JPH09512463A

JPH09512463A - 天然内皮下基質を利用した改善された血液接触表面並びにその製造及び利用方法

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Publication number: JPH09512463A
Application number: JP7528421A
Authority: JP
Inventors: シー．ブルシュマン，ウィリアム; ジェイ．スウィッツァー，アニタ
Original assignee: WL Gore and Associates Inc
Current assignee: WL Gore and Associates Inc
Priority date: 1994-04-29
Filing date: 1995-04-28
Publication date: 1997-12-16
Also published as: WO1995029714A1; EP0757564A1; CA2186374A1; US5776182A; US5762600A; AU2369695A

Abstract

(57)【要約】本発明は哺乳動物血管由来の改善された血管補てつ物に関する。この補てつ物はドナーの内皮を除去した動脈切片から組立てられている。本発明の重要な観点は、この血管補てつ物の血液界面を担うであろう内皮下細胞外基質の保存にある。血管切片をカルシウム沈着の傾向を抑えるために処理し、そして組織保存剤により固定する。本発明は小直径用途、例えば６mm以下の直径を必要とする動脈代用品にとって極めて有用である血管補てつ物をもたらす。

Description

【発明の詳細な説明】天然内皮下基質を利用した改善された血液接触表面並びにその製造及び利用方法発明の背景１．発明の分野本発明は人工血管及びその他の移植可能な器具の如き装置において利用するための改善された血液接触表面、及びこの血液接触表面の製造方法に関する。２．関連技術の詳細閉塞した又は負傷した動脈の代わりとなるヒト又は動物のドナーから取り出した血管の利用は広く実施されている。新鮮な及び保存しておいた動脈同種異系移植片は1950年代において動脈の代用品としてかなり利用されていた。当初の利用は成功を収めていたかのように見えたが、同種異系移植片の利用は血栓症、狭窄症及び動脈瘤の拡張の発生率の高さに基づき1960年までに大部分廃止されている。他の種から取り出した血管を利用するその後の試みも同様に成功を収めていない。動脈を、非血管系起源の組織、例えば自系又は異系線維組織管、ウシの尿管、並びに小腸及び心膜より出来た移植片に置き替える試みもなされている。しかしながら、血管起源由来の上記の移植片と同様に、これらの非血管系生物移植片は非常に限られた成功しか収めていない。合成材料も血管代用品として一般的に利用されている。合成血管移植片ははじめ同種異系移植片移植のための代用品として1950年代において幅広く利用されるようになった。合成品は大型の血管、例えば大動脈、腸骨又は大腿の動脈等の代用品としての成功を示しており、そして今でもこれらの用途に効果的に採用されている。この移植のために利用されている主な合成品はポリエチレンテレフタレート及び延伸膨張ポリテトラフルオロエチレン(ePTFE)である。残念ながら、上記の生物移植片と同様、過酷な小直径の用途、例えば冠状動脈バイパス又は膝窩動脈から遠方の末梢動脈バイパスにおける合成品の性能は移植された生存自系血管のそれよりもかなり劣っている。このような直径の小さい動脈の閉塞アテローム症疾患の処置における一般的な手術は、同一の個体から取り出した生きた静脈の切片を動脈の閉塞領域のまわりにバイパスとして移植することにある。しかしながら、末梢動脈バイパスを必要とする全患者の約１／４は、静脈瘤様腫脹、多分枝形成又は適当でない直径を理由に使用に適さない伏在静脈を有している。このようなとき、これらの患者はバイパスすることのできる何らかの代替材料を必要とする。更に、移植された静脈自体は往々にしてアテローム症疾病の進行に感受性である。このアテローム症の進行は動脈のそれと似ているが、ただし静脈は加速した速度で冒され、静脈移植片不良をしばしば起こし、追加のバイパスを必要とする。このような理由のため、小直径の用途においては自系伏在静脈に少なくとも匹敵するほどに機能する血管代用品のニーズがある。伏在静脈の利用の代用品を提供する試みにおいて、末梢血管代用品として非自系血管組織が利用されている。これらの非自系組織の一部には、固定化されたヒトの臍静脈、固定化されたウシの動脈及び冷凍保存したヒトの静脈が含まれる。例えば、ヒトの臍帯の動脈及び静脈が、同種異系の生物補てつ物を作るためのDa rdikらに付与された米国特許第3,988,782 号において採用されている。この方法は、成形用マンドレルの上に管を載せ、次いで硬化及びグルタルアルデヒド固定処理にかけて低抗原性及び低血栓形成性の移植片を作ることを含む。異種のウシ又はブタの動脈ベース補てつ物を作るのに利用されている特定の固定工程はPederoに付与された米国特許第4,671,797 号に記載されている。Pedero は、受容側の血管の構造及び生物学的特徴に匹敵するそれを有する異種動脈生物移植片を提供することを試みた。主としてコラーゲンより成る管を作るためにタンパク質分解酵素により消化したウシの動脈も非自系血管移植片として利用されている。Rosenberg らに付与された米国特許第2,900,644 号、Sawyerに付与された同第3,927,422 号、Schmitz らに付与された同第4,083,066 号、Miyataらに付与された同第4,098,571 号、及びFraefel らに付与された同第4,383,832 号には、酵素フィシン、トリプシン又はパパインを利用するかかる処理法が記載されている。ところで、これらの如き消化された動脈移植は下肢バイパス手術のために利用したとき、高頻度の血栓による不良を示すことが認められた。多くの特許及び公開物には血管代用のための血管起源組織のその他のタイプの化学処理が記載されている。例えば、Lentz らに付与された米国特許第4,323,35 8 号及びDewanjeeに付与された同第4,553,974 号は不要な物質の除去及び／又はカルシウム沈着の防止の目的のための界面活性剤の利用を開示している。Brende l らに付与された米国特許第4,801,299 号には、移植するつもりの組織を、コラーゲンより主として成る無菌、非抗原性細胞外基質移植片が残るように細胞成分を抽出する連続界面活性剤処理を介して調製する手段が記載されている。この方法は、血管代用品のために使用したとき、内径0.5mm ほどの小さい移植片で高い開存性を供する非免疫原性及び非血栓形成性の移植片を提供すると言われている。Klement らに付与された米国特許第4,776,853 号も米国特許第4,801,299 号に開示されているのと似たような界面活性剤抽出工程を採用している。血栓症を起す及び／又はそれを阻害する正確なメカニズムは人工血液接触表面を開発する試みにおいて特に関心がもたれる。血液接触材料に係る凝血メカニズムに関する数多くの学説がここ何年かで進展してきたにもかかわらず、このような学説に従って構築された装置は正常な血管構造体または経験的に選択された材料と比べて劣ってしか機能しない。従来技術において達成されてきた限られた成功は、非血栓形成能の自然のメカニズムを擬態する試みではなく、経験的な試みから得られている。血管内において見い出せるような天然の血液接触表面は、その表面伝いの血液の正常な通過の際に血栓症を防止するメカニズムをもっている。哺乳動物の動脈の場合、直接血液接触表面は非血栓形成性の内皮細胞層より成る。この内皮細胞層のすぐ外側には内膜の残り、即ち、基底膜及びその下に広がる糖タンパク担持細胞外基質より成る内皮下基質、並びに内部弾性板がある。内膜層を覆っているのは平滑筋細胞及びエラスチンを含む中膜の多層構造体であり、そしてこの中膜を覆っているのは線維芽細胞及び接続組織より成る最外層である外膜である。以下に詳細に説明する通り、内皮下基質層及び中膜構造体は血管系が負傷したときに止血を維持するために事実上血栓形成性であることが一般に受け入れられている。例えば、J.A.Madri ら、「The Collagenous Components of the Subendothe lium」Laboratory Invenstigations 43:303-315(1980) ; 及びT.Matsuda ら「A Hybrid Artifical Vascular Graft Based upon an Organ Reconstruction Model : Significance and Design Criteria of an Artificial Basement Membrane，「ASAIO Transactions 34:640-643(1988)を参照のこと。血管壁の構造学及び生化学の理解はこの10年の間に著しく成長してきたが、天然の血管に機能を維持させる詳細なメカニズムの知識は非常に限られている。正常な血管構造の効果的な機能に関連する主たる学説は無傷の血管内皮の必要性に基づく。この学説の前提は、血液は健全で無傷な内皮細胞のみと接触しなければならないことにあり、そうでなければ血栓症が生ずるであろう。この仮説は、内皮が、それと接触する血液に対して固有の凝血阻止効果を有することを示す多くの実験に由来する。内皮細胞は、硫酸ヘパラン／アンチトロンビンIII、硫酸デルマタン／ヘパリン補助因子II、トロンボモジュリン／プロテインＣ／プロテインＳ、プロスタサイクリン及び組織タイププラスミノゲンアクチベータを含む、凝血阻害又はフィブリン溶解性機能をもつ数多くの物質を合成する又は結合することが示されている。更に、内皮層の除去は、血栓形成性であることが示されている構造体を露出させてしまうということを実証する数多くの実験が行われている。これらの所見及び、血管系において内皮が血液と接触する場所にあるということに基づき、内皮は、全部ではないにしても、主として血管の抗血栓挙動を担っていることが広く認められている。例えばL.A.Erickson、「Regulation of Vasc ular Fibrinolysis」Blood Vessel Wall and Thrombosis 1:222-233(Ed.,R.Mach ovich，CRCPress 1988) ; R.G.Petty ら、「Endothelium-The Axis of Vascular Health and Disease」Journal of the Royal College of Physicians，London 23:92-102(1989); 及びR.E.Scharfら、「Thrombos is and Atherosclerosis: Re gulatory Role of Interactions Among Blood Components and Endothelium」Bl ut 55:131-144(1987)を参照のこと。この概念を裏付けるものとして、犬において頸動脈の代わりに用いられる自系及び同種異系静脈の双方の開存性は、血管及びその内皮の生存率に依存することが更に示されている。例えばT.R.Weber ら「Viable Vein Graft Preservation」Journal of Surgical Research 18:247-25 5(1975)を参照のこと。この分野の主たる教示は内皮細胞が移植片の機能にとって重要であることを強調しているが、内皮細胞無含有脈管表面の血栓形成能についてのいくつかの議論中の研究がある。例えばM.R.Buchananら、「The Basement Membrane Underlying the Vasculer Endothelium Is Not Thrombogenic : In Vivo and In Vitro Stu dies with Rabbit and Human Tissus 」Thrombosis and Haemostasis 58:698-70 4(1987)において、血栓症は、血小板接着力により決定したとき、ウサギの動脈中の内皮細胞の除去により上昇しないことが報告されている。この所見は内皮細胞による基底膜表層への13−ヒドロキシオクタデカジン酸（13−HODE）の分泌に由来すると仮定された。これらの発見の妥当性はJ.C.de Graafらにより論文「Pl atelet Adhesion to Subendothelial Structures Under Flow Conditions : No Effect of the Lipoxygenase Product 13-HODE」Thrombosis and Haemostastis 62:802-806(1989)において問題とされている。この研究は反対の所見、即ち、13 −HODEは抗血栓挙動に関係していないと報じ、そしてBuchananらにより上に観察された血小板の反応性の欠如は、実際には内皮細胞の不完全な除去の相関的要素ではないかという問題を提示した。このもう１つの解釈はJ.Aznar-Salatti らの「Platelet Adhesion to Exposed Endothelial Cells Extracellular Matrixes Is Influenced by the Method of Preparation」Arteriosclerosis and Thrombo sis 11:436-442(1991)の、内皮細胞の除去の程度が血小板活性の度合いと相関することが示されたという発見と一致する。内皮細胞除去の度合いが高いと、血小板の反応性の度合いは高まる。最後に、M.Richardsonら、「Wound Healing in t he Media of the Normolipemic Rabbit Cartoid Artery Injured by Air Drying or by Balloon Catheter Deendothelialization」American Journal of Pathol ogy 137:1453-1465(1990)は、前掲のBuchananらに利用されている内皮のエアー除去が、血小板堆積の遅延化のみを供し（消失させるのではない）、そしてこの血小板相互作用は血管表面が再び内皮により覆われるまで存続することを示した。天然の血管機能及び血小板反応性のこのような所見に基づき、天然の血管構造に類似の血栓抵抗性の最良の合成血液接触具は、内皮細胞の血液接触表面を必要とするであろうと仮定された。従って、内皮層が含まれている又は展開している補てつ物表面、そして特に血管移植片を提供する試みがなされている。例えば、 Carabasiらに付与された米国特許第4,883,755 号；Smith に付与された同第4,96 0,423 号；及びTurinaらに付与された同第4,804,381 号及び同第4,804,382 号； Bellに付与された同第4,539,716 号及び同第4,546,500 号；並びにMullerらに付与された同第5,037,378 号には、抗血栓性を供するために血管界面の生存内皮細胞被覆を成し遂げる手段が記載されている。これらの手法には、内皮細胞被覆(S mith)、他の細胞との内皮細胞の組合せ（Bell；Turinaら）、内皮細胞の付着性を高めるためのエラスチン誘導ペプチド(Smith)、又は移植片表面に内皮細胞を適用するための単純な物理学的手段（Mullerら）が含まれる。内皮は血管の活発な抗血栓挙動の源として広く認識されているが、血管移植片において非自系内皮を利用することは、非自系細胞の免疫学的認識により起こる血栓による不良を生じうる。例えば、M.A.Galumbeck ら「Inhibition of Vessel Allograft Rejection by Endothelial Removal : Morphologic and Ultrastruc tural Change s 」Annals of Surgery 206:757-764(1987)においては、大腿動脈及び大腿静脈の移植片を、内皮細胞を伴って及び伴わないで、同種異系ラットに移植している。コントロールのグループには自系移植片を受容させた。内皮が完全なままの同種異系血管移植片は不良となり、一方内皮を除去したものは開存性のままであることが認められた。これらの結果は、同種異系内皮の存在により付与される抗血栓能は受容側のその細胞に対する免疫反応に負けることを示唆する。従って、非自系血管の有用性は、この発見から生ずる理論的ジレンマによって制約を受けるように思われる。即ち、脈管の機能についての現在の理解は、移植された血管の内皮は抗血栓機能を確実なものとするために無傷でなくてはならないが、しかしながらこの同一の非自系内皮の存在がホストの免疫応答に由来する血栓を招いてしまいうる、ということを規定する。小直径の用途において、又は冠状バイパスの如きの感受性な領域に使用する移植片においては、ささいな血栓の発生でさえも非常に重大な問題となる。上記の移植片全般にとって問題となる開存性能に加えて、上記の移植片はいづれも小直径の移植片の用途の開存性の問題を適切に処理し始めていない。現存の移植片に勝る上記の移植片の高い性能は、生体内移植研究では実証されていないことに注目すべきである。上述の従来技術に対比して、本発明の主たる目的は小直径の血管移植片を必要とする用途を含む、現存の人工構造物よりも血栓形成性の低い改善された血液接触表面を提供することにある。本発明の別の目的は、容易に製造及び使用されうる人工血液接触表面を提供することにある。本発明の更なる目的は、血液と天然血管構造体との相互作用を支配する以前までわかっていないメカニズムを特定すること、更には一式の改善された血液接触構造体並びにその製造及び使用方法を提供するためにそのメカニズムを利用することにある。本発明のこのような目的及びその他の目的は以下の説明を再吟味することで明らかとなるであろう。発明の概要本発明は人工血管、並びにその他の移植可能な器具、人工器官、輸血装置及び類似の装置における使用のために適切な改善された血液接触表面に関する。従来技術の受容された学説及び教示に反して、哺乳動物の血管における内皮下基質は、内皮細胞から適正に分離されると、主要な血液接触表面として採用したとき、実質的に非血栓性を示す。この低下した血栓形成能は内皮細胞層自体のそれに近い。実質的に非血栓性な表面であることに加えて、内皮下基質はホストの免疫応答を誘発しにくく、それ故人工又は移植された血管及びその他の血液接触器具を提供しようとする事実上全ての従来の試みよりも実質的に改善された血液接触表面となる。本発明は改善された血液接触表面であり、それは装置における利用のためにそれを仕上げる一連の処理工程を通じて形成される。本発明を実施するための一般的な計画は以下の通りである。まず、天然のドナー動脈を採用し、数多くの内皮細胞剥離技術の一つを利用して適当な血液接触表面を作ることである。得られる血液接触表面は保存内皮下基質層をもつ天然血管より成る。所望するなら、改善された性能のために追加の処理工程、例えば移植片の潜在的なカルシウム沈着を最小限とする脈管処理及び／又は血管固定を採用してよい。最後に、周囲の組織の内成長から保護し、且つ適宜この血管を強化するために血管をさや内で保護する。細胞に対して不透過性であることに加えて、このさやはイオンから高分子に至るサイズの範囲の分子に対して透過性である。本発明における直接血液接触表面としての内皮下基質の利用は背景の章において上述した従来の補てつ物の血液接触表面の欠点を回避せしめる。第１に、移植片拒絶及びその他の免疫合併症は、内皮細胞層のないドナーの内皮下基質を利用することによって低下又は除去されうる。第２に、人工移植片の製造において、本発明における保存された天然の内皮下基質層の利用は現状の有用な補てつ移植片よりも血栓形成しにくい。このことは、本発明を、直径の小さい移植片及び凝血の危険性に対して非常に感受性であるその他の用途において利用できるようにする。その結果、本発明は他の補てつ具よりもはるかに耐血栓性である血管代用品を提供する。本発明の向上した耐血栓性は、内皮の下に見い出せる細胞外基質層に横たわる動脈の中にある天然のメカニズムに由来するものと信じられている。本発明の保存動脈により提供される改善された開存性は、内皮下基質層の保存に関与する。従って、本発明は、支持体及びこの支持体に付着したドナー内皮細胞を実質的に含まない保存内皮下基質層を含んで成る血液接触層を含んで成る血液接触表面であり、ここでこの内皮下基質は主要な血液接触表面を担っている。本発明は血管及び類似の器具に特に応用可能であるが、それは実質的に非血栓性の血液接触表面が提供されなければらない数多くの領域に適用できうる。本発明に従って製造できうるその他の器具の例には、限定することなく、とりわけ心弁、人工心臓、及び人工器官、例えば移植可能人工腎臓が含まれる。図面の説明本発明の実施は、添付図面を一緒に考慮しながら以下の説明により明らかとなるであろう。図１は哺乳動物の動脈の透視断面図である。図２は哺乳動物の動脈の縦軸伝いの断面図である。図３は本発明の態様の一つの縦軸伝いの断面図であり、ここで図２の構造体からは内皮細胞層が除去されている。図４は動脈の保存内皮下表面の走査電子顕微鏡写真である。図５は、内皮下基質がポリマー製のさやの内に封じ込められている、図３の構造を有する本発明の人工血管の別の態様の断面図である。図６は図５に示した本発明の態様の別の図である。発明の詳細な説明本発明は人工血管及びその他の血液接触器具において利用するものの如き改善された血液接触表面に関する。まず最初に、図１及び２は典型的な哺乳動物動脈（10）の構造を示す。動脈（ 10）の構造体は、内皮細胞（EC_s）の最内層（12）、基底膜及びその他の細胞外基質成分より成る内皮下基質層（14）、並びに内部弾性板層（16）を有する内膜層より成る。内膜の外側には平滑筋細胞(SMC_s)（20）より成る中膜層（18）があり、そして最後に線維状接続組織又は外膜層（22）がある。上述の「発明の背景」の章において説明した通り、正常な血流の際、内皮細胞層は血液接触表面を担い、従って非血栓性でなくてはならない。一方、血管が負傷したときは、血管からの血液漏出を防ぐために血栓が生じることは重要である。これに関連して、内皮細胞層の下の構造体は、その内皮層のどこで傷ついても凝血を促進させるよう血栓性であることが一般に認められている。驚くべきことに、内皮細胞層（12）の真下の内皮下基質層（14）もそれ自体では実質的に非血栓性であることが発見された。例えば、内皮をはいだグルタルアルデヒド固定化血管を動脈代用品として生体内に適用すると、それは適正に機能を維持するのみならず、保存内皮下基質層のない合成血管のそれより優れた態様で機能を維持することが示された。更に、この合成血管の保存内皮下基質層は自系内皮の集密層を有する合成血管のそれより優れた機能を発揮する。内皮下基質層の非血栓特性は、内皮下基質層が負傷したとき又は保存血管から取り除かれたとき、その性能が合成移植片のそれとほぼ等しいレベルにまで低下するという事実により実証される。このような結果は、適正に処理及び保存された内皮下基質層が、合成又は天然由来の血管上の内皮層の欠如を補うことができることを実証する。本明細書における「保存内皮下基質層」なる語は、内皮下基質層であって、その基質を化学的に安定化し、それにより内皮下基質層を直接血液接触表面として保存させるように固定溶液、例えばグルタルアデルヒドにより処理された層を意味する。従って、本発明は直接血液接触表面として保存された内皮下基質層を利用し、そしてこれによって合成血管移植片及び天然由来の血管の双方に有用な実質的に非血栓性の血液接触表面を作り上げることで従来技術の上記の数多くの欠点を解決する。例えば生物材料から血管移植片を構築することにおいて、内皮細胞層のないドナーの内皮下基質の利用は移植拒絶及びその他の免疫合併症を軽減する又は消失させることができる。例えば人工移植片の製造においては、合成血管の主要な血液接触表面としての保存天然内皮下基質層の利用は、合成材料より成る又は天然血管に由来する現状有用な補てつ移植片よりも血栓発生しにくい。このことは、かかる移植片を小直径移植片を必要とする状況、例えば末梢バイパス、冠状バイパス用途、又は凝血の危険性に対して同様に感受性であるその他の状況において使用できるようにする。血管移植片において使用するための本発明の血液接触表面を調製するのに２通りの方法論が利用される。一つの方法論は移植片のために天然の血管組織を利用することで血液接触表面を調製する。他の方法論は移植片として利用するための合成材料の上に内皮下基質層を適用することで血液接触表面を調製する。天然のドナー動脈を採用するとき、本発明は適切な血液接触表面を作り上げるためにいくつかの内皮細胞剥離技術の一つを利用する。一つの任意的な工程をドナー動脈の潜在的なカルシウム沈着を抑えるために採用してよい。次に、内皮下基質層を保存し、そして移植片を滅菌にかける。保存後、図３に示している得られる血液接触表面は、残留中膜層（18）及び外膜層（22）、内部弾性板層（16）、並びに直接血液接触表面を担う保存内皮下基質層（14）を有する天然血管より成る。所望するなら、ドナーの血管の外径は、より良い取扱い特性を有し、しかも本発明の改善された開存性能を保持する薄壁移植片を供するために小さくしてよい。ドナーの血管の外径を小さくする好適な方法は、タンパク質分解酵素を用いて血管の壁の外面から血管組織層を消化することにある。この処理における使用にとって適切な酵素には、限定することなく、例えばコラゲナーゼ、パパイン、トリプシン、キモトリプシン及びエラスターゼが含まれる。この処理の際、内皮下基質層を含むドナーの血管の内部はタンパク質分解酵素の作用から保護されている。血管移植のために合成材料を採用するとき、内皮下基質層をドナー組織から単離し、合成基質の内面に適用し、そして保存してよい。得られる保存内皮下基質層は合成材料より成る血管移植片における直接の血液接触表面を担う。これらの処理及び態様はそれぞれに以降により詳しく説明する。天然内皮下基質の調製及び利用移植片の作製のための出発材料は、脊椎動物の種、好ましくは哺乳動物の種、例えば、限定することなく、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ又は霊長類、例えばヒトの起源から獲得されるドナー動脈切片である。同様に鳥類起源も使用できうる。血管は四肢を無傷のまま凍結することにより又は適当なサイズの血管を直ちに切り取ることにより得られうる。もし四肢切片を最初に凍結するなら、四肢はまず解凍しなければならない。解凍したら、血管を四肢から切除して、そして４℃の処理用生理学的pHの食塩水緩衝液の中に入れる。適当な食塩水溶液には任意の数の生理学的平衡塩溶液、例えば、限定することなく、ダルベッコのリン酸緩衝食塩水、アールの平衡塩溶液、ハンクスの平衡塩溶液（HBSS）又はリン酸緩衝食塩水(PBS)が含まれる。処理は、血管からの外生外膜組織の切除及びポリマー製縫合材料による任意の枝状切片の結紮を必要とする。これらの段階を踏んで血管切片は内皮細胞層を除去する更なる処理の用意が整う。内皮下基質層からの内皮細胞層の除去は、内皮下基質層の非血栓特性を保持させるために慎重に行わなければならない。過度に苛酷な技術、例えば界面活性剤剥離の利用は内皮下基質層を傷つけてしまうことが見い出された。内皮下基質層に悪影響を及ぼすことなく内皮細胞層を除去する多くの比較的簡単な試薬及び方法がある。内皮下基質層は例えば温和な化学剥離溶液、例えば水酸化アンモニウム(NH₄OH)により処理してよい。一つのかかる処理は血管腔を約0 .01Ｍ〜約 0.5Ｍ、好ましくは約0.25Ｍの濃度の水系NH₄OH 溶液の中で約30秒〜約60分インキュベートし、次いで血管腔に緩衝溶液をフラッシングすることを含みうる。好適な態様において、この処理は血管腔の中に約0.25Ｍの濃度のNH₄OH 溶液を約３〜５分注入しておくことを含む。この内皮細胞層除去から得られる構造体を図３に示す。内皮細胞除去のための別の適当な技術は管腔表面の風乾の利用である。一つの考慮される風乾処理は、血管腔に残留物質を除去するため緩衝液をフラッシングし、次いで内径４mmの血管に対しては約５〜約10分間にわたり約500 〜約 2,000 cc／min の流速で風乾することを包括する。流速は内径４mmの血管に対しては約 1,000／minであることが好ましい。風乾の後、血管腔に内皮細胞を除去するため緩衝液をフラッシングし、次いで更なる処理の前に内皮下基質層を再水和させておく。本発明の別の態様において、内皮細胞は、動脈を一連の凍結−融解サイクル（好ましくは２サイクルより多く）にかけ、次いで動脈腔に適当な溶液、際えばハンクスの平衡塩溶液（HBSS）（1.3mMのCaCl₂，５mMのKCl，0.3mMのKH₂PO₄，0.5m MのMgCl₂，0.4mMのMgSO₄，138mMのNaCl，４mMのNaHCO₃，0.3mMのNaHPO₄，5.6mM のグルコース）をフラッシングすることにより除去される。内皮下基質表面が上記の通りにして内皮細胞除去により調製されたら、移植した血管組織のカルシウム沈着を防止又は最小限とする処理工程を採用してよい。この技術は主に脂質成分を抽出する溶媒溶液を利用する。一つの効果的な処理は、動脈を例えば２：１の容量：容量の比のクロホルムとメタノール(CHCl₃／CH₃O H)の溶液の中に約15〜約60分間浸しておくことを含み、約20〜約40分の処理時間が好ましい。次いで動脈を溶媒溶液から取り出し、そして食塩水溶液への浸漬を介して再水和させる。再水和させたら、移植片を下記のようにして保存する。クロロホルム／メタノール処理は内皮下基質を損傷せず、しかも移植した後の動脈のカルシウム沈着を抑制する。当業者に周知のその他のカルシウム沈着防止処理も同様に採用できることが知られている。再水和の後、内皮下基質層を保存し、免疫原性を下げ、且つ血管切片を滅菌するために動脈を加圧固定する。この固定は、移植片として適当な直径を供するチューブ内に動脈を入れることにより成し遂げられる。次いで動脈の管腔の中に固定溶液、例えば適当な緩衝液中の約0.1 〜2.5％の濃度のグルタルアルデヒドを、使用した固定剤の濃度に依存して約１〜約72時間にわたり約20.7kPa 〜約34.5 kPa の圧力において充填しておく。直径を担う適当なチューブには、限定することなく、ePTFE 血管移植片、例えばW.L.Gore & Associates，Inc.，（アリゾナ州、フラグスタッフ）より商標GORE-TEX（登録商標）血管移植片で入手できるものが含まれる。グルタルアルデヒドに加えて、適当な固定剤には、限定することなく、ホルムアルデヒド、ジアルデヒドデンプン、エタノール及びポリエポキシ化合物が含まれる。適当な緩衝剤には、限定することなく、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−エタンスルホン酸(HEPES)、酢酸塩、２（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸(MES)、３−〔Ｎ−モルホリノ〕プロパンスルホン酸(MO PS)、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、リン酸塩、等が含まれる。好適な態様においては、動脈を20mMのHEPES 緩衝液中の約 0.5％より大きい濃度のグルタルアルデヒドの中で最低約２時間加圧固定する。その他の適当な滅菌剤、例えばホルムアルデヒドも、無菌を確実なものとするためにグルタルアルデヒドに加えて使用してよい。固定の後、動脈をすすぎ、そして無菌生理食塩溶液の中で約４℃にて移植又は更なる使用まで保存しておく。作製した内皮下基質層の代表的な走査電子顕微鏡写真を図４に示す。前述した通り、本発明に関する血管の処理において採用した２つの工程は：１）血管の表面からのドナー内皮の除去；及び２）有機溶媒を利用する血管全体の主に脂質成分の抽出；である。驚くべきことに、これらの処理工程は、本発明の血管態様の機能を、元来想像していたものを超えて改善せしめることができることが発見された。前述の通り、ドナー内皮の除去はその下にある内皮下基質を露出させ、そしてこれらのドナー細胞に対する受容側の急性免疫応答を阻止させる。この段階は好ましくは温和な化学剥離溶液、例えば水酸化アンモニウム(NH₄OH)の利用を介して成し遂げられる。しかしながら、本発明の態様を開発する際、この処理はもとの内皮細胞を単に除去する効果に勝る付加的効果を有することが発見された。その他の方法、即ち風乾又は凍結−融解サイクルにより内皮細胞が除去された血管は、NH₄OH 処理を介して細胞の除去されたものに比べて低い開存性能を示した。更に、風乾又は凍結−融解を介して内皮の除去された血管は、その血管をNH₄OH 抽出に更に委ねたとき、開存性試験において改善された性能を示す。有機溶媒抽出処理は本発明の組織ベース移植片、特にグルタルアルデヒドで固定したものの鉱化を阻害することを意図する。上記の塩基処理効果の発見と同様に、クロロホルム及びメタノール(CHCl₃／CH₃OH)抽出に委ねた血管は、この処理に委ねていない血管に勝る改善された開存性能を供した。この処理の予測していなかった開存性の向上は鉱化過程とは独立しているものと認めることができ、その理由はその効果が鉱化にとって十分な移植期間を経る前に観察されるからである。本発明の発明品への上記の２通りの処理の開存性効果を個別に評価した。しかしながら、好適な実施方法は、本発明の態様を作るためにこれら２通りの処理の双方を利用することである。各処理は開存性機能に寄与し、そしてその組合せは累積的、おそらくは相乗的であると信じられている。本発明においては、図５及び６に示す複合体（28）を形成するよう、処理したドナー動脈を合成材料製のさや（26）で包むことが好ましい。さやのために適当な材料には、限定することなく、とりわけポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリエチレンテレフタレート、ポリプロピレン、フッ化エチレンプロピレンコポリマー(FEP)及び上記の組合せが含まれる。処理したドナー動脈の非血栓特性の維持を補助することがさやの主要機能である。これは、ドナー動脈からホストの細胞を排除し、同時に処理動脈に至る及びそれからの生物学的物質のさやの厚みを横断するバルクフローを可能にすることによって成し遂げられる。理想的なさや材料は、細胞に対して不透過性でありながら、高分子に対して透過性なものである。「高分子」なる語は、限定することなく、例えば約2,000,000MW を含めこれに至るまでの分子量を有する分子を含むものと解される。さやにとって好適な材料は微多孔質の材料であり、微多孔質ePTFE が最も好ましい。さやの厚みを通る細胞通過を阻止するのに有効な気孔サイズは壁自体の厚み及びさやの外面と内面とを連絡せしめる気孔のくねり性に依存する。薄いさや構築体（厚さ約10〜20μｍ）中の規則的な均質な気孔の場合、気孔は直径約 3.0μｍ未満となるように選定せねばならない。この値は、まっすぐで均質な気孔を通る線維芽細胞の移動限界が約５〜８μｍであり、そしてまっすぐで均質な気孔を通る白血球侵入の限界が約３〜５μｍであるBoydenチャンバーアッセイ(chamber a ssay)に基づく。(A.Albini ら、「Fibroblast Chemotaxis」Collagen Related R esearch ，5:283-296,(1985)；W.Morzyckiら、「Tumour Necrosis Factor-alpha but not Interleukin-1 Induces Polymorphonuclear Leucocyte Migration through Fibroblast Layers by a Fibroblast-Dependent Mechanism」Immunology,74:107-113(1991))。より厚く、よりくねりがある、又は層状の構造の場合、個々の気孔は多少大きくてもよく、なお層を横切る細胞通過の有効なバリヤーを担いつづけることができる。 ePTFE 又は類似のフィブリル化さやに関して、このさやの気孔サイズはさや材料のフィブリルの長さに直接関連する。フィブリルの長さは、さやを介する細胞接近を抑え、しかも高分子の透過性を維持する気孔を形成するように選定すべきである。細胞の内成長に対する抵抗性を規定するうえで、無細胞アッセイ法が開発されている。3.0μｍがまっすぐな気孔の細胞透過性の下限界を示すという公開の値を基礎として、所定のさやが直径３μｍの粒子を排除するかどうかを機械的に決定するためにこの直径の微小球を使用した。その結果、３μｍの微小球を排除する任意のさや材料は、さやを横断する細胞移動を効果的に阻止するであろう。本発明において、さやの特性は、上記の透過性及び細胞排除特性に加え、処理したドナー動脈に機械特性を供するように選定できる。当業者は、各血液器具用途にとって、最低限の機械的保全性要件があることを認識しているであろう。一つの最低限の要件は、器具が、所定の用途の意図している期間の間血圧により強いられる力に耐えることにある。従って、その形態は、破裂又は脈瘤形成することなく血圧により誘発されるフープ応力に耐えるものでなければならず、そして同様に破裂、過剰な縫合穴拡張又は疑似脈瘤形成することなく吻合において誘発される応力に耐えるものでなければならない。このような最低限の機械的要件に加えて、さやは、それが包むことを意図している血管組織がないときでさえも、血管代用品として機械的に働くのに十分な強度のあるものであることが好ましい。この態様においては、合成さやはドナー血管組織まわりに配置されており、かくしてその支持体はドナー組織及び合成さやにより供されるものの複合体である。図５及び６は内皮下基質層（14）、残留中膜層及び外膜層（24）、これらの層を包んでいるさや（26）を有し、複合体（28）を一緒に形成している本複合構造体を示している。生物学的組織の強度をその用途に必要なそれより弱めてしまいうる分解処理にその組織は委ねられるが、この合成品は適当なポリマー及び組立を選定すると、その処理に耐えることができるようになる。さやを構築する一つの方法は、マンドレルを多層のePETF フィルム、例えば双方共Goreに付与された米国特許第3,953,566 号及び同第4,187,390 号（それぞれは引用することで本明細書に組入れる）に記載のもので包み、そしてこのフィルム及びマンドレルを約 380℃で約10〜20分加熱することによりフィルム同志を接着させ合うことにより構築するものである。このフィルムチューブをマンドレルから外し、そして調製しておいた組織移植片をポリマーチューブの管腔の中に設置した。その材料又は材料の組合せは、選定の材料の物理特性に適する温度及び時間を利用して同様に組織チューブに適用してよい。さや材料を製造するその他の方法は、処理した動脈をマンドレルの上に置き、そしてその動脈を多層のePTFE 及びFEP 複合フィルムで包み、そしてそのフィルム層を瞬時にFEP フィルムの融点を超える温度、即ち約271℃に加熱して血管の外面上のフィルムラップ同志を融着させることを含む。FEP をコートしたePTFE フィルムは次の処理を含む工程により作られる：ａ）通常は膜又はフィルム状の多孔質PTFE支持体を、好ましくはFEP 又はその他の熱可塑性ポリマーのフィルムである別の層と接触させ；ｂ）処理（ａ）において得られた組成物を前記熱可塑性ポリマーの融点より高い温度に加熱し；ｃ）前記熱可塑性ポリマーの融点より高い温度に維持しながら処理（ｂ）の加熱組成物を延伸し；そしてｄ）処理（ｃ）の生成物を冷却する。その他のさや構築法は、引用することで本明細書に組入れるGoreに付与された米国特許第3,593,566 号に従い一軸延伸により構築した管状のePTFE 組立てである。処理した血管をこのようにして構築したePTFE チューブの中に挿入する。さやのその他の形態と同様、この管状形態は高分子の通過に対して透過性であるが、しかし細胞は通過させないものでなくてはならない。さやの構築は、引用することで本明細書に組入れる1994年４月29日提出のBruc hmanらの米国特許出願、題名「Cell Excluding Sheath For Vascular Grafts 」 USSN 08／235,045 号に記載されている。さやの透過特性は、処理した動脈からさやを外し、次いで既知サイズのマーカー、例えばデキストラン及びポリスチレン微小球により試験することによって評価できる。例えば、フルオレセイン(Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO)によりラベルした約2,000,000MW の平均分子量を有するデキストランをさやの高分子通過能力を試験するために用いることができる。さやの細胞透過性は例えば懸濁物中で固形分約 2.5％の濃度を有する約 3.0μｍの直径のポリスチレン微小球(P olysciences，Inc.，Warrington，PA)により試験することができる。さやを着色マーカーにより透過性について試験するとき、そのマーカーは明瞭な可視色を供するのに十分な濃度で水溶液又は懸濁物として懸濁する。このマーカー溶液の化合物の好適な濃度は約0.2mg のデキストラン／mlの溶液及び約0.02mlの微小球／mlの懸濁液で、後者は約 4.5×10⁷のビース／mlの懸濁液である。さやの透過性の評価は約23℃で行う。必要ならば、さやは、それを水に対して透過性とすることによって透過試験の準備を整えておく。例えば、ePTFE より構築したさやは 100％のエチルアルコールにより濡らし、次いで試験前にアルコールを除去するために水でフラッシングする。高分子に対するさやの透過性を試験するため、デキストラン試験溶液をさやの管腔に注入し、そして注射器を利用して約20.7kPa に加圧する。注射器の内容物をさやに押し込み、そしてさやの壁をしみ出る液体を集め、そして有色デキストランの形跡について白色の背景に対して目視検査する。さやの細胞透過性を試験するための準備において、懸濁液中の微小球の数を適当な計測装置、例えばヘマサイトメーターを用いることにより決定する。次いでさやの細胞透過性を、そのさや材料に微小球含有懸濁液を注射器を用いて約20.7 kPa にて押し込むことにより試験する。注射器に水を再充填し、そしてこの水も約20.7kPa にてさやに押し込む。さやの壁をしみ出る液体を集め、そして約300 ｇの遠心分離に約10分かける。上澄液をデカンテーションして捨て、そして微小球のペレットを既知容量の水に再懸濁する。再懸濁したペレットの中の微小球の数を計測し、そして元の懸濁液と比較する。さやをしみ出る微小球の数は、さやの管腔に導入した数のパーセンテージとして表わす。本用途にとって適当なさやは、約20.7kPa 以下の圧力において 2,000,000MWのデキストランを通過させ、さやをしみ出る溶液が白色の背景に対して観察されたときに目に見えるほど着色されているものとなるようにするものであらう。更に、このさやは約20.7kPa において約 5.0 ％より多くの 3.0μｍの微小球を通過させないようなものであろう。前述した通り、本発明の重要な要素は、血液接触表面としての保存内皮下基質層の利用である。本発明は、保存内皮下基質層をもとの位置のままに残し、そして組織にこの層をそのまま移植することによって好適に実施される。別の態様は、保存する前にドナーの心臓血管組織の表面から内皮下基質層を除去しておき、次いで合成表面に内皮下基質層を再付着させることである。次いで、合成表面上のこの内皮下基質層に対して前述のカルシウム沈着防止及び保存処理を施す。この場合、この合成成分は補てつ物のために必要な機械的な支持の全てを司る。合成支持体層に内皮下基質層を適用する工程における第１の処理はドナーの組織からの内皮の除去である。次いで内皮下基質層を例えばメスの刃を用いてドナーの組織から機械的に除去する。内部弾性板の上層の細胞外基質層のみを除去する。無傷の内部弾性板層はドナーの組織に付着したままにしておく。合成支持体層への内皮下基質層の付着のためのいくつかの方法が可能である。合成支持体への内皮下基質層の一つの好適な付着方法は、合成支持体の上に得られた内皮下基質層を機械的に捕促させることである。これは例えば、ウシの大動脈の管腔表面に由来する内皮下基質層をHBSSの中に懸濁することにより成し遂げられる。ePTFE 血管移植片を注射器継手（フィッティング）の上に取り付けた後に 100％のエタノールで濡らし、そして内皮下基質懸濁物を含む溶液を注射器圧を利用して微多孔質移植片の隙間に押し入れる。その溶液がその移植片に押し入れられると、内皮下基質の断片は移植片の隙間の中及びその表面上に捕促されて残る。上記の任意の方法により調製した内皮下基質層は数多くの細胞外基質成分を含む。免疫細胞化学アッセイを利用し、この内皮下基質層は、例えば硫酸コンドロイチンプロテオグリカン類、フィブロネクチン、Ｉ型コラーゲン、IV型コラーゲン、III型コラーゲン、エラスチン、グルコサミノグリカン担持プロテオグリカン類を含むことが決定された。本発明に従って作った血管の構造本発明の範囲を限定するつもりでなく、以下の実施例は本発明をどのようにして実施及び使用するかを説明する。以下の実施例の実験結果を実施例の章の最後の表１においてまとめている。実施例例１本例は、本発明の保存内皮下基質層を有する動脈由来の血管移植片が、内皮下基質層を欠くコントロールの動脈由来の血管移植片と比べて改善された開存性を有することを実証する。数対の頸動脈切片をドナーのグレイハウンド犬から取り出し、15％のジメチルスルホキシド／ハンクスの平衡塩溶液（DMSO／HBSS）を含むバイアルに入れ、そして次の処理まで液体窒素下で凍結保存した。処理のとき、各バイアルを37℃の湯浴の中に融解するまで浸しておいた。各対の動脈をバイアルから取り出し、標準食塩水の中ですすぎ、そして手動での切開により外膜を除去した。各対のうちの一方の動脈を内皮下基質層の剥離のために選び、そしてコントロール移植片を担う。各対の他方の動脈は内皮下基質層が無傷で保存されるように処理し、そして本発明の移植片を担う。内皮下剥離手順は、コントロール動脈切片の一端を止血鉗子で握み、そして鋭利な先端を有するシリンダー状の押し出しポリテトラフルオロエチレン（PTFE）全体を管腔に押し付けて血管全体にわたって下方向に強制的に引き降ろすことにより実施した。内皮下基質層の崩壊及び除去を確実にするためにこの手順を数回繰り返した。保存内皮下基質層を有する本発明の血管切片は、残留ドナー内皮がないことを確実にするためにその管腔表面を気流（約1000cc／min）に５分間曝露しておいた。気流にかけた動脈の代表的なサンプルの走査電子顕微鏡(SEM)観察は、天然内皮のほぼ完全な消失及び内皮下基質層の維持を確証せしめた。本発明の目的にとって、内皮下基質層からの約80％より多くの天然内皮の除去が、内皮下基質層を実質的にドナー内皮細胞を含まないものにするものであると考えられると解される。次に、コントロール及び本発明の血管の双方の対を３−０号絹製縫合糸を用いて有刺継手(barbed fitt ing)に取り付け、そして薄壁の 3.0mmのGORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.G ore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)スリーブ内に収納し、約 2.5mmの最終内径を供した。血管の組を食塩水ですすぎ、0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液( pH7.0〜7.2)中の 2.5％のグルタルアルデヒドに浸し、そしてその溶液を管腔の中に27.6kPa の圧力で２時間押し込んだ。無菌技術を利用しながら、ePTFE スリーブを外し、動脈切片の先端をトリーミングし、血管を無菌標準食塩水でよくすすぎ、そして移植まで無菌標準食塩水の中で４℃で保存した。これらのコントロール及び本発明の移植片を６匹の成犬グレイハウンドの腕動脈の中に試験対として移植した。各対の一方の移植片を犬の一方の腕動脈に移植し、各犬において血管の直接対比ができるようにした。2.5mmの内径を有する長さ2.5cmの血管移植片は、成犬グレイハウンド受容体の天然腕動脈に合う良好な直径である。標準の端々吻合(end-to-end)外科技術を移植のために利用し、そして犬に抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。移植の経過は対照血管造影法及び二重超音波検査を利用して追跡した。手術後２週目において、各腕移植片対を外科的に露出させ、そして移植位置から距離を置いて動脈を切開することにより開存性の試験をした。保存内皮下基質層を有する本発明の移植片は６例のうちの６例（６／６）において開存していることが確認され、一方崩壊した内皮下基質層を有するコントロール移植片は６例のうちの１例（１／６）のみにおいて開存していた。まとめると、本発明の移植片は、保存内皮下基質層が、内皮下基質層を欠くコントロール移植片と比べて改善された開存性を供することを実証する。例２本例は、本発明の内皮下基質層のクロロホルム及びメタノールの溶液による処理は、移植片の内皮下基質層の保存に影響を及ぼすことなく、移植後の移植片のカルシウム沈着を低下させることを実証する。雌牛由来の末梢足動脈を屠殺所から入手し、そして処理するまで−20℃で凍結保存しておいた。融解後、約２〜３mmの内径を有する末梢動脈を見きわめ、そして動物から切除した。外膜を切開により除き、枝を縛り、そして血管切片を有刺継手に取り付けた。ドナー内皮がないことを確実にするため、各血管切片の管腔を気流で約５分間風乾し、次いでHBSSの中で簡単にすすいだ。各血管切片を半分に切った。この切片の半分を任意的に本発明移植片に割り当て、そしてもう半分をコントロール移植片に割り当てた。次いで本発明移植片をクロロホルム及びメタノール(CHCl₃／CH₃OH ; ２：１ｖ：ｖ）の溶液に室温で約30分間浸した。次いで本発明移植片を約30分標準食塩水中で再水和し、約 2.5mmの最終内径を供するように商業的に入手できる 3.0mmの薄壁GORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L .Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)にそで通しして、そして 0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0)中の 2.5％のグルタルアルデヒド溶液を27.6kPa で２時間灌流した。固定後、スリーブを外し、血管切片の先端をトリーミングし、そしてその切片を残留グルタルアルデヒドを除くために全部で30分間かけて500mlの無菌食塩水（２回交換）の中ですすいだ。処理した動脈切片を移植するまで無菌標準食塩水の中で保存しておいた。コントロールの動脈切片も同様に処理したが、ただし CH₃Cl₃／CH₃OH 抽出にはかけなかった。本発明及びコントロールの移植片を成犬グレイハウンドの腕動脈の中に試験対として移植し、ここで一方の腕動脈には本発明の抽出ウシ試験移植片を受容させ、そして反対側の動脈には無抽出コントロール移植片を受容させた。長さ 2.5cm の移植片を標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。開存性の状態を確認するために対照血管造影を定期的に利用した。移植片を術後 393日目で露出させ、そして移植位置から距離を置いて動脈を切開することにより開存性を試験した。両移植片共開存していることが見い出された。コントロールの無抽出ウシ移植片は重度に鉱化しており、切開後の管腔上に縦長の亀裂があることが認められた。本発明の抽出ウシ試験移植片には、顕著な、又は顕微鏡観察されるようなカルシウム沈着がなかった。従って、クロロホルム及びメタノール処理は移植片壁のカルシウム沈着を、内皮下基質層の保存に影響を及ぼすことなく、抑制した。例３本例は、移植片のカルシウム沈着を防止又は抑制するためにクロロホルム及びメタノールの溶液で処理した本発明の保存内皮下基質層を有するドナー動脈が、コントロールePTFE 移植片と比べて改善された開存性を供することを実証する。直径２〜３mmの末梢足動脈を雌牛から獲得し、そして例２に詳述のクロロホルム及びメタノール抽出した本発明の移植片と同様に処理した。これらの移植片を、コントロール移植片として内径 2.5mmの30μｍのGORE-TEX（登録商標）延伸膨張PTFEチューブ(W.L.Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)を用いて試験対としてグレイハウンドの腕動脈の中に移植した。本例におけるコントロールのために用いた内径 2.5mmのePTFE チューブは、引用することで本明細書に組入れるGoreに付与された米国特許第3,953,566 号に教示の通り、CD123 微粉末PTFE樹脂(ICI Americas)より構築された。これらのチューブを約30μｍの平均フィブリル長となるように伸長により延伸膨張した。最終チューブは約 2.5mmの内径及び約0.33mmの壁厚を有した。上記の通りに製造した多孔質延伸膨張PTFEチューブのフィブリルの長さは、延伸方向においてフィブリルにより接続された結節間の10回の測定値の平均として本明細書において定義する。10回の測定は以下のようにして行なう。第１に、サンプル表面の代表的な部分の顕微鏡写真を、写真の縦方向においてフィブリルが連続して少なくとも５本示されるのに適当な倍率で作製する。顕微鏡写真の縦方向を横断する２本の平行線を引いてその写真を３等分の領域に分割し、それらの線は延伸方向及びフィブリルの配向方向に対して平行な方向に引かれる。左側から右側にかけて測定して、写真の上部の線分に沿って、写真の左端付近の線分と交差する最初の結節から始め、線分と交差する連続している結節へと続けてフィブリル長の５回の測定を行った。別の線分に沿って更に５回の測定を、写真の右手側の線分を交差する最初の結節から始め、右側から左側に向って行った。この方法により得た10回の測定値を平均して、この材料のフィブリル長を得た。一方の腕動脈には抽出ウシ発明移植片を受容させ、そして他方の動脈は30μｍのePTFE コントロール移植片を受容させた。長さ 2.5cmの移植片を標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを利用して、術後の最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。不明瞭な超音波結果の場合には開存状態を確認するために対照血管造影も採用した。１ケ月目において、抽出ウシ発明移植片は５例のうち３例（３／５）において開存しており、そして合成ePTFE コントロール移植片は５例のうち１例（１／５）が開存していることが見い出された。まとめると、内皮下基質層の保存並びにクロロホルム及びメタノール処理によるカルシウム沈着の抑制はコントロールePTFE 移植片と比べて改善された開存性を供する。例４本例は、本発明の保存内皮下基質層を有するドナー移植片が保存内皮を有する商業的に入手できる移植片と比べて改善された開存性を供することを実証する。直径４〜５mmの末梢足動脈を雌牛から獲得し、そしてクロロホルム及びメタノール抽出した本発明の移植片に対して例２に記載の通りに処理したが、ただしそれらは約 5.0mmの最終内径を供するように６mmのスリーブチューブの中でグルタルアルデヒドにより加圧固定した。この処理の結果得られた物は、内皮細胞は有さないが、無傷の保存内皮下基質層を有する移植片である。これらの発明移植片を、コントロール移植片を担うBiocor Industria E Pequisas LTDA（ブラジル）より製造されたウシ由来の商業的に入手できる 5.0mmの移植片と移植研究において比較した。Biocor移植片はグルタルアルデヒド固定にもかけたが、しかしSEM 観察では、移植片の管腔表面上に存在している均質なドナー内皮が示された。使用前に、双方の移植片を無菌食塩水を何回か交換して洗い、そして移植するまで無菌標準食塩水の中で冷蔵保存した。標準の端々吻合外科技術を利用し、長さ 4.0cmの双方の移植片を６匹の成犬グレイハウンドの大腿動脈に試験対として移植した。各犬の一方の大腿動脈にはBi ocorウシ移植片を移植し、そして反対側の動脈には上記の通りに処理した発明移植片を受容させた。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。対照血管造影も不明瞭な超音波結果の場合の開存状態を調べるために採用した。１ケ月目において、内皮細胞のない無傷の内皮下基質層を有する抽出ウシ発明移植片は６例のうち３例（３／６）において開存しており、一方無傷の内皮を有するコントロールのBiocorウシ移植片は６例のうち０例（０／６）において開存していた。まとめると、発明移植片の保存内皮下基質層は、保存内皮細胞層を有する商業的に入手できる生物移植片と比べて改善された開存性を供する。例５本例は、本発明の保存内皮下基質層を有するドナー移植片は、汎用の界面活性剤処理により内皮細胞層の除去されたドナー移植片と比べて改善された開存性能を供することを実証する。一対の動脈をドナー犬から取り出し、15％のDMSO／HBSSに入れ、そして液体窒素の中で保存した。処理のため、移植片対を融解し、HBSSの中ですすぎ、そして切開により外膜を除去した。その対の一方の血管を本発明に開示の通りに処理して、保存内皮下基質層を有するドナー移植片とした。他方の血管は引用することで本明細書に組入れるKlement らに付与された米国特許第4,776,853 号の教示に従い、且つ以下に概略してある通りに処理して、移植片から内皮細胞層の除去されたドナー移植片にした。本発明の発明移植片は、動脈切片を0.25ＭのNH₄OH の中に１分入れてドナー内皮が確実に失われるようにし、次いでHBSSの中ですすぐことにより調製した。次の処理において、動脈切片をCHCl₃／CH₃OH（２：１ｖ：ｖ）の溶液の中で約30 分浸漬して移植後のカルシウム沈着が阻害されるようにした。この処理の際、管腔を定期的に新鮮な溶液でフラッシングした。移植片切片をHBSSの中で再水和させ、3.0mmの薄壁GORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.Gore & Associates，Inc .，Flagstaff，AZ)でそで通ししてその後の加圧固定処理の際に管腔が約2.5mm に保たれるようにし、次いで有刺継手に取り付けた。次いで移植片血管を 0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0〜7.2)中の0.25％（ｖ／ｖ）のグルタルアルデヒドを用いて27.6kPa の圧力において２時間加圧固定した。加圧固定後、動脈移植片切片をスリーブから抜き出し、そして0.25％のグルタルアルデヒド溶液の中で更に８〜24時間固定した。最終処理において、動脈移植片切片をグルタルアルデヒド溶液から取り出し、標準食塩水の中で数回すすぎ、そして滅菌標準食塩水の中で４℃で使用時まで保存した。コントロール移植片は融解ドナー動脈対の他方の切片を用い、そしてKlement らに付与された米国特許第4,776,853 号のExample １に記載の方法にかけることによって調製した。詳しくは、大動脈片をまず10mMのトリス緩衝液の中で４℃で 24時間インキュベートし（容量で 100：１の溶液：血管）、次いで１％のトリトンＸ−100 界面活性剤の中で４℃で24時間（同じ容量比）インキュベートした。次に切片を 100：１の容量の精製無菌水で３回洗い、そしてHBSS／ 10mMのHEPES 及び50Ｕ／mlのペニシリン／ストレプトマイシン(Gibco)の中で37 ℃で45分ゆらしながらインキュベートした。更なる加工処理において、その切片をRNase A 及びDNase I(共にSigma Chemical Company，St．Lonis，MO より獲得 )酵素処理に 4.5時間ゆらしながらかけ、そして精製水の中で再び洗った。次いでその切片を１％のドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶液の中で24時間室温でインキュベートし、そして100：１の容量の精製無菌水の中で（３回交換）24時間かけて洗った。血管を 100Ｕ／mlのペニシリン／ストレプトマイシンを有するHBSS ／10mMのHEPES の中で４℃で使用時まで保存した。このコントロール移植片の処理は実質的に全ての内皮細胞を除去する。各説明の一血管を成犬グレイハウンドの腕動脈に移植し、ここで一方の腕動脈には上記の通りに処理した発明移植片を受容させ、そして反対側の腕動脈には上記のコントロール移植片を受容させた。長さ 2.5cmそして直径 2.5mmの移植片を標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを用い、術後の最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。コントロール移植片は術後４日目までに閉塞しており、一方本発明の発明移植片は開存のままとなっていることが見い出された。これは術後14日目での対照血管造影により更に立証された。移植片を移植後１ケ月目において取り出し、そして移植片の開存状態は移植位置から距離を置いてホストの動脈を切断し、そして血流を検定することにより立証された。発明移植片は１ケ月目において広く開存状態であり続け、そして血栓沈着物がほとんどないことが見い出された。コントロール移植片は、より初期に立証された通り、閉塞しており、そして吻合は有機組織で充填されていることが見い出され、長期間の閉塞が示唆された。従って、内皮細胞層を除去するためのコントロール生物移植片の上記の界面活性剤処理は、保存内皮下基質層を有する発明移植片に関して観察された改善された開存性能と比べ、開存性に対してネガティブな効果を有する。例６上記の例５に加え、本例は、脱内皮界面活性剤で処理したドナー移植片の開存性能を本発明の保存内皮下基質層を有するドナー移植片の開存性能と比較する追加の実験を示す。本実験においては、同種異系動脈を４匹の成犬グレイハウンドの大腿動脈に移植した。移植するつもりの動脈対はドナー犬から獲得した頸動脈とした。各対の一方の動脈を発明移植片として選び、そして上記の例５における発明移植片について詳述した通りに処理したが、ただし移植片は内径4.0mm 及び長さ4.0cm のものとした。他方の動脈はコントロール移植片として選び、そして上記の例５に記載のコントロール移植のように処理した。これらの移植片対を各犬の大腿動脈に片側に一つづつ移植し、これにより各犬は２つの移植片タイプの直接対比がなされるようにしてある。１ケ月目に、移植片を外科的に露出させ、そして移植位置から距離を置いて動脈を切開することにより開存性について試験した。発明移植片の４例のうちの４例（４／４）は開存のままであり、一方コントロール移植片の４例のうち２例（２／４）が開存していることが見い出された。コントロール移植片は、除去の際に移植片が裂けた場合、４例のうち２例（２／４）において機械保全性が失われていることが更に見い出された。移植片の壁は移植時よりもはるかに弱まっていることが見い出された。即ち、生物移植片の界面活性剤処理は発明移植片により観察された改善された開存性と比べ、開存性に対してネガティブな効果を有する。例７非イオン性界面活性剤トリトンＸ−100 は数多くの特許及び公開物において動脈処理の加工処理に利用されている。例えば、Brendel らに付与されている米国特許第4,801,299 号及びKlement らに付与された同第4,776,853 号を参照のこと。本発明におけるその有効性を以下の通りにして試験した。末梢足動脈を上記の例２に記載の通りにして雌牛から獲得した。そのサイズは約２〜３mmの内径を供するように選んだ。切開後、血管の管腔表面を風乾してドナー内皮の除去を確実とした。動脈をプールし、次いで試験血管グループ又はコントロール血管グループへとランダムに割り当てた。試験血管は１％のトリトンＸ−100 の中で42時間抽出した。コントロール血管はトリトンＸ−100 界面活性剤で抽出しなかった。双方の血管を以下の各溶液の中で２時間すすいだ：食塩水、12％のエタノール、そして再び食塩水。双方の血管を有刺継手に装着し、３mm のePTFE チューブでそで通しして 2.5mmの最終内径となるようにし、そして 0.2 Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0)中の 2.5％のグルタルアルデヒド溶液で２時間、27.6kPa の圧力において加圧灌流した。固定後、血管を滅菌食塩水中ですすぎ（２回交換）、そして移植に必要とされるまで４℃で無菌標準食塩水の中で保存した。コントロール移植片を発明移植片と同様に処理したが、ただしトリトンＸ−100 内皮細胞抽出工程は抜きとした。標準端々吻合外科技術を利用し、長さ 2.5cmの双方の移植片タイプを試験対として７匹の成犬グレイハウンドの腕動脈に移植した。各犬の一方の腕動脈にはトリトンＸ−100 試験移植片を受容させ、そして反対側の動脈には無抽出コントロール移植片を受容させた。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。対照血管造影も問題のある超音波結果の場合に開存状態を調べるために採用した。術後３週目において、界面活性剤抽出試験移植片の７例のうち０例（０／７）が開存しており、一方無抽出コントロール移植片は７例のうち５例（５／７）において開存していた。従って、生物移植片のトリトンＸ −100 抽出は本発明の開存性能に対してネガティブな効果をもたらした。例８ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)は非共有結合を破綻することによりタンパク質を変性させる陰イオン界面活性剤である。SDS の利用は移植するつもりのいくつかの組織調製品において述べられている。例えば、Brendel らに付与された米国特許第4,801,299 号；Klement らに付与された同第4,776,853 号；Lentz らに付与された同第4,323,358 号；及びDewanjeeに付与された同第4,553,974 号がある。本発明の開存性能に及ぼすSDS の効果を本例において実証する。数対の頸動脈切片をグレイハウンド犬から獲得し、そして内皮細胞を例１の通りに除去した。次いで動脈切片を15％のDMSO／HBSSの中で凍結保存した。融解後、外膜を除去し、そして各対の一方の動脈をSDS 抽出による試験のために選んだ。各対由来の他方の動脈はコントロール動脈を担った。試験切片を有刺継手上に装着し、水中の４％（ｗ：ｖ）のSDS を充填し、そしてこの溶液に浸しながら27 .6kPa に加圧した。この試験切片を約 100mlのSDS 溶液の中に浸しながら20時間抽出した。試験切片の管腔の中の溶液は抽出の最初の３時間にわたって１時間毎に交換した。抽出後、試験切片を蒸留水でよくすすいで残留SDS を除去した。次に試験及びコントロール動脈切片の双方を 3.0mmのePTFE チューブに入れて約 2 .5mmの最終内径となるようにし、そして有刺継手を再び取り付けた。次いで動脈切片の双方をソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0)中の 2.5％のグルタルアルデヒドにより27.6kPa の圧力において２時間灌流した。固定後、双方の切片を無菌標準食塩水の中ですすぎ（２回交換）、そして移植のために必要とされるまで４℃において無菌標準食塩水の中で保存した。従って、この無抽出コントロール移植片はSDS 抽出処理を除き、試験移植片と同じようにして調製した。試験及びコントロール動脈の開存性能を移植研究において比較した。標準の端々吻合外科技術を利用し、長さ 2.5cmの双方の移植片を５匹の成犬グレイハウンドの腕動脈の中に試験対として移植した。各犬の一方の腕動脈にはSDS 抽出試験移植片を受容させ、そして反対側の動脈にはSDS 抽出抜きで処理した無抽出コントロール移植片を受容させた。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬を、ドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。定期的な対照血管造影も開存状態を確認するために利用した。５例のうちの４例（４／５）において、SDS 抽出試験移植片は術後１日目において閉塞していた。３ケ月目において、無抽出コントロール移植片の５例のうち４例（４／５）は開存しており、一方SDS 抽出試験移植片の５例のうち１例（１／５）のみが開存性していた。６ケ月目においては、無抽出コントロール移植片の５例のうち３例（３／５）が開存しており、一方SDS 抽出試験移植片の５例のうち０例（０／５）が開存していた。まとめると、試験移植片のSDS 抽出は本発明に従って調製した移植片の開存性能に対してネガティブな効果を有した。例９タンパク質分解酵素フィシンをドナー組織の潜在的に免疫原性である部分を消化するために用いた。組織、特に移植するつもりである血管を処理するためのこの酵素の利用は商業ベースで実施されており、そして以下の米国特許に記載されている。即ちRosenberg に付与された第2,900,644 号；Sawyerに付与された第3,927,422 号；Fraefel らに付与された第4,383,832 号；Miyataに付与された第4,098,571 号；及びSchmitz に付与された第4,083,066 号である。本発明に従って調製したドナー動脈組織に対するフィシン消化の効果を本例において実証する。数対の頸動脈切片をドナーグレイハウンド犬から取り出し、15％のDMSO／HBSS を含むバイアルに入れ、そして次の処理まで液体窒素下で凍結保存した。処理の際、各バイアルを37℃の湯浴の中で融解し、標準食塩水の中ですすぎ、そして切開により外膜を除去した。各対の一方の動脈を試験グループに割り当て、そして他方の動脈をコントロールグループに割り当てた。フィシン処理した試験動脈切片はリン酸−クエン酸緩衝液(pH7.4）中の１％のフィシン溶液の中での37℃で３時間のインキュベーションにより処理した。次いで動脈切片を１％の亜塩素酸ナトリウムの中に18時間入れて任意の吸着フィシンを失活させ、次いで標準食塩水中ですすいだ。次いで試験及びコントロール動脈切片を 3.0mmのePTFE チューブでそで通しし、有刺継手を取り付け、そしてその切片を 0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0)中の 2.5％のグルタルアルデヒドにより27.6kPa で２時間加圧固定した。固定後、双方の切片を滅菌食塩水の中ですすぎ（２回交換）、そして移植のために必要とされるまで無菌標準食塩水の中で４℃で保存した。未処理のコントロール移植片は、フィシン及び亜塩素酸ナトリウム処理を除き、試験移植片と同じようにして調製した。これらの血管対を９匹の成犬グレイハウンドの腕動脈に移植した。各対は一匹の犬の腕動脈に移植し、その犬における２通りの処理の直接対比ができるようにした。長さ 2.5cmの移植片対を標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。各犬に 150Ｕ／kgのナトリウムヘパリンを、第一動脈をクランピングする前に与えた。移植後、全ヘパリン用量を硫酸プロタミンに置き換えた。術後２週目において、各腕移植片対を外科的に露出させ、そして移植位置から距離を置いて動脈を切開することにより開存性を試験した。フィシン処理した試験移植片は９例のうち０例（０／９）が開存しており、一方未処理のコントロール移植片は９例のうち５例（５／９）が開存していた。即ち、血管の酵素処理は開存性を破綻させるネガティブな効果を供した。例10 ある状況においては、ドナー血管の外径を小さくすることが所望される。本例は、より良い取扱い特性を有し、しかも本発明の保存内皮下基質層の改善された開存性能を保持している薄壁移植片を提供するための、血管の外径を小さくするようドナー血管の外部組織層をタンパク質分解酵素を用いて消化する加工処理を示す。雌牛の末梢肢を屠殺所から入手し、そして処理するまで−20℃で凍結保存した。足を温水に浸すことにより融解後、正中動脈（前足）及び背側中足動脈（後足）を切除し、そしてHBSSの中で血液をすすぎ洗いした。動脈を任意にコントロールグループ及び発明グループに分けた。切開によって動脈から外膜を除去し、そして側枝を結紮した。内皮細胞を約５分間の気流、それに続くHBSS中での簡単なすすぎにより動脈の管腔表面から除去した。コントロール動脈を 0.2Ｍのトリス緩衝液(pH7.5)の中に入れ、そして37℃で約６時間インキュベートした。発明動脈をカルシウム・マグネシウム非含有HBSS中のエチレンジアミン四酢酸（EDTA；５mg／ml）で充填し、末端を封じ、そして33ユニット／mlのコラゲナーゼを含む 0.2Ｍのトリス緩衝液(pH7.5)の中に浸した。次いで本発明動脈をコラゲナーゼ溶液の中で37℃で約６時間インキュベートした。この処理の効果は、内皮下基質層をそのまま残しながら動脈から外膜及び中膜部分を酵素的に除去することにあった。インキュベーション後、コントロール及び発明動脈の双方を HBSSの中ですすぎ、有刺注射器継手上に取り付け、そして 3.5mmのGORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)でそで通しした。0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0〜7.5)中の 2.5％のグルタルアルデヒドを用いて動脈を約27.6KPa において２時間加圧固定し、内径約２〜３mm の最終移植片を得た。固定後、動脈を無菌標準食塩水の中ですすぎ、そして使用時まで無菌標準食塩水の中で４℃で保存した。GORE-TEX（登録商標）血管移植片スリーブをそのままにしておいて動脈をそれぞれ移植した。標準の端々吻合外科技術を利用し、一本のコントロール及び一本の試験移植片を試験対として６匹のグレイハウンド犬の腕動脈に移植し、犬における移植片の機能の直接対比が比較できるようにした。術後２週目において、コラゲナーゼ処理した発明動脈の６例のうち３例（３／６）は開存しており、そして擬似消化(m ock digested)コントロール動脈の６例のうち２例（２／６）が開存していた。従って、コラゲナーゼによる動脈中層の除去は、内皮下基質層がコラゲナーゼにより保護され、その結果保存されている限り、開存性を損うことがない。例11 本発明の一態様おいて、内皮下基質層をドナー血管から取り除き、そして合成材料製の人工血管の表面に適用して保存せしめた。本例はかかる補てつ物の開存性能を示す。商業的に入手できる４mm GORE-TEX(登録商標)血管移植片(W.L.Gore & Associa tes，Inc.，Flagstaff，AZ)をドナー雌牛大動脈由来の内皮下基質層の付加を通じて改質せしめた。ドナー血管を屠殺所から入手し、そして例２に前述したようにして使用時まで凍結した。縦方向切開により切り開いた後、血管内膜表面をペーパータオルで静かにこすり、凍結融解サイクルの後に残っている内皮細胞の除去を確実とした。次いで、メスの刃を用い、ドナー血管の内膜表面を、内部弾性板を突き刺さないように気をつけながら注意深くかき落とした。約 5.0cmの雌牛大動脈からこのようにして得た内皮下基質を一本の 4.0mm× 5.0cmの発明移植片のために用いた。雌牛大動脈からのかき落し物を約50mlのHBSSの中に懸濁し、そしてバーチ(Verti)−剪断ミキサーによる約60秒のホモジナイゼーションにかけた。ホモジナイズした内皮下基質層を約 10分間放置して大きな塊を沈降させ、そしてホモジナイズ品の残りをデカンテーションした。この懸濁物を使用の準備ができるまで注射器の中に入れておいた。 GORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，A Z)を有刺継手上に取り付けた。ePTFE 血管移植片を 100％のエタノールで濡らし、次いでエタノールをHBSSと交換した。内皮下基質層のかき落し物を含む注射器からの試料の一部を移植片の気孔を通して押し込み、移植片の表面上に内皮下基質を載せた。次いで内皮下基質層を保存させ、且つ無菌を確実なものとするために、この移植片を 2.5％のグルタルアルデヒド溶液の中に２時間浸した。この移植片を複数回の無菌食塩水の交換によりすすぎ、そして移植するまで無菌食塩水の中で４℃で保存した。本発明移植片を一頭の成犬グレイハウンドの頸動脈に移植した。内径 4.0mmの移植片は犬の天然頸動脈に合う良好な直径であり、そして移植のために標準の端々吻合外科技術を利用した。抗血小板剤は犬に全く投与せず、手術期間中のみ 1 00Ｕ／kgのヘパリンを投与した。移植の経過を対照血管造影及び二重超音波検査を利用して追跡した。移植１ケ月目において、本発明移植片を外科的に露出させ、そして移植位置から距離を置いて動脈を切開することにより開存性について試験した。本発明移植片は開存していた。例12 本例は、内皮下基質層の保存の前の脱内皮された同種異系動脈の管腔の水酸化アンモニウム処理が、水酸化アンモニウムにより処理していない動脈と比べて改善された開存性を示すことを例示する。数対の頸動脈切片をドナーグレイハウンド犬から取り出し、HBSS中の15％のDM SOを含むバイアルに入れ、そしてその後の処理まで液体窒素下で凍結保存した。処理の際、各バイアルを37℃の湯浴の中に融解するまで浸しておいた。各対の動脈をバイアルから取り出し、標準食塩水の中ですすぎ、そして手動切開により外膜を除去した。その血管を３−０号の絹製縫合糸を用いて有刺継手上に取付け、そして約 2.5mmの最終内径を供するように 3.0mmの薄壁GORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)スリーブに収納した。次に各対の両血管を気流(約1000cc／min)に５分間曝露して凍結保存−融解サイクル後に残っている全ての内皮を除き、そして再びHBSSをフラッシングした。気流にかけた動脈の代表的なサンプルの走査電子顕微鏡(SEM)観察は、天然内皮のほとんどの消失、例えば80％より多くの消失、及び内皮下基質層の維持を確証せしめた。各対の一方の動脈をNH₄OH 処理のために選び、そして本発明移植片を担った。これらの発明移植片それぞれを0.25ＭのNH₄OH 溶液の中に１時間入れておいた。各対の他方の動脈はコントロール移植片を担うように選び、そしてNH₄O H 処理工程を除き同様に処理した。再びこの数対の血管をHBSSですすぎ、0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7. 0〜7.2)中の 2.5％のグルタルアルデヒドに浸し、そしてその管腔の中にこの溶液を27.6kPa で２時間押し込んでおいた。無菌技術を利用し、ePTFE スリーブを除去し、動脈切片の先端をトリーミングし、血管を無菌標準食塩水の中でよくすすぎ、そして移植するまで無菌標準食塩水の中で保存した。これらのコントロール及び発明移植片を試験対として９匹の成犬グレイハウンドの腕動脈に移植した。各対を同一の犬の腕動脈に移植し、各犬において血管の直接対比が成されるようにした。長さ２.5cm、内径 2.5mmの血管移植片は成犬グレイハウンド受容体の天然腕動脈に合う良好な直径であった。移植のために標準の端々吻合外科技術を利用し、そして抗凝血剤又は抗血小板剤は犬に全く投与されなかった。各犬をドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。対照血管造影も開存状態を確認するために定期的に採用した。術後２ケ月目において、NH₄OH 処理した発明移植片は９例のうち４例（４／９）において開存していることが確認され、一方コントロールの未処理移植片は９例のうち１例（１／９）において開存していた。まとめると、本発明移植片は、 NH₄OH 処理が、未処理の同種異系コントロール血管と比べ、たとえ双方ともドナー内皮が除去されているにしても、同種異系動脈移植体において改善された開存性を供することを実証している。例13 本例は、内皮下基質層を保存する前に脱内皮されたドナー動脈のクロロホルム及びメタノール処理が、クロロホルム及びメタノールにより処理していない動脈に比べて改善された開存性を示すことを例示する。ウシの足切片を屠殺所から入手し、そして処理するまで−20℃で凍結保存した。その足を温水の中に浸すことによって融解後、正中動脈（前足）及び背側中足動脈（後足）を切除し、そしてHBSSの中で血液をすすぎ落とした。約２〜３mmの内径を有する動脈切片を見きわめ、切開により外膜を除去し、枝を結紮し、そして血管切片を有刺継手の上に取り付けた。ドナー内皮の消失を確実とするため、各血管切片の管腔を約1000cc／min の気流で約５分間風乾し、次いでHBSSにより簡単にフラッシングした。この切片の半分を任意的に発明移植片に割り当て、そしてもう半分をコントロール移植片とした。発明移植片をクロロホルム及びメタノール(CHCl₃／CH₃OH ; ２：１ｖ：ｖ )の溶液に室温で約30分浸しておいた。発明移植片からこの溶媒を蒸発させ、そしてこの移植片を標準食塩水の中で約30分再水和させた。次いでこの血管を約2. 5mm の最終内径となるように商業的に入手できる3.0mm の薄壁GORE-TEX（登録商標）血管移植片(W.L.Gore & Associates，Inc.，Flagstaff，AZ)にそで通しし、そして 0.2Ｍのソレンソンのリン酸緩衝液(pH7.0)中の 2.5％のグルタルアルデヒド溶液により27.6kPa で２時間灌流した。固定後、スリーブを外し、血管切片の先端をトリミングし、そして切片を 500mlの滅菌食塩水（２回交換）の中で全部で30分すすいで残留グルタルアルデヒドを除去した。処理した動脈切片を移植するまで無菌食塩水の中で４℃で保存した。コントロール動脈切片を、CHCl₃／C H₃OH 抽出にかけないことを除き、同様にして処理した。本発明及びコントロール移植片を試験対として８匹の成犬グレイハウンドの腕動脈に移植し、各犬の一方の腕動脈には本発明抽出移植片を受容させ、そして反対側の動脈には無抽出コントロール移植片を受容させた。長さ2.5cm の移植片を標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与されなかった。各犬をドップラー超音波二重スキャナーを用いて最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。対照血管造影も開存状態を確認するために定期的に採用した。術後１ケ月目において、C HCl₃／CH₃OH 抽出にかけた本発明移植片は８例のうち５例（５／８）において開存していることが確認され、一方コントロール移植片は８例のうち１例（１／８）において開存していた。即ち、クロロホルム及びメタノール処理はコントロールに比べて本発明移植片の改善された開存性をもたらした。例14 本例は、例13に記載の2.5mm の最終内径の移植片と比較した4.0mm の最終内径を有するドナー動脈を用いての、例13において前述したクロロホルム及びメタノール処理による改善された開存性を実証する。直径４〜５mmの末梢足動脈を雌牛から獲得し、そして例13に記載の通りに処理したが、ただしそれらは約4.0mm の最終内径を供するように5.0mm のスリーブチューブの中でグルタルアルデヒドにより加圧固定した。ここでも、発明及びコントロール切片をクロロホルム及びメタノール抽出処理を除き、同じようにして処理した。標準の端々吻合外科技術を利用して、長さ4.0cm の双方の移植片を試験対として７匹の成犬グレイハウンドの大腿動脈に移植した。各犬の一方の大腿動脈には無抽出コントロール移植片を移植し、そして反対側の動脈には本発明の抽出移植片を受容させた。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬ともドップラー超音波二重スキャナーを用いて最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。問題のある超音波結果の場合には開存状態を決定するために対照血管造影も採用した。１ケ月目において、本抽出発明移植片は７例のうち５例（５／７）において開存しており、一方無抽出コントロール移植片は７例のうち２例（２／７）において開存していた。例13と同様、CHCl₃／CH₃OH 有機溶媒による抽出は改善された開存性をもたらした。例15 以下の例は２通りの例の実験において犬の動脈移植片として用いた豚の動脈の性能を例示する。第１の実験においては、１組の試験脱内皮豚動脈をグルタルアルデヒド処理のみによって処理した。第２の実験においては、別の組の発明脱内皮豚動脈を例12及び13に記載の通りにして本発明に従って処理し、次いで本例の第１実験において採用するグルタルアルデヒド処理にかけた。この２通りの実験においては、双方の組の豚動脈を同一の直径のePTFE移植片と比較している。第１の実験においては、内径約２〜３mmの頸動脈切片を豚から獲得し、HBSS中の15％のDMSOのバイアルに入れ、そして処理するまで−70℃で凍結した。温水に浸すことによって融解後、各血管の外膜を切開により除去した。各切片を約2.5m m の最終固定化内径を供するように3.0mm のスリーブの中に挿入した。この外スリーブの中に収められている血管を有刺継手の上に取り付けた。上記の凍結保存 −融解サイクルの後にドナー内皮がないことを確実とするため、各血管の管腔を約1000cc／min の気流で５分間風乾し、次いでHBSSで簡単にフラッシングした。血管に 4.4ｇ／リットルのNaCl及び 2.6ｇ／リットルのMgCl₂6H₂Oを含む20mM のHEPES 中の0.25％（ｖ：ｖ）のグルタルアルデヒド溶液を２時間27.6kPa において灌流させた。加圧固定の後、スリーブを外し、そして試験移植片を0.25％のグルタルアルデヒド溶液の中に更に８〜24時間入れておいた。グルタルアルデヒド処理から取り出した後、この移植片をよくすすぎ、そして少なくとも24時間４ ℃において標準食塩水の中で保存した。外科挿入の前、各移植片を30Ｕ／mlのヘパリンを含む食塩水溶液に少なくとも８時間入れ換えておいた。移植の際、処理したブタの試験動脈移植片それぞれを長さ2.5cmにトリミングした。これらの移植片の一方を７匹の成犬グレイハウンドの一方の腕動脈の中に移植した。各犬の反対側の腕動脈においては、コントロール移植片を移植した。コントロール移植片は例３に記載の2.5cm の長さの2.5mm のePTFE チューブとした。即ち、２つの移植片タイプを一匹の犬の中に試験対として移植した。移植片は標準の端々吻合外科技術を利用して移植した。抗凝血剤又は抗血小板剤は全く投与しなかった。各犬をドップラー超音波二重スキャナーを用い、最初の２週間は毎日、そしてその後は毎週一回追跡した。対照血管造影も開存状態を確認するために定期的に採用した。術後１ケ月目において、処理したブタの移植片は７例のうち１例（１／７）において開存しており、一方コントロールePTFE 移植片は７例のうち０例（０／７）が開存していた。本例の第２の実験においては、ブタ動脈を第１の実験のそれと同じように処理したが、ただし例12及び13にそれぞれ前述した本発明の処理に更にかけた。本発明ブタ移植片をそれぞれHBSS中の15％のDMSOのバイアルにまず保存し、そして処理するまで液体窒素下で凍結保存した。外膜の除去後、各移植片を0.25ＭのNH₄O H 溶液の中に約３分入れておき、そして例12に記載の通りにしてHBSSの中ですすいだ。例13と同様に、発明移植片をクロロホルム及びメタノール(CHCl₃／CH₃OH ; ２：１ｖ／ｖ)の溶液の中で室温で約30分浸しておいた。移植片から残留クロロホルム及びメタノール溶媒を蒸発させた後、抽出した移植片それぞれをHBSS の中で約30分再水和させ、そして固定後約2.5mm の最終直径を供するように直径 3.0mm のスリーブの中に入れた。次いで血管に 4.4ｇ／リットルのNaCl及び 2.6 ｇ／リットルのMgCl₂・6H₂Oを有する20mMのHEPES 緩衝液の中の0.25％（ｖ：ｖ）のグルタルアルデヒド溶液を２時間27.6kPa で灌流させる。加圧固定後、スリーズを外し、そして移植片を0.25％のグルタルアルデヒド溶液の中に更に８〜24時間入れておいた。本例の第１の実験と同様に、これらの移植片をよくすすぎ、そして標準食塩水の中で４℃で少なくとも24時間保存し、次いで30Ｕ／mlのヘパリンを含む食塩水溶液に少なくとも８時間入れ換えておいた。本例の第１の実験と同様に、本発明ブタ移植片を成犬グレイハウンドにコントロールePTFE 移植片との対比において試験対として移植した。腕での対の対比を７匹の動物において行った。各犬をここでもドップラー超音波二重スキャナーで追跡し、そして毎週一回対照血管造影にかけた。術後１ケ月目において、本発明ブタ移植片は７例のうち４例（４／７）において開存しており、一方コントロールePTFE 移植片は７例のうち１例（１／７）において開存していた。本例は、本発明の処理により供される増大した開存性能を例示することを担う。本発明の特定の態様を本明細書の中で例示及び説明してきたが、本発明はかかる例示及び説明に限定されるべきものではない。変更及び改良は請求の範囲における本発明の一部に組込まれ、且つ具体化されうることが明らかである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１月２５日【補正内容】請求の範囲１．血液接触材料であって：支持体；前記支持体に取り付けられた、ドナーの内皮細胞を実質的に含まない保存内皮下基質層を含んで成る血液接触層；を含んで成り、ここで前記保存内皮下基質層は主要な血液接触表面を司っている、前記血液接触材料。２．前記保存内皮下基質が硫酸コンドロイチンプロテオグリカン類、フィブロネクチン、Ｉ型コラーゲン、III型コラーゲン、IV型コラーゲン、グルコサミノグリカン担持プロテオグリカン類及びエラスチンより成る群のうちの少なくとも一種のタンパク質を含む、請求項１記載の血液接触材料。３．前記の主要な血液接触表面が以下の工程：内皮細胞層が付着した内皮下基質層の供与；内皮細胞を実質的に含まない血液接触表面を生成するための前記内皮下基質層からの内皮層の剥離；を通じて形成される、請求項１記載の血液接触材料。４．剥離溶液による処理によって前記内皮下基質層から内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の血液接触材料。５．前記剥離溶液が水酸化アンモニウムである、請求項４記載の血液接触材料。６．前記内皮層を凍結−融解処理することにより内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の血液接触材料。７．前記内皮層を風乾処理することにより内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の血液接触材料。８．前記支持体が外側と内側とを有するドナー由来の管状血管を含んで成り；そして前記血液接触表面が前記管状血管の内側を占めている；請求項１記載の血液接触材料。９．前記管状血管が動脈である、請求項８記載の血液接触材料。 10．前記管状血管が静脈である、請求項８記載の血液接触材料。 11．前記血管がカルシウム沈着を抑えるように処理されている、請求項８記載の血液接触材料。 12．前記内皮下基質層が内皮下基質層を保存させるために固定剤により処理されている、請求項８記載の血液接触材料。 13．前記血管の外側がポリマー製さやにより包まれており、このさやは高分子に対しては透過性であるが、細胞内成長に対しては抵抗性である、請求項８記載の血液接触材料。 14．前記さやの材料がポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、フッ化エチレンプロピレンコポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン及びシロキサンより成る群のうちの少なくとも一種から選ばれる、請求項13記載のポリマー製さや。 15．前記さやが延伸膨張ポリテトラフルオロエチレンを含んで成る、請求項13 記載のポリマー製さや。 16．前記血管の少なくとも一部が平滑筋細胞を含んで成る、請求項８記載の血液接触材料。 17．前記管状血管の外部を、その血管の外径を小さくし、しかもその内皮下基質層が酵素作用から保護されるように酵素的に除去する、請求項８記載の血液接触材料。 18．前記管状血管が動脈である、請求項17記載の血液接触材料。 19．前記管状血管が静脈である、請求項17記載の血液接触材料。 20．前記血管がカルシウム沈着を抑えるように処理されている、請求項17記載の血液接触材料。 21．前記内皮下基質層がその内皮下基質層を保存させるために固定剤により処理されている、請求項17記載の血液接触材料。 22．前記血管の外側がポリマー製さやにより包まれており、このさやは高分子に対しては透過性であるが、細胞内成長に対しては抵抗性である、請求項17記載の血液接触材料。 23．前記のさやの材料がポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、フッ化エチレンプロピレンコポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン及びシロキサンより成る群のうちの少なくとも一種から選ばれる、請求項22記載のポリマー製さや。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者スウィッツァー，アニタジェイ. アメリカ合衆国，アリゾナ 86018，フラッグスタッフ，ピー．オー．ボックス 2876，スプリングバレーロード（番地なし)

Claims

【特許請求の範囲】１．血液接触表面であって：支持体；前記支持体に取り付けられた、ドナーの内皮細胞を実質的に含まない保存内皮下基質層を含んで成る血液触層；を含んで成り、ここで前記保存内皮下基質層は主要な血液接触表面を司っている、前記血液接触表面。２．前記保存内皮下基質が硫酸コンドロイチンプロテオグリカン類、フィブロネクチン、Ｉ型コラーゲン、III型コラーゲン、IV型コラーゲン、グルコサミノグリカン担持プロテオグリカン類及びエラスチンより成る群のうちの少なくとも一種のタンパク質を含む、請求項１記載の血液接触表面。３．前記表面が以下の工程：内皮細胞を実質的に含まない血液接触表面を生成するための前記内皮下基質層からの内皮層の剥離；を通じて形成される、請求項１記載の血液接触表面。４．剥離溶液による処理によって前記内皮下基質層から内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の方法。５．前記剥離溶液が水酸化アンモニウムである、請求項３記載の方法。６．前記内皮層を凍結−融解処理することにより内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の方法。７．前記内皮層を風乾処理することにより内皮層を剥離することを更に含んで成る、請求項３記載の方法。８．前記支持体が外側と内側とを有する管状血管を含んで成り；そして前記血液接触表面が前記管状血管の内側を占めている；請求項１記載の血液接触表面。９．前記管状血管が動脈である、請求項８記載の血液接触表面。 10．前記管状血管が静脈である、請求項８記載の血液接触表面。 11．前記血管がカルシウム沈着を抑えるように処理されている、請求項８記載の血液接触表面。 12．前記内皮下基質層が内皮下基質層を保存させるために固定剤により処理されている、請求項８記載の血液接触表面。 13．前記血管の外側がポリマー製さやにより包まれており、このさやは高分子に対しては透過性であるが、細胞内成長に対しては抵抗性である、請求項８記載の血液接触表面。 14．前記さやの材料がポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、フッ化エチレンプロピレンコポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン及びシロキサンより成る群のうちの少なくとも一種から選ばれる、請求項13記載のポリマー製さや。 15．前記さやが延伸膨張ポリテトラフルオロエチレンを含んで成る、請求項13 記載のポリマー製さや。 16．前記血管の少なくとも一部が平滑筋細胞を含んで成る、請求項８記載の血液接触表面。 17．前記管状血管の外部を、その血管の外径を小さく、しかもその内皮下基質層が酵素作用から保護されるように酵素的に除去する、請求項８記載の血液接触表面。 18．前記管状血管が動脈である、請求項17記載の血液接触表面。 19．前記管状血管が静脈である、請求項17記載の血液接触表面。 20．前記血管がカルシウム沈着を抑えるように処理されている、請求項17記載の血液接触表面。 21．前記内皮下基質層がその内皮下基質層を保存させるために固定剤により処理されている、請求項17記載の血液接触表面。 22．前記血管の外側がポリマー製さやにより包まれており、このさやは高分子に対しては透過性であるが、細胞内成長に対しては抵抗性である、請求項17記載の血液接触表面。 23．前記のさやの材料がポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、フッ化エチレンプロピレンコポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン及びシロキサンより成る群のうちの少なくとも一種から選ばれる、請求項22記載のポリマー製さや。 24．前記さやが延伸膨張ポリテトラフルオロエチレンを含んで成る、請求項22 記載のポリマー製さや。 25．前記血管の少なくとも一部が平滑筋細胞を含んで成る、請求項17記載の血液接触表面。 26．血液接触表面を製造する方法であって：内皮下基質層に付着した内皮細胞を含んでいるドナーの血管を用意する；内皮細胞を除去し、しかも内皮下基質層はそのまま残るように前記血管を処理する；前記内皮下基質層を保存させるために前記血管を処理する；器具における直接血液接触表面として前記内皮下基質層を利用する；ことを含んで成る方法。 27．前記血管の外径を小さくするように前記ドナーの血管を処理することを更に含んで成る、請求項26記載の方法。 28．タンパク質分解酵素により前記血管の外径を小さくし、しかもこのタンパク質分解酵素から前記内皮下基質層を保護するために前記ドナー血管を処理することを更に含んで成る、請求項27記載の方法。 29．前記血管の外径を小さくするために、前記ドナー血管をコラゲナーゼ、パパイン、トリプシン、キモトリプシン及びエラスターゼより成る群から選ばれる少なくとも一種のタンパク質分解酵素により処理することを更に含んで成る、請求項28記載の方法。 30．人工血管を含んで成る器具として前記内皮下基質層を採用し、そして前記血管の外側をさやで包む；ことを更に含んで成る請求項26記載の方法。 31．前記人工血管に至る及びそれからの、前記さやの厚みを横断する高分子の通過を可能とし、しかも移植されたときに前記人工血管のまわりの組織からの細胞の内成長に抵抗する材料を含んで成るさやを採用することを更に含んで成る、請求項30記載の方法。 32．カルシウム沈着を防ぐために前記血管を処理することを更に含んで成る、請求項26記載の方法。 33．カルシウム沈着を防ぐために前記血管をクロロホルム及びメタノールの溶液により処理することを更に含んで成る、請求項32記載の方法。 34．前記内皮下基質層を保存させるために前記血管を固定溶液により処理することを更に含んで成る、請求項26記載の方法。 35．前記内皮下基質層を保持させるために前記血管をエタノール溶液により処理することを更に含んで成る、請求項34記載の方法。 36．前記内皮下基質層を保存させるために前記血管をグルタルアルデヒド溶液により処理することを更に含んで成る、請求項34記載の方法。 37．直接血液接触表面を製造する方法であって：内皮下基質層に付着した内皮細胞層を含む天然血液接触表面を用意する；前記内皮下基質層がそのまま残るようにこの内皮下基質層から内皮細胞層を剥離する；前記内皮下基質層を保存させるために前記血液接触表面を処理する；直接血液接触表面として、内皮細胞を実質的に含まない保存内皮下基質層を採用する；ことを含んで成る方法。 38．人工血管の直接血液接触表面として保存内皮下基質層を採用する；そして前記人工血管をさやで包む；ことを更に含んで成る請求項37記載の方法。 39．高分子に対して透過性であるが、細胞内成長に対しては抵抗性である多孔質ポリテトラフルオロエチレン材料をさやとして用意することを更に含んで成る、請求項38記載の方法。 40．カルシウム沈着を防ぐために前記血管を処理することを更に含んで成る、請求項37記載の方法。 41．カルシウム沈着を防ぐために前記血管をクロロホルム及びメタノールの溶液により処理することを更に含んで成る、請求項40記載の方法。 42．前記内皮下基質層を保存させるために前記血管を固定溶液により処理することを更に含んで成る、請求項37記載の方法。 43．前記内皮下基質層を保存させるために前記血管をエタノール溶液により処理することを更に含んで成る、請求項42記載の方法。 44．前記内皮下基質層を保存させるために前記血管をグルタルアルデヒド溶液により処理することを更に含んで成る、請求項42記載の方法。 45．前記血管の外径を小さくするために前記ドナー血管を処理することを更に含んで成る、請求項37記載の方法。 46．タンパク質分解酵素により前記血管の外径を小さくし、しかもこのタンパク質分解酵素から前記内皮下基質層を保護するために前記ドナー血管を処理することを更に含んで成る、請求項45記載の方法。 47．前記血管の外径を小さくするために、前記ドナー血管をコラゲナーゼ、パパイン、トリプシン、キモトリプシン及びエラスターゼより成る群から選ばれる少なくとも一種のタンパク質分解酵素により処理することを更に含んで成る、請求項46記載の方法。 48．患者に直接血液接触表面を供与する方法であって：ドナーに由来し、且つ内皮細胞を実質的に含まない内皮下基質層を用意する；移植可能器具に前記内皮下基質層を取り付ける、ここでこの内皮下基質層は前記器具において直接血液接触表面を構成する；前記内皮下基質層を保存する；そして前記器具を前記患者に移植する；ことを含んで成る方法。 49．前記内皮下基質層を保存させるために前記器具を固定溶液により処理することを更に含んで成る、請求項48記載の方法。 50．前記内皮下基質層を保存させるために前記器具をエタノール溶液により処理することを更に含んで成る、請求項49記載の方法。 51．前記内皮下基質層を保存させるために前記器具をグルタルアルデヒド溶液により処理することを更に含んで成る、請求項49記載の方法。 52．改善された開存性能を有する直接血液接触表面を製造する方法であって：内皮下基質層に付着した内皮細胞層を含んでいる天然血液接触表面を用意する；前記内皮下基質層がそのまま残るように前記内皮下基質層から前記内皮細胞層を剥離する；開存性を改善するために前記内皮下基質層を処理する；前記内皮下基質層を保存するために前記内皮下基質層を処理する；直接血液接触表面として、内皮細胞を実質的に含まない保存内皮下基質層を採用する；ことを含んで成る方法。 53．開存性を改善するために前記内皮下基質層を水酸化アンモニウム溶液により処理することを更に含んで成る、請求項52記載の方法。 54．開存性を改善するために前記内皮下基質層をクロロホルム及びメタノールの溶液により処理することを更に含んで成る、請求項52記載の方法。 55．人工血管であって、ドナーの血管から抽出され、且つ保存された天然内皮下基質層、ここでこの保存内皮下基質層は直接血液接触表面を司る；及び前記保存内皮下基質層を包むさや、ここでこのさやは細胞内成長を防ぎ、しかもこのさやの厚みを高分子が通過できるものである；を含んで成る人工血管。 56．前記さやが高分子に対して透過性であり、且つ細胞内成長に対して抵抗性である多孔質ポリマーを含む、請求項55記載の人工血管。