JPH10505747A

JPH10505747A - Human inositol monophosphatase H1

Info

Publication number: JPH10505747A
Application number: JP8510137A
Authority: JP
Inventors: マイスナー，ポール・エス; ゴカイン，ジーニー・ディ
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Current assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 1994-09-16
Filing date: 1994-09-16
Publication date: 1998-06-09
Also published as: EP0784672A1; AU7956494A; WO1996008557A1; EP0784672A4

Abstract

(57)【要約】ヒトのイノシトールモノホスファターゼＨ１ポリヌクレオチドおよびこのポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）および組換え技術によってこのポリペプチドを製造する方法、およびこのポリペプチドを、例えばｈＩＭＰ−Ｈ１を阻害することのできる化合物を設計し、検索するようなおよび遺伝子疾病の地図作成するような治療的目的のために使用する方法を開示する。またこのポリペプチドに対する拮抗剤を、例えば精神病および抑欝性障害の処置などの治療的目的のためにこの拮抗剤を使用する方法とともに開示する。 (57) [Summary] Human inositol monophosphatase H1 polynucleotide and DNA (RNA) encoding the polypeptide and methods of producing the polypeptide by recombinant techniques, and compounds that can inhibit the polypeptide, eg, hIMP-H1 Methods are disclosed for use in therapeutic purposes, such as designing and searching and mapping genetic diseases. Also disclosed are antagonists to the polypeptide, as well as methods of using the antagonists for therapeutic purposes, such as, for example, treating psychosis and depressive disorders.

Description

【発明の詳細な説明】ヒトのイノシトールモノホスファターゼＨ１この発明は新規に確認されたポリヌクレオチド、これらのポリヌクレオチドがコードするポリペプチド、これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用法、ならびにこれらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生産法に関する。特に、本発明のポリペプチドはヒトのイノシトールモノホスファターゼＨ１であって、以下、時には「ｈＩＭＰ−Ｈ１」と記載する。本発明はこれらのポリペプチドの作用の阻害法にも関する。細胞は複雑な応答のネットワークを通して細胞外の刺激に応答する。イノシトール脂質代謝は細胞内シグナル伝達において鍵となる役割を演じている。作動剤が誘導する細胞の刺激は、ホスホイノシチドのホスホリパーゼＣによる加水分解によって、シグナル伝達分子であるジアシルグリセロールおよびイノシトールホスフェートを放出させる。ジアシルグリセロールはプロティンキナーゼＣを刺激する機能を果たし（Ｎｉｓｈｉｚｕｋａ，Ｙ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３巻：３０５〜３１２頁（１９８６年））、数種のイノシトールモノホスフェート、特に注目すべきはイノシトール−１，４，５−トリホスフェート、は細胞内および細胞間でカルシウム放出を起こす（Ｂｅｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｊ．とＩｒｖｉｎｅ，Ｒ．Ｆ．、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、３１２巻：３１５〜３２１頁（１９８４年））。イノシトールホスファターゼおよびキナーゼの作用でサイトソル中にシグナル伝達分子または調節分子の役目を果たす過剰のイノシトールホスフェートが生じる（Ｍａｊｅｒｕｓ，Ｐ．Ｗ．など、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３巻：３０５１〜３０５４頁（１９８８年））。イノシトールモノホスファターゼ（ＩＭＰ）はホスファチジルイノシトール・シグナル伝達経路においてイノシトールモノホスフェートの加水分解を触媒することによって重要な役割を果たしている。ＩＭＰ類は躁鬱病の治療のためのリチウム療法における作用の分子的側面であると信じられている。リチウムはイノシトールモノホスファターゼを阻害し、イノシトール−１−ホスフェートからの遊離イノシトール蓄積を予防する。炭酸リチウムは１９４９年に有効な抗躁病化合物であることがＪｏｈｎ・Ｃａｄｅによって証明され、この化合物は１９６９年には広範な使用を承認された。しかしながら、躁鬱病患者のリチウム療法はある種の有害な副作用を伴う。これらには震え、体重増加、下痢、肌荒れ、一過性白血球増加症、甲状腺機能低下、および多尿−煩渇多飲症を含む。長期リチウム療法に伴うその他の臨床的疾患には腎臓の構造的損傷（細管萎縮症、糸球体硬化症および間質性繊維症を含む）がある。これらの副作用は直接的にリチウムの毒性に由来する。ホスホイノシチド（ＰＩ）のサイクルはリチウムの作用の推測上の標的であるため、リチウムで全身的に処置した時にはラットの脳中でイノシトール−１−ホスフェートの顕著な増加および遊離イノシトールの対応する減少が起きることが証明されている。これはイノシトール−１−ホスフェートホスファターゼの阻害に起因するとされ、リチウムは過剰に刺激された細胞中でＰＩサイクルの活性を弱めることができ、それで躁病を制御する有効性を説明する仮説が導かれた。ＰＩサイクルに対するイノシトールの供給はグルコースからまたは食事からの新たな合成によるイノシトールホスフェートの加水分解から由来するとすることができる。前者の過程はイノシトール−１−ホスフェートホスファターゼの操作に依存し、それ故、リチウムによって阻害される。末梢性組織中では食事からのイノシトールはリチウムによる遮断を迂回できるが、イノシトールは血液脳関門を通過しないのでＣＮＳではできない。そこで、脳中でのイノシトール−１−ホスフェート増加は遊離イノシトールの等価な減少を伴う。マンガンはイノシトールモノホスファターゼによる触媒作用をサポートする。一方では、二価イオン、すなわちカルシウムおよびマンガンは競合的阻害剤である（Ｈａｌｌｃｈｅｒ，Ｌ．Ｍ．とＳｈｅｒｍａｎ，Ｗ．Ｒ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５５巻：１０８９６〜９０１頁（１９８０年））。リチウムはイノシトールモノホスファターゼを非競合的に阻害する。ＩＭＰは基質ＩＮＳ（１）Ｐ、ＩＮＳ（３）Ｐ、およびＩＮＳ（４）Ｐからイノシトールを遊離させる。ＩＭＰはこれに限定するものではないが、Ｓｈｅｒｍａｎ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２２４巻：１０８９６〜１０９０１頁（１９８０年）、Ｔａｋｉｍｏｔｏ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ）、９８巻：３６３〜３７０頁（１９８５年）およびＧｅｅ、Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．Ｊ．、２４９巻：８８３〜８８９頁（１９８８年）によって開示されたものを含む多様な非イノシトール含有基質を加水分解することができる。最初のヒトのＩＭＰ・ｃＤＮＡはＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒなど（ＷＯ９３／２５６９２（１９３３年））によって分離され、開示された。本発明のポリペプチドはヒトのイノシトールモノホスファターゼポリペプチドとして推定的に確認された。この確認はアミノ酸配列相同性の結果で得られた。本発明の一側面は、ｈＩＭＰ−Ｈ１である新規な推定的な成熟ポリペプチドならびにその断片、類縁体および誘導体を提供する。本発明のポリペプチドはヒト起源のものである。本発明の別の側面では、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を提供する。本発明のさらに別の側面は、組換え技術によってこれらのポリペプチドを製造する方法を提供する。本発明のさらに別の側面は、これらのポリペプチドまたはこれらポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、例えばこのクラスの酵素を阻害することのできる化合物を検索し、設計するためおよび精神医学的な障害の処置のためなど、治療目的のために使用する方法を提供する。本発明のさらに別の側面は、これらのポリペプチドに対する抗体を提供する。本発明のさらに別の側面は、例えば精神疾患および鬱病（両極性および非両極性）の処置においてこれらのポリペプチドの作用を阻害するために使用しうる、これらのポリペプチドに対する拮抗剤を提供する。本発明のこれらおよびその他の側面は本明細書中の開示によって当技術分野における熟練者には明白となる筈である。下記の図面は本発明の態様を例示するものであって、請求項が描出するような本発明の範囲を限定することを意図しているものではない。図１はｃＤＮＡ配列および成熟型ｈＩＭＰ−Ｈ１の演繹した対応アミノ酸配列を開示する。アミノ酸ＤＰＩＤＧＴはＩＭＰ酵素の活性部位において必須であることが証明されており、太字および下線で示してある。図２はｈＩＭＰ−Ｈ１ｃＤＮＡの完全ヌクレオチド配列を示す。ｃＤＮＡをクローニングするために使用した合成ＢａｍＨ１（位置１）およびＸｈｏＩリンカー（位置１３０８）は下線で示す。図３はｈＩＭＰ−Ｈ１とｈＩＭＰとの間のアミノ酸の比較である。四角の枠で囲んだ領域は同一なアミノ酸を示す。図４はｈＩＭＰ−Ｈ１のノーザンブロット分析である。配列決定の不正確さはポリヌクレオチド配列の決定を試みる時には、日常的な難題である。従って、図１の配列は数回行った配列決定実験に基づくものだが、その配列決定の正確度は少なくとも９７％であると考えられる。本発明の一側面は図１に示す演繹されたアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドまたはＡＴＣＣ寄託番号７５７５３として１９９４年４月２５日に寄託したクローンのｃＤＮＡがコードする成熟ポリペプチドをコードする分離された核酸（ポリヌクレオチド）を提供する。本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはヒトの脳、リンパ球、および胎盤から取得しうる。この発明のポリヌクレオチドはヒトの脳組織から誘導したｃＤＮＡライブラリー中に発見された。これは構造的にイノシトールモノホスファターゼ族に関連付けられる。これは約２６５アミノ酸残基の蛋白質をコードする読取り枠を含む。この蛋白質はヒトのイノシトールモノホスファターゼに対して２６５アミノ酸の長さにわたって同一性５５％および類似性６５％に達する最高度の相同性を示す。アミノ酸配列ＤＰＩＤＧＴが本発明のポリペプチドに保存されていることも、この領域がＩＭＰ酵素の活性部位において必須であることが証明されているので、重要なことである。本発明のポリヌクレオチドはＲＮＡの型でもＤＮＡの型であってもよく、そのＤＮＡにはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡを包含する。このＤＮＡは二重鎖または単一鎖であってもよく、もしも単一鎖ならばコード鎖であっても非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。成熟ポリペプチドをコードするコード配列は図１に示すコード配列または寄託したクローンのものと同一であってもよく、また遺伝子コードの重複性または縮退性の結果として、コード配列が同じ成熟ポリペプチドをコードする図１のＤＮＡとも寄託したｃＤＮＡとも異なるコード配列であってもよい。図１に示す成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたは寄託したｃＤＮＡがコードする成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは：成熟ポリペプチドのコード配列のみ：成熟ポリペプチドのコード配列および、たとえばリーダーまたは分泌配列またはプロ蛋白質配列のような付加的コード配列；成熟ポリペプチドのコード配列（および要すれば付加的コード配列）および、たとえばイントロンまたは成熟ポリペプチドのコード配列の５’−および／または３’ −の非コード配列のような非コード配列；を包含することもある。そこで、用語「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」はコード配列のみを含むポリヌクレオチドならびに付加的配列および／または非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。本発明はさらに、図１に示す演繹したアミノ酸配列を持つポリペプチドまたは寄託したクローンのｃＤＮＡがコードするポリペプチドの、断片、類縁体および誘導体をコードする前記ポリヌクレオチドの変異体に関する。このポリヌクレオチドの変異体は本ポリヌクレオチドの天然起源対立遺伝子変異体であるかまたは本ポリヌクレオチドの非天然起源変異体であってもよい。こうして、本発明は図１に示すものと同じ成熟ポリペプチドまたは寄託したクローンのｃＤＮＡがコードする同じ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドならびにこれらポリヌクレオチドの変異体であって、これらの変異体は図１に示すポリペプチドまたは寄託したクローンのｃＤＮＡがコードするポリペプチドの断片、誘導体または類縁体をコードするものを包含する。このようなヌクレオチド変異体には欠失変異体、置換変異体および付加変異体または挿入変異体を包含する。前記に指摘した通り、本ポリヌクレオチドは図１に示すコード配列または寄託したクローンのコード配列の天然起源アレル変異体であるコード配列を持つことがある。当技術分野で知られている通り、アレル変異体はポリヌクレオチド配列の別型であって、コードするポリペプチドの機能を実質的に変化させずにヌクレオチドに１個またはそれ以上の、置換、欠失または付加があるかもしれないものである。本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明の精製を可能にするマーカー配列が融合したコード配列を枠内に持ちうる。このマーカー配列は細菌性宿主の場合にｐＱＥ−９ベクターによって供給されるこのマーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を提供するヘキサヒスチジンタグでありうるし、または哺乳類宿主、たとえばＣＯＳ−７細胞を使用する時は、例えばこのマーカー配列は赤血球凝集素（ＨＡ）タグでもよい。このＨＡタグはインフルエンザの赤血球凝集素蛋白質から誘導したエピトープに対応する（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．など、Ｃｅｌｌ、３７巻：７６７頁（１９８４年））。本発明はさらにもし両配列間に少なくとも５０％、好ましくは７０％の同一性があれば前記配列にハイブリッド形成するポリヌクレオチドに関する。本発明は殊に前記ポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下にハイブリッド形成するポリヌクレオチドに関する。本明細書中に使用する用語「ストリンジェントな条件」とは両配列間に少なくとも９５％、好ましくは９７％の同一性がある時にのみハイブリッド形成が起きることになることを意味する。好適な態様において前記ポリヌクレオチドにハイブリッド形成するポリヌクレオチドは図１のｃＤＮＡまたは寄託したｃＤＮＡがコードする成熟ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドをコードする。本明細書に示した寄託は特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の条項のもとに維持されることになっている。これらの寄託物は当技術分野における熟練者の便宜のためにのみ提供するものであって、この寄託物が米国特許法第１１２条の要件を満たすことを承認するものではない。寄託物に含まれるポリヌクレオチドの配列ならびにこれがコードするポリペプチドのアミノ酸配列はここに参考のために引用するものであって、本明細書の配列の記載に関して争いがある場合に調整するものである。寄託物を製造し、使用し、または販売するためには許諾が必要であって、その許諾をここで授与するものではない。本発明はさらに図１に示す演繹されたアミノ酸配列または寄託したｃＤＮＡがコードするするアミノ酸配列を持つｈＩＭＰ−Ｈ１ポリペプチドならびにそのポリペプチドの断片、類縁体および誘導体に関する。用語「断片」、「誘導体」および「類縁体」は図１に示すポリペプチドまたは寄託したｃＤＮＡに関連して言及する時には、そのポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを意味する。そこで、類縁体はプロプロテイン部分の切断によって活性化されて活性な成熟ポリペプチドを生産するプロプロテインを包含する。本発明のポリペプチドは組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってもよく、好ましくは組換えポリペプチドである。図１に示すポリペプチドまたは寄託したｃＤＮＡがコードするポリペプチドの断片、誘導体または類縁体は（ｉ）アミノ酸残基の１個またはそれ以上が保存性または非保存性アミノ酸残基（好ましくは保存性アミノ酸残基）で置換されているものであって、この置換アミノ酸残基は遺伝子コードがコードするものであってもなくてもよく、または（ｉｉ）アミノ酸残基１個またはそれ以上が置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが他の化合物、たとえばポリペプチドの半減期を増加する化合物（例えばポリエチレングリコール）のようなものに融合しているもの、または（ｉｖ）成熟ポリペプチドに、たとえばリーダーまたは分泌配列または成熟ポリペプチドの精製のために採用する配列またはプロプロテイン配列のような付加的なアミノ酸が融合しているものでありうる。これら断片、誘導体および類縁体は本明細書の教示からはこの技術分野の熟練の範囲内にあると見做される。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、好ましくは分離された型で供給され、好ましくは均一になるまで精製される。用語「分離された」はその材料がその起源である環境（たとえば、天然起源のものであれば天然の環境）から移動したことを意味する。例えば、生きている動物の中に存在する天然起源ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは分離されていないが、天然系における共存物質の一部または全部から分けられた同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは分離されている。これらのポリヌクレオチドはベクターの一部であることができ、および／またはこれらのポリヌクレオチドまたはポリペプチドは構成の一部であることができ、そのベクターまたは構成が天然環境の一部でないという点でなお分離されている。本発明はまた本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子工学的に処理された宿主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチドの生産に関する。宿主細胞を、例えばクローニングベクターまたは発現ベクターであってもよい本発明のベクターで遺伝子工学的に処理（形質導入または形質転換または遺伝子移入）する。このベクターは、例えばプラスミド、ウィルス粒子、ファージその他の型でありうる。遺伝子工学的に処理した宿主細胞はプロモーターの活性化、形質転換体の選択またはｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子の増幅のために適当なように修正した通常の栄養培地中で培養できる。培養条件、たとえば温度、ｐＨその他のようなものは発現のために選択した宿主細胞について以前に使用されたものであって通常の当業者には明白となるものである。本発明のポリヌクレオチドを組換え技術によってポリペプチドを製造するために採用することもある。そこで、例えばこのポリヌクレオチドはポリペプチドの発現のために多種の発現ベクターの中のいずれか一つを含めることもある。これらのベクターには染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、たとえばＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドとファージＤＮＡ、ワクチニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルスおよびシュードラビエスのようなウイルスのウイルスＤＮＡとの組合せから誘導したベクターを含む。しかしながら、他のいずれのベクターもそれが宿主内で複製可能で生存可能であれば使用しうる。適当なＤＮＡ配列は種々の操作法によってベクターに挿入しうる。一般的に、ＤＮＡ配列は適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に当技術分野で知られている操作法によって挿入する。そのような操作法その他は当技術の範囲内にあると見做される。発現ベクターにあるＤＮＡ配列はｍＲＮＡ合成を指示する適当な発現制御配列（プロモーター）と作動可能に結合している。そのプロモーターの代表例としてはＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、大腸菌のｌａｃまたはｔｒｐ、ファージラムダＰ_Lプロモーターおよび原核生物または真核生物細胞またはそれらのウイルス中の遺伝子の発現を制御することが知られているその他のプロモーターを指摘しうる。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写終結部位を含む。ベクターはまた増幅発現のために適当な配列を含みうる。これに加えて、発現ベクターは、たとえば真核生物細胞培養のためのジヒドロ葉酸還元酵素またはネオマイシン耐性または、たとえば大腸菌におけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性のような好ましくは形質転換した宿主細胞の選択用に表現型特性を提供するために選択可能なマーカー遺伝子を１個またはそれ以上含む。前記のような適当なＤＮＡ配列ならびに適当なプロモーターまたは制御配列をを含むベクターを採用してそのプロテインを発現させるために適当な宿主を形質転換しうる。適当な宿主の代表例として、たとえば大腸菌、ストレプトマイセス、サルモネラ・ティフィムリウムのような細菌細胞、酵母のような菌細胞、ドロソフィラおよびＳｆ９のような昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢｏｗｅｓメラノーマのような動物細胞、植物細胞などを指摘しうる。適当な宿主の選択は本明細書の教示から当技術分野の熟練の範囲内にあると見做される。さらに特異的には、本発明は広義に前記したような配列１個またはそれ以上をを含む組換え構築物も包含する。これらの構築物は正方向または逆方向に本発明の配列を挿入したプラスミドまたはウイルスベクターのようなベクターを含む。この態様の好適な側面において、この構築物はさらに、例えば配列に作動可能に結合しているプロモーターなどを含む制御配列を包含する。多数の適当なベクターとプロモーターが当技術分野の熟練者に知られており、商業的に入手可能である。以下のベクターを例示の目的で提示する：細菌：ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ社）、ｐｂｓ、ｐＤ１０、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ｐｓｉＸ１７４、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ｐｂｓｋｓ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６Ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）、ｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）。真核生物用：ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）。しかしながら、宿主内で複製可能で存続可能である限り、その他のプラスミドまたはベクターも使用しうる。プロモーター領域はＣＡＴ（クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたはその他の選択マーカーを持つベクターを用いて所望のいずれの遺伝子からでも選択できる。適当なベクターの二種はＰＫＫ２３２−８およびＰＣＭ７である。特に指定する細菌プロモーターにはｌａｃｌ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびｔｒｐを包含する。真核生物プロモーターはＣＭＶ即時早期、ＨＳＶチミジンキナーゼ、早期および後期ＳＶ４０、レトロウイルスからのＬＴＲおよびマウスのメタロチオネイン−Ｉを包含する。適当なベクターおよびプロモーターの選択は当技術分野における通常の熟練水準内にある。さらに別の態様では、本発明は前記構築物を含む宿主細胞にに関する。宿主細胞は哺乳類細胞のような高等真核生物細胞、酵母細胞のような下等真核生物細胞またはこの宿主細胞は細菌細胞のような原核生物細胞であることができる。宿主細胞への構築物の導入は燐酸カルシウム遺伝子移入、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介遺伝子移入または電気穿孔法で行うことができる（Ｄａｖｉｓ，Ｌ、Ｄｉｂｎｅｒ，Ｍ．、Ｂａｔｔｅｙ，Ｉ．、「分子生物学における基礎的方法（Ｂａｓｉｃ・Ｍｅｔｈｏｄｓ・ｉｎ・Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｂｉｏｌｏｇｙ）」（１９８６年））。宿主細胞中の構築物は通常の方法で使用でき、組換え配列がコードする遺伝子生成物を生産する。あるいは、本発明のポリペプチドは通常のペプチド合成器によっても合成的に生産できる。成熟蛋白質は哺乳類細胞、酵母、細菌またはその他の細胞中で適当なプロモーターの制御下に発現できる。細胞不含翻訳系を本発明のＤＮＡ構築物から誘導したＲＮＡを使用してこれらの蛋白質を生産するために採用できる。原核生物宿主および真核生物宿主で使用するために適当なクローニングおよび発現ベクターはＳａｍｂｒｏｏｋなど、「分子クローニング：実験室便覧（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｍａｎｕａｌ）」、第２版、Ｃｏｌｄ・Ｓｐｒｉｎｇ−Ｈａｒｂｏｒ社、Ｎ．Ｙ．（１９８９年）に記載されており、ここに参考のために引用する。本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの高等真核生物による転写はベクターにエンハンサー配列を挿入することによって増加できる。エンハンサーはＤＮＡのシス−作用エレメントであって、通常約１０から３００ｂｐであって、プロモーターに作用してその転写を増加する。これらの例には複製開始点の後期側にあるｂｐ１００から２７０のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルスの早期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーを包含する。一般に、組換え発現ベクターに複製開始点および、たとえば大腸菌およびパン酵母のアンピシリン耐性遺伝子であるＴＲＰ１遺伝子など宿主細胞の形質転換を選択できるマーカーおよび高度に発現された遺伝子から誘導した下流の構造配列の転写を指示するプロモーターを含む。このようなプロモーターは、中でも３− ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）、α−因子、酸性ホスファターゼまたは熱ショックプロテインのような解糖酵素をコードするオペロンから誘導できる。異種構造配列は翻訳の開始および終結配列、および好ましくは翻訳した蛋白質の細胞縁辺腔または細胞外の培地への分泌を指示することができるリーダー配列とともに適当な相に集合させる。要すれば、この異種配列は、たとえば発現した組換え生成物の安定化または精製単純化など所望の特性を与えるＮ−末端同定ペプチドを含む融合蛋白質をコードできる。細菌に使用する有用な発現ベクターは所望の蛋白質をコードする構造ＤＮＡ配列を機能的プロモーターとともに作動可能な読取り枠内にある適当な翻訳開始および終結シグナルとともに挿入することによって構築する。このベクターにはベクターの持続を確保し、もし所望なら宿主内での増幅を提供するために表現型選択マーカーを一つまたはそれ以上および複製開始点を含ませる。形質転換のために適当な原核生物宿主には、大腸菌、枯草菌、サルモネラ・ティフィムリウムおよび緑膿菌属、ストレプトマイセス属、およびスタフィロコッカス属の中の数々の種を包含するが、選択の問題としては、その他を採用することもありうる。代表的であるが非限定的例示として、細菌を使用するのに有用な発現ベクターはよく知られているクローニングベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝子エレメントを含む商業的に入手可能なプラスミドから誘導した選択マーカーおよび細菌複製開始点を含むことができる。これらの商業的ベクターには、例えばｐＫＫ２２３−３（Ｐｈａｒｍａｃｉａ・Ｆｉｎｅ・Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、ウプサラ、スウェーデン）とＧＥＭ１（Ｐｒｏｍｅｇａ・Ｂｉｏｔｅｃ社、マジソン、ＷＩ、米国）とを包含する。これらのｐＢＲ３２２「バックボーン」部分を適当なプロモーターおよび発現すべき構造配列と結合する。適当な宿主株を形質転換し、宿主株を適当な細胞濃度まで生育させ、それに続いて選択したプロモーターを適当な手段（たとえば温度変化または化学的誘導）で誘導して、細胞をさらに一定期間培養する。典型的には細胞を遠心分離によって収集し、物理的または化学的方法によって崩壊させ、得られる粗製抽出物をその後の精製のために保持する。蛋白質の発現に採用する微生物細胞は、凍結−解凍反復、超音波処理、機械的崩壊、または細胞溶解剤の使用を含む通常の方法のいずれによっても崩壊でき、このような方法は当技術分野の熟練者にはよく知られている。種々の哺乳類細胞培養系を組換え蛋白質を発現するために採用できる。哺乳類発現系の例にはＧｌｕｚｍａｎ、Ｃｅｌｌ、２３巻：１７５頁（１９８１年）が記載したサル腎臓繊維芽細胞のＣＯＳ−７細胞系列、および、例えばＣ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａおよびＢＨＫ細胞系列などの適合するベクターを発現することができる他種の細胞系列を包含する。哺乳類発現ベクターには複製開始点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、およびまた必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライシング供与体およびスプライシング受容体部位、転写終結配列、および５’−隣接非転写配列を含ませる。ＳＶ４０スプライシングから誘導したＤＮＡ配列およびポリアデニル化部位を必要な非転写遺伝子エレメントを提供するために使用することもありうる。ｈＩＭＰ−Ｈ１ポリペプチドは組換え細胞培養物から硫酸アンモニウムまたはエタノール沈降、酸性抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを包含する方法によって回収し、精製できる。精製の間に低濃度のカルシウムイオン（約０．１５〜５ｍＭ）を存在させるのは好適である（Ｐｒｉｃｅなど、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２４４巻：９１７頁（１９６９年））。蛋白質再折り畳みの段階を成熟蛋白質の配置を完成するため必要ならば使用できる。最後に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を最終的な精製段階のために採用できる。本発明のポリペプチドは、精製天然産生成物、または化学合成操作の生成物、または原核生物または真核生物宿主（例えば培養物中の細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳類細胞によって）から組換え技術によって生産したものでありうる。組換え生産操作に採用する宿主に依存して、本発明のポリペプチドはグリコシル化されることも、グリコシル化されないこともある。本発明のポリペプチドは開始メチオニンアミノ酸残基を包含することもある。ｈＩＭＰ−Ｈ１をリチウム以外の異なる躁鬱病治療用化合物を設計するために採用することもありうる。ｈＩＭＰ−Ｈ１はそれ故、ｈＩＭＰ−Ｈ１を阻害することのできる化合物を検索し、設計するために有用である。ｈＩＭＰ−Ｈ１の別の用途は遺伝子病の地図作成である。例えばある種の型の遺伝性躁鬱病の原因である正確な遺伝子座はなお知られておらず、十分な研究の対象である（Ｙｏｒｋなど、ＰＮＡＳ・ＵＳＡ）９０巻：５８３３〜５８３７頁（１９９３年））。この研究の標的の一つはＩＭＰ遺伝子である。ｈＩＭＰ−Ｈ１ｃＤＮＡを使用して完全遺伝子の染色体座を分離できる。この染色体領域を、次に、躁鬱病またはおそらく他の精神疾患に罹患した族における突然変異のいずれかがこの領域に局在するかどうかを研究して決定する。本発明のポリヌクレオチドは同様な生物学的活性を持つ別個の分子を確認するためにも有用である。例えばｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子のコード領域の一部をオリゴヌクレオチドプローブとして採用しうる。本発明の遺伝子の配列と相補的な配列を持つ標識オリゴヌクレオチドは、ライブラリーのどの構成員とこのプローブとがハイブリッド形成するか決定するためにヒトのｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーを検索するために使用される。本発明はｈＩＭＰ−Ｈ１をその機能から遮断する化合物（拮抗剤）を確認する検定法に関する。ｈＩＭＰ−Ｈ１を阻害する別個の治療用化合物を設計するための構造的基礎を提供するため、ｈＩＭＰ−Ｈ１の精製、クローニングおよびＸ線結晶学研究を行う。クローニングした酵素から構造データを作成し、中でもＸ線結晶学的および構造データを得て、ｈＩＭＰ−Ｈ１に対する拮抗剤を検索し、設計するために使用する。この検索の一例にはＬ−［Ｕ−¹⁴Ｃ］Ｉｎｓ（１）Ｐを標識として含有するＤＬ−Ｉｎｓ（１）Ｐからの［¹⁴Ｃ］−イノシトールの放出測定（Ｇｕｍｂｅｒなど、Ｐｌａｎｔ・Ｐｈｙｓｉｏｌ．、７６巻：４０〜４４頁（１９８９年）に記載）を包含する。酵素活性１単位は３７℃で毎分基質１μ モルを加水分解する活性を示す。蛋白質濃度はＢｒａｄｆｏｒｄの方法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ，Ｍ．、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７２巻：２４８〜２５２頁（１９７６年））によって決定しうる。前記検定法はＰＩサイクルに決定的な別種の酵素を遮断するためにも使用しうるものであって、例えばホスファチジルイノシトールシグナル伝達経路に関与する酵素であるホスホイノシトールキナーゼは、すなわちイノシトール−１，３，４−トリホスフェートおよびイノシトール−１，４−ジホスフェートから１位のホスフェートの加水分解を触媒する。拮抗剤候補にはｈＩＭＰ−Ｈ１に結合して基質に結合できないｈＩＭＰ−Ｈ１ポリペプチドを作る、ｈＩＭＰ−Ｈ１ポリペプチドに対する抗体を包含する。拮抗剤候補にはｈＩＭＰ−Ｈ１に類似し（ｈＩＭＰ−Ｈ１機能を保持していない近縁蛋白質）、正常にはｈＩＭＰ−Ｈ１が結合するサブタイプの受容体を認識し、結合する蛋白質も包含する。しかしながら、第二メッセンジャー応答は存在しない。このようにして、ｈＩＭＰ−Ｈ１酵素の機能を妨害し、ｈＩＭＰ−Ｈ１阻害の有益な治療的効果を達成する。これら蛋白質の数例には、これに限定するものではないが、オリゴヌクレオチドおよびペプチド低分子を包含する。アンチセンス技術をＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく方法である三重ラセン形成またはアンチセンスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡの両方法によって遺伝子発現を制御するために使用することもある。例えば本発明の成熟ポリペプチドをコードするこのポリヌクレオチド配列の５’−コード部分を使用して長さ約１０塩基対から約４０塩基対までのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドを転写に関与する遺伝子領域と相補的に設計し（三重ラセン−Ｌｅｅなど、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ・Ｒｅｓ．、６巻：３０７３頁（１９７９年）；Ｃｏｏｎｅｙなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１巻：４５６頁（１９８８年）；Ｄｅｒｖａｎなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１巻：１３６０頁（１９９１年））、そこで転写およびｈＩＭＰ−Ｈ１の生産を妨害する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは生体内でｍＲＮＡとハイブリッド形成してｍＲＮＡ分子のｈＩＭＰ−Ｈ１への翻訳を遮断する（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、５６巻：５６０頁（１９９１年）；「遺伝子発現のアンチセンス阻害剤としてのオリゴデオキシヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ・ａｓ・Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ・Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ・ｏｆ・Ｇｅｎｅ・Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」、ＣＲＣ・Ｐｒｅｓｓ社、Ｂｏｃａ・Ｒａｎｔｏｎ、ＦＬ（１９８８年））。前記オリゴヌクレオチドはアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡが生体内で発現してｈＩＭＰ−Ｈ１の生産を阻害しうるように細胞に送達できる。その他の拮抗剤候補はｈＩＭＰ−Ｈ１酵素の触媒部位に結合し、占拠してその触媒部位に基質が近付けなくして正常な生物学的活性を予防する低分子である。低分子の例には、これに限定するものではないが、低分子量ペプチドまたは低分子量のペプチド様分子を包含する。これらの拮抗剤を躁病以外の精神病および鬱病（両極性または非両極性の）を処置するために使用しうる。拮抗剤はたとえば下記の医薬的に許容される担体とともに組成物中で採用することもある。ｈＩＭＰ−Ｈ１の作用を阻害する化合物を適当な医薬的担体とともに組成物中で採用することもある。これら組成物は治療的有効量のペプチドおよび医薬的に許容される担体または添加剤を含む。この担体は、これに限定するものではないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセリン、エタノールおよびこれらの組合せを包含する。製剤は投与の態様に適合させるべきである。これら医薬組成物は、たとえば経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻内または皮内のような経路の好都合な様式で投与しうる。これら医薬的組成物は特定の徴候の処置および／または予防のために有効な量を投与する。一般に、投与量は少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重の量であって、ほとんどの場合に一日当り約８ｍｇ／ｋｇ体重を越えない量で投与こととなろう。多くの場合、この日用量は投与経路、症状などを考慮に入れて約１０μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ体重までである。ｈＩＭＰ−Ｈ１を阻害することが確認されたポリペプチドであるこれら化合物はしばしば「遺伝子治療」と呼ばれているそのポリペプチドの生体内での発現によって本発明に従って採用しうる。そこで、例えば患者からの細胞を生体外でポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）で遺伝子処理して、それら処理した細胞を次にそのポリペプチドで処置すべき患者に供給する。このような方法は当技術分野で良く知られている。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を使用することによって当技術分野で知られている操作法によって細胞を処理する。同様にして、例えば当技術分野で知られている操作法によって細胞を生体内で処理してポリペプチドを生体内で発現することもある。当分野で知られているように、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を生産するための生産用細胞を患者に投与して生体内で細胞に遺伝子工学的処理をしてこのポリペプチドを生体内で発現する。本発明のポリペプチドを投与するためのこれらおよびその他の方法は当技術分野における熟練者には本発明の教示から明白となろう。例えば細胞に遺伝子工学的処理をするための発現伝達体は、例えば適当な送達伝達体と結合した後に生体内で細胞に遺伝子工学的処理をするために使用しうるアデノウイルスのようにレトロウイルス以外のものでありうる。本発明の配列はまた染色体確認のためにも価値がある。この配列はヒトの各染色体上の特定の位置を特異的標的とし、そこにハイブリッド形成できる。さらにその上、染色体上の特定の部位を確認する必要性が現存する。染色体上の位置に目印するための実際の配列データ（反復多型）に基づく染色体目印試薬は極めて少数が入手できるにすぎない。本発明に従って染色体にＤＮＡを地図作成することはこれら配列を疾病に関連する遺伝子と相関付ける重要な第一段階である。略述すれば、ｃＤＮＡからＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５ｂｐ）を調製することによって配列を染色体に地図作成できる。ｃＤＮＡのコンピュータ解析を使用して迅速にゲノムＤＮＡ中のエクソン１個以上にわたらないので増幅工程を複雑化することのないプライマーを選択する。これらプライマーを次にヒトの各染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲ検索に使用する。このプライマーに対応するヒトの遺伝子を含むハイブリッドのみが増幅した断片を与えることとなる。体細胞ハイブリッドのＰＣＲ地図作成は特定のＤＮＡを特定の染色体に割付けるための迅速な操作である。同じオリゴヌクレオチドプライマーで本発明を使用することで、特定の染色体からの一連の断片を用いてまたは類似の様式における大きなゲノムクローンの集積を用いて副局在化を達成できる。同様にして染色体に地図作成するために使用できるその他の地図作成方策には現位置ハイブリッド形成、標識フロー分類染色体による前検索、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリッド形成による前選択を包含する。分裂中期染色体展開へのｃＤＮＡクローンによる螢光現位置ハイブリッド形成（ＦＩＳＨ）は一段階で正確な染色体位置を提供するために使用できる。この技術は長さ５００塩基または６００塩基のｃＤＮＡで使用できるが、しかしながら２０００ｂｐ以上の大きさのクローンは独特な染色体位置へのさらに高度な結合可能性を持ち、単純な検出のために十分なシグナル強度を有する。ＦＩＳＨにはＥＳＴを誘導した元のクローンの使用が必要で、長いほどよい。例えば、２０００ｂｐは良好で、４０００はさらに良く、時間の合理的な割合で良好な結果を得るためには４０００以上はおそらく不要であろう。この技術の綜説については、Ｖｅｒｍａなど、「ヒトの染色体：基礎技術便覧（Ｈｕｍａｎ・Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：ａ・Ｍａｎｕａｌ・ｏｆ・Ｂａｓｉｃ・Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ・Ｐｒｅｓｓ社、ニューヨーク（１９８８年）を参照。一旦配列が正確な染色体の位置に地図作成されると、染色体上の配列の物理的位置を遺伝子地図データと関連付けできる。このデータは、例えばＶ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ、「ヒトのメンデル遺伝（Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ・Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ・ｉｎ・Ｍａｎ）」に見出される（Ｊｏｈｎｓ・Ｈｏｐｋｉｎｓ大学Ｗｅｌｃｈ医学図書館を経由してオンラインで入手できる）。同じ染色体領域に割付けられた遺伝子と疾病との間の関係を次にリンケージ分析によって確認する（物理的に隣接する遺伝子の共遺伝）。次に、罹患個体と非罹患個体との間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する必要がある。もしも、ある突然変異が罹患個体のいくつかまたは全部に観察されるが、正常な個体にはだれにも観察されなければ、その突然変異はその疾患の原因であるらしく思われる。物理的地図作成と遺伝子的地図作成技術との現技術で疾病に関連付けられた染色体領域に正確に割付けられるＤＮＡは原因遺伝子５０個と５００個との間の１個である（１メガ塩基の地図作成技術と２０ｋｂについて１遺伝子を仮定）。これらポリペプチド、その断片またはその他の誘導体またはその類縁体、またはそれらを発現する細胞はそれに対する抗体を生産するための免疫原として使用できる。例えばこれら抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であることができる。本発明はキメラ抗体、単鎖抗体およびヒト化抗体ならびにＦａｂ抗体またはＦａｂ発現ライブラリーの生成物を包含する。当技術分野で知られている様々な操作法を抗体およびその断片の生産に使用してもよい。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して作成される抗体は、このポリペプチドを動物に直接的に注射することによってまたはこのポリペプチドを動物、好ましくは非ヒトに投与することによって取得できる。こうして得られる抗体はそこでこのポリペプチド自体に結合することとなろう。こうして、これらポリペプチドの断片のみをコードする配列でさえ在来ポリペプチド全体を結合する抗体を作成するために使用できる。次にこのような抗体を使用してこのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを分離できる。モノクローナル抗体の調製のためには、連続的細胞系列培養で生産される抗体を提供するいかなる技術も使用できる。例としては、ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９７頁（１９７５年））、トリオーマ技術、ヒトのＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒなど、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ・Ｔｏｄａｙ、４巻：７２頁（１９８３年））、およびヒトのモノクローナル抗体を生産するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅなど、「モノクローナル抗体と癌治療法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ・Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ・ａｎｄ・Ｃａｎｃｅｒ・Ｔｈｅｒａｐｙ）」、Ａｌａｎ・Ｒ．Ｌｉｓｓ社、７７〜９６頁（１９８５年））を包含する。単鎖抗体の生産用に記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）はこの発明の免疫原ポリペプチド生成物に対する単鎖抗体を生産するために適用できる。ｈＩＭＰ−Ｈ１ポリペプチドに特異的な抗体は診断用検定法の一部として対象から由来する試料中のｈＩＭＰ−Ｈ１濃度を検出するために使用できるはずである。もし検出されればｈＩＭＰ−Ｈ１濃度の異常は対象の脳中遊離イノシトールの増加および対応する精神病的および／またはその他の生理学的な障害の指標でありうる。本発明を以下の実施例を参照してさらに記載することとする。しかしながら、これらの実施例に限定するものではないと理解すべきである。特段の指摘がなければ、部または量はすべてが重量によるものである。以下の実施例の理解を促進するために、頻繁に使用する方法および／または用語をいくつか記載することとする。「プラスミド」は先行する小文字ｐおよび／または後続する大文字および数字で命名する。本明細書の出発プラスミドは商業的に入手できるか、非制限的条件で公共的に入手できるか、または公表された操作に従って入手できるプラスミドから構築できる。これに加えて、記載されたものと等価なプラスミドは当技術分野で知られており、通常の技術熟練者には明白となろう。ＤＮＡの「消化」はＤＮＡ中にある一定の配列のみに作用する制限酵素によるＤＮＡの触媒的切断を示す。本明細書で使用する種々の制限酵素は商業的に入手可能であり、それらの反応条件、共働因子、およびその他の必要条件は通常の熟練者には知られるようにして使用する。分析目的のためには、典型的にはプラスミドまたはＤＮＡ断片１μｇを酵素約２単位とともに緩衝液約２０μＬ中で使用する。プラスミド構築のためのＤＮＡ断片の分離の目的のためには、典型的にはＤＮＡ５から５０μｇを酵素２０から２５０単位で多量の容積中で消化する。特定の制限酵素のために適当な緩衝液および基質量は製造社が指定している。インキュベーション時間約１時間を通常３７℃で使用するが、しかし供給社の指示に従って変化することもある。消化後、反応物をポリアクリルアミドゲル上で直接電気泳動して所望の断片を分離する。切断断片のサイズ分割はＧｏｅｄｄｅｌ，Ｄ．など、Ｎｕｃｌｅｉｃ・Ａｃｉｄｓ・Ｒｅｓ．、８巻：４０５７頁（１９８０年）が記載した８％ポリアクリルアミドゲルを使用して実施する。「オリゴヌクレオチド」は化学合成したものでもよい単鎖ポリデオキシヌクレオチドまたは相補的ポリデオキシヌクレオチド鎖２個を示す。このような合成オリゴヌクレオチドは５’−ホスフェートを持たず、そのため、キナーゼの存在下にＡＴＰとともにホスフェートを添加しなければ、他のオリゴヌクレオチドとは連結しない。合成オリゴヌクレオチドは脱燐酸化されていない断片と連結することもある。「連結」は二重鎖核酸断片２個の間にホスホジエステル結合を形成する工程を示す（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．など、前出、１４６頁）。特段の指摘がなければほぼ等モル量の連結すべき両ＤＮＡ断片０．５μｇについてＴ４−ＤＮＡ連結酵素（「リガーゼ」）１０単位を既知緩衝液および条件を使用して連結を達成しうる。特段の記述がなければ、形質転換はＧｒａｈａｍ，Ｆ．およびＶａｎ・ｄｅｒ・Ｅｂの方法、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、５２巻：４５６〜４５７頁（１９７３年）に記載されたようにして実行した。実施例１細菌によるｈＩＭＰ−Ｈ１の発現および精製最初にｈＩＭＰ−Ｈ１、ＡＴＣＣ７５７５３をコードするＤＮＡ配列をプロセッシングされたｈＩＭＰ−Ｈ１蛋白質（マイナスシグナルペプチド配列）の５’ −末端配列およびｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子の３’へのベクター配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅した。ｈＩＭＰ−Ｈ１に対応する付加的なヌクレオチドを５’−および３’−両配列に追加した。この５’−オリゴヌクレオチドプライマーは配列：５’−ＡＣＴＴＧＣＴＡＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＧＣＧ−３’を持ちＢａｍＨ１制限酵素部位に続いてプロセッシングされた蛋白質コドンの推測上の末端アミノ酸から出発する１８ヌクレオチドのｈＩＭＰ−Ｈ１コード配列を含む。３’−配列：５’−ＡＣＴＴＧＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＴＣＡＣＴＴＣＴＣＡＴＣＡＴＣＣＣＧ−３’はＨｉｎｄＩＩＩ部位を含み、最終終結コドンを含むｈＩＭＰ−Ｈ１の１８ヌクレオチドが後続する。制限酵素部位は細菌発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ社、９２５９、Ｅｔｏｎ・Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）上の制限酵素部位に対応する。ｐＱＥ−９は抗生物質耐性（Ａｍｐ^r）、細菌の複製開始点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧ−調節可能なプロモーターオペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−Ｈｉｓ−タグおよび制限酵素部位をコードする。ｐＱＥ−９を次にＢａｍＨ１およびＨｉｎｄＩＩＩで消化した。増幅した配列をｐＱＥ−９内に連結し、ヒスチジンタグおよびＲＢＳをコードする配列と共に枠内に挿入した。次に連結混合物を使用してＱｉａｇｅｎ社から商標Ｍ１５／ｒｅｐ４の下に入手できる大腸菌株をＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．など、「分子クローニング：実験室便覧（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｍａｎｕａｌ）」、Ｃｏｌｄ・Ｓｐｒｉｎｇ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｐｒｅｓｓ社（１９８９年）に記載の操作によって形質転換した。Ｍ１５／ｒｅｐ４株はプラスミドｐＲＥＰ４を多重コピー含み、ｌａｃＩレプレッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎ^r）を与える。形質転換体をＬＢプレート上で生育する性能によって確認し、アンピシリン／カナマイシン耐性コロニーを選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析によって確認した。所望の構築物を含むクローンをＡｍｐ（１００μｇ／ｍＬ）およびＫａｎ（２５μｇ／ｍＬ）の両方を添加したＬＢ培地で液体培養して一夜（Ｏ／Ｎ）生育させた。Ｏ／Ｎ培養物を用いて大量培養基に１：１００から１：２５０までの比率で接種した。細胞を最適密度６００（Ｏ．Ｄ．⁶⁰⁰）が０．４と０．６との間になるまで生育させた。次にＩＰＴＧ（「イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド」）を最終濃度１ｍＭまで添加した。ＩＰＴＧはｌａｃＩレプレッサーを不活化してＰ／Ｏをクリアーして遺伝子発現の増加を誘導する。細胞をなお３時間から４時間生育した。次に遠心分離によって細胞を収集した。細胞ペレットをカオトロープ剤６Ｍ−塩酸グアニジン中で溶解した。澄明化の後、溶解したｈＩＭＰ−Ｈ１をこの溶液からニッケル−キレートカラム上で６−Ｈｉｓタグを含む蛋白質が強固に結合する条件（Ｈｏｃｈｕｌｉ，Ｅ．など、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｇｒａｐｈｙ、４１１巻：１７７〜１８４頁（１９８４年））でクロマトグラフィーを行って精製した。ｈＩＭＰ−Ｈ１（純度９５％）を６Ｍ−塩酸グアニジン、ｐＨ５．０でカラムから溶離し、再生の目的で３Ｍ−グアニジン塩酸、１００ｍＭ−燐酸ナトリウム、１０ｍＭ−グルタチオン（還元型）、および２ｍＭ−グルタチオン（酸化型）に調整した。この溶液中で１２時間インキュベーションした後、蛋白質を１０ｍＭ−燐酸ナトリウムに対して透析した。実施例２バキュロウイルス発現系を使用するｈＩＭＰ−Ｈ１のクローニングおよび発現全長ｈＩＭＰ−Ｈ１蛋白質をコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ７５７５３、を遺伝子の５’−および３’−配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅した。５’−プライマーは配列：５’−ＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧ−３’を持ち、ＢａｍＨ１制限酵素部位（第一の下線）とそれに続く真核生物細胞中での翻訳開始の効率的シグナルに類似した６ヌクレオチド（Ｋｏｚａｋ，Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９４７〜９５０頁（１９８７年））をｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子の最初の２１ヌクレオチド（翻訳開始コドン「ＡＴＧ」に第二の下線）の直後に含む。３’−プライマーは配列：５’−ＣＡＣＡＧＧＴＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＧＣＣＴＣＡＧＣＣＧＣＡＧ−３’を持ち、制限エンドヌクレアーゼＡｓｐ７１８のための切断部位およびｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子の３’−非翻訳配列に相補的な２０ヌクレオチドを含む。増幅した配列は１％アガロースゲルから商業的に入手できるキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ１０１社、ラホヤ、ＣＡ）を使用して分離した。次に断片をエンドヌクレアーゼＢａｍＨ１およびＡｓｐ７１８で消化し、次に再び１％アガロースゲル上で精製した。この断片をＦ２と命名する。ベクターｐＲＧ１（ｐＶＬ９４１ベクターの下記変換体）を使用してバキュロウイルス発現系（綜説についてはＳｕｍｍｅｒｓ，Ｍ．Ｄ．とＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｅ．、「バキュロウイルスベクターおよび昆虫細胞培養操作法の方法便覧（Ａ・ｍａｎｕａｌ・ｏｆ・ｍｅｔｈｏｄｓ・ｆｏｒ・ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ・ｖｅｃｔｏｒｓ・ａｎｄ・ｉｎｓｅｃｔ・ｃｅｌｌ・ｃｕｌｔｕｒｅ・ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）」、Ｔｅｘａｓ・Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ・Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ・Ｓｔａｔｉｏｎ・Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、１５５５号を参照（１９８７年））によってｈＩＭＰ−Ｈ１蛋白質を発現する。この発現ベクターはオートグラファ・カリフォルニカの核ポリヘドロージスウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーターおよびそれに続いて制限エンドヌクレアーゼＢａｍＨ１およびＡｓｐ７１８のための認識部位を含む。サルのウイルス（ＳＶ）４０のポリアデニル化部位を効率的なポリアデニル化のために使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、大腸菌からのβ−ガラクトシダーゼ遺伝子をポリヘドリンプロモーターと同じ方向に挿入し、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを挿入する。共遺伝子移入した野生型ウイルスＤＮＡの細胞媒介相同的再結合のためのウイルス配列によってポリヘドリン配列を両端に隣接させる。たとえばｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１のような他種のバキュロウイルスベクター（Ｌｕｃｋｏｗ，Ｖ．Ａ．とＳｕｍｍｅｒｓ，Ｍ．Ｄ．、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７０巻：３１〜３９頁）も多数がｐＲＧ１の代わりに使用できるはずである。このプラスミドを制限酵素ＢａｍＨ１およびＡｓｐ７１８で消化し、次に当技術分野で知られている操作によってウシ小腸ホスファターゼを使用して脱燐酸化した。次にＤＮＡを１％アガロースゲルから商業的に入手できるキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ１０１社、ラホヤ、ＣＡ）を使用して分離した。このベクターＤＮＡをＶ２と命名する。断片Ｆ２および脱燐酸化プラスミドＶ２をＴ４ＤＮＡリガーゼで連結した。大腸菌ＨＢ１０１細胞を次に形質転換し、ｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子を有するプラスミド（ｐＢａｃｈＩＭＰ−Ｈ１）を含む細菌を酵素ＢａｍＨ１およびＡｓｐ７１８を使用して確認した。クローニングした断片の配列はＤＮＡ配列決定によって確認した。５μｇのプラスミドｐＢａｃｈＩＭＰ−Ｈ１を商業的に入手できる線形化バキュロウイルス１．０μｇ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）バキュロウイルスＤＮＡ」、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、サンジェゴ、ＣＡ）とともにリポフェクション法（Ｆｅｌｇｎｅｒなど、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４巻：７４１３〜７４１７頁（１９８７年））を使用して共遺伝子移入した。ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）ウイルスＤＮＡ１μｇとプラスミドｐＢａｃｈＩＭＰ−Ｈ１とを血清不含Ｇｒａｃｅ培地５０μＬ（Ｌｉｆｅ・Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を入れたマイクロタイタープレートの無菌ウェル中で混合した。その後、リポフェクチン１０μＬおよびＧｒａｃｅ培地９０μＬを添加し、混合し、および室温で１５分間インキュベーションした。次に遺伝子移入混合物を血清不含Ｇｒａｃｅ培地１ｍＬとともに３５ｍｍ組織培養プレート中に接種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ・ＣＲＬ１７１１）に滴加した。このプレートを前後にゆすって新たに加えた溶液と混合した。プレートを次に２７℃で５時間インキュベーションした。５時間後、遺伝子移入溶液をプレートから去り、１０％ウシ胎児血清添加Ｇｒａｃｅ昆虫培地１ｍＬを添加した。プレートをインキュベーターに戻し、培養を４日間２７℃で継続した。４日後、上清液を集めて、ＳｕｍｍｅｒｓとＳｍｉｔｈ（前出）が記載したものと同様なプラーク検定を行った。修正部分として青色に染色されたプラークを容易に分離できる「Ｂｌｕｅ・Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ・Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を加えたアガロースゲルを使用した。（「プラーク検定」の詳細な記述はＬｉｆｅ・Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇが頒布している昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学のための利用者用案内書の９〜１０頁に見出すことができる）。ウイルスの系統的希釈物を細胞に添加して４日後、青色に染まったプラークをエッペンドルフピペットのチップで釣上げた。組換えウイルスを含む寒天を次にＧｒａｃｅ培地２００μＬを入れたエッペンドルフ管中に再懸濁した。簡単に遠心分離して寒天を除き、組換えバキュロウイルスを含む上清液を用いて３５ｍｍ皿に塗布したＳｆ９細胞に感染させた。４日後にこれらの培養皿の上清液を収集し、次に４℃で貯蔵した。Ｓｆ９細胞を１０％熱不活化ＦＢＳ添加Ｇｒａｃｅ培地中に生育させた。細胞を組換えバキュロウイルスＶ−ＤＲ３−Ｖ１に感染多重度（「ＭＯＩ」）２で感染させた。６時間後、培地を除き、メチオニンおよびシステイン不含のＳＦ９００ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ・Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）に交換した。４２時間後、³⁵Ｓ−メチオニン５μＣｉおよび³⁵Ｓ−システイン５μＣｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）を添加した。細胞をさらに１６時間インキュベーションした後、遠心分離して収集し、標識した蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーによって可視化した。実施例３ＣＯＳ細胞中での組換えｈＩＭＰ−Ｈ１の発現プラスミドｈＩＭＰ−Ｈ１の発現を１）ＳＶ４０複製開始点、２）アンピシリン耐性遺伝子、３）大腸菌複製開始点、４）ＣＭＶプロモーターに続いてポリリンカー領域、ＳＶ４０イントロンおよびポリアデニル化部位を含むベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）から誘導した。完全ｈＩＭＰ−Ｈ１前駆体をコードするＤＮＡ断片および枠内でその３’−末端に融合させたＨＡタグをベクターのポリリンカー領域にクローニングしたので、組換え蛋白質の発現はＣＭＶプロモーターの支配下にある。ＨＡタグは既報（Ｉ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｈ．Ｎｉｍａｎ、Ｒ．Ｈｅｉｇｈｔｅｎ、Ａ．Ｃｈｅｒｅｎｓｏｎ、Ｍ．ＣｏｎｎｏｌｌｙおよびＲ．Ｌｅｒｎｅｒ、Ｃｅｌｌ、３７巻：７６７頁（１９８４年））のようにインフルエンザ赤血球凝集素から誘導したエピトープに対応する。標的蛋白質へのＨＡタグの注入でＨＡエピトープを認識する抗体で組換え蛋白質が容易に検出できる。プラスミドの構築方針は次の通り：ｈＩＭＰ−Ｈ１、ＡＴＣＣ７５７５３をコードするＤＮＡ配列はプライマー２個を使用してクローニングした原ＥＳＴにＰＣＲによって構築した。５’−プライマー：５’−ＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧ−３’はＢａｍＨ１制限酵素部位（第一の下線）および開始コドン（第二の下線）から始まるｈＩＭＰ−Ｈ１の１８ヌクレオチドを含む。３’−配列：ＣＧＣＴＣＴＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＧＴＡＴＧＧＧＴＡＣＴＴＣＴＣＡＴＣＡＴＣＣＣＧＣＣＣはＸｂａＩ制限部位、翻訳終結コドン、ＨＡタグおよびｈＩＭＰ−Ｈ１コード配列の最後の１８ヌクレオチド（終結コドン不含）に対応する相補的配列を含む。それ故、このＰＣＲ生成物はｈＩＭＰ−Ｈ１コード配列に続いて枠内に融合するＨＡタグ、ＨＡタグに隣接する翻訳終結コドン、およびＢａｍＨ１およびＸｂａＩ部位を含む。ＰＣＲで増幅したＤＮＡ断片およびベクターｐｃＤＮＡＩ／ＡｍｐをＢａｍＨ１およびＸｂａＩ制限酵素で消化して連結した。連結混合物で大腸菌ＳＵＲＥ株（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ・Ｃｌｏｎｉｎｇ・Ｓｙｓｔｅｍｓ社、１１０９９・Ｎｏｒｔｈ・Ｔｏｒｒｅｙ・Ｐｉｎｅｓ・Ｒｏａｄ、ラホヤ、ＣＡ、９２０３７から入手できる）を形質転換した。形質転換した培養物をアンピシリン培地プレート上に塗布し、耐性コロニーを選択した。プラスミドＤＮＡを形質転換体から分離し、正しい断片の存在を制限分析によって検査した。組換えｈＩＭＰ−Ｈ１の発現のためにＤＥＡＥ−ＤＥＸＴＲＡＮ法（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｅ．Ｆｒｉｔｓｃｈ、Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ、「分子クローニング：実験室便覧（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｍａｎｕａｌ）」、Ｃｏｌｄ・Ｓｐｒｉｎｇ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｐｒｅｓｓ社（１９８９年））によってＣＯＳ細胞に発現ベクターを遺伝子移入した。ｈＩＭＰ−Ｈ１・ＨＡ蛋白質の発現は放射能標識および免疫沈降法（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ、Ｄ．Ｌａｎｅ、「抗体：実験室便覧（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｍａｎｕａｌ）」、Ｃｏｌｄ・Ｓｐｒｉｎｇ・Ｈａｒｂｏｒ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ・Ｐｒｅｓｓ社（１９８８年））によって検出した。遺伝子移入の２日後に細胞を³⁵Ｓ−システインで８時間標識した。次に培養培地を集め、細胞を界面活性剤（ＲＩＰＡ緩衝液：１５０ｍＭ−ＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、０．５％ＤＯＣ、５０ｍＭ−トリス、ｐＨ７．５）（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．など、前出、３７巻：７６７頁、１９８４年）で溶解した。菌溶解物および培養培地をＨＡ特異的モノクローナル抗体で沈降した。沈殿した蛋白質を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析した。実施例４ヒトの組織中でのｈＩＭＰ−Ｈ１の発現パターンノーザンブロット分析を実施してヒトの組織中におけるｈＩＭＰ−Ｈ１の発現レベルを検査した。細胞の全ＲＮＡ試料をＲＮＡｚｏｌ（商標）システム（Ｂｉｏｔｅｃｘ・Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、６０２３・Ｓｏｕｔｈ・Ｌｏｏｐ・Ｅａｓｔ、ヒューストン、ＴＸ、７７０３３）で分離した。特定のヒトの組織から分離した全ＲＮＡ約１０μｇを１％アガロースゲル上で分離し、ナイロンフィルター上に吸収転移した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｃｏｌｄ・Ｓｐｒｉｎｇ・Ｈａｒｂｏｒ・Ｐｒｅｓｓ社（１９８９年））。標識反応はＳｔｒａｔａｇｅｎｅ・Ｐｒｉｍｅ−Ｉｔキットに従ってＤＮＡ断片５０ｎｇで行った。標識されたＤＮＡをＳｅｌｅｃｔ−Ｇ−５０カラム（５Ｐｒｉｍｅ−３Ｐｒｉｍｅ社、５６０３、Ａｒａｐａｈｏｅ・Ｒｏａｄ、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ、８０３０３）で精製した。次にフィルターを１，０００，０００ｃｐｍ／ｍＬの放射能標識全長ｈＩＭＰ−Ｈ１遺伝子と０．５Ｍ−ＮａＰＯ₄、ｐＨ７．４および７％ＳＤＳ中、一夜６５℃でハイブリッド形成させた。室温で２回洗浄し、２回０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳと６０℃で洗浄した後、−７０ ℃で一夜フィルターを補力焦点板で露出した。ｈＩＭＰ−Ｈ１のメッセージＲＮＡは数種の組織中で豊富であった（図４）。前記教示に照らして本発明には多数の修飾および変化が可能であり、それ故、添付する請求項の範囲内にある。本発明では特定的に記載したものと異なる実施をすることもある。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Human inositol monophosphatase H1 This invention relates to newly identified polynucleotides, these polynucleotides Encoding polypeptides, uses of these polynucleotides and polypeptides And methods for producing these polynucleotides and polypeptides. In particular, the polypeptide of the present invention is human inositol monophosphatase H1. Therefore, hereinafter, it is sometimes referred to as “hIMP-H1”. The present invention relates to these polypeptides. It also relates to a method for inhibiting the action of a tide. Cells respond to extracellular stimuli through a complex network of responses. Wild boar Cholesterol metabolism plays a key role in intracellular signaling. Agonist Stimulates cells induced by hydrolysis of phosphoinositide by phospholipase C. Signal transduction molecules, diacylglycerol and inositol Release the sulfate. Diacylglycerol stimulates protein kinase C (Nishizuka, Y., Science, 233: 3 05-312 (1986)), several inositol monophosphates, especially Of note is inositol-1,4,5-triphosphate; Causes calcium release between the cells (Berridge, MJ and Irvine, R. F. Nature (London), 312: 315-321 (19 1984)). In the cytosol due to the action of inositol phosphatase and kinase Excess inositol phosphate acts as a signaling or regulatory molecule (Majerus, PW et al., J. Biol. Chem., 2 63: 3051-3054 (1988)). Inositol monophosphatase (IMP) is phosphatidylinositol Catalyzes the hydrolysis of inositol monophosphate in signaling pathways It plays an important role by doing. IMPs are used to treat manic depression It is believed to be a molecular aspect of action in um therapy. Lithium is a boar Inhibits toll monophosphatase and inhibits inositol-1-phosphate Prevents inositol accumulation. Lithium carbonate is an effective antimanic compound in 1949. John Ca Proven by de, this compound was approved for widespread use in 1969. However, lithium therapy for patients with manic depression is associated with certain adverse side effects. this Tremors, weight gain, diarrhea, rough skin, transient leukocytosis, hypothyroidism, And polyuria-dysphagia. Other clinical disorders associated with long-term lithium therapy Has structural damage to the kidneys (including tubular atrophy, glomerulosclerosis and interstitial fibrosis) is there. These side effects are directly attributable to the toxicity of lithium. Phosphoinositide (PI) cycle is a putative target for lithium action Therefore, when treated systemically with lithium, inositol-l-fo A significant increase in sulfate and a corresponding decrease in free inositol can occur. Proven. It inhibits inositol-1-phosphate phosphatase Lithium activates the activity of the PI cycle in overstimulated cells. It could be weakened, which led to a hypothesis explaining its effectiveness in controlling mania. The supply of inositol for the PI cycle can be from glucose or from the diet. Derived from newly synthesized hydrolysis of inositol phosphate Can be. The former process involves the manipulation of inositol-1-phosphate phosphatase. And is therefore inhibited by lithium. In peripheral tissues, Inositol can bypass lithium blockade, but inositol does not Can not be done in CNS because it does not pass through. Therefore, inositol-1-ho in the brain Increased sphate is accompanied by an equivalent decrease in free inositol. Manganese supports catalysis by inositol monophosphatase. On the other hand, divalent ions, calcium and manganese, are competitive inhibitors. (Hallcher, LM and Sherman, WR, J. Biol. Chem. 255: 10896-901 (1980)). Lithium is Non-competitively inhibits nositol monophosphatase. IMP is derived from substrates INS (1) P, INS (3) P, and INS (4) P. Release nositol. The IMP is not limited to this, an, J. et al. Biol. Chem. 224: 10896-10901 (19 80), Takimoto, J. et al. Biol. Chem. (Tokyo), 98 Volume: 363-370 (1985) and Gee, Bio. Chem. J. , 249: 883-889 (1988). A non-inositol-containing substrate can be hydrolyzed. First human IMP cDNA is disclosed in McAllister et al. (WO93 / 25692 (1933)) And disclosed. The polypeptide of the present invention is a human inositol monophosphatase polypeptide Was presumed to be confirmed. This confirmation was obtained as a result of amino acid sequence homology. One aspect of the present invention relates to a novel putative mature polypeptide that is hIMP-H1. Also provided are fragments, analogs and derivatives thereof. The polypeptide of the present invention is human Of origin. In another aspect of the invention, polynucleotides encoding these polypeptides (DNA or RNA). Yet another aspect of the invention is the production of these polypeptides by recombinant techniques. Provide a way to Yet another aspect of the invention relates to these polypeptides or these polypeptides Can inhibit, for example, this class of enzymes. For finding and designing compounds that can be cut and for treating psychiatric disorders Methods for use for therapeutic purposes are provided. Yet another aspect of the invention provides antibodies against these polypeptides. Still other aspects of the invention include, for example, mental illness and depression (bipolar and non-bipolar). Gender) to inhibit the action of these polypeptides in the treatment of An antagonist to these polypeptides is provided. These and other aspects of the present invention are recognized in the art by the disclosure herein. Should be evident to experts in The following drawings illustrate embodiments of the present invention and, as the following claims depict. It is not intended to limit the scope of the invention. FIG. 1 shows the cDNA sequence and the deduced corresponding amino acid sequence of mature hIMP-H1 Is disclosed. Amino acid DPIDGT is essential in the active site of IMP enzyme This has been proven and is shown in bold and underlined. FIG. 2 shows the complete nucleotide sequence of hIMP-H1 cDNA. Click cDNA Synthetic BamH1 (position 1) and XhoI linker used for cloning -(Position 1308) is underlined. FIG. 3 is a comparison of amino acids between hIMP-H1 and hIMP. With a square frame Boxed regions indicate identical amino acids. FIG. 4 is a Northern blot analysis of hIMP-H1. Sequencing inaccuracies are a common occurrence when attempting to determine polynucleotide sequences. It is a difficult task. Thus, while the sequence in FIG. 1 is based on several sequencing experiments, The sequencing accuracy is considered to be at least 97%. One aspect of the present invention is a mature polypeptide having the deduced amino acid sequence shown in FIG. Or a black deposit deposited on April 25, 1994 as ATCC Deposit No. 75753. Nucleic acid encoding the mature polypeptide encoded by the cDNA of the sequence Renucleotide). Polynucleotides encoding the polypeptides of the present invention are human brain, lymphocytes, And from the placenta. The polynucleotide of the present invention is derived from human brain tissue. It was found in a derived cDNA library. This is structurally inositol mono Associated with the phosphatase family. It encodes a protein of about 265 amino acid residues. Includes reading frame to read. This protein is human inositol monophosphatase Reached 55% identity and 65% similarity over a length of 265 amino acids Show the highest degree of homology. The polypeptide of the present invention having the amino acid sequence DPIDGT This region is also essential in the active site of the IMP enzyme This is important because it has been proven. The polynucleotide of the present invention may be in the form of RNA or DNA, DNA includes cDNA, genomic DNA, and synthetic DNA. This DNA May be double-stranded or single-stranded, and if single-stranded may be the coding strand. It may be a non-coding strand (antisense strand). Encodes a mature polypeptide The coding sequence was identical to the coding sequence shown in FIG. 1 or that of the deposited clone. And as a result of the redundancy or degeneracy of the genetic code, It differs from the DNA of FIG. 1 and the deposited cDNA which encode the same mature polypeptide. Code sequence. 1. The polynucleotide encoding the mature polypeptide shown in FIG. 1 or the deposited c The polynucleotide encoding the mature polypeptide encoded by the DNA is: Only the coding sequence of the polypeptide: the coding sequence of the mature polypeptide and, for example, Additional coding sequences such as leader or secretory or proprotein sequences; maturation The coding sequence of the polypeptide (and, if necessary, additional coding sequences) 5'- and / or 3 'of the coding sequence of the intron or mature polypeptide, for example. A non-coding sequence, such as a non-coding sequence. Thus, the term "polynucleotide encoding a polypeptide" refers to the coding sequence. Polynucleotides containing additional and / or non-coding sequences. Polynucleotides. The invention further relates to a polypeptide having the deduced amino acid sequence shown in FIG. Fragments, analogs and polypeptides encoded by the cDNA of the deposited clone The present invention relates to a variant of the polynucleotide, which encodes a derivative. This polynucleo The variant of tide is a naturally occurring allelic variant of the polynucleotide or It may be a non-naturally occurring variant of the polynucleotide. Thus, the present invention provides the same mature polypeptide or deposited protein as shown in FIG. Polynucleotides encoding the same mature polypeptide encoded by the loan cDNA And variants of these polynucleotides, these variants are shown in FIG. Or a polypeptide encoded by the cDNA of the deposited clone And those that encode fragments, derivatives or analogs of the drug. Such a nucleus Otide mutants include deletion mutants, substitution mutants and addition mutants or insertion mutants. Include. As noted above, the polynucleotide may comprise the coding sequence shown in FIG. Having a coding sequence that is a naturally occurring allelic variant of the coding sequence of a clone isolated There is. As is known in the art, allelic variants are polynucleotide sequences. Variants of a nucleic acid that do not substantially alter the function of the encoded polypeptide. Otides may have one or more substitutions, deletions or additions It is. The polynucleotide of the present invention may also have a marker sequence enabling the purification of the present invention. The fused coding sequence can be in frame. This marker sequence is useful in bacterial hosts. Mature polypeptide fused to this marker provided by pQE-9 vector Can be a hexahistidine tag that provides for purification of the For example, when COS-7 cells are used, for example, the marker sequence may be a hemagglutinin (HA) tags may be used. Is this HA tag an influenza hemagglutinin protein? (Wilson, I., et al., Cell, vol. 37). : 767 (1984)). The present invention further provides for at least 50%, preferably 70% identity between the two sequences. If present, relates to a polynucleotide that hybridizes to said sequence. The present invention Hybridizes in particular to said polynucleotide under stringent conditions Related to polynucleotides. As used herein, the term "stringent article" "Is" when there is at least 95%, preferably 97%, identity between the sequences. Means that only hybridization will occur. In a preferred embodiment The polynucleotide that hybridizes to the polynucleotide is the cDNA of FIG. Or substantially the same biological sequence as the mature polypeptide encoded by the deposited cDNA Encodes a polypeptide that retains function or activity. The deposit set forth herein is for pigs for international recognition of deposits of microorganisms for patent purposes. It is to be maintained under the terms of the Plague Treaty. These deposits are This deposit is provided only for the convenience of the skilled person in the field of art and this deposit It is not an admission that it meets the requirements of 35 USC 112. Included in deposit Sequence of the polynucleotide to be encoded and the amino acid of the polypeptide The acid sequence is hereby incorporated by reference for the description of the sequence herein. If there is a dispute, it will be adjusted. Manufacture, use or sell the deposit A license is required to sell, and that license is not granted here. The present invention further relates to the deduced amino acid sequence shown in FIG. HIMP-H1 polypeptide having an encoding amino acid sequence and its polypeptide It relates to fragments, analogs and derivatives of the polypeptides. The terms "fragment," "derivative," and "analog" refer to the polypeptide or When referring to a deposited cDNA, it is essentially the same as the polypeptide. A polypeptide that retains a biological function or activity is meant. So the analog is Activated by cleavage of the protein portion to produce active mature polypeptide Protein proteins. The polypeptide of the present invention may be a recombinant polypeptide, a natural polypeptide or a synthetic polypeptide. It may be a polypeptide, preferably a recombinant polypeptide. The polypeptide shown in FIG. 1 or the polypeptide encoded by the deposited cDNA Fragments, derivatives or analogs are (i) conserved in one or more of the amino acid residues Or a non-conservative amino acid residue (preferably a conservative amino acid residue) The replacement amino acid residue is that encoded by the genetic code. Or (ii) one or more amino acid residues have a substituent. Or (iii) the mature polypeptide is other compounds, such as polypep. Compounds that increase the half-life of the tide, such as polyethylene glycol Or (iv) to the mature polypeptide, eg, a leader or Or the sequence or promoter employed for purification of the secreted sequence or the mature polypeptide. Additional amino acids, such as a lutein sequence, may be fused. these Fragments, derivatives and analogs are within the skill of the art from the teachings herein. Is considered to be The polypeptides and polynucleotides of the present invention are preferably in separated form. Supplied and preferably purified to homogeneity. The term “isolated” refers to the environment in which the material is derived (eg, of natural origin). Means that it has moved out of its natural environment. For example, living movement Naturally occurring polynucleotides or polypeptides present in But not the same polynucleated from some or all of the coexisting substances in the natural system Reotide or polypeptide is separated. These polynucleotides are And / or these polynucleotides or Can be part of a constituent, the vector or constituent of which is naturally occurring. It is still separated in that it is not part of the environment. The present invention also relates to a vector comprising the polynucleotide of the present invention, a vector of the present invention. Genetically engineered host cells and recombinant polypeptides of the invention Concerning the production of pide. The host cell can be, for example, a cloning vector or an expression vector. Genetically engineered (transduction or transformation or gene Transfer). This vector can be used, for example, for plasmids, viral particles, phages, It can be other types. Genetically engineered host cells activate the promoter, Modified as appropriate for selection of transformants or amplification of hIMP-H1 gene It can be cultured in a normal nutrient medium. Culture conditions, such as temperature, pH, etc. Such are those previously used with the host cell selected for expression. And will be apparent to one of ordinary skill in the art. For producing a polypeptide of the present invention by recombinant techniques Sometimes adopted. Thus, for example, the polynucleotide Any one of a variety of expression vectors may be included for expression. this These vectors contain chromosomal, non-chromosomal and synthetic DNA sequences, such as SV40. Derivative, bacterial plasmid, phage DNA, baculovirus, yeast plasmid , Plasmid and phage DNA, vaccinia, adenovirus, fowlpox virus and Derived from the combination of virus such as Vector. However, any other vector that replicates in the host It can be used if possible and viable. The appropriate DNA sequence can be inserted into the vector by various procedures. Typically, The DNA sequence may be placed at the appropriate restriction endonuclease site at a site known in the art. Insert by manners. Such procedures and others are deemed to be within the skill of the art. Is done. The DNA sequence in the expression vector is a suitable expression control sequence that directs mRNA synthesis. (Promoter). As a representative example of the promoter Are LTR or SV40 promoter, E. coli lac or trp, phage Lambda P_LPromoters and prokaryotic or eukaryotic cells or their Other promoters known to control the expression of genes in Can be picked. Expression vectors also provide a ribosome binding site for translation initiation and transcription. Includes transcription termination site. Vectors may also contain appropriate sequences for amplified expression. In addition, expression vectors can be used, for example, for dihydrogenation in eukaryotic cell culture. Folate reductase or neomycin resistance or, for example, tetrasa in E. coli Selection of preferably transformed host cells, such as cyclin or ampicillin resistance Optionally, one or more marker genes selectable to provide a phenotypic trait Including the above. An appropriate DNA sequence as described above and an appropriate promoter or control sequence A suitable host for expressing its protein using a vector containing Can be converted. Representative examples of suitable hosts include, for example, E. coli, Streptomyces, Bacterial cells like La typhimurium, fungal cells like yeast, Drosophila and And CHO, COS or Bowes melanomas such as Sf9 and Sf9. Such as animal cells and plant cells. The selection of a suitable host is taught herein. To within the skill of the art. More specifically, the present invention provides for the use of one or more sequences as broadly described above. And recombinant constructs comprising These constructs can be used in the forward or reverse Or a vector such as a viral vector into which the above sequence has been inserted. In a preferred aspect of this embodiment, the construct is further operable, for example, in an array. It includes control sequences including associated promoters and the like. Many suitable vectors Promoters and promoters are known to those of skill in the art and are commercially available. You. The following vectors are presented for illustrative purposes: bacteria: pQE70, pQE60, pQE-9 (Qiagen), pbs, pD10, phasescript, psiX174, pbluescriptSK, pbsks, pNH8A, pN H16A, pNH18A, pNH46A (Stratagene), ptrc 99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 (P Pharmacia). For eukaryotes: pWLNEO, pSV2CAT, pOG4 4, pXT1, pSG (Stratagene), pSVK3, pBPV, p MSG, pSVL (Pharmacia). However, it can replicate in the host Other plasmids or vectors may be used as long as they are viable. The promoter region is CAT (chloramphenicol transferase) vector Any desired gene using a vector with a You can also choose from. Two suitable vectors are PKK232-8 and PCM7. It is. Particularly designated bacterial promoters include lacl, lacZ, T3, T7, gpt, lambda P_R, P_LAnd trp. Eukaryotic promoter is CM V immediate early, HSV thymidine kinase, early and late SV40, retrovirus LTR from mouse and metallothionein-I from mouse. Suitable vector Selection of the promoter and promoter is within the level of ordinary skill in the art. In yet another aspect, the invention relates to a host cell comprising the above construct. Host details Vesicles are higher eukaryotic cells such as mammalian cells, lower eukaryotic cells such as yeast cells Alternatively, the host cell can be a prokaryotic cell, such as a bacterial cell. Host The introduction of the construct into the cells was carried out by calcium phosphate gene transfer, DEAE-dextran medium. Mediated gene transfer or electroporation (Davis, L, Dibn). er, M .; Battie, I .; "Basic methods in molecular biology (Basi c-Methods-in-Molecular Biology) "(19 1986)). The construct in the host cell can be used in a conventional manner and the gene encoded by the recombinant sequence Produce the product. Alternatively, the polypeptide of the present invention can be used in a conventional peptide synthesizer. Therefore, it can be produced synthetically. The mature protein has the appropriate promoter in mammalian cells, yeast, bacteria or other cells. Can be expressed under the control of a protein. Deriving a cell-free translation system from the DNA construct of the invention Can be employed to produce these proteins using purified RNA. Prokaryotic host Suitable cloning and expression vectors for use in eukaryotic hosts are Sambrook et al., “Molecular Cloning: Laboratory Handbook (Molecular) ・ Cloning: A ・ Laboratory ・ Manual) ”, 2nd edition, C Old Spring-Harbor, N.M. Y. (1989) And is quoted here for reference. Transcription of a DNA encoding a polypeptide of the present invention by higher eukaryotes may be a vector. Can be increased by inserting an enhancer sequence into the gene. Enhancer is DN A cis-acting element, usually about 10 to 300 bp, Acts on the motor to increase its transcription. These examples include the late Some bp 100 to 270 SV40 enhancers, early on cytomegalovirus Promoter enhancer, polyoma enhancer on the late side of the replication origin And adenovirus enhancers. Generally, an origin of replication and a recombinant vector, such as E. coli and Transformation of host cells such as TRP1 gene, a yeast ampicillin resistance gene Selectable markers and downstream structural sequences derived from highly expressed genes And a promoter that directs the transcription of Such promoters, among others, Phosphoglycerate kinase (PGK), α-factor, acid phosphatase or It can be derived from operons that encode glycolytic enzymes such as heat shock proteins. Heterologous structural sequences include translation initiation and termination sequences, and preferably those of the translated protein. A leader sequence capable of directing secretion to the cell margin or extracellular medium Assemble them together in the appropriate phase. If desired, this heterologous sequence can be N-terminal identification peptides that confer desired properties, such as stabilization or purification simplification of the replacement product It can encode a fusion protein containing a tide. Useful expression vectors for use in bacteria include structural DNA encoding the desired protein. The sequence is placed in an open reading frame operable with a functional promoter and appropriate translation initiation and And insert with termination signal. This vector contains Phenotypic selection to ensure persistence and, if desired, to provide amplification in the host. Include one or more selectable markers and an origin of replication. For transformation Suitable prokaryotic hosts for E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium and others And Pseudomonas, Streptomyces, and Staphylococcus , But other choices may be taken as a matter of choice. As a representative, but non-limiting example, an expression vector useful for using bacteria Is the well-known cloning vector pBR322 (ATCC37017) Selection markers derived from commercially available plasmids containing various genetic elements Kerr and bacterial origins of replication can be included. These commercial vectors include: For example, pKK223-3 (Pharmacia / Fine / Chemicals) , Uppsala, Sweden) and GEM1 (Promega Biotec) Madison, WI, USA). These pBR322 "backbones" The part is linked to a suitable promoter and the structural sequence to be expressed. Transform an appropriate host strain, grow the host strain to an appropriate cell concentration, and then And the appropriate promoter (eg, temperature change or chemical induction) , And the cells are further cultured for a certain period of time. Typically, the cells are collected by centrifugation and by physical or chemical methods Disintegrate and retain the resulting crude extract for subsequent purification. Microbial cells used for protein expression include freeze-thaw cycling, sonication, mechanical Disintegration, or disintegration by any of the usual methods including the use of cell lysing agents, Such methods are well-known to those skilled in the art. A variety of mammalian cell culture systems can be employed to express the recombinant protein. mammalian Examples of expression systems include Gluzman, Cell, 23: 175 (1981). The described COS-7 cell line of monkey kidney fibroblasts and, for example, C127, Express compatible vectors such as 3T3, CHO, HeLa and BHK cell lines And other cell lines that can be used. Initiation of replication in mammalian expression vectors Points, appropriate promoters and enhancers, and also required ribosome binding Site, polyadenylation site, splicing donor and splicing acceptor Sites, transcription termination sequences, and 5'-flanking non-transcribed sequences. SV40 Supra Non-transcribed inheritance requiring DNA sequences and polyadenylation sites derived from ising May be used to provide child elements. hIMP-H1 polypeptide can be obtained from recombinant cell culture by adding ammonium sulfate or Ethanol precipitation, acidic extraction, anion or cation exchange chromatography, Phosphocellulose chromatography, hydrophobic interaction chromatography, parent Compatibility chromatography, hydroxylapatite chromatography, and It can be recovered and purified by methods including lectin chromatography. Purification It is preferable to have a low concentration of calcium ions (about 0.15 to 5 mM) during (Price et al., J. Biol. Chem., 244: 917 (1 969)). A protein refolding step is required to complete the mature protein configuration Then you can use it. Finally, high performance liquid chromatography (HPLC) Can be employed for purification steps. The polypeptide of the present invention may be a purified natural product, or a product of a chemical synthesis operation, Or a prokaryotic or eukaryotic host (eg, bacteria, yeast, higher plants, (By insect and mammalian cells). You. Depending on the host employed in the recombinant production operation, the polypeptide of the present invention may be glycosylated. It may be silylated or not glycosylated. The polypeptide of the present invention May include the starting methionine amino acid residue. To design different compounds for treating manic depression other than lithium with hIMP-H1 It may be adopted. hIMP-H1 therefore inhibits hIMP-H1 It is useful for searching and designing compounds that can be used. Another use of hIMP-H1 is for mapping genetic diseases. For example, some types of The exact locus responsible for hereditary manic depression is not yet known and is well studied. The subject (York et al., PNAS USA) 90: 5833-5837 (1993)). One of the targets of this study is the IMP gene. hIMP-H One cDNA can be used to isolate the chromosomal locus of the complete gene. This chromosome region Second, any mutations in a family affected by manic depression or possibly other mental illness Research and determine if they are localized in this area. Polynucleotides of the invention identify distinct molecules with similar biological activities It is also useful for. For example, a part of the coding region of the hIMP-H1 gene It can be employed as a nucleotide probe. Sequence complementary to the sequence of the gene of the present invention Labeled oligonucleotides with any of the members of the library and this probe To determine whether humans hybridize to human cDNA, genomic DNA or Used to search libraries of mRNA. The present invention identifies compounds (antagonists) that block hIMP-H1 from its function It relates to the test method. To design a separate therapeutic compound that inhibits hIMP-H1 Purification, cloning and X-ray of hIMP-H1 to provide a structural basis for Conduct crystallographic research. Structural data is created from the cloned enzyme, and X-ray Obtaining crystallographic and structural data, searching for antagonists to hIMP-H1, Used to measure. One example of this search is L- [U-¹⁴C] Ins (1) P [-] From DL-Ins (1) P contained as a label¹⁴C] -Inositol release Measurement (Gumber et al., Plant Physiol., Vol. 76: 40-44) Page (1989)). One unit of enzyme activity is 1μ substrate per minute at 37 ° C. Shows the activity of hydrolyzing moles. The protein concentration was determined by the method of Bradford (Braford). dford, M .; Anal. Biochem. 72: 248-252 ( 1976)). The assay may also be used to block other enzymes critical for the PI cycle That are involved in, for example, the phosphatidylinositol signaling pathway. Phosphoinositol kinase, ie, inositol-1,3,3, 4-position from 4-triphosphate and inositol-1,4-diphosphate Catalyzes the hydrolysis of phosphate. Potential antagonists include hIMP-H1 which binds to hIMP-H1 and cannot bind to substrate Include antibodies to hIMP-H1 polypeptides that make the polypeptide. Potential antagonists are similar to hIMP-H1 (have no hIMP-H1 function). Closely related protein), which normally recognizes a subtype receptor to which hIMP-H1 binds And also includes binding proteins. However, there is a second messenger response do not do. In this way, hIMP-H1 enzyme function is hindered and hIMP-H1 Achieve the beneficial therapeutic effect of the inhibition. Some examples of these proteins include, but are not limited to: It includes, but is not limited to, oligonucleotides and small peptide molecules. Antisense technology based on binding of polynucleotide to DNA or RNA Helical formation or antisense DNA or antisense RNA May be used to control gene expression by both methods. For example 5'-coding portion of this polynucleotide sequence which encodes a light mature polypeptide Of antisense RNA from about 10 base pairs to about 40 base pairs in length. Design gonucleotides. Genes involved in transcription of DNA oligonucleotides The region is designed to be complementary to the region (eg, Triple Helix-Lee, Nucl. Acids Re s. 6, 3073 (1979); Cooney et al., Science, 241: 456 (1988); Dervan et al., Science, 25. 1: 1360 (1991)), where transcription and production of hIMP-H1 are described. to disturb. Antisense RNA oligonucleotides hybridize with mRNA in vivo. Lid formation to block translation of mRNA molecules into hIMP-H1 (antisense Su-Okano, J .; Neurochem, 56: 560 (1991); "Oligodeoxynucleotides (Ol as antisense inhibitors of gene expression) igodoxynucleotide ・ as ・ Antisense ・ Inhib itors of Gene / Expression) ”, CRC / Press Co., Boca Lanton, FL (1988)). The oligonucleotide Expresses the production of hIMP-H1 by expressing antisense RNA or DNA in vivo. It can be delivered to cells so that it can be inhibited. Other antagonist candidates bind to and occupy the catalytic site of the hIMP-H1 enzyme. A small molecule that prevents normal biological activity by keeping the substrate away from the catalytic site. Examples of small molecules include, but are not limited to, low molecular weight peptides or small molecules. Includes small amounts of peptide-like molecules. These antagonists can be used to treat non-manic psychosis and depression (bipolar or non-bipolar). Can be used to treat. The antagonist is, for example, a pharmaceutically acceptable carrier described below. Both may be employed in the composition. Compounds that inhibit the action of hIMP-H1 in a composition together with a suitable pharmaceutical carrier It is sometimes adopted by. These compositions comprise a therapeutically effective amount of the peptide and a pharmaceutically Includes an acceptable carrier or additive. This carrier is not limited to this But saline, buffered saline, dextrose, water, glycerin, ethanol and These combinations are included. The formulation should suit the mode of administration. These pharmaceutical compositions include, for example, oral, topical, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, It may be administered in a convenient manner by a route such as intranasal or intradermal. These pharmaceutical compositions Administer an effective amount for the treatment and / or prevention of a particular indication. In general, The dose is at least about 10 μg / kg body weight, most often daily. Would not be more than about 8 mg / kg body weight per dose. Often this day The dose is about 10 μg / kg to about 1 mg / kg, taking into account the administration route, symptoms, etc. Up to weight. These compounds are polypeptides that have been confirmed to inhibit hIMP-H1 Regulates the expression of that polypeptide in vivo, often called "gene therapy" Thus, it can be employed according to the present invention. Thus, for example, cells from a patient can be transformed in vitro with a polypeptide encoding a polypeptide. Genetic treatment with leotide (DNA or RNA) and then treating the treated cells The polypeptide is supplied to the patient to be treated. Such methods are known in the art. Well known. For example, a protein containing RNA encoding the polypeptide of the present invention. By using torovirus particles, procedures known in the art can be used. To treat the cells. Similarly, cells can be transferred in vivo using, for example, procedures known in the art. Upon processing, the polypeptide may be expressed in vivo. Known in the art Thus, a retroviral particle containing RNA encoding the polypeptide of the present invention is produced. The production cells for production are administered to the patient, and the cells are genetically engineered in vivo. Lever polypeptide is expressed in vivo. For administering the polypeptide of the present invention These and other methods are well known to those skilled in the art from the teachings of the present invention. Will be obvious. For example, expression mediators for genetically engineering cells are To engineer cells in vivo after binding to a suitable delivery vehicle It can be something other than a retrovirus, such as an adenovirus that can be used for. The sequences of the present invention are also valuable for chromosome identification. This sequence is Specific locations on the chromosome can be specifically targeted and hybridized there. further Moreover, there is a need to identify specific sites on the chromosome. At a position on the chromosome Chromosome marker reagents based on actual sequence data (repetitive polymorphisms) Only a few are available. Mapping DNA to chromosomes according to the invention Is an important first step in correlating these sequences with genes associated with the disease. Briefly, a PCR primer (preferably 15-25 bp) is By preparation, the sequence can be mapped to a chromosome. cDNA Computer Use analysis to quickly amplify because it does not span more than one exon in genomic DNA Select primers that do not complicate the process. These primers are then Used for PCR search of somatic cell hybrids containing each chromosome of the target. This primer To give a fragment amplified only by the hybrid containing the human gene corresponding to Becomes PCR mapping of somatic cell hybrids maps specific DNA to specific chromosomes It is a quick operation for. Use the invention with the same oligonucleotide primers By using a series of fragments from a particular chromosome or in a similar fashion Sublocalization can be achieved using large genomic clone collections. Chromosome in the same way Other mapping strategies that can be used to map to Pre-search by formation, labeled flow classification chromosome, and chromosome-specific cDNA live Includes preselection by hybridization to build a rally. Fluorescence in situ hybridization by cDNA clones to metaphase chromosome expansion (FISH) can be used to provide a precise chromosomal location in one step. This technique The technique can be used with cDNAs of 500 or 600 bases in length, however Clones over 2000 bp in size have higher binding to unique chromosomal locations It has the potential and has enough signal intensity for simple detection. FISH Use of the original clone from which the EST was derived is required, the longer the better. For example, 200 0 bp is good and 4000 is even better, giving good results at a reasonable rate of time More than 4000 would probably not be needed. For a review of this technology, Verma et al., “Human Chromosomes: Basic Technical Handbook (Human Chromos) omes: a ・ Manual ・ of ・ Basic ・ Techniques) ” See Pergamon Press, New York (1988). Once a sequence has been mapped to the exact chromosomal location, the physical Locations can be associated with genetic map data. This data is, for example, McKu sick, "Mendelian Inheritanc in Humans" e. in Man) "(Johns Hopkins University Welc) (available online via the Medical Library). Assigned to the same chromosome region The relationship between the identified gene and the disease is then confirmed by linkage analysis (physical Co-inheritance of the gene adjacent to) Next, the differences in the cDNA or genomic sequence between affected and unaffected individuals are determined. There is a need to. If a mutation is observed in some or all of the affected individuals If no mutation is observed in a normal individual, the mutation It seems to be the cause. Diseases associated with disease with current techniques of physical mapping and genetic mapping technology The DNA correctly assigned to the chromosome region is 1 between 50 and 500 causative genes. (Assuming 1 gene for 1 megabase mapping technique and 20 kb). These polypeptides, fragments or other derivatives or analogs thereof, Use cells expressing them as immunogens to produce antibodies against them it can. For example, these antibodies are polyclonal or monoclonal. There can be. The present invention relates to chimeric, single chain and humanized antibodies and F ab antibody or Fab expression library products. Known in the art A variety of procedures may be used to produce antibodies and fragments thereof. Antibodies raised against polypeptides corresponding to the sequences of the present invention will By direct injection of the peptide into the animal or by transferring the polypeptide to the animal, Preferably, it can be obtained by administering to a non-human. The antibodies thus obtained are Then it will bind to the polypeptide itself. Thus, these polypeptides Antibodies that bind whole native polypeptides, even sequences encoding only fragments of peptides Can be used to create Then, using such an antibody, the polypeptide Can be isolated from tissues that express. For preparation of monoclonal antibodies, antibodies produced in continuous cell line cultures Any technique that provides a can be used. Examples include the hybridoma technology (Ko Hler and Milstein, Nature, 256: 495-497 (1 975)), trioma technology, human B cell hybridoma technology (Kozbo) r, Immunology Today, 4: 72 (1983)), -Hybridoma technology for producing human and human monoclonal antibodies (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (Monoclonal A) ntbodies, and Cancer, Therapy) ", Alan R. Lis, 77-96 (1985)). The technology described for the production of single chain antibodies (U.S. Pat. It can be applied to produce single chain antibodies against the light immunogenic polypeptide products. Antibodies specific for hIMP-H1 polypeptide are of interest as part of a diagnostic assay Could be used to detect hIMP-H1 concentration in samples derived from You. If detected, abnormalities in hIMP-H1 concentration will result in free inositol in the subject's brain. Indicators of increased and corresponding psychotic and / or other physiological disorders It is possible. The present invention will be further described with reference to the following examples. However, It should be understood that the invention is not limited to these embodiments. No special indication If so, all parts or amounts are by weight. Frequently used methods and / or uses to facilitate understanding of the following examples Some words will be described. "Plasmid" is preceded by lowercase p and / or followed by uppercase letters and numbers Name it. The starting plasmids herein can be obtained commercially or under non-limiting conditions. Plasmids that are publicly available at or available according to published procedures Can be built from In addition, plasmids equivalent to those described are Known in the field, it will be obvious to the ordinary technical expert. "Digestion" of DNA is due to restriction enzymes that act only on certain sequences in the DNA Figure 5 shows catalytic cleavage of DNA. Various restriction enzymes used herein are commercially available Possible, and their reaction conditions, synergists, and other requirements Use as known to the practitioner. For analytical purposes, typically a plus Use 1 μg of mid or DNA fragment together with about 2 units of enzyme in about 20 μL of buffer I do. For the purpose of separating DNA fragments for plasmid construction, typically 5 to 50 μg of DNA are digested in large volumes with 20 to 250 units of enzyme. Special Appropriate buffers and substrate amounts for certain restriction enzymes are specified by the manufacturer. Inn A incubation time of about 1 hour is usually used at 37 ° C, but according to the supplier's instructions. Therefore, it may change. After digestion, run the reaction directly on a polyacrylamide gel. Separate the desired fragments by electrophoresis. The size division of the cut fragments is described in Goeddel, D .; Nucleic / Aci ds Res. 8: 4057 (1980), 8% polyacrylic Performed using an amide gel. "Oligonucleotide" is a single-chain polydeoxynucleotide that may be chemically synthesized. Shows two chains of otide or complementary polydeoxynucleotides. Such a composite Ligonucleotides do not have a 5'-phosphate, and therefore, in the presence of a kinase If the phosphate is not added together with ATP to the other oligonucleotide, Do not connect. Synthetic oligonucleotides should be ligated to non-dephosphorylated fragments. There is also. "Linking" refers to the step of forming a phosphodiester bond between two double-stranded nucleic acid fragments. (Maniatis, T., supra, p. 146). Unless otherwise specified About 0.5 μg of both DNA fragments to be ligated in an approximately equimolar amount, T4-DNA ligation enzyme was used. Ligation using 10 units of neat ("ligase") using known buffers and conditions You. Unless otherwise stated, transformation was performed according to Graham, F. et al. And Van der Eb's method, Virology, 52: 456-457 (1973). Performed as described. Example 1 Expression and purification of hIMP-H1 by bacteria First, the DNA sequence encoding hIMP-H1, ATCC 77553 was processed. 5 'of shinged hIMP-H1 protein (minus signal peptide sequence) -PC corresponding to terminal sequence and vector sequence to 3 'of hIMP-H1 gene Amplification was performed using R oligonucleotide primers. Compatible with hIMP-H1 Additional nucleotides were added to both the 5'- and 3'-sequences. The 5'-oligonucleotide primer has the sequence: 5'-ACTTGCTAC BamH1 system with GGATCCCATGTGCACCACAGGGGGCG-3 ' Putative terminal amino acids in processed protein codons following restriction enzyme sites. From the 18 nucleotide hIMP-H1 coding sequence. 3'-sequence: 5'-ACTTGCTACAAGCTTTCACTCTCTCAT CATCCCG-3 'contains a HindIII site and hI containing the final stop codon. It is followed by 18 nucleotides of MP-H1. The restriction enzyme site is a bacterial expression vector p QE-9 (Qiagen, 9259, Eton Avenue, Chatsw orth, CA, 91311). pQE-9 is antibiotic resistant (Amp^r), Bacterial origin of replication (ori), IP TG-regulatable promoter operator (P / O), ribosome binding site ( RBS), encoding a 6-His-tag and restriction enzyme sites. Following pQE-9 Was digested with BamH1 and HindIII. Put the amplified sequence in pQE-9 Communicating Ligated and inserted in frame with the sequence encoding the histidine tag and RBS. Next Available under the trademark M15 / rep4 from Qiagen using the ligation mixture Escherichia coli strains are described in Sambrook, J .; "Molecular cloning: Laboratory handbook (Molecular Cloning: A Laboratory Manu) al) ", Cold Spring Laboratory Press (1 989). M15 / rep4 strain is Plasmi Contains multiple copies of pREP4, expresses the lacI repressor, and Thin tolerance (Kan^r)give. For the ability to grow transformants on LB plates Therefore, it was confirmed and ampicillin / kanamycin resistant colonies were selected. Plasmi DNA was isolated and confirmed by restriction analysis. Clones containing the desired construct Both Amp (100 μg / mL) and Kan (25 μg / mL) were added Liquid culture was carried out in LB medium and grown overnight (O / N). Large quantity using O / N culture The culture was inoculated at a ratio of 1: 100 to 1: 250. Optimal cell density of 60 0 (O.D.⁶⁰⁰Was grown between 0.4 and 0.6. Next, IPT G (“isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside”) to a final concentration of 1 mM. Was added. IPTG inactivates the lacI repressor and clears P / O To induce an increase in gene expression. Cells were still grown for 3-4 hours. Next far Cells were collected by heart separation. The cell pellet was washed with the chaotrope 6M Dissolved in Niidine. After clarification, the dissolved hIMP-H1 was nicked from this solution. Conditions for tight binding of a protein containing a 6-His tag on a Kel-chelate column ( Hochuli, E .; J. Chromatography, 411: 17 Pp. 7-184 (1984)). hIM Elution of P-H1 (purity 95%) from the column with 6M guanidine hydrochloride, pH 5.0 3M-guanidine hydrochloride, 100 mM sodium phosphate, 10 m Adjusted to M-glutathione (reduced form) and 2 mM-glutathione (oxidized form) Was. After incubation in this solution for 12 hours, the protein was reduced to 10 mM phosphate. Dialyzed against sodium. Example 2 Cloning and expression of hIMP-H1 using baculovirus expression system A DNA sequence encoding the full-length hIMP-H1 protein, ATCC 77553, PCR oligonucleotide primers corresponding to the 5'- and 3'-sequences of the gene Amplified using The 5'-primer has the sequence: 5'-CCGGATCCGCCACCATGTGC It has ACCACAGGGGCGGGG-3 'and has a BamH1 restriction enzyme site (first (Underlined) followed by an efficient signal for initiation of translation in eukaryotic cells 6 nucleotides (Kozak, M., J. Mol. Biol., 196: 94). 7-950 (1987)) for the first 21 nucleotides of the hIMP-H1 gene. (The translation start codon “ATG” is included immediately after the second underline). The 3'-primer has the sequence: 5'-CACAGGTACCCAGCTTTTGCC It has TCAGCCGCAG-3 'and has the restriction endonuclease Asp718. 20 nucleotides complementary to the cleavage site and the 3'-untranslated sequence of the hIMP-H1 gene Contains nucleotides. Amplified sequences are commercially available from 1% agarose gel Using the kit ("Geneclean", BIO101, La Jolla, CA) separated. The fragment is then digested with the endonucleases BamH1 and Asp718. And then purified again on a 1% agarose gel. This fragment is named F2. Baculo using vector pRG1 (the following transformant of pVL941 vector) Viral expression systems (for a review, see Summers, MD and Smith, G. et al. E. FIG. "Baculovirus Vector and Insect Cell Culture Operation Method Handbook (A. manual ・ of ・ methods ・ for ・ baculovirus ・ ve ctors ・ and ・ insect ・ cell ・ culture ・ proceded ures) ", Texas, Agricultural, Experimentation al. Station Bulletin, 1555 (1987)) Expresses the hIMP-H1 protein. This expression vector is -A powerful polynuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) from California The hedrin promoter followed by the restriction endonucleases BamH1 and And recognition sites for Asp718. Simian virus (SV) 40 poly A The denylation site is used for efficient polyadenylation. Recombinant virus content For easy selection, the β-galactosidase gene from E. coli was The polyhedrin gene, followed by the polyadenylation sequence of the polyhedrin gene. Insert a signal. Cell-mediated homologous recombination of co-transfected wild-type viral DNA The polyhedrin sequence is flanked on both ends by viral sequences for binding. And Other types of baculo such as, for example, pAc373, pVL941 and pAcIM1 Ils vectors (Luckow, VA and Summers, MD, Vir. (vol. 170: 31-39) can also be used in place of pRG1. Should be. This plasmid is digested with the restriction enzymes BamH1 and Asp718 and then Dephosphorylation using bovine intestinal phosphatase by procedures known in the art. did. The DNA was then purified from a commercially available kit from a 1% agarose gel ("Ge neclean, "BIO101, La Jolla, CA). this The vector DNA is named V2. Fragment F2 and dephosphorylated plasmid V2 were ligated with T4 DNA ligase. Big Enterobacteriaceae HB101 cells were then transformed into plasmids harboring the hIMP-H1 gene. (PBachIMP-H1) containing the enzymes BamH1 and Asp718. Confirmed using. The sequence of the cloned fragment was confirmed by DNA sequencing. I accepted. 5 μg of plasmid pBachIMP-H1 was obtained from a commercially available linearized 1.0 μg of urovirus (“BaculoGold ™ Baculovirus D NA ", Pharmingen, San Diego, CA) Method (Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 7413-7417 (1987)). 1 μg of BaculoGold ™ virus DNA and plasmid pBach IMP-H1 and 50 μL of serum-free Grace's medium (Life-Technol) microtiterp containing Ogies, Gaithersburg, MD) Mixed in sterile wells of rate. Then, 10 μL of lipofectin and Gr ace medium is added, mixed, and incubated at room temperature for 15 minutes. I did. The gene transfer mixture was then mixed with 1 mL of serum-free Grace's medium for 35m. m Sf9 insect cells (ATCC CRL 1711) inoculated in tissue culture plate Was added dropwise. The plate was rocked back and forth to mix with the newly added solution. Pre The plate was then incubated at 27 ° C. for 5 hours. 5 hours later, gene transfer solution From the plate and add 1 mL of Grace insect medium with 10% fetal bovine serum did. The plate was returned to the incubator and the culture was continued at 27 ° C. for 4 days. Four days later, the supernatant was collected and described by Summers and Smith (supra). A plaque test similar to that described above was performed. Plaque stained blue as a correction "Blue / Gal" which can be easily separated (Life / Technology Agarose gel to which s company, Gaithersburg was added was used. (" A detailed description of the Lark test can be found in Life Technologies, Gait For insect cell culture and baculovirology distributed by hersberg Can be found on pages 9-10 of the User's Guide). Four days after adding a serial dilution of the virus to the cells, blue stained plaques were removed. Caught with the tip of an Eppendorf pipette. Agar containing recombinant virus The cells were resuspended in an Eppendorf tube containing 200 μL of Grace's medium. Easy far The agar was separated by centrifugation to remove 35 mm from the supernatant containing the recombinant baculovirus. Sf9 cells applied to dishes were infected. Collect supernatant of these culture dishes after 4 days And then stored at 4 ° C. Sf9 cells were grown in Grace's medium supplemented with 10% heat-inactivated FBS. cell At a multiplicity of infection ("MOI") of 2 with recombinant baculovirus V-DR3-V1 Dyed. After 6 hours, the medium was removed and SF90 without methionine and cysteine was removed. 0II medium (Life Technologies, Gaithersburg) g). 42 hours later,³⁵5 μCi of S-methionine and³⁵S-Systay 5 μCi (Amersham) was added. Incubate cells for an additional 16 hours. After centrifugation, the cells were collected by centrifugation, and the labeled proteins were collected by SDS-PAGE and the like. And visualized by autoradiography. Example 3 Expression of recombinant hIMP-H1 in COS cells Expression of plasmid hIMP-H1 was determined by 1) SV40 origin of replication, 2) Ampicillin 3) the E. coli origin of replication, 4) the CMV promoter followed by Vector pc containing an anchor region, an SV40 intron and a polyadenylation site It was derived from DNAI / Amp (Invitrogen). Complete hIMP-H DNA fragment encoding precursor 1 and HA fused in-frame to its 3'-end Since the tag was cloned into the polylinker region of the vector, It is currently under the control of the CMV promoter. The HA tag has already been reported (I. Wilson, H. Niman, R .; Heighten, A .; Cherenson, M .; Con noly and R.A. Lerner, Cell, 37: 767 (1984 )) Corresponds to an epitope derived from influenza hemagglutinin. Recombinant protein with antibody recognizing HA epitope by injection of HA tag into target protein Can be easily detected. The construction policy of the plasmid is as follows: hIMP-H1, ATCC77553 The DNA sequence to be loaded is copied into the original EST cloned using two primers. Constructed by CR. 5'-primer: 5'-CCGGATCCGCCAC CATGTGCACCACAGGGGCGGGG-3 'is a BamH1 restriction enzyme part. HIMP-H1 starting at position (first underline) and start codon (second underline) Contains 18 nucleotides. 3'-sequence: CGCTCTAGATCAAGCGTA GTCTGGGACGTCGTATGGGTACTTCTCCATCATCCCG CCC has an Xbal restriction site, a translation termination codon, an HA tag and a hIMP-Hl codon. A complementary sequence corresponding to the last 18 nucleotides of the nucleotide sequence (without the termination codon) Including. Therefore, this PCR product was fused in frame following the hIMP-H1 coding sequence. A matching HA tag, a translation termination codon adjacent to the HA tag, and BamH1 and Contains an XbaI site. DNA fragment amplified by PCR and vector pcDNAI / Amp was ligated by digestion with BamH1 and XbaI restriction enzymes. Concatenated mixture E. coli SURE strain (Stratagene Cloning Systems) Corporation, 11099 North Torrey Pines Road, La Jolla, CA, available from 92037). Transfer the transformed culture It was spread on a picillin medium plate and resistant colonies were selected. Plasmid DNA Was isolated from transformants and checked for the presence of the correct fragment by restriction analysis. Recombination For expression of hIMP-H1, the DEAE-DEXTRAN method (J. Sambr book, E.L. Fritsch, T .; Maniatis, "Molecular Cloning: Real Laboratory Handbook (Molecular Cloning: A Laboratory) Manual), Cold Spring Laboratory Pres (1989)), the expression vector was transfected into COS cells. h Expression of IMP-H1.HA protein was determined by radiolabeling and immunoprecipitation (E. Harl). ow, D. Lane, "Antibodies: Laboratory Handbook (Antibodies: A. Lab) org.Manual), Cold Spring Harbor. Laboratory Press (1988)). Heredity 2 days after transfer³⁵Labeled with S-cysteine for 8 hours. Next, collect the culture medium. First, cells were washed with a detergent (RIPA buffer: 150 mM-NaCl, 1% NP-4). 0, 0.1% SDS, 1% NP-40, 0.5% DOC, 50 mM Tris, p H7.5) (Wilson, I. et al., Supra, 37: 767, 1984). And dissolved. Precipitate bacterial lysate and culture medium with HA specific monoclonal antibody Was. The precipitated protein was analyzed on a 15% SDS-PAGE gel. Example 4 Expression pattern of hIMP-H1 in human tissues Northern blot analysis was performed to express hIMP-H1 in human tissues The level was inspected. The total RNA sample of the cells was analyzed using the RNAzol ™ system (Bi otecx Laboratories, 6023 South Loop East, Houston, TX, 77033). A specific human tissue Approximately 10 μg of total RNA separated from the gel was separated on a 1% agarose gel, (See Sambrook, Fritsch, Maniati). s, Cold Spring Harbor Press (1989)). The labeling reaction was performed using a DNA fragment according to the Stratagene Prime-It kit. The test was performed at 50 ng. The labeled DNA was applied to a Select-G-50 column (5 Pr im-3Prime Inc., 5603, Arapahoe Road, Bould er, CO, 80303). Next, filter 1,000,000c pm / mL radiolabeled full-length hIMP-H1 gene and 0.5M-NaPO_Four, P Hybridized overnight at 65 ° C. in H7.4 and 7% SDS. 2 at room temperature After washing twice and washing twice with 0.5 × SSC and 0.1% SDS at 60 ° C., The filters were exposed with an intensifying reticle at 0 ° C overnight. Message RN of hIMP-H1 A was abundant in several tissues (FIG. 4). Many modifications and variations of the present invention are possible in light of the above teachings and, therefore, It is within the scope of the appended claims. In the present invention, implementations different from those specifically described Sometimes.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｎ 9/16 ＢＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/42 9/16 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ１２Ｑ 1/42 Ａ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ１２Ｒ 1:91） ──────────────────────────────────────────────────続き Continued on front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI C07K 16/18 C12N 9/16 B C12N 5/10 C12Q 1/42 9/16 C12N 5/00 B C12Q 1/42 A61K 37 / 02 // (C12N 5/10 C12R 1:91) (C12N 9/16 C12R 1:19) (C12N 9/16 C12R 1:91)

Claims

[Claims] 1. (A) hIMP-H1 polypeptide having the deduced amino acid sequence shown in FIG. Or a polynucleotide encoding a fragment, analog or derivative of this polypeptide Otide, (B) amino acids encoded by the cDNA contained in ATCC Deposit No. 75753 HIMP-H1 polypeptide having a sequence or a fragment or analog of this polypeptide Or a polynucleotide encoding a derivative, An isolated polynucleotide selected from the group consisting of: 2. 2. The polynucleotide according to claim 1, wherein the polynucleotide is DNA. 3. The polynucleotide of claim 1, wherein the polynucleotide is RNA. 4. The polynucleotide according to claim 1, wherein the polynucleotide is genomic DNA. 5. HIMP-H wherein the polynucleotide has the deduced amino acid sequence shown in FIG. 3. The polynucleotide of claim 2, which encodes 1. 6. The polynucleotide is encoded by the cDNA of ATCC Deposit No. 75753 3. The polynucleotide of claim 2, which encodes a hIMP-H1 polypeptide. 7. 2. The polynucleotide of claim 1 having the hIMP-H1 coding sequence shown in FIG. De. 8. HIMP-H1 coding sequence deposited under ATCC Deposit No. 75753 The polynucleotide of claim 2 having the formula: 9. A vector comprising the DNA of claim 2. 10. A host cell that has been genetically engineered with the vector of claim 9. 11. Expression of the polypeptide encoded by the DNA from the host cell of claim 10. A method for producing a polypeptide, comprising: 12. A polypeptide comprising genetically engineering cells with the vector of claim 9. A method for producing a cell capable of expressing a peptide. 13. A hybrid can be formed with the DNA of claim 2, which has hIMP-H1 activity. Isolated DNA encoding a polypeptide. 14． (I) hIMP-H1 polypeptide having the deduced amino acid sequence shown in FIG. Peptides and their fragments, analogs and derivatives and (Ii) hIMP-H1 encoded by the cDNA of ATCC Deposit No. 75753 Polypeptides and fragments, analogs and derivatives of the polypeptides A polypeptide selected from the group consisting of: 15. HIMP-H1 wherein the polypeptide has the deduced amino acid sequence shown in FIG. 15. The polypeptide of claim 14, which is 16. An antibody against the polypeptide of claim 14. 17． An antagonist to the polypeptide of claim 14. 18. 18. A hIM comprising administering to a patient a therapeutically effective amount of the antagonist of claim 17. Methods for treating patients in need of inhibiting P-H1. 19. The antagonist is a polypeptide, and the therapeutically effective amount of the antagonist is Administering a DNA encoding the polypeptide to a subject, and administering the polypeptide in vivo. 19. The method of claim 18, wherein the method is administered by expressing the peptide. 20. Inhibits the interaction between hIMP-H1 and inositol monophosphate A method for detecting a compound Expressing the compound hIMP-H1 in the presence of inositol monophosphate Contacting with a cell line that To measure the hydrolysis of inositol monophosphate by hIMP-H1 When A method that includes