JPH11500413A

JPH11500413A - 有機酸のｎ−アルキル−ｎ−ヒドロキシルアミドの常磁性錯体及びそれを含有する磁気共鳴影像（ｍｒｉ）のためのエマルジョン

Info

Publication number: JPH11500413A
Application number: JP8518809A
Authority: JP
Inventors: ピー．キャチェリス，ウィリアム; ジェイ．リチャード，トーマス; シー．グラビアク，レイモンド; シー．リー，アルバート
Original assignee: ヘマジェン／ピーエフシー
Priority date: 1994-11-30
Filing date: 1995-11-09
Publication date: 1999-01-12
Also published as: AU4406096A; WO1996016679A1; CA2205232A1; EP0794801A1; US5614170A

Abstract

(57)【要約】常磁性コントラスト剤のエマルジョン、それらの製造及び使用方法が開示されている。エマルジョンは水、分散した油相、及び常磁性金属イオンと、Ｃ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基及び窒素原子に結合したヒドロキシル基を有する有機酸キレート剤、例えば、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）との錯体を含有する。このエマルジョンは非常に安定で、ＭＲＩ影像を強化するために静脈内投与に対し治療的に許容することができる。

Description

【発明の詳細な説明】有機酸のＮ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミドの常磁性錯体及びそれを含有する磁気共鳴影像（ＭＲＩ）のためのエマルジョン〔技術分野〕本発明は、常磁性錯体、それを含有するエマルジョン、及びその製造及び使用方法に関する。詳しくは、本発明は、水、分散された油相、常磁性金属イオンとＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基及び窒素原子に結合したヒドロキシル基を有する有機酸キレート剤、例えば、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）との錯体を含有する新規なエマルジョンに関する。このエマルジョンは非常に安定で、ＭＲＩ影像を向上させる静脈内適用に治療上許容出来るものである。〔背景技術〕磁気共鳴影像（ＭＲＩ）は最近開発され、影像を改良するため、影像を撮る前に患者に常磁性コントラスト剤が与えられている。例えば、米国特許第４，６４７，４４７号、第４，８５９，４５１号、第４，９５７，９３９号、第４，９６３，３４４号、第５，０２１，２１６号、第５，０６４，６３６号、及び第５，１２０，５２７号、及びＰＣＴ出願ＷＯ９２／２１０１７を含めた多くの特許が常磁性ＭＲＩコントラスト剤を開示している。これらの特許は、当分野の従来の文献の例であると考えられ、最も適切な文献であると言う訳ではない。上記特許に開示された種類の常磁性薬剤は、水溶液の形で患者に投与されている。更に、米国特許第５，０６４，６３６号及び第５，１２０，５２７号明細書に記載されているように、胃腸管でのＭＲＩ影像のために常磁性油エマルジョンが与えられている。器官影像剤の外、血液プール剤として、又は他の用途、例えば、骨髄、脾臓、肝臓、又はリンパ節のための影像剤として効果的に働くＭＲＩコントラスト剤として常磁性金属イオンの錯体を開発する努力が続けられている。リポソームもＭＲＩコントラスト剤として研究されており、最近ＰＣＴ出願ＷＯ９２／２１０７に記載されているように、リポ可溶性コントラスト剤を液体エマルジョンの形で投与してもよい。そのＰＣＴ出願のコントラスト剤は、肝臓、血液プール、及び網内系（ＲＥＳ）の影像に有用である。当分野での従来の努力にも拘わらず、改良されたＭＲＩコントラスト剤に対する必要性が依然として存在している。特に、器官影像剤としてのみならず、血液プール剤、及び網内系の一般的影像剤として有効に働くＭＲＩコントラスト剤が必要である。安定で用途の広いＭＲＩコントラスト剤が必要であり、特に静脈内用のためのものが必要である。〔発明の開示〕本発明は、ＭＲＩのための常磁性錯体及びそれを含有するエマルジョンに関する。ＭＲＩ影像を向上させるための生理学的に許容出来るエマルジョンは、水、分散された油相、及び常磁性金属イオンと次の式を有する有機キレート剤の錯体を含む：式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、残りのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂ （各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。そのようなキレート錯体を用いて非常に微細で安定なエマルジョンを作ることができることが発見された。これらのエマルジョンは熱安定化後も安定なままである。更に、これらのエマルジョンは静脈内に用いることができ、優れたＭＲＩ影像を与える。金属イオンは原子番号５８〜７０のランタニド元素、又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属であり、最も好ましくはＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄及びジスプロシウムからなる群から選択された元素である。有機キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸であるのが好ましい。飽和Ｃ₁₄〜Ｃ₂₂基を有するモノ−又はビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）が生理学的に好ましい。不飽和基がその基の中の多くの異なった位置に一つ、二つ、又は三つの二重結合を持っていても、非常に微細で安定なエマルジョンを依然として達成できることが確認されている。静脈内投与のためのＭＲＩエマルジョンは、約１μより小さく、好ましくは約０．２〜約０．４μの程度の平均粒径を有する。別の態様として、エマルジョンは水、油及びフルオロケミカル及びそれらの混合物からなる群から選択された分散された油相、界面活性剤、及び常磁性金属イオンと有機キレート剤との分散した錯体からなる。油及び（又は）フルオロケミカル（ＰＦＣ）の水中に乳化された粒子は、今後時々「分散された油相」として言及する。常磁性物質は、動物又は人間被験者に投与するために、安定化されたエマルジョンとして効果的に懸濁又は分散することができる。従来のＭＲＩ剤及び組成物とは対照的に、本発明のＭＲＩエマルジョンは非常に安定であり、室温又は他の周囲条件で優れた保存安定性を示す。更に、本発明は、器官、血液プール、及びＲＥＳの優れたＭＲＩ影像を生ずる。本発明は、常磁性薬剤を含有するエマルジョンの製造方法も包含する。本発明の他の目的及び利点は次の詳細な記載から明らかになるであろう。〔本発明の詳細な説明〕本発明のＭＲＩエマルジョンは、水中に乳化された油及び（又は）フルオロケミカル（ＰＦＣ）を含み、常磁性金属キレート錯体を含有する。或る場合には、キレート錯体は界面活性剤として働き、従って、付加的共界面活性剤は不必要になることがある。殆どの場合、界面活性剤を添加する。一般に、油及び（又は）ＰＦＣは、約０．５〜５０重量％の量で含有される。特に、例えば、静脈内（ＩＶ）ＭＲＩコントラスト剤を投与するための医学的用途では、界面活性剤を含むＰＦＣ及び（又は）油の好ましい量は、そのコントラスト剤を安定なエマルジョンとして効果的に分散させるのに最低の量である。経口、直腸、又は他の投与のためには、遥かに多量であるのが望ましいことがある。ＩＶ用では、静脈内生成物のための粘度限界のために、約２５ｗ／ｖ％が油のための実際的限界であり、或は約５５ｖ／ｖ％がＰＦＣにとっての実際的限界である。好ましい範囲は油については約５〜２０ｗ／ｖ％であり、ＰＦＣについては約５〜約５０ｖ／ｖ％である。エマルジョンは油又はＰＦＣ含有量が大きくなると大きな粘度（又はゲル状コンシステンシー）を示す。界面活性剤はエマルジョンの約０．５〜約１０重量％、通常約１〜５重量％の量で含有される。一般に、ＭＲＩ剤は、投与量、効果性、及び安全性の要件に依存して、約３０重量％までの種々の量で分散させることができる。例えば、ＩＶエマルジョンでは約１０重量％までの量のＭＲＩ剤を含むのが好ましい。例えば、経口又は直腸投与では、ジエチレントリアミン五酢酸のビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）のガドリニウム塩のようなＭＲＩ影像剤は、約５０％以上位の多量で用いてもよい。もし望むならば、それらエマルジョンは等張食塩水又は他の薬剤で希釈し、低い濃度のものを生成させるようにしてもよい。これらの成分は次のような大きな特徴によって同定する。Ａ．常磁性金属キレート錯体広い態様として、本発明は、水、分散された油相、及び常磁性金属イオンと次の式を有する有機キレート剤との錯体からなるＭＲＩ影像を向上させるための生理学的に許容出来るエマルジョンに関する。式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、残りのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂ （各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。そのようなキレート錯体を用いて非常に微細で安定なエマルジョンを作ることができることが発見された。更に、これらのエマルジョンは静脈内に用いることができ、優れたＭＲＩ影像を与える。金属イオンは原子番号５８〜７０のランタニド元素、又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属であり、最も好ましくはＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄及びジスプロシウムからなる群から選択された元素である。有機キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸であるのが好ましい。ジエチレントリアミン五酢酸及びエチレンジアミン四酢酸からなる群から選択された有機酸の、各Ｒ₁がステアリル、テトラデシル、及びヘキサデシルの群から選択されたＣ₁₄〜Ｃ₂₂基であるモノヒドロキシルアミド又はビスヒドロキシルアミドが用いられる。キレート錯体の特定の例には、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ステアリル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−テトラデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、及びガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）が含まれる。Ｂ．油ここで用いられる用語「油」とは、鉱物、植物、動物、天然又は合成起源のいずれでも、多くの種類の生理学的に許容可能な物質を指す一般的な意味で用いられている。従って、用語「油」は、ここでは化学的性質が極めて異なった広い範囲の物質に適用されるものとして用いられている。種類又は機能による油の分類で、例えば、鉱油は石油から誘導され、脂肪族又はワックス系炭化水素、芳香族炭化水素、又は混合脂肪族・芳香族系炭化水素が含まれる。精製パラフィン油等のような石油誘導油が鉱油の分類の中に含まれる。植物油の分類では、油は主に種子又はナッツから誘導され、亜麻仁油及び桐油のような乾性油；紅花油及び大豆油のような半乾性油；ひまし油、綿実油、及びココナッツ油のような非乾性油、及びパーム油及びココナッツ油のような食用ソープ・ストック(soap stock)が含まれる。動物油の分類では、油は通常タロー、ラード、及びステアリン酸原料中の脂肪として産する。液体動物油の種類には、魚油、オレイン酸、マッコー鯨油等が含まれ、それらは通常大きな脂肪酸含有量を有する。オリーブ油、綿実油、コーン油、及びピーナッツ油のような或る植物油、その他タラ肝油、ハリバ肝油、鮫肝油等のような或る特定の魚油が含まれ、それらはビタミン含有量が高いため医薬として広く用いられている。モノ−、ジ−、又はトリ−グリセリド、又はそれらの混合物のような液体脂肪酸は好ましい油である。中間的鎖のトリグリセリドも、本発明により有用な油として働く。Ｃ．フルオロケミカル本明細書中「フルオロケミカル」又は「ＰＦＣ」は、ペルフルオロカーボンの高度にフッ素化された有機化合物又はフッ素化された化学物質を記述するのに用いられている。更に、これらの用語は互換性のあるものとして用いられている。用語「ペルフルオロカーボン」には、炭素の「環式」又は「非環式」化合物が含まれる。その置換誘導体も含まれ、この場合フルオロカーボンはそれらの構造内に酸素、水素、窒素、塩素、及び臭素等のような他の元素を有する。用語「ペルフルオロカーボン」とは、部分的に又は実質的にフッ素化された化合物を含む意味を持つことにも注意されたい。これは、全ての水素の完全な置換が欠けていても本発明の好ましい医学的フルオロカーボンの本質的非毒性の特徴に影響を与えない限り、許容出来るものである。用いることができるペルフルオロカーボン化合物の中には、ペルフルオロトリブチルアミン（ＦＣ４７）、ペルフルオロデカリン（ＰＰ５）、ペルフルオロメチルデカリン（ＰＰ９）、臭化ペルフルオロオクチル、ペルフルオロテトラヒドロフラン（ＦＣ８０）、ペルフルオロエーテル（ＰＩＤ）［(ＣＦ₃)₂ＣＦＯＣＦ₂(ＣＦ₂)₂ＣＦ₂ＯＣＦ(ＣＦ₃)₂］、ペルフルオロエーテル（ＰＩＩＤ）［(ＣＦ₃)₂ＣＦＯＣＦ₂(ＣＦ₂)₆ＣＦ₂ＯＣＦＯＣＦ₂ＣＦ₂ＣＦ₃］、ペルフルオロポリマー（Ｅ４）［ＣＦ₃ＣＨＦォムブリン(Fomblin)Ｙ／０１〕、ペルフルオロドデカン、ペルフルオロビシクロ［４．３．０．］ノナン、ペルフルオロトリトリメチルビシクロヘキサン、ペルフルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロイソプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエンドテトラヒドロジシクロペンタジエン、ペルフルオロアダマンタン、ペルフルオロエクソテトラヒドロジシクロペンタジエン、ペルフルオロビシクロ［５．３．０．］デカン、ペルフルオロテトラメチルシクロヘキサン、ペルフルオロ−１−メチル−４−イソプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロ−ｎ− ブチルシクロヘキサン、ペルフルオロジメチルビシクロ［３．３．１．］ノナン、ペルフルオロ−１−メチルアダマンタン、ペルフルオロ−１−メチル−４−ｔ −ブチルシクロヘキサン、ペルフルオロデカヒドロアセナフタン、ペルフルオロトリメチルビシクロ［３．３．１．］ノナン、ペルフルオロ−１−メチルアダマンタン、ペルフルオロ−１−メチル−４−ｔ−ブチルシクロヘキサン、ペルフルオロデカヒドロアセナフテン、ペルフルオロトリメチルビシクロ［３．３．１．］ノナン、ペルフルオロ−ｎ−ウンデカン、ペルフルオロテトラデカヒドロフェナントレン、ペルフルオロ−１，３，５，７−テトラメチルアダマンタン、ペルフルオロドデカヒドロフルオレン、ペルフルオロ−１，３−ジメチルアダマンタン、ペルフルオロ−ｎ−オクチルシクロヘキサン、ペルフルオロ−７−メチルビシクロ［４．３．０．］ノナン、ペルフルオロ−ｐ−ジイソプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロ−ｍ−ジイソプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロ−４−メチルオクタヒドロキノリジジン、ペルフルオロ−Ｎ−メチル−デカヒドロキノリン、Ｆ−メチル−１−オキサデカリン、ペルフルオロオクタヒドロキノリジジン、ペルフルオロ−５，６−ジヒドロ−５−デセン、ペルフルオロ−４，５−ジヒドロ−４−オクテン、ペルフルオロジクロロオクタン、及びペルフルオロビスクロロブチルエーテルである。米国特許第４，６８６，０２４号明細書に記載されているようなクロロアダマンタン及びクロロメチルアダマンタンのような塩素化ペルフルオロカーボンを用いることもできる。そのような化合物は、例えば、米国特許第３，９６２，４３９号、第３，４９３，５８１号、第４，１１０，４７４号、第４，１８６，２５３号、第４，１８７，２５２号、第４，２５２，８２４号、第４，４２３，０７７号、第４，４４３，４８０号、第４，５３４，９７８号、及び第４，５４２，１４７号、欧州特許出願第８０７１０号及び第１５８，９９６号、英国特許第１，５４９，０１８号、及びドイツ特許第２，６５０，５８６号明細書に記載されている。勿論、これら高度にフッ素化された有機化合物のいずれの混合物でも本発明のエマルジョン及び方法で用いることができることは理解されるべきである。Ｄ．界面活性剤界面活性剤は、通常ＭＲＩ剤の表面活性化度が不充分な場合、上で示した安定なエマルジョンを形成するのに必要である。どの適当な界面活性剤でも、単独又は他の界面活性剤と組合せて用いることができる。例えば、卵黄リン脂質又はプルロニクス(Pluronics)乳化剤を用いてもよい。プルロニクス剤はヤンドッテ(Wy andotte)によって販売されているブロック重合体ポリオールであり、例えば約８，０００の分子量を有するプルロニクスＦ６８を用いてもよい。コレステロール、ジアシルグリセロール、及びジアルキルエーテルグリセロールのエトキシル化物は有用な界面活性剤である。また、コレステロール、ジアシルグリセロール、又はジアルキルエーテルグリセロールの主鎖を用いて、エチレンオキシド、プロピレンオキシド及びエチレンオキシドをこの順序で種々の量で添加することによりブロック共重合体を作り、界面活性剤を生成させる。或る用途では非静脈用として陰イオン又は陽イオン性界面活性剤を用いることができる。本発明のエマルジョンは、カオフマン(Kaufman)及びリチャード(Richard)による１９９１年１１月１３日出願の米国特許出願ＳｅｒｉａｌＮｏ．７９１，４２０号に記載されているアルキルホスホリルコリン又はアルキルグリセロホスホリルコリン界面活性剤を含んでいてもよい。これら界面活性剤の特別な例は、１，２−ジオクチルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１，２−ジテトラデシルグリセロ−３− ホスホリルコリン、１，２−ジヘキサデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１，２−ジ−オクタデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−ヘキサデシル −２−テトラデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−オクタデシル−２− テトラデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−テトラデシル−２−オクタデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−ヘキサデシル−２−オクタデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１，２−ジオクタデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−オクタデシル−２−ヘキサデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、１−テトラデシル−２−ヘキサデシルグリセロ−３−ホスホリルコリン、２，２−ジテトラデシル−１−ホスホリルコリンエタン、及び１−ヘキサデシル−テトラデシルグリセロ−３−ホスホリルコリンである。カオフマン及びリチャードによる１９９４年４月１５日に出願された米国特許出願ＳｅｒｉａｌＮｏ．２２８，２２４号に記載されているような１，３−ジアルキルグリセロホスホリルコリン界面活性剤を用いることもでき、その記載は参考のためここに入れてある。これらの新規な界面活性剤と他の既知の界面活性剤との混合物も用いることができる。陰イオン性界面活性剤には、アルキル又はアリールサルフェート、スルホネート、カルボキシレート、又はホスフェートが含まれる。陽イオン性界面活性剤には、モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキル又はアリールアンモニウム塩のようなものが含まれる。非イオン性界面活性剤には、親水性部分がポリオキシエチレン鎖、砂糖分子、ポリアルコール誘導体、又は他の親水性基からなるアルキル又はアリール化合物が含まれる。ツゥィッター(Zwitter)イオン性界面活性剤は、上記陰イオン性又は陽イオン性基の組合せを有し、その疎水性部分はポリイソブチレン又はポリプロピレンオキシドのような他の重合体からなる。Ｅ．エマルジョンの特性本発明のエマルジョンは、上記成分を水中に分散し、それらを均質化することにより製造される。油及び（又は）ＰＦＣを水中に分散し、常磁性金属キレート錯体の分散を促進する。界面活性剤は液相の安定化により分散を促進する。分散物はここではエマルジョンとして一般に言及されているが、それらは溶液、ミセル状溶液、マイクロエマルジョン、小胞状懸濁物、又はこれら物理的状態の全ての混合物であってもよいことは理解されるべきである。ＰＦＣを油中に分散し、油・ＰＦＣ相を水中に乳化することができる。しかし、他の可能な界面及び相も本発明の範囲内に入る。従って、ここで用いる用語「エマルジョン」は、これらの状態の全てを包含し、界面活性剤はフルオロケミカル、油、常磁性金属キレート錯体、及び水の相のこれら物理的状態の安定な混合物を促進するのに用いられている。例えば、フルオロケミカル及び油は、クラーク(Clark)及びシャウ(Shaw )による欧州特許出願８７３００４５４．３に記載されているように、水中に乳化することができ、この出願は適当なＰＦＣ／油エマルジョンをＭＲＩ導入剤として記述するための参考としてここに入れてある。本発明のＭＲＩエマルジョンは、非常に微細で安定なエマルジョンである。「微細(fine)」エマルジョンの条件は、顕微鏡的（３００〜４００Ｘ）に見ることのできない固体物質であり、約０．８μｍ（ＣＶ）より大きな粒子は１０体積％より少ない。比較される従来法の「低品質(poor)」エマルジョンは、顕微鏡で見ることができる大きな（＞５μｍ）の固体を多量に含み、然も約０．８μｍ（ＣＶ）より大きな粒子が１０体積％より多い。図面の第１図を参照すると、そこには３００〜４００Ｘで微細及び低品質のエマルジョンの粒子構造の微視的外観が写真により証明されている。第１図では、微細エマルジョンは２％のレシチン、１０％の紅花油、及び５％の本発明のＧｄＤＴＰＡ−ビス（Ｎ−ステアリル−Ｎ −ヒドロキシルアミド）を含んでいる（表９）。低品質エマルジョンは同じ成分を含んでいるが、但しそれは比較のため表６のＧｄＤＴＰＡ−ビス（ステアリルアミド）を含んでいる。従って、これら二種類の錯体は、ヒドロキシル基についてのみそれら錯体が異なっているだけであるが、著しく異なった品質のエマルジョンを形成している。〔図面の簡単な説明〕第１図は、３００〜４００Ｘでの微細及び低品質のエマルジョンの粒子構造を示す顕微鏡写真である。第２図は、肝臓のＭＲＩ影像のコントラスト化前及びコントラスト化後の写真である。次の実施例は本発明の種々の態様を例示しているが、それによって本発明は、限定されるものではない。ＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）のための一般的手順静止窒素雰囲気中又はＣａＳＯ₄乾燥管の中で、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）二無水物（１モル）及び無水ピリジン（２〜２４．７モル、好ましくは３．３モル）をクロロホルム〔０〜３リットル／モル（ＤＴＰＡ二無水物）、好ましくは１リットル／モル〕中に入れ、機械的に撹拌した混合物を、適当なヒドロキシルアミン（２モル）をクロロホルム〔０〜２．５リットル／モル（ヒドロキシルアミン）、好ましくは０．２５リットル／モル〕中に入れた溶液を滴下して処理した。或る場合には穏やかな発熱が見られた。次に得られた混合物を還流下（６５℃ ｗ／ｏクロロホルム溶媒）で１７〜２２時間加熱した。仕上げ手順Ａ：周囲温度まで冷却した後、得られた反応混合物をアセトン〔４〜５リットル／リットル(ＣＨＣｌ₃)〕で希釈し、０℃に冷却した。得られた固体を濾過し、アセトンで洗浄した。或る場合には、得られた固体を適当な溶媒により再結晶して対応するＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）を与えることにより更に精製した（一層詳細な点については表１参照）。これらの化合物は元素分析（表２参照）、赤外分光分析、プロトン及び炭素核磁気共鳴分光分析により特徴を調べた。或る誘導体については純度を調べるため高性能液体クロマトグラフィーも用いた。仕上げ手順Ｂ：少量ずつアセトンで希釈することにより沈澱が生じないならば、得られた反応混合物を５％ＨＣｌで洗浄し、ピリジンを除去し、次に飽和食塩水で洗浄した。ＭｇＳＯ₄で乾燥した後、真空中で濃縮し、ベージュ色のガラス状物質として粗製ＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）を生成した（一層詳細な点については表１参照）。或る場合には、クロロホルムとメタノールの混合物を用い、シリカゲルによるカラムクロマトグラフィーを用いて微量の不純物を除去した。これらの化合物は更に元素分析（表３参照）、赤外分光分析、プロトン及び炭素核磁気共鳴分光分析により特徴を調べた。純度を調べるため高性能液体クロマトグラフィーも用いた。上記手順を用いて種々のＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）リガンドを製造した。次の表１には、仕上げ手順Ａ又はＢに従った上記一般式による種々のＮＲ₁Ｒ₂を与えている。ＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）リガンドを有するガドリニウム錯体のための一般的手順酸化ガドリニウム及び対応するＤＴＰＡビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）の化学量論的当量を７５：２２：３（Ｖ／Ｖ／Ｖ）のＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ：Ｈ₂Ｏ（約０．１モル錯体／溶媒１リットル）に入れたものを撹拌しながら１８〜２５時間還流下で加熱した。周囲温度に冷却した後、溶液をセライトに通して濾過し、微量のＧｄ₂Ｏ₃を除去した。濾液を真空中で濃縮し、灰色がかった白色の固体又はガラスを生成させた。得られた固体を適当な溶媒により再結晶するか、又は別に指示しない限り表２に示したように高温アセトンでスラリーにした。或る場合には得られた固体を真空炉中で５０〜６５℃で、２９ｉｎＨｇの真空度で一晩乾燥した。有機溶媒混合物中へのＧｄ₂Ｏ₃の溶解、遊離リガンドに対する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、及び赤外分光分析により錯体化が成功したことが証明された。別法として、錯体を形成するのにＧｄＣｌ₃・６Ｈ₂Ｏを用いることができた。反応の完了はＴＬＣにより監視した。反応が完了した時、ＮａＯＨ水溶液を用いて反応混合物を中和し、沈澱したＮａＣｌをセライトによる濾過により除去した。一般に、分離した生成物の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は１成分９０％より大きかった。非対称性Ｎ，Ｎ−二置換ＤＴＰＡヒドロキシルアミドの場合には、ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析により四つの主要ピークが明らかであり、錯化リガンド中の二つのアキラル窒素原子による異性体及びアミド結合の周りの束縛回転を示唆していた。これらの錯体の元素分析も行い、表３に報告する。上記詳細な説明に従って製造された本発明のＭＲＩエマルジョンは、本発明の範囲外の他の常磁性金属イオンキレート錯体と比較して、種々の範疇のエマルジョンに特徴付けることができる。本発明によれば、微細エマルジョンを生ずる常磁性金属キレート錯体は、Ｒ₁が飽和した窒素上の長い炭素鎖（Ｃ₁₀〜Ｃ₃₀）であり、Ｒ₂がヒドロキシルである場合の上記一般式に従ったものとして分類されている。微細エマルジョンを生ずる本発明のエマルジョン及び錯体の範疇は、表５に報告したように、低品質エマルジョンを生ずる他のエマルジョン及び錯体と比較されるものである。本発明の錯体及び他の錯体のリガンドに対する記号を表４に示す。上記表５から決定されるように、範疇４のエマルジョン及びキレート錯体は、本発明に従って微細なエマルジョンを生ずるＭＲＩキレート錯体を代表するものである。範疇１〜３のエマルジョン及びキレート錯体は低品質のエマルジョンを生ずる。上記範疇１〜４の各々についての表に要約したものを次の表６〜８に報告する。表６に示したように比較例範疇＃１に関して、ＧｄＤＴＰＡ−ＢＳＡによって表されているように、Ｒ₁が一つの飽和鎖であり、Ｒ₂が水素である場合、界面活性剤レシチン、油、及びＰＦＤＣＯを含む種々の組成物にも拘わらず低品質のエマルジョンが生成したことが分かる。更に、星印(*)によって示されたエマルジョンに関して、それらは余りにも粘稠で測定できなかった。表７及び８の比較例範疇＃２及び＃３に関して、Ｒ₁及びＲ₂が二つの飽和した鎖又は一つの不飽和鎖及び一つの長鎖Ｃ＞２である場合、エマルジョンは大きな固体を有するか、又は簡単にエマルジョンにすることはできなかった。表８では、星印(*)は、殺菌によりエマルジョンは破壊され、粒径は余りにも大き過ぎてサブミクロン粒径測定器によって測定することはできなかったことを示している。これに対して本発明は、範疇＃４が示されている表９に示されている。換言すれば、Ｒ₁がＣ₁₀〜Ｃ₃₀の飽和鎖であり、Ｒ₂がヒドロキシルである場合、優れたエマルジョンが得られた。更に、現在では最も好ましい常磁性金属キレート錯体は、０．８μより大きいＣＶが約１％である優れたエマルジョンを与えるＧｄＤＴＰＡ−ＢＳＨＡである。エマルジョンのＭＲＩ有用性は、５％のＧｄＤＴＰＡ−ＢＳＨＡを含有するエマルジョンを用いてウサギの肝臓を強化(enhancement)することにより決定した。第２図は、１０μモルのガドリニウム／ｋｇの投与量で静脈内に投与した後、肝臓にほぼ１００％の強化が起きたことを示している。肝臓に対するその強化効果は少なくとも１時間持続した。影像は、１．５テスラで作動するジェネラル・エレクトリック・シグナ(General Electric Signa)全身臨床スキャナーで標準Ｔ₁ −荷重スピン・エコー連続撮影により収集した。本発明のエマルジョンと比較するため、上記本発明の背景で言及した米国特許第５，１２０，５２７号明細書からの実施例Ｉ及びVII を再現した。これらの手順によるこの’５２７特許で作られたエマルジョンは目で見える固体を含まないが、それらは１０〜約３０μの程度の非常に大きな粒子を含み、従ってＩＶ用途には許容できなかった。ゲリトール(Geritol)(登録商標名)を含有するエマルジョンに関して、その組成物は６０ｍｌのゲリトール、１５０ｍｌの溶融アイスクリーム、２５０ｍｌのミルク、及び１００ｍｌのコーン油を含んでいた。他の性質には６．０５ｃｐの粘度、８．１７μのＣＭ、及び８３．１％のＣＶが含まれている。ゲリトールエマルジョンも殺菌で破壊された。ＧｄＤＴＰＡエマルジョンは０．５モル（１．０ｍｌ）のＧｄＤＴＰＡ、１５０ｍｌの溶融アイスクリーム、２５０ｍｌのミルク、及び１００ｍｌのコーン油を含み、そのエマルジョンの他の性質には８．１８ｃｐの粘度、１６．３μのＣＭ、及び７１．８％のＣＶが含まれていた。要約すると、上記’５２７特許のエマルジョンは、ＩＶ用としては許容できず、本発明のエマルジョンの万能性は持たない。それらは上記実験で明らかにされているように、殺菌で安定性を失う。上記詳細な説明を見て、本発明の本質及び範囲から離れることなく、他の変更又は修正を行うことができるであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１１月２８日【補正内容】（１）これらの特許は、当分野の従来の文献の例であると考えられる。上記特許に開示された種類の常磁性薬剤は、水溶液の形で患者に投与されている。更に、米国特許第５，０６４，６３６号及び第５，１２０，５２７号明細書に記載されているように、胃腸管でのＭＲＩ影像のために常磁性油エマルジョンが与えられている。器官影像剤の外、血液プール剤として、又は他の用途、例えば、骨髄、脾臓、肝臓、又はリンパ節のための影像剤として効果的に働くＭＲＩコントラスト剤として常磁性金属イオンの錯体を開発する努力が続けられている。リポソームもＭＲＩコントラスト剤として研究されており、最近ＰＣＴ出願ＷＯ９２／２１０７に記載されているように、リポ可溶性コントラスト剤を液体エマルジョンの形で投与してもよい。そのＰＣＴ出願のコントラスト剤は、肝臓、血液プール、及び網内系（ＲＥＳ）の影像に有用である。当分野での従来の努力にも拘わらず、改良されたＭＲＩコントラスト剤に対する必要性が依然として存在している。特に、器官影像剤としてのみならず、血液プール剤、及び網内系の一般的影像剤として有効に働くＭＲＩコントラスト剤が必要である。安定で用途の広いＭＲＩコントラスト剤が必要であり、特に静脈内用のためのものが必要である。〔発明の開示〕本発明は、ＭＲＩのための常磁性錯体及びそれを含有するエマルジョンに関する。ＭＲＩ影像を向上させるための生理学的に許容出来るエマルジョンは、水、分散された油相、及び常磁性金属イオンと次の式を有する有機キレート剤の錯体を含む：式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、少なくとも一つのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。そのようなキレート錯体を用いて非常に微細で安定なエマルジョンを作ることができることが発見された。これらのエマルジョンは熱安定化後も安定なままである。更に、これらのエマルジョンは静脈内に用いることができ、優れたＭＲＩ影像を与える。（２）カオフマン及びリチャードによる１９９４年４月１５日に出願された米国特許出願ＳｅｒｉａｌＮｏ．２２８，２２４号に記載されているような１，３−ジアルキルグリセロホスホリルコリン界面活性剤を用いることもできる。これらの新規な界面活性剤と他の既知の界面活性剤との混合物も用いることができる。陰イオン性界面活性剤には、アルキル又はアリールサルフェート、スルホネート、カルボキシレート、又はホスフェートが含まれる。陽イオン性界面活性剤には、モノ−、ジ−、トリ−、及びテトラ−アルキル又はアリールアンモニウム塩のようなものが含まれる。非イオン性界面活性剤には、親水性部分がポリオキシエチレン鎖、砂糖分子、ポリアルコール誘導体、又は他の親水性基からなるアルキル又はアリール化合物が含まれる。ツゥィッター(Zwitter)イオン性界面活性剤は、上記陰イオン性又は陽イオン性基の組合せを有し、その疎水性部分はポリイソブチレン又はポリプロピレンオキシドのような他の重合体からなる。Ｅ．エマルジョンの特性本発明のエマルジョンは、上記成分を水中に分散し、それらを均質化することにより製造される。油及び（又は）ＰＦＣを水中に分散し、常磁性金属キレート錯体の分散を促進する。界面活性剤は液相の安定化により分散を促進する。分散物はここではエマルジョンとして一般に言及されているが、それらは溶液、ミセル状溶液、マイクロエマルジョン、小胞状懸濁物、又はこれら物理的状態の全ての混合物であってもよいことは理解されるべきである。ＰＦＣを油中に分散し、油・ＰＦＣ相を水中に乳化することができる。しかし、他の可能な界面及び相も本発明の範囲内に入る。従って、ここで用いる用語「エマルジョン」は、これらの状態の全てを包含し、界面活性剤はフルオロケミカル、油、常磁性金属キレート錯体、及び水の相のこれら物理的状態の安定な混合物を促進するのに用いられている。例えば、フルオロケミカル及び油は、クラーク(Clark)及びシャウ(Shaw )による欧州特許出願８７３００４５４．３に記載されているように、水中に乳化することができ、この出願は適当なＰＦＣ／油エマルジョンをＭＲＩ導入剤として記述している。（３）１．常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、少なくとも一つのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体。（４）８．水、分散した油相、及び常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、少なくとも一つのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体からなるＭＲＩ影像強化のための生理学的に許容可能なエマルジョン。９．金属イオンが原子番号５８〜７０のランタニド元素又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１０．金属イオンがＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄、及びジスプロシウムからなる群から選択されている、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１１．有機キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１２．各Ｒ₁がＣ₁₄〜Ｃ₂₂である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。（５）２０．水、油及びフルオロケミカル及びそれらの混合物からなる群から選択された分散した油相、界面活性剤、及び常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、少なくとも一つのＭ基はＮＲ₁Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体からなるＭＲＩ影像強化のための生理学的に許容可能なエマルジョン。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者グラビアク，レイモンドシー. アメリカ合衆国 63403 ミズーリ州メリーランドハイツ，ルールアベニュー 2016 (72)発明者リー，アルバートシー. アメリカ合衆国 63017 ミズーリ州チェスターフィールド，リバーウェイドライブ 13648，アパートメントジー

Claims

【特許請求の範囲】１．常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、残りのＭ基はＮＲ₁ Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体。２．金属イオンが原子番号５８〜７０のランタニド元素又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属である、請求項１に記載の錯体。３．金属イオンがＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄、及びジスプロシウムからなる群から選択されている、請求項１に記載の錯体。４．有機キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸である、請求項１に記載の錯体。５．各Ｒ₁がＣ₁₄〜Ｃ₂₂である、請求項１に記載の錯体。６．有機キレート剤が、Ｒ₁がステアリル、テトラデシル、及びヘキサデシルからなる群から選択されている場合のモノ又はビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）である、請求項１に記載の錯体。７．錯体が、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ステアリル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−テトラデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、又はガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）からなる群から選択されている、請求項１に記載の錯体。８．水、分散した油相、及び常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、残りのＭ基はＮＲ₁ Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体からなるＭＲＩ影像強化のための生理学的に許容可能なエマルジョン。９．金属イオンが原子番号５８〜７０のランタニド元素又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１０．金属イオンがＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄、及びジスプロシウムからなる群から選択されている、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１１．有機キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１２．各Ｒ₁がＣ₁₄〜Ｃ₂₂である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１３．有機キレート剤が、Ｒ₁がステアリル、テトラデシル、及びヘキサデシルからなる群から選択されている場合のモノ又はビス（Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１４．錯体が、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ステアリル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−テトラデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、又はガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）である、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１５．約１μより小さな平均粒径を有する、請求項８に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。１６．約０．８μより大きな粒子が１０体積％より少ない、熱安定化後に安定な、請求項８に記載のエマルジョン。１７．油相が約５〜約２５％ｗ／ｖの油、又は約５〜約５５％ｖ／ｖのフルオロケミカルを含有する、請求項８に記載のエマルジョン。１８．油が、モノ−、ジ−、及びトリ−グリセリド、及びそれらの混合物からなる群から選択されている、請求項８に記載のエマルジョン。１９．界面活性剤が、エマルジョンの約０．５〜約１０重量％の量で存在する、請求項１７に記載のエマルジョン。２０．水、油及びフルオロケミカル及びそれらの混合物からなる群から選択された分散した油相、界面活性剤、及び常磁性金属イオンと、次の式：〔式中、２〜５のＭ基はヒドロキシルであり、ｎ＝０〜２、残りのＭ基はＮＲ₁ Ｒ₂（各Ｒ₁はＣ₁₀〜Ｃ₃₀飽和脂肪族基であり、Ｒ₂はヒドロキシルである）である。〕を有する有機キレート剤との錯体からなるＭＲＩ影像強化のための生理学的に許容可能なエマルジョン。２１．金属イオンが原子番号５８〜７０のランタニド元素又は原子番号２１〜２９、４２又は４４の遷移金属である、請求項２０に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。２２．金属イオンがＧｄ(III)、Ｍｎ（II）、鉄、及びジスプロシウムからなる群から選択されている、請求項２０に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。２３．有機キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸からなる群から選択された酸である、請求項２０に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。２４．各Ｒ₁がＣ₁₄〜Ｃ₂₂である、請求項２０に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。２５．錯体が、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ステアリル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−テトラデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）、又はガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸ビス（Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ−ヒドロキシルアミド）である、請求項２０に記載の生理学的に許容可能なエマルジョン。２６．フルオロケミカルが、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロメチルデカリン、ペルフルオロジメチルアダマンタン、臭化ペルフルオロオクチル、ペルフルオロ−４−メチルオクタヒドロキノリジジン、ペルフルオロ−Ｎ−メチル−デカヒドロキノリン、Ｆ−メチル−１−オキサデカリン、ペルフルオロビシクロ［５．３．０．］デカン、ペルフルオロオクタヒドロキノリジジン、ペルフルオロ −５，６−ジヒドロ−５−デセン、ペルフルオロ−４，５−ジヒドロ−４−オクテン、ペルフルオロジクロロオクタン、ペルフルオロビスクロロブチルエーテル、及び塩素化ペルフルオロカーボン、及びそれらの混合物からなる群から選択されている、請求項２０に記載のエマルジョン。２７．約０．８μより大きな粒子が１０体積％より少ない、熱安定化後に安定な、請求項２０に記載のエマルジョン。２８．油相が約５〜約２５％ｗ／ｖの油、又は約５〜約５５％ｖ／ｖのフルオロケミカルを含有する、請求項２０に記載のエマルジョン。２９．油が、モノ−、ジ−、及びトリ−グリセリド、及びそれらの混合物からなる群から選択されている、請求項２０に記載のエマルジョン。３０．約１μより小さな平均粒径を有する、請求項２０に記載のエマルジョン。３１．約０．２〜約０．４μの平均粒径を有する、請求項３０に記載のエマルジョン。３２．界面活性剤が、エマルジョンの約０．５〜約１０重量％の量で存在する、請求項２８に記載のエマルジョン。３３．影像改良に有効な量の請求項１に記載の錯体を目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３４．影像改良に有効な量の請求項３に記載の錯体を目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３５．影像改良に有効な量の請求項８に記載のエマルジョンを目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３６．影像改良に有効な量の請求項２０に記載のエマルジョンを目的物に静脈内投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３７．影像改良に有効な量の請求項２２に記載のエマルジョンを目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３８．影像改良に有効な量の請求項２４に記載のエマルジョンを目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。３９．影像改良に有効な量の請求項２７に記載のエマルジョンを目的物に投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。４０．影像改良に有効な量の請求項２８に記載のエマルジョンを目的物に静脈内投与することからなる、目的物のＭＲＩ影像方法。