JPH10502244A - 増量二次物質を含有する形質転換植物 - Google Patents

増量二次物質を含有する形質転換植物

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Abstract

(57)【要約】 増量二次物質を含有する少なくとも１種の非相同ＤＮＡ配列を有する形質転換植物が開示される。該形質転換植物の生産法並びに森林、牧草値、草原および観賞植物や有用植物の栽培における該形質転換植物の使用も開示される。特に、該非相同ＤＮＡ配列は、少なくとも１種の二次物質を抗ウイルス効果および／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効果および／または駆虫効果をもたらすのに十分な濃度で酵素的に生成する酵素活性を有するポリペプチドをコードする。

Description

【発明の詳細な説明】 増量二次物質を含有する形質転換植物 この発明は、増量二次物質を含有し、少なくとも１種の非相同ＤＮＡを有する 形質転換植物、該形質転換植物の生産方法並びに森林、牧草地、草原および観賞 植物や有用植物の栽培における該形質転換植物の使用に関する。 植物性二次物質は病原体、害虫または寄生動植物に対する植物的防御において 重要な役割を果たす[例えば次の文献参照: ローデス、Ｐlant Ｍolecular Ｂi ology、第２４巻、第１頁〜第２０頁(１９９４年); チャサン、Ｐlant Cel1、 第６巻、第３頁〜第９頁(１９９４年)]。しかしながら、二次物質の含量を比較 的長期間にわたって増大させることによって病原体および／または害虫および／ または寄生動植物に対する耐性を高める方法は知られていない。現在のところ、 植物の保護は主として種々の植物予防薬を用いる処理法によっておこなわれてい るが、該予防薬は多くの場合において毒物学的影響や生態学的影響の観点からの 問題をもたらしている。 従って、本発明の課題は、病原体および／または害虫および／または寄生動植 物に対してそれ自体が耐性を有する植物を提供することによって植物予防薬の使 用を最小限に抑制し、毒物学および生態学の見地からの植物保護の問題を改善す ることである。 本発明によれば、この課題は次の形質転換植物の提供によって解決された: 酵 素活性を有する少なくとも１種のポリペプチドをコードする少なくとも１種の非 相同ＤＮＡ配列を有する形質転換植物であって、酵素的に活性な形態で存在しか つ少なくとも１種の二次物質を植物有害生物に対する耐性効果、特に抗ウイルス 効果および／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効果 および／または駆虫効果をもたらす濃度で酵素的に生成するポリペプチドを発現 する形質転換植物。 「植物有害生物」には線虫類、昆虫類および植物病原体、例えばウイルス、菌類 およびバクテリア等が包含される。「形質転換植物」および「植物」には、植物の全 体およびその一部、例えば根、茎、葉、器官特異性組織もしくは細胞およびこれ らの繁殖性物質、特に種子や実生等が包含され、さらに次のものも含まれる： 裸子植物、単子葉植物および双子葉植物、特に有用植物、例えば、穀物(例え ば、ライムギ、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、イネ、カラスムギおよびキビ ); 澱粉塊茎および澱粉根(例えば、ジャガイモ、サツマイモおよびカッサバ); 含糖植物(例えば、サトウキビおよびテンサイ); 豆果(例えば、豆、エンドウお よびヒヨコマメ); 油性作物および脂性作物(例えば、ダイズ、ラッカセイ、ヒマ ワリ、オリーブ、セイヨウアブラナおよびココナッツ); 野菜(例えば、トマト、 キキベツ、タマネギ、キュウリ、ニンジンおよびサラダ菜); 果物(例えば、ぶど う、柑橘類、バナナ、リンゴ、ナシ、モモおよびパイナップル); 堅果作物(例え ば、クルミ、ハシバミの実、アーモンドおよびカシューナッツ); 嗜好作物(例え ば、タバコ、コーヒー、茶およびカカオ); 植物繊維(例えば、ワタ、ジュートお よびアマ); 植林用植物(例えば、トウヒ、オークおよびポプラ); 観賞用植物(例 えば、ツリフネソウ、ベゴニア、ペチュニア、ペラルゴニウム、スミレ、シクラ メン、タマツヅラ、ビンカ、センジュギク、サクラソウ、セントポーリア、アマ ランサス、カッコウアザミ、キンギョソウ、オダマキ、キク、シネラリア、ダリ ア、チョウセンアサガオ、ヒエンソウ、ガーベラ、グラジオラス、グロキシニア 、ヒッペアストルム、メッセンブリアンセムム、サルメンバナおよびジン); お よび原料用植物(例えば、ヘヴェア・ブラジリエンシス(生ゴム)およびホホバ)。 「非相同ＤＮＡ配列」は、本発明により形質転換植物の野性型として別の起源に 由来するＤＮＡ配列を意味する。適当な起源は原核生物(例えば、大腸菌)または アルキバクテリアを含む真核生物である。好ましい起源は非植物、特に原核生物 である。 非相同ＤＮＡ配列のコーディング領域はコーディングセグメント(エクソン)と 非コーディングセグメント(イントロン)を有する。さらに、非相同ＤＮＡ配列は 調節セグメント、例えば、プロモーター、エンハンサーおよび終止配列を有する 。 「プロモーター」は転写の出発部位から上流に位置するヌクレオチド配列を特に 意味する。該ヌクレオチド配列は、mＲＮＡの５"−非翻訳配列(リーダー配列)に 対するコーディング領域を含む転写に必要な全ての領域を含んでおり、該リーダ ー配列はリボソーム結合部位を囲み、ＡＵＧスタートコドンにおける翻訳を開始 させる。本発明によるＤＮＡ構築に用いるのに適したプロモーターとしては、ウ イルス、菌類、バクテリア、哺乳類および植物に由来するプロモーターであって 、植物細胞内において活性であるかまたは活性化され得るプロモーターが例示さ れる。この種のプロモーターは所望のＤＮＡを構成的または変動的に発現させる ことができる。ＤＮＡ発現を分化的に調節するプロモーターとしては、病気媒体 、例えば、アザミウマや菌類等によって誘発されるプロモーター、例えば、所謂「 創傷誘発性」プロモーターが例示される。もちろん、使用されるプロモーターは 非相同ＤＮＡ配列の発現を、植物や植物部位または植物細胞内において生成する 二次物質が最終的に生物学的に有効濃度で生成するように高めなければならない 。特に好ましいプロモーターはカリフラワー−モザイクウイルス３５Ｓ(ＣaＭＶ ３５Ｓ)−プロモーターおよびその誘導体並びに傷害や負傷に基づく病気媒体( 例えば、アザミウマ等)によって誘発される(「創傷誘発性」)プロモーターである 。さらに別の適当なプロモーターとしては、ノパリンシンターゼ系やオクトピン シンターゼ系のプロモーター等が例示される。 「終止配列」は、翻訳の終了を示す転写ユニットの末端における核酸配列を意味 する。終止配列は特に、転写一次産物の３'−末端へのポリアデニレート配列の 付加を開始させるポリアデニル化シグナルを有する３'−非翻訳配列である。活 性終止配列が植物細胞内に存在することは当該分野で知られている。このような 終止配列はバクテリア、菌類、ウイルス、哺乳類または植物から単離することが できる。本発明によるＤＮＡ配列の構築に用いるのに特に適した終止配列として は、アグロバクテリウム・トゥメファシエンス(Ａgrobacterium tumefacins)か ら得られるノパリンシンターゼ−終止配列、ＣaＭＶから得られる３５Ｓ−終止 配列およびツィア・メイズ(Ｚea mays)から得られるツェイン−終止配列が例示 される。 イントロンを含まない非相同ＤＮＡ配列が好ましい。 さらに、該配列にはキメラＤＮＡ配列、合成ＤＮＡ配列および半合成ＤＮＡ配 列も含まれる。 好ましい態様においては、ＤＮＡ配列は大腸菌から得られるubiＣ−Ｇenを含 有する(図１参照)。 本発明には、図１に示すＤＮＡ配列に類似する核酸配列であって、本発明によ れば少なくとも１種の二次物質、特にフェノール誘導体を酵素的に生成するポリ ペプチドをコードする核酸配列も包含される。「類似する」とは、図１に示すＤＮ Ａ配列とハイブリッド形成し得る試験配列と相補的な核酸配列を意味する。さら にまた本発明には、図１に示すＤＮＡ配列および上記の類似核酸配列の部分配列 も包含される。 「酵素活性を有するポリペプチド」は、前記の非相同ＤＮＡ配列によってコード されるポリペプチドを意味する。この場合、コーディング配列は遺伝暗号に応じ て縮重され得る。従って、所望により、コーディング配列は既知の方法により、 植物内での発現が改良されるように縮重させてもよい。 転写一次産物は直接翻訳させてもよく、あるいは「切断」によって翻訳可能なm ＲＮＡを生成させてもよい。さらに、酵素的に活性なポリペプチドを生成させる ために翻訳一次産物を、例えばシグナル配列の切断、不活性「前駆体」を酵素的に 活性な形態に転換させる酵素的切断またはポリペプチドの側鎖の修飾(例えば、 ホスホリル化またはグリコシル化による修飾)によって翻訳後修飾してもよい。 この種のポリペプチドの好ましいものとしは大腸菌から得られる酵素コリスメ ート−ピルベート−リアーゼ(該酵素の一次配列を図２に示す)および酵素イソコ リスメート−ピルベート−リアーゼ(サリシレート−シンターゼ)である。 本発明には、図２に示す一次配列に類似するポリペプチドも包含される。この 場合、「類似する」とは、図２に示すポリペプチドと同じ酵素的機能を有すると共 に、図１に示す一次配列に比べて異なるアミノ酸を少なくとも１種含む一次配列 を有するポリペプチドを意味する。さらにまた本発明には、図２に示すポリペプ チドおよび上記の類似するポリペプチドの一部分も包含される。 本発明によれば、この種のポリペプチドは形質転換植物内に存在する基質を使 用する条件下では、主として野生型において少量生成する酵素性二次物質(植物 性二次物質)を生成する。植物内での二次物質の合成は、野生型においておこな われる限りは、植物細胞の調節機構の影響はもはや受けない。即ち、該合成は主 として植物内において自然にはおこなわれない生合成経路を経ておこなわれる。 驚くべきことには、このような二次物質は本発明による形質転換植物内において は生物学的に有効な濃度まで濃縮される。この場合、該濃縮は同化的もしくは異 化的二次反応または一定の細胞室内での蓄積によっておこなわれる。 本発明による形質転換植物内に濃縮される二次物質の濃度は明白な抗ウイルス 効果および／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効果 および／または駆虫効果をもたらす。特に、保護されるべき植物の部位(器官、 組織)または細胞内におけるこのような生物学的作用効果をもたらす二次物質の 濃度[単位: 新鮮な植物の単位重さ(g)あたりの二次物質の重さ(μg)]は、野生型 植物、特に野生型植物の対応する部位または細胞内における該物質の濃度の少な くとも１０倍、より好ましくは少なくとも５０倍、最も好ましくは少なくとも１ ００倍になる。 「二次物質」には二次代謝物に属する植物成分およびその誘導体が含まれる。該 誘導体としては、植物細胞内での二次反応(例えば、ヒドロキシル化、メチル化 、グリコシル化、エーテル化、エステル化または重合反応等)または前記のポリ ペプチドによる直接的な酵素反応によって生成する誘導体が挙げられる。従って 、前記の生物学的作用効果は本発明によって得られる二次物質自体または二次反 応によって得られる該物質の誘導体によってもたらされる。 二次物質としてはアルカロイド、イソプレノイド、フェノール誘導体、フェニ ルプロパン、キノン、クマリン、リグニンおよびフラボノイド等が例示されるが 、好ましくはサリチル酸のようなフェノール誘導体、特にp−ヒドロキシ安息香 酸およびその誘導体である。 本発明はまた、本発明による形質転換植物の生産方法であって、植物細胞また は所望によるプロトプラスト形態の植物細胞を非相同ＤＮＡ配列の安定な組込み によって遺伝子物質に形質転換させ、該形質転換植物細胞を再生させて該形質転 換植物を生産することを含む該形質転換植物の生産方法に関する。 形質転換植物の生産方法は当該分野においては知られている。例えば、アルゴ バクテリウム・トゥメファシエンスのＴiプラスミドまたはバイナリープラスミ ド系は、非相同ＤＮＡ配列を本発明による形質転換植物の遺伝子物質へ安定に組 込むためのベクターとして使用できる。さらに、非相同ＤＮＡ配列は、例えば、 アグロバクテリウム・リゾジェネスのＲiプラスミド、ポリエチレングリコール を用いる直接的な遺伝子伝達、エレクトロポレーションまたは粒子衝撃によって 形質転換植物の遺伝子物質に導入してもよい。 さらに本発明は、本発明によるＤＮＡ構造または非相同ＤＮＡ配列を植物に導 入し得るベクター、好ましくは、ＤＮＡ構造または非相同ＤＮＡ配列を植物細胞 の遺伝子物質に組込むことのできるベクターに関する。 さらにまた本発明は、本発明による形質転換植物を耐病原性植物および／また は耐害虫性植物および／または耐寄生生物性植物として森林、牧草地、草原およ び観賞植物や有用植物の栽培において使用する方法に関する。 この場合、「耐」とは有害生物による被害に対する植物の感受性を著しく低下さ せる耐性を意味する。 病原体のウイルスとしてはタバコモザイクウイルスおよびカリフラワーモザイ クウイルスが例示され、バクテリアとしてはエルヴィニア・アミロヴォラ(Ｅrwi nia amylovora)、シュードモナス・シリンガエ(Ｐsedomonas syringae)、コリネ バクテリウム・ミキガネンセ(Ｃorynebacterium michiganense)およびキサント モナス・カムペストリス(Ｘanthomonas campestris)が例示され、また、菌類と してはフィトフトラ・インフェスタンス(Ｐhytophtora infestans)、クラヴイセ プス・プルプレア(Ｃlaviceps purpurea)、ボトリチス・シネレア(Ｂotrytis ci nerea)およびウスチラゴ・メイジス(Ｕsti1ago maydis)が例示される。害虫およ び寄生生物としては、特に線虫類、アリマキ、甲虫および芋虫等が例示される。 本発明はまた、前記の非相同ＤＮＡ配列の本発明による形質転換植物の生産の ための使用に関する。 図１(ＳＥＱ ＩＤ Ｎo．１参照)は大腸菌から得られるubiＣ遺伝子の長さ４ ９５bpのコーディング核酸配列を示す。 図２(ＳＥＱ ＩＤ Ｎo．２参照)は大腸菌から得られるコリスメート−ピル ベートリアーゼの長さ１６５aaのアミノ酸配列を示す。 図３は大腸菌から得られるubiＣ遺伝子を用いる形質転換ベクターpＲＯＫ−ub iＣおよびpＲＯＫ−ＴＰＯ−ubiＣの構築を示す模式図である。 本発明を以下の実施例によって説明する。 フェノール誘導体であるp-ヒドロキシ安息香酸(ＰＨＢ)はバクテリアおよび高 等植物においては、呼吸鎖の電子担体であるユビキノンの生合成における主要な 代謝産物である[ペンノックおよびスレルファル、「イソプレノイド化合物の生合 成」(ポーターおよびスプルゲオン編)、第２巻、第１９１頁〜第２０３頁(１９８ ３年)参照]。両方の生物体群においては、ＰＨＢはコリスメートから完全に異な った経路から得られる。植物の場合には、コリスメートはまず第一に芳香族アミ ノ酸の生合成過程においてプレフェネートを経てフェニネアラニンに変換され、 次いでケイ皮酸とp−クマリン酸を経てＰＨＢに変換される[ハイデら、植物化学 (Ｐhytochemistry)、第２８巻、第２６４３頁〜第２６４５頁(１９８９年)参照] 。これに対して、バクテリアの場合には、コリスメートはコリスメート−ピルベ ートリアーゼにより一段階でＰＨＢとピルベートに代謝される。この酵素をコー ドする遺伝子ubiＣは大腸菌からクローン化されている[ジーベルトら、ＦＥＢＳ Ｌetters、第３０７巻、第３４７頁〜第３５０頁(１９９２年); 図１および図 ２参照]。 (１)大腸菌からのubiＣ遺伝子を用いる形質転換ベクターの構築 形質転換ベクターを構築するために、pＵＢＩＣ[ジーベルトら、微生物学(Ｍi crobiology)、第１４０巻、第８９７頁〜第９０４頁(１９９４年)参照]に含まれ るubiＣ遺伝子をEcoＲＩとＳalＩを用いて切断させ、末端をクレノウ酵素で満た した後、バイナリー植物発現ベクターpＲＯＫ１[ベヴァンら、ＥＭＢＯ Ｊ.、 第４巻、第１９２１頁〜第１９２６頁(１９８５年)参照]にクローン化させた。 該ベクターはＢamＨＩを用いて予め線状にした後、末端をクレノウ酵素で満たし た。このベクターはカナマイシン耐性遺伝子によって形質転換植物の選択を可能 にする。この場合、ubiＣ遺伝子は３５Ｓ−ＣaＭＶプロモーターによって制御さ れる。このようにして得られた形質転換ベクターはpＲＯＫ−ubiＣで示される( 図 ３参照)。 修飾されたubiＣ遺伝子は、５'−末端における開放読み枠を保持した状態で、 リブロース−ビスホスフェート−カルボキシラーゼの小さなサブユニットに由来 する色素体のトランシットペプチド[スギタら、Ｍol．Ｇen．Ｇenet．、第２０ ９巻、第２４７頁〜第２５６頁(１９８７年)参照]を用いて、ubiＣ遺伝子を切断 部位を介してＫpnＩと融合させてpＴＰＯ−ubiＣを形成させることによって調製 した。pＴＰＯ−ubiＣに含まれる融合遺伝子ＴＰubiＣを上述のようにしてベク ターpＲＯＫ１にクローン化させることによって形質転換ベクタ-pＲＯＫ−ＴＰ Ｏ−ubiＣを得た(図３参照)。 (２)タバコの形質転換 タバコ[栽培変種「ペチート・ハヴァンナ(Ｐetite Ｈavanna)ＳＲ１]を形質転 換するために、栽培した滅菌タバコの葉を約０.５×０.５cmの大きさに切断し、 アグロバクテリウム・トゥメファシエンス[(１)に記載の形質転換ベクターを有 するＬＢＡ４４０４]の培養液中に少なくとも１分間浸漬した。該培養液はあら かじめ遠心分離処理に短時間付した後、等容量の滅菌水道水に再懸濁させた。Ｓ ＨＩ培地[１リットル中にケラシゲとスクーグによる塩(Ｐhysiol．Ｐlant．、第 １５巻、第４７３頁〜第４９７頁(１９６２年)参照)４.６g、サッカロース３０g 、６−ベンジルアミノプリン１mg、ナフチル酢酸０.１mg、イノシトール１００m g、チアミン１０mg、ピリドキシン１mg、ニコチン酸１mgおよびアガロース７gを 含有する培地]をペトリ皿に入れ、タバコの葉の切断片をその裏面を上にして該 培地上に載置し、２５℃においてアグロバクテリアと共に３日間培養した。この 場合、光量は過度に多くならないようにした(散乱光:約１０００〜３０００lux) 。 アグロバクテリアおよび形質転換していない葉の切断片に対する選択は、該切 断片をＳＨＩ(Ｃef２５０，Ｋan１００)培地[ＳＨＩ培地にさらにセホトキシン ２５０mg／lおよびカナマイシン１００mg／lを添加した培地]上に載置すること によっておこなった。 ４〜６週間後、切断部に発生した新芽を分離し、これをヴィック式殺菌貯蔵瓶 (４５０ml)内に入れたＰＭ(Ｃef１２５，Ｋan１００)培地[セホトキシンおよび カナマイシンをさらにそれぞれ１２５mg／lおよび１００mg／l添加したＳＨＩ培 地(但し、ナフチル酢酸、６−ベンジルアミノプリン、イノシトール、チアミン 、ピリドキシンおよびニコチン酸は添加しない)]に根づかせるためにさした。新 芽が約１０cmの大きさに成長したときに、その根から寒天培地を注意深く除去し た後、殺菌処理した土壌中に移した。 (３)形質転換タバコ中のＰＨＢ含量の分析 前記(２)で得られた形質転換植物の葉を液体窒素の存在下ですりつぶした。植 物中に存在する遊離のＰＨＢを抽出するために、すりつぶした葉を酢酸ナトリウ ムの０.７５Ｍ溶液(pＨ４.０)中に懸濁させた後、酢酸エチルを用いて抽出した 。有機相を分離し、蒸発乾燥させ、メタノール／水／蟻酸混合溶剤(３０:６９. ３:０.７)に溶かした後、ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって分析した。 結合したＰＨＢ(例えば、エステル、グルコシド等)を測定するために、すりつ ぶしたタバコの葉を１ＭのＨＣl中において８０℃で１時間加水分解し、次いで 酢酸エチルを用いて抽出した後、上記の方法によつて分析した。 形質転換したタバコは野生型のものに比べて、遊離のＰＨＢの含量は５０倍多 く(新鮮な状態での単位gあたり２.３μg)、結合したＰＨＢの含量は１１５０倍 多かった。形質転換したタバコの場合には、ＰＨＢの約５０％はグルコシドに結 合した状態で存在し、ＰＨＢ−グルコシドの含量は新鮮な状態での単位gあたり 約０.３mgであり、その他のフェノール系化合物も濃縮された。 (４)形質転換タバコ中の増量二次物質のタバコモザイクウイルス(ＴＭＶ)に対 する生物学的作用効果 ＴＭＶ耐性を調べるために、該ウイルスと珪藻土の懸濁液を形質転換タバコお よび野生型タバコ(栽培変種「ペチート・ハヴァンナＳＲ１」)の葉の上に筆を用い て軽く押し付けながら塗布した。 該栽培変種の場合には、ウイルスは全体に蔓延して局部的な病斑は形成されな いので、約１０日後、その葉をすりつぶし、前記のようにして抽出物をタバコ栽 培変種「ニコチアナ・タバクム・シーヴィ・キサンチ(Ｎicotiana tabacum cv． Ｘanthi)」の葉の上に塗布した。約３日後、これらの植物には局部的な病斑が観 察された。 上記の試験結果により次のことが判明した： (i)形質転換されていない対照植物であるニコチアナ・タバクム・シーヴィ、 ペチート・ハヴァンナにおいては高いＴＭＶタイターが認められる。 (ii)pＲＯＫ−ＴＰＯ−ubiＣを用いて形質転換された植物におけるＴＭＶの蔓 延はかなり抑制される。 (iii)pＲＯＫ−ubiＣを用いて形質転換された植物においてはＴＭＶは実質上 検出されなかった。 以上要約すれば次のことが言える。即ち、大腸菌から得られるubiＣ遺伝子を 含む本発明による形質転換タバコは、野生型のものに比べて病原体に対して明ら かに高い耐性を示し、未知の作用効果と毒性をもたらす物質を生成しないだけで なく、驚くべきことには、病原体に対する耐性の原因となるp−ヒドロキシ安息 香酸(全ての有機体において自然に生成する既知の特性を有する化合物)およびそ の誘導体、特にp−ヒドロキシ安息香酸グルコシドを多量に含有する。
【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項 【提出日】１９９６年１月１１日 【補正内容】 請求の範囲 １．酵素活性を有する少なくとも１種のポリペプチドをコードする少なくとも １種のハクテリア由来の非相同ＤＮＡ配列を有する形質転換植物であって、酵素 的に活性な形態で存在しかつ少なくとも１種の二次物質を抗ウイルス効果および ／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効果および／ま たは駆虫効果をもたらす濃度で酵素的に生成するポリペプチドが発現される形質 転換植物。 ２．非相同ＤＮＡ配列が大腸菌に由来する請求項１記載の形質転換植物。 ３．非相同ＤＮＡ配列が次の配列を有する請求項１または２記載の形質転換植 物： ４．ポリペプチドがコリスメート−ピルベート−リアーゼ酵素またはイソコリ スメート−ピルベート−リアーゼ酵素(サリチラート−シンターゼ)である請求項 １から３いずれかに記載の形質転換植物。 ５．二次物質が植物性成分である請求項１から４いずれかに記載の形質転換植 物。 ６．二次物質がフェノール誘導体である請求項１から５いずれかに記載の形質 転換植物。 ７．二次物質がp−ヒドロキシ安息香酸および／またはその誘導体である請求 項１から６いずれかに記載の形質転換植物。 ８．二次物質の濃度が野性型の二次物質の濃度の少なくとも１０倍である請求 項１から７いずれかに記載の形質転換植物。 ９．植物細胞を非相同ＤＮＡ配列の安定な組込みによって遺伝子物質に形質転 換させ、該形質転換植物細胞を再生させて形質転換植物を生産することを含む請 求項１から８いずれかに記載の形質転換植物の生産方法。 １０．請求項１から８いずれかに記載の形質転換植物を耐病原性植物および／ または耐害虫性植物および／または耐寄生生物性植物として森林、牧草値、草原 および観賞植物や有用植物の栽培において使用する方法。 １１．ポリペプチドによって生成される少なくとも１種の二次物質を抗ウイル ス効果および／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効 果および／または駆虫効果をもたらす濃度で含有する形質転換植物を生産するた めに、酵素活性を有する少なくとも１種のポリペプチドをコードする非相同ＤＮ Ａ配列を使用する方法。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ジーベルト，マリオン ドイツ連邦共和国デー−79100フライブル ク、シュヴィムバートシュトラーセ13番

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．酵素活性を有する少なくとも１種のポリペプチドをコードする少なくとも １種の非相同ＤＮＡ配列を有する形質転換植物であって、酵素的に活性な形態で 存在しかつ少なくとも１種の二次物質を抗ウイルス効果および／または殺菌効果 および／または殺真菌効果および／または殺虫効果および／または駆虫効果をも たらす濃度で酵素的に生成するポリペプチドが発現される形質転換植物。 ２．非相同ＤＮＡ配列がバクテリアに由来する請求項１記載の形質転換植物。 ３．非相同ＤＮＡ配列が大腸菌に由来する請求項１または２記載の形質転換植 物。 ４．非相同ＤＮＡ配列が次の配列を有する請求項１から３いずれかに記載の形 質転換植物： ５．ポリペプチドがコリスメート−ピルベート−リアーゼ酵素またはイソコリ スメート−ピルベート−リアーゼ酵素(サリチラート−シンターゼ)である請求項 １から４いずれかに記載の形質転換植物。 ６．二次物質が植物性成分である請求項１から５いずれかに記載の形質転換植 物。 ７．二次物質がフェノール誘導体である請求項１から６いずれかに記載の形質 転換植物。 ８．二次物質がp−ヒドロキシ安息香酸および／またはその誘導体である請求 項１から７いずれかに記載の形質転換植物。 ９．二次物質の濃度が野生型の二次物質の濃度の少なくとも１０倍である請求 項１から８いずれかに記載の形質転換植物。 １０．植物細胞を非相同ＤＮＡ配列の安定な組込みによって遺伝子物質に形質 転換させ、該形質転換植物細胞を再生させて形質転換植物を生産することを含む 請求項１から９いずれかに記載の形質転換植物の生産方法。 １１．請求項１から９いずれかに記載の形質転換植物を耐病原性植物および／ または耐害虫性植物および／または耐寄生生物性植物として森林、牧草値、草原 および観賞植物や有用植物の栽培において使用する方法。 １２．ポリペプチドによって生成される少なくとも１種の二次物質を抗ウイル ス効果および／または殺菌効果および／または殺真菌効果および／または殺虫効 果および／または駆虫効果をもたらす濃度で含有する形質転換植物を生産するた めに、酵素活性を有する少なくとも１種のポリペプチドをコードする非相同ＤＮ Ａ配列を使用する方法。
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