JPH09503211A

JPH09503211A - 抗炎症薬としてのパーフルオロカーボン類

Info

Publication number: JPH09503211A
Application number: JP7510469A
Authority: JP
Inventors: フアマン，ブラッドレイ，フィリップ; フレイム，スティーブン，エフ．; ハーナン，リン，ジョーン; ネスティ，フランシス，ダレイ; ペイポ，ミシェル，セシル; ステインホーン，デビッド，マーク
Original assignee: アライアンスファーマシューティカルコーポレイション; ザリサーチファウンデーションオブステートユニバーシティオブニューヨーク
Priority date: 1993-09-29
Filing date: 1994-09-29
Publication date: 1997-03-31
Also published as: EP0738142B1; CA2172601A1; EP0738142A1; DE69435215D1; AU691837B2; AU7846994A; EP0738142A4; ATE435646T1; US5470885A; US5733939A; WO1995008985A1

Abstract

(57)【要約】組織を炎症減少有効量の液体または気体状フルオロカーボンと接触させることにより、患者の組織中の炎症反応を減少させる方法。

Description

【発明の詳細な説明】抗炎症薬としてのパーフルオロカーボン類発明の分野本発明は、種々の組織中での炎症の予防または処置における気体状または液体フルオロカーボン類の使用に関する。発明の背景細網内皮系（ＲＥＳ）は、循環する単球と称される白血球から誘導されるマクロファージと称される食作用細胞の網状構造である。これらの循環する単球は、組織のマクロファージに変化し、それらが牌臓、肝臓および肺を含む器官に局在化する。組織のマクロファージは異物を取り込み、体液免疫系の他の成分によるそれらの浄化を促進させる。肺胞マクロファージは、吸入された異物および病原体による肺の侵襲に対する最初の細胞防御列を提供する。組織の損傷後に、好中球およびマクロファージの損傷部位への遊走を促進させる化合物が放出される。これらの細胞は、次に炎症性メディエイタ並びにインターロイキン類、補体成分、プロスタグランジン類、インターフェロン類、過酸化物およびフリーラジカルを含むサイトカイン類を放出し、それらが炎症性カスケードを開始する。このカスケードは、細菌性病原体の破壊にほとんどの場合有利であるが、ある場合にはそれが不適切なほど過度となり、重い疾病をもたらす。成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、大きな手術、腫瘍または感染を受けた患者の肺を最も頻繁に冒す重い症状である。ＡＲＤＳは年間約１５０,０００人に発生し、死亡率は５０％に達する。肺の損傷は白血球の流入をもたらす。これらの白血球は、次に炎症性サイトカイン類を放出して、肺気道の中の流体および細胞破片の堆積をもたらし、酸素交換を害する。この疾病に対する完全に有効な処置は現在は存在しない。幼児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）も同様な処置上の難点を示す。フルオロカーボン類の液体呼吸による対症処置が酸素伝達を促進させ、ＡＲＤＳおよびＩＲＤＳにおける肺中の堆積を除去する手段として提唱されている。例えば、ＰＣＴ国際公開番号WO 92/19232；国際公開日１９９２年１１月１２日(12.11.92)を参照のこと。フルオロカーボン（ＦＣ）液体は普通の有機化合物と一般的に類似しているが、炭素と結合された水素原子の大部分または全てが弗素原子で置換されている。これらの化合物は典型的には透明であり、無色であり、無臭であり、不燃性でありそして本質的に水に不溶性である。炭素と結合された全ての水素が弗素で置換された時には、化合物はパーフルオロカーボン類（ＰＦＣ）と称される。ＰＦＣ液体は水および軟質組織より密度が大きく、低い表面張力および低い粘度を有する。ＰＦＣ液体および他の高度に弗素化された液体は気体に対するそれらの高い親和力において比類ないものであり、水よりも２０倍以上多い酸素および３倍以上多い二酸化炭素を溶解させる。ＰＦＣ液体はまた実質的に無毒であり且つ不活性である（Riess，(1984)Artificial Organs，8: 34-56）。広く使用されているパーフルオロカーボンの一例はペルフルブロンとも称される臭化パーフルオロオクチル（ＰＦＯＢ）である。これらの液体は、そのままの溶液またはエマルジョンとして一般的に使用される。哺乳動物は、長期にわたる影響なしに酸素化されたＦＣを呼吸し、そして空気呼吸に戻すことができる（Modell 他、(1970)Federation Proc.，29: 1731-1739 ; Modell 他、(1976)Chest，69: 79-81）。ＦＣ換気後に重大な形態学的、生化学的または病歴的な悪影響は観察されない（Calderwood 他、(1975)J．Applied. Physiol.，139: 603-607; Forman 他、(1984) Federation Proc.，43: 647）。F uhrman の公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４２は、従来のガスベンチレーターを用いる持続的陽圧呼吸法により、ＰＦＣを担持する肺気道において呼吸ガス交換を維持するパーフルオロカーボン補助ガス交換（ＰＡＧＥ）法を記載している。この工程は液体呼吸よりさらに急速な換気を可能にし、且つそれは取り扱いの困難性がはるかに少ない。ＰＦＣはＡＲＤＳに伴って生じる細胞残片を濯ぐ際に（Puchetti 他、(1984)FourthWorld Congress for Broncho1ogy, abstract，115）、および表面活性剤の欠如または機能不全を含む呼吸窮迫症候群を処置する際に有効である。液体ＰＦＣおよびＰＦＣエマルジョンに関する他の多くの生医学的用途も記載されており、それらは画像形成剤および代用血液としてのそれらの使用を含む（Riess，(1984)Artificial Organs，8: 34-56）。液体ＰＦＣはＲＥＳのマクロファージにより循環系から除去される。図面の簡単な説明図１はＬＰＳで誘発されたＩＣＡＭ−１発現に対する臭化パーフルオロオクチル（ＰＦＯＢ）エマルジョンの効果を示す。ｘ−軸はＰＦＯＢ（ペルフルブロン）エマルジョンまたは賦形剤（ＰＦＯＢを含まない乳化剤、培地中の％ｖ／ｖ（容量／容量））の濃度を示し、ｙ−軸は５７０ｎｍにおける光学密度を示す。図２はＰＦＯＢ投与後のコロイド状炭素の食作用を示す。ｘ−軸はＰＦＯＢ投与後の日数を示し、ｙ−軸は放出定数を示す。図３はＰＦＯＢ投与後の肝臓中のマクロファージ活性の磁力計測定を示す。ｘ −軸はＰＦＯＢ投与後の日数を示し、ｙ−軸は磁場強度の比を示す。発明の要旨本発明は、処置を必要とする患者の組織を炎症減少有効量の液体または気体状フルオロカーボンと接触させることによる該組織中での炎症反応を減少させる方法を提供する。炎症反応の予防的減少および治療的減少の両者が意図される。好適には、この組織は胃腸または肺であり、その細胞性質は上皮または内皮性のいずれかであってもよい。本発明の他の面によると、この炎症は成人呼吸窮迫症候群または幼児呼吸窮迫症候群に伴うものである。本発明のフルオロカーボン類はさらに異なる液体または気体状フルオロカーボン類の混合物を含んでいてもよい。他の態様では、フルオロカーボンは気体の形状で投与され、それは呼吸ガスと混合されていてもよい。さらに別の態様では、フルオロカーボンは気体中に懸濁された小滴の形状で投与される。本発明の他の面によると、フルオロカーボンは肺に液体の形状で投与され、そして患者は投与後、液体フルオロカーボンを呼吸する間に酸素化された気体を呼吸する。本発明はまた、投与前の液体フルオロカーボンの酸素化も提供し、さらにエマルジョンの形状のフルオロカーボン類も提供する。本発明はまた、容器、容器中のフルオロカーボン液体、および患者による吸入用のフルオロカーボンの単位薬用量を噴霧化、アエロゾル化、または蒸発させるための前記容器に付随する手段を含んでなる、患者の肺へのフルオロカーボンの分配において使用するための装置も提供する。発明の詳細な記述本発明は、炎症部位へのフルオロカーボンの投与による肺および他の粘膜性、局所的、または全身的炎症疾病に伴う急性炎症の予防（病気予防）または処置（治療）方法を提供する。例えば、臭化パーフルオロオクチル（ＰＦＯＢ）はＨＵＶＥＣ細胞の細菌性内毒素（ＬＰＳ）で誘発される活性化を抑制し（実施例１）、試験管内でマクロファージの食作用活性を抑制し（実施例２）、胃酸吸引で誘発されるＡＲＤＳに伴う炎症性症状の生体内での有意義な改良をもたらした（実施例３）。マクロファージ活性の抑制は、試験管内での肺胞マクロファージによるフリーラジカルおよびＨ₂Ｏ₂生成を抑制し（実施例４）、炎症性メディエイタの放出をも抑制して、肺および全身的炎症性疾病の経過を改良する。マクロファージおよび循環する血液の白血球の活性化はフルオロカーボン類により直接影響を受けるようであり、その結果、これらの細胞のタイプが直接処置されてそれらの炎症−促進活性を減少させうる。実施例３はＡＲＤＳの処置におけるＰＦＯＢの使用を記載しているが、多くの肺および全身的炎症性症状の処置におけるフルオロカーボン類の使用が本発明の範囲内に含まれる。これらの疾病には、例えば、幼児呼吸窮迫症候群、喘息、嚢胞性腺維症、全身的紅斑性狼瘡、リウマチ様関節炎、クローン病、大腸炎、敗血症、腹膜炎、脈管炎、アレルギー反応、膠原脈管疾病、憩室炎、子宮内膜症および他の自己免疫疾病が包含される。本発明の特に好適な用途は、肺、胃腸、および腟粘膜を含む粘膜炎症の処置である。先行技術では、肺残片、炎症細胞および物質を洗浄により除去し、酸素伝達を促進させることによる呼吸窮迫症候群の処置用のフルオロカーボン液体が提供されている。これに対し、本発明はリンパ球浸潤および／またはマクロファージの活性化を減少させ、それにより炎症性メディエイタの放出を減少させることによる細胞および分子レベルでの炎症の予防および処置に向けられる。換言すると、フルオロカーボンは本発明において、主要な抗炎症剤として使用される。本発明で使用されるフルオロカーボン分子は上記のRiess により記載されているように直鎖状もしくは分枝鎖状の、または環式の構造を含む種々の構造を有することができる。これらの分子はある程度の不飽和性を有していてもよく、そして臭素または水素原子を有していてもよく、或いはそれらはアミン誘導体であってもよい。典型的には、フルオロカーボンは室温（２５℃）において液体または気体である。好適には、フルオロカーボンは約２、３、４、または５個の炭素原子から約１０、１２、または１４個の炭素原子までを有する。本発明において使用が意図されるフルオロカーボン類としては多くのものが存在する。これらのフルオロカーボン類にはビス（Ｆ−アルキル）エタン類、例えばＣ₄Ｆ₉＝ＣＨ₄ＣＦ₉（時には「Ｆ−４４Ｅ」と表される）、ｉ−Ｃ₃Ｆ₉＝ＣＨＣ₆Ｆ₁₃（「Ｆ−ｉ３６Ｅ」）、およびＣ₆Ｆ₁₃ＣＨ＝ＣＨＣ₆ＣＦ₁₃（「Ｆ−６６Ｅ」）；環式フルオロカーボン類、例えばＣ₁₀Ｆ₁₈（「Ｆ−デカリン」、「パーフルオロデカリン」または「ＦＤＣ」）、Ｆ−アダマンタン（「ＦＡ」）、Ｆ−メチルアダマンタン（「ＦＭＡ」）、Ｆ−１,３−ジメチルアダマンタン（「ＦＤＭＡ」）、Ｆ− ジ−もしくはＦ−トリメチルビシクロ［３,３,１］ノナン（「ノナン」）；過弗素化されたアミン類、例えばＦ−トリプロピルアミン（「ＦＴＰＡ」）およびＦ −トリ−ブチルアミン（「ＦＴＢＡ」）、Ｆ−４−メチルオクタヒドロキノリジン（「ＦＭＯＱ」）、Ｆ−ｎ−メチルデカヒドロイソキノリン（「ＦＭＩＱ」）、Ｆ−ｎ−メチルデカヒドロキノリン（「ＦＨＱ」）、Ｆ−ｎ−シクロヘキシルプロリジン（「ＦＣＨＰ」）およびＦ−２−ブチルテトラヒドロフラン（「ＦＣ −７５」もしくは「ＲＭ１０１）、パーフルオロブタン、パーフルオロプロパン、パーフルオロペンタン、パーフルオロヘキサン、パーフルオロヘプタン、またはパーフルオロオクタンが包含される。線状および分枝鎖状の両方の異性体も意図される。他の適当なフルオロカーボン類は、臭素化されたパーフルオロカーボン類、例えば１−ブロモ−ヘプタデカフルオロオクタン（Ｃ₈Ｆ₁₇Ｂｒ、「ＰＦＯＢ」、ペルフルブロン）、１−ブロモペンタ−デカフルオロヘキサン（Ｃ₆Ｆ₁₃Ｂｒ、「ＰＦＨＢ」）、から選択できる。他の臭素化されたフルオロカーボン類は Lon g の米国特許第３,９７５,５１２号に開示されている。非弗素置換基を有するフルオロカーボン類、例えば塩化パーフルオロオクチル、水素化パーフルオロオクチル、並びに異なる数の炭素原子、例えば６−１２個の炭素原子、を有するものも意図される。本発明に従い意図される他のフルオロカーボン類には、パーフルオロアルキル化されたエーテル類またはポリエーテル類、例えば（ＣＦ₃）₂ＣＦＯ（ＣＦ₂ＣＦ₂）₂ＯＣＦ（ＣＦ₃）₂、（ＣＦ₃）₂ＣＦＯ（ＣＦ₂ＣＦ₂）₃ＯＣＦ（ＣＦ₃）、（ＣＦ₃）ＣＦＯ（ＣＦ₂ＣＦ₂）Ｆ、（ＣＦ₃）₂ＣＦＯ（ＣＦ₂ＣＦ₂）₂Ｆ、（Ｃ₃ Ｆ₁₃）₂Ｏが包含される。さらに、（化合物が室温で液体または気体である限り）、フルオロカーボン−炭化水素化合物、例えば、一般式Ｃ_nＦ_2n+1Ｃ_n'Ｆ_2n'+1 、Ｃ_nＦ_2n+1ＯＣ_n'Ｆ_2n'+1、またはＣ_nＦ_2n+1ＣＦ＝ＣＨＣ_n'Ｆ_2n'+1［式中、ｎおよびｎ’は同一もしくは相異なるものであり、約１〜約１０である］を有する化合物。そのような化合物には、例えば、Ｃ₈Ｆ₁₇Ｃ₂Ｈ₅およびＣ₆Ｆ₁₃ＣＨ＝ＣＨＣ₆Ｈ₁₃が包含される。エステル類、チオエーテル類、および他の種々に改質された混合フルオロカーボン−炭化水素化合物も本発明での使用に適する「フルオロカーボン」物質の広い定義内に包括される。フルオロカーボン類の混合物も意図される。ここに挙げられていないが本発明に従う使用にかなうこの開示に記載されている性質を有する別の「フルオロカーボン類」も意図される。フルオロカーボンは、ある好適な態様では、パーフルオロカーボンまたは置換されたパーフルオロカーボンである。本発明で使用されるフルオロカーボン類は、そのままの液体組成物として、気体として、またはエマルジョンとして使用できる。そのようなエマルジョンは典型的には不連続的なフルオロカーボン相および連続的な水相を有する水中−ＦＣエマルジョンである。しかしながら、連続的なフルオロカーボン相および不連続的な水相を有するエマルジョンも意図される。（そのような逆のエマルジョンはゲルの形状で製造することができ、それらは特に局所的用途に適する。）エマルジョンは典型的には乳化剤および浸透剤を緩衝液および電解質と一緒に含んでいる。ＦＣエマルジョンは広範囲の適当なエマルジョンから選択できる。５％ｗ／ｖ（重量／容量）程度の低い濃度も意図されるが、好適な態様では濃度は少なくとも２５％または３０％、好適には少なくとも４０％、５０％、５５％であり、６０％、７５％または８０％ｗ／ｖであってもよい。８５％、９０％、１００％、および１２５％までのエマルジョンも意図される。好適なフルオロカーボンエマルジョン調製物には、米国特許第４,８６５,８３６号、第４,９８７,１５４号および第４,９２７,６２３号に開示されているものが包含される。粘膜性炎症の処置では、ＦＣの局所的分配が特に好適である。ＦＣを粘膜上皮に単に接触させ、好適には少なくとも１分間、より好適には長い時間（例えば、３０分間、１時間、または５、６時間）にわたり接触させたままにする。適当な薬用量は処置しようとする表面積に依存するが、典型的には約０.０１ｇ／ｋｇから患者の全肺容量（機能的残存容量または機能的残存容量および一回換気呼吸容量）までの範囲である。処置は炎症が残存する限り続けられる。本発明の一態様では、フルオロカーボンは液体として患者の肺に投与され、次に該フルオロカーボンが依然として肺の中にある間に患者は酸素化された呼吸ガスを呼吸する。分配の方式は、例えば、肺の炎症性症状の場合には気管内、胃腸炎症の場合には経口的もしくは直腸内に、皮膚炎症の場合には局所的に、または局所的もしくは全身的炎症および自己免疫疾病の処置においては静脈内、筋肉内、動脈内もしくは皮下であってよい。さらに、ＦＣ−飽和蒸気またはＦＣ小滴を、ネブライザーまたはアトマイザーを用いて分配される霧状または空気で運ばれる懸濁液の形状で吸入するのが、特に肺の炎症性疾病に適する。気管内挿管が適当でない時に、この投与方式は急性の肺炎症、例えば喘息発作中の処置に特に有用である。この分配の方式は肺の中に実質的な液体残存量を必要としない利点を有する。この方式を用いる成人に関する薬用量は、例えば、１回の処置当たり約０.１または０.５グラム〜約１０グラムもしくはそれ以上であってよい。胃腸炎症の処置では、患者は好適には生のフルオロカーボン液体を飲む。或いは、そのフルオロカーボンはフルオロカーボンエマルジョンである。成人に経口的に投与されるフルオロカーボンの量は典型的には約１ｇ〜約１０００ｇである。急性の腹膜炎の処置では、フルオロカーボン液体またはエマルジョンが腹膜腔内に直接注入される。注入される量は約０.０１ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇ、好適には約１ｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇであってよい。全身的にフルオロカーボンを投与するために最も適する方式はフルオロカーボンエマルジョンの静脈内投与である。全身的薬用量は、患者の体重に基づいて、約０.０１ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇ、好適には０.１ｇ／ｋｇ〜約３.０ｇ／ｋｇであってよい。ＰＦＣ蒸気が飽和している気体の吸入を炎症の全身的処置のための手段として使用することができる。そのような混合物の呼吸は、肺組織のＰＦＣガス張力を胞内ガス張力により設定される平衡値に急速に到達させるであろう。体組織および血液の約５〜約１０トールの分圧までのＰＦＣ蒸気による飽和が、肺およびおそらくは全身的免疫機能を調整する。本発明はまた、内部にフルオロカーボン液体を有する容器、フルオロカーボン液体を噴霧化、アエロゾル化、または蒸発させて単位薬用量を患者の肺に分配させるための手段を含む、フルオロカーボンを患者の肺に分配させるための装置またはキットも含む。この装置は、例えば、フルオロカーボン液体を充填した従来のアトマイザーまたはスプレー缶を含んでいてもよい。アエロゾル、霧、蒸気などを生成するための他のタイプの装置もまた既知であり、それらも本発明での使用に意図される。また、この装置はフルオロカーボンを患者の呼吸気管に注ぐための前記容器に付随する手段を含んでいてもよい。従来の任意の注入手段を使用することができる。例えば、マウスピース、ノズル、またはチューブがこの目的のために供される。或いは、霧または蒸気を従来のガスベンチレーターの呼吸回路中に注射または注入するための手段が供されていてもよい。この装置により分配される単位薬用量は好適には約０.１ｇ〜約５ｇである。容器は典型的には約１ｇ〜約２５０ｇのフルオロカーボン、より好適には約２ｇ〜約１００ｇのフルオロカーボンを含有する。発明者は本発明の特定理論により拘束されることは望まないが、細胞膜現象が、細胞に対するフルオロカーボンの抗炎症活性に関与していると考えられる。特に、免疫系細胞膜が炎症刺激に反応する要素およびサイトカイン類、接着分子などを放出する要素を含んでいることが知られている。本発明のフルオロカーボン類はこれらの細胞膜の中に取り込まれ、それにより特定の刺激に対する細胞の反応を妨害する。これは当該刺激に対する反応における変化を防止するための細胞の「安定化」と考えられる。実施例１ＰＦＯＢによるＨＵＶＥＣ活性化の抑制１種類の１００％ｗ／ｖのＰＦＯＢエマルジョン（Alliance Pharmaceutical Corp.）および１種類の賦形剤（ＰＦＯＢを含まない乳化剤）をこれらの研究においてテストした。数種のヒトの膳静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、細菌性内毒素（ＬＰＳ）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびミリスチン酸酢酸ホルボール（ＰＭＡ）を含ませてテストした。種々の希釈度（１.２５％ｖ／ｖ〜２０％ｖ／ｖ）のＰＦＯＢエマルジョンを活性化剤であるＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１（５単位／ｍｌ）、ＴＮＦ（１００単位／ｍｌ）またはＰＭＡ（１００ｎｇ／ｍｌ）の添加前にＨＵＶＥＣ培地に加えた。ＩＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ細胞接着分子の発現をＥＬＩＳＡを用いて定量化した。ＩＣＡＭ−１発現の不存在により測定されるように、ＰＦＯＢエマルジョン及び賦形剤のいずれもＨＵＶＥＣ活性化を生じなかった。ＰＦＯＢはＩＣＡＭ−１発現から測定されるようにＨＵＶＥＣのＬＰＳ−誘発性活性化を薬用量−依存方式で抑制した（図１）。１０％ｖ／ｖのＰＦＯＢエマルジョンはＬＰＳ活性化を９５％抑制したが、この同一濃度において賦形剤はＬＰＳ活性化を７％だけ抑制した。ＬＰＳを含む剤による内皮細胞の活性化がＩＣＡＭ−１およびＥＬＡＭを含む細胞接着分子の発現を生するため、そして接着分子を発現する細胞が白血球を引き寄せて白血球へ接着することにより炎症反応に関与するため、この発現の抑制は抗炎症効果を示す。それ故、ＬＰＳ添加前のＰＦＯＢエマルジョンの添加は、有意義な抗炎症効果を有していた。次に、この抗炎症効果がマクロファージの食作用活性の抑制によるものかどうかを下記の実施例に記載されているようにして測定した。実施例２ＰＦＯＢによるマクロファージの食作用活性の抑制各々４匹ずつよりなるいくつかの雄のウィスターラットのグループに、３ｇ／ｋｇ体重のＰＦＯＢ（Alliance Pharmaceutical Corp.）を静脈内投与し、またはその処置をしなかった。コロイド状炭素懸濁液は、遠心処理され、食塩水中に１：１０で希釈された市販の墨汁調製物であった。ＰＦＣ投与から３−２４時間および２−８日後に、血液からの炭素浄化値を、希釈された血液サンプルの炭素注入後の最初の１２分間における６９５ｎｍでの分光分析測定値から求めた。投与された炭素の浄化値は、式：ｋ＝（ｌｎｃ₁−ｌｎｃ₂）／（ｔ₂−ｔ₁）に従う放出定数Ｋにより表示した。ここでｃ₁およびｃ₂は、時間ｔ₁およびｔ₂における濃度である。コロイド状炭素浄化の抑制は、抑制されたマクロファージ活性の間接的な指示値である。抑制は最初の３−２４時間に関して見られた。２日目には浄化は対照の８５％に戻った（図２）。４日後にはＰＦＯＢで処置された動物は対照レベルであった。雄のウィスターラットに５ｍｇ／ｋg体重のγ−Ｆｅ₂Ｏ₃粒子を注射し、３０ｍｇ／ｋｇ体重のペントバルビタールで麻酔をかけて０.２６テシア（２６００ガウス）の磁場で３０秒間磁化した。この動物を、次に磁気的に遮蔽された室の中に入れ、右下唇角上の脱毛された皮膚部分を、磁場検出法のグラジオメーターモードで二重ＦＯＥＲＳＴＥＲプローブに密に接触させた。異なるパラメーターを式ｙ＝ｙ₀ｅ^-kt＋Ｃに従い傾斜磁力曲線を用いて計算した。ここでｙ＝時間ｔにおける合計磁場強度であり、ｙ₀＝動的磁場強度であり、ｋ＝緩和定数であり、Ｃ＝静的磁場強度である。比ｙ₀／（ｙ₀＋Ｃ）、すなわち動的対静的磁場強度の関係が肝臓のマクロファージ活性の直接的測定値である。ＰＦＯＢ（Alliance Pharmaceutical Corp.）を１ｇ／ｋｇ体重の薬用量で静脈内投与した。対照群にはＰＦＯＢを投与しなかった。磁気緩和の長期的な研究を対照およびテストグループについて、注射後３２日目まで行った。ＰＦＯＢの投与後、磁気緩和は注射後２日目までは減少した（図３）。これは肝臓マクロファージ活性の一時的抑制がＰＦＯＢ投与後に起きたことを示していた。この効果の一時性は、宿主免疫系を長期間にわたり弱めないため、望ましい。ＰＦＯＢが急性炎症性疾病に伴う炎症を減少しうるかどうかを測定するために、ＡＲＤＳを生体内で誘発させ、ＰＦＯＢの効果を以下の実施例に記載されているように測定した。実施例３ＰＦＯＢによる肺の免疫反応の抑制 α−クロラロース麻酔（５０ｍｇ／ｋｇ）およびヨウ化メトクリン神経筋肉遮断（０.３ｍｇ／ｋｇ）下で、１４匹のコブタを気管開口術；中枢神経、全身および肺動脈カテーテル法；並びに２５回の呼吸／分、４ｃｍＨ₂Ｏの呼気終末陽圧、１０−１５ｍｌ／ｋｇの一回換気容量および２５％の吸気サイクルに設定された従来のベンチレーター（Ｓｅｒｖｏ９００Ｃ、ＳｉｅｍｅｎｓＥｌｅｍａ）を用いて容量調節された持続的陽圧呼吸にかけた。ホモジナイズされた胃の吸引物をｐＨ＝１.０まで滴定し、各対象物の気管開口管の中に時間０において滴下して（１ｍｌ／ｋｇ）、ＡＲＤＳを誘発させた。血行力学、肺機構およびガス交換を３０分毎に６時間にわたり評価した。７匹のコブタを、６０分の時点で、肺のおおよその正常機能残存容量に選択された量のＰＦＯＢの気管滴下により処置し、ベンチレーターの設定を変えずにパーフルオロカーボン補助ガス交換（ＰＡＧＥ）によりサポートした。ＰＦＯＢ（２.５ｍｌ／ｋｇ）を気管に１時間毎に加えて蒸発損失を戻した。６時間の終了時に、動物を塩化カリウムのボーラス（bolus）注射により死亡させた。肺を検査し、典型的な切片標本をその後の病歴試験のためにホルムアルデヒド中に入れた。各動物に関して光顕微鏡用切片標本を準備し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色して評価し、光顕微鏡写真をとった。肺の死後視覚試験では、未処置の肺では無気肺が両方の群で相当程度に観察された。未処置の肺は暗いピンク色であり且つ全体に多数の微細な点状の出血部分を有していたが、ＰＡＧＥ処置群は出血部分はほとんどなく、かすかなピンク色の半透明の外観を有していた。顕微鏡的には、未処置の肺は破壊されて厚くなった胞膜の部分を有する不完全に膨らんだ胞の内部および周囲の多数に好中球および赤血球を有する強い急性の損傷部分を有していた。拡散性蛋白質浸出液を含有する肺胞も観察された。逆に、ＰＡＧＥで処置された肺では、肺胞は薄壁の比較的無傷であり且つ均質に良く膨らんでいることが観察され、管腔好中球、赤血球および蛋白質浸出液はなかった。それ故、好中球の浸潤およびその後に生成する蛋白質浸出液の不存在が、ＰＦＯＢの抗炎症効果の直接的証拠を与える。これらの研究はＰＦＯＢが与えられた動物において好中球−誘発性の肺の炎症反応が減少したことを示すこと、および肺胞マクロファージが肺の損傷に寄与するフリーラジカルを生成することから、肺胞マクロファージ中の炎症性メディエイタの生成を減少させることによりＰＦＯＢが炎症を減少させたかどうかを測定することについても関心がもたれる。実施例４ＰＦＯＢによるＡＭフリーラジカル生成の抑制刺激されたＨ₂Ｏ₂およびフリーラジカル（ＦＲ）生成の測定により肺胞マクロファージ（ＡＭ）機能を評価した。ＡＭを成体ウサギから食塩水完全肺洗浄により単離し、独立した５群で研究した。Ｈ₂Ｏ₂生成の測定用に、ＡＭ（約１０⁷個の細胞）を３７℃において５時間にわたり最少必須培地（ＭＥＭ）またはＭＥＭおよびＰＦＯＢ（Alliance Pharmaceutical Corp.）の中に懸濁させて揺すった。リポ多糖（ＬＰＳ、５０μｌ）を５時間の時点で加え、ＡＭをさらに１時間培養し、この時点で細胞を含まない上澄み液に対して検定を行った。Ｈ₂Ｏ₂生成は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ／フェノールレッド検定を用いる分光分析法により、既知の標準に対して測定された。第二組の研究では、ＦＲ生成を、１０⁵個の細胞に対するルミノール（３００ μＭ）およびザイモサンを用いる化学発光法により測定した。約２×１０⁶個のＡＭを、ＭＥＭまたはＭＥＭおよびＰＦＯＢを用いて４時間まで培養した。ＡＭを除去し、ザイモサン刺激後にＦＲ生成を測定した。水性細胞懸濁液およびＰＦＯＢは非混和性であるが、化学発光は上記の通りＰＦＯＢの量を増加させて発光計のキュベットに加えられる容量対容量基準で測定された。未処置のＡＭは１０⁷個の細胞当たり１.９２ナノモルのＨ₂Ｏ₂を生成したが、ＰＦＯＢで処置した細胞に関しては０.８８ナノモルであった。ＰＦＯＢを用いる培養は対照動物と比べて全ての時点においてＦＲ生成において９１％の平均減少を生じた。ＰＦＯＢによるＦＲ生成の抑制は薬用量依存性であった。これらの発見は、肺中のＰＦＯＢの存在がＡＭの刺激に対する反応能力を弱め、ＰＦＯＢでの換気中に肺の炎症を減じる役割を演じるかもしれないことを示唆している。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項【提出日】１９９５年３月１０日【補正内容】請求の範囲１．炎症減少有効量のフルオロカーボンを気体またはアエロゾルの形状で外部源から肺の中に投与することにより、そのような処置を必要とする患者の肺の中での炎症反応を減少させるための薬剤の製造におけるフルオロカーボン気体または液体の使用。２．前記炎症が成人呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第１項記載の使用。３．前記炎症が幼児呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第１項記載の使用。４．前記気体状フルオロカーボンが呼吸ガスと混合される、請求の範囲第１項記載の使用。５．前記フルオロカーボンが気体中に懸濁された小滴の形状で投与される、請求の範囲第１項記載の使用。６．前記フルオロカーボンの容量が肺の機能的残存量より実質的に少ない、請求の範囲第１項記載の使用。７．外皮または粘膜組織を炎症減少有効量のフルオロカーボン液体と局所的に接触させることによる、前記組織における炎症反応を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボン液体の使用。８．患者に炎症減少有効量のフルオロカーボン液体を投与することによる、全身的炎症を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボン液体の使用。９．前記投与方法が静脈内、筋肉内、動脈内および皮下投与よりなる群から選択される、請求の範囲第８項記載の使用。１０．患者に炎症減少有効量のフルオロカーボン液体またはエマルジョンを経口的にまたは直腸に投与することによる、胃腸炎症を減少させるための薬剤の製造におけるフルオロカーボン液体またはエマルジョンの使用。１１．炎症減少有効量のフルオロカーボン気体またはアエロゾルを外部源から肺の中に投与する段階を含んでなる、処置を必要とする患者の肺組織中での炎症反応を減少させる方法。１２．炎症減少有効量のフルオロカーボン気体またはアエロゾルを外部源から肺に投与する段階を含んでなる、肺中での炎症反応を減少させるためのフルオロカーボン気体またはアエロゾルの使用。１３．外皮または粘膜組織を炎症減少有効量の液体フルオロカーボンと局所的に接触させる段階を含んでなる、前記組織における炎症反応を減少させるための前記液体フルオロカーボンの使用。１４．炎症減少有効量のフルオロカーボンを投与する段階を含んでなる、全身的炎症性疾病を処置するためのフルオロカーボン液体またはエマルジョンの使用。１５．炎症減少有効量のフルオロカーボンを経口的にまたは直腸に投与する段階を含んでなる、胃腸炎症を処置するためのフルオロカーボン液体またはエマルジョンの使用。【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年８月２９日【補正内容】請求の範囲１．炭素原子数が３もしくはそれ以上のフルオロカーボン気体または液体を含んでなる炎症減少有効量の薬剤を、気体、蒸気またはアエロゾルの形状で外部源から患者の肺の中に投与することにより患者の肺中の炎症反応を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボン気体または液体の使用。２．前記炎症が呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第１項記載の使用。３．前記炎症が全身的症状に伴うものである、請求の範囲第１項記載の使用。４．前記気体状フルオロカーボンが呼吸ガスと混合される、請求の範囲第１項記載の使用。５．前記フルオロカーボンが気体中に懸濁された小滴の形状で投与される、請求の範囲第１項記載の使用。６．前記フルオロカーボンの投与容量が肺の機能的残存量より実質的に少ない、請求の範囲第１項記載の使用。７．外皮または粘膜組織を、炭素原子数が３もしくはそれ以上のフルオロカーボンを含んでなる炎症減少有効量の薬剤と局所的に接触させることによる、前記組織における炎症反応を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボンの使用。８．炭素原子数が３もしくはそれ以上のフルオロカーボンを含んでなる炎症減少有効量の薬剤を患者に投与することにより、肺以外の組織中の炎症を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボンの使用。９．前記投与方法が静脈内、局所的、気管内、筋肉内、動脈内および皮下投与よりなる群から選択される、請求の範囲第８項記載の使用。１０．炭素原子数が３もしくはそれ以上のフルオロカーボンを含んでなる炎症減少有効量の薬剤を患者に投与することにより、胃腸炎症を減少させるための薬剤の製造における前記フルオロカーボンの使用。１１．炭素原子数が３もしくはそれ以上の炎症減少有効量のフルオロカーボンを、気体、蒸気またはアエロゾルの形状で外部源から肺の中に投与する段階を含んでなる、患者の肺中の炎症反応を減少させる方法。１２．炭素原子数が３もしくはそれ以上の炎症減少有効量のフルオロカーボンを、気体、蒸気またはアエロゾルの形状で外部源から肺に投与する段階を含んでなる、肺中の炎症反応を減少させるための前記フルオロカーボンの使用。１３．外皮または粘膜組織を、炭素原子数が３もしくはそれ以上の炎症減少有効量のフルオロカーボンと局所的に接触させる段階を含んでなる、前記組織における炎症反応を減少させるための前記フルオロカーボンの使用。１４．炭素原子数が３もしくはそれ以上の炎症減少有効量のフルオロカーボンを投与する段階を含んでなる、肺以外の組織中の炎症性疾病を処置するための前記フルオロカーボンの使用。１５．炭素原子数が３もしくはそれ以上の炎症減少有効量のフルオロカーボンを投与することを含んでなる、胃腸炎症を処置するための前記フルオロカーボンの使用。１６．前記投与方法が静脈内、局所的、気管内、筋肉内、動脈内および皮下投与よりなる群から選択される、請求の範囲第１４項記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/02 ＡＤＡＡ６１Ｋ 31/02 ＡＤＡ (72)発明者フアマン，ブラッドレイ，フィリップアメリカ合衆国，14222 ニューヨーク, バッファロー，ハイランドアベニュー 46番地 (72)発明者フレイム，スティーブン，エフ. アメリカ合衆国，92130 カリフォルニア, サンディエゴ，フォックスホローコート 4455番地 (72)発明者ハーナン，リン，ジョーンアメリカ合衆国，14209 ニューヨーク, バッファロー，ラムゼーロード４番地 (72)発明者ネスティ，フランシス，ダレイアメリカ合衆国，14222 ニューヨーク, バッファロー，ブライアントストリート 142番地 (72)発明者ペイポ，ミシェル，セシルアメリカ合衆国，14209 ニューヨーク, バッファロー，バーカーストリート 63 番地アパートメントナンバー３ (72)発明者ステインホーン，デビッド，マークアメリカ合衆国，14226 ニューヨーク, エッガーツビル，エルザンドライブ 38 番地

Claims

【特許請求の範囲】１．処置を必要とする患者の肺組織に炎症減少有効量のフルオロカーボン気体またはアエロゾルを接触させる段階を含んでなる、前記組織中での炎症反応を減少させる方法。２．前記組織が粘膜上皮を含む、請求の範囲第１項記載の方法。３．前記組織が胃腸組織である、請求の範囲第２項記載の方法。４．前記フルオロカーボンが液体または気体状フルオロカーボン類の混合物である、請求の範囲第１項記載の方法。５．前記組織が肺組織である、請求の範囲第２項記載の方法。６．前記炎症が成人呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第５項記載の方法。７．前記炎症が幼児呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第５項記載の方法。８．前記フルオロカーボンが気体の形状で投与される、請求の範囲第５項記載の方法。９．前記気体状フルオロカーボンが呼吸ガスと混合される、請求の範囲第８項記載の方法。１０．前記フルオロカーボンが気体中に懸濁された小滴の形状で投与される、請求の範囲第５項記載の方法。１１．前記フルオロカーボンが肺の中に酸素化された液体の形状で投与される、請求の範囲第５項記載の方法。１２．前記フルオロカーボンが肺の中に液体の形状で投与され、そして該投与後、前記フルオロカーボンが依然として肺の中にある間に患者が酸素化された気体を呼吸する、請求の範囲第５項記載の方法。１３．前記液体フルオロカーボンが、該フルオロカーボン投与の前に酸素化される、請求の範囲第１２項記載の方法。１４．前記フルオロカーボンがエマルジョンの形状である、請求の範囲第１項記載の方法。１５．前記フルオロカーボンの容量が肺の機能的残存量より実質的に少ない、請求の範囲第１項記載の方法。１６．容器、容器中の生物学的許容性のフルオロカーボン液体、および患者による吸入用の前記フルオロカーボンの単位薬用量を噴霧化、アエロゾル化または蒸発させるための前記容器に付随する手段を含んでなる、患者の肺にフルオロカーボンを分配させる際に使用するための装置。１７．さらに前記フルオロカーボンを患者の肺気道の中に注入するための手段をも含んでなる、請求の範囲第１６項記載の装置。１８．組織を炎症減少有効量の液体フルオロカーボンと局所的に接触させる段階を含んでなる、外皮または粘膜組織における炎症反応を減少させる方法。１９．患者に炎症減少有効量の液体フルオロカーボンを投与する段階を含んでなる、患者における全身的炎症性疾病を処置する方法。２０．前記投与段階が静脈内、筋肉内、動脈内および皮下投与よりなる群から選択される、請求の範囲第１９項記載の方法。２１．患者に炎症減少有効量の液体フルオロカーボンを経口的にまたは直腸に投与する段階を含んでなる、患者における胃腸炎症を減少させる方法。２２．肺組織に炎症減少有効量のフルオロカーボン気体またはアエロゾルを接触させる段階を含んでなる、前記組織中の炎症反応を減少させるための前記気体またはアエロゾルの使用。２３．前記炎症が成人呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第２２項記載の使用。２４．前記炎症が幼児呼吸窮迫症候群に伴うものである、請求の範囲第２２項記載の使用。２５．前記気体状フルオロカーボンが呼吸ガスと混合される、請求の範囲第２２項記載の使用。２６．前記フルオロカーボンが気体中に懸濁された小滴の形状で投与される、請求の範囲第２２項記載の使用。２７．前記フルオロカーボンの容量が肺の機能的残存量より実質的に少ない、請求の範囲第２２項記載の使用。２８．外皮または粘膜組織を炎症減少有効量の液体フルオロカーボンと局所的に接触させる段階を含んでなる、前記組織における炎症反応を減少させるための前記フルオロカーボンの使用。２９．炎症減少有効量のフルオロカーボンを投与する段階を含んでなる、全身的炎症性疾病を処置するためのフルオロカーボン液体またはエマルジョンの使用。３０．炎症減少有効量のフルオロカーボンを経口的にまたは直腸に投与することを含んでなる、胃腸炎症を処置するためのフルオロカーボン液体またはエマルジョンの使用。