JPH11322916A - ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマー - Google Patents
ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマーInfo
- Publication number
- JPH11322916A JPH11322916A JP14204498A JP14204498A JPH11322916A JP H11322916 A JPH11322916 A JP H11322916A JP 14204498 A JP14204498 A JP 14204498A JP 14204498 A JP14204498 A JP 14204498A JP H11322916 A JPH11322916 A JP H11322916A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polymer
- enzyme
- group
- formula
- biotin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Polyethers (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ビオチンを片末端に有するヘテロテレケリッ
クポリマーの提供。 【解決手段】 一般式（Ｉ） 【化１】 式中、Ａはアルキレンオキシ基であり、Ｂはビオチン残
基を含有する基であり、ｎは２〜２０，０００の整数で
あるヘテロテレケリックポリマー、並びに式（Ｉ）のα
−末端アルデヒド基を用いて式（Ｉ）のポリマーを酵素
に共有結合させた修飾酵素。
クポリマーの提供。 【解決手段】 一般式（Ｉ） 【化１】 式中、Ａはアルキレンオキシ基であり、Ｂはビオチン残
基を含有する基であり、ｎは２〜２０，０００の整数で
あるヘテロテレケリックポリマー、並びに式（Ｉ）のα
−末端アルデヒド基を用いて式（Ｉ）のポリマーを酵素
に共有結合させた修飾酵素。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヘテロテレケリッ
クポリマー、具体的には片末端（α−末端）にアルデヒ
ド基を有し、そしてもう一方の末端（ω−末端）にビオ
チン残基を有するヘテロテレケリックポリオキシエチレ
ン、ならびにそれらと酵素のコンジュゲートである修飾
酵素に関する。
クポリマー、具体的には片末端（α−末端）にアルデヒ
ド基を有し、そしてもう一方の末端（ω−末端）にビオ
チン残基を有するヘテロテレケリックポリオキシエチレ
ン、ならびにそれらと酵素のコンジュゲートである修飾
酵素に関する。
【０００２】
【発明の背景】酵素−抗体のコンジュゲートを生体内に
投与し、かかるコンジュゲートを標的とする抗原部位に
集積させ、一方、用いた酵素により活性化されるプロド
ラッグを投与し、抗原部位でプロドラッグを活性型のド
ラッグとして、標的部位で選択的に薬効を生じさせる、
薬物療法が提案されている。かような薬物療法は、所
謂、抗体指示性酵素プロドラッグ療法（antibody−dire
cted enzyme prodrug therapy）（以下、ＡＤＥＰＴ
ともいう）と称されており、毒性の高い薬物を毒性の低
いプロドラッグとして全身的に投与するが、予め標的部
位に集積せしめた酵素活性を利用して、該標的部位にお
いて、本来的な薬物の薬効を選択的に発揮させようとす
る、極めて興味深い療法である。
投与し、かかるコンジュゲートを標的とする抗原部位に
集積させ、一方、用いた酵素により活性化されるプロド
ラッグを投与し、抗原部位でプロドラッグを活性型のド
ラッグとして、標的部位で選択的に薬効を生じさせる、
薬物療法が提案されている。かような薬物療法は、所
謂、抗体指示性酵素プロドラッグ療法（antibody−dire
cted enzyme prodrug therapy）（以下、ＡＤＥＰＴ
ともいう）と称されており、毒性の高い薬物を毒性の低
いプロドラッグとして全身的に投与するが、予め標的部
位に集積せしめた酵素活性を利用して、該標的部位にお
いて、本来的な薬物の薬効を選択的に発揮させようとす
る、極めて興味深い療法である。
【０００３】しかしながら、ＡＤＥＰＴを実施する上
で、（ａ）酵素−抗体コンジュゲートの作成には、極め
て精緻な技術が必要であり、かつ相当な経費を要する、
（ｂ）酵素−抗体コンジュゲート自体が免疫原性（また
は抗原性）を示すことにより、使用薬物に由来するもの
以外の新たな副作用を惹起する可能性がある、（ｃ）酵
素を結合させた抗体が立体障害等により、標的部位に充
分集積せず、かなりの量が血流中などの標的部位以外に
存在し、結果として、使用薬物による全身的な副作用が
生じる可能性がある、などの問題点がある。
で、（ａ）酵素−抗体コンジュゲートの作成には、極め
て精緻な技術が必要であり、かつ相当な経費を要する、
（ｂ）酵素−抗体コンジュゲート自体が免疫原性（また
は抗原性）を示すことにより、使用薬物に由来するもの
以外の新たな副作用を惹起する可能性がある、（ｃ）酵
素を結合させた抗体が立体障害等により、標的部位に充
分集積せず、かなりの量が血流中などの標的部位以外に
存在し、結果として、使用薬物による全身的な副作用が
生じる可能性がある、などの問題点がある。
【０００４】本発明者らは、かような問題点を解決する
には、（ｉ）簡易な酵素キャリアの調製、（ｉｉ）抗原
性の低減、（ｉｉｉ）特定の標的部位、例えば腫瘍部位
への酵素の集積性を向上させる、手段の開発を目差して
きた。
には、（ｉ）簡易な酵素キャリアの調製、（ｉｉ）抗原
性の低減、（ｉｉｉ）特定の標的部位、例えば腫瘍部位
への酵素の集積性を向上させる、手段の開発を目差して
きた。
【０００５】上記手段の開発を行うに際し、本発明者ら
は、酵素をポリエチレングリコール（またはポリオキシ
エチレン）で修飾すると、酵素の抗原性を低下せしめる
可能性があることに着目した（例えば、稲田、「続タン
パク質ハイブリッド」共立出版、ｐ．２−４参照）。ま
た、一般的に、腫瘍細胞の細胞膜は、通常細胞のそれに
比べて、物質の透過性が増し、ポリマーの取り込み、細
胞内滞留が長くなることも知られている（前田ら、例え
ば、Bioconju．Chem., ３、（１９９２）１２８〜１３
９参照）。
は、酵素をポリエチレングリコール（またはポリオキシ
エチレン）で修飾すると、酵素の抗原性を低下せしめる
可能性があることに着目した（例えば、稲田、「続タン
パク質ハイブリッド」共立出版、ｐ．２−４参照）。ま
た、一般的に、腫瘍細胞の細胞膜は、通常細胞のそれに
比べて、物質の透過性が増し、ポリマーの取り込み、細
胞内滞留が長くなることも知られている（前田ら、例え
ば、Bioconju．Chem., ３、（１９９２）１２８〜１３
９参照）。
【０００６】他方、本発明者らの一部は、多機能性の生
体親和性のポリマーとして、主鎖中にポリオキシエチレ
ンセグメントを有し、分子の両末端に異種官能基を有す
るヘテロテレケリックポリマーの開発を行ってきた（例
えば、国際公開第９７／６２０２号等参照）。
体親和性のポリマーとして、主鎖中にポリオキシエチレ
ンセグメントを有し、分子の両末端に異種官能基を有す
るヘテロテレケリックポリマーの開発を行ってきた（例
えば、国際公開第９７／６２０２号等参照）。
【０００７】
【発明の構成】本発明者らは、かようなヘテロテレケリ
ックポリマーの片末端官能基を介して、生体内の標的部
位以外（例えば、血流中）に存在するポリマーを選択的
に除去しうるように修飾し、そしてもう一つの末端の官
能基を介して酵素を共有結合せしめた酵素−合成ポリマ
ーコンジュゲートは、生体内に投与後、標的部位へ集積
し、また、血流中に存在する該コンジュゲートは、選択
的に除去しうるように修飾した官能基を利用して生体外
へ排泄除去しうるものと推察した。
ックポリマーの片末端官能基を介して、生体内の標的部
位以外（例えば、血流中）に存在するポリマーを選択的
に除去しうるように修飾し、そしてもう一つの末端の官
能基を介して酵素を共有結合せしめた酵素−合成ポリマ
ーコンジュゲートは、生体内に投与後、標的部位へ集積
し、また、血流中に存在する該コンジュゲートは、選択
的に除去しうるように修飾した官能基を利用して生体外
へ排泄除去しうるものと推察した。
【０００８】以上の推察に基づき、ポリエチレングリコ
ール（以下、ＰＥＧともいう）セグメントの片末端（α
−末端）に酵素（タンパク質）と容易に共有結合を形成
しうるアルデヒド基を有し、もう一方の末端にビオチン
残基を有するポリマーは、上記酵素−抗体コンジュゲー
トに随伴する問題点を有意に解消しうる、酵素−ＰＥＧ
コンジュゲートを容易に提供できることを見い出した。
酵素−ＰＥＧ−ビオチン残基からなるコンジュゲートが
血流中に存在する場合、別にアビジンを投与すると血流
中で前記コンジュゲートのビオチンとアビジンとの複合
体を形成し、容易に生体外へ排泄させるであろう。ま
た、アルデヒド基−ＰＥＧ−ビオチン残基からなるヘテ
ロテレケリックポリマーは、生体成分の診断用ツール等
としても、有用であろう。
ール（以下、ＰＥＧともいう）セグメントの片末端（α
−末端）に酵素（タンパク質）と容易に共有結合を形成
しうるアルデヒド基を有し、もう一方の末端にビオチン
残基を有するポリマーは、上記酵素−抗体コンジュゲー
トに随伴する問題点を有意に解消しうる、酵素−ＰＥＧ
コンジュゲートを容易に提供できることを見い出した。
酵素−ＰＥＧ−ビオチン残基からなるコンジュゲートが
血流中に存在する場合、別にアビジンを投与すると血流
中で前記コンジュゲートのビオチンとアビジンとの複合
体を形成し、容易に生体外へ排泄させるであろう。ま
た、アルデヒド基−ＰＥＧ−ビオチン残基からなるヘテ
ロテレケリックポリマーは、生体成分の診断用ツール等
としても、有用であろう。
【０００９】したがって、本発明によれば、一般式
（Ｉ）
（Ｉ）
【００１０】
【化５】
【００１１】（式中、Ａは、アルキレンオキシ基であ
り、Ｂは連結基を介することができるビオチン残基であ
り、そしてｎは２〜２０，０００、好ましくは５０〜２
０,０００の整数である）で示されるヘテロテレケリッ
クポリマーが提供される。
り、Ｂは連結基を介することができるビオチン残基であ
り、そしてｎは２〜２０，０００、好ましくは５０〜２
０,０００の整数である）で示されるヘテロテレケリッ
クポリマーが提供される。
【００１２】また、かかるポリマーと酵素とのコンジュ
ゲートであって、具体的には、一般式（ＩＩ）
ゲートであって、具体的には、一般式（ＩＩ）
【００１３】
【化６】
【００１４】（式中、Ｅｎｚは、酵素の残基を表わし、
Ｙは酵素中のリジン残基のε位のアミノ基を介して形成
される少なくとも１個の共有結合であり、ｑは少なくと
も１以上であり、かつ最大、酵素残基中に含まれるリジ
ン残基の数であり、そしてＡ、Ｂ及びｎは一般式（Ｉ）
について定義したとおりである）で表わされる修飾酵素
も提供される。
Ｙは酵素中のリジン残基のε位のアミノ基を介して形成
される少なくとも１個の共有結合であり、ｑは少なくと
も１以上であり、かつ最大、酵素残基中に含まれるリジ
ン残基の数であり、そしてＡ、Ｂ及びｎは一般式（Ｉ）
について定義したとおりである）で表わされる修飾酵素
も提供される。
【００１５】これらの一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩ）
で示されるヘテロテレケリックポリマーは、上述のとお
り、医療分野で有用である。
で示されるヘテロテレケリックポリマーは、上述のとお
り、医療分野で有用である。
【００１６】
【発明の具体的な態様】本明細書にいう、ヘテロテレケ
リック（hetero−telechelic）の語は、ポリマーの両分
子末端に異種の官能基が存在していることを意味する。
したがって、本発明に従う、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）
に示されるいずれのポリマーまたは修飾酵素も、ヘテロ
テレケリックポリマーの範疇に入る。
リック（hetero−telechelic）の語は、ポリマーの両分
子末端に異種の官能基が存在していることを意味する。
したがって、本発明に従う、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）
に示されるいずれのポリマーまたは修飾酵素も、ヘテロ
テレケリックポリマーの範疇に入る。
【００１７】一般式（Ｉ）のポリマーにおける、式
【００１８】
【化７】
【００１９】で表される部位は、例えば、本発明者らの
提供した国際公開第９７／６２０２号に記載のブロック
ポリマーを製造するための、前駆体たるリビングＰＥＧ
の製造方法に準じて製造することができるポリマーであ
る（該国際公開の記載事項は、ここに引用することによ
り、本明細書の内容となる）。具体的には、Ａ、式
提供した国際公開第９７／６２０２号に記載のブロック
ポリマーを製造するための、前駆体たるリビングＰＥＧ
の製造方法に準じて製造することができるポリマーであ
る（該国際公開の記載事項は、ここに引用することによ
り、本明細書の内容となる）。具体的には、Ａ、式
【００２０】
【化８】
【００２１】（ここで、ｍは２〜６の正数である）で表
わされる、したがって、Ａの具体的な基としては、
わされる、したがって、Ａの具体的な基としては、
【００２２】
【化９】
【００２３】である。また、一般式（Ｉ）におけるＢの
定義である、連結基を介することのできるビオチン残基
とは、ビオチン−アビジンの複合体を形成しうる限り、
如何なる連結基を有していてもよいが、好ましくは、式
定義である、連結基を介することのできるビオチン残基
とは、ビオチン−アビジンの複合体を形成しうる限り、
如何なる連結基を有していてもよいが、好ましくは、式
【００２４】
【化１０】
【００２５】で表わされ、上式中のｐは０（Ｂ基は、連
結基を有さないビオチン残基に相当する）、或いは１
（連結基を有する場合に相当する）であって、ｐが１の
場合のＬは、Ｃ2〜6アルキレンアミノ基、Ｃ2〜6アルキ
レンオキシ基または
結基を有さないビオチン残基に相当する）、或いは１
（連結基を有する場合に相当する）であって、ｐが１の
場合のＬは、Ｃ2〜6アルキレンアミノ基、Ｃ2〜6アルキ
レンオキシ基または
【００２６】
【化１１】
【００２７】（先導するカルボニル基と一体となって、
Ｂ基がビオチンに由来する残基に相当する）の基であ
る。ｐが１であり、ＬがＣ2〜6アルキレンアミノ及びＣ
2〜6アルキレンオキシを表わす、Ｂ基は、ビオチンと対
応するラクタム及びラクトンの反応により誘導できる化
合物に由来する。
Ｂ基がビオチンに由来する残基に相当する）の基であ
る。ｐが１であり、ＬがＣ2〜6アルキレンアミノ及びＣ
2〜6アルキレンオキシを表わす、Ｂ基は、ビオチンと対
応するラクタム及びラクトンの反応により誘導できる化
合物に由来する。
【００２８】かような一般式（Ｉ）で示されるヘテロテ
レケリックポリマーは、通常、まず最初に、式
レケリックポリマーは、通常、まず最初に、式
【００２９】
【化１２】
【００３０】のアルデヒド基を、例えばアセタール化等
により保護した化合物を、リビング重合触媒とともに重
合開始剤として用い、エチレオキシドをアニオン重合さ
せるそれ自体既知の重合法により、リビングポリマーを
製造する。次いで、この反応液中に、例えば式
により保護した化合物を、リビング重合触媒とともに重
合開始剤として用い、エチレオキシドをアニオン重合さ
せるそれ自体既知の重合法により、リビングポリマーを
製造する。次いで、この反応液中に、例えば式
【００３１】
【化１３】
【００３２】（式中、Ｌは上記定義のとおりである）で
示されるビオチン誘導体、また、必要によりそれらの活
性エステル、活性イミド、を加えて、上記重合反応を停
止させることにより、α−末端のアルデヒド基が保護さ
れた一般式（Ｉ）のポリマーを製造する。なお、この停
止反応は、典型的には、室温下で、５０時間まで反応液
を撹拌することにより行うことができる。こうして得ら
れたα−末端のアルデヒド基が保護されたポリマーの保
護基（通常、アセタール基）は、加水分解反応に供する
ことにより、一般式（Ｉ）のポリマーへ転化することが
できる。
示されるビオチン誘導体、また、必要によりそれらの活
性エステル、活性イミド、を加えて、上記重合反応を停
止させることにより、α−末端のアルデヒド基が保護さ
れた一般式（Ｉ）のポリマーを製造する。なお、この停
止反応は、典型的には、室温下で、５０時間まで反応液
を撹拌することにより行うことができる。こうして得ら
れたα−末端のアルデヒド基が保護されたポリマーの保
護基（通常、アセタール基）は、加水分解反応に供する
ことにより、一般式（Ｉ）のポリマーへ転化することが
できる。
【００３３】本発明では、上記式（Ｉ）のポリマーのα
−末端アルデヒド基を用いて、酵素（具体的には酵素中
のリジン残基のε位のアミノ基とのシッフ塩基の形成を
通して）に結合させ、さらにシッフ塩基をアミノ基に還
元することにより、一般式（ＩＩ）で示される修飾酵素
を提供しうる。
−末端アルデヒド基を用いて、酵素（具体的には酵素中
のリジン残基のε位のアミノ基とのシッフ塩基の形成を
通して）に結合させ、さらにシッフ塩基をアミノ基に還
元することにより、一般式（ＩＩ）で示される修飾酵素
を提供しうる。
【００３４】したがって、一般式（ＩＩ）におけるＥｎ
ｚ−は、酵素中の１個以上のリジン残基のε位アミノ基
に由来する結合手を有する酵素残基であり、Ｙは前記ε
位のアミノ基と一般式（Ｉ）のα−末端アルデヒド基と
により形成される共有結合を表わす。また、ｑは、少な
くとも１の整数を表わし、また酵素活性に悪影響を及ぼ
さない限り、最大、使用される酵素分子中に存在するリ
ジン残基の数まででありうるが、通常、１〜１０個程度
であることが好ましい。酵素は、本発明の目的に沿う限
り、複数のサブユニットからなるものであってもよい。
酵素としては、通常、薬物のエステル化、アミド化、イ
ミド化、リン酸化等によって、薬物本来の活性（毒性も
包含する）が低下したプロドラッグを、本来の薬物に変
換しうる作用を有するものが意図されているが、それら
に限定されない。なお、上記のような変換活性を有する
酵素はエステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼと称
されている既知の如何なる酵素であってもよい。またこ
れらの酵素の起源も、動物、植物または微生物のいずれ
に属するものであってもよい。
ｚ−は、酵素中の１個以上のリジン残基のε位アミノ基
に由来する結合手を有する酵素残基であり、Ｙは前記ε
位のアミノ基と一般式（Ｉ）のα−末端アルデヒド基と
により形成される共有結合を表わす。また、ｑは、少な
くとも１の整数を表わし、また酵素活性に悪影響を及ぼ
さない限り、最大、使用される酵素分子中に存在するリ
ジン残基の数まででありうるが、通常、１〜１０個程度
であることが好ましい。酵素は、本発明の目的に沿う限
り、複数のサブユニットからなるものであってもよい。
酵素としては、通常、薬物のエステル化、アミド化、イ
ミド化、リン酸化等によって、薬物本来の活性（毒性も
包含する）が低下したプロドラッグを、本来の薬物に変
換しうる作用を有するものが意図されているが、それら
に限定されない。なお、上記のような変換活性を有する
酵素はエステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼと称
されている既知の如何なる酵素であってもよい。またこ
れらの酵素の起源も、動物、植物または微生物のいずれ
に属するものであってもよい。
【００３５】こうして、提供される一般式（ＩＩ）で示
される修飾酵素は、実質的に未修飾酵素の有する酵素活
性をほとんど低減することな保持している。したがっ
て、これらの修飾酵素は、ビオチン残基の存在が悪影響
を及ぼさない限り、未修飾酵素の使用可能な条件を、場
合によって拡張する利点もある。
される修飾酵素は、実質的に未修飾酵素の有する酵素活
性をほとんど低減することな保持している。したがっ
て、これらの修飾酵素は、ビオチン残基の存在が悪影響
を及ぼさない限り、未修飾酵素の使用可能な条件を、場
合によって拡張する利点もある。
【００３６】
【実施例】以下、具体例を挙げて、本発明をさらに詳細
に説明するが、これらの例は、あくまで例示にすぎない
ことを、理解されたい。
に説明するが、これらの例は、あくまで例示にすぎない
ことを、理解されたい。
【００３７】実施例１：アセタール−ＰＥＯ−ビオチン
の製造
の製造
【００３８】
【化１４】
【００３９】アルゴン下、受器中、室温において、開始
剤３，３−ジエトキシ−１−プロパノール０．５ｍｍｏ
ｌ（０．０８ｍｌ）を溶媒ＴＨＦ ７．６ｍｌにマイク
ロシリンジで加え、Ｋ−ナフタレン０．５ｍｍｏｌ
（０．２８６ｍｏｌ／ｌ−ＴＨＦ溶液、１．７５ｍｌ）
を加えてメタル化を施した後、エチレンオキシド ２．
０ｍｌを加えて水冷下で２日間撹拌し、アニオン開環重
合を行った。この後、停止剤としてＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチンのＤＭＳＯ溶液（０．０６５ｍｏｌ／
ｌ）を２倍モル量（１５．４ｍｌ）加えて２日間停止反
応を行った。この後クロロホルム抽出、エーテル再沈、
吸引濾過、減圧乾燥、ベンゼン凍結乾燥により精製を行
った。この生成物の収率は８８．０％であった。
剤３，３−ジエトキシ−１−プロパノール０．５ｍｍｏ
ｌ（０．０８ｍｌ）を溶媒ＴＨＦ ７．６ｍｌにマイク
ロシリンジで加え、Ｋ−ナフタレン０．５ｍｍｏｌ
（０．２８６ｍｏｌ／ｌ−ＴＨＦ溶液、１．７５ｍｌ）
を加えてメタル化を施した後、エチレンオキシド ２．
０ｍｌを加えて水冷下で２日間撹拌し、アニオン開環重
合を行った。この後、停止剤としてＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチンのＤＭＳＯ溶液（０．０６５ｍｏｌ／
ｌ）を２倍モル量（１５．４ｍｌ）加えて２日間停止反
応を行った。この後クロロホルム抽出、エーテル再沈、
吸引濾過、減圧乾燥、ベンゼン凍結乾燥により精製を行
った。この生成物の収率は８８．０％であった。
【００４０】ＴＯＦ−ＭＳ（飛行時間型質量分析計）に
よる測定により、このポリマーは一峰性であり、その分
子量は約２６００であった。
よる測定により、このポリマーは一峰性であり、その分
子量は約２６００であった。
【００４１】また、これらのピークの測定値と計算値を
比較した結果、このポリマーはポリエチレンオキシドを
主鎖に有し、α−末端にアセタール基、ω−末端にビオ
チンを有するヘテロテレケリックポリマーであることが
確認された。
比較した結果、このポリマーはポリエチレンオキシドを
主鎖に有し、α−末端にアセタール基、ω−末端にビオ
チンを有するヘテロテレケリックポリマーであることが
確認された。
【００４２】さらに、得られたポリマーのＤＭＳＯ中で
のプロトン核磁気共鳴スペクトルより、このポリマーは
ポリエチレンオキシドを主鎖に有し、α−末端にアセタ
ール基、ω−末端にビオチンを有するヘテロテレケリッ
クポリマーであることが確認された（図１参照）。
のプロトン核磁気共鳴スペクトルより、このポリマーは
ポリエチレンオキシドを主鎖に有し、α−末端にアセタ
ール基、ω−末端にビオチンを有するヘテロテレケリッ
クポリマーであることが確認された（図１参照）。
【００４３】実施例２：ＯＣＨ−ＰＥＯ−ビオチンの製
造（脱アセタール化） 受器中において、アセタール−ＰＥＯ−ビオチンポリマ
ー０．２ｇを酢酸４ｍｌ＋氷０．４ｍｌの溶液に溶か
し、恒温槽（２０℃）中において５時間、アセタール基
の脱離反応（脱保護）を施した。この後クロロホルム抽
出、エーテル再沈、吸引濾過、減圧乾燥、ベンゼン凍結
乾燥により精製を行った。この生成物の収率は７９．６
％であった。
造（脱アセタール化） 受器中において、アセタール−ＰＥＯ−ビオチンポリマ
ー０．２ｇを酢酸４ｍｌ＋氷０．４ｍｌの溶液に溶か
し、恒温槽（２０℃）中において５時間、アセタール基
の脱離反応（脱保護）を施した。この後クロロホルム抽
出、エーテル再沈、吸引濾過、減圧乾燥、ベンゼン凍結
乾燥により精製を行った。この生成物の収率は７９．６
％であった。
【００４４】ＴＯＦ−ＭＳ（飛行時間型質量分析計）に
よる測定により、このポリマーは一峰性であり、その分
子量は２５００であった。またピークの測定値と計算値
を比較した結果、このポリマーはポリエチレンオキシド
を主鎖に有し、α−末端にアルデヒド基、ω−末端にビ
オチンを有するヘテロテレケリックポリマーであること
が確認された。
よる測定により、このポリマーは一峰性であり、その分
子量は２５００であった。またピークの測定値と計算値
を比較した結果、このポリマーはポリエチレンオキシド
を主鎖に有し、α−末端にアルデヒド基、ω−末端にビ
オチンを有するヘテロテレケリックポリマーであること
が確認された。
【００４５】得られたポリマーのＤＭＳＯ中でのプロト
ン核磁気共鳴スペクトルより、このポリマーはポリエチ
レンオキシドを主鎖に有し、α−末端にアルデヒド基、
ω−末端にビオチンを有するヘテロテレケリックポリマ
ーであることが確認された。 実施例３：酵素−ＰＥＯ−ビオチンの製造 反応容器中において、ｐＨ７．２に調製したＨＥＰＥＳ
緩衝溶液２ｍｌ（０．１Ｍ）にウシのカルボキシペプチ
ダーゼＡのトルエン溶液０．５２７ｍｌ（含タンパク質
１０ｍｇ）およびＣＨＯ−ＰＥＯ−ビオチンポリマー２
６．１ｍｇを加えて恒温槽中（２０℃）で３時間撹拌し
た。その後この混合溶液に還元剤ＮａＣＮＢＨ ３２．
１ｍｇを加え、２日間還元を行った。純水に対する透析
（分画分子量１２，０００〜１４，０００、２、４、
８、２４時間後に水交換）を２日間行うことで精製を行
った。
ン核磁気共鳴スペクトルより、このポリマーはポリエチ
レンオキシドを主鎖に有し、α−末端にアルデヒド基、
ω−末端にビオチンを有するヘテロテレケリックポリマ
ーであることが確認された。 実施例３：酵素−ＰＥＯ−ビオチンの製造 反応容器中において、ｐＨ７．２に調製したＨＥＰＥＳ
緩衝溶液２ｍｌ（０．１Ｍ）にウシのカルボキシペプチ
ダーゼＡのトルエン溶液０．５２７ｍｌ（含タンパク質
１０ｍｇ）およびＣＨＯ−ＰＥＯ−ビオチンポリマー２
６．１ｍｇを加えて恒温槽中（２０℃）で３時間撹拌し
た。その後この混合溶液に還元剤ＮａＣＮＢＨ ３２．
１ｍｇを加え、２日間還元を行った。純水に対する透析
（分画分子量１２，０００〜１４，０００、２、４、
８、２４時間後に水交換）を２日間行うことで精製を行
った。
【００４６】この反応溶液に対してＴＯＦ−ＭＳ（飛行
時間型質量分析計）による測定を行ったところ、ポリマ
ー修飾前のカルボキシペプチダーゼＡに由来するピーク
に対して、より高質量において、カルボキシペプチダー
ゼＡとＣＨＯ−ＰＥＯ−ビオチンが結合したものと思わ
れるピークを確認した（図２、図３）。
時間型質量分析計）による測定を行ったところ、ポリマ
ー修飾前のカルボキシペプチダーゼＡに由来するピーク
に対して、より高質量において、カルボキシペプチダー
ゼＡとＣＨＯ−ＰＥＯ−ビオチンが結合したものと思わ
れるピークを確認した（図２、図３）。
【図１】図１は実施例１で得られた、アセタール−ＥＰ
Ｏ−アビジンのプロトン核磁気共鳴スペクトラムであ
る。
Ｏ−アビジンのプロトン核磁気共鳴スペクトラムであ
る。
【図２】図２はカルボキシペプチダーゼＡのＴＯＦ−Ｍ
Ｓによる測定結果である。
Ｓによる測定結果である。
【図３】図３は実施例３で得られた酵素−ＰＥＯ−ビオ
チンのＴＯＦ−ＭＳによる測定結果である。
チンのＴＯＦ−ＭＳによる測定結果である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 グレン・エス・クウオン アメリカ合衆国ウイスコンシン州53719マ デイソン・テインバーレイクトレイルナン バー310 7409
Claims (3)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ａは、アルキレンオキシ基であり、Ｂは連結基
を介することができるビオチン残基であり、そしてｎは
２〜２０，０００の整数である）で示されるヘテロテレ
ケリックポリマー。 - 【請求項２】 Ａが、式 【化２】 （ここで、ｍは２〜６で示されるアルキレンオキシ基で
あり、そしてＢが、式 【化３】 （式中、ｐは０または１であり、そしてＬはＣ2〜6アル
キレンアミノ基、Ｃ2〜6アルキレンオキシ基、または−
ＣＨ(ＮＨ2)(ＣＨ2)4ＮＨ−基である）で表わされる基
である、請求項１記載のヘテロテレケリックポリマー。 - 【請求項３】 一般式（ＩＩ） 【化４】 （式中、Ｅｎｚは、酵素の残基を表わし、Ｙは酵素中の
リジン残基のε位のアミノ基を介して形成される少なく
とも１個の共有結合であり、ｑは少なくとも１以上であ
り、かつ最大、酵素残基中に含まれるリジン残基の数で
あり、そしてＡ、Ｂ及びｎは一般式（Ｉ）について定義
したとおりである）で表わされる修飾酵素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14204498A JPH11322916A (ja) | 1998-05-11 | 1998-05-11 | ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマー |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14204498A JPH11322916A (ja) | 1998-05-11 | 1998-05-11 | ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマー |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11322916A true JPH11322916A (ja) | 1999-11-26 |
Family
ID=15306096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14204498A Pending JPH11322916A (ja) | 1998-05-11 | 1998-05-11 | ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマー |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11322916A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7157546B2 (en) | 2002-09-09 | 2007-01-02 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Water-soluble polymer alkanals |
| JP2008518053A (ja) * | 2004-10-25 | 2008-05-29 | インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド | ヘテロ二官能性ポリ（エチレングリコール）およびそれらの使用 |
| WO2012133151A1 (ja) * | 2011-03-25 | 2012-10-04 | 日油株式会社 | 水酸基含有アセタール化合物の製造方法 |
| WO2013089182A1 (ja) * | 2011-12-14 | 2013-06-20 | 国立大学法人筑波大学 | 新規分岐ポリエチレングリコール及びその用途 |
-
1998
- 1998-05-11 JP JP14204498A patent/JPH11322916A/ja active Pending
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8076412B2 (en) | 2002-09-09 | 2011-12-13 | Nektar Therapeutics | Water-soluble polymer alkanals |
| US8853325B2 (en) | 2002-09-09 | 2014-10-07 | Nektar Therapeutics | Water-soluble polymer alkanals |
| US7511094B2 (en) | 2002-09-09 | 2009-03-31 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Water-soluble polymer alkanals |
| US7838595B2 (en) | 2002-09-09 | 2010-11-23 | Nektar Therapeutics | Water-soluble polymer alkanals |
| US7157546B2 (en) | 2002-09-09 | 2007-01-02 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Water-soluble polymer alkanals |
| JP4920593B2 (ja) * | 2004-10-25 | 2012-04-18 | インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド | ヘテロ二官能性ポリ（エチレングリコール）およびそれらの使用 |
| JP2011038118A (ja) * | 2004-10-25 | 2011-02-24 | Intezyne Technologies Inc | ヘテロ二官能性ポリ（エチレングリコール）およびそれらの使用 |
| JP2008518053A (ja) * | 2004-10-25 | 2008-05-29 | インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド | ヘテロ二官能性ポリ（エチレングリコール）およびそれらの使用 |
| WO2012133151A1 (ja) * | 2011-03-25 | 2012-10-04 | 日油株式会社 | 水酸基含有アセタール化合物の製造方法 |
| CN103443063A (zh) * | 2011-03-25 | 2013-12-11 | 日油株式会社 | 用于生产含羟基缩醛化合物的方法 |
| US8952203B2 (en) | 2011-03-25 | 2015-02-10 | Nof Corporation | Method for manufacturing hydroxyl group-containing acetal compound |
| WO2013089182A1 (ja) * | 2011-12-14 | 2013-06-20 | 国立大学法人筑波大学 | 新規分岐ポリエチレングリコール及びその用途 |
| JPWO2013089182A1 (ja) * | 2011-12-14 | 2015-04-27 | 国立大学法人 筑波大学 | 新規分岐ポリエチレングリコール及びその用途 |
| US9327034B2 (en) | 2011-12-14 | 2016-05-03 | University Of Tsukuba, A Japanese National University | Branched polyethylene glycol and use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7101932B2 (en) | Method for the preparation of 1-benzotriazolyl carbonate esters of poly (ethylene glycol) | |
| US7223803B2 (en) | Polyethylene (glycol) derivatives with proximal reactive groups | |
| JP4344110B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| US5965119A (en) | Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents | |
| US9238697B2 (en) | Polymeric materials and methods | |
| JPH09504299A (ja) | 非抗原性分枝ポリマー複合体 | |
| EP0769955A1 (en) | Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates | |
| EP1345982A2 (en) | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives | |
| JP2002508400A (ja) | アミノ及びヒドロキシル含有生物活性剤のポリマープロドラッグ | |
| US20040105839A1 (en) | Biologically active non-antigenic copolymer and conjugates thereof and methods for producing the same | |
| FR2766195A1 (fr) | Polymeres cationiques, complexes associant lesdits polymeres cationiques et des substances therapeutiquement actives comprenant au moins une charges negative, notamment des acides nucleiques, et leur utilisation en therapie genique | |
| WO2003037915A1 (en) | Biocompatible polymers including peptide spacer | |
| JPH11322916A (ja) | ビオチン残基を片末端に有するヘテロテレケリツクポリマー | |
| US6388041B1 (en) | Polyoxyethylene derivatives having optionally protected amino group at one end and process for producing the same | |
| JP2632518B2 (ja) | ビリルビンオキシダーゼの化学修飾体 | |
| WO2003046047A1 (fr) | Polymeres medicaux et leur utilisation | |
| JP6361083B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| JP3208570B2 (ja) | ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸（又はアスパラギン酸）のガラクトサミン置換体 | |
| EP0574638A1 (en) | Soluble dextran-glutathione complexes, method of preparing same and their use | |
| JP2012158759A (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| WO2021234676A1 (en) | Compounds and methods for suppressing an immune response to substances containing polyethylene glycol | |
| JP2018115338A (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 |