JPH10120597A

JPH10120597A - リンパ節高集積性コロイド粒子

Info

Publication number: JPH10120597A
Application number: JP8298143A
Authority: JP
Inventors: Yasuyoshi Mori; 安義森; Akiyoshi Kagawa; 晶良香川; Harufumi Tsuge; 晴文柘植
Original assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Current assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Priority date: 1996-10-22
Filing date: 1996-10-22
Publication date: 1998-05-12

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明は、リンパ節の磁気共鳴断層撮影法（Ｍ
ＲＩ）に有用な超常磁性金属酸化物よりなるコアを適当
な被覆物で覆ったリンパ節集積性のコロイド粒子を提供
することを目的とする。特にコロイド粒子の粒径を調節
することにより、静脈や皮下への注射でリンパ節に特異
的に取り込まれるコロイド粒子に関する。【解決手段】超常磁性金属酸化物のコアを適当な被覆物
で覆ったコロイド粒子であって、平均粒径が散乱光法で
測定した時５〜２５ｎｍであるコロイド粒子とすること
により、リンパ節高集積性のＭＲＩ造影剤を得た。さら
に超常磁性金属酸化物がＦｅ³⁺とＦｅ²⁺の混合物であ
り、被覆物がデキストランであり、コアに結合したデキ
ストランの重量とコアを形成する鉄の重量の比が１．０
以上であるコロイド粒子が良好なリンパ節集積性を示し
た。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、磁気共鳴断層撮影
（ＭＲＩ、Magnetic Resonance Imaging）に有用な超常
磁性金属酸化物よりなるコアを被覆物で覆ったリンパ節
高集積性コロイド粒子に関する。特にコロイド粒子の粒
径や表面電荷を調節し、静脈や皮下への注射でリンパ節
に特異的に取り込まれるコロイド粒子に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】生体
内の大きなタンパク質および特定の細胞（リンパ球）は
血液から組織液中に進み、リンパ系を介して再び血液に
入るというサイクルで循環している。また、消化管での
脂肪の消化の生成物、乳び脂粒はリンパ系を介して、血
液循環中に運ばれる。このように、リンパ系には、体液
およびタンパク質、脂肪粒子等を含む粒状物質を運ぶと
いう重要な役割がある。さらに、リンパ系は腫瘍が広が
る際にも重要な役割を果たす。悪性細胞はリンパ系に入
り、リンパ節によって捕捉され得るが、そこで第二の腫
瘍が生じ、転移が起こる。最終的に、リンパ系の全体が
巻き込まれ、リンパ節のみならず種々の臓器に転移が起
こる。従って、悪性疾患の診断の際にはリンパ節の検査
が重要である。

【０００３】このリンパ節の検査には、リンパ節を生検
し（biopsy）、組織検査を行う方法と、画像診断法が知
られている。リンパ節の生検は侵襲性が高く、深在性の
リンパ節は、殆どの場合手術を必要とすることから容易
に行うことができない。画像診断法には、Ｘ線撮影法、
ＭＲＩ、超音波撮影法がある。画像の解像度の問題のた
めに、リンパ節の撮影は通常、Ｘ線ＣＴ(Computed Tomo
graphy)、ＭＲＩのいずれかで行われる。近年、画像診
断は患者への負担が少なく容易に行えることから、腫瘍
の診断には不可欠な診断法となっている。従って、腫瘍
の診断と同時に腫瘍周辺リンパ節への腫瘍転移の有無を
診断することは非常に重要なことである。

【０００４】しかし、造影剤を用いない単純撮影では、
微小なリンパ節は確認することが難しく、また、従来の
造影剤を用いた造影画像でさえも、リンパ節の腫瘍転移
の有無の判断は、リンパ節の大きさによる判断でしか行
うことができなかった。すなわち、腫瘍の転移（悪性）
によるリンパ節の肥大であるのか、炎症性（良性）の肥
大であるのかを知りえなかったのである。さらに、肥大
の認められない腫瘍転移リンパ節の検出は完全に不可能
である。

【０００５】ところが、近年、超常磁性酸化鉄コロイド
粒子をＭＲＩ造影剤として用いたリンパ節の画像診断法
が注目されている。ＭＲＩ装置は、人体を静磁場の中に
おき、電磁波を使って人体の構成成分である水素原子に
共鳴を起こさせ、水素がもとの静磁場の状態に戻るまで
の時間を数値化して、画像化する装置である。電磁波に
共鳴した水素原子がもとの状態に戻る様式にはＴ₁緩和
（スピン−格子緩和）とＴ₂緩和（スピン−スピン緩
和）があり、このＴ₁緩和時間とＴ₂緩和時間は組織や臓
器によって異なっている。この緩和時間の違いを利用し
て、コンピュータ処理により撮影断面の画像化を行う撮
影法がＭＲＩである。ＧｄやＦｅは、この緩和時間を短
縮する効果を有することから、これらの金属元素を含む
化合物を用いると、組織や臓器の緩和時間の相違を強調
することが可能になり、標的とする臓器や、臓器間のコ
ントラストを強調するために、これらの化合物を含む造
影剤が開発され利用されている。

【０００６】超常磁性酸化鉄コロイド製剤は、これらの
造影剤の中でも、強いＴ₂緩和時間の短縮効果があり、
肝臓・脾臓の細網内皮系細胞やリンパ節のマクロファー
ジ及び骨髄細胞に取り込まれ貪食されることから、これ
らの臓器や組織のＭＲＩ造影剤として利用できることが
知られている。肝臓やリンパ節のほとんどの腫瘍細胞に
は、細網内皮系細胞やマクロファージが存在しないため
に、超常磁性酸化鉄コロイド製剤は、腫瘍には取り込ま
れない。腫瘍の周囲の正常組織にはこれらの細胞が存在
するために、コロイドの取り込みがおこり画像の暗化が
起こる。一方腫瘍は暗化しないので腫瘍と正常組織のコ
ントラストが造影剤により強調され、腫瘍の検出が容易
になる。リンパ節では正常なリンパ節が暗化するのに対
して転移性のリンパ節は暗化しないために転移の有無を
見分けることが可能になる。

【０００７】コロイド粒子は細網内皮系やリンパ系に入
り込み、種々の臓器やリンパ節に治療用薬剤や造影用薬
剤を運ぶことが知られている。特に造影剤に限定すれ
ば、例えば特公平６−６５３８号には２ｎｍ−５０，０
００ｎｍのコロイド粒子が、特公平６−７８２４６号に
は１０−３，０００ｎｍ、特公平７−５５９１２号には
１０−１，００００ｎｍ、公表昭６１−５００７８６号
には１０−１，０００，０００ｎｍ、公表昭６４−５０
０１９６号には５−５００ｎｍ、公表平７−５００８２
３号には１−２，０００ｎｍ、公表平８−５０８７２１
号には１０−１，０００ｎｍ、ＷＯ９２／１２７３５号
には１０−５００ｎｍ、ＵＳ５，２６２，１７６号には
１０−５０ｎｍの、コロイド粒子が記載され、それを体
内に投与し、血中半減期を測定したり、肝臓や脾臓をは
じめとする種々の臓器における造影剤としての効果が調
べられたりしている。

【０００８】各臓器への集合性において、コロイド粒子
の大きさは重要な要件で、特公平３−７５５３４号によ
れば、３０−２００ｎｍのコロイド粒子が肝臓や脾臓に
集まり易く、２−３０ｎｍのコロイド粒子がリンパ節に
集まり易いとされている。しかし、ここで用いられたコ
ロイド粒子はヒト血清アルブミン−Ｓｎ²⁺−界面活性剤
よりなるコロイド製剤で、超常磁性金属酸化物をコアに
持つものではない。また特開平６−２１８２７１号によ
ればコロイド粒子の粒径の分散も造影剤の性能の重要な
要素であることが記載され、実際に粒子の９０％以上が
粒径範囲２−１０ｎｍを示すコロイド粒子を製造してい
る。しかしながらその粒子が実際に造影剤として使用可
能であったかどうかは記載されていない。また公表平８
−５０１５３４号によれば粒子表面の疎水性／親水性の
度合も各臓器への集合性に関与しているとされている。

【０００９】本発明と同様にリンパ節をターゲットとし
た造影剤や薬剤への特許として例えば以下のものが挙げ
られる。特開昭６２−４２９３５号では粒径が１−２０
ｎｍのＴｃ^99m−イオウ−アンチモンコロイドが、リン
パ系のシンチグラフィーに有効との記載がある。公表昭
６４−５００１９６号では、超常磁性金属酸化物粒子を
コアとしその表面をポリマー成分で被覆した粒径が５−
５００ｎｍであるコロイド粒子を調製し、ラットに静脈
注射し、各臓器への集積性を調べている。また請求項に
はリンパ又はリンパ節でもＭＲＩ像が形成されると記載
されているが、実際の例示はない。公表平４−５０６０
７８号では、リンパ管造影に、粒径５−９００ｎｍのフ
ルオロカーボン乳剤を使用している。公表平７−５０９
４６７号には、リンパ系に蓄積する診断剤として、標識
及びターゲット指向部位が連結した粒径が１００ｎｍ以
下の担体粒子が記載されている。公表平８−５０１５３
４号には、リンパ系に活性薬剤を搬送するための組成物
として、粒子表面の疎水性比（ＨＩＣ比）を調節した粒
径１−２５０ｎｍのコロイド粒子が記載され、具体的に
６０ｎｍポリスチレン粒子の表面を非イオン性界面活性
剤でコーティングしたコロイド粒子のリンパ節への集積
の度合を調べている。

【００１０】上述のように種々の造影剤やリンパ節集合
性の粒子が開発されているが、製造法が煩雑でかつ収率
が不良であったり、粒子が生体内で難分解性であった
り、粒子の安定性が悪く保存中に自己凝集を起したり、
高価であったり、リンパ節に特異的に集積せず良好なコ
ントラストが得られなかったり、と生体に無害でしかも
リンパ節に特異的に取り込まれる造影剤は今まで開発さ
れていない。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明はリンパ節に特異
的に取り込まれるコロイド粒子に関する。本発明者は従
来のリンパ節集積性の薬剤や造影剤にあき足らず、鋭意
努力の結果、超常磁性金属酸化物のコアを適当な被覆物
で覆った特定の粒径を有するコロイド粒子が、従来のコ
ロイド粒子よりもリンパ節に高度に集積することをみい
だし、リンパ節に高集積性のコロイド粒子である本発明
を完成したのである。

【００１２】本発明は、超常磁性金属酸化物のコアを適
当な被覆物で覆ったコロイド粒子であって、該コロイド
粒子の平均粒径が散乱光法で測定した時５ｎｍ以上でか
つ２５ｎｍ未満であるリンパ節集積性のコロイド粒子で
ある。また、本発明のコロイド粒子表面のゼータ電位は
−１５ｍＶ〜０ｍＶの範囲であることが望ましい。さら
に、本発明のコロイド粒子がデキストラン被覆の酸化鉄
コロイドである場合には、結合デキストラン量（ｇ）と
鉄（ｇ）の重量比（結合デキストラン／鉄）は１．０以
上であることが望ましい。

【００１３】コロイド粒子表面のゼータ電位あるいはコ
アに対する被覆物の重量比は本発明の重要な要件で、本
発明のコロイド粒子の細網内皮系細胞への貪食を低減
し、結果的にリンパ節への集積を促進する要因となる。
すなわち、−１５ｍＶを越える陰性荷電のゼータ電位
は、生体内のオプソニン効果を誘導しやすく、肝臓及び
脾臓の細網内皮系細胞による当該コロイド粒子の貪食作
用を増長する要因となる。また、コアの表面が被覆物に
より完全に被覆されず、不完全な被覆状態のコロイド粒
子も、生体内のオプソニン効果を誘導しやすいものと考
えられる。このコア表面の被覆状態はコアを形成する金
属酸化物の重量と被覆物の重量比で表すことができ、デ
キストラン酸化鉄コロイドの場合は、その重量比が１．
０以上であることが望ましい。なおここで言う鉄の重量
とは、コアとして酸化鉄における鉄の重量で、原子吸光
光度計によって求められる。

【００１４】本発明のコロイド粒子の蛋白換算の分子量
は粒径に影響する重要なファクターで、本発明のコロイ
ド粒子においてはゲル濾過法による蛋白換算の分子量が
１００−７５０キロダルトンであるコロイド粒子が好ま
しい。

【００１５】本発明のコロイド粒子のコアは超常磁性金
属酸化物よりなっている。そのコアとしては遷移金属の
酸化物、特にＦｅ³⁺とＦｅ²⁺の混合物が好ましくその割
合は２：１が望ましいが、超常磁性を示す範囲であれ
ば、この限りではない。

【００１６】コロイド粒子の磁化率は造影効果に影響を
及ぼすファクターで、本発明では５０，０００×１０^-6
ｃｇｓ／ｇＦｅ以下であるコロイド粒子が本発明に適し
ている。

【００１７】被覆物の種類及び分子量はコロイド粒子の
粒径や表面荷電に影響を及ぼす重要なファクターであ
る。本発明のコロイド粒子の被覆物は炭水化物、蛋白
質、オルガノシラン及びそれらの複合材料よりなる。被
覆物が炭水化物の場合は、デキストラン、デンプンが用
いられ、多糖類が良好な結果をもたらす。その中でも、
デキストランは本発明に好ましく、特に分子量の範囲が
５，０００〜５００，０００であるデキストランは本発
明に有用である。被覆物が蛋白質の場合はヒト血清アル
ブミンが本発明に好ましい被覆物として挙げられる。

【００１８】またコアに鉄酸化物、被覆に蛋白や多糖類
を用いた本発明のコロイド粒子は生物分解性であり、生
体内に投与すると体内で消化されて鉄は血液の材料に、
被覆物はエネルギー源や蛋白源として代謝される。

【００１９】本発明のコロイド粒子は既存の製造法（米
国特許第５，２６２，１７６号）とほぼ同様な操作で製
造される。既存の製造法の試薬の量比を変更し、得られ
た超常磁性酸化鉄−デキストランコロイド溶液をSephar
ose CL-4Bカラムを用いたゲル濾過で分画することによ
り容易に本発明のコロイド粒子を得ることができる。製
造時の試薬の量比、Ｆｅ³⁺とＦｅ²⁺の割合やデキストラ
ン量を変更することにより分画後の本発明のコロイド粒
子の性質や収量も変化する。実施例に示すが、分画前に
はほとんどリンパ節に集積しなかったコロイド粒子がSe
pharose CL-4Bカラムで分画し、特定の粒径のコロイド
粒子を集めると、本発明のリンパ節高集積性コロイド粒
子となる。操作自体は簡単な操作であるが、得られる効
果は大きく、今まで何も報告がないことは不思議であ
る。

【００２０】上述の方法で得られたコロイド溶液は０．
２μｍのフィルターで濾過滅菌し、凍結乾燥することに
より、リンパ節集積性のＭＲＩ造影剤とすることができ
る。使用に際しては、凍結乾燥品を注射用生理食塩液で
溶解し、静脈注射もしくは皮下注射する。なお、２０ｍ
ｇＦｅ／ｍｌ程度の濃度に溶解すると投与量の計算が容
易となり、利便性が良い。なお、コロイド溶液の滅菌法
は濾過滅菌が好ましく、一般的なオートクレーブ滅菌は
本発明のコロイド粒子には不向きである。オートクレー
ブ滅菌するとコロイド粒子のリンパ節集積性が損なわれ
ることがある。正確な理由は不明であるが、オートクレ
ーブの熱あるいは圧力といった物理的なショックにより
コロイド粒子が変性するものと考えられる。

【００２１】また本発明のコロイド粒子は、コアに放射
性金属を用いたり、コロイド被覆部分に適当な標識を付
加すればＭＲＩのみならずＸ線や超音波によるリンパ節
造影法にも使用できる。また適当な薬剤をコロイド粒子
のコアや被覆物に含ませ、ドラッグデリバリーシステム
（ＤＤＳ）用の薬剤として、リンパ節を標的とするター
ゲット療法にも使用可能である。

【００２２】以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細
に説明する。なお、下記実施例は単に説明のためのもの
であり、本発明を何ら限定するものではない。

【実施例】

【００２３】［実施例１］超常磁性酸化鉄−デキスト
ランコロイド溶液の調製方法２５．５ｇのＦｅＣｌ₃・６Ｈ₂Ｏ及び１０．２ｇのＦｅ
Ｃｌ₂・４Ｈ₂Ｏを溶解した水溶液６００ｍｌと、粉末状
のデキストラン（分子量１０，０００ダルトン）３６０
ｇと３０％ＮＨ₄ＯＨ溶液３０ｍｌを用いて、米国特許
第５，２６２，１７６号の方法に準じて、超常磁性酸化
鉄−デキストランコロイド溶液を調製した。上記の方法
で得られた超常磁性酸化鉄−デキストランコロイド溶液
（分画前の造影剤）は、Sepharose CL-4Bカラム（３．
２×９０ｃｍ）を用いて、０．２８％クエン酸ナトリウ
ム−０．８％ＮａＣｌ溶液を移動相として、流速１．７
ｍｌ／ｍｉｎでゲル濾過し、５．１ｍｌづつ分取し、フ
ラクションを得た。原子吸光法で求めたコロイド溶液１
ｇ当たりの鉄濃度の分布を図１に示す。別に各フラクシ
ョンの粒径を散乱光法で求め、表１に示すとおり各フラ
クションをプールし、Fraction Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの
５つのフラクションプールを得、分画分子量３０，００
０の濾過膜を用いた限外濾過で濃縮した。なおコロイド
粒子がほとんど含まれないフラクションプールＡとＧは
廃棄した。なお、本実施例においてアルファベットで記
載したFractionはフラクションプールを意味する。

【００２４】

【表１】

【００２５】各種物性データの測定 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆは下記の方法で、それぞ
れ、平均粒子径、ゼータ電位、分子量、結合デキストラ
ン量、磁化率及び磁気共鳴緩和度を測定した。なお、一
部のFractionは電子顕微鏡によりそのコアの径を求め
た。１．平均粒子径 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ溶液それぞれ０．８ｍｌを
水１０ｍｌに希釈し、平均粒子径測定用セルに分注し、
光散乱光度計ＥＬＳ−８００（大塚電子製）を用いて、
平均粒子径の測定を行った。２．ゼータ電位 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ溶液０．５ｍｌを２．５ｍ
Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．０）１００ｍｌに加えたもの
を試料として、ゼータ電位測定用セルにとり、ＥＬＳ−
８００を用いて、ゼータ電位の測定を行った。３．分子量 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ溶液を、Sepharose CL-4B
カラム（１．０×４５０ｍｍ）を用いて、０．１％アジ
化ナトリウム０．２５％塩化ナトリウムを含む１０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．３）を移動相として、ゲル濾過
した。各Fractionの分子量は、このゲル濾過により得ら
れた紫外部吸収のピークの溶出時間を標準タンパク質の
溶出曲線に照合して分子量を求めた。４．結合デキストラン量 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの一部を採取し、フェノー
ル−硫酸法にて総デキストラン量を測定した。さらに各
Fractionの限外濾過により得られた濾液のデキストラン
量を同じくフェノール−硫酸法にて測定し、下記式によ
り結合デキストラン量を算出した。結合デキストラン＝総デキストラン−遊離デキストランなお、各Fractionの鉄の量は原子吸光法（日立製、Ａ−
１８００原子吸光計）で求めた。５．磁化率 FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの磁化率は１Ｍニッケル水
溶液を標準物質として、磁気天秤（Johnson-Matthey社
製 Model MSBal）にて測定した。測定方法は磁気天秤の
マニュアルに従って行った。６．磁気共鳴緩和度（Ｒ₁、Ｒ₂）(Relaxivity) FractionＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの緩和速度（１／Ｔ₁、１
／Ｔ₂）を、ＮＭＲスペクトロメーター（日本ブルカー
社、ＰＣ１２０／０．４７Ｔ(20MHz)）を用いて測定
し、緩和速度の濃度依存性のグラフにおける傾きから磁
気共鳴緩和度（Ｒ₁、Ｒ₂）を求めた（測定温度４０
℃）。

【００２６】各種物性データの測定結果分画前の造影剤及びFraction Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの平
均粒子径、ゼータ電位、分子量、結合デキストラン量及
び磁化率を表２に示す。

【表２】

【００２７】［実施例２］リンパ節のＭＲＩ画像の撮
影及び鉄染色腋窩リンパ節肥大化ラットの作製体重３００〜４００ｇのWistar系雄性ラット５匹の右上
側腹部及び右前肢padにFreundes Complete Adjuvantを
０．１ｍｌ／ｓｉｔｅ皮下投与することにより、腋窩リ
ンパ節に炎症性の肥大化を起こさせた。このComplete A
djuvant投与７日後のラットを腋窩リンパ節肥大化ラッ
トとして試験に用いた。

【００２８】方法腋窩リンパ節肥大化ラットの腹腔にペントバルビタール
ナトリウムを投与し麻酔を施し、全身用ＭＲ断層撮影機
器(ＧＥ社 Signa 1.5T)にて、肥大化した腋窩リンパ節
のＴ₁強調、Ｔ₂強調及びプロトン密度強調水平断像を撮
影した。撮影後、尾静脈より、分画前の造影剤及びFrac
tion Ｂ，Ｄ，Ｆの各分画製剤を、それぞれ、９０μｍ
ｏｌＦｅ／ｋｇ体重となるように投与した。造影剤を投
与した２０時間後に、再びラットに麻酔を施し、投与前
と同様の方法で肥大化した腋窩リンパ節の撮影を行い、
投与前の撮影結果と比較検討した。撮影を終えたラット
は、放血致死せしめ、直ちに、腋窩リンパ節、肩胛骨下
リンパ節、腸間膜リンパ節、肝臓、脾臓及び腎臓を採取
した。採取した臓器はホルマリン固定し、薄切切片を作
成した後、組織中の鉄分をベルリンブルー染色した。

【００２９】結果分画前の造影剤（３０５５ＤＡ１）及び各Fractionの投
与前（Ｐｒｅ）及び投与後（Ｐｏｓｔ）の、腋窩リンパ
節を含む胸部水平断面像のプロトン密度強調画像（ＰＤ
ＷＩ）を図２〜５に示す。Fraction Ｂ及び分画前の造
影剤を投与したラットの腋窩リンパ節の暗化は殆ど認め
られなかった。一方、Fraction Ｄはわずかな暗化が見
られ、Fraction Ｆを投与したラットの腋窩リンパ節
は、投与前に比較して、明らかな暗化が認められた。特
に、Fraction Ｆを投与したラットの腋窩リンパ節で
は、著明な造影効果（暗化）が認められた。造影剤の投
与による腋窩リンパ節の暗化の程度は、Fraction Ｂ＝
分画前の造影剤＜Ｄ＜＜Ｆの順序となった。また、造影
剤投与２０時間後に採取した腋窩リンパ節標本のベルリ
ンブルー染色における鉄染色の程度も、Fraction Ｆが
その他のFractionに比較して明らかに強い鉄コロイドの
沈着を認める結果となった（図６）。それに対して、肝
臓のベルリンブルー染色は、Fraction Ｂで強い鉄沈着
が認められ、Fraction Ｆでは、鉄の染色を殆ど認め
ず、Fraction Ｄ及び分画前の造影剤はその中間の染色
の程度であった（図７)。この結果より、Fraction Ｆは
リンパ節集積性で造影剤として使用可能であることが確
認された。

【００３０】［実施例３］緩和時間（Ｔ₁、Ｔ₂）の測
定方法正常Wistar系雄性ラット（体重３００〜４００ｇ）の腹
腔にペントバルビタールナトリウムを投与し麻酔を施し
た後、尾静脈より、Fraction Ｅのコロイド製剤を、９
０，３０，１０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ体重となるように投
与した。投与２０時間後に、ラットは放血致死せしめ、
直ちに、腋窩リンパ節、腸間膜リンパ節、肝臓及び脾臓
を採取した。また、同時に造影剤を投与していないラッ
トの臓器も同様に採取した。採取した臓器は、サンプル
管に詰めて、ＮＭＲスペクトロメーター（日本ブルカー
社、ＰＣ１２０／０．４７Ｔ）にて緩和時間（Ｔ₁、
Ｔ₂）の測定を行った(温度４０℃)。緩和時間の測定が
終了した臓器は、ホルマリン固定し、薄切切片を作製し
た後ベルリンブルー染色を行った。

【００３１】結果 Fraction Ｅを投与したラットの各臓器の緩和時間を、
造影剤無投与ラットの臓器の緩和時間と比較した。肝臓
の緩和時間はＴ₁及びＴ₂とも、９０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ
投与ラットにのみ、無投与ラット比較して、緩和時間の
短縮が認められ、１０及び３０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与
ラットの肝臓の緩和時間には短縮効果が認められなかっ
た。一方、腋窩リンパ節と腸間膜リンパ節の緩和時間に
は用量依存的な緩和時間の短縮が認められ、Fraction
Ｅが用量依存的に、ラットのリンパ節に分布しているも
のと考えられた。結果を表３に示す。腋窩リンパ節の組
織標本のベルリンブルー染色では９０μｍｏｌＦｅ／ｋ
ｇ投与ラットで強い鉄の分布が認められ、３０及び１０
μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与ラットでは、鉄染色の程度に大
きな差は認めないものの１０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与ラ
ットに比較して、３０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与ラットの
方が、やや鉄の分布が多い結果となった。腋窩リンパ節
の鉄染色の程度を示すと、９０＞＞３０＞１０となっ
た。これに対して肝臓のベルリンブルー染色では、９０
μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与ラットで若干の鉄染色を認めた
が、３０及び１０μｍｏｌＦｅ／ｋｇ投与のラットで
は、無投与ラットとほぼ同等の染色の程度であり、鉄の
分布がほとんど無く、緩和時間の測定結果を裏付ける結
果となった。この結果より、Fraction Ｅもリンパ節集
積性で造影剤として使用可能であることが確認された。

【００３２】

【表３】

【００３３】

【発明の効果】本発明に基づいてコロイド粒子の粒径あ
るいは表面電荷並びにコロイド表面の被覆構造等を調節
することにより、肝臓・脾臓の細網内皮系細胞に捕捉さ
れにくく、リンパ節に特異的に集積するコロイド粒子を
完成させることができた。このコロイド粒子を用いるこ
とにより、リンパ節を対象とする画像診断用造影剤を製
造することができる。この造影剤は、従来の超常磁性酸
化鉄コロイドを使用するよりも、遥かに少量の投与量に
て、高いリンパ節の造影効果を得ることができ、造影剤
投与による患者の負担とリスクを著しく低減することが
できる。また、リンパ節の腫瘍転移の有無を、単なるリ
ンパ節の肥大のみではなく質的な異常をも含めた情報と
して得ることができ、腫瘍の外科的切除時に正常なリン
パ節の摘出を避け、異常なリンパ節のみを摘出すること
ができる。このことは、リンパ節の摘出による術後の四
肢の浮腫などを必要最小限にとどめ、患者のクォリティ
ーオブライフの向上に貢献をする。本発明によるコロイ
ド粒子は造影剤のみならず、コロイド表面やコアに抗ガ
ン剤などの治療薬を含ませることにより、リンパ節をタ
ーゲットとするターゲット療法の治療薬としても有効で
あり、医学の世界の発展に役立つものと考えられる。

【図面の簡単な説明】

【図１】超常磁性酸化鉄コロイド溶液のゲル濾過結果。
横軸はフラクション番号を、縦軸は原子吸光法で得られ
たコロイド溶液１ｇ中の鉄の含量（ｍｇ）。

【図２】分画前の造影剤（３０５５ＤＡ１）の投与前
（Ｐｒｅ）及び投与後（Ｐｏｓｔ）のプロトン密度強調
画像（ＰＤＷＩ）。

【図３】Fraction Ｂの投与前（Ｐｒｅ）及び投与後
（Ｐｏｓｔ）のプロトン密度強調画像（ＰＤＷＩ）。

【図４】Fraction Ｄの投与前（Ｐｒｅ）及び投与後
（Ｐｏｓｔ）のプロトン密度強調画像（ＰＤＷＩ）。

【図５】Fraction Ｆの投与前（Ｐｒｅ）及び投与後
（Ｐｏｓｔ）のプロトン密度強調画像（ＰＤＷＩ）。

【図６】造影剤投与後の腋窩リンパ節組織標本のベルリ
ンブルー染色の顕微鏡像。

【図７】造影剤投与後の肝臓組織標本のベルリンブルー
染色の顕微鏡像。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】超常磁性金属酸化物のコアを被覆物で覆っ
たコロイド粒子であって、該コロイド粒子の平均粒径が
散乱光法で測定した時５ｎｍ以上でかつ２５ｎｍ未満で
あるリンパ節集積性のコロイド粒子
【請求項２】前記超常磁性金属酸化物のコアサイズが１
〜１５ｎｍである請求項１記載のコロイド粒子
【請求項３】前記コロイド粒子表面のゼータ電位が−１
５ｍＶ〜０ｍＶである、請求項１記載のコロイド粒子
【請求項４】前記コロイド粒子のゲル濾過法による蛋白
換算の分子量が１００〜７５０キロダルトンの請求項１
記載のコロイド粒子
【請求項５】超常磁性金属酸化物が遷移金属の酸化物で
ある請求項１記載のコロイド粒子
【請求項６】超常磁性金属酸化物がＦｅ³⁺とＦｅ²⁺の混
合物である請求項５記載のコロイド粒子
【請求項７】被覆物が炭水化物、蛋白質、もしくはそれ
らの複合材料よりなる請求項１記載のコロイド粒子
【請求項８】被覆物がヒト血清アルブミンである請求項
７記載のコロイド粒子
【請求項９】被覆物が多糖類である請求項７記載のコロ
イド粒子
【請求項１０】被覆物がデキストランである請求項９記
載のコロイド粒子
【請求項１１】超常磁性金属酸化物が酸化鉄であり、コ
アに結合したデキストランの重量（ｇ）とコアを形成す
る鉄の重量（ｇ）の比が１．０以上である請求項１０記
載のコロイド粒子
【請求項１２】コロイド粒子が生物分解性である請求項
１記載のコロイド粒子
【請求項１３】請求項１記載のコロイド粒子を主成分と
する造影剤
【請求項１４】請求項１のコロイド粒子を用いるリンパ
節の造影法
【請求項１５】請求項１のコロイド粒子を用いるリンパ
節の磁気共鳴断層撮影法
【請求項１６】請求項１のコロイド粒子を薬剤搬送物と
して用いるリンパ節への薬剤集積法