JPH0968534A - アミノ酸配列分析装置 - Google Patents
アミノ酸配列分析装置Info
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- JPH0968534A JPH0968534A JP22383795A JP22383795A JPH0968534A JP H0968534 A JPH0968534 A JP H0968534A JP 22383795 A JP22383795 A JP 22383795A JP 22383795 A JP22383795 A JP 22383795A JP H0968534 A JPH0968534 A JP H0968534A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来の分析装置では、反応槽は１個のものが
主で、複数の試料を同時に分析することができなかっ
た。 【解決手段】 反応槽２、２´内のガラスフィルタ上に
異なるペプチドを保持した後、第１試薬供給装置１の試
薬ボトル１４からＰＩＴＣ、試薬ボトル１３からＴＭＡ
を順に送り、反応槽２、２´内にＡＴＺ−アミノ酸を形
成させる。次に試薬ボトル１５、１５´から塩化ｎ−ブ
チルを反応槽２、２´内に供給して、コンバージョンフ
ラスコ３、３´にＡＴＺ−アミノ酸を抽出させる。第２
試薬供給装置４の試薬ボトル４２からＴＦＡ溶液をコン
バージョンフラスコ３、３´に供給して、ＰＴＨ−アミ
ノ酸に転換後、アミノ酸分析装置５に送り、アミノ酸を
同定する。
主で、複数の試料を同時に分析することができなかっ
た。 【解決手段】 反応槽２、２´内のガラスフィルタ上に
異なるペプチドを保持した後、第１試薬供給装置１の試
薬ボトル１４からＰＩＴＣ、試薬ボトル１３からＴＭＡ
を順に送り、反応槽２、２´内にＡＴＺ−アミノ酸を形
成させる。次に試薬ボトル１５、１５´から塩化ｎ−ブ
チルを反応槽２、２´内に供給して、コンバージョンフ
ラスコ３、３´にＡＴＺ−アミノ酸を抽出させる。第２
試薬供給装置４の試薬ボトル４２からＴＦＡ溶液をコン
バージョンフラスコ３、３´に供給して、ＰＴＨ−アミ
ノ酸に転換後、アミノ酸分析装置５に送り、アミノ酸を
同定する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アミノ酸配列分析
装置、更に詳しくは、エドマン反応装置における反応効
率を向上させたアミノ酸配列分析装置に関する。
装置、更に詳しくは、エドマン反応装置における反応効
率を向上させたアミノ酸配列分析装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、蛋白質やペプチドの一次構
造、即ちアミノ酸配列をＮ末端から逐次分析して行く方
法としてエドマン分解が知られている。この反応におけ
る装置では、通常、テフロン膜に試料保持液であるポリ
ブレン等を含侵、乾燥させてなる試料支持体を反応槽に
設置し、反応槽内の試料支持体に溶解した蛋白質やペプ
チドの試料を支持した後、試料と反応試薬（フェニルイ
ソチオシアネート等）との反応により、エドマン分解を
行なう。そして、Ｎ末端側から逐次分解したアミノ酸を
高速液体クロマトグラフ等により分析してアミノ酸配列
の分析を行う。
造、即ちアミノ酸配列をＮ末端から逐次分析して行く方
法としてエドマン分解が知られている。この反応におけ
る装置では、通常、テフロン膜に試料保持液であるポリ
ブレン等を含侵、乾燥させてなる試料支持体を反応槽に
設置し、反応槽内の試料支持体に溶解した蛋白質やペプ
チドの試料を支持した後、試料と反応試薬（フェニルイ
ソチオシアネート等）との反応により、エドマン分解を
行なう。そして、Ｎ末端側から逐次分解したアミノ酸を
高速液体クロマトグラフ等により分析してアミノ酸配列
の分析を行う。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
分析装置では、反応槽は１個のものが主で、複数の試料
を同時に分析することができなかった。なお、複数試料
を分析するため、反応槽を並列に複数個設置することが
考えられるが、複数反応槽に順次切り換えて試薬を供給
していたのでは、複数試料の同時分析ができない。
分析装置では、反応槽は１個のものが主で、複数の試料
を同時に分析することができなかった。なお、複数試料
を分析するため、反応槽を並列に複数個設置することが
考えられるが、複数反応槽に順次切り換えて試薬を供給
していたのでは、複数試料の同時分析ができない。
【０００４】そこで、本発明は、複数試料の同時分析が
可能なアミノ酸配列分析装置を提供することを目的とす
る。
可能なアミノ酸配列分析装置を提供することを目的とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するため、反応槽に蛋白質やペプチドの試料を保持
し、エドマン分解反応試薬を添加してエドマン分解を行
うアミノ酸配列分析装置において、前記反応槽を反応試
薬の流れ方向に複数個直列に設置したことを特徴とす
る。
決するため、反応槽に蛋白質やペプチドの試料を保持
し、エドマン分解反応試薬を添加してエドマン分解を行
うアミノ酸配列分析装置において、前記反応槽を反応試
薬の流れ方向に複数個直列に設置したことを特徴とす
る。
【０００６】ここで、反応槽は、溶液の供給・排出口を
備えた中空の容器からなり、耐薬性が要求されるため、
ガラス、フッ素樹脂などの材質のものが好ましい。反応
槽内には試料を保持するための保持体を挿入しておく。
保持体としては、ガラス繊維ディスク、ＰＶＤＦ（ポリ
ビニリデンジフルオリド）膜などを用いることができる
が、蛋白質やペプチドを保持でき、耐薬性のあるものな
らば何でもよい。保持の方法としては、保持体に蛋白質
等を共有結合させたり、疎水性相互作用やイオン結合等
により行う。
備えた中空の容器からなり、耐薬性が要求されるため、
ガラス、フッ素樹脂などの材質のものが好ましい。反応
槽内には試料を保持するための保持体を挿入しておく。
保持体としては、ガラス繊維ディスク、ＰＶＤＦ（ポリ
ビニリデンジフルオリド）膜などを用いることができる
が、蛋白質やペプチドを保持でき、耐薬性のあるものな
らば何でもよい。保持の方法としては、保持体に蛋白質
等を共有結合させたり、疎水性相互作用やイオン結合等
により行う。
【０００７】エドマン分解反応試薬とは、蛋白質の末端
アミノ基を反応させＰＴＣ（フェニルチオカルバミル）
−蛋白質にするフェニルイソチオシアネート（ＰＩＴ
Ｃ）、ＰＴＣ−蛋白質のＮ末端ペプチド結合を切断し、
ＡＴＺ（２−アニリノ−５−チアゾリノン）−アミノ酸
を形成させるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、遊離したＡ
ＴＺ−アミノ酸を抽出する塩化ｎ−ブチルが該当する。
アミノ基を反応させＰＴＣ（フェニルチオカルバミル）
−蛋白質にするフェニルイソチオシアネート（ＰＩＴ
Ｃ）、ＰＴＣ−蛋白質のＮ末端ペプチド結合を切断し、
ＡＴＺ（２−アニリノ−５−チアゾリノン）−アミノ酸
を形成させるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、遊離したＡ
ＴＺ−アミノ酸を抽出する塩化ｎ−ブチルが該当する。
【０００８】なお、反応槽より塩化ｎ−ブチルで抽出さ
れたＡＴＺ−アミノ酸は、コンバージョンフラスコでＴ
ＦＡ溶液が加えられて、安定なＰＴＨ（３−フェニル−
２−チオヒダントイン）−アミノ酸に転換される。その
ＰＴＨ−アミノ酸を高速液体クロマトグラフで分析する
ことにより、アミノ酸の種類が同定される。
れたＡＴＺ−アミノ酸は、コンバージョンフラスコでＴ
ＦＡ溶液が加えられて、安定なＰＴＨ（３−フェニル−
２−チオヒダントイン）−アミノ酸に転換される。その
ＰＴＨ−アミノ酸を高速液体クロマトグラフで分析する
ことにより、アミノ酸の種類が同定される。
【０００９】直列に設置される反応槽の数は、２以上で
あれば特に限定なく、同時に分析したい蛋白質等の数に
応じて設置される。反応槽の連結は、一つの反応槽の排
出口側と次の反応槽の供給口側を管路で接続して行う。
管路は、耐薬性のためテフロンチューブなどのフッ素樹
脂が好ましい。
あれば特に限定なく、同時に分析したい蛋白質等の数に
応じて設置される。反応槽の連結は、一つの反応槽の排
出口側と次の反応槽の供給口側を管路で接続して行う。
管路は、耐薬性のためテフロンチューブなどのフッ素樹
脂が好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の実施の形態を図面に基づ
いて説明する。図１は本発明のアミノ酸分析装置の全体
概略図である。図において、アミノ酸配列分析装置１０
０は、第１試薬供給装置１と、反応槽２、２´と、コン
バージョンフラスコ３、３´と第２試薬供給装置４と、
ＰＴＨ−アミノ酸分析装置５とを主に備えている。
いて説明する。図１は本発明のアミノ酸分析装置の全体
概略図である。図において、アミノ酸配列分析装置１０
０は、第１試薬供給装置１と、反応槽２、２´と、コン
バージョンフラスコ３、３´と第２試薬供給装置４と、
ＰＴＨ−アミノ酸分析装置５とを主に備えている。
【００１１】第１試薬供給装置１は、酢酸エチルの試薬
ボトル１１と、ｎ−ヘプタンの試薬ボトル１２と、トリ
メチルアミン（ＴＭＡ）水溶液の試薬ボトル１３と、Ｐ
ＩＴＣのｎ−ヘプタン溶液の試薬ボトル１４と、塩化ｎ
−ブチルの試薬ボトル１５、１５´と、ＴＦＡの試薬ボ
トル１６とを備えている。各試薬ボトル１１〜１６の上
部には、電磁弁１７を有するガス供給路１８の一端が接
続されている。各ガス供給路１８の他端は、図示しない
窒素やアルゴン等の不活性ガス供給装置に接続されてい
る。また、各試薬ボトル１１〜１６の上部には、電磁弁
１９ａを有するガス排気路１９の一端が接続されてい
る。さらに、各試薬ボトル１１、１２、１４、１５に
は、その底部に試薬供給路２０の一端が配置されてい
る。ＴＭＡとＴＦＡとは気体状態で反応槽２、２´に供
給されるため、試薬ボトル１３、１６には、その上部に
試薬供給路２０の一端が配置されている。各試薬供給路
２０の他端は、それぞれ電磁弁２２に接続されている。
電磁弁群の一端（図１では上端）に位置する電磁弁２３
には、図示しない不活性ガス供給装置からのガス供給路
２４の一端が接続されている。一方、電磁弁群の他端
（図１では上端から７個目）に位置する電磁弁２２に
は、反応槽２、２´に試薬を導入するための試薬導入路
６２の一端が接続されている。この試薬導入路６２に
は、液体検知センサ６１を有している。
ボトル１１と、ｎ−ヘプタンの試薬ボトル１２と、トリ
メチルアミン（ＴＭＡ）水溶液の試薬ボトル１３と、Ｐ
ＩＴＣのｎ−ヘプタン溶液の試薬ボトル１４と、塩化ｎ
−ブチルの試薬ボトル１５、１５´と、ＴＦＡの試薬ボ
トル１６とを備えている。各試薬ボトル１１〜１６の上
部には、電磁弁１７を有するガス供給路１８の一端が接
続されている。各ガス供給路１８の他端は、図示しない
窒素やアルゴン等の不活性ガス供給装置に接続されてい
る。また、各試薬ボトル１１〜１６の上部には、電磁弁
１９ａを有するガス排気路１９の一端が接続されてい
る。さらに、各試薬ボトル１１、１２、１４、１５に
は、その底部に試薬供給路２０の一端が配置されてい
る。ＴＭＡとＴＦＡとは気体状態で反応槽２、２´に供
給されるため、試薬ボトル１３、１６には、その上部に
試薬供給路２０の一端が配置されている。各試薬供給路
２０の他端は、それぞれ電磁弁２２に接続されている。
電磁弁群の一端（図１では上端）に位置する電磁弁２３
には、図示しない不活性ガス供給装置からのガス供給路
２４の一端が接続されている。一方、電磁弁群の他端
（図１では上端から７個目）に位置する電磁弁２２に
は、反応槽２、２´に試薬を導入するための試薬導入路
６２の一端が接続されている。この試薬導入路６２に
は、液体検知センサ６１を有している。
【００１２】反応槽２、２´は、試薬導入路６２に直列
に連結されており、その内部には試料を保持するための
ポリブレン処理されたガラスフィルタが配置されてい
る。反応槽２の上端には、試薬導入路６２の他端が着脱
可能に接続される導入口が形成され、下端には排出口が
設けられている。排出口には、反応槽２での反応生成物
をコンバージョンフラスコ３に写し替えるための試料移
動管６３の一端が着脱自在に連結され得るにようになっ
ている。試料移動管６３は、流路切替えバルブ６５を備
えており、そのバルブには反応槽２´へ試薬を供給する
連結路が接続されている。
に連結されており、その内部には試料を保持するための
ポリブレン処理されたガラスフィルタが配置されてい
る。反応槽２の上端には、試薬導入路６２の他端が着脱
可能に接続される導入口が形成され、下端には排出口が
設けられている。排出口には、反応槽２での反応生成物
をコンバージョンフラスコ３に写し替えるための試料移
動管６３の一端が着脱自在に連結され得るにようになっ
ている。試料移動管６３は、流路切替えバルブ６５を備
えており、そのバルブには反応槽２´へ試薬を供給する
連結路が接続されている。
【００１３】反応槽２´は、反応槽２と同様に下端には
排出口が設けられており、排出口には、反応槽２´での
反応生成物をコンバージョンフラスコ３´に写し替える
ための試料移動管６３´の一端が着脱自在に連結され得
るにようになっている。試料移動管６３´は、流路切替
えバルブ６５´を備えており、そのバルブには、ドレン
流路６５ａが接続されている。なお、６４、６４´は液
体検知センサである。また、反応槽２´の導入口側に
は、電磁弁２２を介して塩化ｎ−ブチルの試薬ボトル１
５´と連なる試薬供給路２０と接続されている。
排出口が設けられており、排出口には、反応槽２´での
反応生成物をコンバージョンフラスコ３´に写し替える
ための試料移動管６３´の一端が着脱自在に連結され得
るにようになっている。試料移動管６３´は、流路切替
えバルブ６５´を備えており、そのバルブには、ドレン
流路６５ａが接続されている。なお、６４、６４´は液
体検知センサである。また、反応槽２´の導入口側に
は、電磁弁２２を介して塩化ｎ−ブチルの試薬ボトル１
５´と連なる試薬供給路２０と接続されている。
【００１４】コンバージョンフラスコ３、３´の上部に
は、試料移動管６３、６３´の他端が連結されている。
また、コンバージョンフラスコ３、３´の上部には、第
２試薬供給装置４からの試薬を導入するための試薬導入
路６６の一端と、電磁弁６９６９´を有するガス排気管
６８、６８´の一端とがしれぞれ連結されている。試薬
導入路６６は、１組の液体検知センサ６７を有してい
る。また、試薬導入路６６は、流路切替えバルブ７３を
備えており、そのバルブは、コンバージョンフラスコ
３、３´の流路を選択することが可能である。コンバー
ジョンフラスコ３、３´の下端には、ＰＴＨ−アミノ酸
分析装置５へ試料を導出するための試料導出路７０の一
端が接続されている。
は、試料移動管６３、６３´の他端が連結されている。
また、コンバージョンフラスコ３、３´の上部には、第
２試薬供給装置４からの試薬を導入するための試薬導入
路６６の一端と、電磁弁６９６９´を有するガス排気管
６８、６８´の一端とがしれぞれ連結されている。試薬
導入路６６は、１組の液体検知センサ６７を有してい
る。また、試薬導入路６６は、流路切替えバルブ７３を
備えており、そのバルブは、コンバージョンフラスコ
３、３´の流路を選択することが可能である。コンバー
ジョンフラスコ３、３´の下端には、ＰＴＨ−アミノ酸
分析装置５へ試料を導出するための試料導出路７０の一
端が接続されている。
【００１５】試料導出路７０は、流路切替えバルブ７１
と液体検知センサ７２とを有している。流路切替えバル
ブ７１にはコンバージョンフラスコ３、３´からの試料
や洗浄液を排出するためのドレン流路７１ａと、試料導
出路７０に図示しない不活性ガス供給装置から不活性ガ
スを供給するためのガス供給路７１ｂとがそれぞれ接続
されている。ガス供給路７１ｂは、途中に電磁弁７１ｃ
を有している。
と液体検知センサ７２とを有している。流路切替えバル
ブ７１にはコンバージョンフラスコ３、３´からの試料
や洗浄液を排出するためのドレン流路７１ａと、試料導
出路７０に図示しない不活性ガス供給装置から不活性ガ
スを供給するためのガス供給路７１ｂとがそれぞれ接続
されている。ガス供給路７１ｂは、途中に電磁弁７１ｃ
を有している。
【００１６】第２試薬供給装置４は、アセトニトリルと
水との混合液の試薬ボトル４１と、ＴＦＡ溶液の試薬ボ
トル４２とを有している。各試薬ボトル４１、４２の上
部には、電磁弁４４を有するガス供給路４３の一端が接
続されている。各ガス供給路４３の他端は、図示しない
不活性ガス供給装置に接続されている。また、各試薬ボ
トル４１、４２の上部には、電磁弁４５ａを有するガス
排気路４５が接続されている。さらに各試薬ボトル４
１、４２には、その底部には試薬供給路４６の一端が配
置されている。そして、各試薬供給路４６の他端は、電
磁弁４７に接続されている。各電磁弁４７は、互いに接
続されており、片側（図１下側）の電磁弁４７には試料
導入路６６の他端が接続されている。他方の電磁弁４７
には、図示しない不活性ガス供給装置からの圧力制御さ
れた不活性ガスを供給するためのガス供給路４８ａが電
磁弁４８を介して接続されている。また、電磁弁４８に
は、同じく図示しない不活性ガス供給装置から流量制御
された不活性ガスを供給するためのガス供給路４９ａが
電磁弁４９を介して接続されている。
水との混合液の試薬ボトル４１と、ＴＦＡ溶液の試薬ボ
トル４２とを有している。各試薬ボトル４１、４２の上
部には、電磁弁４４を有するガス供給路４３の一端が接
続されている。各ガス供給路４３の他端は、図示しない
不活性ガス供給装置に接続されている。また、各試薬ボ
トル４１、４２の上部には、電磁弁４５ａを有するガス
排気路４５が接続されている。さらに各試薬ボトル４
１、４２には、その底部には試薬供給路４６の一端が配
置されている。そして、各試薬供給路４６の他端は、電
磁弁４７に接続されている。各電磁弁４７は、互いに接
続されており、片側（図１下側）の電磁弁４７には試料
導入路６６の他端が接続されている。他方の電磁弁４７
には、図示しない不活性ガス供給装置からの圧力制御さ
れた不活性ガスを供給するためのガス供給路４８ａが電
磁弁４８を介して接続されている。また、電磁弁４８に
は、同じく図示しない不活性ガス供給装置から流量制御
された不活性ガスを供給するためのガス供給路４９ａが
電磁弁４９を介して接続されている。
【００１７】ＰＴＨ−アミノ酸分析装置５は、六方バル
ブ５１を有している。六方バルブ５１には、試料導出路
７０の他端が接続されている。また、６方バルブ５１に
は、高速液体クロマトグラフィーのカラム５４へ試料を
注入するための注入路５２と、カラム５４で分離された
試料を排出するための排出路５３とが隣接して接続され
ている。排出路５３には、試料の検出器５５が配置され
ている。この検出器５５は、データ処理装置５６に接続
されている。さらに、６方バルブ５１には、フラクショ
ンコレクタ５９のサンプルチューブ５９ａにカラム５４
で分離された試料を回収するための回収路５７が接続さ
れている。なお、回収路５７は、液体検知センサ５８を
有している。
ブ５１を有している。六方バルブ５１には、試料導出路
７０の他端が接続されている。また、６方バルブ５１に
は、高速液体クロマトグラフィーのカラム５４へ試料を
注入するための注入路５２と、カラム５４で分離された
試料を排出するための排出路５３とが隣接して接続され
ている。排出路５３には、試料の検出器５５が配置され
ている。この検出器５５は、データ処理装置５６に接続
されている。さらに、６方バルブ５１には、フラクショ
ンコレクタ５９のサンプルチューブ５９ａにカラム５４
で分離された試料を回収するための回収路５７が接続さ
れている。なお、回収路５７は、液体検知センサ５８を
有している。
【００１８】なお、このようなアミノ酸配列分析装置１
００は、図示しない制御部により電磁弁や流路切替えバ
ルブ等が自動制御されている。
００は、図示しない制御部により電磁弁や流路切替えバ
ルブ等が自動制御されている。
【００１９】次に、上記のアミノ酸配列分析装置１００
を用いたアミノ酸配列分析法を説明する。先ず、反応槽
２、２´内のガラスフィルタ上に異なるペプチドを保持
する。そして、試薬導入路６２内に第１試薬供給装置１
の試薬ボトル１４からＰＩＴＣを充填する。試薬ボトル
１４は、ガス供給路１８からの不活性ガスにより内圧が
上昇し、この圧力により試薬供給路２０内にＰＩＴＣを
送り出す。試薬供給路２０内に送り出されたＰＩＴＣ
は、電磁弁２２を介して試薬導入路６２内に充填され
る。そして、電磁弁２３を開けてガス供給路２４からの
不活性ガスを試薬導入路６２に流すと、試薬導入路６２
内のＰＩＴＣは反応槽２、２´内に勢い良く流れ出す。
反応槽２、２´内に保持された試料は、末端アミノ基に
ＰＩＴＣが結合し、ＰＴＣ−蛋白質が生成される。な
お、ＰＴＣ−蛋白質の生成反応は、ＴＭＡ雰囲気中で行
われる。このＴＭＡは、試薬ボトル１３から反応槽２、
２´内に供給される。
を用いたアミノ酸配列分析法を説明する。先ず、反応槽
２、２´内のガラスフィルタ上に異なるペプチドを保持
する。そして、試薬導入路６２内に第１試薬供給装置１
の試薬ボトル１４からＰＩＴＣを充填する。試薬ボトル
１４は、ガス供給路１８からの不活性ガスにより内圧が
上昇し、この圧力により試薬供給路２０内にＰＩＴＣを
送り出す。試薬供給路２０内に送り出されたＰＩＴＣ
は、電磁弁２２を介して試薬導入路６２内に充填され
る。そして、電磁弁２３を開けてガス供給路２４からの
不活性ガスを試薬導入路６２に流すと、試薬導入路６２
内のＰＩＴＣは反応槽２、２´内に勢い良く流れ出す。
反応槽２、２´内に保持された試料は、末端アミノ基に
ＰＩＴＣが結合し、ＰＴＣ−蛋白質が生成される。な
お、ＰＴＣ−蛋白質の生成反応は、ＴＭＡ雰囲気中で行
われる。このＴＭＡは、試薬ボトル１３から反応槽２、
２´内に供給される。
【００２０】ＰＴＣ−蛋白質生成反応時の過剰試薬や副
生成物は、試薬ボトル１１、１２からそれぞれＰＩＴＣ
と同様に供給される酢酸エチル及びｎ−ヘプタンにより
洗浄され、ドレン流路６５ａから排出される。
生成物は、試薬ボトル１１、１２からそれぞれＰＩＴＣ
と同様に供給される酢酸エチル及びｎ−ヘプタンにより
洗浄され、ドレン流路６５ａから排出される。
【００２１】洗浄後、反応槽２、２´には試薬ボトル１
６からＴＦＡが供給される。このＴＦＡによりＰＴＣ−
蛋白質のＮ末端側のペプチド結合が切断され、ＡＴＺ−
アミノ酸が生成される。ＡＴＺ−アミノ酸は試薬ボトル
１５、１５´からの塩化ｎ−ブチルにより抽出される。
なお、試薬ボトル１５、１５´から塩化ｎ−ブチルを供
給するときは、流路切替えバルブ６５、６５´を試料移
動管６３、６３´側に切り換えておく。これにより抽出
液は、試料移動管６３、６３´を通ってコンバージョン
フラスコ３、３´内に導入される。
６からＴＦＡが供給される。このＴＦＡによりＰＴＣ−
蛋白質のＮ末端側のペプチド結合が切断され、ＡＴＺ−
アミノ酸が生成される。ＡＴＺ−アミノ酸は試薬ボトル
１５、１５´からの塩化ｎ−ブチルにより抽出される。
なお、試薬ボトル１５、１５´から塩化ｎ−ブチルを供
給するときは、流路切替えバルブ６５、６５´を試料移
動管６３、６３´側に切り換えておく。これにより抽出
液は、試料移動管６３、６３´を通ってコンバージョン
フラスコ３、３´内に導入される。
【００２２】コンバージョンフラスコ３、３´内のＡＴ
Ｚ−アミノ酸抽出液には、第２試薬供給装置４の試薬ボ
トル４２からＴＦＡ溶液が供給される。ＴＦＡ溶液によ
り、ＡＴＺ−アミノ酸は、安定なＰＴＨ−アミノ酸に転
換される。
Ｚ−アミノ酸抽出液には、第２試薬供給装置４の試薬ボ
トル４２からＴＦＡ溶液が供給される。ＴＦＡ溶液によ
り、ＡＴＺ−アミノ酸は、安定なＰＴＨ−アミノ酸に転
換される。
【００２３】コンバージョンフラスコ３、３´内のＰＴ
Ｈ−アミノ酸は、試薬ボトル４１からのアセトニトリル
と水との混合液により抽出される。そして、このアセト
ニトリルと水との混合液による抽出液は、試料導出路７
０を通ってアミノ酸分析装置５の６方バルブ５１に接続
されている試料導出路６０に導入される。６方バルブ５
１を切り換えると、アセトニトリルと水との混合液によ
る抽出液は高速液体クロマトグラフのカラム５４に注入
される。そして、カラム５４で分離されたＰＴＨ−アミ
ノ酸は、検出器５５によって検出され、そのデータがデ
ータ処理装置５６によって処理される。これにより、反
応槽２、２´内のペプチドのＮ末端のアミノ酸が同定さ
れる。なお、反応槽２、２´内のいずれのペプチドのア
ミノ酸かは、試料導出路７０に切換バルブを設け（図示
せず）、コンバージョンフラスコ３、３´の流路を選択
し、アミノ酸分析装置５に試料を導入する時間をずらす
ことによって判別できる。また、コンバージョンフラス
コ３、３´に独立にアミノ酸分析装置を設けても良い。
Ｈ−アミノ酸は、試薬ボトル４１からのアセトニトリル
と水との混合液により抽出される。そして、このアセト
ニトリルと水との混合液による抽出液は、試料導出路７
０を通ってアミノ酸分析装置５の６方バルブ５１に接続
されている試料導出路６０に導入される。６方バルブ５
１を切り換えると、アセトニトリルと水との混合液によ
る抽出液は高速液体クロマトグラフのカラム５４に注入
される。そして、カラム５４で分離されたＰＴＨ−アミ
ノ酸は、検出器５５によって検出され、そのデータがデ
ータ処理装置５６によって処理される。これにより、反
応槽２、２´内のペプチドのＮ末端のアミノ酸が同定さ
れる。なお、反応槽２、２´内のいずれのペプチドのア
ミノ酸かは、試料導出路７０に切換バルブを設け（図示
せず）、コンバージョンフラスコ３、３´の流路を選択
し、アミノ酸分析装置５に試料を導入する時間をずらす
ことによって判別できる。また、コンバージョンフラス
コ３、３´に独立にアミノ酸分析装置を設けても良い。
【００２４】試料導出路６０に入りきらなかったＰＴＨ
−アミノ酸は、６方バルブ５１及び回収路５７を通って
フラクションコレクタ５９のサンプルチューブ５９ａに
回収される。
−アミノ酸は、６方バルブ５１及び回収路５７を通って
フラクションコレクタ５９のサンプルチューブ５９ａに
回収される。
【００２５】このような一連の分析操作を繰り返すこと
によって、ペプチドのアミノ酸配列はＮ末端側からＣ末
端側にかけて順次解明され、ペプチドのアミノ酸配列が
決定できる。
によって、ペプチドのアミノ酸配列はＮ末端側からＣ末
端側にかけて順次解明され、ペプチドのアミノ酸配列が
決定できる。
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば、複数の試料のアミノ酸
配列を同時進行的に分析ができるとともに、分析のトー
タル分析時間が短縮できる。
配列を同時進行的に分析ができるとともに、分析のトー
タル分析時間が短縮できる。
【００２７】また、複数の反応槽でカップリング反応、
切断反応にかかわる試薬を共有するため、試薬のランニ
ングコストが安くなる。
切断反応にかかわる試薬を共有するため、試薬のランニ
ングコストが安くなる。
【図１】本発明のアミノ酸分析装置の一実施例図
１００：アミノ酸分析装置 １：第１試薬
供給装置 ２，２´反応槽 ３，３´：コ
ンバージョンフラスコ
供給装置 ２，２´反応槽 ３，３´：コ
ンバージョンフラスコ
Claims (1)
- 【請求項１】 反応槽に蛋白質やペプチドの試料を保持
し、エドマン分解反応試薬を添加してエドマン分解を行
うアミノ酸配列分析装置において、 前記反応槽を反応試薬の流れ方向に複数個直列に設置し
たことを特徴とするアミノ酸配列分析装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22383795A JP3528352B2 (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | アミノ酸配列分析装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22383795A JP3528352B2 (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | アミノ酸配列分析装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0968534A true JPH0968534A (ja) | 1997-03-11 |
| JP3528352B2 JP3528352B2 (ja) | 2004-05-17 |
Family
ID=16804505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22383795A Expired - Lifetime JP3528352B2 (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | アミノ酸配列分析装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3528352B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016056094A1 (ja) * | 2014-10-08 | 2016-04-14 | 株式会社島津製作所 | アミノ酸配列分析装置及びアミノ酸配列分析方法 |
| JP2016148530A (ja) * | 2015-02-10 | 2016-08-18 | 株式会社島津製作所 | アミノ酸配列分析装置 |
| US11268962B2 (en) | 2015-02-20 | 2022-03-08 | Shimadzu Corporation | Device for pretreatment of sample and analyzer equipped therewith, and method for pretreatment of sample |
-
1995
- 1995-08-31 JP JP22383795A patent/JP3528352B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016056094A1 (ja) * | 2014-10-08 | 2016-04-14 | 株式会社島津製作所 | アミノ酸配列分析装置及びアミノ酸配列分析方法 |
| JP2016148530A (ja) * | 2015-02-10 | 2016-08-18 | 株式会社島津製作所 | アミノ酸配列分析装置 |
| US11268962B2 (en) | 2015-02-20 | 2022-03-08 | Shimadzu Corporation | Device for pretreatment of sample and analyzer equipped therewith, and method for pretreatment of sample |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3528352B2 (ja) | 2004-05-17 |
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