JPH11199A - New screening of physiologically active substance - Google Patents
New screening of physiologically active substanceInfo
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- JPH11199A JPH11199A JP16487297A JP16487297A JPH11199A JP H11199 A JPH11199 A JP H11199A JP 16487297 A JP16487297 A JP 16487297A JP 16487297 A JP16487297 A JP 16487297A JP H11199 A JPH11199 A JP H11199A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は生理活性物質の新規
なスクリーニング方法に関し、特に免疫抑制剤、皮膚疾
患治療剤及び脱毛防止剤の候補物質を選択するための粗
スクリーニング法に関する。The present invention relates to a novel screening method for a physiologically active substance, and more particularly to a crude screening method for selecting a candidate substance for an immunosuppressant, a therapeutic agent for a skin disease, and an anti-hair loss agent.
【０００２】[0002]
【従来の技術】サイクロスポリンＡが免疫抑制剤として
有効であること（Pediatr. Nephrol.5 (5) ：622-629
(1991)；Bone Marrow Transplant. 8 (2) ：105 ；111
(1991)）及び乾鮮（J. Am. Acad. Dermatol. 14 (5 Pt
1)：785-791 (1986)) やアトピー性皮膚炎（Br. J. Der
matol. 128 (2)：213-216 (1993)) のごとき皮膚疾患の
治療に有効であることはすでに知られている。Nature V
ol. 374, pp.360-363(1995）にはホリスタチン（Ｆｏｌ
ｌｉｓｔａｔｉｎ）の遺伝子を欠損したマウスにおいて
皮膚、特に毛の異状が生ずることが記載されている。し
かしながら、ケラチノサイトにおけるホリスタチン遺伝
子の転写を利用してサイクロスポリン様生理活性を有す
る物質をスクリーニングする方法は知られていない。2. Prior Art Cyclosporin A is effective as an immunosuppressant (Pediatr. Nephrol. 5 (5): 622-629).
(1991); Bone Marrow Transplant. 8 (2): 105; 111
(1991)) and dried (J. Am. Acad. Dermatol. 14 (5 Pt
1): 785-791 (1986)) and atopic dermatitis (Br. J. Der)
Matol. 128 (2): 213-216 (1993)) is already known to be effective in treating skin diseases. Nature V
ol. 374, pp. 360-363 (1995) include follistatin (Fol
It has been described that abnormalities of the skin, particularly hair, occur in mice lacking the gene for ristatin. However, there is no known method for screening a substance having a cyclosporin-like physiological activity using the transcription of the follistatin gene in keratinocytes.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、ホ
リスタチン遺伝子の転写への影響を検出することにより
免疫抑制剤、皮膚疾患治療剤または脱毛防止剤の候補を
選択するための新規な方法を提供する。Accordingly, the present invention provides a novel method for selecting a candidate for an immunosuppressant, a therapeutic agent for skin diseases or an anti-hair loss agent by detecting the effect of follistatin gene on transcription. provide.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】従って本発明は、被験物
質の存在下及び非存在下でケラチノサイトを培養し、該
培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホリスタチンをコードす
るｍＲＮＡを検出し、そして被験物質の存在下と非存在
下でのホリスタチンをコードするｍＲＮＡに差がある場
合に、前記被験物質を免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮
膚炎などの皮膚疾患の治療剤又は脱毛防止剤の候補とし
て選択することを特徴とする生理活性物質のスクリーニ
ング法を提供する。Accordingly, the present invention provides a method for culturing keratinocytes in the presence and absence of a test substance, extracting RNA from the cultured cells, detecting mRNA encoding follistatin, When there is a difference in the mRNA encoding follistatin in the presence and absence of the above, the test substance as an immunosuppressant, a candidate for a therapeutic agent for skin diseases such as dryness and atopic dermatitis or a hair loss preventing agent A method for screening for a physiologically active substance is provided.
【０００５】[0005]
【作用原理】サイクロスポリンＡが免疫抑制剤であるこ
とは周知であり、また乾鮮やアトピー性皮膚炎などの皮
膚疾患の治療剤として有用であることも知られている。
本発明者らは、サイクロスポリンＡの存在下及び非存在
下でケラチノサイトを培養し、培養細胞から全ＲＮＡを
抽出し、この全ＲＮＡから、ホリスタチン遺伝子のＰＣ
Ｒ増幅に適するプライマー対を用いてホリスタチン遺伝
子の増幅を用いてホリスタチン遺伝子の転写を検出し、
一定量以上のサイクロスポリンＡの存在下でホリスタチ
ン遺伝子の転写（従って発現）が抑制されることを見出
した。[Principle of Action] It is well known that cyclosporin A is an immunosuppressant, and it is also known that it is useful as a therapeutic agent for skin diseases such as dryness and atopic dermatitis.
The present inventors cultivated keratinocytes in the presence and absence of cyclosporin A, extracted total RNA from the cultured cells, and, based on the total RNA, obtained the PC of the follistatin gene.
Detecting the transcription of the follistatin gene using amplification of the follistatin gene using primer pairs suitable for R amplification,
It has been found that the transcription (and therefore expression) of the follistatin gene is suppressed in the presence of a certain amount or more of cyclosporin A.
【０００６】従って、サイクロスポリンＡの代りに被験
物質を用いて同様の実験を行い、サイクロスポリンＡと
同様の結果が得られる場合には、該被験物質が、サイク
ロスポリンＡと同様のメカニズムにより免疫抑制剤や皮
膚疾患治療剤として有用であることが合理的に推定され
る。また、ホリスタチン遺伝子の欠損により毛の発生が
阻害されるから、ホリスタチン遺伝子の移写を抑制する
物質は脱毛防止に有用であることが推定される。Accordingly, a similar experiment is performed using a test substance in place of cyclosporin A, and when the same result as that of cyclosporin A is obtained, the test substance is used in the same manner as cyclosporin A. It is rationally presumed that it is useful as an immunosuppressant or a therapeutic agent for skin diseases depending on the mechanism. In addition, since hair development is inhibited by the deletion of the follistatin gene, it is presumed that a substance that suppresses the transfer of the follistatin gene is useful for preventing hair loss.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明において使用するケチチノ
サイトは、例えば、頭皮をコラーゲナーゼ及びディスパ
ーゼで処理することにより得られる。また、包皮由来の
ケラチノサイトは市販されており、例えばClonetics 社
から購入することができる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Kettinocytes used in the present invention can be obtained, for example, by treating the scalp with collagenase and dispase. Keratinocytes derived from foreskin are commercially available, and can be purchased from, for example, Clonetics.
【０００８】ケラチノサイトを培養するための培地とし
ては動物細胞培養用の培地であればよいが、例えばClon
etics 社のＫＧＭ（Clonetics 社の基礎培地ＫＢＭ５０
０mlに、２mlのウシ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μ
ｇ／mlの上皮成長因子（ＥＧＦ）、５．０mg／mlのイン
シュリン、０．５mg／mgのヒドロコルチゾン、５０mg／
mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／mlのアンフォテリシ
ンＢを添加したもの）が使用される。[0008] The medium for culturing keratinocytes may be any medium for culturing animal cells.
etics KGM (Clonetics basal medium KBM50)
In 0 ml, 2 ml of bovine pituitary extract, final concentration 0.1 μ
g / ml epidermal growth factor (EGF), 5.0 mg / ml insulin, 0.5 mg / mg hydrocortisone, 50 mg / ml
ml gentamicin and 50 μg / ml amphotericin B) are used.
【０００９】培養は、動物細胞培養のための常法に従っ
て液体静置培養を約３７℃にて行い、およそ５０〜８０
％のコンフルエントに達成するまで培養を続ける。次
に、ある量の被験物質を培地に加え、さらに例えば約２
４時間インキュベートする。被験物質の量は、被験物質
の活性に異り、０〜１００μｇ／ml程度の範囲にわたっ
て数段階の濃度で行うのがよい。Cultivation is carried out in a liquid stationary culture at about 37 ° C. according to a conventional method for culturing animal cells.
Continue culturing until% confluency is achieved. Next, a certain amount of the test substance is added to the medium, and further, for example, about 2 hours.
Incubate for 4 hours. The amount of the test substance varies depending on the activity of the test substance, and it is preferable to perform the test in several concentrations over a range of about 0 to 100 μg / ml.
【００１０】次に、インキュベーションが終った後、生
理的食塩水で１度洗浄し、常法に従って、例えばＩｓｏ
ｇｅｎ（日本ジーン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出す
る。次に、この全ＲＮＡに対するｃＤＮＡを常法に従っ
て合成し、ホリスタチン遺伝子を特異的に増幅すること
ができるプライマー対を用いて、前記ｃＤＮＡを鋳型と
してＰＣＲ増幅を行う。Next, after the incubation is completed, the plate is washed once with a physiological saline solution, and then, for example, Iso-isolated according to a conventional method.
Gen (Nippon Gene) is added to extract total RNA. Next, a cDNA for this total RNA is synthesized according to a conventional method, and PCR amplification is performed using the cDNA as a template, using a primer pair capable of specifically amplifying the follistatin gene.
【００１１】この場合のプライマーとしては、例えば、
５′−CTCCTGCTGCTGCTGCTCTGC −３′（配列番号：１）
及び５′−TCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC −３′（配列番号：
２）のプライマー対を用いることができる。ホリスタチ
ン遺伝子は、スプライシングにより２種類のｍＲＮＡに
転写されるので、９９４ｂｐと１２０８ｂｐのＰＣＲ増
幅されたＤＮＡが期待される。ＰＣＲ反応生成物を、例
えば１％アガロースゲル電気泳動にかけ、エチジウムブ
ロミド染色後、ＵＶ照射により検出することができる。
あるいは、標識したオリゴヌクレオチドプライマーによ
り検出することもできる。[0011] As the primer in this case, for example,
5'-CTCCTGCTGCTGCTGCTCTGC-3 '(SEQ ID NO: 1)
And 5'-TCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC-3 '(SEQ ID NO:
The primer pair of 2) can be used. The follistatin gene is transcribed into two types of mRNAs by splicing, and thus PCR-amplified DNA of 994 bp and 1208 bp is expected. The PCR reaction product is subjected to, for example, 1% agarose gel electrophoresis, and can be detected by UV irradiation after ethidium bromide staining.
Alternatively, it can be detected with a labeled oligonucleotide primer.
【００１２】なお、定量的にホリスタチン遺伝子のｍＲ
ＮＡ発現を調べる方法としては、ＲＴ−ＰＣＲ以外に、
ノザンブロット法、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ
法も使用できる。また、抗ホリスタチン抗体を用い、チ
ラチノサイト細胞培養上清に分泌されるホルスタチンを
ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロット法などにより定量す
ることも可能である。It should be noted that the mR of the follistatin gene is quantitatively determined.
As a method for examining NA expression, in addition to RT-PCR,
Northern blotting and RNase protection assay can also be used. Also, using an anti-follistatin antibody, it is possible to quantify the amount of forstatin secreted into the culture supernatant of tyratinocyte cells by ELISA, Western blotting, or the like.
【００１３】上記の方法において、被験物質添加量ゼロ
（無添加）の場合に比べて被験物質を添加した場合に検
出されるＤＮＡの量が少い場合、すなわちホリスタチン
遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量が少い場合、被験物
質は、免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮膚炎等の皮膚疾
患の治療剤、又は脱毛防止剤の候補として選択される。
この方法は上記の薬剤の粗スクリーニング法として有用
であり、この方法により候補とされた被験物質は、さら
に直接的な上記治療剤用の選択試験にかけられる。In the above method, when the amount of DNA detected when the test substance is added is smaller than that when the test substance is not added (no addition), that is, the amount of mRNA transcribed from the follistatin gene When the amount is small, the test substance is selected as a candidate for an immunosuppressant, a therapeutic agent for skin diseases such as desiccation and atopic dermatitis, or a hair loss preventing agent.
This method is useful as a crude screening method for the above-mentioned drugs, and the test substance candidate by this method is subjected to a further direct selection test for the above-mentioned therapeutic agent.
【００１４】また、被験物質により、被験物質非存在下
におけるよりも増幅されたＤＮＡが多い場合、すなわち
ホリスタチン遺伝子から移写されるｍＲＮＡの量が多い
場合、あるいは、これらの量が被験物質の添加量に依存
して逆の傾向を示す場合も、該被験物質は、新たな生理
活性を有するものとして期待される。[0014] Further, depending on the test substance, when the amount of amplified DNA is larger than that in the absence of the test substance, that is, when the amount of mRNA transferred from the follistatin gene is large, The test substance is expected to have a new biological activity even when the test substance shows the opposite tendency depending on the amount.
【００１５】[0015]
【実施例】次に、本願発明を実施例によりさらに具体的
に説明する。実施例１． サイクロスポリンＡによりモデル実験 ヒトの頭皮から、ケラチノサイトを次のようにして調製
した。頭皮由来表皮細胞は以下に示す通りに行った。手
術副産物として得られたヒト頭皮禿頭部（３０歳男性、
頭頂部）の真皮層下半分、毛髪を取り除き、表皮層・真
皮層上半分を５mm幅で短冊状に切り、０．２５％ｔｒｙ
ｐｓｉｎ−０．０２％ＥＤＴＡ溶液で４℃、１８時間処
理した。角層をピンセットで取り除き、ＰＢＳ中にて真
皮シート上面をピンセットで軽くこすり、表皮基底細胞
を浮遊させ、遠心して細胞を回収した後に、０．５％の
血清を含むＫ−ＧＭ(Keratinocyte Growth Medium, clo
netics）にて１日培養し、以後は血清を含まないＫ−Ｇ
Ｍにて培養した。以後、２日おきに培地交換を行った。Next, the present invention will be described more specifically with reference to examples. Embodiment 1 FIG. Keratinocytes were prepared from human scalp in a model experiment using cyclosporin A as follows. Scalp-derived epidermal cells were performed as described below. Bald human scalp obtained as a by-product of surgery (30-year-old man,
The lower half of the dermis layer and the hair of the parietal part) are removed, and the upper half of the epidermis layer and the dermis layer are cut into strips with a width of 5 mm, and 0.25% try
The mixture was treated with a 0.02% EDTA solution at 4 ° C. for 18 hours. The stratum corneum was removed with tweezers, the upper surface of the dermal sheet was gently rubbed with tweezers in PBS, the epidermal basal cells were suspended, and the cells were collected by centrifugation. Then, K-GM (Keratinocyte Growth Medium) containing 0.5% serum was added. , clo
netics) for 1 day, after which KG containing no serum
M. Thereafter, the medium was replaced every two days.
【００１６】増殖した細胞を０．０５％ｔｒｙｐｓｉｎ
−０．０２％ＥＤＴＡ溶液にて３７℃、５分間処理した
のち、等量の０．１％ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔ
ｏｒで反応を止め、遠心して細胞を回収した。細胞を無
血清培地に浮遊させ５，０００細胞／cm2 の密度で培養
皿に播種した。上記のようにして調製したケラチノサイ
トを、Clonetics 社製の培地ＫＧＭ（５００mlの基礎培
地（Clonetics 社製ＫＢＭ培地、組成不明）に２mlのウ
シ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μｇ／mlのＥＧＦ、
５．０mg／mlのインシュリン、０．５mg／mlのヒドロコ
ルチゾン、５０mg／mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／
mlのアンフォテリシンＢを添加したもの）中で、７５cm
2 フラスコ内で３７℃にてＣＯ2 インキュベーター中で
培養し、約８０％のコンフルエントとした。[0016] The grown cells are reduced to 0.05% trypsin.
After treatment with a 0.02% EDTA solution at 37 ° C. for 5 minutes, an equal volume of 0.1% trypsin inhibit
The reaction was stopped at or, and the cells were collected by centrifugation. The cells were suspended in a serum-free medium and seeded on a culture dish at a density of 5,000 cells / cm 2 . The keratinocytes prepared as described above were mixed with 2 ml of bovine pituitary extract and a final concentration of 0.1 μg / ml of EGF in 500 mg of a basal medium (Clonetics KBM medium, composition unknown) in a medium KGM manufactured by Clonetics. ,
5.0 mg / ml insulin, 0.5 mg / ml hydrocortisone, 50 mg / ml gentamicin and 50 μg / ml
75 ml of amphotericin B)
The cells were cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C. in two flasks to obtain about 80% confluence.
【００１７】次に、上記の培養物に、最終濃度が０．
０，１．０、及び１０μｇ／mlとなるようにサイクロス
ポリンＡを加え、ＣＯ2 インキュベーター中で３７℃に
て２４時間インキュベートした。次に、細胞を生理食塩
水にて１回洗浄した後、３mlのＩｓｏｇｅｎ（日本ジー
ン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出した。次に、この全Ｒ
ＮＡに基き、常法に従ってｃＤＮＡを合成した。このｃ
ＤＮＡを鋳型とし、ホリスタチン増幅用プライマー対配
列番号：１及び配列番号：２を用いて常法に従ってＰＣ
Ｒ増幅を行った。Next, the above culture was added to a final concentration of 0.1%.
Cyclosporin A was added at 0, 1.0, and 10 μg / ml and incubated at 37 ° C. for 24 hours in a CO 2 incubator. Next, the cells were washed once with physiological saline, and then 3 ml of Isogen (manufactured by Nippon Gene) was added to extract total RNA. Next, this all R
Based on NA, cDNA was synthesized according to a conventional method. This c
Using a DNA as a template and a follistatin amplification primer pair SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 according to a conventional method,
R amplification was performed.
【００１８】この増幅生成物を１．０％アガロースゲル
電気泳動にかけて増幅されたＤＮＡを分離した後、エチ
ジウムブロミド染色及びＵＶ照射により増幅されたＤＮ
Ａを検出した。この結果を図１に示す。この図から明ら
かな通り、サイクロスポリンＡを１０μｇ／ml添加した
場合、ホリスタチン遺伝子の転写が抑制された。The amplified product is subjected to 1.0% agarose gel electrophoresis to separate the amplified DNA, and then the amplified DNA is stained with ethidium bromide and irradiated with UV.
A was detected. The result is shown in FIG. As is clear from this figure, when 10 μg / ml of cyclosporin A was added, the transcription of the follistatin gene was suppressed.
【００１９】実施例２． コンフルエントの程度の影響 実施例１の方法を反復したが、サイクロスポリンＡを無
添加とし、ケラチノサイト培養における細胞増殖の程度
を、５０％コンフルエント、８０％コンフルエント、１
００％コンフルエント、及び１００％コンフルエント後
さらに２日間培養の４種類とした。 Embodiment 2 FIG . Effect of Degree of Confluence The method of Example 1 was repeated except that cyclosporin A was not added, and the degree of cell growth in keratinocyte culture was reduced by 50% confluent, 80% confluent, and 1%.
Four types of culture were performed for two days after 00% confluence and 100% confluence.
【００２０】この結果を図２に示す。この図から明らか
な通り、５０％コンフルエント及び８０％コンフルエン
トではサイクロスポリンＡの非存在下でホリスタチン遺
伝子の転写が認められたが、１００％コンフルエントに
達して細胞増殖が停止した後はホリスタチン遺伝子の転
写は減少し、１００％コンフルエント後さらに２日間培
養した場合には、ホリスタチン遺伝子の転写は生じなか
った。FIG. 2 shows the result. As is clear from this figure, at 50% confluent and 80% confluent, transcription of the follistatin gene was observed in the absence of cyclosporin A, but after reaching 100% confluence and cell growth was stopped, Transcription was reduced and no further transcription of the follistatin gene occurred when the cells were cultured for another 2 days after 100% confluence.
【００２１】[0021]
配列番号：１ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｓｙｎＤＮＡ 配列 CTCCTGCTGC TGCTGCTCTG C 21 SEQ ID NO: 1 Sequence length: 21 Sequence type: nucleic acid Number of strands: single-stranded Topology: linear Sequence type: synDNA sequence CTCCTGCTGC TGCTGCTCTG C 21
【００２２】配列番号：２ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｓｙｎＤＮＡ 配列 TCCTCTTCCT CGGTGTCTTC C 21SEQ ID NO: 2 Sequence length: 21 Sequence type: nucleic acid Number of strands: single strand Topology: linear Sequence type: synDNA sequence TCCTCTTCCT CGGTGTCTTC C 21
【図１】図１は、ケラチノサイトにおけるホリスタチン
遺伝子の転写をサイクロスポリンＡが量依存的に阻害す
ることを示す図であり、電気泳動図を示す図面代用写真
である。BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS FIG. 1 is a drawing showing that cyclosporin A inhibits the transcription of the follistatin gene in keratinocytes in a dose-dependent manner, and is a drawing substitute photograph showing an electrophoretogram.
【図２】図２は、ケラチノサイトにおけるホリスタチン
遺伝子の転写が該細胞のコンフルエントの程度により異
ることを示す図であり、電気泳動の結果を示す図面代用
写真である。FIG. 2 is a photograph showing that transcription of the follistatin gene in keratinocytes varies depending on the degree of confluence of the cells, and is a photograph substituted for a drawing showing the results of electrophoresis.
フロントページの続き (72)発明者 相馬 勤 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社資生堂第二リサーチセンター内 (72)発明者 日比野 利彦 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社資生堂第二リサーチセンター内Continued on the front page (72) Inventor Tsutomu Soma 2-12-1 Fukuura, Kanazawa-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture Inside Shiseido Second Research Center Co., Ltd. (72) Toshihiko Hibino 2-12-, Fukuura, Kanazawa-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture 1. Inside Shiseido Daini Research Center Co., Ltd.
Claims (3)
ノサイトを培養し、該培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホ
リスタチンをコードするｍＲＮＡを検出し、そして被験
物質の存在下と非存在下でホリスタチンをコードするｍ
ＲＮＡの量に差がある場合に、前記被験物質を免疫抑制
剤、皮膚疾患の治療剤又は脱毛防止剤の候補として選択
することを特徴とする生理活性物質のスクリーニング
法。1. Keratinocytes are cultured in the presence and absence of a test substance, RNA is extracted from the cultured cells, mRNA encoding follistatin is detected, and follistatin is present in the presence and absence of the test substance. Code m
A method for screening for a physiologically active substance, wherein the test substance is selected as a candidate for an immunosuppressant, a therapeutic agent for skin diseases or an anti-hair loss agent when there is a difference in the amount of RNA.
存在下よりも存在下においてホリスタチンをコードする
ｍＲＮＡが少い場合に該被験物質を候補として選択す
る、請求項１に記載の方法。2. The method according to claim 1, wherein in the procedure according to claim 1, the test substance is selected as a candidate when there is less mRNA encoding follistatin in the presence than in the absence of the test substance.
出を、プライマー対CTCCTGCTGCTGCTCTGC（配列番号：
１）及びTCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC （配列番号：２）を用
いるＰＣＲ増幅法により行う、請求項１又は２に記載の
方法。3. Detection of mRNA encoding follistatin was performed using primer pair CTCCTGCTGCTGCTCTGC (SEQ ID NO:
The method according to claim 1 or 2, wherein the method is carried out by a PCR amplification method using 1) and TCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC (SEQ ID NO: 2).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16487297A JPH11199A (en) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | New screening of physiologically active substance |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16487297A JPH11199A (en) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | New screening of physiologically active substance |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11199A true JPH11199A (en) | 1999-01-06 |
Family
ID=15801536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16487297A Withdrawn JPH11199A (en) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | New screening of physiologically active substance |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11199A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1302546A2 (en) * | 2001-10-10 | 2003-04-16 | Tosoh Corporation | Method of evaluating drug efficacy and toxicity |
| JP2014518099A (en) * | 2011-05-30 | 2014-07-28 | ロレアル | Reconstituted scalp model and screening method for active molecules |
-
1997
- 1997-06-09 JP JP16487297A patent/JPH11199A/en not_active Withdrawn
Cited By (4)
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