JPH09257742A - アルコールセンサ - Google Patents
アルコールセンサInfo
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- JPH09257742A JPH09257742A JP8062957A JP6295796A JPH09257742A JP H09257742 A JPH09257742 A JP H09257742A JP 8062957 A JP8062957 A JP 8062957A JP 6295796 A JP6295796 A JP 6295796A JP H09257742 A JPH09257742 A JP H09257742A
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- JP
- Japan
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- alcohol
- biotin
- avidin
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アルコール酸化酵素を利用した簡単な構造を
有し、アルコールに対する選択性、応答性に優れ、長期
間安定して使用できる、実用的なアルコールセンサを提
供する。 【解決手段】 白金電極１の表面に、アビジン２と、ビ
オチン３ｂで標識したアルコールオキシダーゼ３ａから
なるビオチン標識アルコールオキシダーゼ３とを交互に
積層した多重層膜を有するアルコールセンサ。
有し、アルコールに対する選択性、応答性に優れ、長期
間安定して使用できる、実用的なアルコールセンサを提
供する。 【解決手段】 白金電極１の表面に、アビジン２と、ビ
オチン３ｂで標識したアルコールオキシダーゼ３ａから
なるビオチン標識アルコールオキシダーゼ３とを交互に
積層した多重層膜を有するアルコールセンサ。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、溶液中のアルコー
ルを選択的に検知してその濃度を測定することができる
アルコールセンサに関する。
ルを選択的に検知してその濃度を測定することができる
アルコールセンサに関する。
【０００２】
【従来技術】溶液中のエタノールを検知する酵素センサ
は、臨床研究や食品工業、発酵工業などの分野で実用さ
れている。最近では、酵素を利用したアルコールセンサ
が知られており、具体的にはアルコールオキシダーゼ
（ＡＯx）の固定化酵素膜を備えた酸素電極や、アルコ
ールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）を利用した全固体セン
サ等が開発されている。
は、臨床研究や食品工業、発酵工業などの分野で実用さ
れている。最近では、酵素を利用したアルコールセンサ
が知られており、具体的にはアルコールオキシダーゼ
（ＡＯx）の固定化酵素膜を備えた酸素電極や、アルコ
ールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）を利用した全固体セン
サ等が開発されている。
【０００３】これらの酵素を利用したアルコールセンサ
は、比較的小型であるが、ＡＤＨは補酵素としてβ−ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドを必要とするの
で、簡便さの点ではＡＯxに基づくアルコールセンサの
方がＡＤＨを利用したセンサよりも優れている。しか
し、ＡＯxは電子受容体として酵素のみを必要とすし、
ＡＯxは単離される起源によっては多少不安定である。
は、比較的小型であるが、ＡＤＨは補酵素としてβ−ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドを必要とするの
で、簡便さの点ではＡＯxに基づくアルコールセンサの
方がＡＤＨを利用したセンサよりも優れている。しか
し、ＡＯxは電子受容体として酵素のみを必要とすし、
ＡＯxは単離される起源によっては多少不安定である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記のごとく、酵素を
利用したアルコールセンサについては多くの研究がなさ
れているが、いまだ実用性の点において有用なものが発
表されていない。特にエタノールセンサなどのアルコー
ルセンサでは、選択性及び感度を向上させること、並び
に安定性ないし信頼性を向上させることが臨床研究や食
品・発酵工業などの分野で強く要望されている。
利用したアルコールセンサについては多くの研究がなさ
れているが、いまだ実用性の点において有用なものが発
表されていない。特にエタノールセンサなどのアルコー
ルセンサでは、選択性及び感度を向上させること、並び
に安定性ないし信頼性を向上させることが臨床研究や食
品・発酵工業などの分野で強く要望されている。
【０００５】本発明は、かかる従来の事情に鑑み、アル
コール酸化酵素を利用した簡単な構造であって、アルコ
ールに対する選択性、応答性に優れ、長期間安定して使
用できる、実用的なアルコールセンサを提供することを
目的とする。
コール酸化酵素を利用した簡単な構造であって、アルコ
ールに対する選択性、応答性に優れ、長期間安定して使
用できる、実用的なアルコールセンサを提供することを
目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明が提供するアルコールセンサは、白金電極の
表面に、アビジンとビオチン標識アルコール酸化酵素と
が交互に積層された多重層膜を設けたことを特徴とする
ものである。
め、本発明が提供するアルコールセンサは、白金電極の
表面に、アビジンとビオチン標識アルコール酸化酵素と
が交互に積層された多重層膜を設けたことを特徴とする
ものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】アビジン（ａｖｉｄｉｎ）は卵白
などに含まれるタンパク質の一種であり、ビオチン（ｂ
ｉｏｔｉｎ）はビタミンＢ複合体の一種である。また、
アビジンとビオチンの結合反応は公知であり、生化学検
出反応に用いられている。
などに含まれるタンパク質の一種であり、ビオチン（ｂ
ｉｏｔｉｎ）はビタミンＢ複合体の一種である。また、
アビジンとビオチンの結合反応は公知であり、生化学検
出反応に用いられている。
【０００８】本発明者は、このアビジンとビオチンとの
間の強い親和性を利用して、その触媒活性を失うことな
く、白金表面に酵素多重層を調整できることを見い出し
た。本発明のアルコールセンサは、アルコール酸化酵素
にビオチンを付加してビオチン標識アルコール酸化酵素
とし、上記のアビジン−ビチオン結合を利用して、アル
コール酸化酵素を含むアビジン−ビオチンのタンパク質
層を白金電極表面に形成したものである。
間の強い親和性を利用して、その触媒活性を失うことな
く、白金表面に酵素多重層を調整できることを見い出し
た。本発明のアルコールセンサは、アルコール酸化酵素
にビオチンを付加してビオチン標識アルコール酸化酵素
とし、上記のアビジン−ビチオン結合を利用して、アル
コール酸化酵素を含むアビジン−ビオチンのタンパク質
層を白金電極表面に形成したものである。
【０００９】アビジンとビオチンの結合システムによっ
て調製された酵素を含む多重層膜の理想的な構造を、図
１に模式的に図解した。この多重層膜は、白金電極１の
表面に、アビジン２とビオチン標識アルコールオキシダ
ーゼ（ＡＯx）３とが交互に積層しており、アビジン２
がビチオン３ｂとの４つの結合部位を持つことと、ＡＯ
x３ａに幾つかのビチオン３ｂが付加するという特徴に
基づいている。
て調製された酵素を含む多重層膜の理想的な構造を、図
１に模式的に図解した。この多重層膜は、白金電極１の
表面に、アビジン２とビオチン標識アルコールオキシダ
ーゼ（ＡＯx）３とが交互に積層しており、アビジン２
がビチオン３ｂとの４つの結合部位を持つことと、ＡＯ
x３ａに幾つかのビチオン３ｂが付加するという特徴に
基づいている。
【００１０】上記のごとく、アビジンとビオチン標識ア
ルコール酸化酵素との多重層膜を持つ本発明のアルコー
ルセンサは電流応答型であって、例えば０.０１〜１０
ｍｇ／１００ｍｌの範囲のエタノールに対して鋭敏な応
答を示すことが判った。応答は約１０秒以内と速やかで
あり、これはエタノール及びＨ2Ｏ2が抵抗なく拡散でき
る程度にＡＯx多重層膜が疎になっていることを示して
いる。ＡＯx多重層膜の薄も速やかな応答の原因の一つ
と考えられ、例えばアビジン１層とＡＯx１層の合計厚
さはアビジン及びＡＯxの分子サイズから見積もって約
１５ｎｍである。
ルコール酸化酵素との多重層膜を持つ本発明のアルコー
ルセンサは電流応答型であって、例えば０.０１〜１０
ｍｇ／１００ｍｌの範囲のエタノールに対して鋭敏な応
答を示すことが判った。応答は約１０秒以内と速やかで
あり、これはエタノール及びＨ2Ｏ2が抵抗なく拡散でき
る程度にＡＯx多重層膜が疎になっていることを示して
いる。ＡＯx多重層膜の薄も速やかな応答の原因の一つ
と考えられ、例えばアビジン１層とＡＯx１層の合計厚
さはアビジン及びＡＯxの分子サイズから見積もって約
１５ｎｍである。
【００１１】また、本発明のアルコールセンサの出力電
流はビオチン標識アルコール酸化酵素の層数に比例し、
これは一層ごとの被覆によって一定量のアルコール酸化
酵素が固定化されるということを示している。この出力
電流とアルコール酸化酵素の層数との比例関係を利用し
て、即ちアルコール酸化酵素の層数の増減により、セン
サの感度を正確に調節することができる。例えば、ビオ
チン標識ＡＯxの層数（ＡＯx層数）を１５層以上とした
とき、応答電流は９ｍＡ以上になり、この応答電流は実
用的なエタノールの分析には十分高い値である。
流はビオチン標識アルコール酸化酵素の層数に比例し、
これは一層ごとの被覆によって一定量のアルコール酸化
酵素が固定化されるということを示している。この出力
電流とアルコール酸化酵素の層数との比例関係を利用し
て、即ちアルコール酸化酵素の層数の増減により、セン
サの感度を正確に調節することができる。例えば、ビオ
チン標識ＡＯxの層数（ＡＯx層数）を１５層以上とした
とき、応答電流は９ｍＡ以上になり、この応答電流は実
用的なエタノールの分析には十分高い値である。
【００１２】更に、このアルコールセンサは、約１カ月
の間劣化することなく、最初の応答性を保つことができ
る。この優れた安定性は、酵素とアビジンがいかなる架
橋試薬も用いず、非共有結合によって互いに結びついて
いることによるものと考えられ、従来型の酵素センサと
比べて大幅に改善されている。
の間劣化することなく、最初の応答性を保つことができ
る。この優れた安定性は、酵素とアビジンがいかなる架
橋試薬も用いず、非共有結合によって互いに結びついて
いることによるものと考えられ、従来型の酵素センサと
比べて大幅に改善されている。
【００１３】尚、本発明のアルコールセンサの脂肪族ア
ルコールに対する選択性は、メタノール＞エタノール＞
ｎ−プロパノール＞ｎ−ブタノールの順となり、これは
均一系でのＡＯxの選択性と一致する。
ルコールに対する選択性は、メタノール＞エタノール＞
ｎ−プロパノール＞ｎ−ブタノールの順となり、これは
均一系でのＡＯxの選択性と一致する。
【００１４】
【実施例】アルコール酸化酵素として、アルコーオキシ
ダーゼ（ＡＯx）（ＥＣ １.１３.１３； Ｐｉｃｈｉａ
Ｐａｓｔｏｒｉｓ由来；３３Ｕ／ｍｇ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）を、米国のＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．
から購入して使用した。アビジンは米国のＣａｌｚｙｍ
ｅ Ｌａｂ．から購入し、活性ビオチン（Ｎ−ｈｙｄｒ
ｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ６−（ｂｉｏｔｉｎ
ａｍｉｄｏ）ｈｅｘａｎｏａｔｅ）は米国のＶｅｃｔｏ
ｒ Ｌａｂ．から購入した。酵素及びアビジンの溶液
は、共にダルベッコのリン酸緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ）で調
製した。使用したエタノール及び他の全ての試薬は特級
で、精製せずそのまま用いた。
ダーゼ（ＡＯx）（ＥＣ １.１３.１３； Ｐｉｃｈｉａ
Ｐａｓｔｏｒｉｓ由来；３３Ｕ／ｍｇ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）を、米国のＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．
から購入して使用した。アビジンは米国のＣａｌｚｙｍ
ｅ Ｌａｂ．から購入し、活性ビオチン（Ｎ−ｈｙｄｒ
ｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ６−（ｂｉｏｔｉｎ
ａｍｉｄｏ）ｈｅｘａｎｏａｔｅ）は米国のＶｅｃｔｏ
ｒ Ｌａｂ．から購入した。酵素及びアビジンの溶液
は、共にダルベッコのリン酸緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ）で調
製した。使用したエタノール及び他の全ての試薬は特級
で、精製せずそのまま用いた。
【００１５】アルコールオキシダーゼ（５２ｍｇ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ／ｍｌ）３０μｌと、活性ビチオン溶液（１
ｍｇ／ｍｌ Ｎ,Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉ
ｄｅ中）を０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3溶液２.５ｍｌ中で混
合し、室温で３時間良く撹拌した。反応終了後遠心分離
を行って、ＡＯx分子に幾つかのビチオン残基を導入し
たビチオン標識ＡＯx溶液を得た。
ｏｔｅｉｎ／ｍｌ）３０μｌと、活性ビチオン溶液（１
ｍｇ／ｍｌ Ｎ,Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉ
ｄｅ中）を０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3溶液２.５ｍｌ中で混
合し、室温で３時間良く撹拌した。反応終了後遠心分離
を行って、ＡＯx分子に幾つかのビチオン残基を導入し
たビチオン標識ＡＯx溶液を得た。
【００１６】過酸化水素を検出するために白金ディスク
電極（直径３ｍｍ）を電極材料として用いた。この白金
ディスク電極をアビジン溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に室温で
２０分間浸漬し、電極表面にアビジンを被覆した。次
に、この電極をＤ−ＰＢＳ中で１０分間洗浄し、続いて
上記のビチオン標識ＡＯx溶液（５１Ｕ／ｍｌ）中に２
０分間浸漬し、再びＤ−ＰＢＳ中で１０分間洗浄した。
この操作を繰り返すことにより、白金ディスク電極表面
にＡＯx多重層膜を形成した。
電極（直径３ｍｍ）を電極材料として用いた。この白金
ディスク電極をアビジン溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に室温で
２０分間浸漬し、電極表面にアビジンを被覆した。次
に、この電極をＤ−ＰＢＳ中で１０分間洗浄し、続いて
上記のビチオン標識ＡＯx溶液（５１Ｕ／ｍｌ）中に２
０分間浸漬し、再びＤ−ＰＢＳ中で１０分間洗浄した。
この操作を繰り返すことにより、白金ディスク電極表面
にＡＯx多重層膜を形成した。
【００１７】得られたアルコールセンサを用いて、その
電気化学的応答を従来型の三元電極系で銀−塩化銀参照
電極に対して０.６Ｖの電位で測定を行った。一定の電
位を印加するため、従来型の定電位電解装置を用いた。
尚、測定は１０ｍｌの緩衝液（０.１Ｍリン酸、ＰＨ.
８）に、所定のエタノール標準溶液を撹拌しながら注入
して行い、センサを使用しないときはＤ−ＰＢＳ中に約
４℃で保存した。
電気化学的応答を従来型の三元電極系で銀−塩化銀参照
電極に対して０.６Ｖの電位で測定を行った。一定の電
位を印加するため、従来型の定電位電解装置を用いた。
尚、測定は１０ｍｌの緩衝液（０.１Ｍリン酸、ＰＨ.
８）に、所定のエタノール標準溶液を撹拌しながら注入
して行い、センサを使用しないときはＤ−ＰＢＳ中に約
４℃で保存した。
【００１８】まず、ＡＯx多重層膜の層数を変えて、４
６ｍｇ／１００ｍｌのエタノールに対する応答電流を調
べ、その結果を図２に示した。図２から、ＡＯx層数の
増加によって応答電流が増加し、出力電流の増加量はＡ
Ｏx層数にほぼ比例していることが判る。この比例関係
は、各々ＡＯx層ごとにほぼ同じ量のＡＯxが存在してい
ることを示している。また、ＡＯx層数を１５層以上と
したとき応答電流が９ｍＡ以上になることが判り、これ
は実用的なエタノールの分析には十分高い値である。
６ｍｇ／１００ｍｌのエタノールに対する応答電流を調
べ、その結果を図２に示した。図２から、ＡＯx層数の
増加によって応答電流が増加し、出力電流の増加量はＡ
Ｏx層数にほぼ比例していることが判る。この比例関係
は、各々ＡＯx層ごとにほぼ同じ量のＡＯxが存在してい
ることを示している。また、ＡＯx層数を１５層以上と
したとき応答電流が９ｍＡ以上になることが判り、これ
は実用的なエタノールの分析には十分高い値である。
【００１９】次に、このアルコールセンサの応答性を調
べた。出力電流の最大電流値は、緩衝液中に試料を添加
後１０秒以内に得られた。緩衝液中に添加したエタノー
ルがＡＯx多重層膜中に速やかに拡散してアセトアルデ
ヒドと過酸化水素に酸化され、電気化学的応答が極めて
速やかに行われていることが判る。この速やかな応答
は、エタノール及びＨ2Ｏ2が抵抗なく拡散できる程度に
ＡＯx多重層膜が疎であること、及びＡＯx多重層膜の膜
厚がアビジン１層とＡＯx１層の合計でアビジンとＡＯx
の分子サイズから見積もって約１５ｎｍと薄いことによ
るものと考えられる。
べた。出力電流の最大電流値は、緩衝液中に試料を添加
後１０秒以内に得られた。緩衝液中に添加したエタノー
ルがＡＯx多重層膜中に速やかに拡散してアセトアルデ
ヒドと過酸化水素に酸化され、電気化学的応答が極めて
速やかに行われていることが判る。この速やかな応答
は、エタノール及びＨ2Ｏ2が抵抗なく拡散できる程度に
ＡＯx多重層膜が疎であること、及びＡＯx多重層膜の膜
厚がアビジン１層とＡＯx１層の合計でアビジンとＡＯx
の分子サイズから見積もって約１５ｎｍと薄いことによ
るものと考えられる。
【００２０】図３は、ＡＯx層数が２０層の多重層膜を
持つ上記アルコールセンサの検量線を示しており、０.
０１〜１０ｍｇ／１００ｍｌのエタノール濃度範囲で直
線となっている。図３の検量線を用いることにより、ア
ルコールセンサの出力電流から、濃度未知の試料に含ま
れるエタノール濃度を知ることができる。例えばアルコ
ールを摂取した人の血中エタノールを測定する場合に
は、センサの検量線が約５０〜２５０ｍｇ／１００ｍｌ
のエタノール濃度を含む必要があるが、ここで用いたセ
ンサは適当な緩衝液で１００倍希釈後の血中アルコール
の測定には十分な感度を持つことが判る。
持つ上記アルコールセンサの検量線を示しており、０.
０１〜１０ｍｇ／１００ｍｌのエタノール濃度範囲で直
線となっている。図３の検量線を用いることにより、ア
ルコールセンサの出力電流から、濃度未知の試料に含ま
れるエタノール濃度を知ることができる。例えばアルコ
ールを摂取した人の血中エタノールを測定する場合に
は、センサの検量線が約５０〜２５０ｍｇ／１００ｍｌ
のエタノール濃度を含む必要があるが、ここで用いたセ
ンサは適当な緩衝液で１００倍希釈後の血中アルコール
の測定には十分な感度を持つことが判る。
【００２１】更に、ＡＯx層数が２０層の多重層膜を持
つアルコールセンサの安定性を２カ月以上調べ、その結
果を図４に示した。４６ｍｇ／１００ｍｌのエタノール
に対する応答電流は４週間後までは最初の値の９５％の
活性を維持し、その後次第に減少し、１０週間後には最
初の値の約３０％の活性にまで減少した。ＡＯxは安定
性に乏しいことが知られており、これは反応生成物のＨ
2Ｏ2がＡＯxの触媒活性を阻害するためとされている。
しかし、この実施例で用いたＰｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏ
ｒｉｓ由来のＡＯxに対するＨ2Ｏ2の影響は小さく、ま
た架橋試薬を用いずにアビジンとビチオンによってＡＯ
xを固定化するという緩和な条件も、本発明のセンサの
比較的長い寿命の一因であると考えられる。
つアルコールセンサの安定性を２カ月以上調べ、その結
果を図４に示した。４６ｍｇ／１００ｍｌのエタノール
に対する応答電流は４週間後までは最初の値の９５％の
活性を維持し、その後次第に減少し、１０週間後には最
初の値の約３０％の活性にまで減少した。ＡＯxは安定
性に乏しいことが知られており、これは反応生成物のＨ
2Ｏ2がＡＯxの触媒活性を阻害するためとされている。
しかし、この実施例で用いたＰｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏ
ｒｉｓ由来のＡＯxに対するＨ2Ｏ2の影響は小さく、ま
た架橋試薬を用いずにアビジンとビチオンによってＡＯ
xを固定化するという緩和な条件も、本発明のセンサの
比較的長い寿命の一因であると考えられる。
【００２２】異なった微生物由来のＡＯxは、数種類の
脂肪族一級アルコールに対して異なった活性を持ってい
ることが知られている。そこで、本発明のアルコールセ
ンサを血中エタノールの検出及び測定に使用する場合の
選択性について調査した。ＡＯx層数が１０層の多重層
膜を持つアルコールセンサを用い、その基質選択性を調
べるため２０ｍｇ／１００ｍｌの各種アルコールを測定
した時の出力電流の比率を表１に示した。
脂肪族一級アルコールに対して異なった活性を持ってい
ることが知られている。そこで、本発明のアルコールセ
ンサを血中エタノールの検出及び測定に使用する場合の
選択性について調査した。ＡＯx層数が１０層の多重層
膜を持つアルコールセンサを用い、その基質選択性を調
べるため２０ｍｇ／１００ｍｌの各種アルコールを測定
した時の出力電流の比率を表１に示した。
【００２３】
【表１】アルコールの種類 出力電流比（％） メタノール ２０８ エタノール １００ ｎ−ポロパノール ４８ ｎ−ブタノール ２１
【００２４】このアルコールセンサの感度は、メタノー
ルがエタノールの２倍である。しかし、血中メタノール
濃度は一般的にエタノール濃度と比較して無視できるの
で、センサのメタノールに対する感度がエタノールの２
倍であるということは、血中エタノールを測定する場合
には問題ない。いずれにせよ、本発明のアルコールセン
サは血中エタノールの検出と測定に有用である。
ルがエタノールの２倍である。しかし、血中メタノール
濃度は一般的にエタノール濃度と比較して無視できるの
で、センサのメタノールに対する感度がエタノールの２
倍であるということは、血中エタノールを測定する場合
には問題ない。いずれにせよ、本発明のアルコールセン
サは血中エタノールの検出と測定に有用である。
【００２５】また、本発明のアルコールセンサの更なる
利用例として、希釈した酒（日本酒）からのエタノール
の回収試験を行った。希釈した５つの試料にエタノール
をそれぞれ０.１〜５ｍｇ／１００ｍｌの濃度で添加
し、ＡＯx層数が２０層のアルコールセンサを用いて各
々の添加後のエタノール濃度を測定し、その結果を表２
に示した。下記表２から分かるように、９５〜１０８％
の範囲の回収率は、このアルコールセンサが希釈した酒
の中のエタノールの測定に利用できるということを示し
ている。
利用例として、希釈した酒（日本酒）からのエタノール
の回収試験を行った。希釈した５つの試料にエタノール
をそれぞれ０.１〜５ｍｇ／１００ｍｌの濃度で添加
し、ＡＯx層数が２０層のアルコールセンサを用いて各
々の添加後のエタノール濃度を測定し、その結果を表２
に示した。下記表２から分かるように、９５〜１０８％
の範囲の回収率は、このアルコールセンサが希釈した酒
の中のエタノールの測定に利用できるということを示し
ている。
【００２６】
【表２】試料 添加量(mg／100ml) 測定値(mg／100ml) 回収率（％） １ ０.１０ ０.０９５ ９５ ２ ０.５０ ０.５４ １０８ ３ １.００ １.０６ １０６ ４ ２.５０ ２.６０ １０４ ５ ５.１０ ４.９２ ９８
【００２７】尚、本発明におけるアビジンとビオチンを
用いて酵素を電極に固定かする方法は、原則的にいかな
る種類の酵素にも応用できる。しかし、多重層の被覆の
最適条件は、ある程度個々の酵素の化学的及び物理的性
質に依存する。
用いて酵素を電極に固定かする方法は、原則的にいかな
る種類の酵素にも応用できる。しかし、多重層の被覆の
最適条件は、ある程度個々の酵素の化学的及び物理的性
質に依存する。
【００２８】
【発明の効果】本発明によれば、アルコール酸化酵素を
利用した簡単な構造を持ち、アルコールに対する選択性
並びに応答性に優れると共に、長期間安定して使用でき
る、実用的で信頼性の高いなアルコールセンサを提供す
ることができる。
利用した簡単な構造を持ち、アルコールに対する選択性
並びに応答性に優れると共に、長期間安定して使用でき
る、実用的で信頼性の高いなアルコールセンサを提供す
ることができる。
【図１】アビジン及びビオチン標識ＡＯxからなる多重
層膜の模式図である。
層膜の模式図である。
【図２】本発明のエタノールセンサにおけるＡＯx層数
と出力電流の関係を示すグラフである。
と出力電流の関係を示すグラフである。
【図３】本発明のエタノールセンサの一具体例における
検量線を示す。
検量線を示す。
【図４】本発明のエタノールセンサの一具体例における
安定性を示すグラフである。
安定性を示すグラフである。
１ 白金電極 ２ アビジン ３ ビオチン標識ＡＯx ３ａ ＡＯx ３ｂ ビオチン
Claims (3)
- 【請求項１】 白金電極の表面に、アビジンとビオチン
標識アルコール酸化酵素とが交互に積層された多重層膜
を設けたことを特徴とするアルコールセンサ。 - 【請求項２】 アルコール酸化酵素がアルコールオキシ
ダーゼであることを特徴とする、請求項１に記載のアル
コールセンサ。 - 【請求項３】 ビオチン標識アルコールオキシダーゼを
１５層以上有していることを特徴とする、請求項２に記
載のアルコールセンサ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8062957A JPH09257742A (ja) | 1996-03-19 | 1996-03-19 | アルコールセンサ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8062957A JPH09257742A (ja) | 1996-03-19 | 1996-03-19 | アルコールセンサ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09257742A true JPH09257742A (ja) | 1997-10-03 |
Family
ID=13215319
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8062957A Pending JPH09257742A (ja) | 1996-03-19 | 1996-03-19 | アルコールセンサ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09257742A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004057321A1 (ja) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | バイオセンサ |
| JP2007139729A (ja) * | 2005-11-23 | 2007-06-07 | Japan Science & Technology Agency | 酵素固定化バイオセンサー |
| JP2014503080A (ja) * | 2011-01-20 | 2014-02-06 | メドトロニック ミニメド インコーポレイテッド | 分析物センサと共に使用される層状酵素組成物 |
| CN105102972A (zh) * | 2013-01-11 | 2015-11-25 | 东北大学 | 唾液葡萄糖监测系统 |
-
1996
- 1996-03-19 JP JP8062957A patent/JPH09257742A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004057321A1 (ja) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | バイオセンサ |
| JP2007139729A (ja) * | 2005-11-23 | 2007-06-07 | Japan Science & Technology Agency | 酵素固定化バイオセンサー |
| JP2014503080A (ja) * | 2011-01-20 | 2014-02-06 | メドトロニック ミニメド インコーポレイテッド | 分析物センサと共に使用される層状酵素組成物 |
| CN105102972A (zh) * | 2013-01-11 | 2015-11-25 | 东北大学 | 唾液葡萄糖监测系统 |
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