JPH09286802A - 高マンノース型糖鎖 - Google Patents
高マンノース型糖鎖Info
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- JPH09286802A JPH09286802A JP8099864A JP9986496A JPH09286802A JP H09286802 A JPH09286802 A JP H09286802A JP 8099864 A JP8099864 A JP 8099864A JP 9986496 A JP9986496 A JP 9986496A JP H09286802 A JPH09286802 A JP H09286802A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- manα1
- sugar chain
- hydrogen atoms
- type sugar
- 2manα1
- Prior art date
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- Pending
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 高マンノース型糖鎖をアスコルビン酸オキシ
ダーゼ活性維持剤としての使用および該糖鎖を得ること
にある。 【解決手段】 下記一般式 【化１】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび当該糖鎖である。 【効果】 高マンノース型糖鎖をアスコルビン酸オキシ
ダーゼ活性維持剤として使用することにより、還元作用
を持つアスコルビン酸の除去を行う酵素反応系の精度を
上昇させたり、酸素の消費を利用した飲食物の劣化防止
のための脱酸素剤としての効果が期待される。
ダーゼ活性維持剤としての使用および該糖鎖を得ること
にある。 【解決手段】 下記一般式 【化１】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび当該糖鎖である。 【効果】 高マンノース型糖鎖をアスコルビン酸オキシ
ダーゼ活性維持剤として使用することにより、還元作用
を持つアスコルビン酸の除去を行う酵素反応系の精度を
上昇させたり、酸素の消費を利用した飲食物の劣化防止
のための脱酸素剤としての効果が期待される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、下記一般式
【０００２】
【化３】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび該高マンノース型糖鎖に関するものである。
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび該高マンノース型糖鎖に関するものである。
【０００３】本発明において、好ましくは、Ｒ１がＧａ
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）としての使用、Ｒ２がＭａｎα１→６またはＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６としての使用、Ｒ３がＭａ
ｎα１→２としての使用、Ｒ４がＭａｎα１→２または
Ｍａｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用等が挙げら
れる。
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）としての使用、Ｒ２がＭａｎα１→６またはＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６としての使用、Ｒ３がＭａ
ｎα１→２としての使用、Ｒ４がＭａｎα１→２または
Ｍａｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用等が挙げら
れる。
【０００４】そして、より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ
３およびＲ４が水素原子としての使用、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素原子としての使用、
Ｒ１、Ｒ３およびＲ４が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→６としての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原
子としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２とし
ての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆは
ガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａｎα
１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素原子であ
り、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４
がＭａｎα１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素
原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用、Ｒ１がＧａｌ
ｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を
示す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６で
あり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２と
しての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆ
はガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎ
α１→２Ｍａｎα１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→
６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２として
の使用、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用など
が挙げられる。
３およびＲ４が水素原子としての使用、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素原子としての使用、
Ｒ１、Ｒ３およびＲ４が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→６としての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原
子としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２とし
ての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆは
ガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａｎα
１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素原子であ
り、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４
がＭａｎα１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３が水素
原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用、Ｒ１がＧａｌ
ｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を
示す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６で
あり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２と
しての使用、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆ
はガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎ
α１→２Ｍａｎα１→２としての使用、Ｒ１およびＲ３
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→
６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２として
の使用、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２としての使用など
が挙げられる。
【０００５】また、本発明は下記一般式
【０００６】
【化４】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖に
関するものである。
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖に
関するものである。
【０００７】本発明において、好ましくは、Ｒ１がＧａ
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）である高マンノース型糖鎖、Ｒ２がＭａｎα１
→６またはＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ３がＭａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが挙げら
れる。
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）である高マンノース型糖鎖、Ｒ２がＭａｎα１
→６またはＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ３がＭａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが挙げら
れる。
【０００８】そして、より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ
３およびＲ４が水素原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ
１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラ
ノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素
原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａ
ｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である高
マンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２で
ある高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１
およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍ
ａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２である高マ
ンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であ
り、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１が
水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６
であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが
挙げられる。
３およびＲ４が水素原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ
１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラ
ノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素
原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａ
ｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である高
マンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２で
ある高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１
およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍ
ａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２である高マ
ンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であ
り、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１が
水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６
であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが
挙げられる。
【０００９】
【従来の技術】アスコルビン酸オキシダーゼ（Ａｓｃｏ
ｒｂａｔｅ ｏｘｉｄａｓｅ、以下ＡＯＸと略す）は
０．５モルの分子状酸素存在下、１モルのアスコルビン
酸を脱水素化し、１モルのデヒドロアスコルビン酸と１
モルの水分子を生ずる反応を触媒する酵素である（Ｅ．
Ｃ．１．１０．３．３）。ＡＯＸは、血清や尿等を被検
液として生体成分を測定するに当たって還元作用を持つ
アスコルビン酸の除去を行って目的とする生体成分を測
定する際の酵素反応系の精度を上昇させたり、ＡＯＸに
よる酸素消費の反応を利用した飲食物の脱酸素下による
劣化防止方法やそのための脱酸素剤等に利用されてい
る。
ｒｂａｔｅ ｏｘｉｄａｓｅ、以下ＡＯＸと略す）は
０．５モルの分子状酸素存在下、１モルのアスコルビン
酸を脱水素化し、１モルのデヒドロアスコルビン酸と１
モルの水分子を生ずる反応を触媒する酵素である（Ｅ．
Ｃ．１．１０．３．３）。ＡＯＸは、血清や尿等を被検
液として生体成分を測定するに当たって還元作用を持つ
アスコルビン酸の除去を行って目的とする生体成分を測
定する際の酵素反応系の精度を上昇させたり、ＡＯＸに
よる酸素消費の反応を利用した飲食物の脱酸素下による
劣化防止方法やそのための脱酸素剤等に利用されてい
る。
【００１０】従来、公知のＡＯＸとして植物由来のもの
としてはキュウリ（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４，１８
９−１９５，１９６８）及びカボチャ（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２４８，６５９６−６６０２，１９７
３）、微生物由来のものとしてはミロセシウム ベルカ
リア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉ
ａ）（日本栄養・食糧学会誌、４０，４７−５１，１９
８７）、エーロバクター エロゲネス（Ａｅｒｏｂａｃ
ｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）（日本栄養・食糧学会
誌、４０，４７−５１，１９８７）、及びアクレモニウ
ム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−
２５（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１２４）（特開平３−２３６
７６６号公報）がある。該アクレモニウム ｓｐ．（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５株は工業技術
院生命工学工業研究所に受託番号ＦＥＲＭＰ−１５３２
８号で寄託されている（特願平７−３３１４５９号明細
書）。
としてはキュウリ（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４，１８
９−１９５，１９６８）及びカボチャ（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２４８，６５９６−６６０２，１９７
３）、微生物由来のものとしてはミロセシウム ベルカ
リア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉ
ａ）（日本栄養・食糧学会誌、４０，４７−５１，１９
８７）、エーロバクター エロゲネス（Ａｅｒｏｂａｃ
ｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）（日本栄養・食糧学会
誌、４０，４７−５１，１９８７）、及びアクレモニウ
ム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−
２５（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１２４）（特開平３−２３６
７６６号公報）がある。該アクレモニウム ｓｐ．（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５株は工業技術
院生命工学工業研究所に受託番号ＦＥＲＭＰ−１５３２
８号で寄託されている（特願平７−３３１４５９号明細
書）。
【００１１】糖鎖が酵素などの蛋白質の安定化、酵素の
活性化などに影響をおよぼすことは一般的に公知のこと
である。しかしながら、カボチャ由来のＡＯＸの糖鎖構
造はＭａｎα１−６（Ｘｙｌβ１−２）（Ｍａｎα１−
３）Ｍａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃ
であるが（Ｇ．Ｄ’Ａｎｄｒｅａら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎ
ｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，１５１−１５７，１９８
８））、当該糖鎖構造は該カボチャ由来ＡＯＸに付加し
ていてもその酵素の安定性は必ずしもよくない。即ち酵
素の安定化、活性化に寄与する糖鎖構造は酵素に合った
糖鎖が必要である。
活性化などに影響をおよぼすことは一般的に公知のこと
である。しかしながら、カボチャ由来のＡＯＸの糖鎖構
造はＭａｎα１−６（Ｘｙｌβ１−２）（Ｍａｎα１−
３）Ｍａｎβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃ
であるが（Ｇ．Ｄ’Ａｎｄｒｅａら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎ
ｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，１５１−１５７，１９８
８））、当該糖鎖構造は該カボチャ由来ＡＯＸに付加し
ていてもその酵素の安定性は必ずしもよくない。即ち酵
素の安定化、活性化に寄与する糖鎖構造は酵素に合った
糖鎖が必要である。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明者らは
ＡＯＸを安定化させる高マンノース型糖鎖を見出し、ア
スコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤として使用する方
法を提供することが本発明の目的である。また、ＡＯＸ
を安定化させる高マンノース型糖鎖を提供することが本
発明の目的である。
ＡＯＸを安定化させる高マンノース型糖鎖を見出し、ア
スコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤として使用する方
法を提供することが本発明の目的である。また、ＡＯＸ
を安定化させる高マンノース型糖鎖を提供することが本
発明の目的である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、アクレモニウム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉ
ｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３２
８）が産生するＡＯＸに付加した高マンノース型糖鎖構
造がアスコルビン酸オキシダーゼを安定化させ、活性維
持剤となり得ることを見出し、本発明を完成した。即
ち、本発明は下記一般式
の結果、アクレモニウム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉ
ｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３２
８）が産生するＡＯＸに付加した高マンノース型糖鎖構
造がアスコルビン酸オキシダーゼを安定化させ、活性維
持剤となり得ることを見出し、本発明を完成した。即
ち、本発明は下記一般式
【００１４】
【化５】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび該高マンノース型糖鎖を提供するものである。
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖を
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用お
よび該高マンノース型糖鎖を提供するものである。
【００１５】本発明において、好ましくは、Ｒ１がＧａ
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）である高マンノース型糖鎖、Ｒ２がＭａｎα１
→６またはＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ３がＭａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖等が挙げられ
る。
ｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型
を示す）である高マンノース型糖鎖、Ｒ２がＭａｎα１
→６またはＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ３がＭａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα１→２
Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖等が挙げられ
る。
【００１６】そして、より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ
３およびＲ４が水素原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ
１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラ
ノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素
原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａ
ｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である高
マンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２で
ある高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１
およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍ
ａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２である高マ
ンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であ
り、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１が
水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６
であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが
挙げられる。
３およびＲ４が水素原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ
１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラ
ノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素
原子である高マンノース型糖鎖、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４
が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→６である高マン
ノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａ
ｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である高
マンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２で
ある高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１
およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍ
ａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２である高マ
ンノース型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆ
β１→２（但し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示
す）であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であ
り、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る高マンノース型糖鎖、Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但
し、Ｇａｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、
Ｒ２がＭａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、
Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である高マンノー
ス型糖鎖、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖、Ｒ１が
水素原子であり、Ｒ２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６
であり、Ｒ３がＭａｎα１→２であり、Ｒ４がＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→２である高マンノース型糖鎖などが
挙げられる。
【００１７】本発明の高マンノース型糖鎖をアスコルビ
ン酸オキシダーゼ活性維持としての使用に当たっては、
高マンノース型糖鎖の群から選ばれた少なくとも一種以
上を活性維持剤とすることにより達成されるものであ
り、この高マンノース型糖鎖の群から選ばれた少なくと
も一種以上を活性維持剤としたアスコルビン酸オキシダ
ーゼは、従来のその他のＡＯＸに比べて活性維持が格段
に向上することを見出した。
ン酸オキシダーゼ活性維持としての使用に当たっては、
高マンノース型糖鎖の群から選ばれた少なくとも一種以
上を活性維持剤とすることにより達成されるものであ
り、この高マンノース型糖鎖の群から選ばれた少なくと
も一種以上を活性維持剤としたアスコルビン酸オキシダ
ーゼは、従来のその他のＡＯＸに比べて活性維持が格段
に向上することを見出した。
【００１８】本発明は上記の知見により完成されたもの
である。即ちアスコルビン酸オキシダーゼの活性維持
は、高マンノース型糖鎖を活性維持剤とすることにより
なされ、該アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持によ
り、ＡＯＸをアスコルビン酸の安定的測定や酸化防止法
に用いることが可能となり、高マンノース型糖鎖をアス
コルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用および
該高マンノース型糖鎖を提供し得るものであることが見
出された。本発明の高マンノース型糖鎖をアスコルビン
酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用に当たっては、
アスコルビン酸オキシダーゼ１分子に対して、高マンノ
ース型糖鎖の群から選ばれた１種以上を１〜８分子含ま
れることを特徴とする。
である。即ちアスコルビン酸オキシダーゼの活性維持
は、高マンノース型糖鎖を活性維持剤とすることにより
なされ、該アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持によ
り、ＡＯＸをアスコルビン酸の安定的測定や酸化防止法
に用いることが可能となり、高マンノース型糖鎖をアス
コルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用および
該高マンノース型糖鎖を提供し得るものであることが見
出された。本発明の高マンノース型糖鎖をアスコルビン
酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用に当たっては、
アスコルビン酸オキシダーゼ１分子に対して、高マンノ
ース型糖鎖の群から選ばれた１種以上を１〜８分子含ま
れることを特徴とする。
【００１９】以下に、本発明について詳しく説明する
が、特にこれに限定されるものではない。本発明は、ア
クレモニウム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓ
ｐ．）ＨＩ−２５からＡＯＸを村尾らの方法（Ｂｉｏｓ
ｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，８４
７−８５２，１９９２）により精製分離し、該ＡＯＸの
Ｎ−結合型糖鎖を松浦らの方法（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ Ｊ．，５，１３−２６，１９８８）でヒドラ
ジン分解および再アセチル化し、遊離型糖鎖を作製す
る。遊離した糖鎖をｐ−アミノベンゼン酸エチルエステ
ル（ＡＢＥＥ）で還元的にアミノ化した後、ＰＲＥ−Ｓ
ＥＰ Ｃ１８ カートリッジ（テセック社製、アメリ
カ）及びＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−４カラム（２００−４０
０メッシュ、１．０×４５ｃｍ）で精製する。
が、特にこれに限定されるものではない。本発明は、ア
クレモニウム エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓ
ｐ．）ＨＩ−２５からＡＯＸを村尾らの方法（Ｂｉｏｓ
ｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，８４
７−８５２，１９９２）により精製分離し、該ＡＯＸの
Ｎ−結合型糖鎖を松浦らの方法（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ Ｊ．，５，１３−２６，１９８８）でヒドラ
ジン分解および再アセチル化し、遊離型糖鎖を作製す
る。遊離した糖鎖をｐ−アミノベンゼン酸エチルエステ
ル（ＡＢＥＥ）で還元的にアミノ化した後、ＰＲＥ−Ｓ
ＥＰ Ｃ１８ カートリッジ（テセック社製、アメリ
カ）及びＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−４カラム（２００−４０
０メッシュ、１．０×４５ｃｍ）で精製する。
【００２０】次に、ＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷカ
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ、トーソー社製）による
陰イオン交換高速液体クロマトグラフィーにより、分離
精製をする。中性ＡＢＥＥ−糖鎖の分画はＴＳＫｇｅｌ
アミド−８０カラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（ト
ーソー社製）あるいはワコーシル５Ｃ１８−２００カラ
ム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光純薬社製）で行う。
それぞれのＡＢＥＥ−糖鎖の解析は２次元マッピングに
より行う。
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ、トーソー社製）による
陰イオン交換高速液体クロマトグラフィーにより、分離
精製をする。中性ＡＢＥＥ−糖鎖の分画はＴＳＫｇｅｌ
アミド−８０カラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（ト
ーソー社製）あるいはワコーシル５Ｃ１８−２００カラ
ム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光純薬社製）で行う。
それぞれのＡＢＥＥ−糖鎖の解析は２次元マッピングに
より行う。
【００２１】また、単糖の組成は、精製分離したＡＯＸ
を１．５Ｍ濃度のメタノール性塩酸中でメタノール分解
することにより生じるトリメチルシリルメチル化糖のガ
ス液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ）で分析することに
より行う。単糖の絶対的な立体配座は高野らの方法（Ｂ
ｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５
７，１１９５−１１９７，１９９３）により、トリメチ
ルシリルＬ−２−オクチル化糖をＧＬＣ分析することに
より行う。ＧＬＣはＤＢ−５充填シリカキャピラリーカ
ラム（０．３２ｍｍ×２５ｍ）（Ｊ＆Ｗ サイエンティ
フィック社製、アメリカ）で行い、カラム温度は５０℃
〜１７０℃まで毎分２０℃上昇させ、その後２５０℃ま
では毎分３℃上昇させる。
を１．５Ｍ濃度のメタノール性塩酸中でメタノール分解
することにより生じるトリメチルシリルメチル化糖のガ
ス液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ）で分析することに
より行う。単糖の絶対的な立体配座は高野らの方法（Ｂ
ｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５
７，１１９５−１１９７，１９９３）により、トリメチ
ルシリルＬ−２−オクチル化糖をＧＬＣ分析することに
より行う。ＧＬＣはＤＢ−５充填シリカキャピラリーカ
ラム（０．３２ｍｍ×２５ｍ）（Ｊ＆Ｗ サイエンティ
フィック社製、アメリカ）で行い、カラム温度は５０℃
〜１７０℃まで毎分２０℃上昇させ、その後２５０℃ま
では毎分３℃上昇させる。
【００２２】ＡＢＥＥ−糖鎖はシウカヌウらの方法（Ｃ
ａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１３１，２０９−２１
７，１９８４）で過メチル化した後、メチル化サンプル
を加水分解し、還元し、アセチル化する。結果として生
じる部分的にメチル化されたアルディトールアセテート
をＧＣ／ＭＳ ＯＰ−１０００ガスクロマトグラフィー
−マススペクトメトリーで解析する。
ａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１３１，２０９−２１
７，１９８４）で過メチル化した後、メチル化サンプル
を加水分解し、還元し、アセチル化する。結果として生
じる部分的にメチル化されたアルディトールアセテート
をＧＣ／ＭＳ ＯＰ−１０００ガスクロマトグラフィー
−マススペクトメトリーで解析する。
【００２３】ガラクトヘキサピラノシド結合ではなく、
ガラクトフラノシド結合を加水分解するために、ＡＢＥ
Ｅ−糖鎖の０．０１Ｎ塩酸中で１００℃、３０分間、穏
和な加水分解を行う。他方、ヒドラジン分解により、Ａ
ＯＸから調製される遊離型Ｎ−結合糖鎖中のガラクトフ
ラノシドの加水分解は０．０２Ｎ塩酸中で１００℃、１
５０分間行う。
ガラクトフラノシド結合を加水分解するために、ＡＢＥ
Ｅ−糖鎖の０．０１Ｎ塩酸中で１００℃、３０分間、穏
和な加水分解を行う。他方、ヒドラジン分解により、Ａ
ＯＸから調製される遊離型Ｎ−結合糖鎖中のガラクトフ
ラノシドの加水分解は０．０２Ｎ塩酸中で１００℃、１
５０分間行う。
【００２４】酸加水分解後の反応混合物は減圧条件下で
乾固蒸発させ、その蒸発乾固物は繰り返し水と蒸発させ
た後、ＡＢＥＥを付加し、高速液体クロマトグラフィー
による分析を行う。ＡＢＥＥ−糖鎖のＮＭＲ分析はＡＢ
ＥＥ−糖鎖を繰り返し重水に置換し、Ｂｒｕｋｅｒ Ａ
Ｍ４００分光計で行う。ＦＡＢ−ＭＳ分析はＪＥＯＬ
ＪＭＳ−ＨＸ１００マス分光計で行う。以上の操作によ
り、ＡＯＸ結合糖鎖の構造が明らかとなる。
乾固蒸発させ、その蒸発乾固物は繰り返し水と蒸発させ
た後、ＡＢＥＥを付加し、高速液体クロマトグラフィー
による分析を行う。ＡＢＥＥ−糖鎖のＮＭＲ分析はＡＢ
ＥＥ−糖鎖を繰り返し重水に置換し、Ｂｒｕｋｅｒ Ａ
Ｍ４００分光計で行う。ＦＡＢ−ＭＳ分析はＪＥＯＬ
ＪＭＳ−ＨＸ１００マス分光計で行う。以上の操作によ
り、ＡＯＸ結合糖鎖の構造が明らかとなる。
【００２５】高マンノース型糖鎖の群から選ばれる少な
くとも一種を有効成分とするアスコルビン酸オキシダー
ゼの安定化作用は、精製ＡＯＸをスタールらの方法（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７３，
４０４５−４０４９，１９７６）による過ヨウ素酸酸化
処理をし、糖鎖機能を破壊したＡＯＸを調製した後、精
製ＡＯＸと比較することにより、該有効成分のアスコル
ビン酸オキシダーゼに及ぼす安定化効果として定量化で
きる。
くとも一種を有効成分とするアスコルビン酸オキシダー
ゼの安定化作用は、精製ＡＯＸをスタールらの方法（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７３，
４０４５−４０４９，１９７６）による過ヨウ素酸酸化
処理をし、糖鎖機能を破壊したＡＯＸを調製した後、精
製ＡＯＸと比較することにより、該有効成分のアスコル
ビン酸オキシダーゼに及ぼす安定化効果として定量化で
きる。
【００２６】また、ＡＯＸ酵素活性は酵素反応液（０．
５ｍＭのアスコルビン酸、０．０５ｍＭの塩酸、０．５
ｍＭのエチレンジアミン４酢酸ナトリウム、０．１Ｍの
リン酸２水素カリウム、５ｍＭのリン酸水素２ナトリウ
ム、最終ｐＨ５．６）１ｍｌを試験管に入れ、３０℃で
５分間インキュベートした後に、適当に希釈した酵素液
０．１ｍｌを添加して撹拌し、反応を停止して、２４５
ｎｍの吸光度Ａｓを測定する。
５ｍＭのアスコルビン酸、０．０５ｍＭの塩酸、０．５
ｍＭのエチレンジアミン４酢酸ナトリウム、０．１Ｍの
リン酸２水素カリウム、５ｍＭのリン酸水素２ナトリウ
ム、最終ｐＨ５．６）１ｍｌを試験管に入れ、３０℃で
５分間インキュベートした後に、適当に希釈した酵素液
０．１ｍｌを添加して撹拌し、反応を停止して、２４５
ｎｍの吸光度Ａｓを測定する。
【００２７】また、酵素反応液１ｍｌと０．２Ｎの塩酸
３ｍｌを試験管中で混合撹拌し、３０℃で５分間インキ
ュベートした後に、先述と同じ酵素液０．１ｍｌを加え
撹拌し、２４５ｎｍの吸光度を測定してブランク吸光度
Ａｂを求める。これにより得られたＡｓとＡｂから、以
下の式により酵素液の酵素活性値が導き出される。 活性値（ｕ／ｍｌ）＝（Ａｓ−Ａｂ）×０．５２×（希
釈率）
３ｍｌを試験管中で混合撹拌し、３０℃で５分間インキ
ュベートした後に、先述と同じ酵素液０．１ｍｌを加え
撹拌し、２４５ｎｍの吸光度を測定してブランク吸光度
Ａｂを求める。これにより得られたＡｓとＡｂから、以
下の式により酵素液の酵素活性値が導き出される。 活性値（ｕ／ｍｌ）＝（Ａｓ−Ａｂ）×０．５２×（希
釈率）
【００２８】本発明による高マンノース型糖鎖の群から
少なくとも一種を有効成分としたＡＯＸの安定化剤は、
ＡＯＸを共に使用することによって、還元作用を持つア
スコルビン酸の除去を行うＡＯＸ酵素反応系の精度を上
昇させたり、ＡＯＸによるアスコルビン酸酸化時の酸素
の消費を利用した飲食物の劣化防止方法及びそのための
脱酸素剤等に安定的に利用されるという効能を有する。
少なくとも一種を有効成分としたＡＯＸの安定化剤は、
ＡＯＸを共に使用することによって、還元作用を持つア
スコルビン酸の除去を行うＡＯＸ酵素反応系の精度を上
昇させたり、ＡＯＸによるアスコルビン酸酸化時の酸素
の消費を利用した飲食物の劣化防止方法及びそのための
脱酸素剤等に安定的に利用されるという効能を有する。
【００２９】
【発明の実施の形態】次に、実施例にもとづいて本発明
を説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。 実施例１ アクレモニウム ｓｐ．からのＡＯＸ（アスコルビン酸
オキシダーゼ）の分離精製 （１）アクレモニウム ｓｐ．の培養 ＣＭ培地（ショ糖２０ｇ／l 、リン酸二水素カリウム
０．５ｇ／l 、リン酸水素二カリウム０．５ｇ／l 、塩
化カリウム０．５ｇ／l 、硫酸マグネシウム・７水塩
０．５ｇ／l 、硫酸第１鉄・７水塩０．０１ｇ／l 、硝
酸ナトリウム３ｇ／ｌ、酵母エキス４ｇ／l 、ペプトン
１０ｇ／l ）に、ＡＯＸ生産菌であるアクレモニウム
エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５
株（ＦＥＲＭＰ−１５３２８）を植菌し２８℃で１０日
間撹拌培養して、アスコルビン酸オキシダーゼ活性（総
活性、１，０３０，０００ユニット）を含む培養液１０
０Ｌを得た。
を説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。 実施例１ アクレモニウム ｓｐ．からのＡＯＸ（アスコルビン酸
オキシダーゼ）の分離精製 （１）アクレモニウム ｓｐ．の培養 ＣＭ培地（ショ糖２０ｇ／l 、リン酸二水素カリウム
０．５ｇ／l 、リン酸水素二カリウム０．５ｇ／l 、塩
化カリウム０．５ｇ／l 、硫酸マグネシウム・７水塩
０．５ｇ／l 、硫酸第１鉄・７水塩０．０１ｇ／l 、硝
酸ナトリウム３ｇ／ｌ、酵母エキス４ｇ／l 、ペプトン
１０ｇ／l ）に、ＡＯＸ生産菌であるアクレモニウム
エスピー（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ．）ＨＩ−２５
株（ＦＥＲＭＰ−１５３２８）を植菌し２８℃で１０日
間撹拌培養して、アスコルビン酸オキシダーゼ活性（総
活性、１，０３０，０００ユニット）を含む培養液１０
０Ｌを得た。
【００３０】（２）ＡＯＸの精製 上記（１）で得られたアスコルビン酸オキシダーゼ活性
を含む培養物から村尾らの方法（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，８４７−８５２，
１９９２）にしたがってＡＯＸを精製し、総活性として
１２０，０００ユニット（８６ｍｇ）を得た。
を含む培養物から村尾らの方法（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，８４７−８５２，
１９９２）にしたがってＡＯＸを精製し、総活性として
１２０，０００ユニット（８６ｍｇ）を得た。
【００３１】実施例２ アクレモニウム ｓｐ．からのＡＯＸの糖鎖構造解析 （１）ＡＯＸからの糖鎖の分離精製 ５０ｍｇのＡＯＸのＮ−結合型糖鎖を松浦らの方法（Ｇ
ｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，１３−２６，
１９８８）でヒドラジン分解及び再アセチル化し、遊離
型糖鎖を作製した。次に、太田ら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｊ．，８，４００−４１３，１９９１）及
び松浦ら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，
１３−２６，１９８８）の方法にならって、遊離した糖
鎖をｐ−アミノベンゼン酸エチルエステル（ＡＢＥＥ）
で還元的にアミノ化した後、ＰＲＥ−ＳＥＰ Ｃ１８
カートリッジ（テセック社製、アメリカ）及びＢｉｏ−
Ｇｅｌ Ｐ−４カラム（２００−４００メッシュ、１．
０×４５ｃｍ）で精製した。
ｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，１３−２６，
１９８８）でヒドラジン分解及び再アセチル化し、遊離
型糖鎖を作製した。次に、太田ら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｊ．，８，４００−４１３，１９９１）及
び松浦ら（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．，５，
１３−２６，１９８８）の方法にならって、遊離した糖
鎖をｐ−アミノベンゼン酸エチルエステル（ＡＢＥＥ）
で還元的にアミノ化した後、ＰＲＥ−ＳＥＰ Ｃ１８
カートリッジ（テセック社製、アメリカ）及びＢｉｏ−
Ｇｅｌ Ｐ−４カラム（２００−４００メッシュ、１．
０×４５ｃｍ）で精製した。
【００３２】次に、ＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷカ
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ、トーソー社製）による
陰イオン交換高速液体クロマトグラフィーにより、分離
精製をした。該カラムは１０ｍＭリン酸２水素１ナトリ
ウムで１０分間溶出させた後、１０ｍＭ〜１７０ｍＭの
リン酸２水素１ナトリウム緩衝液で直線的勾配の下で、
流速０．５ｍｌ／分で溶出した。図１中において、バー
で示した部分をプールした。分画Ｎ及び分画ＡＩはそれ
ぞれ中性糖鎖及びモノリン酸化糖鎖のＡＢＥＥ誘導体に
相当した。
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ、トーソー社製）による
陰イオン交換高速液体クロマトグラフィーにより、分離
精製をした。該カラムは１０ｍＭリン酸２水素１ナトリ
ウムで１０分間溶出させた後、１０ｍＭ〜１７０ｍＭの
リン酸２水素１ナトリウム緩衝液で直線的勾配の下で、
流速０．５ｍｌ／分で溶出した。図１中において、バー
で示した部分をプールした。分画Ｎ及び分画ＡＩはそれ
ぞれ中性糖鎖及びモノリン酸化糖鎖のＡＢＥＥ誘導体に
相当した。
【００３３】中性ＡＢＥＥ−糖鎖の分画Ｎは溶媒Ａ（ア
セトニトリル−水（９：１））と溶媒Ｂ（アセトニトリ
ル−水（１：９））の８０：２０の比率の混合物で平衡
化したＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４
６×２５ｃｍ）（トーソー社製）高速液体クロマトグラ
フィーで行った。サンプルの負荷後、溶出は直線的勾配
で溶媒Ａと溶媒Ｂとが５０：５０の比率になるまで、４
０℃、０．８ｍｌ／分で、６０分間行った。図２に示し
たように、分画Ｎをａ〜ｌまでの１２分画として集め
た。
セトニトリル−水（９：１））と溶媒Ｂ（アセトニトリ
ル−水（１：９））の８０：２０の比率の混合物で平衡
化したＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４
６×２５ｃｍ）（トーソー社製）高速液体クロマトグラ
フィーで行った。サンプルの負荷後、溶出は直線的勾配
で溶媒Ａと溶媒Ｂとが５０：５０の比率になるまで、４
０℃、０．８ｍｌ／分で、６０分間行った。図２に示し
たように、分画Ｎをａ〜ｌまでの１２分画として集め
た。
【００３４】次に、それぞれの高マンノース型ＡＢＥＥ
−糖鎖及びグリコシダーゼ消化産物の２次元マッピング
解析は、ＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．
４６×２５ｃｍ）（トーソー社製）およびワコーシル５
Ｃ１８−２００カラム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光
純薬社製）で行った。ＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラ
ムからのＡＢＥＥ−糖鎖の溶出位置はグルコースユニッ
トの数として表し、ワコーシル５Ｃ１８−２００カラム
のＯＤＳカラムからの溶出位置はグルコースＡＢＥＥに
対するのと同様に相対的な保持時間で表した。
−糖鎖及びグリコシダーゼ消化産物の２次元マッピング
解析は、ＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．
４６×２５ｃｍ）（トーソー社製）およびワコーシル５
Ｃ１８−２００カラム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光
純薬社製）で行った。ＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラ
ムからのＡＢＥＥ−糖鎖の溶出位置はグルコースユニッ
トの数として表し、ワコーシル５Ｃ１８−２００カラム
のＯＤＳカラムからの溶出位置はグルコースＡＢＥＥに
対するのと同様に相対的な保持時間で表した。
【００３５】ＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラムは、前
記したように溶媒Ａ（アセトニトリル−水（９：１））
と溶媒Ｂ（アセトニトリル−水（１：９））の８０：２
０の比率の混合物で平衡化したＴＳＫｇｅｌ アミド−
８０カラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（トーソー社
製）高速液体クロマトグラフィーで行った。サンプルの
負荷後、溶出は直線的勾配で溶媒Ａと溶媒Ｂとが５０：
５０の比率になるまで、４０℃，０．８ｍｌ／分間で、
６０分間行った。
記したように溶媒Ａ（アセトニトリル−水（９：１））
と溶媒Ｂ（アセトニトリル−水（１：９））の８０：２
０の比率の混合物で平衡化したＴＳＫｇｅｌ アミド−
８０カラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（トーソー社
製）高速液体クロマトグラフィーで行った。サンプルの
負荷後、溶出は直線的勾配で溶媒Ａと溶媒Ｂとが５０：
５０の比率になるまで、４０℃，０．８ｍｌ／分間で、
６０分間行った。
【００３６】ワコーシル５Ｃ１８−２００カラムは１０
０ｍＭ酢酸中で９％〜１１％のアセトニトリルの直線的
勾配で、４０℃、０．８ｍｌ／分の流速で、６０分間溶
出した。上記２方法での解析結果を図３に示した。次
に、モノガラクトシル化高マンノース型ＡＢＥＥ−糖鎖
及びαマンノシダーゼ消化及び穏和な酸加水分解産物の
２次元マッピング解析はＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カ
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（トーソー社製）およ
びワコーシル５Ｃ１８−２００カラム（直径０．４×２
５ｃｍ）（和光純薬社製）で行い、この２方法での解析
結果を図４に示した。
０ｍＭ酢酸中で９％〜１１％のアセトニトリルの直線的
勾配で、４０℃、０．８ｍｌ／分の流速で、６０分間溶
出した。上記２方法での解析結果を図３に示した。次
に、モノガラクトシル化高マンノース型ＡＢＥＥ−糖鎖
及びαマンノシダーゼ消化及び穏和な酸加水分解産物の
２次元マッピング解析はＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カ
ラム（直径０．４６×２５ｃｍ）（トーソー社製）およ
びワコーシル５Ｃ１８−２００カラム（直径０．４×２
５ｃｍ）（和光純薬社製）で行い、この２方法での解析
結果を図４に示した。
【００３７】ＡＢＥＥ−糖鎖のＮＭＲ（核磁気共鳴）分
析はＡＢＥＥ−糖鎖を繰り返し重水に置換し、Ｂｒｕｋ
ｅｒ ＡＭ４００分光計で行い、分画Ｎのピークｆにお
けるＡＢＥＥ−糖鎖の４００ＭＨｚプロトンＮＭＲによ
る解析をした。その結果を図５（ａ）に示した。また、
ピークＸについても同様に解析した。その結果を図５
（ｂ）に示した。さらに、ＡＢＥＥ誘導体糖鎖構造由来
の標的グループのプロトン化学シフトは表１に示すとお
りである。
析はＡＢＥＥ−糖鎖を繰り返し重水に置換し、Ｂｒｕｋ
ｅｒ ＡＭ４００分光計で行い、分画Ｎのピークｆにお
けるＡＢＥＥ−糖鎖の４００ＭＨｚプロトンＮＭＲによ
る解析をした。その結果を図５（ａ）に示した。また、
ピークＸについても同様に解析した。その結果を図５
（ｂ）に示した。さらに、ＡＢＥＥ誘導体糖鎖構造由来
の標的グループのプロトン化学シフトは表１に示すとお
りである。
【００３８】
【表１】
【００３９】次に、分画Ｎのピークｈおよび分画Ｎのピ
ークｊにおけるＡＢＥＥ−糖鎖のＡ．ｓａｉｔｏｉαマ
ンノシダーゼＩ（天野らの方法（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，９９，１６４５−１６５４，１９８６）にて調
製）による消化産物（１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ５．０、３７℃、２４時間反応）のＴＳＫｇｅ
ｌ アミド−８０高速液体クロマトグラフィーによる解
析を行った。そのクロマトグラムを図６に示した。
ークｊにおけるＡＢＥＥ−糖鎖のＡ．ｓａｉｔｏｉαマ
ンノシダーゼＩ（天野らの方法（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，９９，１６４５−１６５４，１９８６）にて調
製）による消化産物（１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ５．０、３７℃、２４時間反応）のＴＳＫｇｅ
ｌ アミド−８０高速液体クロマトグラフィーによる解
析を行った。そのクロマトグラムを図６に示した。
【００４０】また、単糖の組成は、精製分離したＡＯＸ
を１．５Ｍ濃度のメタノール性塩酸中でメタノール分解
することにより生じるトリメチルシリルメチル化糖のガ
ス液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ）で分析することに
より行った。単糖の絶対的な立体配座は高野らの方法
（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
５７，１１９５−１１９７，１９９３）により、トリメ
チルシリルＬ−２−オクチル化糖をＧＬＣ分析すること
により行った。ＧＬＣはＤＢ−５充填シリカキャピラリ
ーカラム（０．３２ｍｍ×２５ｍ）（Ｊ＆Ｗ サイエン
ティフィック社製、アメリカ）で行い、カラム温度は５
０℃〜１７０℃まで毎分２０℃上昇させ、その後２５０
℃までは毎分３℃上昇させた。
を１．５Ｍ濃度のメタノール性塩酸中でメタノール分解
することにより生じるトリメチルシリルメチル化糖のガ
ス液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ）で分析することに
より行った。単糖の絶対的な立体配座は高野らの方法
（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
５７，１１９５−１１９７，１９９３）により、トリメ
チルシリルＬ−２−オクチル化糖をＧＬＣ分析すること
により行った。ＧＬＣはＤＢ−５充填シリカキャピラリ
ーカラム（０．３２ｍｍ×２５ｍ）（Ｊ＆Ｗ サイエン
ティフィック社製、アメリカ）で行い、カラム温度は５
０℃〜１７０℃まで毎分２０℃上昇させ、その後２５０
℃までは毎分３℃上昇させた。
【００４１】ＡＢＥＥ−糖鎖はシウカヌウらの方法（Ｃ
ａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１３１，２０９−２１
７，１９８４）で過メチル化した後、メチル化サンプル
を加水分解し、還元し、アセチル化した。結果として生
じる部分的にメチル化されたアルディトールアセテート
をＧＣ／ＭＳ ＯＰ−１０００ガスクロマトグラフィー
−マススペクトメトリーで解析した。
ａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１３１，２０９−２１
７，１９８４）で過メチル化した後、メチル化サンプル
を加水分解し、還元し、アセチル化した。結果として生
じる部分的にメチル化されたアルディトールアセテート
をＧＣ／ＭＳ ＯＰ−１０００ガスクロマトグラフィー
−マススペクトメトリーで解析した。
【００４２】ガラクトヘキサピラノシド結合ではなく、
ガラクトフラノシド結合を加水分解するために、ＡＢＥ
Ｅ−糖鎖の０．０１Ｎ塩酸中で１００℃、３０分間、穏
和な加水分解を行った。他方、ヒドラジノ分解により、
ＡＯＸから調製される遊離型Ｎ−結合糖鎖中のガラクト
フラノシドの加水分解は０．０２Ｎ塩酸中で１００℃、
１５０分間行った。
ガラクトフラノシド結合を加水分解するために、ＡＢＥ
Ｅ−糖鎖の０．０１Ｎ塩酸中で１００℃、３０分間、穏
和な加水分解を行った。他方、ヒドラジノ分解により、
ＡＯＸから調製される遊離型Ｎ−結合糖鎖中のガラクト
フラノシドの加水分解は０．０２Ｎ塩酸中で１００℃、
１５０分間行った。
【００４３】酸加水分解後の反応混合物は減圧条件下で
乾固蒸発させ、その蒸発乾固物は繰り返し水と蒸発させ
た後、ＡＢＥＥを付加し、高速液体クロマトグラフィー
による分析を行った。ＦＡＢ−ＭＳ分析はＪＥＯＬ Ｊ
ＭＳ−ＨＸ１００マス分光計で行った。以上の実験結果
から解明できたアクレモニウム ｓｐ．のＡＯＸの中性
Ｎ−結合型糖鎖の構造を下記に示した。即ち、分画Ｎピ
ークａの構造を下記に示した。
乾固蒸発させ、その蒸発乾固物は繰り返し水と蒸発させ
た後、ＡＢＥＥを付加し、高速液体クロマトグラフィー
による分析を行った。ＦＡＢ−ＭＳ分析はＪＥＯＬ Ｊ
ＭＳ−ＨＸ１００マス分光計で行った。以上の実験結果
から解明できたアクレモニウム ｓｐ．のＡＯＸの中性
Ｎ−結合型糖鎖の構造を下記に示した。即ち、分画Ｎピ
ークａの構造を下記に示した。
【００４４】
【化６】 即ち、分画Ｎピークｃの構造を下記に示した。
【００４５】
【化７】 即ち、分画Ｎピークｅの構造を下記に示した。
【００４６】
【化８】 即ち、分画Ｎピークｆの構造を下記に示した。
【００４７】
【化９】 即ち、分画Ｎピークｇの構造を下記に示した。
【００４８】
【化１０】 即ち、分画Ｎピークｈの構造を下記に示した。
【００４９】
【化１１】 即ち、分画Ｎピークｉの構造の１つを下記に示した。
【００５０】
【化１２】 即ち、分画Ｎピークｉの構造のもう１つを下記に示し
た。
た。
【００５１】
【化１３】 即ち、分画Ｎピークｊの構造の１つを下記に示した。
【００５２】
【化１４】 即ち、分画Ｎピークｊの構造のもう１つを下記に示し
た。
た。
【００５３】
【化１５】 即ち、分画Ｎピークｋの構造を下記に示した。
【００５４】
【化１６】 即ち、分画Ｎピークｌの構造を下記に示した。
【００５５】
【化１７】
【００５６】実施例３ 糖鎖によるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化 （１）糖鎖機能を破壊したＡＯＸの調製 精製ＡＯＸ３００ユニットに対し、過ヨウ素酸ナトリウ
ム（シグマ社製）１０ｍＭ添加し、５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）中で４℃，１時間、暗中で反応させ、糖
鎖機能を破壊したＡＯＸを調製した。
ム（シグマ社製）１０ｍＭ添加し、５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）中で４℃，１時間、暗中で反応させ、糖
鎖機能を破壊したＡＯＸを調製した。
【００５７】（２）糖鎖機能を破壊したＡＯＸの安定性
評価 精製ＡＯＸ５０ユニットと糖鎖機能を破壊したＡＯＸ５
０ユニットをそれぞれ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）に置換し、６０℃、３０分間静置した。静置後、そ
れぞれのアスコルビン酸オキシダーゼ活性を測定した結
果、精製ＡＯＸは５０ユニット、糖鎖機能を破壊したＡ
ＯＸは２０ユニットの回収率であった。
評価 精製ＡＯＸ５０ユニットと糖鎖機能を破壊したＡＯＸ５
０ユニットをそれぞれ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）に置換し、６０℃、３０分間静置した。静置後、そ
れぞれのアスコルビン酸オキシダーゼ活性を測定した結
果、精製ＡＯＸは５０ユニット、糖鎖機能を破壊したＡ
ＯＸは２０ユニットの回収率であった。
【００５８】また、精製ＡＯＸ２０ユニットと糖鎖機能
を破壊したＡＯＸ２０ユニットをそれぞれ０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に置換し、３７℃、４０日間静
置した。４０日後、ＡＯＸの活性回収率は精製ＡＯＸが
９８％、糖鎖機能を破壊したＡＯＸが３０％であった。
本結果により、高マンノース型糖鎖をアスコルビン酸オ
キシダーゼ活性維持剤として使用できることが明らかと
なった。
を破壊したＡＯＸ２０ユニットをそれぞれ０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に置換し、３７℃、４０日間静
置した。４０日後、ＡＯＸの活性回収率は精製ＡＯＸが
９８％、糖鎖機能を破壊したＡＯＸが３０％であった。
本結果により、高マンノース型糖鎖をアスコルビン酸オ
キシダーゼ活性維持剤として使用できることが明らかと
なった。
【００５９】
【発明の効果】本発明にかかる高マンノース型糖鎖をア
スコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用は、
以上のように、還元作用を持つアスコルビン酸の除去を
行う酵素反応系の精度を上昇させたり、酸素の消費を利
用した飲食物の劣化防止方法およびそのための脱酸素剤
等に利用される。
スコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用は、
以上のように、還元作用を持つアスコルビン酸の除去を
行う酵素反応系の精度を上昇させたり、酸素の消費を利
用した飲食物の劣化防止方法およびそのための脱酸素剤
等に利用される。
【図１】中性糖鎖及びモノリン酸化糖鎖のＡＢＥＥ誘導
体をＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷカラム（直径０．
４６×２５ｃｍ，トーソー社製）による陰イオン交換高
速液体クロマトグラフィーにより、分離精製をしたもの
である。
体をＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷカラム（直径０．
４６×２５ｃｍ，トーソー社製）による陰イオン交換高
速液体クロマトグラフィーにより、分離精製をしたもの
である。
【図２】中性ＡＢＥＥ−糖鎖の分画Ｎを溶媒Ａ（アセト
ニトリル−水（９：１））と溶媒Ｂ（アセトニトリル−
水（１：９））の８０：２０の比率の混合物で平衡化し
たＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４６ｘ
２５ｃｍ）（トーソー社製）高速液体クロマトグラフィ
ーである。図中、ピークａ〜ピークｌまでの１２分画を
集めた。
ニトリル−水（９：１））と溶媒Ｂ（アセトニトリル−
水（１：９））の８０：２０の比率の混合物で平衡化し
たＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４６ｘ
２５ｃｍ）（トーソー社製）高速液体クロマトグラフィ
ーである。図中、ピークａ〜ピークｌまでの１２分画を
集めた。
【図３】ワコーシル５Ｃ１８−２００カラムによる１０
０ｍＭ酢酸中で９％〜１１％のアセトニトリルの直線的
勾配で溶出したものである。
０ｍＭ酢酸中で９％〜１１％のアセトニトリルの直線的
勾配で溶出したものである。
【図４】モノガラクトシル化高マンノース型ＡＢＥＥ−
糖鎖及びαマンノシダーゼ消化及び穏和な酸加水分解産
物をＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４６
×２５ｃｍ）（トーソー社製）あるいはワコーシル５Ｃ
１８−２００カラム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光純
薬社製）で行った２次元マッピング解析結果である。
糖鎖及びαマンノシダーゼ消化及び穏和な酸加水分解産
物をＴＳＫｇｅｌ アミド−８０カラム（直径０．４６
×２５ｃｍ）（トーソー社製）あるいはワコーシル５Ｃ
１８−２００カラム（直径０．４×２５ｃｍ）（和光純
薬社製）で行った２次元マッピング解析結果である。
【図５】分画Ｎのピークｆ及びピークＸにおけるＡＢＥ
Ｅ−糖鎖の４００ＭＨｚプロトンＮＭＲであり、それぞ
れ（ｂ）と（ａ）に対応する。
Ｅ−糖鎖の４００ＭＨｚプロトンＮＭＲであり、それぞ
れ（ｂ）と（ａ）に対応する。
【図６】分画Ｎのピークｈ及び分画Ｎのピークｊにおけ
るＡＢＥＥ−糖鎖のＡ．ｓａｉｔｏｉαマンノシダーゼ
Ｉによる消化産物のＴＳＫｇｅｌ アミドー８０高速液
体クロマトグラフィーである。
るＡＢＥＥ−糖鎖のＡ．ｓａｉｔｏｉαマンノシダーゼ
Ｉによる消化産物のＴＳＫｇｅｌ アミドー８０高速液
体クロマトグラフィーである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (34)
- 【請求項１】 下記一般式 【化１】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖の
アスコルビン酸オキシダーゼ活性維持剤としての使用。 - 【請求項２】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）である請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 Ｒ２がＭａｎα１→６またはＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→６である請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 Ｒ３がＭａｎα１→２である請求項１記
載の方法。 - 【請求項５】 Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα１
→２Ｍａｎα１→２である請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素原子
である請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ３
およびＲ４が水素原子である請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 Ｒ１、Ｒ３およびＲ４が水素原子であ
り、Ｒ２がＭａｎα１→６である請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａｌ
ｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭａ
ｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である請
求項１記載の方法。 - 【請求項１０】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭ
ａｎα１→２である請求項１記載の方法。 - 【請求項１２】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２である請求項１記載の方法。 - 【請求項１３】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である請求項１記載の方法。 - 【請求項１４】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子で
あり、Ｒ４がＭａｎα１→２である請求項１記載の方
法。 - 【請求項１５】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→２である請求項１記載の方
法。 - 【請求項１６】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２Ｍａｎα１→２である請求項１記載の方法。 - 【請求項１７】 Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３がＭａｎα１→２
であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である請
求項１記載の方法。 - 【請求項１８】 下記一般式 【化２】 （但し式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４は水素原子あ
るいは置換基を示す）で表される高マンノース型糖鎖。 - 【請求項１９】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）である請求項１８
記載の高マンノース型糖鎖。 - 【請求項２０】 Ｒ２がＭａｎα１→６またはＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→６である請求項１８記載の高マンノ
ース型糖鎖。 - 【請求項２１】 Ｒ３がＭａｎα１→２である請求項１
８記載の高マンノース型糖鎖。 - 【請求項２２】 Ｒ４がＭａｎα１→２またはＭａｎα
１→２Ｍａｎα１→２である請求項１８記載の高マンノ
ース型糖鎖。 - 【請求項２３】 Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素原
子である請求項１８記載の高マンノース型糖鎖。 - 【請求項２４】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２、Ｒ
３およびＲ４が水素原子である請求項１８記載の高マン
ノース型糖鎖。 - 【請求項２５】 Ｒ１、Ｒ３およびＲ４が水素原子であ
り、Ｒ２がＭａｎα１→６である請求項１８記載の高マ
ンノース型糖鎖。 - 【請求項２６】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→６であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子である
請求項１８記載の高マンノース型糖鎖。 - 【請求項２７】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２であ
る請求項１８記載の高マンノース型糖鎖。 - 【請求項２８】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭ
ａｎα１→２である請求項１８記載の高マンノース型糖
鎖。 - 【請求項２９】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２である請求項１８記載の高マンノース型糖
鎖。 - 【請求項３０】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａ
ｎα１→２である請求項１８記載の高マンノース型糖
鎖。 - 【請求項３１】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子で
あり、Ｒ４がＭａｎα１→２である請求項１８記載の高
マンノース型糖鎖。 - 【請求項３２】 Ｒ１がＧａｌｆβ１→２（但し、Ｇａ
ｌｆはガラクトフラノース型を示す）であり、Ｒ２がＭ
ａｎα１→６であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がＭ
ａｎα１→２Ｍａｎα１→２である請求項１８記載の高
マンノース型糖鎖。 - 【請求項３３】 Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ
２がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ４がＭａ
ｎα１→２Ｍａｎα１→２である請求項１８記載の高マ
ンノース型糖鎖。 - 【請求項３４】 Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２がＭａｎ
α１→２Ｍａｎα１→６であり、Ｒ３がＭａｎα１→２
であり、Ｒ４がＭａｎα１→２Ｍａｎα１→２である請
求項１８記載の高マンノース型糖鎖。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8099864A JPH09286802A (ja) | 1996-04-22 | 1996-04-22 | 高マンノース型糖鎖 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8099864A JPH09286802A (ja) | 1996-04-22 | 1996-04-22 | 高マンノース型糖鎖 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09286802A true JPH09286802A (ja) | 1997-11-04 |
Family
ID=14258680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8099864A Pending JPH09286802A (ja) | 1996-04-22 | 1996-04-22 | 高マンノース型糖鎖 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09286802A (ja) |
-
1996
- 1996-04-22 JP JP8099864A patent/JPH09286802A/ja active Pending
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|
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| A521 | Written amendment |
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| A02 | Decision of refusal |
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