JPH10221247A - 蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法 - Google Patents
蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法Info
- Publication number
- JPH10221247A JPH10221247A JP3318997A JP3318997A JPH10221247A JP H10221247 A JPH10221247 A JP H10221247A JP 3318997 A JP3318997 A JP 3318997A JP 3318997 A JP3318997 A JP 3318997A JP H10221247 A JPH10221247 A JP H10221247A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- wavelength range
- secondary structure
- calculation
- component ratio
- total value
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 計算波長範囲の選択を適切にしかも容易に
行うことができる蛋白質の二次構造解析に用いる計算波
長範囲選択方法を提供することを目的とする。 【解決手段】 波長範囲の長波長端を固定する長波長端
固定工程 (s100) と、その短波長端を順次変更し、それ
ぞれの二次構造成分比が零または正の値をもつという拘
束条件で成分比を最適化法によって算出する仮成分比算
出工程（s102）と、該算出された成分比の合計値をそれ
ぞれの波長範囲について算出する合計値算出工程（s10
4）と、該算出された合計値の誤差が許容値以下である
と、その中から短波長端が最も大きい波長範囲を探索
し、合計値の誤差が許容値より大であると、その中から
合計値が１００％と最も近似する波長範囲を探索する探
索工程 (s106,s108,s110)と、該探索された波長範囲を
計算波長範囲として各成分比を算出する工程 (s112) と
を備えたことを特徴とする方法。
行うことができる蛋白質の二次構造解析に用いる計算波
長範囲選択方法を提供することを目的とする。 【解決手段】 波長範囲の長波長端を固定する長波長端
固定工程 (s100) と、その短波長端を順次変更し、それ
ぞれの二次構造成分比が零または正の値をもつという拘
束条件で成分比を最適化法によって算出する仮成分比算
出工程（s102）と、該算出された成分比の合計値をそれ
ぞれの波長範囲について算出する合計値算出工程（s10
4）と、該算出された合計値の誤差が許容値以下である
と、その中から短波長端が最も大きい波長範囲を探索
し、合計値の誤差が許容値より大であると、その中から
合計値が１００％と最も近似する波長範囲を探索する探
索工程 (s106,s108,s110)と、該探索された波長範囲を
計算波長範囲として各成分比を算出する工程 (s112) と
を備えたことを特徴とする方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は蛋白質の二次構造解
析に用いる計算波長範囲選択方法に関するものである。
析に用いる計算波長範囲選択方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】蛋白質の円二色性（ＣＤ）がその二次構
造を鋭敏に反映することは良く知られている事実であ
る。図１には二次構造成分比が異なるミオグロビン（My
oglobin）、リゾチーム（Lysozyme）およびパパイン（P
apain）のＣＤスペクトル測定例が示されている。な
お、同図において、Ｍはミオグロビン（Myoglobin）、
Ｌはリゾチーム（Lysozyme）、Ｐはパパイン（Papain）
の遠紫外ＣＤ測定例である。これら円二色性スペクトル
の特徴的形状と強度から二次構造成分比を評価しようと
する種々の試みがなされ、その解析原理として例えばYa
ng教授らのリファレンスＣＤスペクトル法が採用されて
いる。
造を鋭敏に反映することは良く知られている事実であ
る。図１には二次構造成分比が異なるミオグロビン（My
oglobin）、リゾチーム（Lysozyme）およびパパイン（P
apain）のＣＤスペクトル測定例が示されている。な
お、同図において、Ｍはミオグロビン（Myoglobin）、
Ｌはリゾチーム（Lysozyme）、Ｐはパパイン（Papain）
の遠紫外ＣＤ測定例である。これら円二色性スペクトル
の特徴的形状と強度から二次構造成分比を評価しようと
する種々の試みがなされ、その解析原理として例えばYa
ng教授らのリファレンスＣＤスペクトル法が採用されて
いる。
【０００３】すなわち、蛋白質のＣＤを４つの基本二次
構造のリファレンスＣＤを用いて（１）式で表す。 Ｐ（λ）＝ｆH・Ｈ（λ）＋ｆB・Ｂ（λ）＋ｆT・Ｔ（λ）＋ｆR・Ｒ（λ） … （１ ） ただし、Ｐ（λ）、Ｈ（λ）、Ｂ（λ）、Ｔ（λ）およ
びＲ（λ）は、それぞれタンパク質、ヘリックス、ベー
タ、ターン及びランダムの波長λにおけるＣＤ値（平均
残基分子楕円率）を表す。ｆi（ｉ＝Ｈ，Ｂ，Ｔ，Ｒ）
は、蛋白質のそれぞれの二次構造成分比を表す。そし
て、未知構造蛋白質の二次構造成分比ｆi（ｉ＝Ｈ，
Ｂ，Ｔ，Ｒ）を（１）式のカーブフィッティングによっ
て求めるものである。
構造のリファレンスＣＤを用いて（１）式で表す。 Ｐ（λ）＝ｆH・Ｈ（λ）＋ｆB・Ｂ（λ）＋ｆT・Ｔ（λ）＋ｆR・Ｒ（λ） … （１ ） ただし、Ｐ（λ）、Ｈ（λ）、Ｂ（λ）、Ｔ（λ）およ
びＲ（λ）は、それぞれタンパク質、ヘリックス、ベー
タ、ターン及びランダムの波長λにおけるＣＤ値（平均
残基分子楕円率）を表す。ｆi（ｉ＝Ｈ，Ｂ，Ｔ，Ｒ）
は、蛋白質のそれぞれの二次構造成分比を表す。そし
て、未知構造蛋白質の二次構造成分比ｆi（ｉ＝Ｈ，
Ｂ，Ｔ，Ｒ）を（１）式のカーブフィッティングによっ
て求めるものである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ところで、リファレン
スＣＤスペクトル法に代表される蛋白質二次構造解析で
は、二次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲の選択
の仕方が悪いと、得られた二次構造成分比とそれらのＸ
線解析データとの相関係数が低くなってしてしまう。特
にベータ構造の評価精度を維持するためには真空紫外域
までのＣＤデータ（たとえば１８０ｎｍ以下）を用いな
ければならなかった。
スＣＤスペクトル法に代表される蛋白質二次構造解析で
は、二次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲の選択
の仕方が悪いと、得られた二次構造成分比とそれらのＸ
線解析データとの相関係数が低くなってしてしまう。特
にベータ構造の評価精度を維持するためには真空紫外域
までのＣＤデータ（たとえば１８０ｎｍ以下）を用いな
ければならなかった。
【０００５】しかしながら、このような短波長まで測定
領域を延長することによって、溶媒の選択や、空気中の
酸素の吸収をさけるために行う円二色性分散計内の窒素
置換の問題などの困難が増えてくるため、数多くのプロ
グラムの使用者にとって１９０ｎｍまでの測定が限界で
あり、１８０ｎｍ以下の測定は事実上不可能であった。
そのため、二次構造成分比の評価精度を維持するために
は計算波長範囲の選択は重要であるが、プログラムの使
用者の要求に十分に応えることができていなかった。
領域を延長することによって、溶媒の選択や、空気中の
酸素の吸収をさけるために行う円二色性分散計内の窒素
置換の問題などの困難が増えてくるため、数多くのプロ
グラムの使用者にとって１９０ｎｍまでの測定が限界で
あり、１８０ｎｍ以下の測定は事実上不可能であった。
そのため、二次構造成分比の評価精度を維持するために
は計算波長範囲の選択は重要であるが、プログラムの使
用者の要求に十分に応えることができていなかった。
【０００６】その理由は、二次構造成分比の計算に用い
る計算波長範囲の設定には数多くの場合が考えられ、さ
らには選択された計算波長範囲が最適なものであるかど
うかを判断するための適切な規範が存在しないため、プ
ログラムの使用者は満足のゆく評価精度が得られるま
で、計算波長範囲を選択してから二次構造成分比を算出
するまでの一連の操作を繰り返さなければならず、非常
に煩わしいものであった。本発明は前記従来技術の事情
に鑑みなされたものであり、その目的は蛋白質の二次構
造成分比、特にベータ構造の評価精度の改善が容易にな
し得る蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択
方法を提供することにある。
る計算波長範囲の設定には数多くの場合が考えられ、さ
らには選択された計算波長範囲が最適なものであるかど
うかを判断するための適切な規範が存在しないため、プ
ログラムの使用者は満足のゆく評価精度が得られるま
で、計算波長範囲を選択してから二次構造成分比を算出
するまでの一連の操作を繰り返さなければならず、非常
に煩わしいものであった。本発明は前記従来技術の事情
に鑑みなされたものであり、その目的は蛋白質の二次構
造成分比、特にベータ構造の評価精度の改善が容易にな
し得る蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択
方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に本発明にかかる蛋白質の二次構造解析方法に用いる計
算波長範囲選択方法は、円二色性データから、蛋白質の
二次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲を選択する
方法であって、長波長端固定工程と、仮成分比算出工程
と、合計値算出工程と、探索工程と、選択工程と、を備
えたことを特徴とする。前記長波長端固定工程は、前記
計算波長範囲の長波長端を所定の波長に固定する。
に本発明にかかる蛋白質の二次構造解析方法に用いる計
算波長範囲選択方法は、円二色性データから、蛋白質の
二次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲を選択する
方法であって、長波長端固定工程と、仮成分比算出工程
と、合計値算出工程と、探索工程と、選択工程と、を備
えたことを特徴とする。前記長波長端固定工程は、前記
計算波長範囲の長波長端を所定の波長に固定する。
【０００８】前記仮成分比算出工程は、前記計算波長範
囲の短波長端を順次変更し、それぞれの二次構造成分比
が零または正の値をもつという拘束条件で二次構造成分
比を最適化法によって算出する。前記合計値算出工程
は、前記仮成分比算出工程で算出されたそれぞれの二次
構造成分比の合計値をそれぞれの計算波長範囲について
算出する。前記探索工程は、前記合計値算出工程で算出
された合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値以下である
と、その中から短波長端が最も大きい計算波長範囲を探
索し、また、合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値より
大であると、その中から合計値が１００％と最も近似す
る計算波長範囲を探索する。
囲の短波長端を順次変更し、それぞれの二次構造成分比
が零または正の値をもつという拘束条件で二次構造成分
比を最適化法によって算出する。前記合計値算出工程
は、前記仮成分比算出工程で算出されたそれぞれの二次
構造成分比の合計値をそれぞれの計算波長範囲について
算出する。前記探索工程は、前記合計値算出工程で算出
された合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値以下である
と、その中から短波長端が最も大きい計算波長範囲を探
索し、また、合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値より
大であると、その中から合計値が１００％と最も近似す
る計算波長範囲を探索する。
【０００９】前記選択工程は、前記探索工程で探索され
た計算波長範囲を蛋白質の二次構造解析に用いる計算波
長範囲として選択する。なお、前記探索工程は、前記二
次構造成分比の合計値の誤差が許容値以下の計算波長範
囲を優先して探索することが好適である。
た計算波長範囲を蛋白質の二次構造解析に用いる計算波
長範囲として選択する。なお、前記探索工程は、前記二
次構造成分比の合計値の誤差が許容値以下の計算波長範
囲を優先して探索することが好適である。
【００１０】
【発明の実施形態】以下、図面に基づき本発明の一実施
態様について説明する。図２には本発明の一実施態様に
かかる蛋白質二次構造解析用の装置のブロック図が示さ
れている。なお、本実施態様ではリファレンスＣＤとし
て図４に示すヤン教授らのリファレンスＣＤを想定し、
未知構造蛋白質の二次構造成分比を（１）式のカーブフ
ィッティングによって求める場合について説明する。図
２において、装置１０は、長波長短固定手段、仮成分比
算出手段、合計値算出手段、探索手段、及び選択手段と
してのＣＰＵ１２と、ＲＯＭ１４と、ＨＤＤ１６とを含
む。
態様について説明する。図２には本発明の一実施態様に
かかる蛋白質二次構造解析用の装置のブロック図が示さ
れている。なお、本実施態様ではリファレンスＣＤとし
て図４に示すヤン教授らのリファレンスＣＤを想定し、
未知構造蛋白質の二次構造成分比を（１）式のカーブフ
ィッティングによって求める場合について説明する。図
２において、装置１０は、長波長短固定手段、仮成分比
算出手段、合計値算出手段、探索手段、及び選択手段と
してのＣＰＵ１２と、ＲＯＭ１４と、ＨＤＤ１６とを含
む。
【００１１】ＲＯＭ１４にはカーブフィッティングプロ
グラムをはじめ、例えば（１）式に示す解析関数やリフ
ァレンスＣＤデータなどが記憶されている。ＨＤＤ１６
には円二色性分散計（図示省略）で測定された被解析蛋
白質のＣＤデータが記憶されている。そして、二次構造
解析の開始を指示する解析開始信号がＣＰＵ１２に入力
されると、ＣＰＵ１２は、ＲＯＭ１４に記憶されている
解析プログラムを起動する。このとき、ＣＰＵ１２は、
リファレンスＣＤデータやＨＤＤ１６に記憶されている
被解析蛋白質のＣＤデータも同時に読み出して、この未
知構造蛋白質の二次構造成分比を（１）式のカーブフィ
ッティングによって求めることができる。
グラムをはじめ、例えば（１）式に示す解析関数やリフ
ァレンスＣＤデータなどが記憶されている。ＨＤＤ１６
には円二色性分散計（図示省略）で測定された被解析蛋
白質のＣＤデータが記憶されている。そして、二次構造
解析の開始を指示する解析開始信号がＣＰＵ１２に入力
されると、ＣＰＵ１２は、ＲＯＭ１４に記憶されている
解析プログラムを起動する。このとき、ＣＰＵ１２は、
リファレンスＣＤデータやＨＤＤ１６に記憶されている
被解析蛋白質のＣＤデータも同時に読み出して、この未
知構造蛋白質の二次構造成分比を（１）式のカーブフィ
ッティングによって求めることができる。
【００１２】すなわち、ＣＰＵ１２は、波長λにおける
蛋白質のＣＤ値Ｐ（λ）を、たとえば４つの基本二次構
造のリファレンスＣＤを用いて近似的に（１）式で表
す。ただし（１）式において蛋白質ＣＤ値Ｐ（λ）は、
それぞれ測定された波長範囲のｎ個の波長点λｉ（ｉ＝
１，２，…，ｎ）においてそれぞれ独立した値をもって
いる。Ｈ（λｉ）、Ｂ（λｉ）、Ｔ（λｉ）およびＲ
（λｉ）の４つの二次構造のリファレンスＣＤ値を用い
て、被解析蛋白質のそれぞれの二次構造成分比ｆH、
ｆB、ｆT、ｆRを最小二乗法により求める。
蛋白質のＣＤ値Ｐ（λ）を、たとえば４つの基本二次構
造のリファレンスＣＤを用いて近似的に（１）式で表
す。ただし（１）式において蛋白質ＣＤ値Ｐ（λ）は、
それぞれ測定された波長範囲のｎ個の波長点λｉ（ｉ＝
１，２，…，ｎ）においてそれぞれ独立した値をもって
いる。Ｈ（λｉ）、Ｂ（λｉ）、Ｔ（λｉ）およびＲ
（λｉ）の４つの二次構造のリファレンスＣＤ値を用い
て、被解析蛋白質のそれぞれの二次構造成分比ｆH、
ｆB、ｆT、ｆRを最小二乗法により求める。
【００１３】ここで、前記（１）式は厳密に成り立つの
ではなく、波長λｉ（ｉ＝１，２，…，ｎ）において誤
差（εｉ）が含まれており、これは（２）式で表せられ
る。 すなわち、誤差（εｉ）＝Ｐｉ−（ｆH・Ｈｉ＋ｆB・Ｂｉ＋ｆT・Ｔｉ＋ｆR・ Ｒｉ）（ｉ＝１，２，…，ｎ） … （２） ただし、前記（２）式において、Ｐｉ＝Ｐ（λｉ），Ｈ
ｉ＝Ｈ（λｉ），Ｂｉ＝Ｂ（λｉ），Ｔｉ＝Ｔ（λ
ｉ），Ｒｉ＝Ｒ（λｉ）である。したがって、ＣＰＵ１
２は、（２）式に示すこれらの誤差（εｉ）の平方和
（Ｓ）を最小にする蛋白質のそれぞれの二次構造成分比
ｆH、ｆB、ｆT、ｆRを求めるのである。
ではなく、波長λｉ（ｉ＝１，２，…，ｎ）において誤
差（εｉ）が含まれており、これは（２）式で表せられ
る。 すなわち、誤差（εｉ）＝Ｐｉ−（ｆH・Ｈｉ＋ｆB・Ｂｉ＋ｆT・Ｔｉ＋ｆR・ Ｒｉ）（ｉ＝１，２，…，ｎ） … （２） ただし、前記（２）式において、Ｐｉ＝Ｐ（λｉ），Ｈ
ｉ＝Ｈ（λｉ），Ｂｉ＝Ｂ（λｉ），Ｔｉ＝Ｔ（λ
ｉ），Ｒｉ＝Ｒ（λｉ）である。したがって、ＣＰＵ１
２は、（２）式に示すこれらの誤差（εｉ）の平方和
（Ｓ）を最小にする蛋白質のそれぞれの二次構造成分比
ｆH、ｆB、ｆT、ｆRを求めるのである。
【００１４】 平方和（Ｓ）＝ε１2＋ε２2＋…＋εｎ１2＝Σεｉ2＝Σ｛Ｐｉ−（ｆH・Ｈ ｉ＋ｆB・Ｂｉ＋ｆT・Ｔｉ＋ｆR・Ｒｉ）｝2 … （ ３） すなわち、前記（３）式を蛋白質のそれぞれの二次構造
成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRでそれぞれ偏微分したそれぞ
れの式を零とおく。 つまり、∂Ｓ／∂ｆH＝２Σ｛Ｈｉ（ｆH・Ｈｉ＋ｆB・Ｂｉ＋ｆT・Ｔｉ＋ｆR ・Ｒｉ）−Ｐｉ・Ｈｉ｝＝０より、ｆH・ΣＨｉ2＋ｆB・ΣＨｉ・Ｂｉ＋ｆT・Σ ・Ｈｉ・Ｔｉ＋ｆR・ΣＨｉ・Ｒｉ−ΣＰｉ・Ｈｉ＝０ … （４−１ ） を得る。
成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRでそれぞれ偏微分したそれぞ
れの式を零とおく。 つまり、∂Ｓ／∂ｆH＝２Σ｛Ｈｉ（ｆH・Ｈｉ＋ｆB・Ｂｉ＋ｆT・Ｔｉ＋ｆR ・Ｒｉ）−Ｐｉ・Ｈｉ｝＝０より、ｆH・ΣＨｉ2＋ｆB・ΣＨｉ・Ｂｉ＋ｆT・Σ ・Ｈｉ・Ｔｉ＋ｆR・ΣＨｉ・Ｒｉ−ΣＰｉ・Ｈｉ＝０ … （４−１ ） を得る。
【００１５】 同様にして、∂Ｓ／∂ｆBより、ｆH・ΣＨｉ・Ｂｉ＋ｆB・ΣＢｉ2＋ｆT・Σ Ｂｉ・Ｔｉ＋ｆR・ΣＢｉ・Ｒｉ−ΣＰｉ・Ｂｉ＝０ … （４− ２） を得る。 また、∂Ｓ／∂ｆTより、ｆH・ΣＨｉ・Ｔｉ＋ｆB・ΣＢｉ・Ｔｉ＋ｆT・ΣＴ ｉ2＋ｆR・ΣＴｉ・Ｒｉ−ΣＰｉ・Ｔｉ＝０ … （４−３） を得る。
【００１６】 ∂Ｓ／∂ｆRより、ｆH・ΣＨｉ・Ｒｉ＋ｆB・ΣＢｉ・Ｒｉ＋ｆT・ΣＴｉ・Ｒ ｉ＋ｆR・ΣＲｉ2−ΣＰｉ・Ｒｉ＝０ … （４−４ ） を得る。このようにして、ＣＰＵ１２は、前記（４）式
の４元連立１次方程式の解として、被解析蛋白質のそれ
ぞれの二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRを求めること
ができる。
の４元連立１次方程式の解として、被解析蛋白質のそれ
ぞれの二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRを求めること
ができる。
【００１７】本発明において特徴的なことは蛋白質の二
次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲を容易に選択
可能としたことであり、このために本実施態様において
はＣＰＵ１２が、長波長端固定手段と、仮成分比算出手
段と、合計値算出手段と、探索手段と、選択手段とを備
えることとした。すなわち、図３に示すように長波長端
固定手段（ｓ１００）は、計算波長範囲の長波長端を所
定の波長に固定する。本実施態様においては、例えばリ
ファレンスＣＤの長波長端、または被解析蛋白質のＣＤ
データの長波長端のうち、短い方の波長に設定してい
る。
次構造成分比の計算に用いる計算波長範囲を容易に選択
可能としたことであり、このために本実施態様において
はＣＰＵ１２が、長波長端固定手段と、仮成分比算出手
段と、合計値算出手段と、探索手段と、選択手段とを備
えることとした。すなわち、図３に示すように長波長端
固定手段（ｓ１００）は、計算波長範囲の長波長端を所
定の波長に固定する。本実施態様においては、例えばリ
ファレンスＣＤの長波長端、または被解析蛋白質のＣＤ
データの長波長端のうち、短い方の波長に設定してい
る。
【００１８】仮成分比算出手段（ｓ１０２）は、前記計
算波長範囲の短波長端を順次変更し、それぞれの二次構
造成分比が零または正の値をもつという拘束条件で二次
構造成分比を種々の最適化法で算出する。すなわち、蛋
白質のそれぞれの二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRが
零または正の値をもつという拘束条件を与えている。こ
のために本実施態様においては、ＣＰＵ１２が、前述の
ようにして求めた蛋白質の二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆ
T、ｆRの中で負の値をもつものがあると、これを零とお
いて前記（４）式を解く。この場合、３元連立１次方程
式を解くこととなる。
算波長範囲の短波長端を順次変更し、それぞれの二次構
造成分比が零または正の値をもつという拘束条件で二次
構造成分比を種々の最適化法で算出する。すなわち、蛋
白質のそれぞれの二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRが
零または正の値をもつという拘束条件を与えている。こ
のために本実施態様においては、ＣＰＵ１２が、前述の
ようにして求めた蛋白質の二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆ
T、ｆRの中で負の値をもつものがあると、これを零とお
いて前記（４）式を解く。この場合、３元連立１次方程
式を解くこととなる。
【００１９】合計値算出手段（ｓ１０４）は、前記仮成
分比算出手段（ｓ１０２）で算出された二次構造成分比
の合計値をそれぞれの計算波長範囲について算出する。
すなわち、波長λｉにおける蛋白質のそれぞれの二次構
造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRが求まると、その合計値を
算出する。
分比算出手段（ｓ１０２）で算出された二次構造成分比
の合計値をそれぞれの計算波長範囲について算出する。
すなわち、波長λｉにおける蛋白質のそれぞれの二次構
造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRが求まると、その合計値を
算出する。
【００２０】探索手段（ｓ１０６）は、前記合計値算出
手段（ｓ１０４）で算出された合計値の誤差がそれぞれ
所定の許容値以下であると、その中から短波長端が最も
大きい計算波長範囲を探索し（ｓ１０８）、また、合計
値の誤差がそれぞれ所定の許容値より大であると、その
中から合計値が１００％と最も近似する計算波長範囲を
探索する（ｓ１１０）。
手段（ｓ１０４）で算出された合計値の誤差がそれぞれ
所定の許容値以下であると、その中から短波長端が最も
大きい計算波長範囲を探索し（ｓ１０８）、また、合計
値の誤差がそれぞれ所定の許容値より大であると、その
中から合計値が１００％と最も近似する計算波長範囲を
探索する（ｓ１１０）。
【００２１】すなわち、リファレンスＣＤのもつｎ個の
波長点数のうち、大きい番号が短波長側であるとする。
ＣＰＵ１２は長波長端（ｎ＝１）を固定して短波長端を
１ステップずつ順次ずらして上記の最適化計算を行うの
である。この場合、ｎ個の波長点λｉ（ｉ＝１，２，
３，…，ｎ）から、ｎ−ｋ個の波長点λｉ（ｉ＝１，
２，３，…，ｎ−ｋ）までの、短波長端が順次ずれた波
長範囲での二次構造成分比ｆH，ｆB，ｆT，ｆRの合計値
が（ｋ＋１）個求まる。
波長点数のうち、大きい番号が短波長側であるとする。
ＣＰＵ１２は長波長端（ｎ＝１）を固定して短波長端を
１ステップずつ順次ずらして上記の最適化計算を行うの
である。この場合、ｎ個の波長点λｉ（ｉ＝１，２，
３，…，ｎ）から、ｎ−ｋ個の波長点λｉ（ｉ＝１，
２，３，…，ｎ−ｋ）までの、短波長端が順次ずれた波
長範囲での二次構造成分比ｆH，ｆB，ｆT，ｆRの合計値
が（ｋ＋１）個求まる。
【００２２】合計値に対して所定の許容値内の値が複数
個得られた場合、短波長端を最も長波長側のλｉ（ｉ＝
ｎ−ｋ）に設定し、その許容値より大の場合には、１０
０％に最も近い波長範囲のものを選ぶ。探索された波長
範囲はｎ−ｋ個の波長点数をもつことになる。ここで、
二次構造成分比の合計値の誤差が、それぞれ所定の許容
値以下である場合、その許容値以下の波長範囲であれ
ば、任意の波長範囲を選択しても、得られる結果は殆ど
かわりがない。
個得られた場合、短波長端を最も長波長側のλｉ（ｉ＝
ｎ−ｋ）に設定し、その許容値より大の場合には、１０
０％に最も近い波長範囲のものを選ぶ。探索された波長
範囲はｎ−ｋ個の波長点数をもつことになる。ここで、
二次構造成分比の合計値の誤差が、それぞれ所定の許容
値以下である場合、その許容値以下の波長範囲であれ
ば、任意の波長範囲を選択しても、得られる結果は殆ど
かわりがない。
【００２３】一方、測定技術から言えば、より短波長ま
で測定領域を延長するためには、溶媒の選択や、空気中
の酸素の吸収をさけるために行う円二色性分散計内の窒
素置換の問題などの困難が増えてくる。このために本実
施態様においては、ＣＰＵ１２が探索手段（ｓ１０６）
として、前記合計値算出手段で算出された合計値の誤差
がそれぞれ所定の許容値以下であると、その中から短波
長端が最も大きい計算波長範囲を探索し（ｓ１０８）、
また、合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値より大であ
ると、その中から合計値が１００％と最も近似する計算
波長範囲を探索しているのである（ｓ１１０）。
で測定領域を延長するためには、溶媒の選択や、空気中
の酸素の吸収をさけるために行う円二色性分散計内の窒
素置換の問題などの困難が増えてくる。このために本実
施態様においては、ＣＰＵ１２が探索手段（ｓ１０６）
として、前記合計値算出手段で算出された合計値の誤差
がそれぞれ所定の許容値以下であると、その中から短波
長端が最も大きい計算波長範囲を探索し（ｓ１０８）、
また、合計値の誤差がそれぞれ所定の許容値より大であ
ると、その中から合計値が１００％と最も近似する計算
波長範囲を探索しているのである（ｓ１１０）。
【００２４】前記探索手段（ｓ１０６），（ｓ１０
８），あるいは（ｓ１１０）で探索された計算波長範囲
が各成分比の算出手段（ｓ１１２）で計算に用いる計算
波長範囲として選択される。そして、探索手段で探索さ
れた計算波長範囲でカーブフィッティングを行って二次
構造成分比を計算する。すなわち、ＣＰＵ１２は、各二
次構造の成分比が零または正の値をもち、かつ、各二次
構造の成分比の合計値が１００％をもつという拘束条件
を与えて各二次構造の成分比を最小二乗法により算出す
る。
８），あるいは（ｓ１１０）で探索された計算波長範囲
が各成分比の算出手段（ｓ１１２）で計算に用いる計算
波長範囲として選択される。そして、探索手段で探索さ
れた計算波長範囲でカーブフィッティングを行って二次
構造成分比を計算する。すなわち、ＣＰＵ１２は、各二
次構造の成分比が零または正の値をもち、かつ、各二次
構造の成分比の合計値が１００％をもつという拘束条件
を与えて各二次構造の成分比を最小二乗法により算出す
る。
【００２５】このために本実施態様においては、選択手
段で選択された計算波長範囲における蛋白質のそれぞれ
の二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRに、ｆH＋ｆB＋ｆ
T＋ｆR＝１（１００％）という拘束条件を与えるため、
前記（３）式に、ランダムの成分比ｆR＝１−ヘリック
スの成分比（ｆH）−ベータの成分比（ｆB）−ターンの
成分比（ｆT）を代入している。 すなわち、平方和（Ｓ）＝Σｉ｛（Ｐｉ−Ｒｉ）−ｆH（Ｈｉ−Ｒｉ）−ｆB（ Ｂｉ−Ｒｉ）＋ｆT（Ｔｉ−Ｒｉ）｝2＝Σ｛ｐｉ−（ｆHｈｉ＋ｆBｂｉ＋ｆT・ ｔｉ）｝2 … （５ ）
段で選択された計算波長範囲における蛋白質のそれぞれ
の二次構造成分比ｆH、ｆB、ｆT、ｆRに、ｆH＋ｆB＋ｆ
T＋ｆR＝１（１００％）という拘束条件を与えるため、
前記（３）式に、ランダムの成分比ｆR＝１−ヘリック
スの成分比（ｆH）−ベータの成分比（ｆB）−ターンの
成分比（ｆT）を代入している。 すなわち、平方和（Ｓ）＝Σｉ｛（Ｐｉ−Ｒｉ）−ｆH（Ｈｉ−Ｒｉ）−ｆB（ Ｂｉ−Ｒｉ）＋ｆT（Ｔｉ−Ｒｉ）｝2＝Σ｛ｐｉ−（ｆHｈｉ＋ｆBｂｉ＋ｆT・ ｔｉ）｝2 … （５ ）
【００２６】ただし、前記（５）式において、ｐｉ＝Ｐ
ｉ−Ｒｉ，ｈｉ＝Ｈｉ−Ｒｉ，ｂｉ＝Ｂｉ−Ｒｉ，ｔｉ
＝Ｔｉ−Ｒｉ。そして、前記（５）式を二次構造成分比
ｆH、ｆB、ｆTで偏微分すると、３元連立１次方程式を
（４）式と類似の型で得る。これらの解としてヘリック
ス（Ｈ）、ベータ（Ｂ）およびターン（Ｔ）の成分比ｆ
H、ｆB、ｆTを求めることができるから、拘束条件（ラ
ンダムの成分比ｆR＝１−ヘリックスの成分比（ｆH）−
ベータの成分比（ｆB）−ターンの成分比（ｆT））より
ランダム（Ｒ）の成分比ｆRも求めることができる。
ｉ−Ｒｉ，ｈｉ＝Ｈｉ−Ｒｉ，ｂｉ＝Ｂｉ−Ｒｉ，ｔｉ
＝Ｔｉ−Ｒｉ。そして、前記（５）式を二次構造成分比
ｆH、ｆB、ｆTで偏微分すると、３元連立１次方程式を
（４）式と類似の型で得る。これらの解としてヘリック
ス（Ｈ）、ベータ（Ｂ）およびターン（Ｔ）の成分比ｆ
H、ｆB、ｆTを求めることができるから、拘束条件（ラ
ンダムの成分比ｆR＝１−ヘリックスの成分比（ｆH）−
ベータの成分比（ｆB）−ターンの成分比（ｆT））より
ランダム（Ｒ）の成分比ｆRも求めることができる。
【００２７】図５には本実施態様にかかる蛋白質の二次
構造解析用の装置１０によるミオグロビン（Myoglobi
n）の二次構造評価例が示されている。表１には本実施
態様にかかる装置１０を用いた場合と、従来の装置を用
いた場合との評価精度の比較結果が示されている。本分
析系では二次構造成分比の評価精度を検証する目的で、
計算波長範囲の長波長端として２４０ｎｍが択一される
条件とした。また、本実施態様では短波長端として１９
０ｎｍ〜２００ｎｍの中から最適な計算波長範囲が探索
され、従来例では１９０ｎｍが択一される条件とした。
構造解析用の装置１０によるミオグロビン（Myoglobi
n）の二次構造評価例が示されている。表１には本実施
態様にかかる装置１０を用いた場合と、従来の装置を用
いた場合との評価精度の比較結果が示されている。本分
析系では二次構造成分比の評価精度を検証する目的で、
計算波長範囲の長波長端として２４０ｎｍが択一される
条件とした。また、本実施態様では短波長端として１９
０ｎｍ〜２００ｎｍの中から最適な計算波長範囲が探索
され、従来例では１９０ｎｍが択一される条件とした。
【００２８】
【表１】 ──────────────────────────────────── 方法 本実施態様 従来例 ──────────────────────────────────── 長波長短 ２４０ｎｍ固定 ２４０ｎｍ固定 ──────────────────────────────────── 短波長端 探索工程 １９０ｎｍ固定 ──────────────────────────────────── ヘリックス ０．８９ ０．８８ ──────────────────────────────────── ベータ ０．８４ ０．７３ ──────────────────────────────────── ターン ０．４４ ０．１３ ──────────────────────────────────── ランダム ０．３８ ０．３９ ────────────────────────────────────
【００２９】この結果、従来例に比較して本実施態様に
かかる装置１０によれば、特にベータ構造の評価精度が
改善され、その他の二次構造についても評価精度が維持
されていることが理解される。以上のように、本実施態
様にかかる蛋白質の二次構造解析用の装置１０によれ
ば、蛋白質の二次構造成分比を計算するのに用いる計算
波長範囲を適切にしかも容易に選択することができるの
で、二次構造成分比の評価精度の改善が容易に行える。
かかる装置１０によれば、特にベータ構造の評価精度が
改善され、その他の二次構造についても評価精度が維持
されていることが理解される。以上のように、本実施態
様にかかる蛋白質の二次構造解析用の装置１０によれ
ば、蛋白質の二次構造成分比を計算するのに用いる計算
波長範囲を適切にしかも容易に選択することができるの
で、二次構造成分比の評価精度の改善が容易に行える。
【００３０】しかも、このような評価精度の改善が測定
の困難な１８０ｎｍ以下のＣＤデータを用いることなく
成し得るため、数多くのプログラムの使用者にとって非
常に有効である。また、アミノ酸配列からの二次構造予
測精度も年々向上してきており、本実施態様にかかる蛋
白質の二次構造解析用の装置は、これらの結果を確かめ
る簡便な手法として有効である。
の困難な１８０ｎｍ以下のＣＤデータを用いることなく
成し得るため、数多くのプログラムの使用者にとって非
常に有効である。また、アミノ酸配列からの二次構造予
測精度も年々向上してきており、本実施態様にかかる蛋
白質の二次構造解析用の装置は、これらの結果を確かめ
る簡便な手法として有効である。
【００３１】なお、本発明の蛋白質の二次構造解析に用
いる計算波長範囲選択方法としては、前記各構成に限定
されるものではなく、発明の要旨の範囲内で種々の変形
が可能である。すなわち、前記各構成ではリファレンス
ＣＤとしてヤン教授らのリファレンスＣＤを用いる場合
について説明したが、本発明はこれに限定されるもので
はない。すなわち、その他、使用者が測定した構造既知
の蛋白質ＣＤデータから計算によって作られたもの、ポ
リペプチドや変性蛋白質のＣＤデータから作られたもの
を用いることができる。
いる計算波長範囲選択方法としては、前記各構成に限定
されるものではなく、発明の要旨の範囲内で種々の変形
が可能である。すなわち、前記各構成ではリファレンス
ＣＤとしてヤン教授らのリファレンスＣＤを用いる場合
について説明したが、本発明はこれに限定されるもので
はない。すなわち、その他、使用者が測定した構造既知
の蛋白質ＣＤデータから計算によって作られたもの、ポ
リペプチドや変性蛋白質のＣＤデータから作られたもの
を用いることができる。
【００３２】これらの機能は、ある蛋白質の改変や変性
などに伴う二次構造成分比のモニタにも有効である。そ
の応用例として、図６，７には、温度コントロールシス
テムによって測定された蛋白質の熱変性ＣＤスペクトル
及びそれらの二次構造成分比の解析結果がそれぞれ示さ
れている。
などに伴う二次構造成分比のモニタにも有効である。そ
の応用例として、図６，７には、温度コントロールシス
テムによって測定された蛋白質の熱変性ＣＤスペクトル
及びそれらの二次構造成分比の解析結果がそれぞれ示さ
れている。
【００３３】また、前記構成では、最適化法のアルゴリ
ズムとして重回帰形の最小二乗法を用いた場合について
説明したが、種々の最適化法を用いることができる。ま
た、前記構成では、ＣＤデータがＨＤＤ（ハードディス
ク）に記憶されている場合について説明したが、たとえ
ばＦＤ（フロッピーディスク）などの他の記憶手段を用
いることができる。さらに、前記構成では、探索工程に
おいて、合計値の誤差が所定の許容値以下または大の場
合について説明したが、これらの合計値が、所定の許容
値以下と大の両者に存在する場合、二次構造成分比の合
計値の誤差が所定の許容値以下の計算波長範囲を優先し
て探索することが好適である。
ズムとして重回帰形の最小二乗法を用いた場合について
説明したが、種々の最適化法を用いることができる。ま
た、前記構成では、ＣＤデータがＨＤＤ（ハードディス
ク）に記憶されている場合について説明したが、たとえ
ばＦＤ（フロッピーディスク）などの他の記憶手段を用
いることができる。さらに、前記構成では、探索工程に
おいて、合計値の誤差が所定の許容値以下または大の場
合について説明したが、これらの合計値が、所定の許容
値以下と大の両者に存在する場合、二次構造成分比の合
計値の誤差が所定の許容値以下の計算波長範囲を優先し
て探索することが好適である。
【００３４】
【発明の効果】以上説明したように、本発明にかかる蛋
白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法によ
れば、蛋白質の二次構造成分比を計算するのに用いる計
算波長範囲を適切にしかも容易に選択することができる
ので、蛋白質の二次構造成分比の評価精度の改善を容易
になし得ることができる。
白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法によ
れば、蛋白質の二次構造成分比を計算するのに用いる計
算波長範囲を適切にしかも容易に選択することができる
ので、蛋白質の二次構造成分比の評価精度の改善を容易
になし得ることができる。
【図１】蛋白質の遠紫外ＣＤ測定例
【図２】本発明の実施態様にかかる蛋白質二次構造解析
用の装置の概略構成を示すブロック図
用の装置の概略構成を示すブロック図
【図３】本発明の実施態様にかかる装置の処理内容を示
すフローチャート
すフローチャート
【図４】本発明の実施態様にかかる装置で採用されてい
るヤン教授らのリファレンスＣＤスペクトル
るヤン教授らのリファレンスＣＤスペクトル
【図５】本発明の実施態様にかかる装置によるミオグロ
ビン（Myoglobin）の二次構造評価例
ビン（Myoglobin）の二次構造評価例
【図６】リボヌクレアーゼＡ（Ribonuclease A）の０．
００１規定硫酸（0.001N H2SO4）溶液中における熱変性
ＣＤスペクトル
００１規定硫酸（0.001N H2SO4）溶液中における熱変性
ＣＤスペクトル
【図７】リボヌクレアーゼＡ（Ribonuclease A）の０．
００１規定硫酸（0.001N H2SO4）溶液中の熱変性に伴う
二次構造変化の解析例
００１規定硫酸（0.001N H2SO4）溶液中の熱変性に伴う
二次構造変化の解析例
１０ … 蛋白質二次構造解析用の装置 １２ … ＣＰＵ（長波長端固定手段、仮成分比算出手
段、合計値算出手段、探索手段および各成分比算出手
段） １４ … ＲＯＭ １６ … ＨＤＤ
段、合計値算出手段、探索手段および各成分比算出手
段） １４ … ＲＯＭ １６ … ＨＤＤ
Claims (2)
- 【請求項１】 円二色性データから、蛋白質の二次構造
成分比の計算に用いる計算波長範囲を選択する方法であ
って、 前記計算波長範囲の長波長端を所定の波長に固定する長
波長端固定工程と、 前記計算波長範囲の短波長端を順次変更し、それぞれの
二次構造成分比が零または正の値をもつという拘束条件
で二次構造成分比を最適化法によって算出する仮成分比
算出工程と、 前記仮成分比算出工程で算出されたそれぞれの二次構造
成分比の合計値をそれぞれの計算波長範囲について算出
する合計値算出工程と、 前記合計値算出工程で算出された合計値の誤差がそれぞ
れ所定の許容値以下であると、その中から短波長端が最
も大きい計算波長範囲を探索し、また、合計値の誤差が
それぞれ所定の許容値より大であると、その中から合計
値が１００％と最も近似する計算波長範囲を探索する探
索工程と、 前記探索工程で探索された計算波長範囲を蛋白質の二次
構造成分比の計算に用いる計算波長範囲として選択する
選択工程と、 を備えたことを特徴とする蛋白質の二次構造解析に用い
る計算波長範囲選択方法。 - 【請求項２】 請求項１記載の方法において、前記探索
工程は前記二次構造成分比の合計値の誤差が許容値以下
の計算波長範囲を優先して探索することを特徴とする蛋
白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03318997A JP3768634B2 (ja) | 1997-01-31 | 1997-01-31 | 蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03318997A JP3768634B2 (ja) | 1997-01-31 | 1997-01-31 | 蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10221247A true JPH10221247A (ja) | 1998-08-21 |
| JP3768634B2 JP3768634B2 (ja) | 2006-04-19 |
Family
ID=12379548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03318997A Expired - Fee Related JP3768634B2 (ja) | 1997-01-31 | 1997-01-31 | 蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3768634B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002340793A (ja) * | 2001-05-11 | 2002-11-27 | Jasco Corp | タンパク質二次構造の面分布測定方法及び装置 |
| JP2003240773A (ja) * | 2002-02-19 | 2003-08-27 | Jasco Corp | 癌診断における異常部及び異常度特定方法 |
| JP5414073B2 (ja) * | 2008-09-10 | 2014-02-12 | 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 | 構造解析装置、及び構造解析方法 |
| CN104020124A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-09-03 | 暨南大学 | 基于吸收率择优的分光波长筛选方法 |
-
1997
- 1997-01-31 JP JP03318997A patent/JP3768634B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002340793A (ja) * | 2001-05-11 | 2002-11-27 | Jasco Corp | タンパク質二次構造の面分布測定方法及び装置 |
| JP4644383B2 (ja) * | 2001-05-11 | 2011-03-02 | 日本分光株式会社 | タンパク質二次構造の面分布測定方法及び装置 |
| JP2003240773A (ja) * | 2002-02-19 | 2003-08-27 | Jasco Corp | 癌診断における異常部及び異常度特定方法 |
| JP5414073B2 (ja) * | 2008-09-10 | 2014-02-12 | 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 | 構造解析装置、及び構造解析方法 |
| CN104020124A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-09-03 | 暨南大学 | 基于吸收率择优的分光波长筛选方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3768634B2 (ja) | 2006-04-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sreerama et al. | Estimation of protein secondary structure from circular dichroism spectra: inclusion of denatured proteins with native proteins in the analysis | |
| Ron | Property testing | |
| Sreerama et al. | Estimation of the number of α‐helical and β‐strand segments in proteins using circular dichroism spectroscopy | |
| Baumruk et al. | Predictions of secondary structure using statistical analyses of electronic and vibrational circular dichroism and Fourier transform infrared spectra of proteins in H2O | |
| Sreerama et al. | Estimation of protein secondary structure from circular dichroism spectra: comparison of CONTIN, SELCON, and CDSSTR methods with an expanded reference set | |
| Linge et al. | Automated assignment of ambiguous nuclear overhauser effects with ARIA | |
| US7474993B2 (en) | Selection of wavelengths for integrated circuit optical metrology | |
| Choromanski et al. | From complexity to simplicity: Adaptive es-active subspaces for blackbox optimization | |
| US7069153B2 (en) | CD metrology method | |
| Bro et al. | Review of chemometrics applied to spectroscopy: 1985-95, Part 3—Multi-way analysis | |
| CN111337606A (zh) | 一种应用于色谱分析的重叠峰处理办法及装置 | |
| Cottaz et al. | Line positions and intensities in the 2ν2/ν4 vibrational system of 14NH3 near 5–7 μm | |
| JP3768634B2 (ja) | 蛋白質の二次構造解析に用いる計算波長範囲選択方法 | |
| Johnson | Consumer similarity judgments: A test of the contrast model | |
| Dar et al. | A performance study of transitive closure algorithms | |
| Sudha et al. | Review of experimental design in analytical chemistry | |
| CN113030012A (zh) | 基于多级偏最小二乘算法的光谱分析方法及系统 | |
| Westerhaus | Interpretation of Regression Statistics MO Westerhaus The preferred statistics to use for evaluating calibration regressions are based on validation samples separate from the calibration samples. The regression statistics | |
| WO2014125819A1 (ja) | 解析装置 | |
| JP3671241B2 (ja) | 非線形多変量赤外解析法 | |
| Gulati et al. | A comparison of synthetic and observed spectra for GK dwarfs using artificial neural networks | |
| US20040034477A1 (en) | Methods for modeling chromatographic variables | |
| JPH0750042B2 (ja) | スペクトル分析装置における状態分析方法 | |
| Sengupta | Optimal choice of a new observation in a linear model | |
| Stoyanov et al. | 8 Response-Surface Modeling and Experimental Design |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040120 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20060113 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060124 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060202 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100210 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100210 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110210 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110210 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120210 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120210 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130210 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140210 Year of fee payment: 8 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |