JPH11502844A

JPH11502844A - Peptides with growth promoting properties

Info

Publication number: JPH11502844A
Application number: JP8529451A
Authority: JP
Inventors: バツクウオルター，ブライアン・リー; シー，ホング−ミング; ワング，ボスコ・シヤング
Original assignee: アメリカン・サイアナミド・カンパニー
Priority date: 1995-03-31
Filing date: 1996-03-15
Publication date: 1999-03-09
Also published as: WO1996030405A1; EP0819137A1; HUP9801337A2; KR19980703438A; PL322585A1; BG101927A; CA2216755A1; MX9707433A; AU5422596A

Abstract

(57)【要約】ブタのソマトトロピン（ｐＳＴ）の対応する領域を模し、しかもｐＳＴの活性を強化し、かつ温血動物の成長を促進する、良く明確にされた２次構造、好ましくはヘリックスコンホメーションを有するペプチドが記載されている。これらのペプチドは、その中にアミノ酸配列Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｘａａ（配列番号１）を含み、ここでこの配列は天然のｐＳＴとは異なり、ならびに配列中の必須アミノ酸の位置は３つのアミノ酸によりシフトされ、ヘリックスに沿ってほぼ１回転を表し、その中にアミノ酸Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ（配列番号１８）を含み、そしてその配列は天然のｐＳＴ配列とは異なる。 (57) [Summary] Peptides that mimic the corresponding region of porcine somatotropin (pST) and that have a well-defined secondary structure, preferably a helical conformation, that enhance the activity of pST and promote the growth of warm-blooded animals Is described. These peptides contain therein the amino acid sequence Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Val-Xaa-Xaa (SEQ ID NO: 1), where The sequence differs from the native pST, and the positions of the essential amino acids in the sequence are shifted by three amino acids, representing approximately one revolution along the helix, in which the amino acids Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Leu -Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Val (SEQ ID NO: 18), and the sequence differs from the native pST sequence.

Description

【発明の詳細な説明】成長促進特性を持つペプチド発明の分野本発明は、ブタのソマトトロピン活性を強化させ、そして温血動物の成長を促進する抗体を導き出すペプチドに関する。発明の背景ブタのソマトトロピン(ｐＳＴ)は、多様な生物活性を有する191アミノ酸長の下垂体ホルモンである（引用文献１）。このホルモンは４つの非−平行α-ヘリックスに整列している一本鎖のポリペプチドとして存在する（２）。各α-ヘリックスは、１回転あたり3.6個のアミノ酸を含む。この周期性で、３または４残基毎にヘリックスの同じ面に位置する。 pSTを飼育場の動物に投与すると、筋肉の成長および飼料効率が増し、そして脂肪の蓄積が減少する(3、4)。内因性のｐＳＴ量は少ない；それゆえに大規模農業に使用するための外因性ｐＳＴの調製の努力が集中的になされた。外因性ｐＳＴを広く使用することは、配合および投与の難しさにより阻まれた。長期のインプラントには、ｐＳＴ分子の安定化および時間経過にわたりｐＳＴ放出の制御が必要である。あるいは、ｐＳＴを毎日または頻繁な周期で注射するには労働力に経費がかかり、ｐＳＴの利益を非経済的なものとしてしまう。これらの困難を減じるための幾つかの成果には、ｐＳＴの活性を強化する成分の添加を通して、必要なｐＳＴ量を減らすことが含まれた。ソマトトロピンと複合化したモノクローナルおよびポリクローナル抗体は、ソマトトロピンの生物活性をインビボでさらに強めると報告された(5-9)。抗体− 媒介成長強化のメカニズムは完全に明らかではないが、ソマトトロピンの変化した薬物動態および／または生体分布(biodistribution) が、成長強化現象を一部説明するために提案された(10)。この強化は、抗体のソマトトロピンレセプターのサブクラスへの結合の選択的モジュレーションによる、ということも示唆された(５、６、11、12)。肝臓の体細胞原性レセプターへのソマトトロピン結合の改善も、可能な説明であると報告された（13）。これらの抗体が、外因性ｐＳＴ無しではそれら自体で成長を強化しない、ということは注目に値する。動物の成長を免疫的に増進させるための１つの試みで、PS-7.6と命名されたモノクローナル抗体が作成され、この抗体は下垂体を切除した(ハイポックス:hypo x)ラットアッセイで、ｐＳＴの生物活性を一貫して増大させるが(10)、ｐＳＴの不在では、この抗体自体が成長を増進させることはない。しかし飼育場の動物を、この成長強化モノクローナル抗体を用いて受動免疫することは、モノクローナル抗体の経費および抗体の多回投与に要する労働力から、経済的に最適ではない。このように現在の方法の難しさを減らす、成長強化に対する新しい方法の必要性がある。そのような方法の１つには、PS-7.6モノクローナル抗体に結合するｐＳＴの領域を模するペプチドを設計することが含まれる。PS-7.6モノクローナル抗体により認識されるエピトープに対応するペプチド断片を用いる動物の能動免疫化は、PS-7.6モノクローナル抗体と機能的に同様な抗体を生成して、内因性のｐＳＴ活性を強化するはずである。すなわち、PS-7.6モノクローナル抗体により認識されるエピトープの同定が、動物の成長能を強化するペプチドワクチンの設計に極めて重要である。ほとんどのペプチドが、天然タンパク質の１次コンホメーションを有するが、２次コンホメーションを欠いている。短いペプチドは典型的には溶液中で、急速に構造を相互転換するように存在する（ランダムコイル）。ｐＳＴの所望する領域のコンホメーション類似体は、与えられた時間中にペプチドの小画分に存在するだけであろう。したがって、明確な２次コンホメーションを有するペプチドを設計する必要がある。発明の要約したがって本発明の目的は、ｐＳＴの対応する領域を模する、良く明らかにされた２次構造、好ましくはヘリックスコンホメーションを有するペプチドを設計することである。本発明のさらなる目的は、PS-7.6モノクローナル抗体との結合を、ｐＳＴと競合するペプチドを設計することである。さらに本発明の別の目的は、温血動物の成長を促進するために、これらのペプチドを利用する組成物を開発することである。本発明のこれらの目的は、ペプチド中のアミノ酸配列にＸａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｘａａ（配列番号１）（式中、配列はｐＳＴの天然の配列とは異なる）を含むペプチドを通して達成される。また本発明は、配列番号１の１つ以上の第１または第２ロイシンまたはバリンが、正常型（直鎖）ロイシン (Nle)に置換されているペプチドを含む。本発明はまた、必須アミノ酸の位置が、ほぼヘリックスに沿って１回転を表す３つのアミノ酸によりシフトしているペプチドを対象とし、このペプチドはその中にアミノ酸Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ− Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ− Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ（配列番号１８）の配列を含み、そしてこの配列は、ｐＳＴの天然の配列とは異なる。配列番号１８のペプチドは、３番目のアミノ酸残基をイソロイシンに限定することによりさらに改変され、アミノ酸配列：Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ− Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ一Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ− Ｘａａ−Ｖａｌ（配列番号１９）を生成し、そしてこの配列はｐＳＴの天然の配列とは異なる。これらのペプチドは好ましくは、ヘリックスコンホメーションのプロモーターとして、配列番号１の第１ロイシンのアミノ−末端側に隣接するアミノ酸として、および配列番号１９の第１イソロイシンのアミノ−末端側に隣接するアミノ酸としてセリンを含む。本発明のペプチドは、温血動物の成長を促進するための方法において、組成物を配合するために、医薬的に許容できる補助剤、希釈剤またはキャリアーと共に使用される。図面の簡単な説明図１は、PS-7.6モノクローナル抗体と一緒にインキューベーションされ、磁化ヤギ抗-マウスIgG抗体により免疫沈降し、SDS-PAGEに供し、PVDF膜に電気ブロットし、ウサギ抗-pSTポリクローナル抗体で釣り上げ、続いてヨウ素化ロバ抗- ウサギIgG抗体で釣り上げ、そして最後にＸ−線フィルムおよびオートラジオグラフィーに暴露した、トリプシン消化物（レーン１）、画分#９（レーン２）および#９−５（レーン３）を表す。図２は、合成され、そしてPS-7.6モノクローナル抗体と¹²⁵I-pSTとの間の相互作用に対する阻害効果を、競合的ＲＩＡで試験したペプチドpST(70-95)、pST(64 -95)およびpST(54-95)(図２Ａ)、ならびにpST(75-95) およびpST(75-90)(図２Ｂ)を表す。非放射標識の完全pSTも試験し、そして陽性の対照として使用する。図３は、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイの結果を、放射標識pSTと；(１)pGH(75-95)ペプチド、(２)pGH(80- 90)ペプチドおよび(３)pGH(81-90)ペプチドとを比較して表す。図４は、アミノ酸残基75-90をアラニンにより連続的に置換した、pST(75-95) 断片のアミノ酸を表す。これらの類似体を競合RIAにより試験する。各残基に関して効果的競合のＩＣ₅₀は、５回の別個の実験の平均である。図５は、pSTのpST(75-95)のヘリックス投影を表す。斜線の丸は、PS-7.6モノクローナル抗体による認識に臨界的なアミノ酸である。図６は、PS-7.6モノクローナル抗体(図５で“pGH”と呼ぶ)への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイの結果を、放射標識pSTと；(１)pSTのアミノ酸75-95の天然配列に対応するペプチド(図５で“pGH(75-95)”と呼ぶ)、(２) 配列番号２のペプチド(“ペプチドＸ”と呼ぶ)、および(３)アミノ-末端アミノ基が、アセチル基の付加により修飾されているペプチド-Ｘの修飾形(キャップ化ペプチド-Ｘと呼ぶ)とを比較して表す。図７は、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイの結果を、放射標識pSTと；(１)pGH(75-95)ペプチド、および(２) 本発明の範囲ではない配列番号２１のペプチド(図６で“ペプチド-Ｙ”と呼ぶ) とを比較して表す。図８は、PS-7.6モノクローナル抗体(図５で“PGH”と呼ぶ)への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイの結果を、放射標識pSTと；(１)pGH (75-95)ペプチド、（２）ペプチド-Ｘ、（３）ペプチド-Ｙ、および（４）第１ロイシンを正常型ロイシン(Nle)に置き換えたペプチド-Ｘ、配列番号１３を生成する(図７で“Nle80”と呼ぶ)、（５）第２ロイシンを正常型ロイシン(Nle)に置き換えたペプチド-Ｘ、配列番号１４を生成する(“Nle87”と呼ぶ)、および(６) バリンを正常型ロイシン(Nle)に置き換えて、配列番号１５を生成するペプチド- Ｘ(“Nle90”と呼ぶ)とを比較して表す。図９は、処置なし（陰性対照、第１の棒）；pSTのみの処置(陽性対照、第２の棒)；ペプチド-Ｘ（配列番号２）を用いた免疫前および後に、pSTに加えて３種のブタに由来するブタ抗体を用いた処置（ラットの３群、第３から第８の棒）のいずれかを受けた、下垂体切除ラットの成長に対する効果を表す。発明の詳細な説明本発明は、pSTのヘリックス領域を模するペプチドの設計を含んで成る。これらのペプチドは、ペプチドがヘリックス形成を保持できるように、pSTに相同的な最小配列を有する。これらのペプチドは、天然のpSTを認識できる抗体の誘導を模する。 PS-7.6モノクローナル抗体（天然pSTに対して生成）により認識されるエピトープを含むペプチドを用いた標的の動物種の免疫化は、PS-7.6モノクローナル抗体と機能的に類似の抗体を生成し、そして動物の成長を促進する。 PS-7.6モノクローナル抗体により認識されるエピトープを用いた動物の能動免疫化は、PS-7.6モノクローナル抗体の受動投与の現実的な代替法である。この案は、ラムのソマトトロピン断片（残基135-154、強化に関連する異なる領域）を用いた免疫化が、脂肪の少ない(lean)筋肉の成長の割合を増加させたことを示したPellら(14)の最近の報告により支持されている。本発明では、PS-7.6モノクローナル抗体に結合するpSTのエピトープを、逆相液体クロマトグラフィー分離および免疫沈降と組み合わせてpSTの限定トリプシン消化によりマップする。PS-7.6モノクローナル抗体と相互反応するこのエピトープの臨界的なアミノ酸を、次にエピトープの一連の連続的なアラニン類似体の免疫的分析により同定する。PS-7.6と命名された（これは組換えpSTに対して生成される）、モノクローナル抗体により認識されるエピトープを含むペプチドは、下垂体切除ラットモデルでpSTの成長−促進活性を強化し、そしてブタの成長を促進することを示す。アミノ酸残基70-95(pSTの第２ヘリックスを含む(２))に対応するpST断片を、逆相高性能液体クロマトグラフィーにより分離し、そしてまたPS-7.6モノクローナル抗体により免疫沈降させる。この断片は、ラジオイムノアッセイ(RIA)で、放射標識したpSTとPS-7.6モノクローナル抗体への結合に関して、用量依存的に競合することが分かる。しかし、pST（70-95）で免疫化したブタの血清は、抗-p ST抗体を有意なレベルで生じない。この結果は、pST（70-95）のコンホメーションが真のエピトープのコンホメーションとは合わないか、またはペプチドが十分に免疫原性でないことを示唆している。このpST（70-95）の潜在的なエピトープ領域を含む数種のペプチドを合成し、そして競合RIAによりアッセイする。この結果は、pST(75-95) がPS-7.6モノクローナル抗体により認識される最適配列であることを示唆している。対照的に、pST(85-95)はPS-7.6モノクローナル抗体には大変弱く結合し、そして非−再現的であるが、pST(81-95)は結合を全く欠いている。ペプチドpGH(80 -90)は、pGH(75-95)とほとんど同じくらい強力にPS-7.6モノクローナル抗体に結合するが、pGH(81-90)は大変弱く結合する。さらに、ペプチドがpST(80-95)のように小さすぎると、結合は良くても、凝集は実質的に個々のアミノ酸残基の疎水的特性が原因である。凝集の問題を減らし、そして溶解性を向上させるために、ペプチドは長くあるべきである。エピトープ領域pST(75-95)中のペプチドの設計には、多数の因子が関与する。ほとんどのペプチドが天然タンパク質の１次コンホメーションを有するが、２次コンホメーションを欠いている。短いペプチドは典型的には溶液中で、急速に相互転換する構造として存在する(ランダムコイル)。pSTの所望する領域に類似するコンホメーションは、与えられた時間中にペプチドの小さい画分にのみ存在するのだろう。設計の目的は、ヘリックスコンホメーションを安定化させ、そしてすなわち、タンパク質に関する抗体の親和性を強化することである。この親和性には、抗体の結合部位とタンパク質上のエピトープとの間の構造的相補性が必要である。抗体結合部位と接触するアミノ酸残基は、置換には比較的非耐性である。ロイシンのイソロイシンによる置換は、抗体へのペプチドの結合を破壊するのに十分である。非−臨界的な残基を、所望の構造を促進または安定化させる残基に置換することができ、α-ヘリックスの場合は、この残基でペプチドが天然のタンパク質のコンホメーションをより良く模することを可能にする。中でもα-ヘリックスを安定化するために使用できる方法は：(１)ヘリックス間の疎水的会合(15)：(２)側鎖の電荷−電荷相互作用(16)：(３)ジスルフィドによる側鎖共有結合(17)またはラクタム結合(18)：(４)高いヘリックス傾向を持つアミノ酸残基の取り込み(19)；(５)荷電−ヘリックス双極子安定化(20)；(６)ペプチドのエンド−キャッピング(21)および金属イオン側鎖安定化(22)である。第１ロイシンの臨界性は、以下の実施例１に示され、ここではペプチド（配列番号２）の第１ロイシンが、イソロイシンに置換されて、配列番号２１のペプチドが作成されている。対照的に、非−接触残基は自由に置換することができ、そしてそれでも効果的に結合する。このように、必須な抗体接触残基を同定した後、ペプチドの残りの残基は安定なヘリックスコンホメーションになるように置換する。 pST(75-90)の各残基の連続的なアラニン置換では、Leu⁸⁰、Ile⁸³およびLeu⁸⁷ の残基に加えて、Leu⁷⁶またはVal⁹⁰のいずれかが、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に臨界的であることが明らかである（図５のヘリックス投影図に表すように）。他の残基は、結合親和性を実質的に変化させることなく、アラニンにより置換する。アミノ酸75-95の領域はpSTの第２ヘリックスを含んで成り、そして臨界的アミノ酸のｉおよびｉ＋３（ｉ＋７）の反復パターンは、PS-7.6モノクローナル抗体のヘリックスの疎水性側への結合に合致するようである。これでｉおよびｉ＋３（ほぼヘリックス１回転）の両パターンを利用するペプチドの合成が可能になる。PS-7.6モノクローナル抗体により認識されるこの配列およびヘリックス構造は、動物の成長能を強化するための効果的なペプチドワクチンを設計するための基礎を提供する。 pSTおよびペプチドは、以下のように作成する。組換えpSTは、ニューョーク州、パールリバーのアメリカンシアナミド社(American Cyanamid Co.)により作成する。ペプチドは、固相自動ペプチド合成機（9600、ミリジェン／バイオサーチ (Milligen/Biosearch)、ベッドフォード、マサチューセッツ州）で合成する。全ての試薬は、カリフォルニア州、ベルモントのペニンスーララボラトリーズ社(P eninsula Laboratories Inc.)から購入する。樹脂支持体から開裂した後、全てのペプチドをC18カラム(ライニンインスツルメント社:Rainin Instrument Corp .、ウォバーン、マサチューセッツ州)で、調製用の逆相高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）により精製する。これらペプチドの純度は、分析HPLC、FABマススペクトロメトリーおよびアミノ酸組成分析により測定すると、常に97％よりも高い。あるいは本発明のペプチドは、液−相化学合成または適当な宿主中でのＤＮＡヌクレオチド配列の組換え発現のような、当該技術分野で周知の他の技法によっても構築される。組換え発現は、マルトース−結合タンパク質またはペプチドのような、キャリアーへのペプチドの融合状態でもよい。抗体−認識部位のマッピングは、抗原の酵素的消化により従来のように(23、2 4)、または固体支持体上での多ペプチドの同時合成(25)により取り組んだ。多ペプチド合成を用いた最初の試みは成功しなかったので、続いてpSTのタンパク質溶解的分解を使用して、この研究のPS-7.6モノクローナル抗体のエピトープマッピングを完成する。初めにpSTを37℃で種々プロテアーゼ(キモトリプシン、トリプシンおよびエンドプロティナーゼGlu-Cを含む)を用いて処理する。これらはすべて、小さい pST断片を生じる(m.w.＜４kDa)。これらの小さい断片を選択した根本的理由は、将来のペプチドワクチン候補の固相合成に便利であるという理由からである。しかしPS-7.6モノクローナル抗体は、RIAおよびウエスタン分析で、これら任意の小さい断片を認識できない。さらに、短いペプチドは一般的にコンホメーションに柔軟性があり、そして溶液中で様々な相互転換コンホメーションを形成する。その結果、生成した抗−ペプチド抗体は、大変低い効率で対応する天然のタンパク質と頻繁に相互作用する。酵素分解の最初の実験の結果は、PS-7.6モノクローナル抗体に認識されるエピトープが、37℃でプロテアーゼに対して大変感受性であることを示す。pSTの２次／３次構造は、この温度でわずかに開くかもしれないので、極めて重要なエピトープ領域を全分解のためにプロテアーゼに暴露する可能性がある。酵素消化の程度を制限して完全なPS-7.6エピトープ(特に、ループおよび回転(26))を保護するために、反応温度を３日間、25℃に限定する。特別に、組換えpST(100mg)を、アガロースに架橋-結合した１mlのウシ膵臓トリプシン(1mlの包装ゲルあたり50単位の酵素活性、シグマ社：Sigma Co.、セントルイス、モンタナ州)と共に、200mlのリン酸緩衝液、pH9.5にて、25℃で３日間インキューベーションすることにより、限定トリプシン消化に供する。トリプシン処理断片を、調製用HPLC(C18カラム、21.4mm×25cm、流速＝24ml/分、235nm でのＵＶ、Dynamax-300A、ライニン)により、30分間で０−100％のＢ緩衝液の直線勾配を用いて（Ａ緩衝液＝0.1％ TFA／水中；Ｂ緩衝液＝0.1％ TFA／アセトニトリル中）分離する。全ての画分を集め、そしてRIAにより分析して活性成分を同定する。37℃の消化では存在しない、主要かつ安定なトリプシン断片が生成され、そして画分#９と命名する。この画分は18.89分の保持時間で溶出し、そして最初のpST消化の60％収量より多くを含んで成る。これは後にPS-7.6モノクローナル抗体への結合を、¹²⁵I-pSTと競合することがRIAで判明し、画分#９がPS-7.6エピトープを含むことを示唆している。画分#９をさらに10モル過剰量のジチオスレイトール(0.1Mの重炭酸アンモニウム溶液、pH9.5中)により還元し、そして再度HPLCにより分画する。#９−５と命名した１つの画分が、18.43分の保持時間で溶出し、PS-7.6モノクローナル抗体結合について、¹²⁵I-pSTと競合する能力を表し続ける。免疫沈降およびウエスタンブロッティング実験を組み合わせて行い、これらの試料を分析する。トリプシン消化物、画分#９および#９−５を、PS-7.6モノクローナル抗体と共に37℃で60分間インキューベーションする。ヤギ抗−マウスIg G被覆磁気ビーズ（アドバンストマグネチックス社：Advanced Magnetics Inc. 、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を混合物に加え、そして室温で30分間、穏やかに、一定に震盪しながらインキューベーションする。ビーズを数回洗浄し、そして磁石により集める。タンパク質をSDS-PAGE試料緩衝液中で煮沸することによりビーズから分離し、そして16％ゲル（PAGE、ノベックス:Novex、サンディエゴ、カリフォルニア州）で還元型Tris-トリシンポリアクリルアミドゲル電気泳動に供する。分離したタンパク質成分をゲルからポリビニリデンフルオリド微孔（PVDF）膜（アプライドバイオシステムズ：Applied Biosystems、フォスターシティ、カリフォルニア州）に、20％メタノールを含有する10mM 3-[シクロヘキシルアミノ]-1-プロパンスルホン酸 (CAPS)緩衝液中でpH11で電気ブロットする。この膜を５％脱脂乳で処理し、続いて連続的にウサギ抗-pSTポリクローナル抗体、そしてヨウ素化ロバ抗−ウサギ IgG抗体(アマシャム社:Amersham Corp.、アーリントンハイツ、イリノイ州)で処理する。最後に、オートラジオグラフィーで現像するために、PVDF膜をx-線フィルムに暴露する。トリプシン処理断片のアミノ酸配列を決定するために、膜のブロットを0.1％クーマシー、40％メタノールおよび10％酢酸を含む溶液で簡単に染色し、目で見えるバンドを切り出す。これらのバンドを、ガス-相シークエネーター(アプライドバイオシステムズ)の上部カートリッジブロック中の単一層に置き、そしてフェニルチオヒダントイン−誘導アミノ酸を、Hankapiller & Hood (27)の方法により決定する。結果を図１に見ることができる。トリプシンを用いた限定的消化後のpSTの主要成分は、10kDa、4kDaおよび2.5k Daがわずかに混入する15kDaの物質であることが明らかである（レーン１）。しかしこれらのわずかな混入成分は、HPLCの分画後に濃縮され、そして#９画分中で主要成分となる（レーン２）。最後に、2.5kDa断片が画分#９−５中に存在する唯一の成分となるようであり、この画分中でのPS-7.6モノクローナル抗体残基により認識されるエピトープを示唆している（レーン３）。次にこの2.5kDa断片を配列決定し、そしてpSTのアミノ酸70-95に対応することが分かる。この断片の化学構造および免疫原性は、合成したペプチドがPS-7.6モノクローナル抗体への結合をRIAで用量依存的に¹²⁵Ｉ−pSTと競合するので（図２）、固相ペプチド合成(28)により確認される。pST(70-95)の競合は、放射標識していないpSTの競合よりもおよそ100倍少ない活性である。さらに正確なエピトープの特性を決定するために、３つのさらなるペプチドを合成する。ペプチドpST(54-95)およびpST(64-95)は、Ｎ−末端のアミノ酸残基を延ばすことにより生成し、一方pST（75-90）は両端の残基を短縮化することにより生成する。これらのペプチドはRIAで試験し、そしてトリプシンpST（ 70-95）断片に匹敵する同様な競合効果を現し、75と90の間の残基がエピトープを含むことを示唆している(図２)。これらペプチドの競合は、実質的に対照pST の競合よりも低く、おそらく短いペプチドに固有のコンホメーション的な柔軟性、および抗体認識における他の非連続残基の関与が原因であろう。別の競合RIAで、Leu⁸⁰残基の臨界性を確立する。図３に表すように、ペプチド pGH(80-90)はpGH(75-95)とほぼ同様に強くPS-7.6モノクローナル抗体に結合するが、pGH(81-90)は大変弱く結合する。ペプチド抗原のコンホメーション的な柔軟性は、抗原としての実際的な利用性を限定する。しかしこの限界はペプチドのコンホメーション的柔軟性を、天然のタンパク質抗原の２次構造を模するように限定することで克服できる。エピトープ中の全残基が抗体結合部位と接触する必要はないことが知られている(29)。PS -7.6モノクローナル抗体エピトープの２次構造が重要であると考えられるので、 PS-7.6モノクローナル抗体と相互作用するpST(75-95)断片のアミノ酸側鎖を、各残基をアラニンで順次置換することにより決定する。アラニンとの連続的な置換で、ペプチドまたはタンパク質内にヘリックスコンホメーションを形成する高い傾向を持たせるが(30)、pST(75-95)の利用可能な骨格コンホメーションを変化させることは無いようである。アラニン−スキャンニング突然変異誘発法と呼ばれるこの取り組みは、レセプターと相互作用するヒトソマトトロピンの臨界的なアミノ酸を同定するために大変有用であった(３１)。アラニンは２次構造を変化させないと仮定されるが、一方、抗体との相互作用が可能な１つの部位が排除される。置換されたアラニンを含むペプチドが、それでも抗体に結合すれば、置換されたアミノ酸は非−接触残基と考えられる。したがって、pST（75-90）の一連のアラニン−置換類似体を固相法により合成し、そしてPS-7.6モノクローナル抗体結合についてpSTと競合するそれらの能力を、RIAにより評価する。もしアラニン置換がIC₅₀を有意に増大させて同等の競合に達するならば、残基の側鎖は臨界的であると考えられる。５回の別個の実験をまとめている図４の知見から、Leu⁸⁰(図３も参照にされたい)、Ile⁸³およびLe u⁸⁷(これらすべては疎水性アミノ酸である)が、PS-7.6モノクローナル抗体認識に臨界的であり、そしてLeu⁷⁶またはVal⁹⁰のいずれかも臨界的であることを示している。図４で89位の棒の値は90位の値より大きいが、ｐ値をFisherの組み合わせp-値試験を使用してコンピューター処理すると、90位のｐ値は統計的に有意であり(ｐ＝0.00162)、一方89位のｐ値は統計的に有意ではない(ｐ＝0.16048)。図４は第６回目の実験のデータ（この実験は、結果が他の５回の実験と全く一致しない）を含まないことに注目されたい。 pSTの３次構造（２）および第２ヘリックスの投影に基づき、図５で斜線の丸印により与えられるこれら５個の臨界的残基は、ヘリックス上の同面に位置し、 PS-7.6モノクローナル抗体と相互作用するための疎水的リボンを表す。要約すると、成長−強化抗体PS-7.6モノクローナル抗体のエピトープを、限界トリプシン消化によりマップし、そしてエピトープ上の臨界的なアミノ酸を連続的なアラニン置換により同定する。pSTのα-ヘリックス投影では、臨界的なアミノ酸は第２ヘリックスの同面上に位置する疎水的リボンであることを表す。エピトープのこの配列および２次構造の特性決定では、pS Tのエピトープに対応する天然のコンホメーションを模する効果的なペプチド抗原を設計するための基礎が提供される。エピトープ中の臨界的アミノ酸の同定に基づき、一連のペプチドを設計する。本発明の１つの態様では、このペプチドは式、Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ− Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｘａａ（配列番号１）を含む配列から選択され、ここでこの配列は天然のpST配列とは異なる。そのようなペプチドの例には、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：２）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｓｐ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ（配列番号：３）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：４）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ（配列番号：５）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ− Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（配列番号：６）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ（配列番号：７）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ− Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ（配列番号：８）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号：９）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ− Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ（配列番号：１０）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ− Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ（配列番号：１１）、およびＴｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ− Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ−Ｖａｌ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ（配列番号：１２）が含まれ、式中、Ａｉｂは2-アミノイソ酪酸である。さらに、配列番号１の１つ以上のロイシンまたはバリンを、正常型ロイシン(N le)に、以下のように置換できる：Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｉｌｅ（配列番号：１３）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：１４）、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｎｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：１５）、およびＴｙｒ−Ｓｅｒ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ− Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：１６）。さらに、システインを配列番号１のペプチドのいずかの末端、または両端に付加してもよい。そのようなペプチドの例は：Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ− Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ− Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号：１７）である。本発明の別の態様では、必須アミノ酸残基の位置、をほぼヘリックス１回転を表す。３つのアミノ酸によりずらす。これらのペプチドは式：Ｘａａ−Ｘａａ− Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ− Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ（配列番号１８）を含む配列から選択され、ここでこの配列はpSTの天然の配列とは異なる。特にこれらのペプチドは、第３残基としてイソロイシンを含み、そして式：Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ（配列番号１９）を含む配列から選択され、ここでこの配列はpSTの天然の配列とは異なる。そのようなペプチドの例は：Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ −Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ（配列番号２０）である。これらのペプチドは好ましくは、ヘリックスコンホメーションのプロモーターとしてセリンを、配列番号１の第１ロイシンのアミノ末端側に隣接するアミノ酸として、および配列番号１９の第１イソロイシンのアミノ末端側に隣接するアミノ酸として含む。これらペプチドのアミノ酸配列は、第１の必須残基をアミノ−末端に向け、そして最後の必須残基をカルボキシ−末端に向ける慣例を使用して記載されている。また本発明は、第１の必須アミノ酸がカルボキシ末端に向けられ、そして最後の必須アミノ酸がアミノ末端に向けられている、反対方向の同一配列も包含する。両方の方向性は、側鎖について同じヘリックス投影を有し（図５を参照にされたい）、そして機能的には均等である。本発明の範囲内の他のペプチドは、本明細書に記載の方法および基準を使用することにより、容易に作成される。本発明のペプチドを、以下の実施例で詳細に記載するように、種々の実験で試験する。最初に、PS-7.6モノクローナル抗体に対する結合について、種々のペプチド（本発明の範囲内および範囲外）が、放射標識pSTと競合する程度を測定するために、ラジオイムノアッセイを行う。実施例１に詳細に、そして図６に示すように、配列番号２のペプチド（“ペプチド-Ｘ”と呼ぶ）は、PS-7.6モノクローナル抗体および放射標識pSTの相互作用を、用量依存的な様式で、pSTのアミノ酸75-95の天然配列に相当するペプチドよりも強く阻害する。ペプチド-Ｘの修飾形（ここでアミノ−末端アミノ基は、アセチル基により置換されている（“キャップ化ペプチド-Ｘ”と呼ぶ）は、相互作用を阻害しない。図６には示していない実験で、配列番号８−１１のペプチドがペプチド-Ｘと同様に相互作用を阻害する一方、配列番号３および１２のペプチドは、相互作用を阻害はするが、ペプチド-Ｘよりも低率である。実施例１に詳細に、そして図７に示すように、本発明の範囲ではなく、そして配列Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ（配列番号２１；“ペプチド-Ｙ”と呼ぶ）を有するペプチドは、pGH(75-95)ペプチドよりも阻害の効果がはるかに低い。このように、配列番号２のペプチド中の第１ロイシンおよびバリンのイソロイシンへの置換は、抗体への結合を破壊する。実施例１に詳細に、そして図８に示すように、ペプチド-Ｘおよびその３つの変異体（配列番号１３−１５）（ここでロイシンまたはバリンが正常型ロイシン (Nle)に置換されている）は、相互作用の阻害においてpGH(75-95)よりも効果的である一方、ペプチド-Ｙは、ここでもはるかに効果が低い。図８には示していない実験で、配列番号１６のペプチドが、ペプチド-Ｘと同様に相互作用を阻害する。次にこれらペプチドの生物的活性を、下垂体切除（ハイポックス）ラットで試験する。ハイポックス−ラットは、それらの下垂体の外科的除去の結果、成長が欠失している。ハイポックス−ラットは、ソマトトロピンの成長に対する効果を研究するための有用なモデルとして役立つ(32)。実施例２に記載し、そして図９に示すように、ペプチド-Ｘ（配列番号２）を、卵白アルブミンと連結し、そして完全フロイントアジュバントで乳化する。３匹のブタをペプチド-Ｘで免疫化し、そして２回の不完全フロイントアジュバントを用いたブースター投与を受けさせる。血液試料をこれらの動物から採取し、そして対照血清も同じブタから第１回の注射前に採血する。抗体を精製し、pST と混合し、そしてハイポックスラットに５日間続けて注射する。pSTのみを受容したラットは、統計的に有意な様式で成長する。pSTに加えてブタ#１または#２からの抗体を免疫化後に受容したラットは、成長が有意に増加した。ブタ#３からの抗体の効果は、統計的に有意なレベルに達しないが(Ｐ＝0.08)、目で見える成長の強化がある。対照的に、前−免疫化抗体は効果的ではない。ハイポックスラットの実験結果として、免疫化試験をブタを用いて行う。ペプチドを単独で、またはより好ましくは抗体のインビボ生成を強めるために役立つ高分子と連結して投与できる。例えば、ペプチドをカギアナカサガイヘモシアニン（KLH）のようなタンパク質に連結できる。本発明の範囲内の他の高分子には、ヒトおよびウシ血清アルブミン、卵白アルブミン、ミオグロビン、β -ガラクトシダーゼ、ペニシラナーゼ、熱ショックタンパク質および細菌トキソイドのような、当該技術分野で周知な高分子を含む。マルチポリ-DL-アラニル- ポリ-L-リシンおよびポリ-L-リシンのような合成分子も適当である。ペプチドは皮下注射、筋肉注射および静脈流、ならびに経皮的および経口投与のような通常の経路により投与できる。ペプチド（またはそれらの結合物）を、医薬的に許容できる補助剤、希釈剤またはキャリアーと組み合わせて投与することが好ましい。ペプチドの最初の投与後に、１回以上の同じペプチドのブースター投与が、定期的時間間隔で続く投与量の投薬を使用することが特に好ましい。実施例３−５に詳細に記載するように、本発明のペプチドを用いたブタの免疫化は、飼料効率、赤身の増大、および脂肪の減少を増加させる、望ましい結果を生じる。実施例３、表１で、配列番号２のペプチドを受容したブタの成長状態は、卵白アルブミンのみを受容したブタと比べた時に、実験期間中に統計的に有意な飼料効率の増大を示す。実施例３、表２では、ペプチドを受容した同じブタが、卵白アルブミンのみを受容したブタと比べて、統計的に有意な赤身の増大および脂肪の減少を有する、向上した屠体の特徴を示す。ペプチドを受容したブタが、ほとんどの器官重量に有意な増加を示さないことは、興味深い特記事項である。対照的に、pSTは器官重量を増大させることが知られている。ペプチド配列番号２またはペプチド配列番号１７（“Cys-ペプチド”）のいずれかを受容して成長したブタの別の群を用いて、実施例３の実験を実施例５で繰り返すと、両群のブタは卵白アルブミンのみを受容したブタと比べた時に、統計的に有意な望ましくないリーフ脂肪(leaf fat)の減少を示すが、配列番号２のペプチドを受容したブタは半腱様筋肉に統計的に有意な減少を示す（表５および６を参照にされたい）。実施例４、表３および４では、ペプチドを受容した成長中のブタは、卵白アルブミンのみを受容しているブタと比べた時に、実験を通して統計的に有意な赤身の増大を示す。これは処理を終了した後の最終段階に比べて、処理期間中で特に有意である。本発明をより良く理解するために、以下の実施例を説明する。この実施例は、説明を目的とするだけであり、本発明の範囲を限定するものではない。実施例１競合ラジオイムノアッセイラジオイムノアッセイは、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関して、種々のペプチドと放射標識pSTとの競合の程度を測定するために行う。任意の所定濃度のペプチドについて、アッセイで抗体に結合するpSTの量を下げると、抗体に対するペプチドの競合はより大きくなる。天然のpSTをコンフォメーション的に模するペプチドは、PS-7.6モノクローナル抗体からpSTをより効率的に置き換えるはずである。ラジオイムノアッセイは以下のように行う。取り外し可能なマイクロタイターウェルに、１μg/ウェルでPS-7.6モノクローナル抗体を被覆し、そして残存するマイクロタイターウェル結合部位を２％ BSA でブロックする。ヨウ素化pST（¹²⁵Ｉ−pST、比活性＝180-250μCi/μg、ニューイングランドヌクレアー／デュポン社：New England Nuclear/DuPont,Co.、ボストン、マサチューセッツ州）を、種々の希釈で競合剤と一緒に加える。60分間のインキューベーション後、すべてのウェルを徹底的に洗浄して、未結合¹²⁵Ｉ- pSTを除去し、そして各ウェル中にPS-7.6モノクローナル抗体と結合して残る¹²⁵ Ｉ-pSTの量を反映する残存放射活性を、ガンマカウンターで別々にカウントする。図６に表す第１実験では、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイを、放射標識pST(図６では“pGH”と呼ぶ)と、次のものとを比較して行う：(１)pSTのアミノ酸75-95の天然の配列に対応するペプチド(図６では“pGH(75-95)”と呼ぶ)、（２）配列番号２のペプチド（“ペプチド-Ｘ”と呼ぶ）、および（３）アミノ−末端アミノ基がアセチル基に置き換えられた、ペプチド-Ｘの修飾形（“キャップ化ペプチド-Ｘ”と呼ぶ）。結果は、pGH(75-95)をウェルに加えると、PS-7.6モノクローナル抗体および放射活性pSTの相互作用が用量依存的様式で阻害されることを示す。ペプチド-Ｘも、同様に相互作用を阻害することを表すが、いくぶん強い様式であり、一方、キャップ化ペプチド-Ｘはそのようにできない。理論付けるわけではないが、競合アッセイでのキャップ化ペプチド-Ｘの失敗は、試験溶液中のペプチド間凝集によるものかもしれない。図７に表す第２実験では、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイを、放射標識pSTと次のものとを比較して行う：( １)pGH(75-95)ペプチド、および（２）本発明の範囲外の配列番号２１のペプチド（図７では“ペプチド-Ｙ”と呼ぶ）。結果は、pGH(75-95)をウェルに加えると、PS-7.6モノクローナル抗体および放射活性pSTの相互作用が用量依存的様式で阻害される。対照的にペプチド-Ｙは、はるかに効果が低いことを示す。図８に表す第３実験では、PS-7.6モノクローナル抗体への結合に関する競合を測定するラジオイムノアッセイを、放射標識pSTと次のものとを比較して行う：( １)pGH(75-95)ペプチド、（２）ペプチド-Ｘ、（３）ペプチド-Ｙ、（４）第１ロイシンが正常型ロイシン(Nle)により置換されたペプチド-Ｘ、配列番号１３を生成する(図８では“Nle80”と呼ぶ)、（５）第２ロイシンが正常型ロイシン(Nl e)により置換されたペプチド-Ｘ、配列番号１４を生成する(“Nle87”と呼ぶ)、および（６）バリンが正常型ロイシン(Nle)により置換されたペプチド-Ｘ、配列番号１５を生成する (“Nle90”と呼ぷ)。結果は、pGH(75-95)をウェルに加えると、PS-7.6モノクローナル抗体および放射活性pSTの相互作用が用量依存的様式で阻害されることを示している。本発明の範囲内の幾つかのペプチド（ペプチド-Ｘ、Nle80、Nle87およびNle90を含む）は、この競合アッセイでpGH(75-95)よりも効果的であることが分かる。しかしペプチド-Ｙは、ここでもはるかに効果が低いことを示す。実施例２ペプチドに対するブタの抗体を用いた、ハイポックスラットのpST活性の強化この実施例では、ブタにペプチドを注射する。ペプチドに対して生成された抗体を含む血清試料を、pSTと一緒にハイポックスラットに注射する。抗体は、pST がハイポックスラットの成長を促進する能力を強化する。この実験は以下のように行う。ペプチド-Ｘ（配列番号２）を、卵白アルブミンに連結し、そして完全フロイントアジュバントで乳化する。３匹のブタはペプチド-Ｘで免疫化し、そしてその４および８週間後、不完全フロイントアジュバントを用いてブースター投与を受ける。血液試料は、最後のブースターから１週間後にこれらの動物から採血する。対照血清も、第１回の注射前にこれらの同じブタから採取する。抗体を硫酸アンモニウム沈殿により精製し、pSTと混合して、１mg抗体および５μg pSTの投与量を提供し、ハイポックスラットに５日間連続して投与する。３つの別々のラット群は、それぞれ異なる１匹のブタの抗体を受容する：第４群のラットには、注射しないが、第５群のラットはpSTのみを受容する。５日目のラットの正味の体重増加を図９に表す。 pST単独の処理では、統計的に有意(ｐ＜0.05)な様式で、ハイポックスラットの成長を刺激する。pSTに加えて、ブタ#１または#２の抗体を免疫化後に受容したラットは、成長の増大が有意である。ブタ#３の抗体の効果は、統計的に有意なレベルに達しないが(Ｐ＝0.08)、目で見える成長の強化がある。対照的に、前 −免疫化抗体は、効果的ではない。実施例３成長したブタのペプチドを用いた免疫化この実施例は、成長したブタ（70-80kg以上の最終的な成長期）の、本発明のペプチドを用いた免疫化の、成長率、飼料効率および屠体組成に対する効果を説明する。ペプチド（Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ；配列番号２）を、合成し、そして卵白アルブミンと連結する。比較のために、卵白アルブミン抗原を卵白アルブミン自体に連結することにより生成する。体重70-80kgの混合−育種去勢ブタ(新しく市販されているデカルブ：Dekalbのターミナル交叉遺伝系)を、ノースカロライナ州、ヒルスブローのゴールドキストポーク(Gold Kist Pork)から購入する。ブタはペプチドの標的動物であり、処置間の統計的な有意性を得るためには、処置毎に少なくとも25匹のブタが必要である。動物は個々に番号を付けた耳タグにより確認され、そして番号を付けた囲いの中で維持する。ブタにはクロロテトラサイクリンを200g／トンで加えた食事を与え、そしてブタが運ばれてからおよそ１週間給餌する。残りの実験ではこのブタに、Swine ST 食糧(20％粗タンパク質)を与える。飼料および水は自由に与える。動物を無作為の完全ブロックデザイン(complete block design)で、２つの処置のそれぞれに割り当てる。動物は、初期の体重によりブロックされる。以下の処置を投与する：ブタは、ＡまたはＢ群の各ブロックの処置に無作為に割り当てる。15匹のブタの各ブロックは、それらの体重が平均約75kgとなった時に処置を始める。ブタは第１回目の免疫化注射の前に、囲いの中で少なくとも１週間、前処置期間に供される。飼料供給は、最小の消費量で無制限に出入りするように調整する。ブタは、完全フロイントアジュバントで完全に乳化した0.5mgのペプチド／卵白アルブミン結合物を用いて、皮下（ＳＣ）注射を使用して耳の直後の首の部分で免疫化する。すべてのブタは、１回のブースター注射を、４週間後の間隔で、同量であるが不完全フロイントアジュバント中の結合物を使用して受ける。対照のブタは、ペプチド無しの卵白アルブミン結合物を受容する。ブタを毎日観察する。病気または負傷した動物は、適切な獣医の手当を受ける。数日内に回復しないか、または回復するために隔離される動物（例えばペンメートにより悪化する肘跛症）は、実験から排除する。体重および飼料消費は、毎週、そして必要に応じてブタが屠殺体重に近付いた時には、より頻繁に測定する。各囲いの中のブタは、平均生体重が115±２kgである時に屠殺する。屠体の測定には、冷蔵重量、背脂肪の厚さ、リブアイ面積(rib eye area)、屠体長、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、リーフファット(leaf fat)および半腱様筋肉の重量を含む。データは、無作為の完全ブロックデザイン用の平方偏差法の分析を使用して分析する。体重増加および屠体測定の評価に関する実験単位は、個々のブタである。飼料消費および飼料効率データは、実験単位として囲いを使用する。平均の比較を、Fisherの保護LSD(Fisher's Protected LSD)を使用して行う。実験は以下のスケジュールで進行する。１日に、すべてのブタの体重を測定し、そして平均体重が75kgに達した時に、各ブロックについて処置（Ｂ群については、初期免疫化を含む）を開始する。ブースター注射は、初期免疫化の４および８週間後に投与する。ブタの体重を測定し、そして飼料消費を週毎に測定する。ブタを115±２kgの平均囲い体重(pe n weight)で屠殺する。この実験結果を、表１および２に示す。実施例４ペプチドを用いた成長中のブタの免疫化実施例３の免疫化実験を、ニュージャージー州、プリンストンのアメリカンシアナミドカンパニー(American Cyanamid Company)のブタ群から、成長中の若いブタ(約15−20kg)を使用して繰り返す。２回のブースター投与を４週間間隔で与える(約50−60kgの成長期中)。動物を維持して、成長状態の体重が約115kgで屠殺する。この実験結果を表３および４に示す。実施例５成長したブタのペプチドを用いた免疫化実施例３の免疫化実験を、アミノ−末端にシステイン結合を有する第２ペプチド（配列番号１７）（Cys-ペプチド）を含んで繰り返す。このペプチドは卵白アルブミンに次のように結合している：卵白アルブミン(10mg)を、水溶液(pH8)に溶解し、そして無水ヨード酢酸(16mg：20倍過剰)で処理し、周囲温度で２時間撹拌する。過剰の無水ヨード酢酸を超遠心により分離し、そして修飾した卵白アルブミンをCys-ペプチドと、周囲温度で４時間反応させ、そして透析して最終結合物を生成する。この実験結果を表５および６に示す。結合物Cys-ペプチドを受容した２匹のブタは、実験中に死亡したことに注目されたい。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Peptides with growth promoting properties Field of the invention The present invention enhances somatotropin activity in pigs and promotes the growth of warm-blooded animals. The present invention relates to a peptide for deriving an antibody to progress. Background of the Invention Porcine somatotropin (pST) is a 191 amino acid long with various biological activities. It is a pituitary hormone (Cited Document 1). This hormone has four non-parallel α-heli Exist as single-stranded polypeptides that are aligned in a matrix (2). Each α-heli The box contains 3.6 amino acids per revolution. With this periodicity, 3 or 4 residues Each group is located on the same side of the helix. Administration of pST to breeding animals increases muscle growth and feed efficiency, and Fat accumulation is reduced (3, 4). Low endogenous pST levels; therefore, large-scale farming Efforts have been focused on preparing exogenous pST for commercial use. Exogenous pS Widespread use of T has been hampered by formulation and administration difficulties. Long-term inn The plant needs to stabilize the pST molecule and control pST release over time. is necessary. Alternatively, labor is needed to inject pST daily or on a frequent cycle. Expensive and makes the benefits of pST uneconomical. Some achievements to reduce these difficulties include components that enhance the activity of pST. To reduce the amount of pST required through the addition of. Monoclonal and polyclonal antibodies conjugated to somatotropin It has been reported to further enhance the biological activity of mattropin in vivo (5-9). Antibody- The mechanism of enhanced mediation is not completely clear, Altered pharmacokinetics and / or biodistribution of somatotropin Was proposed to partially explain the growth enhancement phenomenon (10). This enhancement is due to the By selective modulation of binding to subclasses of the mattropin receptor It was also suggested (5, 6, 11, 12). To the somatic receptor of the liver Improved somatotropin binding was also reported as a possible explanation (13). these Note that antibodies do not enhance growth on their own without exogenous pST. Worth the eye. In one attempt to immunologically enhance animal growth, a model named PS-7.6 was used. Noclonal antibodies were made, which removed the pituitary gland (Hypox: hypopox). x) consistent increase in pST biological activity in rat assay (10) In its absence, the antibody itself does not enhance growth. But animals in the breeding ground Passive immunization with this growth enhancing monoclonal antibody Not economically optimal due to antibody costs and labor required for multiple doses of antibody . Need for new ways to enhance growth, thus reducing the difficulty of current methods There is. One such method involves p-binding to a PS-7.6 monoclonal antibody. It involves designing a peptide that mimics the region of ST. PS-7.6 monoclonal Active immunization of animals using peptide fragments corresponding to the epitope recognized by the antibody Epidemiology produces antibodies functionally similar to the PS-7.6 monoclonal antibody, It should enhance pST activity. That is, the PS-7.6 monoclonal antibody Identification of recognized epitopes will lead to the design of peptide vaccines that enhance animal growth potential. It is extremely important for the total. Most peptides are the primary conformers of natural proteins. But lacks a secondary conformation. Short pepti Are typically present in solution to rapidly interconvert structures (randomly coil). The conformational analog of the desired region of pST is given at a given time. It will only be present in a small fraction of the peptides in it. Therefore, a clear secondary combo It is necessary to design a peptide that has a formation. Summary of the Invention The object of the present invention was therefore to better simulate the corresponding region of pST, A peptide with a defined secondary structure, preferably a helical conformation It is to be. A further object of the present invention is to compete with pST for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody. Is to design a peptide that matches. Yet another object of the present invention is to use these peptides to promote the growth of warm-blooded animals. Developing compositions that utilize tide. These objects of the present invention are to provide the amino acid sequence in the peptide with Xaa-Xaa-Le. u-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xa a-Val-Xaa-Xaa (SEQ ID NO: 1) wherein the sequence is the native sequence of pST (Different from the sequence). Further, the present invention relates to SEQ ID NO: 1. One or more of the first or second leucine or valine is a normal (linear) leucine (Nle). The present invention also provides that Are shifted by three amino acids that represent one revolution about the helix. For peptides, this peptide contains the amino acids Xaa-Xaa-Xaa- Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa- Sequence of Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Val (SEQ ID NO: 18) Sequence, and this sequence differs from the native sequence of pST. SEQ ID NO: 18 The peptide is further reduced by limiting the third amino acid residue to isoleucine. Modified amino acid sequence: Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu- Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa- Xaa-Val (SEQ ID NO: 19), and this sequence is the native sequence of pST. Different from columns. These peptides are preferably helical conformation promoters As an amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first leucine of SEQ ID NO: 1 And the amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first isoleucine of SEQ ID NO: 19 As serine. The peptide of the present invention may be used in a method for promoting the growth of a warm-blooded animal. Together with a pharmaceutically acceptable adjuvant, diluent or carrier to formulate used. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES Figure 1 shows the incubation with the PS-7.6 monoclonal antibody and the magnetization. Immunoprecipitated with goat anti-mouse IgG antibody, subjected to SDS-PAGE and electroblocked on PVDF membrane. And raised with rabbit anti-pST polyclonal antibody, followed by iodinated donkey anti- Catch with rabbit IgG antibody, and finally X-ray film and autoradiograph Tryptic digest (lane 1), fraction # 9 (lane 2), exposed to Raffy And # 9-5 (lane 3). FIG. 2 shows the synthesized and PS-7.6 monoclonal antibodies¹²⁵Mutual between I-pST The inhibitory effect on action was tested in competitive RIA peptides pST (70-95), pST (64 -95) and pST (54-95) (FIG. 2A), and pST (75-95) And pST (75-90) (FIG. 2B). Non-radiolabeled complete pST also tested and positive Use as a control. FIG. 3 shows radiographs measuring competition for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody. The results of the Muno assay were compared with radiolabeled pST; (1) pGH (75-95) peptide, (2) pGH (80- 90) and (3) pGH (81-90) peptide in comparison. FIG. 4 shows pST (75-95) in which amino acid residues 75-90 were successively replaced by alanine. Represents the amino acids of the fragment. These analogs will be tested by competitive RIA. For each residue And effective competitive IC₅₀Is the average of five separate experiments. FIG. 5 shows a helix projection of pST of pST (75-95). The shaded circles are PS-7.6 mono It is an amino acid critical for recognition by clonal antibodies. FIG. 6 shows binding to the PS-7.6 monoclonal antibody (referred to as “pGH” in FIG. 5). The results of the radioimmunoassay for measuring competition were compared with radiolabeled pST; A peptide corresponding to the native sequence of carboxylic acids 75-95 (referred to as "pGH (75-95)" in FIG. 5), (2) A peptide of SEQ ID NO: 2 (referred to as "peptide X"), and (3) an amino-terminal amino Modified form of peptide-X wherein the group is modified by the addition of an acetyl group (capping (Referred to as peptide-X). FIG. 7 shows radiographs measuring competition for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody. The results of the Muno assay were compared with radiolabeled pST; (1) pGH (75-95) peptide, and (2) Peptide of SEQ ID NO: 21 which is not within the scope of the present invention (referred to as "Peptide-Y" in FIG. 6) And expressed as a comparison. FIG. 8 shows binding to PS-7.6 monoclonal antibody (referred to as “PGH” in FIG. 5). The results of the radioimmunoassay for measuring competition for (75-95) peptide, (2) peptide-X, (3) peptide-Y, and (4) first Peptide-X in which leucine was replaced with normal leucine (Nle), producing SEQ ID NO: 13 (Referred to as “Nle80” in FIG. 7). (5) Place the second leucine in normal leucine (Nle). Produces the altered peptide-X, SEQ ID NO: 14 (referred to as "Nle87"), and (6) Peptide that replaces valine with normal leucine (Nle) to produce SEQ ID NO: 15 X (referred to as "Nle90"). FIG. 9 shows no treatment (negative control, first bar); treatment with pST alone (positive control, second bar). Bar); before and after immunization with peptide-X (SEQ ID NO: 2), 3 species in addition to pST Treatment with porcine antibody from 3 pigs (3 groups of rats, 3rd to 8th bars) FIG. 4 shows the effect on growth of hypophysectomized rats receiving either. Detailed description of the invention The invention comprises the design of a peptide that mimics the helical region of pST. this These peptides are homologous to pST so that the peptides can retain helix formation. With a minimal array. These peptides induce antibodies that can recognize natural pST Imitate Epitope recognized by PS-7.6 monoclonal antibody (generated against natural pST) Immunization of the target animal species with the peptide containing It produces antibodies functionally similar to the body and promotes animal growth. Active immunization of animals using epitopes recognized by the PS-7.6 monoclonal antibody Epidemiology is a viable alternative to passive administration of PS-7.6 monoclonal antibody Is the law. The idea is that the somatotropin fragment of lamb (residues 135-154, Immunization with different areas increases the rate of lean muscle growth This is supported by a recent report by Pell et al. In the present invention, the epitope of pST that binds to the PS-7.6 monoclonal antibody is Limited trypsin of pST in combination with liquid chromatography separation and immunoprecipitation Map by digestion. This epitope interacts with the PS-7.6 monoclonal antibody Critical amino acids, then a series of consecutive alanine analogs of the epitope Identified by immunological analysis. It was named PS-7.6 (this was produced against recombinant pST The peptide containing the epitope recognized by the monoclonal antibody Enhances the growth-promoting activity of pST in a hypophysectomized rat model, and grows pigs To promote. A pST fragment corresponding to amino acid residues 70-95 (including the second helix of pST (2)) Separated by reversed-phase high-performance liquid chromatography and also PS-7.6 monochrome Immunoprecipitate with null antibody. This fragment was analyzed by radioimmunoassay (RIA). Dose-dependent binding of radiolabeled pST to PS-7.6 monoclonal antibody It turns out that they compete. However, sera from pigs immunized with pST (70-95) showed no anti-p Does not produce ST antibodies at significant levels. This result is consistent with the conformation of pST (70-95). Does not match the conformation of the true epitope, or Is not immunogenic. Several peptides containing the potential epitope region of this pST (70-95) were synthesized, Assay by competitive RIA. The result is pST (75-95) Is the optimal sequence recognized by the PS-7.6 monoclonal antibody. You. In contrast, pST (85-95) binds very weakly to the PS-7.6 monoclonal antibody, Although non-reproducible, pST (81-95) lacks any binding. Peptide pGH (80 -90) binds PS-7.6 monoclonal antibody almost as strongly as pGH (75-95). PGH (81-90) binds very weakly. Furthermore, if the peptide is pST (80-95) If it is too small, the binding is good but the aggregation is substantially hydrophobic of individual amino acid residues. Characteristic. To reduce aggregation problems and improve solubility, Peptides should be long. A number of factors are involved in designing the peptide in the epitope region pST (75-95). Most peptides have a primary conformation of the native protein, but Lack of conformation. Short peptides are typically found to be rapidly soluble in solution. It exists as an alternating structure (random coil). Similar to the desired region of pST Conformation is only present in a small fraction of the peptide during a given time I guess. The purpose of the design is to stabilize the helical conformation, and It is to enhance the affinity of the antibody for the protein. This affinity depends on the antibody Structural complementarity between the binding site of the and the epitope on the protein is required. Amino acid residues in contact with the antibody combining site are relatively non-resistant to substitutions. Roy Replacement of syn with isoleucine is sufficient to break the binding of the peptide to the antibody It is. Replace non-critical residues with residues that promote or stabilize the desired structure In the case of an α-helix, this residue Better quality conformation Allows you to imitate. Among the methods that can be used to stabilize the α-helix are: (1) Helix Hydrophobic association between (15): (2) charge-charge interaction of side chain (16): (3) to disulfide Side chain covalent bond (17) or lactam bond (18) due to: (4) high helical tendency Incorporation of amino acid residues (19); (5) Stabilization of charged-helix dipoles (20); End-capping of the peptide (21) and metal ion side chain stabilization (22). The criticality of the first leucine is shown in Example 1 below, where the peptide (sequence No. 2) is replaced with isoleucine, and the peptide of SEQ ID NO. Code has been created. In contrast, non-contact residues can be freely substituted, and And still combine effectively. Thus, after identifying essential antibody contact residues , The remaining residues in the peptide are replaced to form a stable helical conformation I do. For successive alanine substitutions of each residue in pST (75-90), Leu⁸⁰, Ile⁸³And Leu⁸⁷ In addition to the residues of⁷⁶Or Val⁹⁰To PS-7.6 monoclonal antibody It is clear that this is critical for binding (as shown in the helix projection of FIG. 5). To). Other residues are not changed by alanine without substantially altering the binding affinity. Replace. The region of amino acids 75-95 comprises the second helix of pST and The repeating pattern of i and i + 3 (i + 7) of the world amino acids is PS-7.6 monochrome It appears to match binding to the hydrophobic side of the helix of the null antibody. Now i Peptide can be synthesized using both patterns i and 3 (almost one helix rotation) It will work. This sequence and the helic recognized by the PS-7.6 monoclonal antibody Structure is an effective peptide to enhance animal growth Provide the basis for designing vaccines. pST and peptides are made as follows. Recombinant pST, New York Created by American Cyanamid Co. of Pearl River I do. For peptides, use a solid phase automated peptide synthesizer (9600, Milligen / Biosearch) (Milligen / Biosearch), Bedford, Mass.). all All reagents are from Peninsula Laboratories, Belmont, CA (P eninsula Laboratories Inc.). After cleavage from the resin support, all Peptide on a C18 column (Rainin Instrument Corp .: Rainin Instrument Corp.) Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography for Preparation at Woburn, Mass. Purify by fee (HPLC). The purity of these peptides was determined by analytical HPLC, FAB mass Always more than 97% as measured by spectrometry and amino acid composition analysis high. Alternatively, the peptides of the invention can be prepared by liquid-phase chemical synthesis or by Other techniques well known in the art, such as recombinant expression of NA nucleotide sequences Therefore, it is also constructed. Recombinant expression includes maltose-binding protein or pepti The peptide may be fused to a carrier, such as a peptide. The mapping of the antibody-recognition site is conventionally performed by enzymatic digestion of the antigen (23, 2 4) or by simultaneous synthesis of multiple peptides on a solid support (25). Many The first attempt with peptide synthesis was unsuccessful, followed by pST protein Using lytic digestion, the epitope map of the PS-7.6 monoclonal antibody in this study was used. Complete the ping. First, pST was incubated at 37 ° C with various proteases (chymotrypsin, Psin and endoproteinase Glu-C). These lotus All small This produces a pST fragment (m.w. <4 kDa). The rationale for choosing these small pieces is that This is because it is convenient for solid-phase synthesis of future peptide vaccine candidates. I However, the PS-7.6 monoclonal antibody was tested by RIA and Western Cannot recognize small fragments. In addition, short peptides generally have a conformation Is flexible and forms various interconversion conformations in solution. As a result, the generated anti-peptide antibodies are converted to the corresponding native protein with very low efficiency. Interacts frequently with materials. The results of the first experiment of enzymatic degradation show that the epithelium recognized by the PS-7.6 monoclonal antibody Shows that the toup is very sensitive to proteases at 37 ° C. pST 2 The secondary / tertiary structure may open slightly at this temperature, so There is a possibility of exposing the tope region to proteases for total degradation. Enzymatic digestion To a limited extent to protect the complete PS-7.6 epitope, especially loops and turns (26) To limit the reaction temperature to 25 ° C. for 3 days. Specifically, recombinant pST (100 mg) was cross-linked to agarose in 1 ml of bovine pancreatic Lipsin (50 units of enzyme activity per 1 ml of packaging gel, Sigma: Sigma Co., Sen. (Truis, Mont.) For 3 days at 25 ° C. in 200 ml phosphate buffer, pH 9.5 During limited incubation, subject to limited trypsin digestion. Trip The syn-treated fragment was subjected to preparative HPLC (C18 column, 21.4 mm x 25 cm, flow rate = 24 ml / min, 235 nm UV, Dynamax-300A, lining) at 0-100% B buffer in 30 minutes. Using a linear gradient (A buffer = 0.1% TFA / water; B buffer = 0.1% TFA / acetoni (During toril) separate. Collect all fractions and analyze by RIA for active ingredients same Set. Digestion at 37 ° C produces a major and stable tryptic fragment that is not present , And fraction # 9. This fraction elutes with a retention time of 18.89 minutes and It comprises more than 60% yield of the first pST digestion. This is the PS-7.6 Monona later Binding to antibodies¹²⁵It was found by RIA that it competed with I-pST, and fraction # 9 was PS-7.6E. Suggests containing pitopes. Fraction # 9 was further treated with a 10 molar excess of dithios Reduce with reitol (0.1 M ammonium bicarbonate solution, pH 9.5) and re- Fractionated by HPLC. One fraction, named # 9-5, has a retention time of 18.43 minutes Eluted, for PS-7.6 monoclonal antibody binding,¹²⁵Shows the ability to compete with I-pST Keep doing. The combination of immunoprecipitation and Western blotting experiments Analyze the sample. Trypsin digest, fractions # 9 and # 9-5 were converted to PS-7.6 monochrome Incubate for 60 minutes at 37 ° C with the local antibody. Goat anti-mouse Ig G-coated magnetic beads (Advanced Magnetics Inc .: Advanced Magnetics Inc. , Cambridge, Mass.) To the mixture and at room temperature for 30 minutes Incubate gently with constant shaking. Wash the beads several times , And collect by magnet. Boiling proteins in SDS-PAGE sample buffer And separated from the beads by 16% gel (PAGE, Novex: Novex, Sandy Ego, CA) Reduced Tris-Tricine Polyacrylamide Gel Electrode Provide for electrophoresis. The separated protein components are separated from the gel by polyvinylidene fluoride fine Pore (PVDF) membrane (Applied Biosystems, Foster City, California) with 10 mM 3- [cyclohexene containing 20% methanol. Silamino] -1-propanesulfonic acid Electroblot at pH 11 in (CAPS) buffer. This membrane is treated with 5% skim milk, followed by Rabbit anti-pST polyclonal antibody and iodinated donkey anti-rabbit IgG antibody (Amersham Corp .: Amersham Corp., Arlington Heights, Ill.) Manage. Finally, the PVDF membrane is x-ray filtered for autoradiographic development. Expose to LUM. To determine the amino acid sequence of the trypsinized fragment, Easily lots with a solution containing 0.1% Coomassie, 40% methanol and 10% acetic acid Stain and cut out visible bands. These bands are used for gas-phase sequencing. (Applied Biosystems) in a single layer in the upper cartridge block And the phenylthiohydantoin-derived amino acid was replaced with Hankapiller & Hood Determined by the method of (27). The results can be seen in FIG. The major components of pST after limited digestion with trypsin are 10 kDa, 4 kDa and 2.5 kDa It is clear that Da is a slightly contaminated 15 kDa substance (lane 1). I However, these minor contaminants were concentrated after fractionation by HPLC and in the # 9 fraction And becomes the main component (lane 2). Finally, a 2.5 kDa fragment is present in fraction # 9-5. PS-7.6 monoclonal antibody residues in this fraction (Lane 3). Next, this 2.5 kDa fragment And was found to correspond to amino acids 70-95 of pST. Of this fragment The chemical structure and immunogenicity of the synthesized peptide Binding is dose dependent with RIA¹²⁵Since it competes with I-pST (FIG. 2), Confirmed by (28). The competition for pST (70-95) is the competition for pST without radiolabel It is about 100 times less active than. To determine more precise epitope characteristics, three additional Synthesize the peptide. Peptides pST (54-95) and pST (64-95) have N-terminal amino acids. Produced by extending acid residues, while pST (75-90) shortens both ends Generated by These peptides were tested in the RIA and trypsin pST ( 70-95) show similar competitive effects comparable to fragments, with residues between 75 and 90 (FIG. 2). Competition of these peptides is essentially control pST Conformational flexibility inherent in shorter peptides, possibly lower than the competition And the involvement of other non-contiguous residues in antibody recognition. In another competing RIA, Leu⁸⁰Establish residue criticality. As shown in FIG. pGH (80-90) binds PS-7.6 monoclonal antibody almost as strongly as pGH (75-95) However, pGH (81-90) binds very weakly. The conformational flexibility of peptide antigens means practical utility as antigens Restrict. However, this limitation limits the conformational flexibility of the peptide to its natural This can be overcome by limiting the secondary structure of the protein antigen to mimic it. Epito It is known that not all residues in the loop need to contact the antibody binding site (29). PS -7.6 Since the secondary structure of the monoclonal antibody epitope is considered important, The pST (75-95) fragment interacting with the PS-7.6 monoclonal antibody It is determined by sequentially replacing residues with alanine. Continuous substitution with alanine To form a helical conformation within a peptide or protein Tend (30), but change the available backbone conformation of pST (75-95). It doesn't seem to let me. This approach, called alanine-scanning mutagenesis, Critical amino acids of human somatotropin that interact with It was very useful for determining (31). Alanine is supposed to change secondary structure However, one site that can interact with the antibody is excluded. Replaced If the peptide containing the substituted alanine still binds to the antibody, the substituted amino acid Acids are considered non-contact residues. Therefore, a series of alanine-substituted analogs of pST (75-90) were synthesized by the solid phase method. And their ability to compete with pST for PS-7.6 monoclonal antibody binding Is evaluated by RIA. If alanine substitution is IC₅₀Competition with significantly increased If a match is reached, the side chain of the residue is considered critical. 5 separate experiments From the findings in Figure 4 that summarizes⁸⁰(See also FIG. 3), Ile⁸³And Le u⁸⁷(All of which are hydrophobic amino acids) recognize PS-7.6 monoclonal antibodies Critical and Leu⁷⁶Or Val⁹⁰Indicates that either is critical ing. In Figure 4, the value of the 89th bar is greater than the value of the 90th bar, but the p-value is Fisher's combination. Computed using the p-value test, the p-value at position 90 is statistically significant. Yes (p = 0.00162), while the p value at position 89 is not statistically significant (p = 0.16048). Figure 4 is the data of the sixth experiment (this experiment is completely consistent with the results of the other five experiments) Note that no) is not included. Based on the tertiary structure of pST (2) and the projection of the second helix, in FIG. These five critical residues, given by the marks, lie on the same side of the helix, Figure 9 shows a hydrophobic ribbon for interacting with the PS-7.6 monoclonal antibody. In summary, the growth-enhanced antibody PS-7.6 Map by trypsin digestion and contiguous critical amino acids on epitope By alanine substitution. pST α-Helic In the projections, the critical amino acids are the hydrophobic ribose located on the same side of the second helix. It represents that it is. Characterization of this sequence and the secondary structure of the epitope revealed that pS An effective peptide antibody mimicking the natural conformation corresponding to the T epitope A basis for designing the original is provided. Based on the identification of critical amino acids in the epitope, a series of peptides is designed. In one aspect of the invention, the peptide has the formula: Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Xaa- Leu-Xaa-Xaa-Val-Xaa-Xaa (SEQ ID NO: 1) Where the sequence is different from the native pST sequence. That's it Examples of such peptides include: Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg- Leu-Asp-Asp-Val-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: : 2), Tyr-Ser-Leu-Asp-Arg-Ile-Ile-Arg-Asp- Leu-Asp-Arg-Val-Ile-Arg-Asp-Ile (SEQ ID NO: : 3), Tyr-Ser-Leu-Arg-Arg-Ile-Ile-Arg-Arg- Leu-Arg-Arg-Val-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: : 4), Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ile-Asp-Asp- Leu-Asp-Asp-Val-Ile-Asp-Asp-Ile (SEQ ID NO: : 5), Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ala-Arg- Arg-Leu-Asp-Asp-Val-Ala-Arg-Arg-Leu ( SEQ ID NO: 6), Tyr-Ser-Leu-Lys-Ala-Ile-Ala-Glu-Ala- Leu-Lys-Ala-Val-Ala-Glu-Ala (SEQ ID NO: 7), Tyr-Ser-Leu-Lys-Glu-Ile-Glu-Lys-Leu- Leu-Lys-Glu-Val-Leu-Glu-Lys-Leu (SEQ ID NO: : 8), Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ala-Arg-Arg- Leu-Asp-Asp-Val-Ala-Arg-Arg-Ala (SEQ ID NO: : 9), Tyr-Ser-Leu-Lys-Ile-Ile-Ile-Glu-Ile- Leu-Lys-Ile-Val-Ile-Glu-Ile (SEQ ID NO: 10) , Tyr-Ser-Leu-Lys-Glu-Ile-Glu-Lys-Leu- Leu-Lys-Glu-Val-Leu-Glu-Lys-Leu (SEQ ID NO: : 11), and Tyr-Ser-Leu-Lys-Aib-Ile-Aib-Glu-Aib- Leu-Lys-Aib-Val-Aib-Glu-Aib (SEQ ID NO: 12) Wherein Aib is 2-aminoisobutyric acid. In addition, one or more leucine or valine of SEQ ID NO: 1 is replaced with normal leucine (N le) can be replaced as follows: Tyr-Ser-Nle-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg- Leu-Asp-Asp-Val-Ile-Arg-Arg- Ile (SEQ ID NO: 13), Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg- Nle-Asp-Asp-Val-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: : 14), Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg- Leu-Asp-Asp-Nle-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: : 15), and Tyr-Ser-Nle-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg- Nle-Asp-Asp-Val-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: : 16). In addition, cysteine is added to either or both ends of the peptide of SEQ ID NO: 1. May be added. Examples of such peptides are: Cys-Tyr-Ser-Leu- Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Arg-Leu-Asp-Asp- Val-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: 17). In another aspect of the invention, the position of the essential amino acid residue is Represent. Stagger by three amino acids. These peptides have the formula: Xaa-Xaa- Xaa-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa- A sequence comprising Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Val (SEQ ID NO: 18) Wherein the sequence is different from the native sequence of pST. In particular, these pages The peptide contains isoleucine as the third residue and has the formula: Xaa-Xaa-I le-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-X aa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Val (SEQ ID NO: 19) Where the sequence is different from the native sequence of pST. Such pepti Examples of the code are: Tyr-Ser-Ile-Asp-Asp-Leu-Ile-Arg -Arg-Ile-Asp-Asp-Leu-Ile-Arg-Arg-Val (SEQ ID NO: 20). These peptides are preferably helical conformation promoters As an amino acid adjacent to the amino terminal side of the first leucine of SEQ ID NO: 1. And an amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first isoleucine of SEQ ID NO: 19. Included as acid. The amino acid sequence of these peptides directs the first essential residue to the amino-terminus, and Using the convention of directing the last essential residue to the carboxy-terminus . The invention also provides that the first essential amino acid is directed to the carboxy terminus and Also includes identical sequences in the opposite direction, with the essential amino acids of . Both orientations have the same helix projection for the side chains (see FIG. 5). ), And functionally equivalent. Other peptides within the scope of the present invention use the methods and criteria described herein. By doing so, it is easily created. The peptides of the invention were tested in various experiments, as described in detail in the Examples below. Test. First, various peptides (for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody) (Within and outside the scope of the present invention) to determine the extent to which it competes with radiolabeled pST Next, a radioimmunoassay is performed. As detailed in Example 1 and as shown in FIG. The peptide of SEQ ID NO: 2 (referred to as "Peptide-X") is a PS-7.6 monoclonal The interaction of the antibody and radiolabeled pST In a dose-dependent manner, the peptide corresponding to the native sequence of amino acids 75-95 of pST Strongly inhibits. A modified form of peptide-X, wherein the amino-terminal amino group is acetyl (Referred to as "capped peptide-X") Does not inhibit. In an experiment not shown in FIG. 6, the peptide of SEQ ID NOS: 8-11 was Inhibiting the interaction in the same way as Peptide-X, Inhibits the interaction but at a lower rate than peptide-X. As detailed in Example 1 and as shown in FIG. 7, it is not the scope of the present invention, and Sequence Tyr-Ser-Ile-Asp-Asp-Ile-Ile-Arg-Ar g-Ile-Asp-Asp-Ile-Arg-Arg-Ile (SEQ ID NO: 21 A peptide having a “peptidyl-Y”) is more inhibitory than the pGH (75-95) peptide. Harm effect is much lower. Thus, the first leucine in the peptide of SEQ ID NO: 2 And the substitution of valine for isoleucine breaks the binding to the antibody. As detailed in Example 1 and shown in FIG. 8, peptide-X and its three Mutant (SEQ ID NO: 13-15) (where leucine or valine is normal leucine (Substituted with (Nle)) is more effective than pGH (75-95) in inhibiting the interaction While peptide-Y is again much less effective. FIG. 8 shows In no experiment, the peptide of SEQ ID NO: 16 inhibited the interaction as well as peptide-X I do. The biological activity of these peptides was then tested in hypophysectomized (hypox) rats. Test. Hypox-rats grow less as a result of surgical removal of their pituitary. Has been deleted. Hypox-rats have an effect on somatotropin growth. Serves as a useful model for studying (32). Peptide-X (SEQ ID NO: 2) was described in Example 2 and shown in FIG. , Coupled with ovalbumin, and emulsified with complete Freund's adjuvant. 3 One pig was immunized with peptide-X and given two incomplete Freund's adjuvants. And receive a booster administration. Blood samples are taken from these animals, A control serum is also collected from the same pig before the first injection. The antibody is purified and pST And inject hypox rats continuously for 5 days. Accepts pST only Rats grow in a statistically significant manner. Pig # 1 or # 2 in addition to pST Rats that received the antibody from after immunization had significantly increased growth. Pig # 3 The effect of these antibodies does not reach statistically significant levels (P = 0.08) but is visible There is growth enhancement. In contrast, pre-immunizing antibodies are not effective. Hypox Immunization tests are performed on pigs as experimental results in rats. Peptides alone or, more preferably, to enhance in vivo production of antibodies It can be administered in conjunction with a useful macromolecule. For example, a peptide can be Can be linked to proteins such as mosocyanin (KLH). Other heights within the scope of the invention The molecules include human and bovine serum albumin, ovalbumin, myoglobin, β -Galactosidase, penicillanases, heat shock proteins and bacterial toxo And macromolecules well known in the art, such as ids. Multipoly-DL-alanyl- Synthetic molecules such as poly-L-lysine and poly-L-lysine are also suitable. Peptides are injected subcutaneously, intramuscularly and intravenously, as well as transdermally and orally It can be administered by a usual route such as Peptides (or their conjugates) Pharmaceutically acceptable auxiliaries, diluents or carriers It is preferred to administer in combination with One or more times after the first dose of the peptide Booster administration of the same peptide uses dosing at doses that follow at regular time intervals It is particularly preferred to do so. Immunization of pigs with a peptide of the invention, as described in detail in Examples 3-5 Has the desired effect of increasing feed efficiency, increasing lean, and reducing fat. Occurs. In Example 3, Table 1, the growth state of the pig that received the peptide of SEQ ID NO: 2 was egg white. Statistically significant diet during the experiment when compared to pigs that received albumin alone 9 shows an increase in efficiency. In Example 3, Table 2, the same pig receiving the peptide was found to be egg white Statistically significant increase in lean and fat compared to pigs receiving albumin alone 1 shows improved carcass characteristics with a decrease in The pig that received the peptide is almost It is an interesting note that it does not show a significant increase in most organ weights. Contrast In particular, pST is known to increase organ weight. Either peptide SEQ ID NO: 2 or peptide SEQ ID NO: 17 ("Cys-peptide") The experiment of Example 3 was repeated in Example 5 using another group of pigs receiving and growing the same. In return, the pigs in both groups had statistically lower values than pigs that received ovalbumin alone. Shows a significant decrease in undesired leaf fat, but the Pigs receiving the peptide show a statistically significant decrease in semitendinosus muscle (Tables 5 and 6). Please refer to). In Example 4, Tables 3 and 4, growing pigs that received the peptide were egg white Statistically significant leanness throughout the experiment when compared to pigs receiving only cumin Indicates an increase in This is especially true during the processing period compared to the final stage Significant. To better understand the present invention, the following examples are described. This example is For illustrative purposes only, and does not limit the scope of the invention. Example 1 Competitive radioimmunoassay Radioimmunoassays are available for binding to PS-7.6 monoclonal antibodies. This is performed to determine the degree of competition between the peptide of Example 1 and the radiolabeled pST. Any given darkness For some peptides, lowering the amount of pST bound to the antibody in the assay The competition for the peptide is greater. Conformation of natural pST Peptide mimics more efficient replacement of pST from PS-7.6 monoclonal antibody Should be. The radioimmunoassay is performed as follows. PS-7.6 monochrome at 1μg / well in removable microtiter wells Null antibodies are coated and the remaining microtiter well binding sites are 2% BSA Block with. Iodized pST (¹²⁵I-pST, specific activity = 180-250 μCi / μg, new England Nuclear / DuPont: New England Nuclear / DuPont, Co., Bo (Ston, Mass.) At various dilutions with competitor. 60 minutes After incubation, wash all wells thoroughly and unbound¹²⁵I- Remove pST and remain bound to PS-7.6 monoclonal antibody in each well¹²⁵ The remaining radioactivity reflecting the amount of I-pST is counted separately with a gamma counter . In the first experiment shown in FIG. 6, competition for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody was determined. The radioimmunoassay to be measured is called radiolabeled pST (referred to as “pGH” in FIG. 6). (1) of amino acids 75-95 of pST A peptide corresponding to the natural sequence (referred to as “pGH (75-95)” in FIG. 6), (2) SEQ ID NO: No. 2 peptide (referred to as “Peptide-X”), and (3) amino-terminal amino A modified form of peptide-X in which the group is replaced by an acetyl group ("capped peptide"). De-X "). The results show that when pGH (75-95) is added to the wells, PS-7.6 monoclonal antibody and release 4 shows that the interaction of radioactive pST is inhibited in a dose-dependent manner. Peptide-X also , Which also impairs the interaction, but in a somewhat stronger manner, Encapsulated peptide-X cannot do so. Without theory, competition Failure of capped Peptide-X in the assay resulted in inter-peptide aggregation in the test solution. It may be due. In the second experiment shown in FIG. 7, competition for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody was determined. A radioimmunoassay to be measured is performed comparing radiolabeled pST with: 1) the pGH (75-95) peptide, and (2) the peptide of SEQ ID NO: 21 outside the scope of the present invention. (Referred to as “peptide-Y” in FIG. 7). The results show that when pGH (75-95) is added to the wells, PS-7.6 monoclonal antibody and release The interaction of radioactive pST is inhibited in a dose-dependent manner. In contrast, peptide-Y is Indicates much less effective. In the third experiment shown in FIG. 8, competition for binding to the PS-7.6 monoclonal antibody was determined. A radioimmunoassay to be measured is performed comparing radiolabeled pST with: 1) pGH (75-95) peptide, (2) peptide-X, (3) peptide-Y, (4) first Peptide-X in which leucine was replaced by normal leucine (Nle), SEQ ID NO: 13 (Referred to as “Nle80” in FIG. 8). (5) The second leucine is a normal leucine (Nl80). e) generate peptide-X, SEQ ID NO: 14, substituted by (referred to as "Nle87"); And (6) valine Produces peptide-X, SEQ ID NO: 15, which has been replaced by normal leucine (Nle) (Called “Nle90”). The results show that when pGH (75-95) is added to the wells, PS-7.6 monoclonal antibody and release 9 shows that the interaction of radioactive pST is inhibited in a dose-dependent manner. The present invention (Including peptide-X, Nle80, Nle87 and Nle90) Is more effective than pGH (75-95) in this competition assay. But pe Peptide-Y again shows to be much less effective. Example 2 Enhancement of pST activity in hypox rats using porcine antibodies to peptides In this example, pigs are injected with the peptide. Antibodies raised against peptides Serum samples containing the body are injected into hypox rats along with pST. Antibody, pST Enhance the ability of hypox rats to promote growth. This experiment is as follows To do. Peptide-X (SEQ ID NO: 2) was linked to ovalbumin and Emulsify with adjuvant. Three pigs were immunized with peptide-X and 4 and 8 weeks after the booster administration using incomplete Freund's adjuvant receive. Blood samples are drawn from these animals one week after the last booster You. A control serum is also taken from these same pigs before the first injection. Sulfate antibody Purified by ammonium precipitation, mixed with pST and injected with 1 mg antibody and 5 μg pST. Doses are provided and administered to hypox rats for 5 consecutive days. Three separate la The groups of rats receive one different pig antibody: the rats of group 4 No injection, but group 5 rats only receive pST. 5 day rat net Weight gain is represented in FIG. Treatment with pST alone, in a statistically significant (p <0.05) manner, Stimulates growth. In addition to pST, pig # 1 or # 2 antibodies are received after immunization Rats have a significant increase in growth. Pig # 3 antibody effect is statistically significant Not reach a significant level (P = 0.08), but there is visible growth enhancement. In contrast, before The immunizing antibody is not effective; Example 3 Immunization of growing pigs with peptides. This example demonstrates the growth of pigs (70-80 kg or more in final growth phase) according to the invention. Explains the effect of immunization with peptides on growth rate, feed efficiency and carcass composition I will tell. Peptide (Tyr-Ser-Leu-Asp-Asp-Ile-Ile-Ar g-Arg-Leu-Asp-Asp-Val-Ile-Arg-Arg-Il e; SEQ ID NO: 2) is synthesized and ligated with ovalbumin. For comparison Is produced by linking an ovalbumin antigen to ovalbumin itself. Mixed-bred castrated pigs weighing 70-80 kg (newly available decarb: Dekalb's Terminal Crossed Genetic System), Gold Kiss, Hillsboro, NC Purchased from Gold Kist Pork. Pig is the target animal for the peptide, At least 25 pigs per treatment required for statistical significance between treatments It is. Animals are identified by individually numbered ear tags and are numbered Keep in the enclosure. Pigs are fed with 200g / ton of chlorotetracycline Give things, and Feed the pigs for approximately one week after they have been transported. For the rest of the experiment, Give ST food (20% crude protein). Feed and water are available ad libitum. Animals are treated in a random complete block design in two Assigned to each of the locations. Animals are blocked by initial weight. below Administer treatment: Pigs are randomly assigned to treatment in each block of group A or B. 15 pigs Begin treatment when their weight averages about 75 kg. Pigs should be kept in a pen for at least one week prior to the first immunization injection. Served in between. Feed supply is regulated for unlimited access with minimal consumption . Pigs are 0.5mg peptide / egg completely emulsified in Complete Freund's Adjuvant With ovalbumin conjugate, the part of the neck just behind the ear using subcutaneous (SC) injection Immunize with All pigs receive a single booster injection at intervals after 4 weeks Receive using the same amount of conjugate in incomplete Freund's adjuvant. Contrast Pigs receive ovalbumin conjugate without peptide. The pigs are observed daily. Sick or injured animals receive appropriate veterinary care . Actions that will not recover within a few days or will be quarantined to recover Objects (eg, elbow clade, exacerbated by penmates) are excluded from the experiment. Body weight and feed consumption approached slaughter weight of pigs weekly and as needed Sometimes measure more often. Pigs in each pen are sacrificed when the average live weight is 115 ± 2 kg. Measurement of carcass Refrigerated weight, back fat thickness, rib eye area, carcass length, heart Weight of the gut, liver, spleen, kidney, leaf fat and semitendinous muscle Including. Data were separated using variance analysis for random complete block designs. Analyze. The experimental unit for evaluating weight gain and carcass measurements is the individual pig . Feed consumption and feed efficiency data use enclosures as experimental units. Average ratio The comparison is performed using Fisher's Protected LSD (Fisher's Protected LSD). The experiment proceeds according to the following schedule. One day, all pigs are weighed , And when the average weight reaches 75 kg, treatment for each block (for group B Initiates initial immunization). Booster injections are administered 4 and 8 weeks after the initial immunization. Pig weight And feed consumption is measured weekly. Pigs have an average pen weight of 115 ± 2 kg (pe n weight). The results of this experiment are shown in Tables 1 and 2. Example 4 Immunization of growing pigs with peptides. The immunization experiment of Example 3 was performed with an American physician at Princeton, NJ. From the growing herd of American Cyanamid Company pigs, Repeat using pigs (about 15-20 kg). 2 boosters every 4 weeks Give (about 50-60 kg during the growing season). Maintain the animal and keep the growing weight at about 115kg Slaughter. The results of this experiment are shown in Tables 3 and 4. Example 5 Immunization of growing pigs with peptides. The immunization experiment of Example 3 was performed using a second peptide having a cysteine bond at the amino-terminus. (SEQ ID NO: 17) (Cys-peptide). This peptide is egg white It is bound to albumin as follows: ovalbumin (10 mg) is added to an aqueous solution (pH 8) Dissolve and treat with iodoacetic anhydride (16 mg: 20-fold excess) and stir at ambient temperature for 2 hours Mix. Excess iodoacetic anhydride is separated by ultracentrifugation and the modified egg white The bumin is reacted with the Cys-peptide for 4 hours at ambient temperature and dialyzed to final binding Generate things. The results of this experiment are shown in Tables 5 and 6. Accepts conjugate Cys-peptide Note that the two pigs that died during the experiment.

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年５月１３日【補正内容】請求の範囲１．アミノ酸Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｘａａの配列（配列番号１）を含んで成るペプチドであり、この配列はブタのソマトトロピンの天然の配列（ｐＳＴ）とは異なり、そしてこのペプチドはｐＳＴ活性を強化し、かつ温血動物の成長を促進する、上記ペプチド。２．第１ロイシンのアミノ−末端側に隣接するアミノ酸がセリンである、請求の範囲第１項に記載のペプチド。３．ペプチドが配列番号２から１２に表される配列を有するペプチドから本質的に成る群から選択される、請求の範囲第２項に記載のペプチド。４．システインが、ペプチドのいずれかの一端、または両端に付加される、請求の範囲第１項に記載のペプチド。５．ペプチドが配列番号１７に表される配列を有する、請求の範囲第４項に記載のペプチド。６．アミノ酸Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌの配列（配列番号１８）を含んで成り、そしてこの配列がｐＳＴの天然の配列とは異なるペプチド。７．ペプチドがアミノ酸Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｖａｌの配列（配列番号１９）を含んで成るように、第３残基がイソロイシンであり、そしてこの配列がｐＳＴの天然の配列とは異なる、請求の範囲第６項に記載のペプチド。８．第１イソロイシンのアミノ−末端側に隣接するアミノ酸がセリンである、請求の範囲第７項に記載のペプチド。９．請求の範囲第１、４、５、６、７または８に記載の少なくとも１つのペプチドを、医薬的に許容できる補助剤、希釈剤または[Procedure of Amendment] Article 184-8, Paragraph 1 of the Patent Act [Submission date] May 13, 1997 [Correction contents] The scope of the claims 1. Amino acids Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xa a-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Val-Xaa-Xaa sequence (SEQ ID NO: No. 1), the sequence of which is the natural sequence of porcine somatotropin. Sequence (pST), and this peptide enhances pST activity and The above peptide, which promotes blood animal growth. 2. The amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first leucine is serine. 2. The peptide according to item 1 of the scope. 3. The peptide is essentially a peptide having the sequence represented by SEQ ID NOs: 2 to 12 The peptide according to claim 2, wherein the peptide is selected from the group consisting of: 4. Cysteine is added at one or both ends of the peptide 2. The peptide according to item 1 above. 5. 5. The method according to claim 4, wherein the peptide has a sequence represented by SEQ ID NO: 17. Peptide. 6. Amino acids Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xa a-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Va 1 (SEQ ID NO: 18), and this sequence is the native sequence of pST A different peptide. 7. The peptide is an amino acid Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-X aa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-X aa-Val sequence (SEQ ID NO: 19), the third residue Claim 6 wherein the sequence is syn and the sequence differs from the native sequence of pST. The peptide according to item. 8. 1st iso The amino acid adjacent to the amino-terminal side of leucine is serine. The peptide according to item. 9. At least one peptid according to claim 1, 4, 5, 6, 7 or 8; With pharmaceutically acceptable adjuvants, diluents or

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＫ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, S Z, UG), AM, AU, BB, BG, BR, BY, C A, CN, CZ, DK, EE, GE, HU, IS, JP , KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LV, MD, MG, MN, MX, NO, NZ, PL, RO, R U, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UZ , VN

Claims

[Claims] 1. An amino acid sequence that differs from the native sequence of porcine somatotropin (pST). Acid Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Xa a-Leu-Xaa-Xaa-Val-Xaa-Xaa sequence (SEQ ID NO: 1) A peptide comprising: 2. The amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first leucine is serine. 2. The peptide according to item 1 of the scope. 3. The peptide is essentially a peptide having the sequence represented by SEQ ID NOs: 2 to 12 The peptide according to claim 2, wherein the peptide is selected from the group consisting of: 4. Cysteine is added at one or both ends of the peptide 2. The peptide according to item 1 above. 5. 5. The method according to claim 4, wherein the peptide has a sequence represented by SEQ ID NO: 17. Peptide. 6. Amino acids Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xa a-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Va 1 (SEQ ID NO: 18), and this sequence is the native sequence of pST A different peptide. 7. The peptide is an amino acid Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-X aa-Xaa-Xaa-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-X aa-Val sequence (SEQ ID NO: 19), the third residue Claim 6 wherein the sequence is syn and the sequence differs from the native sequence of pST. The peptide according to item. 8. An amino acid adjacent to the amino-terminal side of the first isoleucine is serine; 8. The peptide according to claim 7, wherein 9. At least one peptid according to claim 1, 4, 5, 6, 7 or 8; Comprises a pharmaceutically acceptable adjuvant, diluent or carrier. , A composition for promoting the growth of warm-blooded animals. 10. Administering a composition according to claim 9 to a warm-blooded animal. How to promote the growth of warm-blooded animals.