JPH11290058A - 遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置 - Google Patents
遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置Info
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- JPH11290058A JPH11290058A JP10115971A JP11597198A JPH11290058A JP H11290058 A JPH11290058 A JP H11290058A JP 10115971 A JP10115971 A JP 10115971A JP 11597198 A JP11597198 A JP 11597198A JP H11290058 A JPH11290058 A JP H11290058A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 局所に、安全かつ効果的に遺伝子を導入でき
る遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置を提供する
ことを目的とする。 【解決手段】 遺伝子導入用電極装置は、一対の電極
４、５と、一対の電極間の間隔を変更できるように一対
の電極を保持するホルダ１６とを備え、それぞれの電極
は、絶縁体からなるさや８、９と、さやを貫通する導体
１０、１１とを有し、導体には、さやから外部に延出
し、さやに対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対し
て折れ曲がって連続し、かつ導入対象に接触させるため
の接触子１４、１５とが形成されている。これらの電極
にＤＣパルスを印加してエレクトロポレーションを発生
させる。
る遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置を提供する
ことを目的とする。 【解決手段】 遺伝子導入用電極装置は、一対の電極
４、５と、一対の電極間の間隔を変更できるように一対
の電極を保持するホルダ１６とを備え、それぞれの電極
は、絶縁体からなるさや８、９と、さやを貫通する導体
１０、１１とを有し、導体には、さやから外部に延出
し、さやに対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対し
て折れ曲がって連続し、かつ導入対象に接触させるため
の接触子１４、１５とが形成されている。これらの電極
にＤＣパルスを印加してエレクトロポレーションを発生
させる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遺伝子導入用電極
装置及び遺伝子導入装置に関するものである。
装置及び遺伝子導入装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、細胞に遺伝子を導入するにあた
り、細胞をバラバラにした状態ではなく、生体に直接遺
伝子を導入する手法が試みられ始めている。
り、細胞をバラバラにした状態ではなく、生体に直接遺
伝子を導入する手法が試みられ始めている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、生体の
局所、例えばニワトリ胚の特定個所などに対して、電極
を用いて、安全かつ効果的に遺伝子を導入する手法は、
知られていない。
局所、例えばニワトリ胚の特定個所などに対して、電極
を用いて、安全かつ効果的に遺伝子を導入する手法は、
知られていない。
【０００４】そこで本発明は、局所に、安全かつ効果的
に遺伝子を導入できる遺伝子導入用電極装置及び遺伝子
導入装置を提供することを目的とする。
に遺伝子を導入できる遺伝子導入用電極装置及び遺伝子
導入装置を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の遺伝子導入用電
極装置は、一対の電極と、一対の電極間の間隔を変更で
きるように一対の電極を保持するホルダとを備え、それ
ぞれの電極は、絶縁体からなるさやと、さやを貫通する
導体とを有し、導体には、さやから外部に延出し、さや
に対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対して折れ曲
がって連続し、かつ導入対象に接触させるための接触子
とが形成されている。この構成により、電極を用いて、
局所に、安全かつ効果的に遺伝子を導入できる。
極装置は、一対の電極と、一対の電極間の間隔を変更で
きるように一対の電極を保持するホルダとを備え、それ
ぞれの電極は、絶縁体からなるさやと、さやを貫通する
導体とを有し、導体には、さやから外部に延出し、さや
に対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対して折れ曲
がって連続し、かつ導入対象に接触させるための接触子
とが形成されている。この構成により、電極を用いて、
局所に、安全かつ効果的に遺伝子を導入できる。
【０００６】
【発明の実施の形態】請求項１記載の遺伝子導入用電極
装置では、一対の電極と、一対の電極間の間隔を変更で
きるように一対の電極を保持するホルダとを備え、それ
ぞれの電極は、絶縁体からなるさやと、さやを貫通する
導体とを有し、導体には、さやから外部に延出し、さや
に対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対して折れ曲
がって連続し、かつ導入対象に接触させるための接触子
とが形成されている。この構成により、接触子を生体の
導入対象に接触させて一対の電極にＤＣパルスを印加す
ると、接触子間に電場を形成し、エレクトロポレーショ
ンを発生させることができる。この際、接触子を導入対
象に沿わせて接触させる形態をとるか、あるいは、この
導入対象に接触子を差し込む形態をとるかによって、電
場を導入対象の表層部に限定したり、あるいは、表層部
よりも深い位置に設定するなど、遺伝子を導入したい位
置に応じて、電場を変更することができる。
装置では、一対の電極と、一対の電極間の間隔を変更で
きるように一対の電極を保持するホルダとを備え、それ
ぞれの電極は、絶縁体からなるさやと、さやを貫通する
導体とを有し、導体には、さやから外部に延出し、さや
に対して折れ曲がった傾斜部と、傾斜部に対して折れ曲
がって連続し、かつ導入対象に接触させるための接触子
とが形成されている。この構成により、接触子を生体の
導入対象に接触させて一対の電極にＤＣパルスを印加す
ると、接触子間に電場を形成し、エレクトロポレーショ
ンを発生させることができる。この際、接触子を導入対
象に沿わせて接触させる形態をとるか、あるいは、この
導入対象に接触子を差し込む形態をとるかによって、電
場を導入対象の表層部に限定したり、あるいは、表層部
よりも深い位置に設定するなど、遺伝子を導入したい位
置に応じて、電場を変更することができる。
【０００７】請求項２記載の遺伝子導入用電極装置で
は、ホルダは、台部と、台部に対面する押さえ板とを備
え、台部と押さえ板によって一対の電極を挟持すると共
に、台部には、一定挟ピッチを開けてさやを挿入できる
ように複数の位置決め溝が形成され、かつ一対の電極間
の間隔は、複数の位置決め溝のうち、さやを挿入するた
め選択される位置決め溝によって変更される。この構成
により、台部のどの位置決め溝を選択するかによって、
電極間の間隔を容易に設定できる。さて、本発明者の実
験によると、電極間の間隔は、導入対象の性質に応じ
て、細かく調整する必要があり、従来の遺伝子導入用電
極装置では、この間隔の調整自由度が不十分であり、遺
伝子導入が十分行えない場合が多かった。しかし、この
構成により、この間隔を容易にかつ精緻に調節して、遺
伝子導入の効率を向上できる。
は、ホルダは、台部と、台部に対面する押さえ板とを備
え、台部と押さえ板によって一対の電極を挟持すると共
に、台部には、一定挟ピッチを開けてさやを挿入できる
ように複数の位置決め溝が形成され、かつ一対の電極間
の間隔は、複数の位置決め溝のうち、さやを挿入するた
め選択される位置決め溝によって変更される。この構成
により、台部のどの位置決め溝を選択するかによって、
電極間の間隔を容易に設定できる。さて、本発明者の実
験によると、電極間の間隔は、導入対象の性質に応じ
て、細かく調整する必要があり、従来の遺伝子導入用電
極装置では、この間隔の調整自由度が不十分であり、遺
伝子導入が十分行えない場合が多かった。しかし、この
構成により、この間隔を容易にかつ精緻に調節して、遺
伝子導入の効率を向上できる。
【０００８】請求項３記載の遺伝子導入装置では、上記
遺伝子導入用電極装置と、遺伝子導入用電極装置の一対
の電極にＤＣパルスを印加してエレクトロポレーション
を発生させる矩形波印加手段とを備えている。この構成
により、電極を用いて、生体の局所に、安全かつ効果的
に遺伝子を導入できる。
遺伝子導入用電極装置と、遺伝子導入用電極装置の一対
の電極にＤＣパルスを印加してエレクトロポレーション
を発生させる矩形波印加手段とを備えている。この構成
により、電極を用いて、生体の局所に、安全かつ効果的
に遺伝子を導入できる。
【０００９】請求項４記載の遺伝子導入装置では、ＤＣ
パルスは、パルス幅と電圧が設定された矩形波である。
この構成により、ＤＣパルスのパルス幅と電圧を調整す
ることにより、緩衝液の成分や組織の性質に合わせたパ
ルスを印加できる。
パルスは、パルス幅と電圧が設定された矩形波である。
この構成により、ＤＣパルスのパルス幅と電圧を調整す
ることにより、緩衝液の成分や組織の性質に合わせたパ
ルスを印加できる。
【００１０】次に図面を参照しながら、本発明の実施の
形態について説明する。図１は、本発明の一実施の形態
における遺伝子導入装置のブロック図である。
形態について説明する。図１は、本発明の一実施の形態
における遺伝子導入装置のブロック図である。
【００１１】図１において、１は、発明の一実施の形態
における遺伝子導入用電極装置、２は、遺伝子導入用電
極装置１に接続され、遺伝子導入用電極装置１にＤＣパ
ルスを印加するものであって、１００μｓｅｃ〜１００
０ｍｓｅｃのパルス幅、１〜５００ｖの電圧及びパルス
回数を設定可能なものが望ましい。３は、インピーダン
ス測定手段であり、ＤＣパルス印加前後において、遺伝
子導入用電極装置１のインピーダンスを測り、導入対象
の細胞の損傷程度を知るためのものである。このインピ
ーダンスを測定し、インピーダンスを適切にすると、矩
形波印加手段２の印加条件を最適化（細胞の損傷が過大
にならず、かつ、遺伝子導入の効率を高くすること）が
できる。
における遺伝子導入用電極装置、２は、遺伝子導入用電
極装置１に接続され、遺伝子導入用電極装置１にＤＣパ
ルスを印加するものであって、１００μｓｅｃ〜１００
０ｍｓｅｃのパルス幅、１〜５００ｖの電圧及びパルス
回数を設定可能なものが望ましい。３は、インピーダン
ス測定手段であり、ＤＣパルス印加前後において、遺伝
子導入用電極装置１のインピーダンスを測り、導入対象
の細胞の損傷程度を知るためのものである。このインピ
ーダンスを測定し、インピーダンスを適切にすると、矩
形波印加手段２の印加条件を最適化（細胞の損傷が過大
にならず、かつ、遺伝子導入の効率を高くすること）が
できる。
【００１２】さて、遺伝子導入用電極装置１のうち、４
は第１電極、５は第２電極である。これら第１電極４、
第２電極５は、間隔Ｄを開けて平行に、かつ対称に配置
される。そして、これら第１電極４、第２電極５は、後
端部に端子６、７を有し、端子６、７から前方へ延び、
絶縁体から構成されるさや８、９を有する。
は第１電極、５は第２電極である。これら第１電極４、
第２電極５は、間隔Ｄを開けて平行に、かつ対称に配置
される。そして、これら第１電極４、第２電極５は、後
端部に端子６、７を有し、端子６、７から前方へ延び、
絶縁体から構成されるさや８、９を有する。
【００１３】また、これら第１電極４、第２電極５は、
端子６、７に電気的に接続され、さや８、９を貫通して
さや８、９よりも前方へ延出して外部に露呈するワイヤ
状の導体１０、１１を有する。この導体１０、１１の前
方側は、さや８、９に対して下向きに折れ曲がる傾斜部
１２、１３となっており、さらに導体１０、１１の前方
端部は、これら傾斜部１２、１３に連続し、かつ傾斜部
１２、１３と逆向き（上向き）に折れ曲がる接触子１
４、１５となっている。この接触子１４、１５は、導入
対象（生体の特定個所）に直に接触させ、ＤＣパルスが
印加されることにより、導入対象に後述するような電場
を形成するためのものである。
端子６、７に電気的に接続され、さや８、９を貫通して
さや８、９よりも前方へ延出して外部に露呈するワイヤ
状の導体１０、１１を有する。この導体１０、１１の前
方側は、さや８、９に対して下向きに折れ曲がる傾斜部
１２、１３となっており、さらに導体１０、１１の前方
端部は、これら傾斜部１２、１３に連続し、かつ傾斜部
１２、１３と逆向き（上向き）に折れ曲がる接触子１
４、１５となっている。この接触子１４、１５は、導入
対象（生体の特定個所）に直に接触させ、ＤＣパルスが
印加されることにより、導入対象に後述するような電場
を形成するためのものである。
【００１４】そして、これら第１電極４、第２電極５
は、ホルダ１６によって間隔Ｄを変更できるように保持
される。このホルダ１６は、台部１７とこれに対面する
押さえ板２０とを備え、台部１７と押さえ板２０によっ
て第１電極４、第２電極５を挟持することにより、第１
電極４、第２電極５は、ホルダ１６に保持される。台部
１７には、後方に延びる把手１８が固着され、使用者
は、把手１８を把持するか、あるいは、適当なマニュピ
ュレータを用いることにより、遺伝子導入用電極装置１
を操作できるようになっている。なお、台部１７、押さ
え板２０は、例えば、アクリル樹脂などから構成する。
は、ホルダ１６によって間隔Ｄを変更できるように保持
される。このホルダ１６は、台部１７とこれに対面する
押さえ板２０とを備え、台部１７と押さえ板２０によっ
て第１電極４、第２電極５を挟持することにより、第１
電極４、第２電極５は、ホルダ１６に保持される。台部
１７には、後方に延びる把手１８が固着され、使用者
は、把手１８を把持するか、あるいは、適当なマニュピ
ュレータを用いることにより、遺伝子導入用電極装置１
を操作できるようになっている。なお、台部１７、押さ
え板２０は、例えば、アクリル樹脂などから構成する。
【００１５】ここで、導体１０、１１は、例えば、φ２
ｍｍのステンレス鋼で構成し、傾斜部１２、１３は、例
えば、φ０．３ｍｍのステンレス鋼で構成し、導体１
０、１１及び傾斜部１２、１３には、絶縁体で薄いコー
ティングを施すのが望ましい。さらに、接触子１４、１
５は、例えば長さ３ｍｍの白金細棒を傾斜部１２、１３
の先端部にかしめることにより、構成する。
ｍｍのステンレス鋼で構成し、傾斜部１２、１３は、例
えば、φ０．３ｍｍのステンレス鋼で構成し、導体１
０、１１及び傾斜部１２、１３には、絶縁体で薄いコー
ティングを施すのが望ましい。さらに、接触子１４、１
５は、例えば長さ３ｍｍの白金細棒を傾斜部１２、１３
の先端部にかしめることにより、構成する。
【００１６】また、台部１７の上面には、前後方向に向
かい、かつ、さや８、９を挿入できるように形成された
位置決め溝１９が、一定の狭いピッチｔを介して、複数
条設けてある。ここで、接触子１４、１５の間隔Ｄは、
複数条の位置決め溝１９の何れにさや８、９を挿入する
かによって定められるものであり、本発明者の実験によ
ると、この間隔Ｄは、１ｍｍ弱から数ｍｍ程度の範囲
で、細かく設定できるように、ピッチｔをできるだけ小
さく（例えば、１ｍｍ以下）することが望ましい。とい
うのは、この間隔Ｄは、エレクトロポレーションの電撃
条件を定める重要なパラメータであり、従来の遺伝子導
入用電極装置１では、粗すぎて実用にならない。なお、
２１、２２は、第１電極４、第２電極５の位置決め後に
第１電極４、第２電極５を挟持するための固定ビスであ
る。
かい、かつ、さや８、９を挿入できるように形成された
位置決め溝１９が、一定の狭いピッチｔを介して、複数
条設けてある。ここで、接触子１４、１５の間隔Ｄは、
複数条の位置決め溝１９の何れにさや８、９を挿入する
かによって定められるものであり、本発明者の実験によ
ると、この間隔Ｄは、１ｍｍ弱から数ｍｍ程度の範囲
で、細かく設定できるように、ピッチｔをできるだけ小
さく（例えば、１ｍｍ以下）することが望ましい。とい
うのは、この間隔Ｄは、エレクトロポレーションの電撃
条件を定める重要なパラメータであり、従来の遺伝子導
入用電極装置１では、粗すぎて実用にならない。なお、
２１、２２は、第１電極４、第２電極５の位置決め後に
第１電極４、第２電極５を挟持するための固定ビスであ
る。
【００１７】さて、図１の遺伝子導入用電極装置１で
は、導入対象が生体の表層部である場合と、表層部より
も深い位置にある場合のそれぞれに好適な電場を形成で
きるようになっている。
は、導入対象が生体の表層部である場合と、表層部より
も深い位置にある場合のそれぞれに好適な電場を形成で
きるようになっている。
【００１８】まず、表層部であれば、図１の状態のま
ま、図２に示すように、接触子１４、１５の周面を導入
対象２３にならって平行に接触させる。このようにする
と、平面視では、図３（ａ）に示すような電場Ｓとな
り、Ａ−Ａ断面図では、図３（ｂ）に示すようになる。
即ち、電場Ｓを表層部に限定することができ、導入に関
与しない個所の損傷を抑制することができる。
ま、図２に示すように、接触子１４、１５の周面を導入
対象２３にならって平行に接触させる。このようにする
と、平面視では、図３（ａ）に示すような電場Ｓとな
り、Ａ−Ａ断面図では、図３（ｂ）に示すようになる。
即ち、電場Ｓを表層部に限定することができ、導入に関
与しない個所の損傷を抑制することができる。
【００１９】また、表層部よりも深い位置ならば、図１
の姿勢を表裏反転させ、図４に示すように接触子１４、
１５を導入対象２３の表面に対してほぼ垂直に差し込
み、ＤＣパルスを印加する。このようにすると、Ｂ−Ｂ
断面では図５（ａ）に示すように、深い位置まで到達す
る電場Ｓを形成できる。
の姿勢を表裏反転させ、図４に示すように接触子１４、
１５を導入対象２３の表面に対してほぼ垂直に差し込
み、ＤＣパルスを印加する。このようにすると、Ｂ−Ｂ
断面では図５（ａ）に示すように、深い位置まで到達す
る電場Ｓを形成できる。
【００２０】（実験例）１０体節期のニワトリ胚の中脳
の近辺に、次のように、遺伝子導入を試みた。まず、こ
の実験において、導入する遺伝子のｃＤＮＡは、真核生
物用の強制発現ベクターに組み込む。本例では、ｐＭｉ
ｗＳＶとｐＲｃ／ＣＭＶを用いたが、何れも高い発現が
確認できた。
の近辺に、次のように、遺伝子導入を試みた。まず、こ
の実験において、導入する遺伝子のｃＤＮＡは、真核生
物用の強制発現ベクターに組み込む。本例では、ｐＭｉ
ｗＳＶとｐＲｃ／ＣＭＶを用いたが、何れも高い発現が
確認できた。
【００２１】次に、胚を準備する。実験日の朝に丁度良
いステージになるよう、Hambergerand Hamilton(1951)
のステージ表を参考にして、孵卵時間を調整する。１０
体節期の胚の場合、３７．５℃に設定した孵卵器で３６
時間ほどである。
いステージになるよう、Hambergerand Hamilton(1951)
のステージ表を参考にして、孵卵時間を調整する。１０
体節期の胚の場合、３７．５℃に設定した孵卵器で３６
時間ほどである。
【００２２】次に、ステージを確認する。まず、卵をア
ルコール綿で拭き、卵の鋭端に小さな穴を開け、この穴
に注射針を差し込んで、３〜４ｍｌの卵白を抜き取る。
次に、この穴をテープで塞ぎ、卵の上面に直径２ｃｍ程
度の楕円形の穴を開ける。そして、卵を実体鏡の下へ移
し、胚を観察し、ステージを確認する。確認したら、楕
円形の穴を塞いでおく。
ルコール綿で拭き、卵の鋭端に小さな穴を開け、この穴
に注射針を差し込んで、３〜４ｍｌの卵白を抜き取る。
次に、この穴をテープで塞ぎ、卵の上面に直径２ｃｍ程
度の楕円形の穴を開ける。そして、卵を実体鏡の下へ移
し、胚を観察し、ステージを確認する。確認したら、楕
円形の穴を塞いでおく。
【００２３】次に、矩形波印加手段２におけるエレクト
ロポレーションの条件を設定する。本例では、電圧２５
ｖ、パルス幅５０ｍｓｅｃ、パルス回数５回とした。
ロポレーションの条件を設定する。本例では、電圧２５
ｖ、パルス幅５０ｍｓｅｃ、パルス回数５回とした。
【００２４】また、遺伝子導入用電極装置１の調整を行
う。本例では、導体１０、１１の太さ０．５ｍｍ、同露
出長さ１ｍｍ、間隔Ｄは４ｍｍとした。ここで、導体１
０、１１の太さと長さは、胚の生存率に関係する。この
長さが大きすぎたり、太さが小さすぎると、組織のダメ
ージが大きくなり、胚の生存率が極端に低下することが
あるため、これらの値は、経験値から慎重に決定する。
なお、この条件では、エレクトロポレーション後２日目
での生存率は、６割前後であった。また、間隔Ｄは、こ
れより１ｍｍ広げただけでも遺伝子の導入効率が半分以
下になった。
う。本例では、導体１０、１１の太さ０．５ｍｍ、同露
出長さ１ｍｍ、間隔Ｄは４ｍｍとした。ここで、導体１
０、１１の太さと長さは、胚の生存率に関係する。この
長さが大きすぎたり、太さが小さすぎると、組織のダメ
ージが大きくなり、胚の生存率が極端に低下することが
あるため、これらの値は、経験値から慎重に決定する。
なお、この条件では、エレクトロポレーション後２日目
での生存率は、６割前後であった。また、間隔Ｄは、こ
れより１ｍｍ広げただけでも遺伝子の導入効率が半分以
下になった。
【００２５】次に、墨を注入する。上述のように開けた
卵殻の穴を再び開いて、胚を露出させる。また、乾燥を
塞ぐため、胚の上に１、２滴のハンクス緩衝液をたら
す。そして、ピペットにごく少量の墨を吸い込み、ピペ
ットを卵黄の胚域からできるだけ離れたところに刺し、
先を胚の真下へ水平に差し込み、ゆっくり墨を注入す
る。
卵殻の穴を再び開いて、胚を露出させる。また、乾燥を
塞ぐため、胚の上に１、２滴のハンクス緩衝液をたら
す。そして、ピペットにごく少量の墨を吸い込み、ピペ
ットを卵黄の胚域からできるだけ離れたところに刺し、
先を胚の真下へ水平に差し込み、ゆっくり墨を注入す
る。
【００２６】次に、卵を実体鏡下に移し、胚をおおう卵
黄膜のうち、中脳よりやや後ろ間脳のあたりに、小さな
穴を開ける。また、次に注入するＤＮＡ溶液に押される
脳胞内液が抜けるようにするため、前脳の先端にも小さ
な穴を開ける。そして、ピペットにＤＮＡ溶液を吸い込
み、神経管に開けた穴へ注入する。
黄膜のうち、中脳よりやや後ろ間脳のあたりに、小さな
穴を開ける。また、次に注入するＤＮＡ溶液に押される
脳胞内液が抜けるようにするため、前脳の先端にも小さ
な穴を開ける。そして、ピペットにＤＮＡ溶液を吸い込
み、神経管に開けた穴へ注入する。
【００２７】そして、接触子１４、１５をこの付近に接
触させ、上述の条件による電撃を加え、エレクトロポレ
ーションによる遺伝子導入を行う。
触させ、上述の条件による電撃を加え、エレクトロポレ
ーションによる遺伝子導入を行う。
【００２８】以上の実験により、ニワトリ胚に、胚の生
存率を保持したまま、局所的に、かつ効率よく遺伝子を
導入することができた。
存率を保持したまま、局所的に、かつ効率よく遺伝子を
導入することができた。
【００２９】
【発明の効果】本発明は、以上のように構成したので、
安全かつ効果的に遺伝子を導入できる電極装置及びそれ
を用いた導入装置を得ることができる。
安全かつ効果的に遺伝子を導入できる電極装置及びそれ
を用いた導入装置を得ることができる。
【図１】本発明の一実施の形態における遺伝子導入装置
のブロック図
のブロック図
【図２】本発明の一実施の形態における接触子の接触状
態を示す斜視図
態を示す斜視図
【図３】（ａ）本発明の一実施の形態における電場を示
す平面図 （ｂ）本発明の一実施の形態における電場を示す断面図
す平面図 （ｂ）本発明の一実施の形態における電場を示す断面図
【図４】本発明の一実施の形態における接触子の接触状
態を示す斜視図
態を示す斜視図
【図５】（ａ）本発明の一実施の形態における電場を示
す平面図 （ｂ）本発明の一実施の形態における電場を示す断面図
す平面図 （ｂ）本発明の一実施の形態における電場を示す断面図
１ 遺伝子導入用電極装置 ２ 矩形波印加手段 ３ インピーダンス測定手段 ４ 第１電極 ５ 第２電極 ８、９ さや １０、１１ 導体 １２、１３ 傾斜部 １４、１５ 接触子 １６ ホルダ ２３ 導入対象
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 仲村 春和 宮城県仙台市青葉区南吉成１丁目６番８号 (72)発明者 村松 達夫 愛知県豊橋市大岩町字北田60−２
Claims (4)
- 【請求項１】一対の電極と、前記一対の電極間の間隔を
変更できるように前記一対の電極を保持するホルダとを
備え、それぞれの前記電極は、絶縁体からなるさやと、
前記さやを貫通する導体とを有し、前記導体には、前記
さやから外部に延出し、前記さやに対して折れ曲がった
傾斜部と、前記傾斜部に対して折れ曲がって連続し、か
つ導入対象に接触させるための接触子とが形成されてい
ることを特徴とする遺伝子導入用電極装置。 - 【請求項２】前記ホルダは、台部と、前記台部に対面す
る押さえ板とを備え、前記台部と前記押さえ板によって
前記一対の電極を挟持すると共に、前記台部には、一定
挟ピッチを開けて前記さやを挿入できるように複数の位
置決め溝が形成され、かつ前記一対の電極間の間隔は、
前記複数の位置決め溝のうち、前記さやを挿入するため
選択される位置決め溝によって変更されることを特徴と
する請求項１記載の遺伝子導入用電極装置。 - 【請求項３】請求項１記載の遺伝子導入用電極装置と、
前記遺伝子導入用電極装置の前記一対の電極にＤＣパル
スを印加してエレクトロポレーションを発生させる矩形
波印加手段とを備えたことを特徴とする遺伝子導入装
置。 - 【請求項４】前記ＤＣパルスは、パルス幅と電圧が設定
された矩形波であることを特徴とする請求項３記載の遺
伝子導入装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10115971A JPH11290058A (ja) | 1998-04-10 | 1998-04-10 | 遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10115971A JPH11290058A (ja) | 1998-04-10 | 1998-04-10 | 遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11290058A true JPH11290058A (ja) | 1999-10-26 |
Family
ID=14675673
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10115971A Pending JPH11290058A (ja) | 1998-04-10 | 1998-04-10 | 遺伝子導入用電極装置及び遺伝子導入装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11290058A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001055294A1 (fr) * | 2000-01-27 | 2001-08-02 | The Mollennium Laboratories | Dispositif, auxiliaire, et procede de transfert moleculaire |
| KR20030012995A (ko) * | 2001-08-06 | 2003-02-14 | 주식회사 토이랩 | Ｄｃ 전원을 사용한 전기천공기 |
| WO2004033614A1 (ja) * | 2002-10-10 | 2004-04-22 | Fujitsu Limited | 分子放出装置及び分子放出方法 |
| EP1482032A1 (en) * | 2002-02-12 | 2004-12-01 | The Mollennium Laboratories | Molecule vibrator |
| EP1766004A1 (en) * | 2004-06-12 | 2007-03-28 | Digital Bio Technology Co., Ltd. | Electroporator having an elongated hollow member |
| US8383394B2 (en) | 2004-06-08 | 2013-02-26 | Applied Biosystems, Llc | System and method for electroporating a sample |
| US9523071B2 (en) | 2008-04-15 | 2016-12-20 | Life Technologies Corporation | Pipette tip for electroporation device |
-
1998
- 1998-04-10 JP JP10115971A patent/JPH11290058A/ja active Pending
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001055294A1 (fr) * | 2000-01-27 | 2001-08-02 | The Mollennium Laboratories | Dispositif, auxiliaire, et procede de transfert moleculaire |
| US7341864B2 (en) | 2000-01-27 | 2008-03-11 | The Hollenniun Laboratories | Molecule transferring device, auxiliary for molecule transferring device, and molecule transferring method |
| JP4740503B2 (ja) * | 2000-01-27 | 2011-08-03 | 株式会社モレニアムラボラトリーズ | 分子導入装置及び分子導入方法 |
| KR20030012995A (ko) * | 2001-08-06 | 2003-02-14 | 주식회사 토이랩 | Ｄｃ 전원을 사용한 전기천공기 |
| EP1482032A1 (en) * | 2002-02-12 | 2004-12-01 | The Mollennium Laboratories | Molecule vibrator |
| EP1482032A4 (en) * | 2002-02-12 | 2008-07-16 | Mollennium Lab | MOLECULAR VIBRATOR |
| WO2004033614A1 (ja) * | 2002-10-10 | 2004-04-22 | Fujitsu Limited | 分子放出装置及び分子放出方法 |
| US9260690B2 (en) | 2004-06-08 | 2016-02-16 | Applied Biosystems, Llc | System and method for electroporating a sample |
| US8383394B2 (en) | 2004-06-08 | 2013-02-26 | Applied Biosystems, Llc | System and method for electroporating a sample |
| US8921092B2 (en) | 2004-06-08 | 2014-12-30 | Applied Biosystems Llc | System and method for electroporating a sample |
| US9670449B2 (en) | 2004-06-08 | 2017-06-06 | Applied Biosystems Llc | System and method for electroporating a sample |
| EP1766004A1 (en) * | 2004-06-12 | 2007-03-28 | Digital Bio Technology Co., Ltd. | Electroporator having an elongated hollow member |
| EP1766004B1 (en) * | 2004-06-12 | 2016-08-31 | Invitrogen Singapore Pte. Ltd. | Electroporator having an elongated hollow member |
| US8932850B2 (en) | 2004-06-12 | 2015-01-13 | Invitrogen Singapore Pte. Ltd. | Electroporation apparatus having an elongated hollow member |
| US9890355B2 (en) | 2004-06-12 | 2018-02-13 | Life Technologies Holdings Pte Limited | Electroporation systems having a plurality of hollow members |
| US11130936B2 (en) | 2004-06-12 | 2021-09-28 | Life Technologies Holdings Pte Limited | Electroporator apparatus and system having a hollow member |
| US9523071B2 (en) | 2008-04-15 | 2016-12-20 | Life Technologies Corporation | Pipette tip for electroporation device |
| US10450543B2 (en) | 2008-04-15 | 2019-10-22 | Life Technologies Corporation | Pipette tip for electroporation device |
| US11634679B2 (en) | 2008-04-15 | 2023-04-25 | Life Technologies Corporation | Pipette tip for electroporation device |
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