JPH09224695A - アルカリプロテアーゼを用いた毛髪構成成分の採取法 - Google Patents
アルカリプロテアーゼを用いた毛髪構成成分の採取法Info
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- JPH09224695A JPH09224695A JP8058555A JP5855596A JPH09224695A JP H09224695 A JPH09224695 A JP H09224695A JP 8058555 A JP8058555 A JP 8058555A JP 5855596 A JP5855596 A JP 5855596A JP H09224695 A JPH09224695 A JP H09224695A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 毛髪のコルテックス部位を構成するマトリッ
クス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に
分解し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及
びメラニンと形状を維持したキューティクル部位あるい
は断片を効率良く採取する。 【解決手段】 毛髪に還元剤共存下、好アルカリ性のバ
チルス属細菌から産生されるアルカリプロテアーゼＢＹ
ＡをｐＨ１０以上のアルカリ性条件下で作用させ、毛髪
のコルテックス部位を構成するマトリックス及びミクロ
フィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解してコルテ
ックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位又はキューティクル断
片を採取する。
クス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に
分解し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及
びメラニンと形状を維持したキューティクル部位あるい
は断片を効率良く採取する。 【解決手段】 毛髪に還元剤共存下、好アルカリ性のバ
チルス属細菌から産生されるアルカリプロテアーゼＢＹ
ＡをｐＨ１０以上のアルカリ性条件下で作用させ、毛髪
のコルテックス部位を構成するマトリックス及びミクロ
フィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解してコルテ
ックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位又はキューティクル断
片を採取する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、毛髪のコルテック
ス部位を構成するマトリックス並びにミクロフィブリル
のケラチン蛋白種を優先的に分解し、コルテックス起源
の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形状を維持し
たキューティクル部位あるいは断片を採取する方法であ
り、得られた分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンの解
析から毛髪物性や機能の解明、損傷モデル毛髪試料の調
製並びに白髪の診断など、学問上等の有益な手法となり
得るほか、得られた分解ペプチド、アミノ酸及びメラニ
ンは、香粧品原料、洗浄剤原料並びに医薬、化学原料、
生化学試薬などとして利用できるものである。なお、本
発明において、「毛髪」は人の毛髪以外に羊毛などの哺
乳動物の毛を含む意味で用いる。
ス部位を構成するマトリックス並びにミクロフィブリル
のケラチン蛋白種を優先的に分解し、コルテックス起源
の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形状を維持し
たキューティクル部位あるいは断片を採取する方法であ
り、得られた分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンの解
析から毛髪物性や機能の解明、損傷モデル毛髪試料の調
製並びに白髪の診断など、学問上等の有益な手法となり
得るほか、得られた分解ペプチド、アミノ酸及びメラニ
ンは、香粧品原料、洗浄剤原料並びに医薬、化学原料、
生化学試薬などとして利用できるものである。なお、本
発明において、「毛髪」は人の毛髪以外に羊毛などの哺
乳動物の毛を含む意味で用いる。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】毛髪の
７０〜８０％は蛋白質からなる。毛髪中の蛋白質は、構
造や特性の異なる数種類のものが複雑に絡み合い不溶性
のケラチンを形成し、強固な繊維状態で存在している。
そのため、毛髪中の蛋白質の分解法については数多くの
提案がなされているが、完全なものはない。
７０〜８０％は蛋白質からなる。毛髪中の蛋白質は、構
造や特性の異なる数種類のものが複雑に絡み合い不溶性
のケラチンを形成し、強固な繊維状態で存在している。
そのため、毛髪中の蛋白質の分解法については数多くの
提案がなされているが、完全なものはない。
【０００３】即ち、これまでに報告されている毛髪中の
蛋白質の分解法としては、単純に毛髪をアルカリ剤で分
解する方法（Ｗｅｒｔｚ，Ｐ．Ｗ．，Ｄｏｗｎｉｎｇ，
Ｄ．Ｔ．，ＬＩＰＩＤＳ ２３，８７８−８８１（１９
８８））、テトラメチルアンモニウムヒドロオキシド
（四級アミン）及び塩酸による分解とメラニン顆粒の採
取（日本化粧品技術者会会誌、１２，３９−４５（１９
７８））が提案されているが、これら方法では、毛髪の
特定の部位のみを壊すことは不可能であり、また、酵素
法（特開昭５６−７３０９５号公報、特開昭６１−１８
３２９８号公報）も提案されているが、この方法でも特
定部位のみを分解採取することはできないものであっ
た。
蛋白質の分解法としては、単純に毛髪をアルカリ剤で分
解する方法（Ｗｅｒｔｚ，Ｐ．Ｗ．，Ｄｏｗｎｉｎｇ，
Ｄ．Ｔ．，ＬＩＰＩＤＳ ２３，８７８−８８１（１９
８８））、テトラメチルアンモニウムヒドロオキシド
（四級アミン）及び塩酸による分解とメラニン顆粒の採
取（日本化粧品技術者会会誌、１２，３９−４５（１９
７８））が提案されているが、これら方法では、毛髪の
特定の部位のみを壊すことは不可能であり、また、酵素
法（特開昭５６−７３０９５号公報、特開昭６１−１８
３２９８号公報）も提案されているが、この方法でも特
定部位のみを分解採取することはできないものであっ
た。
【０００４】毛髪のコルテックス部位又はキューティク
ル部位を構成する蛋白種の分解ペプチド、アミノ酸及び
コルテックス部位に局在するメラニン顆粒を得るには、
予めそれらの部位を分画後、処理して得る方法が第一に
考えられる。前者のコルテックス部位を得る方法は、い
くつか提案されており、毛髪や羊毛を過蟻酸や過酢酸水
溶液で処理することでＳ−Ｓ結合を酸化切断し、スルホ
ン酸基として分離する方法（Ｃｏｒｆｉｅｌｄ，Ｍ．
Ｃ．，Ｒｏｂｓｏｎ．Ａ．，Ｔｅｘ．Ｒｅｓ．Ｊ．６
８，３４８（１９５８））、尿素水溶液で解きほぐしな
がら、２−メルカプトエタノールやチオグリコール酸に
よりＳ−Ｓ結合を切断し、採取する方法（Ｍａｃｌａｒ
ｅｎ，Ｊ．Ａ． ＆ Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ，Ｄ．
Ｊ．，Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．２１，８０５
−８１３（１９６８））、チオ硫酸ナトリウムでＳ−Ｓ
結合をＳ−ＳＯ3Ｎａに変化させ抽出する方法（Ｔｈｏ
ｍａｓ，Ｈ．，Ｃｏｎｒａｄｓ，Ａ．，Ｐｈａｎ，Ｋ．
Ｈ．，Ｌｏｃｈｔ，Ｍ．，Ｚａｈｎ．Ｈ．，Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．，８，２５８−２６
４（１９８６））などがある。
ル部位を構成する蛋白種の分解ペプチド、アミノ酸及び
コルテックス部位に局在するメラニン顆粒を得るには、
予めそれらの部位を分画後、処理して得る方法が第一に
考えられる。前者のコルテックス部位を得る方法は、い
くつか提案されており、毛髪や羊毛を過蟻酸や過酢酸水
溶液で処理することでＳ−Ｓ結合を酸化切断し、スルホ
ン酸基として分離する方法（Ｃｏｒｆｉｅｌｄ，Ｍ．
Ｃ．，Ｒｏｂｓｏｎ．Ａ．，Ｔｅｘ．Ｒｅｓ．Ｊ．６
８，３４８（１９５８））、尿素水溶液で解きほぐしな
がら、２−メルカプトエタノールやチオグリコール酸に
よりＳ−Ｓ結合を切断し、採取する方法（Ｍａｃｌａｒ
ｅｎ，Ｊ．Ａ． ＆ Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ，Ｄ．
Ｊ．，Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．２１，８０５
−８１３（１９６８））、チオ硫酸ナトリウムでＳ−Ｓ
結合をＳ−ＳＯ3Ｎａに変化させ抽出する方法（Ｔｈｏ
ｍａｓ，Ｈ．，Ｃｏｎｒａｄｓ，Ａ．，Ｐｈａｎ，Ｋ．
Ｈ．，Ｌｏｃｈｔ，Ｍ．，Ｚａｈｎ．Ｈ．，Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．，８，２５８−２６
４（１９８６））などがある。
【０００５】しかし、これら方法は、抽出効率が悪かっ
たり、ありのままの姿のケラチン蛋白種が得られない等
の課題がある。なお、抽出効率については、羊毛を尿
素、還元剤、ＳＤＳなどの界面活性剤との三者混合物で
処理した報告があるが、その収率については未だ満足で
きるものではない（高分子加工、４３巻１号１４−１９
（１９９４））。
たり、ありのままの姿のケラチン蛋白種が得られない等
の課題がある。なお、抽出効率については、羊毛を尿
素、還元剤、ＳＤＳなどの界面活性剤との三者混合物で
処理した報告があるが、その収率については未だ満足で
きるものではない（高分子加工、４３巻１号１４−１９
（１９９４））。
【０００６】一方、キューティクル部位を採取する方法
についても、機械的な破壊などでキューティクル部位の
みを剥離する方法があるものの、この方法でもキューテ
ィクル部位を定量的に分取することは難しい（Ｓｗｉｆ
ｔ，Ｊ．Ａ． ＆ Ｂｅｗｓ，Ｂ．，Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏ
ｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．２５，１３−２２（１９７
４））。
についても、機械的な破壊などでキューティクル部位の
みを剥離する方法があるものの、この方法でもキューテ
ィクル部位を定量的に分取することは難しい（Ｓｗｉｆ
ｔ，Ｊ．Ａ． ＆ Ｂｅｗｓ，Ｂ．，Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏ
ｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．２５，１３−２２（１９７
４））。
【０００７】また、予め採取したキューティクル部位を
パパイン、プロナーゼ、トリプシン等のプロテアーゼで
段階的に分解する方法も報告されている（Ｓｗｉｆｔ，
Ｊ．Ａ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ．９１，
４６−４８（１９７６））が、この方法は、毛髪全体に
適用した場合、特異性の点で特定部分のみを分解、採取
することはできない。
パパイン、プロナーゼ、トリプシン等のプロテアーゼで
段階的に分解する方法も報告されている（Ｓｗｉｆｔ，
Ｊ．Ａ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ．９１，
４６−４８（１９７６））が、この方法は、毛髪全体に
適用した場合、特異性の点で特定部分のみを分解、採取
することはできない。
【０００８】このように、毛髪のコルテックス部位及び
キューティクル部位をあらかじめ採取する方法には、上
記課題のほか長時間を要するという問題もあり、効率的
ではない。
キューティクル部位をあらかじめ採取する方法には、上
記課題のほか長時間を要するという問題もあり、効率的
ではない。
【０００９】以上のように、毛髪を構成する部位を直
接、特異的に分解し、高収率かつ迅速に採取する方法は
提案されておらず、その開発が強く要望されていた。
接、特異的に分解し、高収率かつ迅速に採取する方法は
提案されておらず、その開発が強く要望されていた。
【００１０】本発明は、上記要望に応えるためになされ
たもので、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリッ
クス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に
分解し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及
びメラニンと形状を維持したキューティクル部位あるい
は断片を効率良く採取することができる毛髪構成成分の
採取法を提供することを目的とする。
たもので、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリッ
クス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に
分解し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及
びメラニンと形状を維持したキューティクル部位あるい
は断片を効率良く採取することができる毛髪構成成分の
採取法を提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた
結果、毛髪に還元剤共存下、毛髪コルテックス部位を構
成するケラチン蛋白種に特異的に作用するアルカリプロ
テアーゼである好アルカリ性のバチルス属細菌から産生
されるアルカリプロテアーゼＢＹＡをｐＨ１０以上のア
ルカリ性条件下で作用させることにより、コルテックス
部位を優先的に分解させ、マトリックス及びミクロフィ
ブリル起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位あるいは断片を効率良
く採取できることを見い出し、本発明を完成するに至っ
た。
発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた
結果、毛髪に還元剤共存下、毛髪コルテックス部位を構
成するケラチン蛋白種に特異的に作用するアルカリプロ
テアーゼである好アルカリ性のバチルス属細菌から産生
されるアルカリプロテアーゼＢＹＡをｐＨ１０以上のア
ルカリ性条件下で作用させることにより、コルテックス
部位を優先的に分解させ、マトリックス及びミクロフィ
ブリル起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位あるいは断片を効率良
く採取できることを見い出し、本発明を完成するに至っ
た。
【００１２】本発明の還元剤共存下、上記特定のアルカ
リプロテアーゼＢＹＡを高ｐＨ条件下で作用させて毛髪
のコルテックス部位を構成するマトリックス及びミクロ
フィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解し、コルテ
ックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位あるいは断片が採取で
きる理由としては、まずキューティクル部位を構成する
蛋白種とコルテックス部位を構成するマトリックス及び
ミクロフィブリルの蛋白種の組成及び結合様式の違いに
よるプロテアーゼ耐性差、また、処理ｐＨが高く毛髪が
膨潤する環境下にあるので、コルテックス部位が反応し
易くなったためと考えられる。更に、アルカリプロテア
ーゼＢＹＡが、耐アルカリ性（ｐＨ１３でも活性保
持）、耐熱性（７０℃まで安定）、酸化剤及び還元剤耐
性に優れる特徴を有し、反応中での酵素失活がないこ
と、また、アルカリプロテアーゼＢＹＡは、構造中に疎
水領域が多く、皮膚角質ケラチンなど不溶性ケラチンに
対する基質特異性が高いこと、更に、ｐＨ１０以上の条
件下で高次構造の変化からキューティクル部位のケラチ
ン蛋白種に対する作用が低下する等の特性を有し、毛髪
の膨潤も幸いし、コルテックス部位での分解反応がキュ
ーティクル部位より早いため、コルテックス起源の蛋白
種を優先的に分解するためであると考えられる。
リプロテアーゼＢＹＡを高ｐＨ条件下で作用させて毛髪
のコルテックス部位を構成するマトリックス及びミクロ
フィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解し、コルテ
ックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位あるいは断片が採取で
きる理由としては、まずキューティクル部位を構成する
蛋白種とコルテックス部位を構成するマトリックス及び
ミクロフィブリルの蛋白種の組成及び結合様式の違いに
よるプロテアーゼ耐性差、また、処理ｐＨが高く毛髪が
膨潤する環境下にあるので、コルテックス部位が反応し
易くなったためと考えられる。更に、アルカリプロテア
ーゼＢＹＡが、耐アルカリ性（ｐＨ１３でも活性保
持）、耐熱性（７０℃まで安定）、酸化剤及び還元剤耐
性に優れる特徴を有し、反応中での酵素失活がないこ
と、また、アルカリプロテアーゼＢＹＡは、構造中に疎
水領域が多く、皮膚角質ケラチンなど不溶性ケラチンに
対する基質特異性が高いこと、更に、ｐＨ１０以上の条
件下で高次構造の変化からキューティクル部位のケラチ
ン蛋白種に対する作用が低下する等の特性を有し、毛髪
の膨潤も幸いし、コルテックス部位での分解反応がキュ
ーティクル部位より早いため、コルテックス起源の蛋白
種を優先的に分解するためであると考えられる。
【００１３】従って、本発明は、毛髪に還元剤共存下、
好アルカリ性のバチルス属細菌から産生されるアルカリ
プロテアーゼＢＹＡをｐＨ１０以上のアルカリ性条件下
で作用させ、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリ
ックス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的
に分解してコルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸
及びメラニンと形状を維持したキューティクル部位又は
キューティクル断片を採取することを特徴とする毛髪構
成成分の採取法を提供する。
好アルカリ性のバチルス属細菌から産生されるアルカリ
プロテアーゼＢＹＡをｐＨ１０以上のアルカリ性条件下
で作用させ、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリ
ックス及びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的
に分解してコルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸
及びメラニンと形状を維持したキューティクル部位又は
キューティクル断片を採取することを特徴とする毛髪構
成成分の採取法を提供する。
【００１４】以下、本発明を更に詳しく説明すると、本
発明の毛髪（人の毛髪及び羊毛などの哺乳動物の毛）構
成成分の採取法は、毛髪に還元剤共存下、特定のアルカ
リプロテアーゼＢＹＡを作用させるものである。
発明の毛髪（人の毛髪及び羊毛などの哺乳動物の毛）構
成成分の採取法は、毛髪に還元剤共存下、特定のアルカ
リプロテアーゼＢＹＡを作用させるものである。
【００１５】ここで、本発明で用いられる還元剤として
は、例えばチオグリコール酸、２−メルカプトエタノー
ル、ジチオスレイトールなどが好適に使用され、これら
の還元剤は１種又は２種以上を組み合わせて用いること
ができる。
は、例えばチオグリコール酸、２−メルカプトエタノー
ル、ジチオスレイトールなどが好適に使用され、これら
の還元剤は１種又は２種以上を組み合わせて用いること
ができる。
【００１６】処理溶液中の還元剤の含有量は、０．０１
〜４０％（重量％、以下同様）、好ましくは０．０５〜
３０％、より好ましくは０．０５〜１５％の範囲であ
り、特にチオグリコール酸の場合は０．５〜１０％、特
に０．５〜３％、２−メルカプトエタノールの場合は
０．５〜１０％、特に０．５〜８％、ジチオスレイトー
ルの場合は０．０５〜１５％、特に０．２〜１５％が好
適であり、その範囲内で組み合わせて使用することが好
ましい。これら還元剤の含有量が上記範囲より少ない
と、毛髪ケラチン蛋白種のＳ−Ｓ結合の還元切断が不十
分で所期の目的を達成することが難しくなる場合があ
り、他方その含有量が上記範囲を超えると、酵素活性へ
の影響並びに分解ペプチドの精製過程での負担などが懸
念され好ましくない場合がある。
〜４０％（重量％、以下同様）、好ましくは０．０５〜
３０％、より好ましくは０．０５〜１５％の範囲であ
り、特にチオグリコール酸の場合は０．５〜１０％、特
に０．５〜３％、２−メルカプトエタノールの場合は
０．５〜１０％、特に０．５〜８％、ジチオスレイトー
ルの場合は０．０５〜１５％、特に０．２〜１５％が好
適であり、その範囲内で組み合わせて使用することが好
ましい。これら還元剤の含有量が上記範囲より少ない
と、毛髪ケラチン蛋白種のＳ−Ｓ結合の還元切断が不十
分で所期の目的を達成することが難しくなる場合があ
り、他方その含有量が上記範囲を超えると、酵素活性へ
の影響並びに分解ペプチドの精製過程での負担などが懸
念され好ましくない場合がある。
【００１７】次に、本発明で用いられるアルカリプロテ
アーゼとしては、好アルカリ性のバチルス属細菌から産
生されるアルカリプロテアーゼＢＹＡが使用されるもの
である。
アーゼとしては、好アルカリ性のバチルス属細菌から産
生されるアルカリプロテアーゼＢＹＡが使用されるもの
である。
【００１８】具体的には、特開昭６１−２８０２７８号
公報に開示されたアルカリプロテアーゼＢＹＡが好適
で、好アルカリ性のバチルス属細菌であるバチルスｓ
ｐ．Ｙ（微工研菌寄第１０２９号）、バチルスｓｐ．Ｐ
（微工研菌寄第１０３０号）、バチルスｓｐ．Ｋ（微工
研菌寄第１０３１号）、バチルスｓｐ．Ｘ（微工研菌寄
第１０３２号）から産生されるものである。
公報に開示されたアルカリプロテアーゼＢＹＡが好適
で、好アルカリ性のバチルス属細菌であるバチルスｓ
ｐ．Ｙ（微工研菌寄第１０２９号）、バチルスｓｐ．Ｐ
（微工研菌寄第１０３０号）、バチルスｓｐ．Ｋ（微工
研菌寄第１０３１号）、バチルスｓｐ．Ｘ（微工研菌寄
第１０３２号）から産生されるものである。
【００１９】上記プロテアーゼの一次構造は、Ｎ末端側
配列がＮＤＶＡＲＧＩＶＫＡＤＶＡＱＮＮＹＧＬＹＧＱ
ＧＱＬＶＡＶＡＤＴＧ−−で、活性中心Ｓｅｒ以降の配
列がＳＭＡＴＰＩＶＡＧＮＶＡＱＬＲＥＨＦＩＫ−−で
ある。
配列がＮＤＶＡＲＧＩＶＫＡＤＶＡＱＮＮＹＧＬＹＧＱ
ＧＱＬＶＡＶＡＤＴＧ−−で、活性中心Ｓｅｒ以降の配
列がＳＭＡＴＰＩＶＡＧＮＶＡＱＬＲＥＨＦＩＫ−−で
ある。
【００２０】上記アルカリプロテアーゼの処理溶液への
含有量は、カゼイン基質での活性が５０〜１００，００
０ＡＰＵ／ｍｌ、特に１００〜１０，０００ＡＰＵ／ｍ
ｌの範囲が好適である。アルカリプロテアーゼの含有量
が５０ＡＰＵ／ｍｌより少ないと、分解反応が遅く、特
異性も低下するため所期の目的を達成することが難しく
なる場合があり、他方その含有量が１００，０００ＡＰ
Ｕ／ｍｌを超えると、分解ペプチドの精製過程での負担
など経済的に好ましくなくなる場合がある。
含有量は、カゼイン基質での活性が５０〜１００，００
０ＡＰＵ／ｍｌ、特に１００〜１０，０００ＡＰＵ／ｍ
ｌの範囲が好適である。アルカリプロテアーゼの含有量
が５０ＡＰＵ／ｍｌより少ないと、分解反応が遅く、特
異性も低下するため所期の目的を達成することが難しく
なる場合があり、他方その含有量が１００，０００ＡＰ
Ｕ／ｍｌを超えると、分解ペプチドの精製過程での負担
など経済的に好ましくなくなる場合がある。
【００２１】本発明の方法でアルカリプロテアーゼを作
用させるｐＨについては、毛髪への浸透及びプロテアー
ゼの特異性を発揮させるため、また反応を効率的に進め
るためにｐＨ１０以上とすることが必要であり、好まし
くはｐＨ１０〜１３、より好ましくは１０．５〜１２．
０の範囲とする。ｐＨが１０未満では、毛髪を構成する
コルテックス部位及びキューティクル部位のケラチン蛋
白種への特異性が低下し、キューティクル部位も分解し
てしまう。また、ｐＨが１３より大きいと、酵素の失活
と強アルカリ下でのペプチド結合の切断や置換基変換、
架橋生成などを伴う場合がある。なお、処理液のｐＨ調
整には、通常用いられている０．１ＭＫＣｌ−ＮａＯＨ
などの緩衝剤が利用できる。
用させるｐＨについては、毛髪への浸透及びプロテアー
ゼの特異性を発揮させるため、また反応を効率的に進め
るためにｐＨ１０以上とすることが必要であり、好まし
くはｐＨ１０〜１３、より好ましくは１０．５〜１２．
０の範囲とする。ｐＨが１０未満では、毛髪を構成する
コルテックス部位及びキューティクル部位のケラチン蛋
白種への特異性が低下し、キューティクル部位も分解し
てしまう。また、ｐＨが１３より大きいと、酵素の失活
と強アルカリ下でのペプチド結合の切断や置換基変換、
架橋生成などを伴う場合がある。なお、処理液のｐＨ調
整には、通常用いられている０．１ＭＫＣｌ−ＮａＯＨ
などの緩衝剤が利用できる。
【００２２】しかして、本発明では、上記方法で毛髪構
成成分を採取し得るものであるが、使用する毛髪は、予
め脱脂しておいたものを５ｍｍ以下に裁断したものが好
ましく使用される。毛髪の脱脂は、クロロホルム−メタ
ノール溶媒で処理することにより行うことができるが、
その他の慣用の方法で処理してもよい。なお、脱脂及び
裁断をしない毛髪を用いた場合、処理に時間がかかるな
どの支障が生じる場合がある。
成成分を採取し得るものであるが、使用する毛髪は、予
め脱脂しておいたものを５ｍｍ以下に裁断したものが好
ましく使用される。毛髪の脱脂は、クロロホルム−メタ
ノール溶媒で処理することにより行うことができるが、
その他の慣用の方法で処理してもよい。なお、脱脂及び
裁断をしない毛髪を用いた場合、処理に時間がかかるな
どの支障が生じる場合がある。
【００２３】本発明において、毛髪の処理時間は４〜８
時間が望ましい。また、処理温度は３０〜７０℃が好ま
しく、３０℃未満の温度では反応が遅く、処理時間が長
くかかる場合があり、７０℃より高い温度でも前記同
様、酵素の失活及びペプチド結合の切断や置換基変換、
架橋などを伴い好ましくない場合がある。
時間が望ましい。また、処理温度は３０〜７０℃が好ま
しく、３０℃未満の温度では反応が遅く、処理時間が長
くかかる場合があり、７０℃より高い温度でも前記同
様、酵素の失活及びペプチド結合の切断や置換基変換、
架橋などを伴い好ましくない場合がある。
【００２４】また、本発明の採取法において、脱脂毛髪
と処理溶液の浴比については、酵素反応を行うため酵素
量、還元剤の量及び反応ｐＨに左右されるが、通常１〜
５０ｍｇ脱脂毛髪／ｍｌ処理溶液の範囲が好ましい。
と処理溶液の浴比については、酵素反応を行うため酵素
量、還元剤の量及び反応ｐＨに左右されるが、通常１〜
５０ｍｇ脱脂毛髪／ｍｌ処理溶液の範囲が好ましい。
【００２５】更に、本発明で分解採取するコルテックス
起源の分解ペプチドは、反応処理に任意の分子ふるいを
セットした限外濾過器を取り付けて行うことにより、任
意の分子量分布のものを分取することができ、更には酵
素や還元剤を除去した分解ペプチドとしても得ることが
できる。
起源の分解ペプチドは、反応処理に任意の分子ふるいを
セットした限外濾過器を取り付けて行うことにより、任
意の分子量分布のものを分取することができ、更には酵
素や還元剤を除去した分解ペプチドとしても得ることが
できる。
【００２６】なお、採取された分解ペプチド溶液は、利
用目的に応じて、そのまま用いるか、アルキル化、イオ
ン化などの修飾や慣用される添加剤、例えば粉体、油
分、界面活性剤、溶剤、殺菌剤、包接化合物、ビタミン
類、抗炎症剤、冷温感付与剤、紫外線吸収剤、酸化剤、
還元剤、酸化防止剤、生薬、香料、液化噴射剤などを添
加して利用することができる。更に、慣用の加工処理、
例えば乾燥処理などを行い、粉体化して利用することも
できる。
用目的に応じて、そのまま用いるか、アルキル化、イオ
ン化などの修飾や慣用される添加剤、例えば粉体、油
分、界面活性剤、溶剤、殺菌剤、包接化合物、ビタミン
類、抗炎症剤、冷温感付与剤、紫外線吸収剤、酸化剤、
還元剤、酸化防止剤、生薬、香料、液化噴射剤などを添
加して利用することができる。更に、慣用の加工処理、
例えば乾燥処理などを行い、粉体化して利用することも
できる。
【００２７】本発明の分解溶液からメラニンを採取する
には、塩酸酸性にして沈殿させ、通常の方法、例えば遠
心分離で得ることができる。
には、塩酸酸性にして沈殿させ、通常の方法、例えば遠
心分離で得ることができる。
【００２８】
【発明の効果】本発明の毛髪構成成分の採取法によれ
ば、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリックス及
びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解
し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメ
ラニンと形状を維持したキューティクル部位あるいは断
片を効率良く採取することができる。
ば、毛髪のコルテックス部位を構成するマトリックス及
びミクロフィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解
し、コルテックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメ
ラニンと形状を維持したキューティクル部位あるいは断
片を効率良く採取することができる。
【００２９】更に、本発明の方法は、傷んだ毛髪にも広
く適用することが可能であり、ヒト毛髪と構造及び成分
が類似している羊毛など哺乳動物の毛の処理にも利用す
ることができる。
く適用することが可能であり、ヒト毛髪と構造及び成分
が類似している羊毛など哺乳動物の毛の処理にも利用す
ることができる。
【００３０】また、本発明の方法で処理して得られたケ
ラチン蛋白種の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニン
は、毛髪構成成分の分析やそれに基づいた物性、機能及
び代謝系の解明など、学問上等の有益な材料となり得る
ほか、得られたケラチン蛋白種の分解ペプチド、アミノ
酸及びメラニンは、香粧品原料、洗浄剤原料並びに医
薬、化学品原料、生化学試薬等として利用できる。
ラチン蛋白種の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニン
は、毛髪構成成分の分析やそれに基づいた物性、機能及
び代謝系の解明など、学問上等の有益な材料となり得る
ほか、得られたケラチン蛋白種の分解ペプチド、アミノ
酸及びメラニンは、香粧品原料、洗浄剤原料並びに医
薬、化学品原料、生化学試薬等として利用できる。
【００３１】
【実施例】以下、実験例及び実施例を挙げて本発明を具
体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限される
ものではない。なお、下記の例で用いたアルカリプロテ
アーゼＢＹＡは、バチルスｓｐ．Ｙから産生されたもの
を用いた。
体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限される
ものではない。なお、下記の例で用いたアルカリプロテ
アーゼＢＹＡは、バチルスｓｐ．Ｙから産生されたもの
を用いた。
【００３２】〔実験例１〕毛髪が不溶性ケラチン蛋白で
構成されていること、また処理ｐＨがアルカリ側で行う
ことを前提に好アルカリ性細菌が産生する代表的なアル
カリプロテアーゼの基質特異性を下記方法で調べ、スク
リーニングした。結果を表１に示す。
構成されていること、また処理ｐＨがアルカリ側で行う
ことを前提に好アルカリ性細菌が産生する代表的なアル
カリプロテアーゼの基質特異性を下記方法で調べ、スク
リーニングした。結果を表１に示す。
【００３３】基質特異性の評価方法：表１に示すように
アルカリプロテアーゼＢＹＡの各基質に対する特異性を
ズブチリシンカルスベルグタイプのアルカリプロテアー
ゼとの対比で示した。各基質に対する分解力指数（力
価）は、プロテアーゼ蛋白の１ｍｇ当たりの分解量を萩
原変法に準じて測定し、ズブチリシンカルスベルグタイ
プのアルカリプロテアーゼを１００として換算した。
アルカリプロテアーゼＢＹＡの各基質に対する特異性を
ズブチリシンカルスベルグタイプのアルカリプロテアー
ゼとの対比で示した。各基質に対する分解力指数（力
価）は、プロテアーゼ蛋白の１ｍｇ当たりの分解量を萩
原変法に準じて測定し、ズブチリシンカルスベルグタイ
プのアルカリプロテアーゼを１００として換算した。
【００３４】
【表１】
【００３５】表１の結果より、アルカリプロテアーゼＢ
ＹＡは、ズブチリシンカルスベルグタイプのアルカリプ
ロテアーゼに比べ、相対的に比活性が高く、特に不溶性
でシスチン含量の多い獣毛ケラチンに対する分解力が強
いプロテアーゼであることがわかった。
ＹＡは、ズブチリシンカルスベルグタイプのアルカリプ
ロテアーゼに比べ、相対的に比活性が高く、特に不溶性
でシスチン含量の多い獣毛ケラチンに対する分解力が強
いプロテアーゼであることがわかった。
【００３６】〔実験例２〕キューティクル部位を構成す
る蛋白種とコルテックス部位を構成するマトリックス並
びにミクロフィブリル蛋白種に対するアルカリプロテア
ーゼＢＹＡの特異性を羊毛モスリン布を用いて下記方法
で調べた。結果を表２に示す。
る蛋白種とコルテックス部位を構成するマトリックス並
びにミクロフィブリル蛋白種に対するアルカリプロテア
ーゼＢＹＡの特異性を羊毛モスリン布を用いて下記方法
で調べた。結果を表２に示す。
【００３７】評価方法：１０ｍｌのプラスチック試験管
に羊毛モスリン布（染色試剤（株）谷頭商品）を約８０
ｍｇ入れ、ｐＨ９から１３の各所定ｐＨに調整した５０
ｍＭ緩衝液を８ｍｌ加え、更に、アルカリプロテアーゼ
ＢＹＡをカゼイン基質での力価で８００ＡＰＵになるよ
うに添加し、３７℃で１６時間インキュベートした。処
理後、水洗し、乾燥後の重量減少を求め、緩衝液のみで
行ったものとの差し引きで示した。なお、緩衝液はｐＨ
９〜１１については四硼酸系を使用し、ｐＨ９は塩酸
で、ｐＨ１０〜１１は水酸化ナトリウムで調整した。ま
た、ｐＨ１２〜１３はリン酸二ナトリウム−水酸化ナト
リウムで調整し使用した。
に羊毛モスリン布（染色試剤（株）谷頭商品）を約８０
ｍｇ入れ、ｐＨ９から１３の各所定ｐＨに調整した５０
ｍＭ緩衝液を８ｍｌ加え、更に、アルカリプロテアーゼ
ＢＹＡをカゼイン基質での力価で８００ＡＰＵになるよ
うに添加し、３７℃で１６時間インキュベートした。処
理後、水洗し、乾燥後の重量減少を求め、緩衝液のみで
行ったものとの差し引きで示した。なお、緩衝液はｐＨ
９〜１１については四硼酸系を使用し、ｐＨ９は塩酸
で、ｐＨ１０〜１１は水酸化ナトリウムで調整した。ま
た、ｐＨ１２〜１３はリン酸二ナトリウム−水酸化ナト
リウムで調整し使用した。
【００３８】
【表２】
【００３９】表２の結果より、羊毛モスリン布を用いて
のアルカリプロテアーゼＢＹＡの特異性を評価した結
果、ｐＨ１０以上では酵素活性が残存しているにもかか
わらず、羊毛モスリン布の分解力が急激に低下すること
が確認され、基質特異性が変わることがわかった。
のアルカリプロテアーゼＢＹＡの特異性を評価した結
果、ｐＨ１０以上では酵素活性が残存しているにもかか
わらず、羊毛モスリン布の分解力が急激に低下すること
が確認され、基質特異性が変わることがわかった。
【００４０】上記ｐＨでの高次構造特異性の変化は、Ｃ
Ｄスペクトルでも確認された。更に、走査型電子顕微鏡
（日立製Ｓ−５２０型）で観察したところ、ｐＨ１０未
満ではキューティクル部位の破壊がみられたが、それ以
上では破壊が観察されず、コントロールの緩衝剤溶液で
処理したものとほとんど差がなかった。
Ｄスペクトルでも確認された。更に、走査型電子顕微鏡
（日立製Ｓ−５２０型）で観察したところ、ｐＨ１０未
満ではキューティクル部位の破壊がみられたが、それ以
上では破壊が観察されず、コントロールの緩衝剤溶液で
処理したものとほとんど差がなかった。
【００４１】〔実験例３〕還元剤共存下でのアルカリプ
ロテアーゼＢＹＡによる毛髪コルテックス部位の蛋白種
の特異的分解性を確認するため、走査型電子顕微鏡（日
立製Ｓ−５２０型）で観察評価した。毛髪は３０才男性
のノーマル毛髪を用い、クロロホルム−メタノール溶媒
で１６時間脱脂処理後、５ｍｍ以下に裁断したものを使
用した。処理条件はスクリュー管（１３ｍ／ｍ×４０ｍ
／ｍ）に毛髪２．５ｍｇを入れ、ｐＨ９から１３の各所
定ｐＨに調整した５０ｍＭ緩衝液を２５０μｌ加え、更
に最終濃度が１％になるようにチオグリコール酸を加
え、またアルカリプロテアーゼＢＹＡを最終量で５００
ＡＰＵ（カゼイン基質での活性）を加え、３４℃で４時
間まで処理し、走査型電子顕微鏡で破壊部位を経時的に
観察した。結果を表３に示す。
ロテアーゼＢＹＡによる毛髪コルテックス部位の蛋白種
の特異的分解性を確認するため、走査型電子顕微鏡（日
立製Ｓ−５２０型）で観察評価した。毛髪は３０才男性
のノーマル毛髪を用い、クロロホルム−メタノール溶媒
で１６時間脱脂処理後、５ｍｍ以下に裁断したものを使
用した。処理条件はスクリュー管（１３ｍ／ｍ×４０ｍ
／ｍ）に毛髪２．５ｍｇを入れ、ｐＨ９から１３の各所
定ｐＨに調整した５０ｍＭ緩衝液を２５０μｌ加え、更
に最終濃度が１％になるようにチオグリコール酸を加
え、またアルカリプロテアーゼＢＹＡを最終量で５００
ＡＰＵ（カゼイン基質での活性）を加え、３４℃で４時
間まで処理し、走査型電子顕微鏡で破壊部位を経時的に
観察した。結果を表３に示す。
【００４２】
【表３】
【００４３】表３の結果より、アルカリプロテアーゼＢ
ＹＡは、還元剤共存下、ｐＨ１０以上でコルテックス部
位を構成する蛋白種を特異的に分解することが確認され
た。
ＹＡは、還元剤共存下、ｐＨ１０以上でコルテックス部
位を構成する蛋白種を特異的に分解することが確認され
た。
【００４４】〔実験例４〕３０才男性のノーマル毛髪を
あらかじめクロロホルム−メタノール溶媒で１６時間脱
脂処理後、５ｍｍ以下に裁断した毛髪１０ｍｇをスクリ
ュー管（１３ｍ／ｍ×４０ｍ／ｍ）に入れ、続いてｐＨ
１２に調整した１００ｍＭ ＫＣｌ−ＮａＯＨ緩衝液１
ｍｌを加え、更に最終濃度が所定濃度になるように還元
剤を加えた後、アルカリプロテアーゼＢＹＡを最終量で
１，０００ＡＰＵ（カゼイン基質での活性）加え、３４
℃で６時間処理し、コルテックス蛋白の分解量から還元
剤の最適含有量を調べた。コルテックス蛋白の分解量に
ついては、コルテックス中のメラニンに起因するＯＤ４
００ｎｍの濁度で相対的に評価し、酵素抜きのものの溶
出量を差し引いた値を示した。結果を表４に示す。
あらかじめクロロホルム−メタノール溶媒で１６時間脱
脂処理後、５ｍｍ以下に裁断した毛髪１０ｍｇをスクリ
ュー管（１３ｍ／ｍ×４０ｍ／ｍ）に入れ、続いてｐＨ
１２に調整した１００ｍＭ ＫＣｌ−ＮａＯＨ緩衝液１
ｍｌを加え、更に最終濃度が所定濃度になるように還元
剤を加えた後、アルカリプロテアーゼＢＹＡを最終量で
１，０００ＡＰＵ（カゼイン基質での活性）加え、３４
℃で６時間処理し、コルテックス蛋白の分解量から還元
剤の最適含有量を調べた。コルテックス蛋白の分解量に
ついては、コルテックス中のメラニンに起因するＯＤ４
００ｎｍの濁度で相対的に評価し、酵素抜きのものの溶
出量を差し引いた値を示した。結果を表４に示す。
【００４５】
【表４】
【００４６】表４の結果より、コルテックス蛋白種を酵
素で分解する際の還元剤の最適含有量は、チオグリコー
ル酸と２−メルカプトエタノールの場合、溶液中に０．
５〜１０重量％、ジチオスレイトールの場合、０．０５
〜１５重量％であることがわかった。
素で分解する際の還元剤の最適含有量は、チオグリコー
ル酸と２−メルカプトエタノールの場合、溶液中に０．
５〜１０重量％、ジチオスレイトールの場合、０．０５
〜１５重量％であることがわかった。
【００４７】〔実験例５〕アルカリプロテアーゼＢＹＡ
の処理溶液中の最適含有量を調べるため、還元剤をチオ
グリコール酸１％と一定にし、２４才女性のノーマル脱
脂裁断毛髪を用い、上記実施例４記載の条件に準じて処
理を行い、プロテアーゼを所定濃度添加したものの処理
後のＯＤ４００の濁度上昇を測定した。結果を表５に示
す。
の処理溶液中の最適含有量を調べるため、還元剤をチオ
グリコール酸１％と一定にし、２４才女性のノーマル脱
脂裁断毛髪を用い、上記実施例４記載の条件に準じて処
理を行い、プロテアーゼを所定濃度添加したものの処理
後のＯＤ４００の濁度上昇を測定した。結果を表５に示
す。
【００４８】表５に示した結果から、プロテアーゼの含
有量は、カゼイン基質での活性が５０〜１００，０００
ＡＰＵ／ｍｌ処理液であることがわかった。
有量は、カゼイン基質での活性が５０〜１００，０００
ＡＰＵ／ｍｌ処理液であることがわかった。
【００４９】
【表５】
【００５０】〔実施例１〕脱脂、裁断したノーマル毛髪
からコルテックスを構成する蛋白種の分解ペプチド、ア
ミノ酸及びメラニンと形状を維持したキューティクル部
位、断片を下記方法で採取した。
からコルテックスを構成する蛋白種の分解ペプチド、ア
ミノ酸及びメラニンと形状を維持したキューティクル部
位、断片を下記方法で採取した。
【００５１】採取方法：２０ｍｌのスクリュー管に毛髪
を２００ｍｇ入れ、ｐＨ１２に調整した５０ｍＭ塩化カ
リウム−水酸化ナトリウム緩衝液を１０ｍｌ加え、次
に、チオグリコール酸を最終濃度１％になるように加
え、更にアルカリプロテアーゼＢＹＡをカゼイン基質で
の力価で１０，０００ＡＰＵになるように添加し、４０
℃で２時間インキュベートした。処理後、８，０００回
転、１５分遠心分離を行い、コルテックス部位由来の分
解ペプチド及びアミノ酸を含む溶液と残渣を得た。上清
溶液はアミコン社のダイヤフローメンブレンＹＣ０５
（分子量５００）で洗浄、濃縮を行い、凍結乾燥後、８
５ｍｇ得た。
を２００ｍｇ入れ、ｐＨ１２に調整した５０ｍＭ塩化カ
リウム−水酸化ナトリウム緩衝液を１０ｍｌ加え、次
に、チオグリコール酸を最終濃度１％になるように加
え、更にアルカリプロテアーゼＢＹＡをカゼイン基質で
の力価で１０，０００ＡＰＵになるように添加し、４０
℃で２時間インキュベートした。処理後、８，０００回
転、１５分遠心分離を行い、コルテックス部位由来の分
解ペプチド及びアミノ酸を含む溶液と残渣を得た。上清
溶液はアミコン社のダイヤフローメンブレンＹＣ０５
（分子量５００）で洗浄、濃縮を行い、凍結乾燥後、８
５ｍｇ得た。
【００５２】一方、残渣は、ｐＨ８．３の２５ｍＭトリ
ス−１９２ｍＭグリシン緩衝液１０ｍｌに懸濁して静置
後、デカンテーションでメラニンを含む懸濁液と毛髪形
状を維持したキューティクル部位及び断片に分けた。メ
ラニンを含む懸濁液は、塩酸でｐＨ２以下にして沈殿さ
せ、１．２ｍｇ採取した。毛髪形状を維持したキューテ
ィクル部位及び断片については、水洗後、凍結乾燥を行
い、３２ｍｇ採取した。
ス−１９２ｍＭグリシン緩衝液１０ｍｌに懸濁して静置
後、デカンテーションでメラニンを含む懸濁液と毛髪形
状を維持したキューティクル部位及び断片に分けた。メ
ラニンを含む懸濁液は、塩酸でｐＨ２以下にして沈殿さ
せ、１．２ｍｇ採取した。毛髪形状を維持したキューテ
ィクル部位及び断片については、水洗後、凍結乾燥を行
い、３２ｍｇ採取した。
【００５３】得られたコルテックス部位由来の分解ペプ
チドと残渣のキューティクル部位及び断片のアミノ酸組
成を測定したところ、表６に示すように、システインの
分解がみられるものの、その他のアミノ酸は既知情報と
よく類似した値を示した。
チドと残渣のキューティクル部位及び断片のアミノ酸組
成を測定したところ、表６に示すように、システインの
分解がみられるものの、その他のアミノ酸は既知情報と
よく類似した値を示した。
【００５４】
【表６】
【００５５】〔実施例２〜４〕白髪発生度評価への利用
の可能性を判断するため、水浸ストレス負荷法で白毛を
意図的に作製したマウス毛を用いて、官能評価法と本発
明の分解法でのメラニン量測定との関連性を評価した。
の可能性を判断するため、水浸ストレス負荷法で白毛を
意図的に作製したマウス毛を用いて、官能評価法と本発
明の分解法でのメラニン量測定との関連性を評価した。
【００５６】官能評価は４名で行い、白毛発生の１ポイ
ントは約２％の白毛発生率に対応する。また、酵素分解
法による方法は、マウス毛５０ｍｇをｐＨ１２に調整し
た５０ｍＭ塩化カリウム−水酸化ナトリウム緩衝液５ｍ
ｌに加え、次にチオグリコール酸を最終濃度で１％にな
るように加え、更にアルカリプロテアーゼＢＹＡをカゼ
イン基質での力価で５，０００ＡＰＵになるように添加
し、４０℃で４時間インキュベートした。処理後、吸光
光度計でＯＤ４００の濁度を測定した。結果を表７に示
す。
ントは約２％の白毛発生率に対応する。また、酵素分解
法による方法は、マウス毛５０ｍｇをｐＨ１２に調整し
た５０ｍＭ塩化カリウム−水酸化ナトリウム緩衝液５ｍ
ｌに加え、次にチオグリコール酸を最終濃度で１％にな
るように加え、更にアルカリプロテアーゼＢＹＡをカゼ
イン基質での力価で５，０００ＡＰＵになるように添加
し、４０℃で４時間インキュベートした。処理後、吸光
光度計でＯＤ４００の濁度を測定した。結果を表７に示
す。
【００５７】表７の結果より、酵素法でコルテックス部
位の蛋白種を分解し、メラニン顆粒が遊離した懸濁液を
直接吸光度で測定した値は、官能評価の評点とよく一致
しており、白髪発生頻度の評価系に利用できることがわ
かった。
位の蛋白種を分解し、メラニン顆粒が遊離した懸濁液を
直接吸光度で測定した値は、官能評価の評点とよく一致
しており、白髪発生頻度の評価系に利用できることがわ
かった。
【００５８】
【表７】
【手続補正書】
【提出日】平成８年４月１８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (2)
- 【請求項１】 毛髪に還元剤共存下、好アルカリ性のバ
チルス属細菌から産生されるアルカリプロテアーゼＢＹ
ＡをｐＨ１０以上のアルカリ性条件下で作用させ、毛髪
のコルテックス部位を構成するマトリックス及びミクロ
フィブリルのケラチン蛋白種を優先的に分解してコルテ
ックス起源の分解ペプチド、アミノ酸及びメラニンと形
状を維持したキューティクル部位又はキューティクル断
片を採取することを特徴とする毛髪構成成分の採取法。 - 【請求項２】 還元剤がチオグリコール酸、２−メルカ
プトエタノール及びジチオスレイトールから選ばれる１
種又は２種以上であり、また、好アルカリ性のバチルス
属細菌から産生されるプロテアーゼＢＹＡがバチルスｓ
ｐ．Ｙ（微工研菌寄第１０２９号）、バチルスｓｐ．Ｐ
（微工研菌寄第１０３０号）、バチルスｓｐ．Ｋ（微工
研菌寄第１０３１号）又はバチルスｓｐ．Ｘ（微工研菌
寄第１０３２号）から産生されるアルカリプロテアーゼ
ＢＹＡである請求項１記載の毛髪構成成分の採取法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8058555A JPH09224695A (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | アルカリプロテアーゼを用いた毛髪構成成分の採取法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8058555A JPH09224695A (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | アルカリプロテアーゼを用いた毛髪構成成分の採取法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09224695A true JPH09224695A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=13087711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8058555A Pending JPH09224695A (ja) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | アルカリプロテアーゼを用いた毛髪構成成分の採取法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09224695A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014013082A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method for the degradation of keratin and use of the keratin hydrolysate produced |
-
1996
- 1996-02-21 JP JP8058555A patent/JPH09224695A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014013082A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method for the degradation of keratin and use of the keratin hydrolysate produced |
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