JPH1099A - Ｌｈ−ｒｈ誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 一般式(1) ：pGlu-His-Trp-OR¹（式中、
R¹は低級アルキルを示す。）で表されるペプチドフラグ
メントと、一般式(2) ：H-Ser-Tyr-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ
（式中、ＸはD-Leu 、D-Ser(But)、D-Trp 、(2-ナフチ
ル)-D-Ala 、Leu 又はGly を示し、ＹはGly-NH₂ 、アザ
グリシン又はNHR²（R²は低級アルキルである。）を示
す。）で表されるペプチドフラグメントとを、キモトリ
プシン又はキモトリプシン様酵素の存在下で反応させる
ことを特徴とする、一般式(3) ：pGlu-His-Trp-Ser-Tyr
-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ（式中、Ｘ及びＹは前記のとおりで
ある。）で表されるＬＨ−ＲＨ誘導体の製造方法。 【効果】 ラセミ化等の副反応を伴わないのでＬＨ−Ｒ
Ｈ誘導体の分離、精製が容易であり、しかも、収率が高
く、未反応のペプチドフラグメントを回収して再利用す
ることが可能であるため、工業的に極めて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬として有用な
ペプチドであるＬＨ−ＲＨ誘導体を酵素を用いて効率的
に製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激
ホルモン（ＦＳＨ）は、視床下部に生成する黄体形成ホ
ルモン放出ホルモンＬＨ−ＲＨの支配下に脳下垂体前葉
から放出される。ＬＨ−ＲＨ及びその誘導体は、性腺刺
激ホルモン分泌活性を有し、連続投与により性腺機能の
抑制現象が認められることから、例えば子宮内膜症、中
枢性思春期早発症、不妊症、前立腺癌等の予防及び／又
は治療薬として応用されている。既に医薬品となってい
るものにブセレリン（特公昭60-9519号公報）、ゴセレ
リン（特公昭61-13480号公報）、リュープロレリン（特
公昭53-14072号公報）、ナファレリン（特公昭63-56238
号公報）がある。

【０００３】上記ＬＨ−ＲＨ及びその誘導体の製造方法
として、そのポリペプチドに対応する部分配列をもつペ
プチドフラグメントを液相法又は固相法で形成せしめ、
各フラグメントを液相中でさらにカップリングさせる液
相合成法による化学合成法（特公昭56-47175号公報、特
開昭49-117468号公報、特公昭57-29462号公報、特公昭5
7-25540号公報、特公昭63-17839号公報、特公昭63-4539
8号公報、特開昭48-40770号公報、特開昭50-88069号公
報、特開昭49-41375号公報、特開昭49-41376号公報、特
開昭48-99170号公報、特公昭52-20996号公報、特開昭49
-35381号公報、特公昭52-8831号公報、特公昭57-61268
号公報、特公昭53-14072号公報、特公昭57-26506号公
報、特公昭60-22720号公報、特公昭61-13480号公報、特
公平3-71439号公報等参照）が知られている。

【０００４】しかしながら、液相合成法ではペプチドの
アミノ酸残基の数が増すに従ってその溶解度が微妙に変
化するので適当な溶媒を見出すのが次第に困難になり、
それにつれて目的のペプチドと未反応物や副生成物との
分離の困難さも増大してくる。特にＬＨ−ＲＨ及びその
誘導体の４位のセリン残基はラセミ化し易いので夾雑物
として残存すること、また原料の回収が不可能なことな
ど、反応後の処理が困難で且つ不経済なことから工業的
に十分満足できるものではない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、ＬＨ
−ＲＨ誘導体を効率よく大量に、しかも安価に製造する
方法を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決すべく鋭
意研究を重ねた結果、酵素合成手法により工業的生産に
適したＬＨ−ＲＨ誘導体の製造方法を見出し、本発明を
完成した。

【０００７】本発明は、一般式(1) ： pGlu-His-Trp-OR¹ (1) （式中、R¹は低級アルキルを示す。）で表されるペプチ
ドフラグメントと、一般式(2) ： H-Ser-Tyr-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ (2) （式中、ＸはD-Leu 、D-Ser(But)、D-Trp 、(2-ナフチ
ル)-D-Ala 、Leu 又はGlyを示し、ＹはGly-NH₂ 、アザ
グリシン又はNHR²（R²は低級アルキルである。）を示
す。）で表されるペプチドフラグメントとを、キモトリ
プシン又はキモトリプシン様酵素の存在下で反応させる
ことを特徴とする、一般式(3) ： pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ (3) （式中、Ｘ及びＹは前記のとおりである。）で表される
ＬＨ−ＲＨ誘導体の製造方法を提供する。

【０００８】本明細書において、「低級アルキル」と
は、炭素原子数１〜３個のアルキルを意味し、メチル、
エチル、プロピル及びイソプロピルが挙げられる。ま
た、本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、
溶媒、その他に関し略号で表示する場合、国際純正及び
応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）、国際生化学連合（ＩＵ
Ｂ）の規定、あるいは当該分野における慣用記号に従う
ものとする。その例を以下に示す。ただし、アミノ酸等
に関し光学異性体がありうる場合は、特に明示しなけれ
ばＬ体を示すものとする。

【０００９】 Tyr ：チロシン残基 Gly ：グリシン残基 Azgly ：アザグリシン残基 Glu ：グルタミン酸残基 pGlu ：ピログルタミン酸残基 Ser ：セリン残基 Arg ：アルギニン残基 Asp ：アスパラギン酸残基 Pro ：プロリン残基 Leu ：ロイシン残基 His ：ヒスチジン残基 Ala ：アラニン残基 Trp ：トリプトファン残基 Et ：エチル Boc ：t-ブトキシカルボニル Aoc ：t-アミルオキシカルボニル Bz ：ベンジル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Tos ：トシル OMe ：メチルエステル OBz ：ベンジルエステル OSu ：N-ヒドロキシコハク酸イミドエステル TFA ：トリフルオロ酢酸 THF ：テトラヒドロフラン DMF ：ジメチルホルムアミド DCC ：ジシクロヘキシルカルボジイミド WSC ：N-エチル-N'-ジメチルアミノプロピル-カルボジ
イミド HOSu：N-ヒドロキシコハク酸イミド HOBt：1-ヒドロキシベンゾトリアゾール MeOH：メタノール EtOH：エタノール AcOH：酢酸

【００１０】一般式(1) で表されるペプチドフラグメン
トは、一般式(3) で表されるＬＨ−ＲＨ誘導体のアミノ
酸配列の１位から３位のアミノ酸残基に相当するもので
ある。また、一般式(2) で表されるペプチドフラグメン
トは、一般式(3) で表されるＬＨ−ＲＨ誘導体のアミノ
酸配列の４位以下のアミノ酸残基に相当するものであ
る。

【００１１】一般式(1) で表されるペプチドフラグメン
ト又は一般式(2) で表されるペプチドフラグメントは、
それぞれ、公知のペプチド合成の常法手段に従って合成
できる。例えば「ザ．ペプチド(The Peptides)」第1巻
(1966年)[Schreder and Luhke著、Academic Press ,New
York, U.S.A.]、あるいは「ペプチド合成」［泉屋ら
著、丸善株式会社(1975年)］に記載されている方法に従
って、例えばアジド法、酸クロライド法、酸無水物法、
混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（p-ニトロ
フェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエ
ステル法、シアノメチルエステル法等）、ウッドワード
試薬Ｋを用いる方法、カルボイミダゾール法、酸化還元
法、ＤＣＣ−アディティブ（HONB、HOBt、HOSu）法、固
相法等により合成することができる。上記のような一般
的なペプチドの合成法により、例えば、Ｃ末端アミノ酸
に、アミノ酸配列にしたがって順次１個ずつアミノ酸を
縮合させるいわゆるステップワイズ伸長法によって、又
は数個のフラグメントに分けて各フラグメントを合成し
てそれらをカップリングさせるフラグメント縮合法によ
って製造することができる。

【００１２】また、上記一般式(1) 又は(2) で表される
ペプチドフラグメントの合成反応工程では、反応に関与
すべきではない官能基は通常の保護基によって保護さ
れ、反応終了後保護基は脱離される。更に、反応に関与
する官能基は通常活性化される。これら各反応方法は公
知であり、それに用いられる試薬等も公知のものから適
宜選択し得る。

【００１３】アミノ基の保護基としては、ベンジルオキ
シカルボニル（Ｚ）、t-ブチルオキシカルボニル(Boc)
、t-アミルオキシカルボニル(Aoc) 、イソボニルオキ
シカルボニル、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、
2-クロル-ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオ
キシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、
ホルミル、o-ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニル
ホスフィノチオイル等が挙げられる。

【００１４】カルボキシル基の保護基としては、アルキ
ルエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステ
ル、プロピルエステル、ブチルエステル、tert−ブチル
エステル等）、ベンジルエステル、p-ニトロベンジルエ
ステル、メチルベンジルエステル、p-クロロベンジルエ
ステル、ベンズヒドリルエステル、ベンジルオキシカル
ボニルヒドラジド、tert-ブチルオキシカルボニルヒド
ラジド、トリチルヒドラジド等が挙げられる。

【００１５】ペプチド結合に関与するカルボキシル基の
活性化されたものとしては、例えば、対応する酸クロラ
イド、酸無水物又は混合酸無水物、アジド、活性エステ
ル（例えば、ペンタクロロフェノール、p-ニトロフェノ
ール、N-ヒドロキシコハク酸イミド、N-ヒドロキシベン
ズトリアゾール、N-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジ
カルボキシイミド等とのエステル）等が挙げられる。

【００１６】尚、ペプチド結合生成反応は縮合剤、例え
ばジシクロヘキシルカルボジイミド、カルボジイミダゾ
ール等のカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフ
ェイト等の存在下に実施し得る場合もある。

【００１７】従来、蛋白質分解酵素は主としてペプチド
結合の開裂に使用されてきたが、その逆反応であるペプ
チド結合の生成反応にも関与し得ることは古くから知ら
れている。長鎖ペプチドの酵素合成はその構造中に限ら
れた基質特異性のあるアミノ酸を有する場合か、限られ
た基質特異性を有する酵素を用いる場合に限定されるた
め、トリプシンやキモトリプリンのような一般的な酵素
はペプチドの形成反応に用いられることは少ない。従っ
て酵素反応は主にオリゴペプチド等の比較的短鎖のペプ
チド結合に用いられるが、合成条件の検討に時間を要す
るため、ペプチドを製造する場合一般的には化学合成が
用いられており、化学合成で副反応が多い場合や反応が
困難な場合に酵素合成が試される。酵素合成は条件次第
では化学合成での上記問題点が解決され、大量生産可能
な緩和な条件で行うことにより極めて有用な方法になる
ことがある。

【００１８】本発明は、鋭意検討を重ねた結果、一般式
(1) で表されるペプチドフラグメントと、一般式(2) で
表されるペプチドフラグメントとを、キモトリプシン又
はキモトリプシン様酵素の存在下で反応させて両者を結
合させることにより、一般式(3) で表されるＬＨ−ＲＨ
誘導体を効率よく製造することに成功したものである。

【００１９】本発明で用いるキモトリプシンは、国際生
化学連合(I.U.B) 酵素委員会に酵素番号EC.3.4.21.1 と
して登録されており、ウシ膵臓から得られる酵素であ
る。キモトリプシンは、SIGMA 社等から市販されてい
る。この反応は、通常、pH５〜10、好ましくはpH６〜９
の緩衝液を含む媒質中で行われる。

【００２０】緩衝液としては、pH値が上記範囲内のもの
であればその種類は特に限定されることなく各種のもの
を使用することができる。例えば、トリス塩酸緩衝液、
マックイルベイン緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸アンモニ
ウム緩衝液、アトキンス＆パンチン氏緩衝液、ベロナー
ル緩衝液等が挙げられる。

【００２１】上記のような緩衝液を反応媒質として使用
する場合、該緩衝液は、通常、水混和性有機溶媒と混合
して使用される。その水混和性有機溶媒としては、例え
ば、ジメチルホルムアミド（DMF）、ジメチルスルホキ
シド（DMSO）、ジメチルイミダゾリジノン（DMI）、ヘ
キサメチルホスホリルトリアミド（HMPA）、メタノール
（MeOH）、エタノール（EtOH）等が挙げられる。好まし
いのは、ジメチルホルムアミド、メタノール、及びエタ
ノールである。またブタノール、酢酸エチルなどと分離
する溶媒を使用することもできる。これらの有機溶媒は
１種単独で、又は２種以上の組み合わせで使用すること
ができる。水混和性有機溶媒の混合割合は、一般的には
70容量％以下、好ましくは50容量％以下の範囲である。

【００２２】反応は、通常、キモトリプシン又はキモト
リプシン様酵素が作用する温度範囲、即ち、一般的には
約０〜約50℃、好ましくは約０℃〜約20℃の範囲で行
う。キモトリプシン又はキモトリプシン様酵素の使用量
は、特に制限はなく、反応条件に応じて適宜変えること
ができる。

【００２３】また、一般式(2) で表されるペプチドフラ
グメント１モル当たり、一般式(1)で表されるペプチド
フラグメントを、通常、１〜５モル、好ましくは２〜４
モル使用する。反応は、キモトリプシン又はキモトリプ
シン様酵素を、一般的な方法、例えば、担体結合法、架
橋法、包括法、その他の方法により固定化した固定化酵
素を利用して行うことができる。担体結合法において用
いる担体としては、セルロース、デキストラン、アガロ
ースのような多糖類の誘導体、ポリアクリルアミドゲ
ル、多孔性ガラス等が挙げられる。架橋法において用い
る架橋試薬としては、例えば、グルタールアルデヒド、
ビスジアゾベンジジン、N,N-ポリメチレンビスヨードア
セトアミド、N,N-エチレンビスマレインイミド等が挙げ
られる。包括法で用いる素材としては、ポリアクリルア
ミドゲル、ポリアクリルアルコールゲル、デンプン、コ
ンニャク粉、ナイロン、ポリウレア、ポリスチレン、エ
チルセルロース、コロジオン、硝酸セルロース等が挙げ
られる。但し、固定化法は何らこれらに限定されるもの
ではない。

【００２４】本発明の方法によって製造されたＬＨ−Ｒ
Ｈ誘導体は、通常の方法に従って脱塩、精製することが
できる。例えば、ＤＥＡＥ−セルロース等のイオン交換
クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０、セフ
ァデックスＧ−２５等の分配クロマトグラフィー、シリ
カゲル等の順相クロマトグラフィー、ＯＤＳ−シリカゲ
ル等の逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラ
フィー等が挙げられる。

【００２５】本発明の方法は、ＬＨ−ＲＨ誘導体を製造
するための従来の既知の方法に比べて以下に述べるよう
な利点があり、工業的に極めて有用である。 イ）酵素反応の性質上ラセミ化等の副反応を伴わず合成
することができるため精製分離が容易である。 ロ）収率が高く、また未反応のフラグメントは、回収再
利用できるので経済的に有利である。 ＬＨ−ＲＨ誘導体は必要に応じて医薬品として許容され
得る塩、例えば、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩等にするこ
とができる。

【００２６】

【実施例】以下、本発明を実施例を挙げてより具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。以下の実施例において、得られた純粋ペプチドの同
定は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の保持
時間の測定、旋光度の測定及びアミノ酸分析により行っ
た。これらの測定は、特に示さない限り、下記の測定法
及び測定条件により行った。

【００２７】・高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ） 高速液体クロマトグラフィー分析には、LC-Module-1
（日本ウォーターズ・リミテッド社製）を用いた。 （ＨＰＬＣ分析条件） カラム：TSK gel ODS-120T（4.6×250mm） 溶 媒：0.1％ＴＦＡ−アセトニトリル（アセトニトリ
ルを20％から50％に毎分１％変化させる直線勾配グラジ
ェント） 流 速：１ml/min 検出波長：220nm

【００２８】・旋光度 旋光度の測定には、DIC-370 （日本分光工業社製）を用
いた。 （旋光度測定条件） 光線： Ｎａランプ 589nm 温度： 20℃ 層長： 100mm 濃度： ５mg／ml ・アミノ酸分析 アミノ酸分析は、得られたペプチドを６Ｎの塩酸（ 0.1
％フェノール含有）中で 110℃、20時間加水分解した後
に、日立アミノ酸分析装置L-8500型（日立製作所製）を
用いて行った。

【００２９】〔実施例１〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEtの
製造 (1-1) Boc-Arg(Tos)-Pro-NHEt の製造 Boc-Arg(Tos)-OH 214.3gをＴＨＦ 150ml及びＤＭＦ 100
mlの混合溶媒に溶解し、ドライアイス−エタノールで−
20℃に冷却した。次に、これにＮ−メチルモルフォリン
35mlを滴下し、続いてイソブチルクロロフォルメイト66
mlを滴下して、−20℃で１分間撹拌して該当する混合酸
無水物を製造した。得られた反応液を、H-Pro-NHEt 71.
1gをＴＨＦ 300mlに溶解した溶液と混合し、０℃で５分
間、室温で30分間撹拌した。その後、得られた反応混合
液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル1200ml（２回）を
加えて、水 500mlで２回洗浄した後、酢酸エチル層を減
圧濃縮した。残渣をエーテルで処理して固化し、乾燥し
た。このようにしてBoc-Arg(Tos)-Pro-NHEt 221.18ｇ
（収率80.0％）が得られた。Boc-Arg(Tos)-Pro-NHEt の
融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示
す。

【００３０】 m.p. ： 100〜102 ℃ [α] _D ： -30.3 (c=1.0, MeOH) Rf ： 0.69 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₂₅Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₆Ｓ・Ｈ₂Ｏとして） 理論値 Ｃ:52.61% Ｈ:7.42% Ｎ:14.73% 測定値 Ｃ:52.85% Ｈ:7.30% Ｎ:14.41%

【００３１】(1-2) Z-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEtの製造 上記(1-1) で製造したBoc-Arg(Tos)-Pro-NHEt 110.54ｇ
をジクロロメタン（ＤＣＭ） 150mlに溶解した。これ
に、氷冷下でＴＦＡ 150mlを加えて、30分間室温で撹拌
した。得られた反応液を減圧濃縮し、残渣にエーテル15
00mlを加えて固化し、乾燥した。このようにしてH-Arg
(Tos)-Pro-NHEt・TFAを得た。この脱保護体H-Arg(Tos)-P
ro-NHEt・TFAを、ＤＭＦ80ml及びＴＨＦ 200mlの混合溶
媒に溶解し、冷却しながらＮ−メチルモルフォリンで中
和した。次いで、Z-Leu-OH 53.06g とＨＯＳｕ 23.02ｇ
とをＴＨＦ 200mlに溶解した液、及び、ＷＳＣ 36.4ml
を加えて０℃で５分間、室温で一夜撹拌した。ニンヒド
リンでの確認後、反応混合液を減圧濃縮した。

【００３２】残渣に酢酸エチル1500mlを加え、水 500ml
で２回、飽和食塩水 500mlで２回洗浄した。次いで、酢
酸エチル層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理して固
化し、乾燥した。このようにして、Z-Leu-Arg(Tos)-Pro
-NHEt 119.5g（収率85.1%）が得られた。Z-Leu-Arg(To
s)-Pro-NHEt の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析
値を下記に示す。

【００３３】 m.p. ： 99〜103 ℃ [α] _D ： -40.6(c=1.0, MeOH) Rf ： 0.75 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₄Ｈ₄₉Ｎ₇Ｏ₇Ｓとして） 理論値 Ｃ:58.35% Ｈ:7.06% Ｎ:14.01% 測定値 Ｃ:58.40% Ｈ:7.26% Ｎ:13.78%

【００３４】(1-3) Z-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEtの
製造 上記(1-2) で製造したZ-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt 20.99g
にアニソール32mlを加え、次いで、ドライアイス−エタ
ノールで-70℃に冷却しながらＨＦ約 200mlを加えて０
℃で１時間撹拌した。その後、減圧濃縮して、残渣をエ
ーテルで処理した。析出した生成物を濾取し、水酸化ナ
トリウム上で真空乾燥しH-Leu-Arg-Pro-NHEt・HFを得
た。

【００３５】Z-D-Ser(But)-OH 8.86gをＴＨＦ 100mlに
溶解した。これをドライアイス−エタノールで -20℃に
冷却し、Ｎ−メチルモルフォリン3.3mlを滴下し、次い
でイソブチルクロロフォルメイト3.96mlを滴下した後、
-20℃で１分間撹拌して該当する混合酸無水物を製造し
た。得られた反応液を、H-Leu-Arg-Pro-NHEt・HFのＤＭ
Ｆ 200ml溶液（Ｎ−メチルモルフォリンで中和したも
の）と混合し、０℃で５分間、室温で30分間撹拌した。
その後、減圧濃縮し、残渣に水 500mlを加えて、ブタノ
ール 200mlで５回抽出した。抽出液を水で５回洗浄した
後、ブタノール層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理
して固化した。このようにしてZ-D-Ser(But)-Leu-Arg-P
ro-NHEt 22.89g （収率90.5%）が得られた。Z-D-Ser(Bu
t)-Leu-Arg-Pro-NHEtの融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び
元素分析値を下記に示す。

【００３６】 m.p. ： 121〜123 ℃ [α] _D ： -49.0(c=1.0, MeOH) Rf ： 0.51 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₄Ｈ₅₆Ｎ₈Ｏ₇として） 理論値 Ｃ:59.28% Ｈ:8.19% Ｎ:16.27% 測定値 Ｃ:59.01% Ｈ:8.15% Ｎ:16.19%

【００３７】(1-4) Z-Ser-Tyr-OMeの製造 Z-Ser-OH 23.9g及びH-Tyr-OMe 23.2gをＤＭＦ50mlに
溶解し、ＨＯＳｕ12.7ｇ及びＷＳＣ20mlを加えて０℃で
５分間、室温で一夜撹拌した。ニンヒドリンで確認後、
反応混合液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル 500mlを
加え、１Ｎ塩酸200mlで２回、飽和重曹水200mlで２回、
飽和食塩水２回の順で洗浄した。酢酸エチル層を減圧濃
縮し、残渣をヘキサンで処理して固化した。このように
してZ-Ser-Tyr-OMe 38.44g（収率92.3%）が得られた。Z
-Ser-Tyr-OMe の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分
析値を下記に示す。

【００３８】 m.p. ： 49 〜53℃（分解） [α] _D ： +2.3(c=1.0,MeOH) Rf ： 0.89 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₂₁Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₇として） 理論値 Ｃ:60.57% Ｈ:5.81% Ｎ:6.73% 測定値 Ｃ:60.88% Ｈ:5.88% Ｎ:6.99%

【００３９】(1-5) Z-Ser-Tyr-NHNH₂の製造 上記(1-4) で製造したZ-Ser-Tyr-OMe 38.0gをメタノー
ル200mlに溶解し、ヒドラジン50ｇを加えて、室温で一
夜放置した。その後、減圧濃縮し、メタノール洗浄し
た。このようにしてZ-Ser-Tyr-NHNH₂ 34.2g（収率90.0
%）が得られた。Z-Ser-Tyr-NHNH₂の融点、旋光度、ＴＬ
ＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００４０】 m.p. ： 194〜197 ℃ [α] _D ： +9.9(c=1.0,DMF) Rf ： 0.64 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₂₀Ｈ₂₄Ｎ₄Ｏ₆として） 理論値 Ｃ:57.69% Ｈ:5.81% Ｎ:13.45% 測定値 Ｃ:57.85% Ｈ:5.83% Ｎ:13.49%

【００４１】(1-6) Z-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro
-NHEtの製造 上記(1-3) で製造したZ-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt
28.0gをメタノール 300mlに溶解し、10%パラジウム／炭
素 2.5g の存在下で水素を添加した。７時間室温で撹拌
した後、触媒を除去して減圧濃縮し、残渣をエーテルで
処理した。このようにして、H-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro
-NHEtを得た。

【００４２】上記(1-5) で製造したZ-Ser-Tyr-NHNH₂ 2
0.1gをＤＭＦ150mlに溶解し、ドライアイス−エタノー
ルで-20℃に冷却した。その溶液に、4N HCl−ジオキサ
ン43.5ml、及び亜硝酸イソアミル 6.5mlを添加してアジ
ド化合物とした。さらにトリエチルアミン24.4mlを添加
して中和した。その混合液をH-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro
-NHEtのＤＭＦ150ml溶液に移し、-20℃で２時間、４℃
で17時間攪拌した後濃縮した。残渣に水 500mlを加え、
ブタノール200mlで５回抽出した。水で５回洗浄後、ブ
タノール層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理して固
化した。このようにしてZ-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg
-Pro-NHEt 33.2g（収率87.5%）が得られた。Z-Ser-Tyr-
D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の融点、旋光度、ＴＬＣ
のRf及び元素分析値を下記に示す。

【００４３】 m.p. ： 115〜118 ℃（分解） [α] _D ： -27.6(c=1.0,DMF) Rf ： 0.36 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₄₆Ｈ₇₀Ｎ₁₀Ｏ₁₁として） 理論値 Ｃ:58.83% Ｈ:7.51% Ｎ:14.91% 測定値 Ｃ:58.88% Ｈ:7.55% Ｎ:14.90%

【００４４】(1-7) Z-pGlu-His-OHの製造 Z-pGlu-OH 52.6gをＴＨＦ400mlに溶解した。この溶液を
ドライアイス−エタノールで-20℃に冷却し、Ｎ−メチ
ルモルフォリン22.0ml、ついでイソブチルクロロフォル
メイト26.4mlを滴下した後、-20℃で１分間撹拌して該
当する混合酸無水物を製造した。得られた反応混合液に
HOSu 25.3ｇを加えて30分間攪拌した。次いでこれにH-H
is-OH・HCl 62.9g及びトリエチルアミン（ＴＥＡ） 28.
0mlを水400mlに溶解した溶液を加えた。０℃で１時間、
室温で一夜撹拌した後、減圧濃縮した。残水溶液を酢酸
エチルで洗浄し、水層をブタノール抽出した。水で数回
洗浄した後、ブタノール層を減圧濃縮した。エーテルで
固化した後水に溶解し、ｐＨ５に調整した。この水溶液
をＨＰ−２０を充填したカラム(5.0×20cm)に注入し、
流出液のパウリー反応が±になるまで水洗した後、メタ
ノールで溶出した。溶出したメタノール液を減圧濃縮
し、残渣をエーテルで処理した。次いでメタノールーエ
ーテルで再結晶化した。このようにしてZ-pGlu-His-OH
59.5g（収率74.3%）が得られた。Z-pGlu-His-OH の融
点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００４５】 m.p. ： 146〜149℃（分解） [α] _D ： -0.91 (c=1.0,DMF) Rf ： 0.14 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₁₉Ｈ₂₀Ｎ₄Ｏ₆として） 理論値 Ｃ:57.00% Ｈ:5.03% Ｎ:13.99% 測定値 Ｃ:57.23% Ｈ:5.05% Ｎ:14.05%

【００４６】(1-8) Z-pGlu-His-Trp-OMeの製造 上記(1-7) で製造したZ-pGlu-His-OH 40.0g、H-Trp-OMe
・HCl 19.6g及びＨＯＳｕ12.7gをＤＭＦ100mlに溶解し
た。次いで、この溶液を冷却しながらＮ−メチルモルフ
ォリンで中和した後、ＷＳＣ2.0mlを加えて０℃で５分
間、室温で一夜撹拌した。ニンヒドリンでの確認後、反
応混合液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル−ｎブタノ
ール(1:1)200mlを加え、有機層を水 100mlで３回洗浄し
た。有機層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理して固
化した。このようにしてZ-pGlu-His-Trp-OMe48.5g（収
率92.3%）が得られた。Z-pGlu-His-Trp-OMeの融点、旋
光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００４７】 m.p. ： 112〜115 ℃（分解） [α] _D ： -1.5(c=1.0,DMF) Rf ： 0.3 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₁Ｈ₃₂Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値 Ｃ:61.99% Ｈ:5.37% Ｎ:13.99% 測定値 Ｃ:61.54% Ｈ:5.33% Ｎ:13.80%

【００４８】(1-9) pGlu-His-Trp-OMeの製造 上記(1-8) で製造したZ-pGlu-His-Trp-OMe 40.0gをＤＭ
Ｆ50mlに溶解し、10%パラジウム／炭素 500mgの存在下
で水素を添加した。７時間室温で撹拌後、触媒を除去し
て減圧濃縮する。残渣をエーテルで処理して固化した。
このようにしてpGlu-His-Trp-OMe 28.5g （収率91.8%）
が得られた。pGlu-His-Trp-OMeの融点、旋光度、ＴＬＣ
のRf及び元素分析値を下記に示す。

【００４９】 m.p. ： 132〜137℃（分解） [α] _D ： +4.1(c=1.0,DMF) Rf ： 0.18 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₂₃Ｈ₂₆Ｎ₆Ｏ₅として） 理論値 Ｃ:59.22% Ｈ:5.62% Ｎ:18.02% 測定値 Ｃ:59.01% Ｈ:5.55% Ｎ:17.89%

【００５０】(1-10) H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pr
o-NHEtの製造 上記(1-6) で製造したZ-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-P
ro-NHEt 93.0gをメタノール 800mlに溶解し、10%パラジ
ウム／炭素 5.0g の存在下で水素を添加した。７時間室
温で撹拌した後、触媒を除去して減圧濃縮した。残渣を
エーテルで処理して固化した。このようにしてH-Ser-Ty
r-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt 74.0g（収率90.3%）が
得られた。H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の
融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示
す。

【００５１】 m.p. ： 124〜128 ℃（分解） [α] _D ： +10.1(c=1.0,DMF) Rf ： 0.16 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₈Ｈ₆₄Ｎ₁₀Ｏ₉ として） 理論値 Ｃ:56.70% Ｈ:8.01% Ｎ:17.40% 測定値 Ｃ:56.55% Ｈ:7.97% Ｎ:17.18%

【００５２】(1-11) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)
-Leu-Arg-Pro-NHEtの製造 上記(1-9) で製造したpGlu-His-Trp-OMe 30g及び上記(1
-10)で製造したH-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHE
t 22g をブタノール飽和水1300mlに溶解した。その溶液
に、1000U/mgのキモトリプシン78mgをブタノール飽和水
2.5mlに溶解した溶液を加え、pH7.8 に調整し、10℃で
１時間撹拌した。反応混合液にｎ−ブタノール 300mlを
加え、ｎ−ブタノール(200ml) と水の分配クロマトグラ
フィーを繰り返した。次いでｎ−ブタノール 100mlで５
回抽出した。ブタノールは水で洗浄し有機層及び水層を
別々に濃縮し、それぞれをエーテルで固化した。水層よ
り回収した、H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt
は再度反応に使用する。有機層（ｎ−ブタノール）は濃
縮し、残渣にエーテルを加えて粉末化した。有機層より
得られた粉末は0.01Ｍ酢酸アンモニウム水溶液に溶解し
て、ＣＭ−セルロースを充填したカラム(4×30cm)上に
注入した。0.01Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（pH4.4 ） 5
00ml〜0.1 Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（pH4.4 ） 500ml
の直線型濃度勾配溶出(60ml/時間)を行って、その溶出
液を10mlづつ分画採取した。溶出液を高速液体クロマト
グラフィーにより分析し、目的画分を集めて凍結乾燥し
た。このようにして、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu
t)-Leu-Arg-Pro-NHEt 22.4gが得られた。pGlu-His-Trp-
Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEtの旋光度、元素
分析値及びアミノ酸分析値を下記に示す。

【００５３】 [α] _D ： -46.0(C=1,H₂O) 元素分析 （Ｃ₆₀Ｈ₈₆Ｎ₁₆Ｏ₁₃・CH₃COOH・2H₂Oとし
て） 理論値 Ｃ,55.76% Ｈ, 7.09% Ｎ,16.78% 測定値 Ｃ,55.60% Ｈ, 7.10% Ｎ,16.79% アミノ酸組成； Ser 2.05(2),Glu 1.08(1),Pro 0.99(1),Leu 1.09(1),Ty
r 0.92(1),His 0.93(1),Arg 1.06(1)

【００５４】〔実施例２〕本実施例において、実施例１
の (1-1)〜(1-3) にしたがって製造したZ-D-Ser(But)-L
eu-Arg-Pro-NHEt を、下記 (2-1)〜(2-3) にしたがって
製造した以外は実施例１と同様にしてpGlu-His-Trp-Ser
-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEtを製造した。

【００５５】(2-1) Z-Leu-Arg-NHNH₂の製造 Z-Leu-OH 172.5g及びH-Arg-OEt・2HCl 178.9gをＤＭＦ
／ＴＨＦ（1/1)混合溶液800 mlに溶解し、0 ℃にてＮ−
メチルモルフォリン 143mlを加えて中和した。次いでＤ
ＣＣ 147.5mlを加えて0 ℃にて5 分間、室温にて15時間
攪拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られた残渣に水10
00mlを加えて、酢酸エチル500 mlで2 回洗浄した後、水
層をブタノール1000mlで3 回抽出した。得られたブタノ
ール層を減圧濃縮することによりZ-Leu-Arg-OEt が得ら
れた。

【００５６】Z-Leu-Arg-OEt をメタノール500 mlに溶解
し、氷冷下にてNH₂NH₂・H₂O 150 mlを加え、室温にて18
時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して得られた残渣に水
500mlを加え、ブタノール1000mlで5 回抽出した。抽出
液を水500 mlで4 回洗浄した後、減圧濃縮した。得られ
た残渣をエーテルで処理して固化し、乾燥した。このよ
うにして、Z-Leu-Arg-NHNH₂ 209.7g（収率74.1%)が得ら
れた。Z-Leu-Arg-NHNH₂の融点、旋光度、TLC のRf値、
及び元素分析値を下記に示す。

【００５７】 m.p : 105〜107 ℃ [α] _D : -30.6 (c ＝1.0 MeOH) Rf値 : 0.60 (BuOH/AcOH/H₂O ＝４／１／
５） 元素分析値（Ｃ_２０Ｈ₃₃Ｎ₇Ｏ₄として) 理論値 C:55.61% H:7.64% N:22.51% 測定値 C:55.84% H:7.42% N:22.41%

【００５８】(2-2) Z-Leu-Arg-Pro-NHEtの製造 上記(2-1) で製造したZ-Leu-Arg-NHNH₂ 130.8g をＤＭ
Ｆ 500mlに溶解し、ドライアイス−エタノールで -20℃
に冷却した。その溶液に、4N HCl−ジオキサン225ml、
及び亜硝酸イソアミル 40.5 mlを添加してアジド化合物
とした。さらにトリエチルアミン 126mlを添加して中和
した。その混合液を H-Pro-NHEt 42.6gのＤＭＦ 200ml
溶液に移し、-20 ℃にて2 時間、4 ℃にて16時間攪拌し
た後濃縮した。残渣に、水 800mlを加え、酢酸エチル 4
00mlで2 回洗浄した後に、水層をブタノール 800mlで3
回抽出し、更に水 400mlで洗浄した。得られたブタノー
ル層を減圧濃縮した。得られた残渣をエーテルで処理し
て固化し、乾燥した。このようにして、Z-Leu-Arg-Pro-
NHEt 154.5g(収率94.3%)が得られた。Z-Leu-Arg-Pro-NH
Etの融点、旋光度、TLC のRf値、及び元素分析値を下記
に示す。

【００５９】 m.p : 125〜126 ℃ [α] _D : -66.6 (c ＝1.0 MeOH) Rf : 0.45 (BuOH/AcOH/H₂O ＝4/1/5) 元素分析値（Ｃ₂₇Ｈ₄₃Ｎ₇Ｏ₅として) 理論値 C:59.43% H:7.94% N:17.97% 測定値 C:59.31% H:7.78% N:18.13%

【００６０】(2-3) Z-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の
製造 上記(2-2) で製造したZ-Leu-Arg-NHEt 154.5g をメタノ
ール1500mlに溶解し、10% パラジウム／炭素14g の存在
下で水素を添加した。16時間室温で攪拌後、触媒を除去
して減圧濃縮して H-Leu-Arg-Pro-NHEt が得られた。

【００６１】Z-D-Ser(But)-OH 82.3g をＴＨＦ 200mlに
溶解した。これをドライアイス−エタノールで -20℃に
冷却し、Ｎ−メチルモルフォリン 30.7 mlを滴下し、次
いでイソブチルクロロフォルメイト 36.3 ml滴下した
後、 -20℃で1 分間攪拌して該当する混合酸無水物を製
造した。得られた反応液を、H-Leu-Arg-Pro-NHEtのＤＭ
Ｆ 700ml溶液と混合し、0 ℃で5 分間、室温で30分間攪
拌した。その後、減圧濃縮し、残渣に水 1000 mlを加
え、酢酸エチル 500mlで2 回洗浄した後、水層を酢酸エ
チル／ブタノール(2/1) 混合溶液 1000 mlで2 回抽出し
た。抽出液を水 500mlで5 回洗浄した後、減圧濃縮して
得られた残渣をエーテルで処理して固化し、乾燥した。
このようにして、D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt 178.3g
(収率91.2%)が得られた。尚、得られた化合物の融点、
旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値は実施例１の(1-3)
で製造したD-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt のものと一致
した。

【００６２】〔実施例３〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEtの製造 (3-1) Boc-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt の製造 実施例１の(1-2) で製造したZ-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt
20.99gをメタノール 200mlに溶解し、10％パラジウム／
炭素 1.5g の存在下で水素を添加した。７時間室温で攪
拌した後、触媒を除去して減圧濃縮した。残渣をエーテ
ルで処理して固化した。このようにして、H-Leu-Arg(To
s)-Pro-NHEt を得た。

【００６３】H-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt を、ＤＭＦ 80m
l及びＴＨＦ 200mlに溶解した。この溶液を冷却しなが
らＮ−メチルモルフォリンで中和した。次いで、この溶
液に、Boc-D-Leu-OH 8.86gとＨＯＳｕ 23.02ｇとをＴ
ＨＦ 200mlに溶解した溶液、及び、ＷＳＣ 36.4ml を加
えて０℃で５分間、室温で一夜撹拌した。ニンヒドリン
での確認後、反応混合液を減圧濃縮した。残渣に水500m
lを加え、ブタノール200mlで５回抽出した。水で５回洗
浄した後、ブタノール層を減圧濃縮し、残渣をエーテル
で処理して固化した。このようにしてBoc-D-Leu-Leu-Ar
g(Tos)-Pro-NHEt 21.5g （収率92.1%）が得られた。Boc
-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt の融点、旋光度、ＴＬ
ＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００６４】 m.p. ： 119〜121 ℃ [α] _D ： -45.2(c=1.0, MeOH) Rf ： 0.50 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₀Ｈ₅₆Ｎ₈Ｏ₆として） 理論値 Ｃ:57.67% Ｈ:9.03% Ｎ:17.93% 測定値 Ｃ:57.43% Ｈ:8.89% Ｎ:17.80%

【００６５】(3-2) Z-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro
-NHEt の製造 上記(3-1) で製造したBoc-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHE
t 25.8g をＤＣＭ 10ml に溶解した。氷冷下、ＴＦＡ 1
0mlを加えて、30分間室温で撹拌した。次いで減圧濃縮
し、残渣にエーテル 200mlを加えて固化し、乾燥した。
このようにして、H-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt ・TF
Aを得た。

【００６６】Z-Ser-Tyr-NHNH₂ 16.6g をＤＭＦ 100mlに
溶解し、ドライアイス−エタノールで-20℃に冷却し
た。その溶液に4N HCl−ジオキサン 29.8ml 及び亜硝酸
イソアミル 5.3mlを添加してアジド化合物とした。さら
にトリエチルアミン 16.7ml を添加して中和した混合液
を、H-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt ・TFAのＤＭＦ 20
0ml溶液に移し、-20℃で２時間、４℃で17時間攪拌した
後、濃縮した。残渣に水500mlを加え、ブタノール200ml
で５回抽出した。水で５回洗浄後、ブタノール層を減圧
濃縮し、残渣をエーテルで処理して固化した。このよう
にして、Z-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-NHEt 25.0
g（収率83.2%）が得られた。Z-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg
(Tos)-Pro-NHEt の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素
分析値を下記に示す。

【００６７】 m.p. ： 114〜118 ℃（分解） [α] _D ： -30.1(c=1.0,DMF) Rf ： 0.32 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₄₅Ｈ₆₈Ｎ₁₀Ｏ₁₀として） 理論値 Ｃ:59.45% Ｈ:7.54% Ｎ:15.41% 測定値 Ｃ:59.33% Ｈ:7.52% Ｎ:15.32%

【００６８】(3-3) H-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt
の製造 上記(3-2) で製造したZ-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-P
ro-NHEt 20.4g に、アニソール 32ml を加え、ドライア
イス−エタノールで -70℃に冷却した。これにHF 200ml
を加えて０℃で１時間攪拌した。その後、減圧濃縮し、
残渣をエーテルで処理し、析出した生成物を濾取して水
酸化ナトリウム上で真空乾燥した。このようにして、H-
Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt 16.0g (収率92.4%)が
得られた。H-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEtの融点、
旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００６９】 m.p. ： 121〜123 ℃ [α] _D ： +11.0(c=1.0,DMF) Rf ： 0.20 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₇Ｈ₆₂Ｎ₁₀Ｏ₈ として） 理論値 Ｃ:57.35% Ｈ:8.06% Ｎ:18.07% 測定値 Ｃ:57.21% Ｈ:8.01% Ｎ:18.10%

【００７０】(3-4) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-A
rg-Pro-NHEtの製造 H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の代わりに、
上記(3-3) で製造したH-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH
Et 1.30g を用いた以外は実施例１の(1-11)と同様の方
法によりpGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHE
t 811mg を得た。pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg
-Pro-NHEt の旋光度、元素分析値及びアミノ酸分析値を
下記に示す。

【００７１】 [α] _D ： -32.0(C=0.52, 5%AcOH) 元素分析 （Ｃ₅₉Ｈ₈₄Ｎ₁₆Ｏ₁₂として） 理論値 Ｃ:58.59% Ｈ:7.00% Ｎ:18.53% 測定値 Ｃ:58.40% Ｈ:7.10% Ｎ:18.31% アミノ酸組成；Ser 1.05(1),Glu 1.08(1),Pro 0.99(1),
Leu 2.09(2),Tyr 0.92(1),His 0.93(1),Arg 1.06(1)

【００７２】〔実施例４〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-
NH ₂ の製造 (4-1)Z-Pro-Azgly-NH₂の製造 Z-Pro-OH 24.9g、セミカルバジド塩酸塩11.2g及びトリ
エチルアミン14.5mlをＤＭＦ200mlに溶解した。その溶
液に、０℃に冷却下、ＤＣＣ20.6gを加え、４℃で16時
間攪拌した。その後、反応混合液からジシクロヘキシル
ウレア（ＤＣＵ）を濾過して除去し、減圧濃縮した。残
渣に酢酸エチル 500mlを加え、水 200mlで２回で洗浄し
た。減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理して固化した。
このようにしてZ-Pro-Azgly-NH₂ 16.7g （収率54.3%）
が得られた。Z-Pro-Azgly-NH₂ の融点、旋光度、ＴＬＣ
のRf及び元素分析値を下記に示す。

【００７３】 m.p. ： 189〜190 ℃ [α] _D ： -43.6(c=1.4,DMF) Rf ： 0.62 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₁₄Ｈ₁₈Ｎ₄Ｏ₄として） 理論値 Ｃ:54.89% Ｈ:5.95% Ｎ:18.29% 測定値 Ｃ:54.41% Ｈ:7.74% Ｎ:15.60%

【００７４】(4-2)Boc-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ の製造 上記(4-1) で製造したZ-Pro-Azgly-NH₂ 16.5g をＤＭＦ
500mlに溶解し、10%パラジウム／炭素 1.1g の存在下
で水素を添加した。７時間室温で撹拌後、触媒を除去し
て減圧濃縮した。残渣にエーテル1500mlを加えて固化し
乾燥した。このようにして、H-Pro-Azgly-NH₂・TFAを得
た。

【００７５】Boc-Arg(NO₂)-OH 13.5gをＴＨＦ100mlに溶
解し、ドライアイス−エタノールで-20℃に冷却した。
これに、Ｎ−メチルモルフォリン3.3mlを滴下し、次い
でイソブチルクロロフォルメイト3.96mlを滴下した後、
-20℃で１分間撹拌して該当する混合酸無水物を製造し
た。得られた反応液を、H-Pro-Azgly-NH₂・TFAのＤＭＦ
200ml溶液（Ｎ−メチルモルフォリンで中和したもの）
と混合し、０℃で5分間、室温で30分間撹拌した後、減
圧濃縮した。残渣に水 500mlを加え、ブタノール200ml
で５回抽出した。水で５回洗浄後、ブタノール層を減圧
濃縮し、残渣をエーテルで処理して固化した。このよう
にして、Boc-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ 16.7g （収率88.
6%）が得られた。Boc-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ の融
点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００７６】 m.p. ： 135〜137℃(分解) [α] _D ： ＋35.3°(c=1.0, DMF) Rf ： 0.49 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₁₇Ｈ₃₁Ｎ₉Ｏ₇として） 理論値 Ｃ:43.12% Ｈ:6.60% Ｎ:26.62% 測定値 Ｃ:54.41% Ｈ:7.74% Ｎ:15.60%

【００７７】(4-3)Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ の製
造 上記(4-2) で製造したBoc-Arg(NO₂)-Pro-NHEt 110.54g
をＤＣＭ 150ml に溶解した。その溶液に、氷冷下でＴ
ＦＡ 150mlを加えて、30分間室温で撹拌した。次いでそ
の反応混合液を減圧濃縮し、残渣にエーテル1500mlを加
えて固化し乾燥した。このようにして、H-Arg(NO₂)-Pro
-NHEt・TFAを得た。

【００７８】H-Arg(NO₂)-Pro-NHEt・TFAを、ＤＭＦ 80m
l及びＴＨＦ 200mlの混合溶媒に溶解した。この溶液を
冷却しながらＮ−メチルモルフォリンで中和した。次い
で、この溶液に、Z-Leu-OH 53.06g (0.2mole)とＨＯＳ
ｕ 23.02ｇ (0.22mole)とをＴＨＦ 200mlに溶解した溶
液、及びＷＳＣ 36.4ml (0.2mole ）を加えて０℃で5分
間、室温で一夜撹拌した。ニンヒドリンでの確認後、反
応混合液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル1500mlを加
え、水500mlで２回、飽和食塩水500mlで２回洗浄した。
その後、酢酸エチル層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで
処理して固化し乾燥した。このようにして、Z-Leu-Arg
(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ 27.52g （収率98.6%）が得られ
た。Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ の融点、旋光度、
ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００７９】 m.p. ： 88〜90℃ [α] _D ： -30.2(c=1.5,DMF) Rf ： 0.57 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₂₆Ｈ₄₀Ｎ₁₀Ｏ₈として） 理論値 Ｃ:50.31% Ｈ:6.50% Ｎ:22.57% 測定値 Ｃ:50.24% Ｈ:6.41% Ｎ:22.45%

【００８０】(4-4)Z-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH
₂の製造 上記(4-3) で製造したZ-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Azgly-NH₂ 1
6.5g をＤＭＦ500mlに溶解し、10%パラジウム／炭素 1.
1g の存在下で水素を添加した。７時間室温で撹拌した
後、触媒を除去して減圧濃縮した。残渣にエーテル1500
mlを加えて固化し乾燥した。このようにしてH-Leu-Arg-
Pro-Azgly-NH₂ を得た。

【００８１】Z-D-Ser(But)-OH 8.86gをＴＨＦ100mlに
溶解し、ドライアイス−エタノールで -20℃に冷却し
た。この溶液に、Ｎ−メチルモルフォリン3.3mlを滴下
し、次いでイソブチルクロロフォルメイト3.96mlを滴下
した後、-20℃で１分間撹拌して該当する混合酸無水物
を製造した。得られた反応液を、H-Leu-Arg-Pro-Azgly-
NH₂ のＤＭＦ 200ml溶液（Ｎ−メチルモルフォリンで中
和したもの）と混合し、０℃で5分間、室温で30分間撹
拌した後、減圧濃縮した。残渣に水500mlを加え、ブタ
ノール200mlで５回抽出した。水で５回洗浄後、ブタノ
ール層を減圧濃縮し、残渣をエーテルで処理して固化し
た。このようにして、Z-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly
-NH₂ 16.9g （収率78.3%）が得られた。Z-D-Ser(But)-L
eu-Arg-Pro-Azgly-NH₂の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び
元素分析値を下記に示す。

【００８２】 m.p. ： 115〜118 ℃ [α] _D ： -45.8(c=1.0, DMF) Rf ： 0.51 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₃Ｈ₅₄Ｎ₁₀Ｏ₈として） 理論値 Ｃ:55.14% Ｈ:7.57% Ｎ:19.48% 測定値 Ｃ:55.01% Ｈ:7.42% Ｎ:19.33%

【００８３】(4-5)Z-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-
Azgly-NH₂の製造 上記(4-4) で製造したZ-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly
-NH₂ 26.7g をメタノール 500mlに溶解し、10%パラジウ
ム／炭素 1.9g の存在下で水素を添加した。７時間室温
で撹拌した後、触媒を除去し、減圧濃縮した。残渣をエ
ーテルで処理し、析出した生成物を濾取し、水酸化ナト
リウム上で真空乾燥した。このようにして、H-D-Ser(Bu
t)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂を得た。

【００８４】実施例１の(1-5) で製造したZ-Ser-Tyr-NH
NH₂ 18.5g をＤＭＦ 150mlに溶解し、ドライアイス−エ
タノールで-20℃に冷却した。その溶液に４Ｎ−ＨＣｌ
−ジオキサン 33.4ml 及び亜硝酸イソアミル 6.0mlを添
加してアジド化合物とした。さらにトリエチルアミン 1
8.7ml を添加して中和した。その混合液を、H-D-Ser(Bu
t)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂のＤＭＦ 150ml溶液に移し、
-20℃で２時間、４℃で17時間攪拌した後濃縮した。残
渣に水500mlを加え、ブタノール200mlで５回抽出した。
水で５回洗浄後、ブタノール層を減圧濃縮し、残渣をエ
ーテルで処理して固化した。このようにして、Z-Ser-Ty
r-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂ 28.3g （収率78.
6%）が得られた。Z-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-A
zgly-NH₂の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を
下記に示す。

【００８５】 m.p. ： 110〜113 ℃（分解） [α] _D ： -28.2(c=1.0,DMF) Rf ： 0.36 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₄₅Ｈ₆₈Ｎ₁₂Ｏ₁₂として） 理論値 Ｃ:55.77% Ｈ:7.07% Ｎ:17.34% 測定値 Ｃ:55.64% Ｈ:7.01% Ｎ:17.29%

【００８６】(4-6)H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-
Azgly-NH₂ の製造 上記(4-5) で製造したZ-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-P
ro-Azgly-NH₂ 25.4gをメタノールに500mlに溶解し、10%
パラジウム／炭素 1.3g の存在下で水素を添加した。７
時間室温で撹拌した後、触媒を除去して減圧濃縮した。
残渣をエーテルで処理して固化した。このようにして、
H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂ 20.7 g
（収率94.6%）が得られた。H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-
Arg-Pro-Azgly-NH₂の融点、旋光度、ＴＬＣのRf及び元
素分析値を下記に示す。

【００８７】 m.p. ： 120〜122 ℃ [α] _D ： +11.2(c=1.0,DMF) Rf ： 0.31 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₇Ｈ₆₂Ｎ₁₂Ｏ₁₀として） 理論値 Ｃ:53.22% Ｈ:7.48% Ｎ:20.13% 測定値 Ｃ:53.19% Ｈ:7.43% Ｎ：２０．０１％

【００８８】（４−７） ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−
Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ_２ の製造 H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の代わりに、
上記(4-6) で製造したH-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-P
ro-Azgly-NH₂ 1.30gを用いた以外は実施例１の(1-11)と
同様の方法により、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-
Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂ 812mg を得た。pGlu-His-Trp-S
er-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂ の旋光度、
元素分析値及びアミノ酸分析値を下記に示す。

【００８９】 [α] _D ： -52.4(C=1.0, DMF) 元素分析 （Ｃ₅₉Ｈ₈₄Ｎ₁₈Ｏ₁₄として） 理論値 Ｃ: 55.82% Ｈ:6.67% Ｎ:19.86% 測定値 Ｃ: 55.70% Ｈ:6.55% Ｎ:19.72% アミノ酸組成；Ser 2.02(2),Glu 1.07(1),Pro 1.00(1),
Leu 1.03(1),Tyr 0.92(1),His 0.94(1),Arg 1.02(1)

【００９０】〔実施例５〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂の製
造 (5-1) H-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂の製造 固相合成装置として Milligen Bioreserch社製ペプチド
シンセサイザー9600を用いて固相合成を行った。まず、
p-メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂（ペプ
チド研究所社製、アミノ基0.72mmol/g）694mg をペプチ
ド固相合成用反応容器に入れ、ＤＣＭ 8ml（４回、各１
分間）、60％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液 8ml（20分間）、Ｄ
ＣＭ 4ml（３回、各15秒間）、ＤＩＥＡ 1ml含有ＤＭＦ
溶液 3ml（２回、各１分間）ＤＭＦ 8ml（６回、各40秒
間）の順でアルゴンガス気流中攪拌下にて処理した。ま
た、各々の処理毎に濾過を行った。

【００９１】一方、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-A
rg-Pro-Gly-NH₂のアミノ酸配列の第10番目のアミノ酸残
基に対応するＢoc−Ｇly−OH 2mmole をＤＣＭ 4mlに溶
解した。この溶液をアミノ酸活性化容器に入れ、ＤＣＣ
（ 0.5Ｍ−ＤＣＭ溶液） 3ml及びＨＯＢｔ（ 0.5Ｍ−Ｄ
ＣＭ溶液） 4mlを加え、３０分間反応させた。反応液を
濾過して濃縮容器に移した。これにＤＭＦ 3mlを加え、
アルゴンガス気流下ＤＣＭを留去した。その後、ＤＭＦ
3mlを加え、前記のペプチド固相合成用反応容器に移し
て30分間反応させた。次いでＤＣＭ 8mlで洗浄した（６
回、各２０秒間）。さらにＢoc−Gly −OH 2mmolをＤＣ
Ｍ 4mlに溶解し、アミノ酸活性化反応容器中で同様の操
作を繰り返すいわゆるダブルカップリング法を行った
後、濾過してＢoc−Gly−ＭＢＨＡ樹脂を得た。

【００９２】次に、得られたＢoc−Ｇly−ＭＢＨＡ樹脂
をＤＣＭ 8mlで洗浄し（４回、各１分間）、濾過した。
これに、60％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液 8ml（20分間）、Ｄ
ＣＭ4ml（３回、各15秒間）、ＤＩＥＡ 1ml含有ＤＭＦ
溶液 3ml（２回、各１分間）、ＤＭＦ 8ml（６回、各40
秒間）の順でアルゴンガス気流中、攪拌下にて処理し、
また、各々の処理毎に濾過を行った。

【００９３】さらに、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu
-Arg-Pro-Gly-NH₂のアミノ酸配列の第９番目のアミノ酸
残基に対応するＢoc−Ｐｒｏ−ＯＨ 2mmole をＤＣＭ 4
mlに溶解し、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（ 0.5Ｍ−
ＤＣＭ溶液）1.5ml を加え、７分間反応させた。その
後、反応混合液を濾過して濃縮容器に移し、これにＤＭ
Ｆ 3mlを加え、アルゴンガス気流下ＤＣＭを留去した。
これにＤＭＦ 3mlを加え、前記のペプチド固相合成用反
応容器に移して30分間反応させた。ついでＤＣＭ8mlで
洗浄し（６回、各20秒間）、濾過してＢoc−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂を得た。以下、次に示すアミノ基保
護アミノ酸を用いて順次８番目から４番目までのアミノ
酸をカップリングした。

【００９４】 アミノ 保護アミノ酸 使用量 酸順序 (mmol) ８ Boc-Arg(Tos)-OH ２×２ ７ Boc-Leu-OH ２ ６ Boc-D-Trp-OH ２ ５ Boc-Tyr(Bzl)-OH ２ ４ Boc-Ser(Bzl)-OH ２ 上記固相合成において、Ａrgを用いた場合はダブルカッ
プリングを行った。このようにして、保護ペプチド−Ｍ
ＢＨＡ樹脂、Boc-Ser(Bzl)-Tyr(Bzl)-D-Trp-Leu-Arg(To
s)-Pro-Gly-ＭＢＨＡ樹脂2.76ｇを得た。上記保護ペプ
チド−ＭＢＨＡ樹脂2.76ｇにアニソール 5mlを加え、さ
らに無水フッ化水素25mlを加えて、０℃で１時間撹拌し
た。反応後、無水フッ化水素を減圧下で留去し、残査を
エーテルで洗浄した。このようにして、H-Ser-Tyr-D-Tr
p-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ 130gが得られた。

【００９５】H-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ の
旋光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。 [α] _D ： -50.4(c=1.0,MeOH) Rf ： 0.13 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₅₉Ｈ₈₄Ｎ₁₆Ｏ₁₂・AcOH・2H₂Oとして） 理論値 Ｃ:54.31% Ｈ:7.04% Ｎ:17.27% 測定値 Ｃ:54.20% Ｈ:6.89% Ｎ:16.97%

【００９６】(5-2)pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Ar
g-Pro-Gly-NH₂の製造 H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の代わりに、
上記(5-1) で製造したH-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gl
y-NH₂ 1.30gを用いた以外は実施例１の(1-11)と同様の
方法により、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro
-Gly-NH₂ 808mgを得た。pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-L
eu-Arg-Pro-Gly-NH₂ の旋光度、元素分析値及びアミノ
酸分析値を下記に示す。

【００９７】 [α] _D ： -56.6(C=1.0, H₂O) 元素分析 （Ｃ₆₄Ｈ₈₂Ｎ₁₈Ｏ₁₃・AcOH・2H₂Oとして） 理論値 Ｃ:56.32% Ｈ:6.44% Ｎ:17.91% 測定値 Ｃ:56.20% Ｈ:6.38% Ｎ:16.97% アミノ酸組成；Ser 0.98(1),Glu 1.07(1),Gly 1.01(1),
Pro 0.99(1),Leu 1.00(1),Tyr 0.92(1),His 0.95(1),Ar
g 1.08(1)

【００９８】〔実施例６〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(2-ナフチル)-D-Ala-Leu-Arg-Pr
o-Gly-NH ₂の製造 (6-1) H-Ser-Tyr-(2-ナフチル)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly
-NH₂ の製造 第６番目のアミノ酸残基に対応するBoc-D-Trp-OHの代わ
りにBoc-D-(2-ナフチル)-D-Ala-OHを使用した以外は実
施例５の(5-1) と同様の処理をしてH-Ser-Tyr-(2-ナフ
チル)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ 0.98 ｇを得た。H-S
er-Tyr-(2-ナフチル)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂の旋
光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【００９９】 [α] _D ： -44.1(C=1.0, MeOH) Rf ： 0.15 元素分析値 （Ｃ₄₇Ｈ₆₆Ｎ₁₂Ｏ₁₀として） 理論値 Ｃ:58.86% Ｈ:6.94% Ｎ:17.52% 測定値 Ｃ:58.72% Ｈ:6.88% Ｎ:17.49%

【０１００】(6-2) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(2-ナフチ
ル)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂の製造 H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の代わりに、
上記(6-1) で製造したH-Ser-Tyr-(2-ナフチル)-D-Ala-L
eu-Arg-Pro-Gly-NH₂ 1.30g を用いた以外は実施例１の
(1-11)と同様の方法により、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(2-
ナフチル)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ 802mg を得た。
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(2-ナフチル)-D-Ala-Leu-Arg-Pr
o-Gly-NH₂ の旋光度、元素分析値及びアミノ酸分析値を
下記に示す。

【０１０１】 [α] _D ： -50.3(C=1.0,H₂O) 元素分析 （Ｃ₆₉Ｈ₈₈Ｎ₁₈Ｏ₁₄として） 理論値 Ｃ:59.47% Ｈ:6.37% Ｎ:18.09% 測定値 Ｃ:59.40% Ｈ:6.33% Ｎ:17.98% アミノ酸組成；Ser 0.98(1),Glu 1.05(1),Gly 1.00(1),
Pro 1.03(1),Leu 1.00(1),Tyr 0.93(1), His 0.94(1),A
rg 1.07(1)

【０１０２】〔実施例７〕pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂の製造 (7-1) H-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂の製造 第６番目のアミノ酸残基に対応するBoc-D-Trp-OHの代わ
りにBoc-Gly-OHを使用した以外は実施例５の(5-1) と同
様の処理をしてH-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ 1.
12ｇを得た。H-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ の旋
光度、ＴＬＣのRf及び元素分析値を下記に示す。

【０１０３】 [α] _D ： -40.1(c=1.0, MeOH) Rf ： 0.10 (BuOH/AcOH/H₂O=4/1/5) 元素分析値 （Ｃ₃₃Ｈ₅₃Ｎ₁₁Ｏ₉として） 理論値 Ｃ:53.00% Ｈ:7.14% Ｎ:20.60% 測定値 Ｃ:53.20% Ｈ:6.89% Ｎ:20.97%

【０１０４】(7-2) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg
-Pro-Gly-NH₂の製造 H-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt の代わりに、
上記(6-1) で製造したH-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-
NH₂ 1.30gを用いた以外は実施例１の(1-11)と同様の方
法により、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly
-NH₂ 811mgを得た。pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg
-Pro-Gly-NH₂の元素分析値及びアミノ酸分析値を下記に
示す。

【０１０５】 元素分析 （Ｃ₅₅Ｈ₇₅Ｎ₁₇Ｏ₁₃・AcOH・2H₂O として） 理論値 Ｃ:53.55% Ｈ:6.54% Ｎ:18.63% 測定値 Ｃ:53.85% Ｈ:6.89% Ｎ:18.97% アミノ酸組成；Ser 1.01(1),Glu 1.03(1),Gly 2.01(2),
Pro 0.98(1),Leu 1.01(1),Tyr 0.94(1), His 0.94(1),A
rg 1.08(1)

【０１０６】

【発明の効果】本発明の方法は、酵素反応を利用するこ
とからラセミ化等の副反応を伴わないのでＬＨ−ＲＨ誘
導体の分離、精製が容易であり、しかも、収率が高く、
未反応のペプチドフラグメントを回収して再利用するこ
とが可能であるため、工業的に極めて有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大畠 章子 茨城県北相馬郡守谷町久保ヶ丘１丁目２番 伊藤ハム株式会社中央研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式(1) ： pGlu-His-Trp-OR¹ (1) （式中、R¹は低級アルキルを示す。）で表されるペプチ
   ドフラグメントと、一般式(2) ： H-Ser-Tyr-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ (2) （式中、ＸはD-Leu 、D-Ser(But)、D-Trp 、(2-ナフチ
   ル)-D-Ala 、Leu 又はGlyを示し、ＹはGly-NH₂ 、アザ
   グリシン又はNHR²（R²は低級アルキルである。）を示
   す。）で表されるペプチドフラグメントとを、キモトリ
   プシン又はキモトリプシン様酵素の存在下で反応させる
   ことを特徴とする、一般式(3) ： pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Ｘ-Leu-Arg-Pro-Ｙ (3) （式中、Ｘ及びＹは前記のとおりである。）で表される
   ＬＨ−ＲＨ誘導体の製造方法。