂質マーカーである³Ｈコレステロールヘキサデシルエーテル（２５μＣi）を添加して、工程の全体にわたって脂質濃度を追跡するのを助けた。薄い脂質フィルムを製造するために、溶媒を注意深く蒸発させた。これは、多くの異なる方法で行うことができる。例えば、以下のとおり、窒素ガスを吹き込むことによる蒸発：溶媒の表面から５cm上方に出口を設置し、窒素流を調節して、溶媒／空気界面での発泡を回避した。窒素圧は、出口の数に従って、調節しなければならなかった。窒素ガスによって溶媒のほとんどが除去されたが、良好なリポソーム調製物を得るためには、溶媒の残留痕跡物を除去することが重要である。したがって、真空下、一晩、デシケーター中に乾燥フィルムを置いて、溶媒の痕跡物を除去しなければならない。脂質を分散させるために、エントラップしようとする水溶性成分（例えば、放射性標識もしくは蛍光化合物、または次なる¹¹¹インジウムの負荷のためのニトリロ三酢酸、ＮＴＡ）を含有するバッファー５mlを脂質フィルムに室温で添加した。次いで、該混合物を、室温で２０時間ゆっくりと振盪しつつ、オービタル振盪器に入れた。２０時間膨潤させた後、脂質が完全に分散されるまで、該混合物を６５℃まで加温（２分）および撹拌（１分）のサイクルに数回付した。次いで、リポソーム懸濁液を、液体Ｎ₂に該管を１〜２分間（またはリポソーム調製物を冷凍させるのに必要な時間）浸漬した後に６５℃で１〜２分間（または液体リポソーム懸濁液にするのに必要な時間）水に浸漬することによる冷凍および解凍のサイクルに５回付した。次いで、リポソーム懸濁液を、以下のとおり、ポリカーボネートフィルター（ダブルスタックフィルター）を介して、６５℃（再循環水浴に連結したサーモバレルによって提供される温度）で押し出した：０.４ミクロンのフィルターに５回；０.２ミクロンのフィルターに５回および０.１ミクロンのフィルターに５回通す。これにより、平均サイズ約１００nmのリポソームが得られる。次いで、バッファーを交換することによって、例えば、ゲル透過クロマトグラフィーによって、エントラップされた内容物を有するリポソームをエントラップされていない水溶性成分と分離した。市販のＰＤ−１０カラム（セファデックス（Ｓephadex）Ｇ−２５、分別範囲１０００−５０００ＫＤa）が適切であることが判明した。これらのカラムを用いて、リポソームを空隙率で回収し、ＮＴＡ（または他の水溶性内容物）をカラムの全容積で回収した。ＰＤ−１０カラムを適当なバッファーで平衡化させ、押し出されたリポソーム懸濁液２ml（最大）を添加した。フラクション１を回収した後、バッファー３００μlでフラクション２〜３０を溶出させた。リポソームの位置は、シンチレーションカウンティングによって脂質標識（すなわち、³Ｈ）を定量化することによって確立した。次いで、リポソームを含有するフラクションをプールし、³Ｈ含量によって、およびリンの推定によって、脂質含量を確立した。次いで、例えば、リン脂質１０mg当たり０.８mＣiの比率で、¹¹¹Ｉn（０.０４ＭＨＣl中で形成された¹¹¹インジウム塩酸塩）と一緒にインキュベートすることによって、リポソームに¹¹¹Ｉnを添加することができる（リポソームが、例えばＮＴＡの存在下で生成された場合）。次いで、適当な内容物を添加した押し出されたリポソームを、適当なバッファー中、室温で２時間、ＴＭＰＥＧと反応させることによって、ＰＥＧ化した（種々のバッファーの長所および短所をさらに以下に記載する、例えば、１）２５０mＭスクロースを含有する５０mＭホウ酸バッファー（pＨ９.３）；２）２５０mＭスクロースを含有する５０mＭリン酸バッファー（pＨ７.４）；３）２０mＭＨＥＰＥＳ１４５mＭＮaＣl（pＨ７.４））。リポソーム懸濁液を、１６６mg／mlのＴＭＰＥＧを含有する反応混合物中２mg／ mlの最終リン脂質濃度に調節した（別のストラテジーを以下に記載する）。セファロースＣＬ−４Ｂを用いるゲル透過クロマトグラフィーによって、未反応ＴＭＰＥＧを含まないＰＥＧ化リポソームを回収した。高さ７cm、直径２.４c mの大きさのセファロースカラムに添加する最大値は、約２mg／mlの全リン脂質および１６６mg／mlのＴＭＰＥＧのリポソーム懸濁液１mlである。該カラムは、まず、適当なバッファー（例えば、注入に適しているバッファー）で平衡化させた。リポソームを添加する前に、カラムの上部から過剰のバッファーを排出する。フラクション１を回収した後、バッファー５００μlでフラクション２〜３０を溶出させ、バッファー２mlでフラクション３１〜４０を溶出させた。ＰＥＧ化リポソームを空隙率で回収した。ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ（５：６２：３３mol％）リポソームについて、以下の例外を除いては、上記方法を行った：１）オービタル振盪を省略し、代わりに強い撹拌を用いた（高いＤＳＰＥ含量を含有するかまたはコレステロールを含有しないリポソームについて、この方法は、起泡およびオービタル振盪を生じ、したがって、代わりに長い時間が用いられた）；２）リポソームは、２５０mＭスクロースおよびＮＴＡを含有する５０mＭリン酸（pＨ７.４）を用いて構築された；３）ＮＴＡのクロマトグラフィー分離のために用いたバッファーは、２５０m Ｍスクロースを含有する５０mＭリン酸（pＨ７.４）であった；４）インジウム添加前に、リポソームを０.２μフィルター（アクロディスク（Ａcrodisc １３）を介して濾過して、如何なる凝集をも除去した；５）添加した¹¹¹インジウムは、リン脂質１０mg当たり０.５mＣiであった；６）ＰＥＧ化反応におけるリン脂質の最終濃度は、１５０mg／mlのＴＭＰＥＧを含有する３.５mg／mlであった。ＰＥＧ化の程度は、リン脂質の薄層クロマトグラフィーならびにＤＳＰＣ、ＤＳＰＥおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥのリン推定によってモニターした。１６６mg／ml のＴＭＰＥＧをpＨ９.３で用いた場合、pＨを７.４に変えた場合の内容物の実質的な漏出があった。高いＤＳＰＥ含量（６０および１００mol％）を有するＰＥＧ化リポソームは、非ＰＥＧ化リポソームよりも良好なこのpＨシフトに耐えたので（各々、残存内容物９.３対２.６％および７.４対１.７％）、内容物を保持するリポソームは、多量にＰＥＧ化したリポソームについて濃縮されることができた。これは、「空の」または「添加された」リポソームの両方からの脂質がＴＬＣによって評価されるので、ＰＥＧ−脂質のmol％の正確な評価を複雑にする。さらに、高いＴＭＰＥＧ濃度はリポソームの凝集を生じ（容量排除効果による）、したがって、全てのリポソームへのＴＭＰＥＧの等しいアクセスを妨げる。これをpＨ７.４で行うと（すなわち、pＨ変化の工程を誘発する溶解を省略する）、調製物は、不均質なＰＥＧ化を有し、すなわち、多量にＰＥＧ化されたリポソームおよび全く／あまりＰＥＧ化されなかったリポソームの混合物を含有する。これらの考察に加えて、高いＰＥＧ濃度は、脂質二重層をＰＥＧに浸透可能にすることが知られている。これは、内部のＰＥＧ化を多少可能にし、したがって、この可能性は、全脂質を測定するＰＥＧ化の評価方法を適用するかを考慮されるべきである。本発明者らは、アッセイしようとする外部および全ＰＥＧを可能にするＰＥＧについてのチャイルズ（Ｃhilds）アッセイに基づく方法を研究した。それは、ＲＥＳ摂取に対する障壁を提供する外部ＰＥＧであるので、それらの外部ＰＥＧ含量に対してリポソームを比較するのは、重要である。高いＴＭＰＥＧ濃度の潜在的な問題（凝集、ＰＥＧ化の間の二重層移動、溶融、および敏感なリポソームについての非リポソーム構造への転移）を仮定すれば、別の起こり得る好ましいＰＥＧ化スキームは、段階的にＴＭＰＥＧを付加することであり、この結果、該反応の初期段階の間に、亜凝集で、亜溶融投与量である。必要な場合、過剰のＴＭＰＥＧは、ＴＭＰＥＧのアリコットの添加の間に除去することができる。実施例２取り込まれたホスファチジルエタノールアミンの外部ＰＥＧ化を介するＰＥＧ修飾ＤＯＰＣ／ＤＯＰＥリポソームの製造該リポソームは、典型的には、１０mg／mlのリポソーム懸濁液の押出しによって製造された。１０mg／mlリン脂質懸濁液４mlを製造するために、ＤＯＰＣ（クロロホルム中濃度２０mg／ml）およびＤＯＰＥ（クロロホルム／メタノール（２：１）中濃度１０mg／ml）を混合することによってリン脂質（ＰＬ）全含量４０ mgを有する脂質フィルムを製造した。該脂質フィルムは、実施例１と同様に製造した。脂質を分散させるために、エントラップしようとする水溶性成分（例えば、¹² ⁵ Ｉ−チラミニルイヌリン、ＴＩ）を含有するバッファー４mlを脂質フィルムに室温で添加した。次いで、該混合物を強く撹拌した。脂質が完全に分散されるまで、該混合物を６５℃まで加温（２分）および撹拌（１分）のサイクルに数回付した。次いで、リポソーム懸濁液を、液体Ｎ₂に該管を１〜２分間（またはリポソーム調製物を冷凍させるのに必要な時間）浸漬した後に６５℃で１〜２分間（または液体リポソーム懸濁液にするのに必要な時間）水に浸漬することによる冷凍および解凍のサイクルに５回付した。次いで、リポソーム懸濁液を、以下のとおり、ポリカーボネートフィルター（ダブルスタックフィルター）を介して、約６５℃で押し出した：０.４ミクロンのフィルターに５回；０.２ミクロンのフィルターに５回および０.１ミクロンのフィルターに１０回通す。これにより、平均サイズ約１００nmのリポソームが得られる。次いで、２０mＭＨＥＰＥＳ１４５mＭＮaＣlバッファー（pＨ７.４）を用いて１０mlのシリンジバレルセファロースＣＬ−４Ｂカラムを用いてエントラップされた内容物を有するリポソームをエントラップされていない水溶性成分と分離した。これらのカラムを用いて、リポソームを空隙率で回収し、ＴＩ（または他の水溶性内容物）をカラムの全容積で回収した。該カラムを同一のバッファーで平衡化させ、押し出されたリポソーム懸濁液１mlを添加した。フラクション１を回収した後、バッファー４００μlでフラクション２〜４９を溶出させた。リポソームの位置は、ガンマカウンティングによって¹²⁵Ｉ−ＴＩ（または他の標識）を定量化することによって確立した。次いで、リポソームを含有するフラクションをプールした。次いで、適当な内容物を添加した押し出されたリポソームを、２０mＭＨＥＰＥＳ１４５mＭＮaＣl（pＨ７.４）中、室温で２時間、ＴＭＰＥＧとの反応によってＰＥＧ化した。リポソーム懸濁液は、７０mg／mlのＴＭＰＥＧを含有する反応混合物中、３.４mg／mlの最終リン脂質濃度に調節した。実施例３リポソーム中に取り込むためのＰＥＧ誘導ホスファチジルエタノールアミンの製造原則として、ＰＥＧ−リポソームは、それらがＰＥＧ−脂質の取込みによって製造されるかまたはリポソームの外部のＰＥＧ化によって製造されるかに関係なく、実質的に同一の生物学的分布を有すべきである。身体クリアランスメカニズムは、外部ＰＥＧだけを調べ、かくして、１０mol％ＰＥＧ−ＤＳＰＥを含有するリポソームは、外部が完全にＰＥＧ化された１０mol％ＤＳＰＥを含有するリポソームと、後者の場合のＰＥＧ−ＤＳＰＥが全脂質に対する５mol％ＰＥＧ− ＤＳＰＥだけを構成する場合でさえ、等価である。一の差異は、含有容量が内部ＰＥＧ−鎖含量および該内容物の分子サイズによって決定された程度までＰＥＧ −ＤＳＰＥによって減少させられるであろうということであろう（ＰＥＧは、表面から蛋白を排除することが知られている）。多量のＰＥＧ化は、有意な割合のリポソームキャビティを失うであろう。しかしながら、これは、生物学的行動に影響を及ぼさない。２つの方法は、共に、長所および短所を有する：外部ＰＥＧ化は、１）内部容量をむだにしない；２）非常に高いレベルのＰＥＧ化を容易に達成することができる；３）達成されたＰＥＧ濃度が高い場合に凝集を形成させる。取込みを介するＰＥＧ化は、１）内部空隙をむだにする；２）高いＰＥＧ−ＤＳＰＥレベルを用いる場合にミセル形成および起泡の問題に遭遇する［Allenら，(1991)］；３）添加されたＰＥＧ脂質を全て取り込まない［Allenら，(1991)］；４）他のもの［Blume および Cevc，(1993)］ではなくいくつかのＰＥＧ脂質について［Allenら，(1991)］、取り込むことができるＰＥＧ−脂質の量に比較的低い限界（約７−１０mol％）を付加する。かくして、続くべき製造プロトコールが多少自由裁量であり、要求に依存する選択は、特定の用途のために重要であると思われる。非常に多量にＰＥＧ化されたリポソームを取込み経路によって製造することができるかについての議論に関して、以下の実施例で観察されるものに匹敵する腫瘍および皮膚保持についての結果を達成することは、必ずしも可能ではない。しかしながら、Cevcは、１００mol％までのＰＥＧ−ＤＳＰＥでリポソームを製造したこと（すなわち、予備形成したＰＥＧ−脂質の取込みを経由）を主張した。かくして、外部ＰＥＧ化に本発明を限定することは、本発明者らの目的ではない。ＰＥＧ−脂質の製造は、よく確立されている；適切なスキームは、以下のとおりである：わずかに加温しつつ、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（２０ mg、２７μmol）を乾燥クロロホルム／乾燥メタノール（５／２（vol／vol））３mlに溶解させる。乾燥クロロホルム／乾燥メタノール（５／２）１mlに溶解させたトレシル−モノメトキシＰＥＧ−５０００（１５０mg、２７μmol）を添加した。薄層クロマトグラフィーで検出可能なニンヒドリン陽性ＤＳＰＥスポットが消失するまで、炭酸ナトリウム（２９０mg）の存在下、５０℃で該混合物を撹拌した。遠心分離により炭酸ナトリウムを除去した後、ＭＰＥＧ誘導体を乾燥ジエチルエーテルから沈殿させ、減圧下で乾燥させた。試料の純度は、ＰＥＧ鎖のＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ単位のメチレン共鳴およびリン脂質のステアロイル鎖のメチレン共鳴の相対的積分を用いて¹Ｈｎｍｒによって決定した。実施例４および比較例腫瘍濃度および腫瘍：血液比についてのＰＥＧ修飾の影響表２に典型的な結果を示す。５mol％ＤＳＰＥのみを有するＰＥＧ化したＤＳＰＥ−ＤＳＰＣ：cholリポソームを除いては、全ての他の場合には、ＰＥＧ化したリポソームは、非ＰＥＧ化対照（ＰＥＧ−脂質を欠いているか、または、非ＰＥＧ化形態において誘導可能な脂質を含有するいずれかの対照）よりも増大した腫瘍濃度を示した。腫瘍：血液比は、実質的には、１以上であり、非ＰＥＧ化対照に対して増加するかまたは維持された。ＰＥＧによる置換の程度を簡単な組成物（ＤＳＰＣ：ＤＳＰＥ）のリポソームにおいて直接比較した場合、増加するＰＥＧ化ＤＳＰＥ含量を有するリポソーム投与された内容物の腫瘍濃度を改良する傾向があった（図１）。これらの結果に対照的に、他の結果は、ＰＥＧ化について腫瘍：血液比を下方に向けることを示す。さらにまた、全ての従前に発行されたＰＥＧ化の例（すなわち、非ＰＥＧ化対照が与えられなかったものを含む）は、表２に示す本発明の実施例よりも実質的に低い腫瘍：血液比を示した。２組の結果の間の主な差異は、ＰＥＧ化の程度にあるといことに注目すべきである。好評された例では、ＰＥＧ−ＰＥのmol％は、７.１mol％、５.０mol％、６.２５mol％および６.２５mol ％であった（表３の上から下まで）。５％ＰＥＧ化ＤＳＰＥについての表２の２つの例のうち１つでは、腫瘍：血液比は、非ＰＥＧ化対照に対して低下するが、全ての他の実施例（２０mol％以上のＰＥＧ化ＤＳＰＥを有した１以外の全て）では、腫瘍：血液比は、ＰＥＧ化についての同一のものよりも上昇するかまたは維持した。実施例５肝臓／脾臓由来の種々の程度にＰＥＧ化されたリポソームの排除とそれらの改良された腫瘍濃度との間の相互関係の欠落ＬＴＩＰＣＴ／ＵＳ９０／０６２１１ＰＥＧ−リポソームデザインについての関係は、肝臓および脾臓が排泄の主な臓器であり、ＰＥＧがこれらの臓器によるリポソームの摂取を損なうので、次のリポソームの血液中保持がリポソームによりエントラップされた化合物を腫瘍中に追い込むであろうということである。この方法でＰＥＧを用いる場合、一の簡単な推論は、腫瘍位置推定の改良（腫瘍薬物濃度に影響を及ぼすエントラップメントまたは他のメカニズムとは対照的に）は、肝臓および／または脾臓位置推定に反対に関係するであろうということである。対照的に、ＰＥＧが腫瘍中の保持を改良することなどの他の効果を有する場合、肝臓および脾臓からの排除に至適なＰＥＧの量は、腫瘍における最良の位置推定を与えるものと必ずしも同一である必要はないであろう。図２は、２４時間目の¹¹¹インジウムの肝臓濃度、脾臓濃度および腫瘍濃度に対するＤＳＰＥ−ＤＳＰＥリポソーム（実施例１におけると同様の外部ＰＥＧ化により製造した）中の種々のモル％のＰＥＧ化ＤＳＰＥの効果を比較する。この結果から、肝臓および脾臓からの最大排除は、４０mol％のＰＥＧ化ＤＳＰＥで観察されるが、腫瘍濃度は、段々に改良されたということが明らかである。肝臓については最大変化が５〜２０および２０〜４０％ＰＥＧ化ＤＳＰＥにあり、脾臓についてはほとんど全ての変化が２０〜４０％で生じるが、腫瘍については、少なくとも６０％まで、％ＰＥＧ化ＤＳＰＥの全ての変化について比較的規則的な進行があるということに特に注目すべきである。図３は、肝臓摂取および腫瘍摂取の間の低い相互関係を示し、図３は、脾臓摂取および腫瘍摂取の間の低い相互関係を示す。図３ａおよび図３ｂは、個々のマウスについての結果を示し、図２の結果を確認する。腫瘍濃度の改良のほとんど（例えば、腫瘍ｇ当たりの注射用量３〜８.５％）は、肝臓濃度または脾臓濃度の逆変化なしで生じる；これらは、共に、上記範囲にわたる腫瘍値の大部分についてｇ当たりの注射用量約１５％である。かくして、肝臓および脾臓のＲＥＳからの排除以外の因子は、ｇ当たりの注射用量約３％以上のリポソーム含量の腫瘍濃度の増加の原因にちがいない。この結果は、肝臓摂取および脾臓摂取の低下に影響を及ぼす因子がリポソームによりデリバリーされた化合物（この実施例では、ＮＴＡにキレート化した¹¹¹ インジウム）の改良された腫瘍濃度の原因となるものに関して等価ではないことを示す。実施例６エントラップされた内容物の最大腫瘍用量についてリポソームを選択する際の１時間および２４時間の潜伏能（latency）の低い予想値肝脾摂取の減少に加えて、ポリエチレングリコールなどのポリマーは、血清タンパク質の付着を低下させることも知られており（ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２６２を参照）、これは、他のものではなくいくつかの報告における血清中の増加した潜伏能（すなわち、改良された内容物の保持）に関連する。増加した潜伏能は、改良された循環期間に関連するので、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６１２２に具体的に開示されている「プッシュ（push）」原理に基づく腫瘍位置推定のために至適化すると、高い潜伏能を有するリポソームが選択されるであろう。図４ａ−ｃは、ＮＴＡにキレート化した¹¹¹インジウムを含有するリポソームの潜在物を示す。リポソームに存在するＰＥＧ化ＤＳＰＥのレベルとは無関係に（１ａおよび１ｂ）、０〜１００mol％ＰＥＧ化ＤＳＰＥを有するＤＳＰＥ：ＤＳＰＣリポソームは、４℃で、５０mＭリン酸２５０mＭスクロース（pＨ７.４）中に少なくとも１９日間貯蔵した場合、内容物があまり減少しないことを示した。セファロースＣＬ−４Ｂ２０mlシリンジバレルカラムを用いて、貯蔵前に負荷されたリポソームから遊離¹¹¹インジウム（および過剰のＴＭＰＥＧ）を除去した。所定時間貯蔵した後、リポソームによりエントラップされた¹¹¹インジウムの漏出は、約８cm走行したワットマン（Ｗhatman）４濾紙および適切なバッファー（リポソームpＨに依存する）のペーパークロマトグラフィーを用いて評価した。上部および下部は、¹¹¹Ｉnとみなされた。潜伏能は、０時でのフリーカウントについて補正された。２２日貯蔵した後、非ＰＥＧ化リポソームについて、同様の結果が得られた（図４ｃ）。ＴＭＰＥＧおよびバッファー（５０mＭホウ酸２５０mＭスクロース（pＨ９.３））を除去せずに４９日間の¹¹¹インジウム負荷ＰＥＧ化リポソーム調製物の貯蔵によっても、ＴＭＰＥＧが貯蔵前に除去されたＰＥＧ化リポソームについて判明したものと同様の適度な内容物の減少が得られた（図４ｄ）。これらのリポソームをクエン酸化新鮮凍結血漿に１〜２４時間暴露した場合、ＰＥＧ化ＤＳＰＥの量と潜伏能の低下との間に明らかな関係があった（図５ａおよび５ｂ）。驚くべきことに、２４時間血漿暴露の後の潜伏能と２４時間¹¹¹インジウムの腫瘍濃度との間にはほぼ反対の関係があった（図６ａ）。放出したＩ n／ＮＴＡ複合体は、インジウムを血液タンパク質に移動させ、したがってリポソームの特徴であるＲＥＳ捕獲を回避すると予想することができるが、全リポソーム内容物と等価のＩn／ＮＴＡ複合体の注射により、２０％ＰＥＧ化ＤＳＰＥについて判明したものよりも高かったが、高度なＤＳＰＥ置換について判明したものよりも低かった２４時間目の血液レベルを生じた（図６ｂ）。同様に、肝臓については、Ｉn／ＮＴＡは、全てのリポソーム試料よりも低い肝臓摂取量を与えた（図６ｂ）。かくして、４０〜１００％ＰＥＧ化ＤＳＰＥを含有するリポソームについて２４時間目のイン・ビトロでの潜伏能の顕著かつ類似の低下にかかわらず、リポソーム被包化の効果は、なお顕著であった。さらに、リポソームから失われた場合に迅速に取り除かれることが知られている種々のリポソーム内容物（例えば、¹²⁵Ｉ−ＴＩ）について、増強された腫瘍濃度および腫瘍：血液比＞１に関する同様の結果が得られた（下記実施例９で説明する図１８を参照）。この逆の関係は、予想されないので、不一致の起こり得る人工的な供給源が要求された：第１に、マウス血漿とヒト血漿との間の差異が不一致、すなわち、マウス血漿が漏出のあまり有効ではない刺激であったことを説明することができたか（図７）、第２に、ヒト血漿中の完全なまたは他の熱不安定な因子が原因であるか（図８）。図７は、クエン酸化したヒト血漿についての潜伏能結果（図５ａおよびｂから）を１および２４／２５時間ヘパリン化したマウス血漿に暴露したリポソームについての潜伏能と比較する。マウス血漿は、特に４０−１００％ＰＥＧ化ＤＳＰＥで明らかな２４／２５時間目の潜伏能をあまり低下させないが、ヒト血漿結果と同様にマウス血漿結果は、腫瘍¹¹¹インジウム濃度との逆の関係をなおも示しており、かくして、血漿により誘発された潜伏能の低下が腫瘍薬物濃度に関してＰＥＧ−リポソーム行動の信頼性のある予言者ではないことを示している。図８は、クエン酸化したヒト血漿についての潜伏能結果（図５ａおよび５ｂ）を、５６℃で４５分間加熱処理して完全なかつ他の熱不安定な脂質移動因子を除去したクエン酸化したヒト血漿に暴露したリポソームについての潜伏能（従前に報告された）と比較する。マウス血漿について、４０−１００％ＰＥＧ化ＤＳＰＥリポソームについて明らかなように２４時間のインキュベーション後に多少異なったが、腫瘍¹¹¹インジウム濃度との逆関係がなおもある。腫瘍薬物濃度の良好な予言者として作用する１および２４／２５時間潜伏能評価の不足についての１つの可能な説明は、循環の最初の１時間前に腫瘍への分布が充分に生じることである。潜伏能の減少がリポソームの腫瘍中への内向きフラックスの速度に対して比較的遅い場合、潜伏能の遅い低下は、あまり影響を有しておらず、したがって、前記で観察された不一致を説明する。したがって、潜伏能と血漿暴露との間の一時的な関係は、２０mol％ＰＥＧ化ＤＳＰＥについてリポソームを用いて探究された。図９は、新鮮凍結クエン酸化血漿への２〜６０分暴露の影響を示す。２分のみで、遊離された¹¹¹インジウムが初期のエントラップされた物質の４２％であり、これは、１時間後に５３％に上昇し、血漿により誘発された減少のほとんどが＜５２分に生じることを意味する。かくして、潜伏能が非常に初期の時点で測定される場合でさえ、１時間測定と同様の結果が得られる。図１８ａ（下記）の検査は、＜２分以内の腫瘍への分布が腫瘍薬物濃度利益の説明にならないことを示す。全血もまた、血漿よりもあまり顕著な潜伏能に対する効果を有しないことが報告されており、これは、イン・ビボ／イン・ビトロ不一致を有効な説明することができた。しかしながら、３７℃で１時間、ヘパリン化マウス血液３００μlと一緒にインキュベートした脂質２０μgと等価なリポソーム（２０mol％）を含有するＰＥＧ化ＤＳＰＥを用いると、エントラップされたインジウムの５６.４％が放出された。比較可能な血漿への１時間暴露において、２２.８％¹¹¹Ｉnは、ヒトクエン酸化新鮮凍結血漿について放出され、マウス血漿については、５.９％、熱不活化ヒト血漿については４３.６％であり、かくして、血漿／血液差異は、イン・ビボ／イン・ビトロ不一致を説明する見込みがない。血清／血漿により誘発された潜伏能の低下の基礎（すなわち、脂質組成物またはＰＥＧ化のいずれのためであるか）を確かめるために、非ＰＥＧ化およびＰＥＧ化リポソームの潜伏能を比較した。図１０は、ＰＥＧ化およびＤＳＰＥ含有リポソームをそれらの非ＰＥＧ化相手と比較する（０％ＤＳＰＥリポソームの潜伏能は、破線によって示す）。１時間および２４時間インキュベーション後に明らかなように潜伏能に対するＤＳＰＥの濃度依存性効果があった。ＤＳＰＥの全ての濃度で、潜伏能の低下は、非ＰＥＧ化およびＰＥＧ化例において顕著には異ならず、ＰＥＧが潜伏能の低下に対してあまり影響を及ぼさないことを示した。この結果は、約２％ＰＥＧ−ＰＥからの効果を示した（取り込まれたＰＥＧ−脂質を用いる）他のもの［BlumeおよびCevc，(1993)］と矛盾するが従前の発見と同様である。血漿により誘発された潜伏能の低下と腫瘍¹¹¹Ｉn濃度との間の驚くべき逆関係にもかかわらず、他の正常な臓器とは対照的にＰＥＧ化ＤＳＰＥ含量が¹¹¹Ｉn含量の排除（肝臓および脾臓）または最も適度な増加（心臓、肺、結腸、筋肉、皮膚）と関係しているので、リポソーム内容物の多少の減少がイン・ビボで生じていたという証拠があった。腎臓は、より顕著に増強された¹¹¹Ｉn含量を示した。この増強された腎臓¹¹¹Ｉn含量は、マウス血漿によって放出された¹¹¹インジウムの量とほぼ相互に関係した（図１１）。実線は、症状の緩和を示し、点線の曲線は、９５％信頼区間を示す。しかしながら、全リポソーム内容物と等価な注射した遊離¹¹¹Ｉn／ＮＴＡ複合体は、６０％および１００％ＤＳＰＥを含有するＰＥＧ化リポソームまたはＰＥＧ化リポソームよりも低い２４時間目の腎臓¹¹¹Ｉn レベルを生じた（図１２）。したがって、¹¹¹インジウムの漏出がイン・ビボで明らかに生じていたので、一の関係は、潜伏能と腫瘍位置推定との間で観察された逆関係が¹¹¹インジウムの減少、次なる血漿タンパク質への結合および後者の腫瘍への溢出のためであることである。しかしながら、腫瘍ｇ当たりの注射用量％は、２０％、６０％および１００％ＤＳＰＥを含有するＰＥＧ化リポソームにおいて徐々に増加したが（図１を参照）、遊離¹¹¹インジウム／ＮＴＡの等価用量（すなわち、漏出のために利用可能な用量）は、１００％ＤＳＰＥリポソームについての腫瘍濃度の５７ .５％および６０％ＤＳＰＥリポソームについての８２.０％を与えたが、２０％ＤＳＰＥリポソームの１３７％であった（最初の２つの調製物よりも非常に高い潜伏能を有した）。かくして、¹¹¹インジウムの漏出は、観察された逆関係を説明することができない。潜伏能の迅速な低下は、多くのリポソーム形成のために本質的に望ましくないので、脂質組成物の変化は、これを軽減するために探究される。しかしながら、至適化が腫瘍濃度および腫瘍：血液または腫瘍：血液比によっても余儀なくされることを正しく認識することは、重要である。脂質処方のいくつかの変化は、血清／血漿における潜伏能に対する有益な影響を有することが知られており、コレステロールの取込みが広く用いられている。しかしながら、これは、必ずしも改良された腫瘍濃度を導くわけではない（各々、注射の約２４時間後の腫瘍ｇ当たりの注射用量１.７０±０.２７および２.３７±０.３６を投与した図１のＰＥＧ化ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ（５：９５mol％）と比較してＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：コレステロール（５：６２：３３mol％）を含有するＰＥＧ化リポソームを利用する表２の例を参照）。実施例７肝臓、脾臓および腎臓以外の正常な組織における生体分布に対するＰＥＧ化ＤＳＰＥ含量の影響生体分布研究は、実施例１の記載にしたがって調製したＤＳＰＥ：ＤＳＰＣリポソームを用いて行った。分布プロフィルを、血液レベルと比較した（全ての所定濃度は、２４時間目である）図１３は、組織濃度（左のパネル）および組織：血液比を示す。組織濃度は、臓器の血液含量について補正されなかった。２４時間目の¹¹¹インジウムの濃度は、ＤＳＰＥの増加する量を含有するＰＥＧ化リポソームについて全ての臓器において上昇した（左側のパネル）。全ての臓器において、２０mol％ＤＳＰＥまで組織：血液比を低下させる傾向があり（右側のパネル）、血液レベルの増加は、組織レベルの平行増加を伴わなかったこと、したがって、ＰＥＧ−脂質がこれらの組織中への進入ならびに肝臓および脾臓に対するその効果をわずかに減少させていたこと（または、「プッシュ」原理がこれらの正常な組織において優勢的であること）を意味する。４０mol％以上を有するＰＥＧ化リポソームは、この減少した組織：血液比を維持した（例えば、肺）か、または、わずかな増加を示したが、非ＰＥＧ化０％ＤＳＰＥ対照よりも決して多くはなかった。実施例８ＰＥＧ化反応およびバッファー交換後のインジウム負荷および減少 ¹¹¹インジウム負荷をＰＥＧ化の前に行うと、ＤＳＰＥ含量は、エントラップされた¹¹¹Ｉnの量に対して有意な影響を及ぼさなかった（図１４）。pＨ９.３のホウ酸バッファーにおいて１６６mg／mlのＴＭＰＥＧを用いる反応方法を用い、次いで、注射／使用の前に該バッファーを交換すると、ＤＳＰＥ濃度に依存して変化した¹¹¹Ｉnの実質的な減少があった（図１５）。曲線下面積評価は、ＰＥＧ化ＤＳＰＥが複雑な効果を及ぼしたことを示し、これは、¹¹¹Ｉn減少を低下させることを意味する（図１６）。しかしながら、リポソーム、ＴＭＰＥＧ、ホウ酸バッファー反応混合物が４９日間にの貯蔵後にその¹¹¹Ｉnの８０％以上をなおも保持していたので（図４ｄを参照）、この潜伏能の大きな低下は、ＰＥＧ化の間生じなかった。かくして、バッファーが交換されると、¹¹¹Ｉnの減少は、９.３から７.４へのpＨ変化のためであると思われる。これを確認するために、pＨ９. ３で形成した非ＰＥＧ化リポソームをバッファー交換に暴露し、各々、２０、６０および１００mol％ＤＳＰＥリポソームについてのそれらの内容物の３３.９％、２.６％および１.７％だけを保持した(この¹¹¹Ｉn減少が、各々、３８.４％、９.３％および７.４％保持した等価なＰＥＧ化例よりも多いことに注目する)。ＰＥＧ化の不均一性がある場合に、より多量にＰＥＧ化されたリポソームが特に高いＤＳＰＥレベルの内容物の減少に抵抗すると思われるので、このpＨ−変化により誘発された溶解に対する示差感度は、ＰＥＧ化の程度の評価に関して有効に重要である。pＨ変化により誘発された漏出は、脂質小胞化（脂質が高いpＨを有する側で二重層から発芽する場合）に基づく。ＤＳＰＥが約８０℃で六面構造II を形成するが、この温度は、減少した水和化（ＰＥＧから）およびpＨの低下により低下し、ＰＥＧ−ＤＳＰＥは、六面構造IIを形成することができないので、六面構造IIの形成は、排除することができない（５nmコアは、巨大なＰＥＧヘッドグループを適合させるのが困難である）。いずれかのシナリオについて、薄層クロマトグラフィーに基づくＰＥＧ−脂質評価は、内容物を有するリポソームのＰＥＧ化状態の過小評価出あり、この行動は、イン・ビボでモニターされる。実施例１におけるpＨ９.３の選択は、以下のことに基づいていた：１）増強されたＰＥＧ化率の従前の観察；２）ホスファチジルエタノールアミンの正味の負の変化を生じさせること、したがって、リポソームのＰＥＧ誘発凝集の可能性を減少させようとすることの利益。しかしながら、凝集は、少量のＴＭＰＥＧの滴下を用いることによって減少させることができ、より延長されたＰＥＧ化期間を用いて低いpＨでのＰＥＧ化の遅延を克服することができる。実施例９腫瘍および皮膚は他の臓器よりも高い組織：血液比の増加を示す２１mol％ＤＯＰＥを有するＰＥＧ化ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥリポソームを用いると、循環時間の最適な延長が観察された（図１７）。¹²⁵Ｉ−チラミニルイヌリン濃度対時間および腫瘍：血液比のプロット（図１８ａおよびｂ）の比較は、皮膚および腫瘍が、非ＰＥＧ化対照に対して腫瘍：血液比の最も高い増加を示すことを示した。有意には、いくつかの抗腫瘍剤が心臓毒性であると仮定すれば、心臓：血液比の有意な変化があった。１−１４４時間のＡＵＣ（図１９ａ）の計算は、非ＰＥＧ化リポソームについて、腫瘍についてのＡＵＣが腎臓、皮膚および肺についてよりも低かったが、ＰＥＧ化後には、腎臓ＡＵＣ_1-144は、腫瘍よりも多かった（腎臓：腫瘍比は、３.１６：１から１.４９：１に減少した；図１９ｂ）。ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣリポソームは、また、腫瘍：血液比の増加と皮膚：血液比の増加との間で同様の関係を示し、該効果がリポソーム中のＰＥＧ化ＤＳＰＥの濃度に関係したことを示した。この実験では、ＰＥＧが循環時間を有しないという影響を相殺するために（したがって、生体分布の他の特徴に対するＰＥＧ濃度の効果を優先させるために）、５％ＤＳＰＥを有するＰＥＧ化リポソーム３３mo l％は、コレステロールおよび６２％ＤＳＰＣを含有したが、４０mol％ＤＳＰＥを有するＰＥＧ化リポソームは、ＤＳＰＣのみを含有した。この手段により、２２〜７２時間にわたって同様であった血液排除曲線を作成した。図２０ａおよびｂは、５mol％ＤＳＰＥ＋コレステロールを有するＰＥＧ化リポソームを、４０m ol％ＤＳＰＥを有するものと比較する。さらなるＰＥＧ−ＤＳＰＥ含量は、腫瘍：血液比および皮膚：血液比の勾配の増加を生じるが、他の臓器における比率を増加させず、肝臓および脾臓における比率を減少させる。筋肉における明らかな増加および肺比率の減少は、矛盾のない発見ではなかった（図１８ａおよびｂを参照）。これらの結果は、血液クリアランス率の最小変化についてさえ（あまり多くないＰＥＧ化リポソームにおけるコレステロールの存在を補正することによる）、ＰＥＧは、腫瘍：血液比および皮膚：血液比に影響を及ぼす。これは、「プッシュ」および「トラップ」原理が独立して操作するというさらなる証拠を提供する。表４は、種々のリポソーム処方の範囲について血液および皮膚結果ならびに皮膚：血液比を示す。これらの発見は、本発明のＰＥＧリポソームに関する腫瘍組織および皮膚の行動におけるいくつかの類似性を示す。かくして、リポソーム調製物は、化合物の皮膚への選択的なデリバリーにおいて有用性を有する。実施例１０腫瘍：血液比に対するリポソーム脂質組成物の影響従来技術では、「プッシュ」原理について至適化すると、ＰＥＧを添加して血漿半減期を延長させただけではなく、脂質組成物をこの目的について選択した。本発明のリポソームは、（対照に対して増加または維持された腫瘍：血液比によって行われた腫瘍内での増加した濃度によって明らかにされたように）増強された腫瘍エントラップメントに関する以外は、この方法で至適化されなかった。また、前記腫瘍：血液比のモデル由来の分析から、基礎的なリポソーム処方は、独自に（すなわち、ＰＥＧの添加前に）良好な腫瘍エントラップメントを達成し、次いで、適切なＰＥＧ化は、腫瘍濃度および腫瘍：血液比を共にさらに増強するであろうということに注目すべきである。基礎的なリポソームがあまり良くない腫瘍エントラップメント特性を有し、ＰＥＧ化が腫瘍エントラップメントの有意な改良を生じるのに不充分である場合にのみ、リポソームの腫瘍濃度が増加するので、腫瘍：血液比は、低下するであろう。図２１は、注射の約２４時間後に血液および腫瘍レベルに対する種々の脂質組成物の効果を示す。種々の脂質組成物についての腫瘍および血液濃度の有意な差異があるのは、明らかである（Ａ＝ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ５：６２：３３mol％；Ｂ＝ＤＯＰＥ：ＤＯＰＣ２１：７９mol％；Ｃ＝ＤＳＰＣ；Ｄ＝ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ２０：８０mol％；Ｅ＝ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ６０：４０mol％；Ｆ＝ＤＳＰＥ）。全ての腫瘍：血液比が単一よりも高いことに注目すべきである。リポソーム内の内容物のタイプもまた、その結果に関係があった。組成物ＥおよびＦは、血漿への暴露により潜伏能を著しく低下させた（実施例６を参照）。これらの調製物（および他のもの、図２１におけるＡ、ＣおよびＤ）は、ＮＴＡにキレート化した¹¹¹インジウムを含有していた。ＮＴＡは、比較的弱いキレート化剤であり、内容物の漏出は、漏出した¹¹¹インジウムのＮＴＡから血漿タンパク質（例えば、アルブミン）への移動を生じることが知られている。これは、比較的長い循環時間を¹¹¹インジウムに与え、アルブミンは、腫瘍へ溢出することができることが知られているので、この効果は、腫瘍：血液比の分析を複雑にするであろう。ＥおよびＦは、イン・ビトロで血漿への２４時間暴露についてそれらの内容物の９３.２％および９１.９％を失うので（図１０を参照）、リポソーム内容物と等価な遊離ＮＴＡ−¹¹¹インジウムの量についての結果（縞入り）が比較のために与えられる。¹¹¹インジウムの漏出（前記図９において主に血漿への暴露の最小の２分以内に生じることを示した）が完全には血液レベルの原因となり得ないこと、すなわち、リポソーム腫瘍エントラップメントが調製物Ｆの非常に低いイン・ビトロ潜伏能結果にもかかわらず２４時間レベルを増加させたことに注目する。この観察の一の重要な推論は、このタイプの行動を有する内容物について、潜伏能の低下は、リポソームからの漏出の後に迅速に排除される内容物についてほど重要ではないことである。表２との比較により（同一実験内では比較されず、したがって、差異の有意さの統計学的分析をさせないが）、内容物がＮＴＡ−¹¹ ¹ インジウムである場合にＰＥＧ化の影響が組成物Ｅについてあまり顕著ではないことが明らかであり、ＰＥＧの影響が顕著であり、潜伏能の低下があまり著しくない場合の組成物Ｄとは反対に組成物Ｆについて低下したかもしれない（両方の場合に潜伏能の低下が非常に高い場合）ことに注目すべきである。本当であるならば、ＰＥＧ化の影響のこの明かな低下は、おそらく漏出した¹¹¹インジウムの影響およびそのアルブミンに付着する傾向によるものであろう。実施例１１ ¹⁹Ｆ−ＮＭＲによるＴＭＰＥＧの加水分解速度および他の競合する副反応の評価ＰＥＧ化反応の間、ＴＭＰＥＧの加水分解速度および他の競合する副反応をモニターすることは、重要である。完全なＰＥＧ化のために必要とされる反応時間の期間が延長されると（例えば、＞２時間）、水溶液中のＴＭＰＥＧ加水分解が比較的迅速に生じるので、これは、重要な問題である。図２２は、ＴＭＰＥＧ（ジメチルスルホキシド中で実施例１および２で用いた調製物（ｄ６））の¹⁹Ｆ− ｎｍｒを示す。２つの三重項が観察され、−６０.７７５２ppmおよび−６０. ８８５６ppmに集中した。前者は、エステル結合トレシル基に対応し、後者は、遊離トリフルオロエタンスルホン酸（ＴＦＥＳＡ）に対応する。加水分解は、p Ｈに依存すると思われ、したがって、用いた各バッファー系は、独立して評価しなければならない。１）２５０mＭスクロースを含有する５０mＭホウ酸バッファー、pＨ９.３；２）２０mＭＨＥＰＥＳ、１４５mＭＮaＣl、pＨ７.４、加水分解に暴露すると、エステル結合トレシル基についての三重項の漸減があった（図２３）。しかしながら、ＴＦＥＳＡ以外の種が形成された。等価なＤＭＳＯ調製物からの値をシフトした−６２.５ppm（ＴＭＰＥＧ）および−６３.５ppm（ＴＦＥＳＡ）の２つの三重項に加えて、約−７５ppmおよび−１２０ppmにもピークがあった（図２４）。−７５ppmでピークを生じる種の性質は知られていないが、バッファーへの暴露後に変化しないままであると思われた調製物においてわずかな汚染物質があることが明らかである。対照すると、−６３.４および−１２０ppmで該種は、経時変化した。−７５ppmシグナルに正規化されたシグナルの総合は、−６２.５pp mで該種が経時的に低下し、一方、−１２０ppmで増加したことを示した；−６３ .５ppmで該種、遊離ＴＦＥＳＡは、比較的変化しなかった。該変化は、pＨ７.３（図２５ｂ）よりもpＨ９.３（図２５ａ）の方が非常に速く生じた。おそらく、−１２０ppm種についての説明は、ＴＭＰＥＧの副反応によって放出された遊離フッ化物イオンであるということである。この結果の推論は、ＴＭＰＥＧが比較的迅速に失われ、かくして、反応混合物は、高レベルのＰＥＧ化を得るために添加された新鮮なＴＭＰＥＧの一連のアリコットを有することが必要であるということである。低いpＨで、以下の反応： −ＣＨ₂ＯＳＯ₂ＣＨ₂ＣＦ₃＋Ｒ−ＮＨ₃→ −ＣＨ₂ＮＨ−Ｒ＋ＨＯＳＯ₂ＣＨ₂ＣＦ₃ が優先するが、高いpＨでは、別の反応（−Ｏ−ＳＯ₂−結合部分を生じる）： −ＣＨ₂ＯＳＯ₂ＣＨ₂ＣＦ₃＋Ｒ−ＮＨ₂＋３ＮaＯＨ → −ＣＨ₂ＯＳＯ₂ＮＨ−Ｒ＋ＣＨ₃ＣＯＯＨ＋３ＮaＦ＋Ｈ₂Ｏが優先する。実施例１２ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥリポソームのＰＥＧ化は¹²⁵Ｉ標識ＴＩおよび¹¹¹Ｉnの両方のデリバリーのための増加した腫瘍：血液比を生じる種々のリポソーム内容物の漏出の後の行動の差異を仮定すると、種々の内容物を有する同一脂質処方を研究するのが重要である。２つの極限実験は、チラミニルイヌリン（ＴＩ）およびＮＴＡにキレート化した¹¹¹インジウムである。上記に概要記載したとおり、前者は、小さく、リポソームから漏出すると腎臓排泄を介して迅速に除去される。対照的に、¹¹¹インジウムは、リポソーム分布後にＮＴＡから血漿または血管外タンパク質に移動する。これが本発明者らの選択基準に影響を及ぼす方法を評価するために、リポソーム内容物のこれら２つのタイプを同一リポソームにおいて評価した。血液薬物動態学、腫瘍生体分布および腫瘍：血液濃度比を、対照およびＰＥＧ化ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥ（７９：２１mol％）リポソームに負荷した¹²⁵Ｉ標識ＴＩおよび¹¹¹Ｉnについて分析した。¹²⁵Ｉ標識ＴＩリポソームについて負荷した対照ＰＥＧ化ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥリポソームの調製は、実施例２に記載した。 ¹¹¹Ｉnについて負荷した対照およびＰＥＧ化ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥリポソームの調製は、以下のとおりであった：Ｈepes ２０mＭ pＨ７.４、塩化ナトリウム１４５mＭおよびＮＴＡ１mＭ中の脂質懸濁液（１０mg／ml）の押出しによって、イオノフォアＡ２３８１７（脂質mg当たり１.０８mg）を含有するＤＯＰＣ：ＤＯＰＥ（７９：２１mol％）を調製した（該脂質懸濁液は、実施例２におけると同様に、撹拌し、次いで、６５℃まで２分間加温および１分間撹拌のサイクルを数回行い、次いで、冷凍および解凍のサイクルを５回行い、次いで押し出すことによって得られた）。次いで、バッファーを、ＰＤ−１０カラムを用いてＨepes ２０mＭ pＨ７.４、塩化ナトリウム１４５mＭと交換した。¹¹¹Ｉn負荷については、６５℃で３０分間、３mg／mlのリポソーム１.２mlを０.３mＣiの¹¹¹Ｉnと一緒にインキュベートした。¹¹¹Ｉn負荷リポソームをＰＤ−１０カラム中のＧＰＣによって単離した。¹¹¹インジウムのリポソームへの取込みは、実施例６に記載したと同様にペーパークロマトグラフィーによって示されるように約１００％であった。次いで、¹¹¹Ｉnを負荷した押し出されたリポソームを、実施例２の記載と同様に、塩化ナトリウム１４５mＭを含有するＨepes ２０mＭ pＨ７.４中、室温で２時間、ＴＭＰＥＧと反応させることによってＰＥＧ化した。図２６は、ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥ（（７９：２１）mol％）リポソーム中にエントラップされた¹¹¹Ｉnおよび¹²⁵Ｉ標識ＴＩについての血液薬物動態学および腫瘍生体分布を示す。¹¹¹Ｉnについての血液レベルは、全ての時点で、¹²⁵Ｉ標識ＴＩについての血液レベルよりもわずかに大きかった。腫瘍生体分布は、２つの内容物について非常に異なっていた：¹¹¹Ｉnのレベルは、それらがプラトーに達するまで注射後の時間に経時的に上昇するが、¹²⁵Ｉ標識ＴＩのレベルは、駐車後の時間に経時的に減少した。この行動は、リポソームビヒクルからの内容物の少なくとも１つの漏出と矛盾がない。表５は、対照およびＰＥＧ化ＤＯＰＣ：ＤＯＰＥリポソーム中にエントラップされた¹¹¹Ｉnおよび¹²⁵Ｉ標識ＴＩについての注射後２４時間目の血液および腫瘍濃度ならびに腫瘍：血液濃度比を示す。両方の内容物について、腫瘍：血液濃度比は、対照リポソームについてよりもＰＥＧ化リポソームについての方が高かった（「トラッピング」原理が作用していたことを示す）。しかしながら、内容物のタイプは、腫瘍：血液比の絶対値に影響を及ぼしたが、両方の内容物は、腫瘍：血液比の同様の比例した増加を示す。かくして、ここで用いた内容物のいずれについても、リポソームの「トラッピング」を示すための試験基準は、あまり影響しなかった。チラミニルイヌリンについての腫瘍中の低いレベルを仮定すると、これは、リポソームの最終結果についてのより厳格な試験を提供し、好ましい評価方法である。しかしながら、デリバリーさせようとする内容物が¹¹¹Ｉnと同様の行動を有する場合、問題のリポソームを介して実際にデリバリーしようとする内容物がより適切である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者フィッシャー，デレクイギリス、エヌダブリュー３・２イーゼット、ロンドン、フリート・ロード、ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー

Claims

【特許請求の範囲】１．充実性腫瘍または皮膚に血流を介して投与するための診断的または治療的に有効な薬剤の組成物であって、該組成物が脂質含有多分子構造を含有してなり、該薬剤が該脂質含有多分子構造中に優先的に存在し、該脂質含有多分子構造が共有結合した親水性ポリマー部分を有する１以上の疎水性本体を含有してなり、該脂質含有多分子構造の物理的形態、疎水性本体の性質、親水性ポリマー部分の性質、血流に暴露された非誘導疎水性本体に対するポリマー含有疎水性本体の比率、ならびに２つ以上の疎水性本体がある場合のこれら疎水性本体の相対的な割合が全て以下のように選択されることを特徴とする組成物：（ｉ）該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射について、注射後２４時間目および４８時間目のいずれかまたは両方で達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率が一単位よりも大きくなるように、（ii）該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射後２４時間目および４８時間目に達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率が、第１対照生成物が疎水性本体の親水性ポリマー修飾を欠いていること以外は該組成物と同一である第１対照生成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射後の同時間に達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率よりも有意には低くならないように、および（iii）該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合以外は、該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、第２対照生成物が親水性ポリマー修飾を欠いており、かつ、該組成物中におけるポリマー修飾によって誘導化される疎水性本体を欠いている第２対照生成物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度よりも高くなるように、または、該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合は、該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、前記定義と同じである第１対照生成物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度よりも高くなるように。２．脂質含有多分子構造がリポソームを含有してなる請求項１記載の組成物。３．共有結合した親水性ポリマー部分がポリエチレングリコール部分である請求項１または２記載の組成物。４．診断的または治療的に有効な薬剤が、少なくともリポソームの外面上でホスファチジルエタノールアミン分子に共有結合したポリエチレングリコール部分を有しているリポソーム中に閉じ込められている請求項３記載の組成物。５．ポリエチレングリコール部分が、２,２,２−トリフルオロエタンスルホニルポリエチレングリコールの誘導体でホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルエタノールアミンを含有するリポソームを処理することによって得られる非生物分解性共有結合によって結合されている請求項４記載の組成物。６．誘導体が２,２,２−トリフルオロエタンスルホニルポリエチレングリコールのモノメチルエーテルである請求項５記載の組成物。７．親水性ポリマーが分子量２５０〜１２,０００のポリエチレングリココールである請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。８．診断的または治療的に有効な薬剤が皮膚疾患または障害を診断または治療するための薬剤である請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物。９．診断的または治療的に有効な薬剤が充実性腫瘍を診断または治療するための薬剤である請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。１０．薬剤が腫瘍造影剤である請求項９記載の組成物。１１．薬剤が細胞増殖抑制剤または細胞障害剤である請求項９記載の組成物。１２．脂質含有多分子構造が組成物中に診断剤または治療剤の合計量の少なくとも半分を含有するリポソームを含有してなる請求項１〜１１のいずれか１項記載の組成物。１３．２４〜４８時間目に達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率が、第１対照生成物により同じ時間で達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率よりも高い請求項１〜１２のいずれか１項記載の組成物。１４．投与後２４〜４８時間の間じゅう、組成物の投与によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度が血中濃度よりも高いままである請求項１３記載の組成物。１５．人体または動物体に行った診断または治療の方法における使用のための請求項１〜１４のいずれか１項記載の組成物。１６．人体または動物体における皮膚疾患もしくは障害または充実性腫瘍の診断薬または治療薬の製造における請求項１〜１５のいずれか１項記載の組成物の使用。１７．患者に請求項１〜１６のいずれか１項記載の組成物の有効な非毒性量を投与することを特徴とする、ヒトまたは動物患者における皮膚疾患もしくは障害または充実性腫瘍の治療方法または診断方法。１８．さらに、診断薬または治療薬のデリバリーを保証するための皮膚または腫瘍の全身または局所治療の工程を含んでなる請求項１７記載の方法。１９．該さらなる工程が、構造を漏りやすくまたは溶融しやすくなるように熱の局所適用または脂質含有多分子構造を分解する薬剤の局所もしくは全身投与を含んでなる請求項１８記載の方法。２０．充実性腫瘍または皮膚に血流を介して投与するための診断的または治療的に有効な薬剤の組成物の製造方法であって、該組成物が脂質含有多分子構造を含有してなり、該薬剤が該脂質含有多分子構造中に優先的に存在し、該脂質含有多分子構造が共有結合した親水性ポリマー部分を有する１以上の疎水性本体を含有してなり、該方法が脂質含有多分子構造の物理的形態、疎水性本体の性質、親水性ポリマー部分の性質、血流に暴露された非誘導疎水性本体に対するポリマー含有疎水性本体の比率、ならびに２つ以上の疎水性本体がある場合のこれら疎水性本体の相対的な割合を以下のように選択することを特徴とする方法：（ｉ）該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射について、注射後２４時間目および４８時間目のいずれかまたは両方で達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率が一単位よりも大きくなるように、（ii）該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射後２４時間目および４８時間目に達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率が、第１対照生成物が疎水性本体の親水性ポリマー修飾を欠いていること以外は該組成物と同一である第１対照生成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射後の同時間に達成された薬剤の血中濃度に対する腫瘍中濃度の比率または血中濃度に対する皮膚中濃度の比率よりも有意には低くならないように、および（iii）該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体物の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合以外は、該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、第２対照生成物が親水性ポリマー修飾を欠いており、かつ、該組成物中におけるポリマー修飾によって誘導化される疎水性本体を欠いている第２対照生成物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度よりも高くなるように、または、該組成物が実質的に１種以上の疎水性本体（ここで、各種は、親水性ポリマー部分による誘導化に影響されやすく、疎水性本体の種の各々の少なくとも一部は、親水性部分によって誘導化される）からなる脂質含有多分子構造に関連する薬剤からなる場合は、該組成物の、モデル充実性腫瘍を有しているのが適切である動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度が、注射後２４時間目および４８時間目では、前記定義と同じである第１対照生成物の動物への静脈内注射によって達成された薬剤の腫瘍中濃度または皮膚中濃度よりも高くなるように。２１．請求項２〜１５のいずれか１項記載の組成物の製造のための請求項２０記載の方法。