JPH11152276A - ベンゾジアゼピン誘導体 - Google Patents
ベンゾジアゼピン誘導体Info
- Publication number
- JPH11152276A JPH11152276A JP33644497A JP33644497A JPH11152276A JP H11152276 A JPH11152276 A JP H11152276A JP 33644497 A JP33644497 A JP 33644497A JP 33644497 A JP33644497 A JP 33644497A JP H11152276 A JPH11152276 A JP H11152276A
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- JP
- Japan
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- dihydro
- benzodiazepin
- group
- phenyl
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Abstract
(57)【要約】
【課題】トロンボポエチンレセプターへの優れた親和性
と該レセプターに対するアゴニスト活性を有し、血小板
産生調節作用を持つ薬剤を提供する。 【解決手段】次の一般式 【化１】 （式中、Ｒ1 は置換基を有してもよいフェニル基又は置
換基を有してもよい１Ｈ−インドリル基を表し、Ｒ2 は
置換基を有してもよいフェニル基又は低級アルキル基を
表し、ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるベンゾジ
アゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩は、ト
ロンボポエチンレセプターへの優れた親和性と該レセプ
ターに対するアゴニスト活性を有し、血小板産生調節作
用を持つ薬剤として極めて有用である。
と該レセプターに対するアゴニスト活性を有し、血小板
産生調節作用を持つ薬剤を提供する。 【解決手段】次の一般式 【化１】 （式中、Ｒ1 は置換基を有してもよいフェニル基又は置
換基を有してもよい１Ｈ−インドリル基を表し、Ｒ2 は
置換基を有してもよいフェニル基又は低級アルキル基を
表し、ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるベンゾジ
アゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩は、ト
ロンボポエチンレセプターへの優れた親和性と該レセプ
ターに対するアゴニスト活性を有し、血小板産生調節作
用を持つ薬剤として極めて有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、巨核球造血，血小
板産生に深く関わるトロンボポエチンレセプターに対す
る親和性及びアゴニスト活性を有し、血小板産生調節作
用を持つ新規なベンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学
的に許容しうる塩に関するものである。
板産生に深く関わるトロンボポエチンレセプターに対す
る親和性及びアゴニスト活性を有し、血小板産生調節作
用を持つ新規なベンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学
的に許容しうる塩に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血小板は生体の止血，血栓形成において
主要な役割を果たす血液有形成分である。血小板は骨髄
幹細胞から巨核球前駆細胞より骨髄で分化，成熟して生
じた巨核球より血中に放出されるが、その寿命は約10日
であり、その数は長期にわたって一定の値を保つことが
知られていた。この巨核球造血の過程における主要な因
子であるトロンボポエチンの遺伝子が最近クローニング
され〔ネイチャー(Nature), 369 巻, 533 頁（1994
年）〕、トロンボポエチンはc-mpl がコードしているタ
ンパク質（トロンボポエチンレセプター： MPL）のリガ
ンドであり、巨核球前駆細胞から巨核球細胞の増殖と分
化成熟を刺激し、さらに血小板産生を増加させることも
判明した〔Nature, 369 巻, 568 頁（1994年）〕。ま
た、トロンボポエチンがそのレセプターに結合すると、
細胞内シグナル伝達因子であるSTAT5 が活性化されるこ
とも判明し〔ブラッド(Blood),89巻, 483 頁（1997
年）〕、このSTAT5 は巨核球の分化に必要な遺伝子の発
現を誘導すると推測されている。
主要な役割を果たす血液有形成分である。血小板は骨髄
幹細胞から巨核球前駆細胞より骨髄で分化，成熟して生
じた巨核球より血中に放出されるが、その寿命は約10日
であり、その数は長期にわたって一定の値を保つことが
知られていた。この巨核球造血の過程における主要な因
子であるトロンボポエチンの遺伝子が最近クローニング
され〔ネイチャー(Nature), 369 巻, 533 頁（1994
年）〕、トロンボポエチンはc-mpl がコードしているタ
ンパク質（トロンボポエチンレセプター： MPL）のリガ
ンドであり、巨核球前駆細胞から巨核球細胞の増殖と分
化成熟を刺激し、さらに血小板産生を増加させることも
判明した〔Nature, 369 巻, 568 頁（1994年）〕。ま
た、トロンボポエチンがそのレセプターに結合すると、
細胞内シグナル伝達因子であるSTAT5 が活性化されるこ
とも判明し〔ブラッド(Blood),89巻, 483 頁（1997
年）〕、このSTAT5 は巨核球の分化に必要な遺伝子の発
現を誘導すると推測されている。
【０００３】現在まで、トロンボポエチンレセプターを
介して血小板産生を調節する生理活性物質としては、ト
ロンボポエチンそのものの他、ＷＯ９６／４０１８９号
及びＷＯ９６／４０７５０号明細書に開示されている低
分子ペプチドなども知られている。
介して血小板産生を調節する生理活性物質としては、ト
ロンボポエチンそのものの他、ＷＯ９６／４０１８９号
及びＷＯ９６／４０７５０号明細書に開示されている低
分子ペプチドなども知られている。
【０００４】又、本発明に係るベンゾジアゼピン誘導体
と類似構造を有する化合物としては、次式
と類似構造を有する化合物としては、次式
【化２】 で示される（Ｒ）−１−（２−ジメチルアミノエチル）
−５−（２−フルオロフェニル）−１，３−ジヒドロ−
３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンが知られており、
特開昭６１−６３６６６号, 特開昭６３−２３８０６９
号及びジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー
(Journal of Medicinal Chemistry), 30巻, 1229頁（19
87年）等においてＣＣＫ拮抗剤として開示され、またＷ
Ｏ９５／１４４７０号ではカリウムイオン遮断による不
整脈治療剤として開示されてはいるが、これら文献には
本発明に係るトロンボポエチンレセプター親和性及びア
ゴニスト活性について全く触れられていない。
−５−（２−フルオロフェニル）−１，３−ジヒドロ−
３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンが知られており、
特開昭６１−６３６６６号, 特開昭６３−２３８０６９
号及びジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー
(Journal of Medicinal Chemistry), 30巻, 1229頁（19
87年）等においてＣＣＫ拮抗剤として開示され、またＷ
Ｏ９５／１４４７０号ではカリウムイオン遮断による不
整脈治療剤として開示されてはいるが、これら文献には
本発明に係るトロンボポエチンレセプター親和性及びア
ゴニスト活性について全く触れられていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】前述のトロンボポエチ
ンや低分子ペプチドなどの生理活性物質は、トロンボポ
エチンレセプターを介して血小板産生を調節し、血小板
数の減少を伴う種々の血液疾患の病態に対して優れた薬
剤として期待されている。しかしながら、トロンボポエ
チンは３３２個のアミノ酸からなるポリペプチドサイト
カインであり、薬剤として用いる場合、消化管内で分解
されると予測され、注射剤としては利用できるが、経口
投与製剤としては実用的ではないと考えられる。また、
トロンボポエチン様作用を有する低分子ペプチドも、経
口投与の可能性が未知数であることなどから、優れたト
ロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性を
有し経口投与可能な低分子非ペプチド化合物の開発が望
まれている。
ンや低分子ペプチドなどの生理活性物質は、トロンボポ
エチンレセプターを介して血小板産生を調節し、血小板
数の減少を伴う種々の血液疾患の病態に対して優れた薬
剤として期待されている。しかしながら、トロンボポエ
チンは３３２個のアミノ酸からなるポリペプチドサイト
カインであり、薬剤として用いる場合、消化管内で分解
されると予測され、注射剤としては利用できるが、経口
投与製剤としては実用的ではないと考えられる。また、
トロンボポエチン様作用を有する低分子ペプチドも、経
口投与の可能性が未知数であることなどから、優れたト
ロンボポエチンレセプター親和性及びアゴニスト活性を
有し経口投与可能な低分子非ペプチド化合物の開発が望
まれている。
【０００６】本発明の課題は、優れたトロンボポエチン
レセプター親和性及びアゴニスト活性を有し、且つ経口
投与可能な低分子非ペプチド化合物を見い出し、血小板
数の減少を伴う種々の病態に対し優れた効果が期待でき
る治療薬を提供することにある。
レセプター親和性及びアゴニスト活性を有し、且つ経口
投与可能な低分子非ペプチド化合物を見い出し、血小板
数の減少を伴う種々の病態に対し優れた効果が期待でき
る治療薬を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明に係る新規
なベンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しう
る塩が、優れたトロンボポエチンレセプター親和性及び
アゴニスト活性を有することを見い出し、本発明を完成
するに至った。
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明に係る新規
なベンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しう
る塩が、優れたトロンボポエチンレセプター親和性及び
アゴニスト活性を有することを見い出し、本発明を完成
するに至った。
【０００８】即ち、本発明は次の一般式（Ｉ）
【化３】 （式中、Ｒ1 は置換基を有してもよいフェニル基又は置
換基を有してもよい１Ｈ−インドリル基を表し、Ｒ2 は
置換基を有してもよいフェニル基又は低級アルキル基を
表し、ｎは１〜４の整数を表す。）で示される新規なベ
ンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩
を提供するものである。
換基を有してもよい１Ｈ−インドリル基を表し、Ｒ2 は
置換基を有してもよいフェニル基又は低級アルキル基を
表し、ｎは１〜４の整数を表す。）で示される新規なベ
ンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩
を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の前記一般式（Ｉ）におい
て、Ｒ1 で示されるフェニル基又は１Ｈ−インドリル基
及びＲ2 で示されるフェニル基は、適宜置換基を有して
いてもよく、置換基としては、例えば、メチル基，エチ
ル基，n-プロピル基等の低級アルキル基、フッ素原子，
塩素原子，臭素原子等のハロゲン原子、水酸基，シアノ
基，ニトロ基等が挙げられる。Ｒ2 で示される低級アル
キル基としては、例えば、メチル基，エチル基，n-プロ
ピル基，イソプロピル基，n-ブチル基，イソブチル基，
tert- ブチル基，n-ペンチル基，n-ヘキシル基等が挙げ
られる。
て、Ｒ1 で示されるフェニル基又は１Ｈ−インドリル基
及びＲ2 で示されるフェニル基は、適宜置換基を有して
いてもよく、置換基としては、例えば、メチル基，エチ
ル基，n-プロピル基等の低級アルキル基、フッ素原子，
塩素原子，臭素原子等のハロゲン原子、水酸基，シアノ
基，ニトロ基等が挙げられる。Ｒ2 で示される低級アル
キル基としては、例えば、メチル基，エチル基，n-プロ
ピル基，イソプロピル基，n-ブチル基，イソブチル基，
tert- ブチル基，n-ペンチル基，n-ヘキシル基等が挙げ
られる。
【００１０】本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合
物には、不斉に基づく異性体が存在するが、これらの異
性体及びその混合物も本発明の範囲に包含される。
物には、不斉に基づく異性体が存在するが、これらの異
性体及びその混合物も本発明の範囲に包含される。
【００１１】本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合
物又はその薬理学的に許容しうる塩は、製造条件により
任意の結晶形として存在することができ、任意の水和物
として存在することもできるが、これらの結晶形や水和
物及びその混合物も本発明の範囲に包含される。又、ア
セトン，エタノール，テトラヒドロフラン等の有機溶媒
を含む溶媒和物として存在することもあるが、これらの
形態の物質はいずれも本発明の範囲に包含される。
物又はその薬理学的に許容しうる塩は、製造条件により
任意の結晶形として存在することができ、任意の水和物
として存在することもできるが、これらの結晶形や水和
物及びその混合物も本発明の範囲に包含される。又、ア
セトン，エタノール，テトラヒドロフラン等の有機溶媒
を含む溶媒和物として存在することもあるが、これらの
形態の物質はいずれも本発明の範囲に包含される。
【００１２】本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合
物は、所望に応じて薬理学的に許容しうる塩に変換する
ことも、又は生成した塩から遊離塩基に変換することも
できる。本発明の薬理学的に許容しうる塩としては、例
えば、塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸，
燐酸等の鉱酸塩、あるいは、酢酸，マレイン酸，フマル
酸，クエン酸，シュウ酸，コハク酸，酒石酸，リンゴ
酸，マンデル酸，メタンスルホン酸，p-トルエンスルホ
ン酸，10- カンファースルホン酸等の有機酸塩等が挙げ
られる。
物は、所望に応じて薬理学的に許容しうる塩に変換する
ことも、又は生成した塩から遊離塩基に変換することも
できる。本発明の薬理学的に許容しうる塩としては、例
えば、塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸，
燐酸等の鉱酸塩、あるいは、酢酸，マレイン酸，フマル
酸，クエン酸，シュウ酸，コハク酸，酒石酸，リンゴ
酸，マンデル酸，メタンスルホン酸，p-トルエンスルホ
ン酸，10- カンファースルホン酸等の有機酸塩等が挙げ
られる。
【００１３】本発明に係るベンゾジアゼピン誘導体の好
ましい態様としては、以下の化合物及びその薬理学的に
許容しうる塩を挙げることができるが、本発明はこれら
の例に限定されるものではない。 (1) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ
−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (2) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (3) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）
−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (4) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (5) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (6) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (7) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（４−ヒドロキシフェニルメチル）−
５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン (8) （±）−５−（２−フルオロフェニル）−１−
（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒドロ−３−
（フェニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (9) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−
５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン (10) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (11) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (12) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (13) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (14) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (15) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（５−メチル−１Ｈ−インドール−３
−イルメチル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾ
ジアゼピン−２−オン (16) （±）−５−（２−フルオロフェニル）−１−
（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒドロ−３−
（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−２−オン (17) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (18) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (19) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (20) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
ましい態様としては、以下の化合物及びその薬理学的に
許容しうる塩を挙げることができるが、本発明はこれら
の例に限定されるものではない。 (1) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ
−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (2) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (3) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）
−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (4) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (5) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (6) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (7) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（４−ヒドロキシフェニルメチル）−
５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン (8) （±）−５−（２−フルオロフェニル）−１−
（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒドロ−３−
（フェニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (9) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−
５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン (10) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (11) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (12) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (13) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (14) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン
−２−オン (15) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（５−メチル−１Ｈ−インドール−３
−イルメチル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾ
ジアゼピン−２−オン (16) （±）−５−（２−フルオロフェニル）−１−
（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒドロ−３−
（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−２−オン (17) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (18) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (19) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−
２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (20) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
【００１４】(21) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチ
ル）−１，３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニル
メチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (22) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (23) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（４−ヒドロキシフェニルメチル）−
５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン (24) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−イソプロピル−３−（フェニルメチ
ル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (25) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−
５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン (26) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (27) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (28) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (29) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (30) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (31) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（５−メチル−１Ｈ−イ
ンドール−３−イルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジ
アゼピン−２−オン (32) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−イソプロピル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼ
ピン−２−オン
ル）−１，３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニル
メチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (22) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (23) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（４−ヒドロキシフェニルメチル）−
５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン (24) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−イソプロピル−３−（フェニルメチ
ル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン (25) （±）−１−（グアニジノメチル）−１，３−ジ
ヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−
５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン (26) （±）−１−（２−グアニジノエチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (27) （±）−１−（３−グアニジノプロピル）−１，
３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (28) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (29) （Ｒ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (30) （Ｓ）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−
２−オン (31) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−５−メチル−３−（５−メチル−１Ｈ−イ
ンドール−３−イルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジ
アゼピン−２−オン (32) （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３
−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチ
ル）−５−イソプロピル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼ
ピン−２−オン
【００１５】本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合
物は、以下の方法により製造することができるが、当該
化合物の製造方法は、この方法に限定されるわけではな
い。
物は、以下の方法により製造することができるが、当該
化合物の製造方法は、この方法に限定されるわけではな
い。
【００１６】
【化４】 （式中、Ｒ1 , Ｒ2 及びｎは前述と同意義を表す。）
【００１７】即ち、工程１においては、特開昭６１−６
３６６６号, 特開昭６３−２３８０６９号及びJournal
of Medicinal Chemistry, 30巻, 1229頁（1987年）等に
開示されている一般式（II）の化合物と、次の一般式
（Ｖ）
３６６６号, 特開昭６３−２３８０６９号及びJournal
of Medicinal Chemistry, 30巻, 1229頁（1987年）等に
開示されている一般式（II）の化合物と、次の一般式
（Ｖ）
【化５】 （Ｌは塩素原子，臭素原子等のハロゲン原子又はメシル
オキシ基等の脱離基を表し、ｎは前述と同意義を表
す。）で示される化合物を、 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド, テトラヒドロフラン等の溶媒中、水素化ナトリウ
ム，リチウムジイソプロピルアミド等の塩基の存在下
で、０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させるこ
とにより、一般式 (III)の化合物を得ることができる。
オキシ基等の脱離基を表し、ｎは前述と同意義を表
す。）で示される化合物を、 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド, テトラヒドロフラン等の溶媒中、水素化ナトリウ
ム，リチウムジイソプロピルアミド等の塩基の存在下
で、０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させるこ
とにより、一般式 (III)の化合物を得ることができる。
【００１８】工程２においては、一般式（III)の化合物
をエタノール等の溶媒中、抱水ヒドラジン又はメチルア
ミンと０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させる
ことにより、一般式（IV）の化合物を得ることができ
る。
をエタノール等の溶媒中、抱水ヒドラジン又はメチルア
ミンと０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させる
ことにより、一般式（IV）の化合物を得ることができ
る。
【００１９】工程３においては、一般式（IV）の化合物
と１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン等のグアニ
ル化試薬とをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒
中、０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させるこ
とにより、本発明に係る前記一般式（Ｉ）の化合物を得
ることができる。
と１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン等のグアニ
ル化試薬とをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒
中、０℃から溶媒の還流温度までの範囲で反応させるこ
とにより、本発明に係る前記一般式（Ｉ）の化合物を得
ることができる。
【００２０】このようにして製造される前記一般式
（Ｉ）で示される新規なベンゾジアゼピン誘導体又はそ
の薬理学的に許容しうる塩の少なくとも１つを有効成分
として含有する医薬は、通常、カプセル剤，錠剤，細粒
剤，顆粒剤，散剤，シロップ剤などの経口剤、あるいは
注射剤として投与される。これらの製剤は、薬理学的、
製剤学的に許容しうる添加剤を加え、常法により製造す
ることができる。即ち経口剤にあっては、賦形剤（乳
糖，D-マンニトール，トウモロコシデンプン，結晶セル
ロース等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロース，カ
ルボキシメチルセルロースカルシウム等）、結合剤（ヒ
ドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース，ポリビニルピロリドン等）、滑沢剤（ス
テアリン酸マグネシウム，タルク等）、コーティング剤
（ヒドロキシプロピルメチルセルロース，白糖，酸化チ
タン等）、可塑剤（ポリエチレングリコール等）等の製
剤用成分が、注射剤にあっては水性あるいは用時溶解型
剤型を構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤（注射用蒸留
水，生理食塩水，プロピレングリコール等）、pH調節剤
（無機又は有機の酸あるいは塩基）、 等張化剤（食塩，
ブドウ糖，グリセリン等）、 安定化剤等の製剤成分が使
用される。
（Ｉ）で示される新規なベンゾジアゼピン誘導体又はそ
の薬理学的に許容しうる塩の少なくとも１つを有効成分
として含有する医薬は、通常、カプセル剤，錠剤，細粒
剤，顆粒剤，散剤，シロップ剤などの経口剤、あるいは
注射剤として投与される。これらの製剤は、薬理学的、
製剤学的に許容しうる添加剤を加え、常法により製造す
ることができる。即ち経口剤にあっては、賦形剤（乳
糖，D-マンニトール，トウモロコシデンプン，結晶セル
ロース等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロース，カ
ルボキシメチルセルロースカルシウム等）、結合剤（ヒ
ドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース，ポリビニルピロリドン等）、滑沢剤（ス
テアリン酸マグネシウム，タルク等）、コーティング剤
（ヒドロキシプロピルメチルセルロース，白糖，酸化チ
タン等）、可塑剤（ポリエチレングリコール等）等の製
剤用成分が、注射剤にあっては水性あるいは用時溶解型
剤型を構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤（注射用蒸留
水，生理食塩水，プロピレングリコール等）、pH調節剤
（無機又は有機の酸あるいは塩基）、 等張化剤（食塩，
ブドウ糖，グリセリン等）、 安定化剤等の製剤成分が使
用される。
【００２１】本発明化合物の治療患者への投与量は、患
者の症状，年齢等により異なるが、通常成人の場合、経
口投与で１〜２０００mg、非経口投与で１〜２００mg
を、１日１回又は数回に分けて投与することができる。
者の症状，年齢等により異なるが、通常成人の場合、経
口投与で１〜２０００mg、非経口投与で１〜２００mg
を、１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００２２】
【実施例】以下、本発明を例によって説明するが、本発
明はこれらの例の特定の細部に限定されるものではな
い。
明はこれらの例の特定の細部に限定されるものではな
い。
【００２３】例１ （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−２−オキ
ソ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタル
イミド （±）−１，３−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェ
ニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン４．００ｇ（１２mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド５０mlの混合物に、氷冷下６０％水素化ナトリ
ウム０．５４ｇ（１４mmol）を加えた。氷冷下１．５時
間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチル）フタルイミド７．
００ｇ（２５mmol）を加え、室温で１８時間攪拌した。
反応混合物に水１００mlを加え、溶媒を吸引濾去した。
残渣を酢酸エチルに溶かし、水，飽和食塩水で順次洗浄
し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残
渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサ
ン：酢酸エチル＝２：１）により精製し、黄色無晶形固
体を得た。得られた固体にジイソプロピルエーテルを加
えて結晶化させ、吸引濾過して、融点１２４〜１２６℃
の微黄色結晶５．９０ｇ（収率９１％）を得た。 元素分析値 Ｃ34Ｈ29Ｎ3 Ｏ3 理論値 Ｃ, 77.40; Ｈ, 5.54; Ｎ, 7.96 実験値 Ｃ, 77.08; Ｈ, 5.52; Ｎ, 7.94 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−２−オキソ−
５−フェニル−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミド
４．００ｇ（７．６mmol），抱水ヒドラジン０．４１ml
（８．５mmol）及びエタノール４０mlの混合物を４時間
加熱還流した。放冷後、反応混合物に５％水酸化ナトリ
ウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチルで抽出した。有
機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで
乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグ
ラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝
５：１）により精製し、微黄色無晶形固体１．１７ｇ
（収率３９％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3376 , 167
6 , 1606 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.21-1.35(2H,
m),1.40-1.60(4H,m),2.48-2.57(2H,m),3.59(2H,d,J=6.5
Hz),3.65(1H,ddd,J=13.5,7.5,5.5Hz),3.78(1H,t,J=6.5H
z),4.43(1H,dt,J=14,7.5Hz),7.15-7.56(14H,m) 高分解能マススペクトル：Ｃ26Ｈ27Ｎ3 Ｏ 理論値 m/z : 397.2154 実験値 m/z : 397.2150 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−１，
４−ベンゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（３．８mm
ol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン・塩
酸塩０．５５ｇ（３．８mmol），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルエチルアミン０．４９ｇ（３．８mmol）及びＮ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド６mlの混合物に加えた。室温で４
時間攪拌後、反応混合物にジエチルエーテル５０mlを加
え、吸引濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィー
（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５：１）
により精製し、微黄色無晶形固体１．２７ｇ（収率６８
％）を得た。 元素分析値 Ｃ27Ｈ29Ｎ5 Ｏ・ＨＣｌ・5/4 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 65.05; Ｈ, 6.57; Ｎ, 14.05 実験値 Ｃ, 65.04; Ｈ, 6.61; Ｎ, 14.10
ドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−２−オキ
ソ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタル
イミド （±）−１，３−ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェ
ニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン４．００ｇ（１２mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド５０mlの混合物に、氷冷下６０％水素化ナトリ
ウム０．５４ｇ（１４mmol）を加えた。氷冷下１．５時
間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチル）フタルイミド７．
００ｇ（２５mmol）を加え、室温で１８時間攪拌した。
反応混合物に水１００mlを加え、溶媒を吸引濾去した。
残渣を酢酸エチルに溶かし、水，飽和食塩水で順次洗浄
し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残
渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサ
ン：酢酸エチル＝２：１）により精製し、黄色無晶形固
体を得た。得られた固体にジイソプロピルエーテルを加
えて結晶化させ、吸引濾過して、融点１２４〜１２６℃
の微黄色結晶５．９０ｇ（収率９１％）を得た。 元素分析値 Ｃ34Ｈ29Ｎ3 Ｏ3 理論値 Ｃ, 77.40; Ｈ, 5.54; Ｎ, 7.96 実験値 Ｃ, 77.08; Ｈ, 5.52; Ｎ, 7.94 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−２−オキソ−
５−フェニル−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミド
４．００ｇ（７．６mmol），抱水ヒドラジン０．４１ml
（８．５mmol）及びエタノール４０mlの混合物を４時間
加熱還流した。放冷後、反応混合物に５％水酸化ナトリ
ウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチルで抽出した。有
機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで
乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグ
ラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝
５：１）により精製し、微黄色無晶形固体１．１７ｇ
（収率３９％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3376 , 167
6 , 1606 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.21-1.35(2H,
m),1.40-1.60(4H,m),2.48-2.57(2H,m),3.59(2H,d,J=6.5
Hz),3.65(1H,ddd,J=13.5,7.5,5.5Hz),3.78(1H,t,J=6.5H
z),4.43(1H,dt,J=14,7.5Hz),7.15-7.56(14H,m) 高分解能マススペクトル：Ｃ26Ｈ27Ｎ3 Ｏ 理論値 m/z : 397.2154 実験値 m/z : 397.2150 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２
Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−５−フェニル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−１，
４−ベンゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（３．８mm
ol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン・塩
酸塩０．５５ｇ（３．８mmol），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルエチルアミン０．４９ｇ（３．８mmol）及びＮ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド６mlの混合物に加えた。室温で４
時間攪拌後、反応混合物にジエチルエーテル５０mlを加
え、吸引濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィー
（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５：１）
により精製し、微黄色無晶形固体１．２７ｇ（収率６８
％）を得た。 元素分析値 Ｃ27Ｈ29Ｎ5 Ｏ・ＨＣｌ・5/4 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 65.05; Ｈ, 6.57; Ｎ, 14.05 実験値 Ｃ, 65.04; Ｈ, 6.61; Ｎ, 14.10
【００２４】例２ （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１
Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−５−
フェニル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イ
ル〕ブチル〕フタルイミド （±）−１，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−
３−イルメチル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベン
ゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（４．１mmol）及び
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０mlの混合物に、氷冷
下６０％水素化ナトリウム０．１７ｇ（４．３mmol）を
加えた。氷冷下１時間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチ
ル）フタルイミド２．４８ｇ（８．８mmol）を加え、室
温で１６時間攪拌した。反応混合物に水１００mlを加
え、溶媒を吸引濾去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、
水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフ
ィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５
０：１）により精製し、黄色無晶形固体２．１３ｇ（収
率９２％）を得た。 元素分析値 Ｃ36Ｈ30Ｎ4 Ｏ3 理論値 Ｃ, 76.31; Ｈ, 5.34; Ｎ, 9.89 実験値 Ｃ, 76.18; Ｈ, 5.16; Ｎ, 9.85 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−
インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−５−フェ
ニル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブ
チル〕フタルイミド１．５０ｇ（２．７mmol），抱水ヒ
ドラジン０．１４ml（２．９mmol）及びエタノール２０
mlの混合物を５時間加熱還流した。放冷後、反応混合物
に５％水酸化ナトリウム水溶液５０mlを加え、酢酸エチ
ルで抽出した。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣を
カラムクロマトグラフィー（アルミナ，ジクロロメタ
ン：メタノール＝２０：１→９：１）により精製し、微
褐色無晶形固体０．８１ｇ（収率７０％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (KBr) cm -1 ： 3360 , 1672
, 1602 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.22-1.57(6H,
m),2.53(2H,dd,J=13.5,6.5Hz),3.63-3.71(2H,m),3.78-
3.84(2H,m),4.44(1H,dt,J=14,7Hz),7.05-7.65(14H,m),
8.01(1H,brs) 高分解能マススペクトル：Ｃ28Ｈ28Ｎ4 Ｏ 理論値 m/z : 436.2263 実験値 m/z : 436.2263 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）
−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２
−オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−フ
ェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
０．８１ｇ（１．９mmol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−
カルボキサミジン・塩酸塩０．２７ｇ（１．９mmol），
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．２４ｇ（１．
９mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１．８mlの
混合物に加えた。室温で２．５時間攪拌後、反応混合物
にジエチルエーテル２０mlを加え、吸引濾過した。残渣
をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメ
タン：メタノール＝５：１）により精製し、淡黄色無晶
形固体０．５５ｇ（収率５６％）を得た。 元素分析値 Ｃ29Ｈ30Ｎ6 Ｏ・ＨＣｌ・1/2 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 66.46; Ｈ, 6.15; Ｎ, 16.04 実験値 Ｃ, 66.12; Ｈ, 6.28; Ｎ, 15.68
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１
Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−５−
フェニル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イ
ル〕ブチル〕フタルイミド （±）−１，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−
３−イルメチル）−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベン
ゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（４．１mmol）及び
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０mlの混合物に、氷冷
下６０％水素化ナトリウム０．１７ｇ（４．３mmol）を
加えた。氷冷下１時間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチ
ル）フタルイミド２．４８ｇ（８．８mmol）を加え、室
温で１６時間攪拌した。反応混合物に水１００mlを加
え、溶媒を吸引濾去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、
水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフ
ィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５
０：１）により精製し、黄色無晶形固体２．１３ｇ（収
率９２％）を得た。 元素分析値 Ｃ36Ｈ30Ｎ4 Ｏ3 理論値 Ｃ, 76.31; Ｈ, 5.34; Ｎ, 9.89 実験値 Ｃ, 76.18; Ｈ, 5.16; Ｎ, 9.85 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−
インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−５−フェ
ニル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブ
チル〕フタルイミド１．５０ｇ（２．７mmol），抱水ヒ
ドラジン０．１４ml（２．９mmol）及びエタノール２０
mlの混合物を５時間加熱還流した。放冷後、反応混合物
に５％水酸化ナトリウム水溶液５０mlを加え、酢酸エチ
ルで抽出した。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣を
カラムクロマトグラフィー（アルミナ，ジクロロメタ
ン：メタノール＝２０：１→９：１）により精製し、微
褐色無晶形固体０．８１ｇ（収率７０％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (KBr) cm -1 ： 3360 , 1672
, 1602 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.22-1.57(6H,
m),2.53(2H,dd,J=13.5,6.5Hz),3.63-3.71(2H,m),3.78-
3.84(2H,m),4.44(1H,dt,J=14,7Hz),7.05-7.65(14H,m),
8.01(1H,brs) 高分解能マススペクトル：Ｃ28Ｈ28Ｎ4 Ｏ 理論値 m/z : 436.2263 実験値 m/z : 436.2263 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）
−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２
−オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−フ
ェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
０．８１ｇ（１．９mmol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−
カルボキサミジン・塩酸塩０．２７ｇ（１．９mmol），
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．２４ｇ（１．
９mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１．８mlの
混合物に加えた。室温で２．５時間攪拌後、反応混合物
にジエチルエーテル２０mlを加え、吸引濾過した。残渣
をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメ
タン：メタノール＝５：１）により精製し、淡黄色無晶
形固体０．５５ｇ（収率５６％）を得た。 元素分析値 Ｃ29Ｈ30Ｎ6 Ｏ・ＨＣｌ・1/2 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 66.46; Ｈ, 6.15; Ｎ, 16.04 実験値 Ｃ, 66.12; Ｈ, 6.28; Ｎ, 15.68
【００２５】例３ （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−５−メチ
ル−２−オキソ−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，
４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミ
ド （±）−１，３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニ
ルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン２．６５ｇ（１０mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド５０mlの混合物に、氷冷下６０％水素化ナトリウ
ム０．４２ｇ（１１mmol）を加えた。氷冷下１時間攪拌
後、Ｎ−（４−ブロモブチル）フタルイミド７．００ｇ
（２５mmol）を加え、室温で４時間攪拌した。反応混合
物に水１５０mlを加え、溶媒を吸引濾去した。残渣を酢
酸エチルに溶かし、水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸
ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラ
ムクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン：酢酸エ
チル＝２：１）により精製し、無色無晶形固体を得た。
得られた固体にジイソプロピルエーテルを加えて結晶化
させ、吸引濾過して、融点１３７〜１３９．５℃の無色
結晶３．７５ｇ（収率８１％）を得た。 元素分析値 Ｃ29Ｈ27Ｎ3 Ｏ3 理論値 Ｃ, 74.82; Ｈ, 5.85; Ｎ, 9.03 実験値 Ｃ, 75.06; Ｈ, 6.06; Ｎ, 9.07 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−５−メチル−
２−オキソ−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，４−
ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミド
３．６５ｇ（７．８mmol），抱水ヒドラジン０．４２ml
（８．７mmol）及びエタノール５０mlの混合物を３．５
時間加熱還流した。放冷後、反応混合物に５％水酸化ナ
トリウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチルで抽出し
た。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロ
マトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノ
ール＝５：１）により精製し、褐色油状物質２．００ｇ
（収率７６％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3368 , 167
4 , 1628 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.24-1.60(4H,
m),1.63(2H,brs),2.46(3H,s),2.61(2H,t,J=7.5Hz),3.30
-3.35(1H,m),3.59-3.66(3H,m),4.27(1H,dt,J=14,7Hz),
7.13-7.51(9H,m) 高分解能マススペクトル：Ｃ21Ｈ25Ｎ3 Ｏ 理論値 m/z : 335.1998 実験値 m/z : 335.1991 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ
−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩（±）
−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ−５−
メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベン
ゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（４．５mmol）を、
１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン・塩酸塩０．
６６ｇ（４．５mmol），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチル
アミン０．７８ml（４．５mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド４．５mlの混合物に加えた。室温で４時間
攪拌後、反応混合物にジエチルエーテル４５mlを加え、
吸引濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリ
カゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により
精製し、淡褐色無晶形固体０．８７ｇ（収率４５％）を
得た。 元素分析値 Ｃ22Ｈ27Ｎ5 Ｏ・ＨＣｌ・Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 61.17; Ｈ, 7.00; Ｎ, 16.21 実験値 Ｃ, 61.00; Ｈ, 7.02; Ｎ, 16.13
ドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−５−メチ
ル−２−オキソ−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，
４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミ
ド （±）−１，３−ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニ
ルメチル）−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オ
ン２．６５ｇ（１０mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド５０mlの混合物に、氷冷下６０％水素化ナトリウ
ム０．４２ｇ（１１mmol）を加えた。氷冷下１時間攪拌
後、Ｎ−（４−ブロモブチル）フタルイミド７．００ｇ
（２５mmol）を加え、室温で４時間攪拌した。反応混合
物に水１５０mlを加え、溶媒を吸引濾去した。残渣を酢
酸エチルに溶かし、水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸
ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラ
ムクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン：酢酸エ
チル＝２：１）により精製し、無色無晶形固体を得た。
得られた固体にジイソプロピルエーテルを加えて結晶化
させ、吸引濾過して、融点１３７〜１３９．５℃の無色
結晶３．７５ｇ（収率８１％）を得た。 元素分析値 Ｃ29Ｈ27Ｎ3 Ｏ3 理論値 Ｃ, 74.82; Ｈ, 5.85; Ｎ, 9.03 実験値 Ｃ, 75.06; Ｈ, 6.06; Ｎ, 9.07 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−
１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−５−メチル−
２−オキソ−３−（フェニルメチル）−１Ｈ−１，４−
ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチル〕フタルイミド
３．６５ｇ（７．８mmol），抱水ヒドラジン０．４２ml
（８．７mmol）及びエタノール５０mlの混合物を３．５
時間加熱還流した。放冷後、反応混合物に５％水酸化ナ
トリウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチルで抽出し
た。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロ
マトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタノ
ール＝５：１）により精製し、褐色油状物質２．００ｇ
（収率７６％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3368 , 167
4 , 1628 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.24-1.60(4H,
m),1.63(2H,brs),2.46(3H,s),2.61(2H,t,J=7.5Hz),3.30
-3.35(1H,m),3.59-3.66(3H,m),4.27(1H,dt,J=14,7Hz),
7.13-7.51(9H,m) 高分解能マススペクトル：Ｃ21Ｈ25Ｎ3 Ｏ 理論値 m/z : 335.1998 実験値 m/z : 335.1991 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−５−メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ
−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン・塩酸塩（±）
−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ−５−
メチル−３−（フェニルメチル）−２Ｈ−１，４−ベン
ゾジアゼピン−２−オン１．５０ｇ（４．５mmol）を、
１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジン・塩酸塩０．
６６ｇ（４．５mmol），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチル
アミン０．７８ml（４．５mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド４．５mlの混合物に加えた。室温で４時間
攪拌後、反応混合物にジエチルエーテル４５mlを加え、
吸引濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリ
カゲル，ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により
精製し、淡褐色無晶形固体０．８７ｇ（収率４５％）を
得た。 元素分析値 Ｃ22Ｈ27Ｎ5 Ｏ・ＨＣｌ・Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 61.17; Ｈ, 7.00; Ｎ, 16.21 実験値 Ｃ, 61.00; Ｈ, 7.02; Ｎ, 16.13
【００２６】例４ （±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１
Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−メチル−２−
オキソ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕
ブチル〕フタルイミド （±）−１，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−
３−イルメチル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾ
ジアゼピン−２−オン３．００ｇ（９．９mmol）及び
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０mlの混合物に、氷冷
下６０％水素化ナトリウム０．４２ｇ（１１mmol）を加
えた。氷冷下１．５時間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチ
ル）フタルイミド７．００ｇ（２５mmol）を加え、室温
で３時間攪拌した。反応混合物に水１５０mlを加え、溶
媒を吸引濾去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、水，飽
和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒
を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シ
リカゲル，ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノー
ル＝２０：１）により精製し、黄色無晶形固体を得た。
得られた固体にジイソプロピルエーテルを加えて結晶化
させ、吸引濾過して、融点１７１．５〜１７３．５℃の
無色結晶３．３０ｇ（収率６６％）を得た。 元素分析値 Ｃ31Ｈ28Ｎ4 Ｏ3 理論値 Ｃ, 73.79; Ｈ, 5.59; Ｎ, 11.10 実験値 Ｃ, 73.76; Ｈ, 5.66; Ｎ, 11.03 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−
インドール−３−イルメチル）−５−メチル−２−オキ
ソ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチ
ル〕フタルイミド３．３０ｇ（６．５mmol），抱水ヒド
ラジン０．３５ml（７．２mmol）及びエタノール４０ml
の混合物を５時間加熱還流した。放冷後、反応混合物に
５％水酸化ナトリウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチ
ルで抽出した。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣
２．７０ｇのうち１．２０ｇをカラムクロマトグラフィ
ー（アルミナ，ジクロロメタン：メタノール＝１０：
１）により精製し、無色無晶形固体０．４５ｇ（収率１
８％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3304 , 166
8 , 1626 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.25-1.60(6H,
m),2.47(3H,s),2.62(2H,t,J=7Hz),3.44(1H,dd,J=14.5,6
Hz),3.60-3.67(2H,m),3.78-3.83(1H,m),4.23-4.29(1H,
m),7.00-7.56(9H,m),8.07(1H,brs)高分解能マススペク
トル：Ｃ23Ｈ26Ｎ4 Ｏ 理論値 m/z : 374.2107 実験値 m/z : 374.2104 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）
−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−メ
チル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン１．
５０ｇ（４．０mmol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−カル
ボキサミジン・塩酸塩０．５９ｇ（４．０mmol），Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．７０ml（４．０mm
ol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４mlの混合物に
加えた。室温で１５時間攪拌後、反応混合物にジエチル
エーテル４０mlを加え、吸引濾過した。残渣をカラムク
ロマトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタ
ノール＝５：１）により精製し、淡黄色無晶形固体０．
５０ｇ（収率２５％）を得た。 元素分析値 Ｃ24Ｈ28Ｎ6 Ｏ・ＨＣｌ・9/4 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 58.41; Ｈ, 6.84; Ｎ, 17.03 実験値 Ｃ, 58.14; Ｈ, 6.51; Ｎ, 16.85
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン
・塩酸塩 ａ）（±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１
Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−メチル−２−
オキソ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕
ブチル〕フタルイミド （±）−１，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−
３−イルメチル）−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾ
ジアゼピン−２−オン３．００ｇ（９．９mmol）及び
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０mlの混合物に、氷冷
下６０％水素化ナトリウム０．４２ｇ（１１mmol）を加
えた。氷冷下１．５時間攪拌後、Ｎ−（４−ブロモブチ
ル）フタルイミド７．００ｇ（２５mmol）を加え、室温
で３時間攪拌した。反応混合物に水１５０mlを加え、溶
媒を吸引濾去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、水，飽
和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒
を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シ
リカゲル，ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノー
ル＝２０：１）により精製し、黄色無晶形固体を得た。
得られた固体にジイソプロピルエーテルを加えて結晶化
させ、吸引濾過して、融点１７１．５〜１７３．５℃の
無色結晶３．３０ｇ（収率６６％）を得た。 元素分析値 Ｃ31Ｈ28Ｎ4 Ｏ3 理論値 Ｃ, 73.79; Ｈ, 5.59; Ｎ, 11.10 実験値 Ｃ, 73.76; Ｈ, 5.66; Ｎ, 11.03 ｂ）（±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒ
ドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５
−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン （±）−Ｎ−〔４−〔２，３−ジヒドロ−３−（１Ｈ−
インドール−３−イルメチル）−５−メチル−２−オキ
ソ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕ブチ
ル〕フタルイミド３．３０ｇ（６．５mmol），抱水ヒド
ラジン０．３５ml（７．２mmol）及びエタノール４０ml
の混合物を５時間加熱還流した。放冷後、反応混合物に
５％水酸化ナトリウム水溶液１００mlを加え、酢酸エチ
ルで抽出した。有機層を水，飽和食塩水で順次洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣
２．７０ｇのうち１．２０ｇをカラムクロマトグラフィ
ー（アルミナ，ジクロロメタン：メタノール＝１０：
１）により精製し、無色無晶形固体０．４５ｇ（収率１
８％）を得た。 ＩＲスペクトル ν (liq) cm -1 ： 3304 , 166
8 , 1626 ＮＭＲスペクトル δ (CDCl3) ppm ： 1.25-1.60(6H,
m),2.47(3H,s),2.62(2H,t,J=7Hz),3.44(1H,dd,J=14.5,6
Hz),3.60-3.67(2H,m),3.78-3.83(1H,m),4.23-4.29(1H,
m),7.00-7.56(9H,m),8.07(1H,brs)高分解能マススペク
トル：Ｃ23Ｈ26Ｎ4 Ｏ 理論値 m/z : 374.2107 実験値 m/z : 374.2104 ｃ）（±）−１−（４−グアニジノブチル）−１，３−
ジヒドロ−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）
−５−メチル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−
オン・塩酸塩 （±）−１−（４−アミノブチル）−１，３−ジヒドロ
−３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−メ
チル−２Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン１．
５０ｇ（４．０mmol）を、１Ｈ−ピラゾール−１−カル
ボキサミジン・塩酸塩０．５９ｇ（４．０mmol），Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．７０ml（４．０mm
ol）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４mlの混合物に
加えた。室温で１５時間攪拌後、反応混合物にジエチル
エーテル４０mlを加え、吸引濾過した。残渣をカラムク
ロマトグラフィー（シリカゲル，ジクロロメタン：メタ
ノール＝５：１）により精製し、淡黄色無晶形固体０．
５０ｇ（収率２５％）を得た。 元素分析値 Ｃ24Ｈ28Ｎ6 Ｏ・ＨＣｌ・9/4 Ｈ2 Ｏ 理論値 Ｃ, 58.41; Ｈ, 6.84; Ｎ, 17.03 実験値 Ｃ, 58.14; Ｈ, 6.51; Ｎ, 16.85
【００２７】以下、本発明化合物のトロンボポエチンレ
セプター結合親和性を評価するために、トロンボポエチ
ンと被験化合物とのトロンボポエチンレセプターに対す
る競合実験を行った。又、本発明化合物のトロンボポエ
チンレセプターに対するアゴニスト活性を確認するため
に、トロンボポエチンレセプターを介した細胞内シグナ
ル伝達因子である STAT5の活性化をゲルシフトアッセイ
法を用い評価した。
セプター結合親和性を評価するために、トロンボポエチ
ンと被験化合物とのトロンボポエチンレセプターに対す
る競合実験を行った。又、本発明化合物のトロンボポエ
チンレセプターに対するアゴニスト活性を確認するため
に、トロンボポエチンレセプターを介した細胞内シグナ
ル伝達因子である STAT5の活性化をゲルシフトアッセイ
法を用い評価した。
【００２８】試験例１ヒトトロンボポエチンレセプター（MPL)発現プラスミド
の構築 (1) まず、プラークハイブリダイゼーション法により、
MPL cDNAの全領域を保持するファージクローンを得た。
このために PCR法によりヒト胎児肝cDNA（CLONTECH社
製）からヒトMPL cDNAの一部を取得した。なお、MPL cD
NAの開始コドンから終止コドンはGenBank M90102に、開
始コドンの上流の配列はEMBL X73551 に登録されてい
る。 PCRのためのプライマーは、 MPLの開始コドンのA
から数えて331塩基目から 350塩基目の配列に基づいた
センスプライマー5'-GTGCGTCTCTTCTTTCCGCT-3'と、1888
塩基目から1907塩基目の配列に基づいたアンチセンスプ
ライマー5'-TCAAGGCTGCTGCCAATAGC-3'を用いた。 PCR
は、Takara EX Taq （宝酒造社製）により添付の反応バ
ッファーを用い通常の条件で行った。この PCR産物をア
ガロースゲル電気泳動後、ゲルから SUPREC-01（宝酒造
社製）を用いて、添付のプロトコールに従い回収した。
回収した PCR産物を、Rediprime DNA labelling system
（Amersham社製）を用いて、添付のプロトコールに従い
［α- 32P ］dCTPでラベルし、プローブとした。これを
用いて、Human Fetal Liver 5'-STRETCH cDNAlibrary
（CLONTECH社製）から、添付のプロトコールに従い、MP
L cDNAのコーディング全領域と少なくとも開始コドンよ
り上流60塩基以上を保持するファージクローンを単離
し、常法に従ってファージを調製した。 (2) 次に PCR法により、ヒトMPL 細胞外領域cDNA（1 か
ら 491番目のアミノ酸配列）をコードする DNAを取得し
た。 PCRのための鋳型は上記で得られたファージを用
い、プライマーは MPLの開始コドンの28塩基上流から17
塩基分の配列に基づいたセンスプライマー5'-CTAAGGCAG
GCACACAG-3' と、486 から 491番目のアミノ酸配列に基
づいたアンチセンスプライマー5'-GGTGACCCAGGCGGTCTCG
GTGGC-3'を用いた。この際、 MPL細胞外領域タンパク質
のＣ末端領域がヒトIgG Fcと連結できるようにBstEIIサ
イトを入れ、さらに読み枠が一致するようにした。ま
た、ヒトIgG Fc領域cDNAは、B. D. Bennett らの文献
〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J
ournal of Biological Chemistry), 266巻, 23060 頁
（1991年）〕を参考にして、センスプライマー5'-CGCGG
TCACCGACAAAACTCA-3' とアンチセンスプライマー5'-GCA
CTCATTTACCCGGAGACAGGGAGA-3' を用いて、ヒト脾臓のQU
ICK-CLONE cDNA（CLONTECH社製）を材料として、 PCR法
により取得した。このようにして得られた PCR産物を、
以下に述べる工程に従ってpCR3（Invitrogen社製）に組
込み、 MPL発現プラスミドを構築した。 (3) PCRで得られた MPL細胞外領域cDNAとヒトIgG Fc領
域cDNAを、EUKARYOTIC TA CLONING KIT （Invitrogen社
製）を用いて添付のプロトコールに従い、pCR3哺乳細胞
発現ベクターに挿入した後、大腸菌TOP10 に形質転換し
た。得られた形質転換体を常法に従い大量培養した。こ
れから常法に従いプラスミドを調製し、それぞれMPL(B)
-pCR3 、IgG Fc(B)-pCR3と命名した。 (4) 約 200μg のMPL(B)-pCR3 を、0.64 unitsのBstEII
（東洋紡社製）と 200 unitsのScaI（宝酒造社製）で切
断後、これをアガロース電気泳動に供した。該プラスミ
ドより、MPL cDNA領域を含む3085塩基対の DNA断片を含
むゲル断片を切り出し、そのゲル断片から常法により D
NAを抽出した。 (5) 約20μg のIgG Fc(B)-pCR3を、40 unitsのBstEII
（東洋紡社製）と80 unitsのScaI（宝酒造社製）で切断
後、アルカリフォスファターゼ（東洋紡社製）にて脱リ
ン酸化後、これをアガロース電気泳動に供した。該プラ
スミドより、IgG Fc領域cDNAを含む4150塩基対の DNA断
片を含むゲル断片を切り出し、そのゲル断片から DNAを
抽出した。 (6) (4) で得た DNA断片（約30 ng)と(5) で得た DNA断
片（約20 ng)を、4.6 units のT4 DNAライゲース（東洋
紡社製）にて連結させた。エレクトロポレーション法に
より、大腸菌XL1-Blue株（Stratagene社製）に形質転換
した。得られた形質転換体を常法に従い大量培養した。
これから常法に従いプラスミドを調製し、MPL-IgG Fc
(B)/pCR3と命名した。
の構築 (1) まず、プラークハイブリダイゼーション法により、
MPL cDNAの全領域を保持するファージクローンを得た。
このために PCR法によりヒト胎児肝cDNA（CLONTECH社
製）からヒトMPL cDNAの一部を取得した。なお、MPL cD
NAの開始コドンから終止コドンはGenBank M90102に、開
始コドンの上流の配列はEMBL X73551 に登録されてい
る。 PCRのためのプライマーは、 MPLの開始コドンのA
から数えて331塩基目から 350塩基目の配列に基づいた
センスプライマー5'-GTGCGTCTCTTCTTTCCGCT-3'と、1888
塩基目から1907塩基目の配列に基づいたアンチセンスプ
ライマー5'-TCAAGGCTGCTGCCAATAGC-3'を用いた。 PCR
は、Takara EX Taq （宝酒造社製）により添付の反応バ
ッファーを用い通常の条件で行った。この PCR産物をア
ガロースゲル電気泳動後、ゲルから SUPREC-01（宝酒造
社製）を用いて、添付のプロトコールに従い回収した。
回収した PCR産物を、Rediprime DNA labelling system
（Amersham社製）を用いて、添付のプロトコールに従い
［α- 32P ］dCTPでラベルし、プローブとした。これを
用いて、Human Fetal Liver 5'-STRETCH cDNAlibrary
（CLONTECH社製）から、添付のプロトコールに従い、MP
L cDNAのコーディング全領域と少なくとも開始コドンよ
り上流60塩基以上を保持するファージクローンを単離
し、常法に従ってファージを調製した。 (2) 次に PCR法により、ヒトMPL 細胞外領域cDNA（1 か
ら 491番目のアミノ酸配列）をコードする DNAを取得し
た。 PCRのための鋳型は上記で得られたファージを用
い、プライマーは MPLの開始コドンの28塩基上流から17
塩基分の配列に基づいたセンスプライマー5'-CTAAGGCAG
GCACACAG-3' と、486 から 491番目のアミノ酸配列に基
づいたアンチセンスプライマー5'-GGTGACCCAGGCGGTCTCG
GTGGC-3'を用いた。この際、 MPL細胞外領域タンパク質
のＣ末端領域がヒトIgG Fcと連結できるようにBstEIIサ
イトを入れ、さらに読み枠が一致するようにした。ま
た、ヒトIgG Fc領域cDNAは、B. D. Bennett らの文献
〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J
ournal of Biological Chemistry), 266巻, 23060 頁
（1991年）〕を参考にして、センスプライマー5'-CGCGG
TCACCGACAAAACTCA-3' とアンチセンスプライマー5'-GCA
CTCATTTACCCGGAGACAGGGAGA-3' を用いて、ヒト脾臓のQU
ICK-CLONE cDNA（CLONTECH社製）を材料として、 PCR法
により取得した。このようにして得られた PCR産物を、
以下に述べる工程に従ってpCR3（Invitrogen社製）に組
込み、 MPL発現プラスミドを構築した。 (3) PCRで得られた MPL細胞外領域cDNAとヒトIgG Fc領
域cDNAを、EUKARYOTIC TA CLONING KIT （Invitrogen社
製）を用いて添付のプロトコールに従い、pCR3哺乳細胞
発現ベクターに挿入した後、大腸菌TOP10 に形質転換し
た。得られた形質転換体を常法に従い大量培養した。こ
れから常法に従いプラスミドを調製し、それぞれMPL(B)
-pCR3 、IgG Fc(B)-pCR3と命名した。 (4) 約 200μg のMPL(B)-pCR3 を、0.64 unitsのBstEII
（東洋紡社製）と 200 unitsのScaI（宝酒造社製）で切
断後、これをアガロース電気泳動に供した。該プラスミ
ドより、MPL cDNA領域を含む3085塩基対の DNA断片を含
むゲル断片を切り出し、そのゲル断片から常法により D
NAを抽出した。 (5) 約20μg のIgG Fc(B)-pCR3を、40 unitsのBstEII
（東洋紡社製）と80 unitsのScaI（宝酒造社製）で切断
後、アルカリフォスファターゼ（東洋紡社製）にて脱リ
ン酸化後、これをアガロース電気泳動に供した。該プラ
スミドより、IgG Fc領域cDNAを含む4150塩基対の DNA断
片を含むゲル断片を切り出し、そのゲル断片から DNAを
抽出した。 (6) (4) で得た DNA断片（約30 ng)と(5) で得た DNA断
片（約20 ng)を、4.6 units のT4 DNAライゲース（東洋
紡社製）にて連結させた。エレクトロポレーション法に
より、大腸菌XL1-Blue株（Stratagene社製）に形質転換
した。得られた形質転換体を常法に従い大量培養した。
これから常法に従いプラスミドを調製し、MPL-IgG Fc
(B)/pCR3と命名した。
【００２９】試験例２ヒトIgG Fc領域融合ヒトMPL タンパク質（MPL-IgG)を安
定に発現するヒト胎児 293細胞の作製とMPL-IgG の精製 MPL-IgG Fc(B)/pCR3で、エレクトロポレーション法〔渡
辺良成：組織培養の技術 第三版〔応用編〕（日本組織
培養学会編）, 501 頁, 1996年〕によりヒト胎児 293細
胞を形質転換した。形質転換されたヒト胎児 293細胞
を、10％牛胎児血清含有DMEM培地で２日間培養した後、
0.4 mg/ml ジェネティシン（ LIFE TECHNOLOGIES社製）
を含む10％牛胎児血清含有DMEMにて約２週間培養して、
形質転換体を得た。この形質転換体を、約50％コンフル
エントになるまで培養し、１％ニュートリドーマ(Boehr
inger Mannheim社製）を含むDMEM培地と交換し、培養を
継続した。約１週間ごとに培地を交換しながら、３週間
から４週間培養を続けた。この培地を遠心し、培養上清
を回収した後、VacuCap (Gelman Sciences社製）を用い
て濾過した。約７Ｌの培養上清から、HiTrap Protein G
( Pharmacia-Biotech社製）を用いて、添付のプロトコ
ールに従って、カラムクロマトグラフィーを行い、MPL-
IgG を精製した。
定に発現するヒト胎児 293細胞の作製とMPL-IgG の精製 MPL-IgG Fc(B)/pCR3で、エレクトロポレーション法〔渡
辺良成：組織培養の技術 第三版〔応用編〕（日本組織
培養学会編）, 501 頁, 1996年〕によりヒト胎児 293細
胞を形質転換した。形質転換されたヒト胎児 293細胞
を、10％牛胎児血清含有DMEM培地で２日間培養した後、
0.4 mg/ml ジェネティシン（ LIFE TECHNOLOGIES社製）
を含む10％牛胎児血清含有DMEMにて約２週間培養して、
形質転換体を得た。この形質転換体を、約50％コンフル
エントになるまで培養し、１％ニュートリドーマ(Boehr
inger Mannheim社製）を含むDMEM培地と交換し、培養を
継続した。約１週間ごとに培地を交換しながら、３週間
から４週間培養を続けた。この培地を遠心し、培養上清
を回収した後、VacuCap (Gelman Sciences社製）を用い
て濾過した。約７Ｌの培養上清から、HiTrap Protein G
( Pharmacia-Biotech社製）を用いて、添付のプロトコ
ールに従って、カラムクロマトグラフィーを行い、MPL-
IgG を精製した。
【００３０】試験例３ELISA法を用いたトロンボポエチンと被験化合物との競
合実験 マイクロタイター平板ウェルに、 100μl のPBS(-)で希
釈した10 ng のMPL-IgG を４℃で終夜被覆した。被験体
は被験化合物をDMSOに溶解後、PBS(-)/ １％BSA/0.05％
Tween20を用いて、最終DMSO含有率が５％となるように
トロンボポエチン（R&D 社製）溶液（最終濃度0.1 nM）
と混ぜ合わせて作製した。ウェルよりMPL-IgG 溶液を取
り除き、被験体を添加し、室温で１時間以上被覆した。
この溶液を取り除き、 200μl の PBS(-)/0.05％ Tween
20でウェル底面を洗った後、ヤギAnti-Human TPO Neutr
alizing Antibody（R&D 社製）で、室温にて１時間以上
インキュベートした。200 μl の PBS(-)/0.05％ Tween
20でウェルを洗った後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標
識ロバ抗ヤギ IgG抗体（Chemicon International社製）
で、室温にて１時間以上インキュベートした。 200μl
の0.05％ Tween20を含むPBS(-)でウェルを洗った後、 1
00μl の TMB溶液（DAKO社製）を加え室温で５分間イン
キュベートした。 100μl の１M H2SO4 （和光純薬社
製）を加え反応を停止した。光学密度を450 nmにて測定
し、被験化合物を加えていない時のトロンボポエチンの
結合を 100％として、被験化合物によるトロンボポエチ
ンの結合抑制作用を調べ、トロンボポエチンレセプター
への親和性を評価した。結果を図１に示す。この結果か
ら明らかなように、本発明化合物はトロンボポエチンレ
セプターへの優れた親和性を示した。
合実験 マイクロタイター平板ウェルに、 100μl のPBS(-)で希
釈した10 ng のMPL-IgG を４℃で終夜被覆した。被験体
は被験化合物をDMSOに溶解後、PBS(-)/ １％BSA/0.05％
Tween20を用いて、最終DMSO含有率が５％となるように
トロンボポエチン（R&D 社製）溶液（最終濃度0.1 nM）
と混ぜ合わせて作製した。ウェルよりMPL-IgG 溶液を取
り除き、被験体を添加し、室温で１時間以上被覆した。
この溶液を取り除き、 200μl の PBS(-)/0.05％ Tween
20でウェル底面を洗った後、ヤギAnti-Human TPO Neutr
alizing Antibody（R&D 社製）で、室温にて１時間以上
インキュベートした。200 μl の PBS(-)/0.05％ Tween
20でウェルを洗った後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標
識ロバ抗ヤギ IgG抗体（Chemicon International社製）
で、室温にて１時間以上インキュベートした。 200μl
の0.05％ Tween20を含むPBS(-)でウェルを洗った後、 1
00μl の TMB溶液（DAKO社製）を加え室温で５分間イン
キュベートした。 100μl の１M H2SO4 （和光純薬社
製）を加え反応を停止した。光学密度を450 nmにて測定
し、被験化合物を加えていない時のトロンボポエチンの
結合を 100％として、被験化合物によるトロンボポエチ
ンの結合抑制作用を調べ、トロンボポエチンレセプター
への親和性を評価した。結果を図１に示す。この結果か
ら明らかなように、本発明化合物はトロンボポエチンレ
セプターへの優れた親和性を示した。
【００３１】試験例４ヒトMPL を安定に発現する BaF/mpl細胞の作製 (1) 試験例１で得られたファージDNA を鋳型、プライマ
ーとしてはMPL の開始コドンの28塩基上流から19塩基分
の配列に基づいたセンスプライマー5'-CTAAGGCAGGCACAC
AGTG-3' と1888塩基目から1907塩基目の配列に基づいた
アンチセンスプライマー5'-TCAAGGCTGCTGCCAATAGC-3'と
を用いた。このようにして得られた PCR産物を以下に述
べる工程に従ってpCR3（Invitrogen社製）に導入して、
MPL 発現用の組換えプラスミドを構築した。 (2)EUKARYOTIC TA CLONING KIT（Invitrogen社製）を用
い、添付のプロトコールに従って上記の PCR産物MPL cD
NAをpCR3哺乳細胞発現ベクターに挿入した後、該組換え
ベクターを大腸菌 TOP10に導入した。得られた形質転換
体を常法に従って大量培養した。これから常法に従って
プラスミドを調製した。上記で得たプラスミドを用い
て、エレクトロポレーション法によりマウスインターロ
イキン３依存性マウスプロＢ細胞由来 Ba/F3細胞を形質
転換した。形質転換された Ba/F3細胞を5 units/mlマウ
スインターロイキン３(IL-3, Genzyme社製）と50μM の
β-mercaptoethanolを含む10％牛胎児血清含有RPMI1640
培地で１日間培養した後、0.8mg/ml ジェネティシン(LI
FE TECHNOLOGIES社製）を含む選択培地で約２週間培養
して形質転換体を得た。この形質転換体がトロンボポエ
チン依存性になっていることを市販のヒトトロンボポエ
チン(R&D社製）により確認し、 BaF/mpl細胞と命名し
た。
ーとしてはMPL の開始コドンの28塩基上流から19塩基分
の配列に基づいたセンスプライマー5'-CTAAGGCAGGCACAC
AGTG-3' と1888塩基目から1907塩基目の配列に基づいた
アンチセンスプライマー5'-TCAAGGCTGCTGCCAATAGC-3'と
を用いた。このようにして得られた PCR産物を以下に述
べる工程に従ってpCR3（Invitrogen社製）に導入して、
MPL 発現用の組換えプラスミドを構築した。 (2)EUKARYOTIC TA CLONING KIT（Invitrogen社製）を用
い、添付のプロトコールに従って上記の PCR産物MPL cD
NAをpCR3哺乳細胞発現ベクターに挿入した後、該組換え
ベクターを大腸菌 TOP10に導入した。得られた形質転換
体を常法に従って大量培養した。これから常法に従って
プラスミドを調製した。上記で得たプラスミドを用い
て、エレクトロポレーション法によりマウスインターロ
イキン３依存性マウスプロＢ細胞由来 Ba/F3細胞を形質
転換した。形質転換された Ba/F3細胞を5 units/mlマウ
スインターロイキン３(IL-3, Genzyme社製）と50μM の
β-mercaptoethanolを含む10％牛胎児血清含有RPMI1640
培地で１日間培養した後、0.8mg/ml ジェネティシン(LI
FE TECHNOLOGIES社製）を含む選択培地で約２週間培養
して形質転換体を得た。この形質転換体がトロンボポエ
チン依存性になっていることを市販のヒトトロンボポエ
チン(R&D社製）により確認し、 BaF/mpl細胞と命名し
た。
【００３２】試験例５被験化合物で刺激した細胞の核抽出液の調製 BaF/mpl 細胞またはBa/F3 細胞を増殖因子非存在下に50
μM β-mercaptoethanolと0.4 mg/ml ジェネティシンを
含む10％牛胎児血清含有RPMI1640培地で約16時間培養し
た後、細胞を遠心により沈澱させ、1 ×107 細胞/ml に
なるように50μM β-mercaptoethanolを含む10％牛胎児
血清含有RPMI1640培地に細胞を懸濁した。この懸濁液の
0.99 mlを３〜４時間さらに培養した。被験体は被験化
合物をDMSOに溶解後、細胞懸濁液に10μl 加え15分間培
養した。細胞からの核抽出液は実験医学別冊バイオマニ
ュアルＵＰシリーズ サイトカイン実験法（羊土社，p1
15, 1997年）に準じて行った。即ち、この細胞培養液を
８mlの氷冷した0.4 mM EDTA と0.4 mM Na3VO4 を含むPB
S(-)に加え、４℃で遠心により細胞を沈澱させた。更
に、氷冷した0.4 mlのバッファーH 〔20 mM Hepes-NaOH
(pH7.9), 1 mM EDTA,0.1 mM EGTA, 2 mM MgCl2, 1 mM N
a3VO4 20 mM NaF, 1 mM DTT(dithiothreitol), 1 mg/ml
Leupeptin〕で細胞を懸濁し、４℃で遠心により細胞を
沈澱させた。更に細胞を氷冷した0.4 mlのバッファーI
(0.2％NP-40 含有バッファーH)で懸濁し、４℃で遠心し
沈澱を得た。沈澱を20μl のバッファーK (420 mM NaCl
と20％グリセロール含有バッファーH ）を加えて攪拌
し、４℃で20分間遠心した。この上清を核抽出液とし
た。
μM β-mercaptoethanolと0.4 mg/ml ジェネティシンを
含む10％牛胎児血清含有RPMI1640培地で約16時間培養し
た後、細胞を遠心により沈澱させ、1 ×107 細胞/ml に
なるように50μM β-mercaptoethanolを含む10％牛胎児
血清含有RPMI1640培地に細胞を懸濁した。この懸濁液の
0.99 mlを３〜４時間さらに培養した。被験体は被験化
合物をDMSOに溶解後、細胞懸濁液に10μl 加え15分間培
養した。細胞からの核抽出液は実験医学別冊バイオマニ
ュアルＵＰシリーズ サイトカイン実験法（羊土社，p1
15, 1997年）に準じて行った。即ち、この細胞培養液を
８mlの氷冷した0.4 mM EDTA と0.4 mM Na3VO4 を含むPB
S(-)に加え、４℃で遠心により細胞を沈澱させた。更
に、氷冷した0.4 mlのバッファーH 〔20 mM Hepes-NaOH
(pH7.9), 1 mM EDTA,0.1 mM EGTA, 2 mM MgCl2, 1 mM N
a3VO4 20 mM NaF, 1 mM DTT(dithiothreitol), 1 mg/ml
Leupeptin〕で細胞を懸濁し、４℃で遠心により細胞を
沈澱させた。更に細胞を氷冷した0.4 mlのバッファーI
(0.2％NP-40 含有バッファーH)で懸濁し、４℃で遠心し
沈澱を得た。沈澱を20μl のバッファーK (420 mM NaCl
と20％グリセロール含有バッファーH ）を加えて攪拌
し、４℃で20分間遠心した。この上清を核抽出液とし
た。
【００３３】試験例６STAT5 プローブの調整 ５μl のSTAT5 Gel Shift Oligonucleotides（Santa Cr
uz Biotechnology社製）、１μl のポリヌクレオチドキ
ナーゼバッファー（東洋紡社製）、１μl のポリヌクレ
オチドキナーゼ（東洋紡社製、10 units/ μl)と３μl
の［γ- 32P ］ATP （Amersham社製) を混合し、37℃で
１時間反応した。65℃で約15分間加熱後、エタノール沈
澱を行った。沈澱を乾燥後、100 μl のSTE (100 mM Na
Cl, 10 mM Tris-HCl(pH7.5),1 mM EDTA)で溶解した。こ
の溶液を STEで懸濁したSephadexG50(Pharmacia社製）
を充填したセパコールミニカラム（生化学工業社製）に
アプライし、数mlの STEを界面に加え、約0.5 mlずつ分
取した。放射活性の高いフラクションをGM管サーベイメ
ーターで確認し、活性の高い溶液６本を混合した。この
溶液をエタノール沈澱後、100 μl の水に溶解し、これ
を STAT5プローブとして用いた。
uz Biotechnology社製）、１μl のポリヌクレオチドキ
ナーゼバッファー（東洋紡社製）、１μl のポリヌクレ
オチドキナーゼ（東洋紡社製、10 units/ μl)と３μl
の［γ- 32P ］ATP （Amersham社製) を混合し、37℃で
１時間反応した。65℃で約15分間加熱後、エタノール沈
澱を行った。沈澱を乾燥後、100 μl のSTE (100 mM Na
Cl, 10 mM Tris-HCl(pH7.5),1 mM EDTA)で溶解した。こ
の溶液を STEで懸濁したSephadexG50(Pharmacia社製）
を充填したセパコールミニカラム（生化学工業社製）に
アプライし、数mlの STEを界面に加え、約0.5 mlずつ分
取した。放射活性の高いフラクションをGM管サーベイメ
ーターで確認し、活性の高い溶液６本を混合した。この
溶液をエタノール沈澱後、100 μl の水に溶解し、これ
を STAT5プローブとして用いた。
【００３４】試験例７ゲルシフトアッセイ ゲルシフトアッセイは、実験医学別冊バイオマニュアル
ＵＰシリーズ サイトカイン実験法（羊土社，p115, 19
97年) に準じて行った。試験例５で調整した BaF/mpl細
胞及び Ba/F3細胞の核抽出液それぞれ１μl 、１μl の
STAT5プローブ, １μl の１μg/μl poly(dI)・ poly(d
C)(Pharmacia-Biotech社製）, 10μl のバインディング
バッファー（20 mM Hepes-NaOH (pH7.9)，2 mM EDTA ,
0.2 ％ NP-40, 60 mM NaCl, 10％グリセロール) 及び７
μl の水を加え、室温で30分間以上放置した。反応液の
6.7 μl を５％ポリアクリルアミドゲルにアプライし、
0.25×TBE （22.5 mM Tris-borate, 0.5 mM EDTA (pH8.
0 ））で、10 mA で約１時間電気泳動を行った。ゲルを
10％酢酸−10％メタノール溶液に浸した後乾燥した。ゲ
ルをイメージングプレート（タイプIII 、富士フイルム
社製）と約１時間接触させ BAS2000イメージアナライザ
ー（富士フイルム社製）で画像として取込み、ピクトロ
グラフィー（富士フイルム社製) で印刷した。結果を図
２に示す。この結果から明らかなように、本発明化合物
は STAT5を活性化することにより、トロンボポエチンレ
セプターに対するアゴニスト活性を示すことが分かっ
た。
ＵＰシリーズ サイトカイン実験法（羊土社，p115, 19
97年) に準じて行った。試験例５で調整した BaF/mpl細
胞及び Ba/F3細胞の核抽出液それぞれ１μl 、１μl の
STAT5プローブ, １μl の１μg/μl poly(dI)・ poly(d
C)(Pharmacia-Biotech社製）, 10μl のバインディング
バッファー（20 mM Hepes-NaOH (pH7.9)，2 mM EDTA ,
0.2 ％ NP-40, 60 mM NaCl, 10％グリセロール) 及び７
μl の水を加え、室温で30分間以上放置した。反応液の
6.7 μl を５％ポリアクリルアミドゲルにアプライし、
0.25×TBE （22.5 mM Tris-borate, 0.5 mM EDTA (pH8.
0 ））で、10 mA で約１時間電気泳動を行った。ゲルを
10％酢酸−10％メタノール溶液に浸した後乾燥した。ゲ
ルをイメージングプレート（タイプIII 、富士フイルム
社製）と約１時間接触させ BAS2000イメージアナライザ
ー（富士フイルム社製）で画像として取込み、ピクトロ
グラフィー（富士フイルム社製) で印刷した。結果を図
２に示す。この結果から明らかなように、本発明化合物
は STAT5を活性化することにより、トロンボポエチンレ
セプターに対するアゴニスト活性を示すことが分かっ
た。
【００３５】
【発明の効果】本発明の前記一般式（Ｉ）で示されるベ
ンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩
は、トロンボポエチンレセプターへの優れた親和性と該
レセプターに対するアゴニスト活性を有しており、血小
板産生調節作用を持つ治療薬として極めて有用である。
ンゾジアゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩
は、トロンボポエチンレセプターへの優れた親和性と該
レセプターに対するアゴニスト活性を有しており、血小
板産生調節作用を持つ治療薬として極めて有用である。
【図１】本発明化合物のトロンボポエチンの結合抑制作
用を測定し、本発明化合物のトロンボポエチンレセプタ
ーに対する親和性を評価した図である。
用を測定し、本発明化合物のトロンボポエチンレセプタ
ーに対する親和性を評価した図である。
【図２】本発明化合物が STAT5を活性化することによ
り、トロンボポエチンレセプターに対するアゴニスト活
性を示すことを、ゲルシフトアッセイ法を用いて評価し
た図である。
り、トロンボポエチンレセプターに対するアゴニスト活
性を示すことを、ゲルシフトアッセイ法を用いて評価し
た図である。
フロントページの続き (72)発明者 岩崎 信彦 福井県勝山市猪野口37号１番地１ 北陸製 薬株式会社内 (72)発明者 池田 佳隆 福井県勝山市猪野口37号１番地１ 北陸製 薬株式会社内
Claims (1)
- 【請求項１】次の一般式 【化１】 （式中、Ｒ1 は置換基を有してもよいフェニル基又は置
換基を有してもよい１Ｈ−インドリル基を表し、Ｒ2 は
置換基を有してもよいフェニル基又は低級アルキル基を
表し、ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるベンゾジ
アゼピン誘導体又はその薬理学的に許容しうる塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33644497A JPH11152276A (ja) | 1997-11-20 | 1997-11-20 | ベンゾジアゼピン誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33644497A JPH11152276A (ja) | 1997-11-20 | 1997-11-20 | ベンゾジアゼピン誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11152276A true JPH11152276A (ja) | 1999-06-08 |
Family
ID=18299211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33644497A Pending JPH11152276A (ja) | 1997-11-20 | 1997-11-20 | ベンゾジアゼピン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11152276A (ja) |
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- 1997-11-20 JP JP33644497A patent/JPH11152276A/ja active Pending
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