JPH10282097A - 免疫法及び免疫活性測定法 - Google Patents
免疫法及び免疫活性測定法Info
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- JPH10282097A JPH10282097A JP9973097A JP9973097A JPH10282097A JP H10282097 A JPH10282097 A JP H10282097A JP 9973097 A JP9973097 A JP 9973097A JP 9973097 A JP9973097 A JP 9973097A JP H10282097 A JPH10282097 A JP H10282097A
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- lymphocyte
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Abstract
(57)【要約】
【課題】リンパ球を抗原（特に可溶性の抗原）で特異的
に効率よく感作する免疫系を確立すること、及び該免疫
系を使用する抗原特異的免疫活性測定法を提供すること
を課題とする。 【解決手段】アジュバンド物質、サイトカインを組み合
わせた培養液を用いてリンパキュウを抗原（特に可溶性
抗原）で特異的に免疫し、該免疫して得られたリンパ球
を不滅化させる。また、該培養液に抗原、被試験物を添
加してリンパ球を培養することにより免疫活性を測定す
る。
に効率よく感作する免疫系を確立すること、及び該免疫
系を使用する抗原特異的免疫活性測定法を提供すること
を課題とする。 【解決手段】アジュバンド物質、サイトカインを組み合
わせた培養液を用いてリンパキュウを抗原（特に可溶性
抗原）で特異的に免疫し、該免疫して得られたリンパ球
を不滅化させる。また、該培養液に抗原、被試験物を添
加してリンパ球を培養することにより免疫活性を測定す
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リンパ球を抗原で特異
的に感作する免疫法及び該免疫法を利用した培養系を用
いた免疫活性測定法に関するものである。
的に感作する免疫法及び該免疫法を利用した培養系を用
いた免疫活性測定法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】免疫機構は生体防御機構の中核を成して
おり、その免疫系の確立は研究の面でも、また、感染症
等各種疾病に対する予防・治療等への応用の面からも極
めて重要である。しかし、マウスの免疫系についてはＴ
リンパ球を培養した後の培養液を用いる免疫系などが知
られているが、ヒトについては現在まで抗原に対して特
異的な抗体を産生するヒト生体外免疫系は確立されてい
ない。
おり、その免疫系の確立は研究の面でも、また、感染症
等各種疾病に対する予防・治療等への応用の面からも極
めて重要である。しかし、マウスの免疫系についてはＴ
リンパ球を培養した後の培養液を用いる免疫系などが知
られているが、ヒトについては現在まで抗原に対して特
異的な抗体を産生するヒト生体外免疫系は確立されてい
ない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、リンパ球を
抗原、特に可溶性の抗原で特異的に効率よく感作する免
疫系を確立すること、及び抗原特異的免疫活性測定法を
提供することを目的とする。
抗原、特に可溶性の抗原で特異的に効率よく感作する免
疫系を確立すること、及び抗原特異的免疫活性測定法を
提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記目的を
達成するために鋭意研究を重ねた結果、アジュバンド物
質、サイトカインを組み合わせることにより、リンパ球
を抗原で特異的に効率よく免疫できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
達成するために鋭意研究を重ねた結果、アジュバンド物
質、サイトカインを組み合わせることにより、リンパ球
を抗原で特異的に効率よく免疫できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明の免疫法の一つは、アジ
ュバンド物質、サイトカインを組み合わせた培養液を用
いることにより、リンパ球を抗原、特に可溶性抗原で特
異的に免疫できることを特徴とする。また、本発明の免
疫法のもう一つは、抗原で特異的に免疫して得られたリ
ンパ球を不滅化させることを特徴とする。更に、本発明
の免疫活性測定法は、アジュバンド物質、サイトカイン
を組み合わせた培養液に更に抗原を添加してリンパ球を
培養し、免疫活性を測定することを特徴とする。
ュバンド物質、サイトカインを組み合わせた培養液を用
いることにより、リンパ球を抗原、特に可溶性抗原で特
異的に免疫できることを特徴とする。また、本発明の免
疫法のもう一つは、抗原で特異的に免疫して得られたリ
ンパ球を不滅化させることを特徴とする。更に、本発明
の免疫活性測定法は、アジュバンド物質、サイトカイン
を組み合わせた培養液に更に抗原を添加してリンパ球を
培養し、免疫活性を測定することを特徴とする。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明について具体例を挙
げて更に詳細に説明する。本発明において、抗原として
はいずれの物質も有効に用いられるが、好ましくは可溶
性抗原が使用される。例えばキーホールリンペットヘモ
シアニン（ＫＬＨ）、コレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴ
Ｂ）等が用いられる。
げて更に詳細に説明する。本発明において、抗原として
はいずれの物質も有効に用いられるが、好ましくは可溶
性抗原が使用される。例えばキーホールリンペットヘモ
シアニン（ＫＬＨ）、コレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴ
Ｂ）等が用いられる。
【０００７】使用するリンパ球には個体差がありムラミ
ルジペプチドを用いない方が免疫効率が高い場合もある
が、好ましくはアジュバンド物質としてムラミルジペプ
チド（muramyl dipeptide)が用いられる。ムラミルジペ
プチドを用いる場合の培養液中最終濃度は 、0.1〜1000
μg/ml、好ましくは0.5 〜50μg/mlである。該ペプチド
の濃度が0.1μg/ml未満または1000μg/mlを超える範囲
においては、免疫効率が著しく低下する。
ルジペプチドを用いない方が免疫効率が高い場合もある
が、好ましくはアジュバンド物質としてムラミルジペプ
チド（muramyl dipeptide)が用いられる。ムラミルジペ
プチドを用いる場合の培養液中最終濃度は 、0.1〜1000
μg/ml、好ましくは0.5 〜50μg/mlである。該ペプチド
の濃度が0.1μg/ml未満または1000μg/mlを超える範囲
においては、免疫効率が著しく低下する。
【０００８】サイトカインとしては、インターロイキン
２、インターロイキン４、インターロイキン６よりなる
群から選ばれた少なくとも一種が用いられる。インター
ロイキン２は、１〜1000ユニット/ml 、好ましくは５〜
200 ユニット/ml で用いる。該物質の濃度が１ユニット
/ml未満または1000ユニット/mlを超える範囲においては
免疫効率が著しく低下する。インターロイキン４は、0.
1 〜1000 ng/ml、好ましくは0.5 〜100 ng/mlで用い
る。該物質の濃度が0.１ng/ml未満または1000ng/mlを超
える範囲においては免疫効率が著しく低下する。インタ
ーロイキン６は、１〜1000 ng/ml、好ましくは２〜500n
g/mlで用いる。該物質の濃度が１ng/ml未満または1000n
g/mlを超える範囲においては免疫効率が著しく低下す
る。なお、インターロイキン２、インターロイキン４、
インターロイキン６を組み合わせることにより、免疫効
率を更に高めることができる。
２、インターロイキン４、インターロイキン６よりなる
群から選ばれた少なくとも一種が用いられる。インター
ロイキン２は、１〜1000ユニット/ml 、好ましくは５〜
200 ユニット/ml で用いる。該物質の濃度が１ユニット
/ml未満または1000ユニット/mlを超える範囲においては
免疫効率が著しく低下する。インターロイキン４は、0.
1 〜1000 ng/ml、好ましくは0.5 〜100 ng/mlで用い
る。該物質の濃度が0.１ng/ml未満または1000ng/mlを超
える範囲においては免疫効率が著しく低下する。インタ
ーロイキン６は、１〜1000 ng/ml、好ましくは２〜500n
g/mlで用いる。該物質の濃度が１ng/ml未満または1000n
g/mlを超える範囲においては免疫効率が著しく低下す
る。なお、インターロイキン２、インターロイキン４、
インターロイキン６を組み合わせることにより、免疫効
率を更に高めることができる。
【０００９】培養液としては、例えばダルベッコＭＥＭ
（ＤＭＥＭ）培地、ハムＦ１２培地、ＲＰＭＩ １６４
０培地、ＲＤＦ培地（ＲＰＭＩ １６４０、ＤＭＥＭ及
びハムＦ１２培地を２：１：１で混合した培地）、ＥＲ
ＤＦ培地（ＲＤＦ培地のアミノ酸及びビタミンを強化し
た培地）等が用いられるが、好ましくはＲＤＦあるいは
ＥＲＤＦ培地が用いられる。
（ＤＭＥＭ）培地、ハムＦ１２培地、ＲＰＭＩ １６４
０培地、ＲＤＦ培地（ＲＰＭＩ １６４０、ＤＭＥＭ及
びハムＦ１２培地を２：１：１で混合した培地）、ＥＲ
ＤＦ培地（ＲＤＦ培地のアミノ酸及びビタミンを強化し
た培地）等が用いられるが、好ましくはＲＤＦあるいは
ＥＲＤＦ培地が用いられる。
【００１０】リンパ球としては、例えば生体中のリンパ
球、血液（末梢血等）、手術の際に得られるリンパ節も
しくは脾臓から得られるものを用いることができる。本
発明の方法では、どの組織由来のリンパ球を用いても免
疫を行うことができる。
球、血液（末梢血等）、手術の際に得られるリンパ節も
しくは脾臓から得られるものを用いることができる。本
発明の方法では、どの組織由来のリンパ球を用いても免
疫を行うことができる。
【００１１】培養方法は、アジュバンド物質、サイトカ
インを組み合わせた培養液に更に抗原を添加してリンパ
球を４〜１０日程度培養すればよい。こうしてリンパ球
を培養した後、リンパ球を回収し、必要ならばリンパ球
融合用細胞株と融合するか、もしくはエプスタイン−バ
ーウイルス感染させることによって不滅化することがで
きる。この操作によって、抗原特異的モノクローナル抗
体を産生する細胞株を得ることができ、モノクローナル
抗体の持続的な生産が可能となる。
インを組み合わせた培養液に更に抗原を添加してリンパ
球を４〜１０日程度培養すればよい。こうしてリンパ球
を培養した後、リンパ球を回収し、必要ならばリンパ球
融合用細胞株と融合するか、もしくはエプスタイン−バ
ーウイルス感染させることによって不滅化することがで
きる。この操作によって、抗原特異的モノクローナル抗
体を産生する細胞株を得ることができ、モノクローナル
抗体の持続的な生産が可能となる。
【００１２】ヒトリンパ球を用いた場合、ヒトモノクロ
ーナル抗体を永続的に生産する細胞株が得られるが、他
の動物のリンパ球を用いると、使用した動物のモノクロ
ーナル抗体を永続的に生産する細胞株が得られる。
ーナル抗体を永続的に生産する細胞株が得られるが、他
の動物のリンパ球を用いると、使用した動物のモノクロ
ーナル抗体を永続的に生産する細胞株が得られる。
【００１３】一方、本発明の免疫活性測定法は、アジュ
バンド物質、サイトカインを組み合わせたものと抗原と
を含み、かつ、被試験物質を添加した培養液中でリンパ
球を培養し、免疫活性を測定する方法である。免疫活性
の測定は、後述する方法により、抗原特異的抗体量を測
定することによって行うことができる。そして、被試験
物質を添加しないで培養した場合と、被試験物質を添加
して培養した場合との抗原特異的抗体量を比較すること
により、被試験物質の免疫に及ぼす影響を調べることが
できる。
バンド物質、サイトカインを組み合わせたものと抗原と
を含み、かつ、被試験物質を添加した培養液中でリンパ
球を培養し、免疫活性を測定する方法である。免疫活性
の測定は、後述する方法により、抗原特異的抗体量を測
定することによって行うことができる。そして、被試験
物質を添加しないで培養した場合と、被試験物質を添加
して培養した場合との抗原特異的抗体量を比較すること
により、被試験物質の免疫に及ぼす影響を調べることが
できる。
【００１４】
【作用】本発明の免疫法では、アジュバンド物質、サイ
トカインを組み合わせたものを含む培養液中で、リンパ
球を抗原と共存させることにより、リンパ球を特異的に
効率よく免疫することができ、抗原特異的抗体を多量に
得ることができる。リンパ球には由来臓器による違い、
由来動物の個体差、由来動物のコンディションによる違
い等があることから、用いるリンパ球に適するようにア
ジュバンド物質とサイトカインとを組み合わせる必要が
ある。
トカインを組み合わせたものを含む培養液中で、リンパ
球を抗原と共存させることにより、リンパ球を特異的に
効率よく免疫することができ、抗原特異的抗体を多量に
得ることができる。リンパ球には由来臓器による違い、
由来動物の個体差、由来動物のコンディションによる違
い等があることから、用いるリンパ球に適するようにア
ジュバンド物質とサイトカインとを組み合わせる必要が
ある。
【００１５】また、免疫された抗原特異的リンパ球を、
融合用細胞株と融合させるか、又はエプスタイン−バー
ウイルス感染させることにより不滅化すれば、抗原特異
的モノクローナル抗体を永続的に効率よく生産すること
ができる。更に、アジュバンド物質、サイトカインを組
み合わせたものと抗原とを含み、かつ、被試験物質を添
加した培養液中でリンパ球を培養し、免疫活性を測定す
ることにより、各種物質の免疫に対する影響を調べるこ
とができる。
融合用細胞株と融合させるか、又はエプスタイン−バー
ウイルス感染させることにより不滅化すれば、抗原特異
的モノクローナル抗体を永続的に効率よく生産すること
ができる。更に、アジュバンド物質、サイトカインを組
み合わせたものと抗原とを含み、かつ、被試験物質を添
加した培養液中でリンパ球を培養し、免疫活性を測定す
ることにより、各種物質の免疫に対する影響を調べるこ
とができる。
【００１６】
実施例１ （１）特定抗原に対するリンパ球の免疫 ヘパリン入り採血管で健常人の末梢血を採血し、リン酸
緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で２倍に希釈した。これを
リンパ球分離溶液（ＬＳＭ）で処理し、リンパ球を分離
した。分離したリンパ球から血小板及びＬＳＭを除去す
るために、リンパ球をＥＲＤＦ培地で２〜３回洗浄し
た。更に、体液性免疫反応に抑制的に働くサプレッサー
Ｔリンパ球を選択的に除去するために、ロイシルロイシ
ンメチルエステル（Leu-Leu-OMe)で処理した。処理した
リンパ球をＥＲＤＦ培地で３回洗浄し、これを以後の実
験に用いた。Leu-Leu-OMe で処理したリンパ球を５０μ
Ｍ２−メルカプトエタノール及び１０％牛胎児血清含有
ＥＲＤＦ培地に１〜３Ｘ１０6 個/ml になるように懸濁
し、２４穴培養プレートに１ｍｌ／穴ずつ分注した。続
いて、抗原及び各種因子を所定の濃度になるように添加
した。抗原としてキーホールリンペットヘモシアニン
（Keyhole limpet hemocyanin,以下ＫＬＨとする）を最
終濃度で１０μｇ／ｍｌとなるように添加した。各種因
子としてムラミルジペプチド（以下、ＭＤＰとする）、
インターロイキン２（以下、ＩＬ−２とする）、インタ
ーロイキン４（以下、ＩＬ−４とする）、インターロイ
キン５（以下、ＩＬ−５とする）、インターロイキン６
（以下、ＩＬ−６とする）、インターロイキン１０（以
下、ＩＬ−１０とする）を、培養液中の最終濃度がそれ
ぞれ１０μｇ／ｍｌ、１０ユニット／ｍｌ、１０ｎｇ／
ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、１０ユニット／ｍｌ、１０ｎｇ／
ｍｌになるように、かつ、いろいろな組み合わせで添加
した。こうして、リンパ球及び各因子を添加した後、７
日間培養を行い、以下に述べる方法で全抗体量、クラス
ター形成能及びＫＬＨ特異的抗体量を測定した。
緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で２倍に希釈した。これを
リンパ球分離溶液（ＬＳＭ）で処理し、リンパ球を分離
した。分離したリンパ球から血小板及びＬＳＭを除去す
るために、リンパ球をＥＲＤＦ培地で２〜３回洗浄し
た。更に、体液性免疫反応に抑制的に働くサプレッサー
Ｔリンパ球を選択的に除去するために、ロイシルロイシ
ンメチルエステル（Leu-Leu-OMe)で処理した。処理した
リンパ球をＥＲＤＦ培地で３回洗浄し、これを以後の実
験に用いた。Leu-Leu-OMe で処理したリンパ球を５０μ
Ｍ２−メルカプトエタノール及び１０％牛胎児血清含有
ＥＲＤＦ培地に１〜３Ｘ１０6 個/ml になるように懸濁
し、２４穴培養プレートに１ｍｌ／穴ずつ分注した。続
いて、抗原及び各種因子を所定の濃度になるように添加
した。抗原としてキーホールリンペットヘモシアニン
（Keyhole limpet hemocyanin,以下ＫＬＨとする）を最
終濃度で１０μｇ／ｍｌとなるように添加した。各種因
子としてムラミルジペプチド（以下、ＭＤＰとする）、
インターロイキン２（以下、ＩＬ−２とする）、インタ
ーロイキン４（以下、ＩＬ−４とする）、インターロイ
キン５（以下、ＩＬ−５とする）、インターロイキン６
（以下、ＩＬ−６とする）、インターロイキン１０（以
下、ＩＬ−１０とする）を、培養液中の最終濃度がそれ
ぞれ１０μｇ／ｍｌ、１０ユニット／ｍｌ、１０ｎｇ／
ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、１０ユニット／ｍｌ、１０ｎｇ／
ｍｌになるように、かつ、いろいろな組み合わせで添加
した。こうして、リンパ球及び各因子を添加した後、７
日間培養を行い、以下に述べる方法で全抗体量、クラス
ター形成能及びＫＬＨ特異的抗体量を測定した。
【００１７】（２）ヒト抗体量の測定 全抗体量及び特異抗体量の測定はＩｇＭ及びＩｇＧにつ
いて行った。ＩｇＭ濃度の測定は、次のように行った。
先ず、ラビット抗ヒトＩｇＭ抗体をイムノプレートにコ
ートした。非特異的吸着を抑えるための処理をした後、
培養液を加えて、培養液中に含まれているＩｇＭをコー
トした抗ＩｇＭ抗体を介してイムノプレートに固定し
た。固定化されたＩｇＭをペルオキシダーゼ標識した抗
ヒトＩｇＭ抗体で挟み込み、ＩｇＭ量と相関して固定さ
れたペルオキシダーゼをＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）
で青色に発色させ、その青色強度を測定することにより
ＩｇＭ濃度を算出した。ＩｇＧ濃度の測定については、
先ず、ラビット抗ヒトＩｇＧ抗体をイムノプレートにコ
ートした。これに培養液を加えて、培養液中に含まれて
いるＩｇＧを抗ヒトＩｇＧ抗体を介してイムノプレート
に固定した。固定化されたＩｇＧをペルオキシダーゼ標
識した抗ＩｇＧ抗体で挟み込み、ＩｇＧ量と相関して固
定されたペルオキシダーゼをＡＢＴＳ（２，２’−アジ
ノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）で青色に発色させ、その青色強度を測定することに
よりＩｇＧ濃度を算出した。抗体量の変化は、免疫がか
かる７日目の抗体量を免疫が殆どかからない４日目の抗
体量で割ることにより求めた。
いて行った。ＩｇＭ濃度の測定は、次のように行った。
先ず、ラビット抗ヒトＩｇＭ抗体をイムノプレートにコ
ートした。非特異的吸着を抑えるための処理をした後、
培養液を加えて、培養液中に含まれているＩｇＭをコー
トした抗ＩｇＭ抗体を介してイムノプレートに固定し
た。固定化されたＩｇＭをペルオキシダーゼ標識した抗
ヒトＩｇＭ抗体で挟み込み、ＩｇＭ量と相関して固定さ
れたペルオキシダーゼをＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）
で青色に発色させ、その青色強度を測定することにより
ＩｇＭ濃度を算出した。ＩｇＧ濃度の測定については、
先ず、ラビット抗ヒトＩｇＧ抗体をイムノプレートにコ
ートした。これに培養液を加えて、培養液中に含まれて
いるＩｇＧを抗ヒトＩｇＧ抗体を介してイムノプレート
に固定した。固定化されたＩｇＧをペルオキシダーゼ標
識した抗ＩｇＧ抗体で挟み込み、ＩｇＧ量と相関して固
定されたペルオキシダーゼをＡＢＴＳ（２，２’−アジ
ノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）で青色に発色させ、その青色強度を測定することに
よりＩｇＧ濃度を算出した。抗体量の変化は、免疫がか
かる７日目の抗体量を免疫が殆どかからない４日目の抗
体量で割ることにより求めた。
【００１８】（３）クラスター形成 リンパ球の増殖の指標として顕微鏡下での目視により観
察した。抗原としてＫＬＨ、アジュバンドとしてＭＤＰ
を用いてサイトカインの影響を調べた。 表１ 免疫に及ぼすサイトカインの影響 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 抗体量の変化 添加サイトカイン 特異抗体量 クラスター形成 ━━━━━━━━━━━ ＩｇＧ ＩｇＭ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 無添加 − 4.4 10.2 ＋ IL-2 ＋ 3.2 18.3 ＋ IL-2+IL-4 ＋＋＋ 3.2 34.7 ＋＋＋ IL-2+IL-5 − 2.9 9.9 − IL-2+IL-6 − 3.3 15.6 − IL-2+IL-10 − 3.5 3.5 − IL-2+IL-4+IL-6 ＋＋ 5.0 33.8 ＋＋ IL-2+IL-5+IL-6 ＋ 4.0 14.6 ＋ IL-2+IL-6+IL-10 − 4.0 3.9 − IL-2+IL-4+IL-5+IL-6+IL-10 ＋ 3.9 4.6 ＋ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 特異抗体量は吸光度が0.2 未満を−、0.2 〜0.4 未満を＋、0.4 〜0.6 未満を＋ ＋、0.6 以上を＋＋＋で表した。 表１の結果より、可溶性抗原に対する免疫にはＩＬ−２
とＩＬ−４の組み合わせあるいはＩＬ−２、ＩＬ−４及
びＩＬ−６の組み合わせが有効であることが明らかにな
った。
察した。抗原としてＫＬＨ、アジュバンドとしてＭＤＰ
を用いてサイトカインの影響を調べた。 表１ 免疫に及ぼすサイトカインの影響 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 抗体量の変化 添加サイトカイン 特異抗体量 クラスター形成 ━━━━━━━━━━━ ＩｇＧ ＩｇＭ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 無添加 − 4.4 10.2 ＋ IL-2 ＋ 3.2 18.3 ＋ IL-2+IL-4 ＋＋＋ 3.2 34.7 ＋＋＋ IL-2+IL-5 − 2.9 9.9 − IL-2+IL-6 − 3.3 15.6 − IL-2+IL-10 − 3.5 3.5 − IL-2+IL-4+IL-6 ＋＋ 5.0 33.8 ＋＋ IL-2+IL-5+IL-6 ＋ 4.0 14.6 ＋ IL-2+IL-6+IL-10 − 4.0 3.9 − IL-2+IL-4+IL-5+IL-6+IL-10 ＋ 3.9 4.6 ＋ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 特異抗体量は吸光度が0.2 未満を−、0.2 〜0.4 未満を＋、0.4 〜0.6 未満を＋ ＋、0.6 以上を＋＋＋で表した。 表１の結果より、可溶性抗原に対する免疫にはＩＬ−２
とＩＬ−４の組み合わせあるいはＩＬ−２、ＩＬ−４及
びＩＬ−６の組み合わせが有効であることが明らかにな
った。
【００１９】実施例２ コレラトキシンＢサブユニット（ＣＴＢ）に対する免疫
法の検討を行った。図１から明らかなようにこのリンパ
球においては、ＭＤＰ、ＩＬ−２及びＩＬ−４を組み合
わせることにより、ＩｇＭタイプの抗原特異的抗体が、
また、ＭＤＰ非存在下でＩＬ−２とＩＬ−４を組み合わ
せることにより、ＩｇＧタイプの抗原特異的抗体が得ら
れることが明らかになった。今回用いた健常人のリンパ
球は、これまでにコレラトキシンと接触したことがなか
ったと考えられることから、この免疫系は追加免疫（ブ
ースティング）でなく本当の意味での免疫（抗原感作）
を可能にしたと考えられる。アジュバンド、サイトカイ
ンの組み合わせは、リンパ球の個体差あるいは抗原によ
って調整する必要があると考えられる。
法の検討を行った。図１から明らかなようにこのリンパ
球においては、ＭＤＰ、ＩＬ−２及びＩＬ−４を組み合
わせることにより、ＩｇＭタイプの抗原特異的抗体が、
また、ＭＤＰ非存在下でＩＬ−２とＩＬ−４を組み合わ
せることにより、ＩｇＧタイプの抗原特異的抗体が得ら
れることが明らかになった。今回用いた健常人のリンパ
球は、これまでにコレラトキシンと接触したことがなか
ったと考えられることから、この免疫系は追加免疫（ブ
ースティング）でなく本当の意味での免疫（抗原感作）
を可能にしたと考えられる。アジュバンド、サイトカイ
ンの組み合わせは、リンパ球の個体差あるいは抗原によ
って調整する必要があると考えられる。
【００２０】実施例３ 異なる健常人由来のリンパ球を用いて、実施例２と同様
に免疫法の検討を行った。図２から明らかなようにこの
リンパ球においては、ＭＤＰ、ＩＬ−２及びＩＬ−４を
組み合わせることにより、ＩｇＭタイプとＩｇＧタイプ
両者のＣＬＢ特異的な抗体が得られることが明らかにな
った。
に免疫法の検討を行った。図２から明らかなようにこの
リンパ球においては、ＭＤＰ、ＩＬ−２及びＩＬ−４を
組み合わせることにより、ＩｇＭタイプとＩｇＧタイプ
両者のＣＬＢ特異的な抗体が得られることが明らかにな
った。
【００２１】
【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、ア
ジュバンド物質、サイトカインを組み合わせた培養液を
用いることにより、効率よくリンパ球を免疫でき、抗原
特異的抗体を高濃度に得ることが出来る。また、この系
を生体に応用し、サイトカイン等を調整することにより
免疫能力を高めることも可能になると考えられる。リン
パ球の由来として特殊な組織由来のものを用いることな
く、どのようなものを用いても免疫が可能である。更
に、このように免疫されたリンパ球を用いて、目的とす
る抗原に対するモノクローナル抗体を得ることが可能と
なる。特に、ヒトモノクローナル抗体は、その作製の難
しさ、目的とする抗原に対する抗体を得ることが困難で
あることが、その普及を妨げてきたが、本発明によっ
て、目的とする抗原特異的ヒトモノクローナル抗体が効
率よく得られるようになり、予防、診断、治療への道が
開かれる。また、本発明の免疫活性測定法によれば、各
種物質の免疫に及ぼす影響を容易に調べることができ
る。
ジュバンド物質、サイトカインを組み合わせた培養液を
用いることにより、効率よくリンパ球を免疫でき、抗原
特異的抗体を高濃度に得ることが出来る。また、この系
を生体に応用し、サイトカイン等を調整することにより
免疫能力を高めることも可能になると考えられる。リン
パ球の由来として特殊な組織由来のものを用いることな
く、どのようなものを用いても免疫が可能である。更
に、このように免疫されたリンパ球を用いて、目的とす
る抗原に対するモノクローナル抗体を得ることが可能と
なる。特に、ヒトモノクローナル抗体は、その作製の難
しさ、目的とする抗原に対する抗体を得ることが困難で
あることが、その普及を妨げてきたが、本発明によっ
て、目的とする抗原特異的ヒトモノクローナル抗体が効
率よく得られるようになり、予防、診断、治療への道が
開かれる。また、本発明の免疫活性測定法によれば、各
種物質の免疫に及ぼす影響を容易に調べることができ
る。
【図１】コレラトキシンでの免疫に及ぼすアジュバンド
及びサイトカインの影響（その１）を示すグラフであ
る。
及びサイトカインの影響（その１）を示すグラフであ
る。
【図２】コレラトキシンでの免疫に及ぼすアジュバンド
及びサイトカインの影響（その２）を示すグラフであ
る。
及びサイトカインの影響（その２）を示すグラフであ
る。
Claims (7)
- 【請求項１】アジュバンド物質、サイトカインの組み合
わせを特徴とする抗原に対する特異的な免疫法。 - 【請求項２】アジュバンド物質、サイトカインの組み合
わせを特徴とする培養液中にてリンパ球を抗原で特異的
に免疫し、かつ、不滅化させる免疫法。 - 【請求項３】前記アジュバンド物質が、ムラミルジペプ
チドであることを特徴とする請求項１または２記載の免
疫法。 - 【請求項４】前記サイトカインが、インターロイキン
２、インターロイキン４、インターロイキン６よりなる
群から選ばれた少なくとも一種であることを特徴とする
請求項１〜３のいずれか１つに記載の免疫法。 - 【請求項５】前記抗原が、可溶性抗原であることを特徴
とする請求項１〜４のいずれか１つに記載の免疫法。 - 【請求項６】前記リンパ球が、血液由来、リンパ節由来
又は脾臓由来のものであることを特徴とする請求項１〜
５のいずれか１つに記載の免疫法。 - 【請求項７】アジュバンド物質、サイトカインの組み合
わせを特徴とする培養液に抗原、被試験物を添加してリ
ンパ球を培養することにより免疫活性を測定することを
特徴とする免疫活性測定法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09973097A JP3919875B2 (ja) | 1997-04-02 | 1997-04-02 | 免疫法及び免疫活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09973097A JP3919875B2 (ja) | 1997-04-02 | 1997-04-02 | 免疫法及び免疫活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10282097A true JPH10282097A (ja) | 1998-10-23 |
| JP3919875B2 JP3919875B2 (ja) | 2007-05-30 |
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|---|---|---|---|
| JP09973097A Expired - Fee Related JP3919875B2 (ja) | 1997-04-02 | 1997-04-02 | 免疫法及び免疫活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3919875B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009072660A1 (ja) | 2007-12-03 | 2009-06-11 | Kabushiki Kaisya Advance | 抗体作製方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2607504B1 (en) | 2011-12-23 | 2018-02-28 | Ipsen International GmbH | Load transport mechanism for a multi-station heat treating system |
-
1997
- 1997-04-02 JP JP09973097A patent/JP3919875B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| WO2009072660A1 (ja) | 2007-12-03 | 2009-06-11 | Kabushiki Kaisya Advance | 抗体作製方法 |
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| Publication number | Publication date |
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