JPH09107955A - 動物細胞培養用培地 - Google Patents
動物細胞培養用培地Info
- Publication number
- JPH09107955A JPH09107955A JP7275690A JP27569095A JPH09107955A JP H09107955 A JPH09107955 A JP H09107955A JP 7275690 A JP7275690 A JP 7275690A JP 27569095 A JP27569095 A JP 27569095A JP H09107955 A JPH09107955 A JP H09107955A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- cells
- cell
- sugar chain
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Abstract
(57)【要約】
【課題】 動物細胞培養において生ずる培養細胞の生理
的な機能低下を抑制する。 【解決手段】 動物細胞培養において生ずる培養細胞の
生理的な機能低下を抑制する、糖鎖合成阻害剤を含有す
る動物細胞培養用培地を提供する。 【効果】 生体内の細胞はそれぞれの分化の段階に応じ
て生理的な機能的役割を異にしている。動物細胞培養に
おいて、該細胞が担った生理的な機能を保持したまま培
養できることが望ましいが、通常培養を続けるに従いし
ばしば生理的な機能の低下が認められる。本願発明の糖
鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養用培地を用いるこ
とにより、細胞の有する生理的な機能の低下を抑制する
ことのできる培養を行うことができる。
的な機能低下を抑制する。 【解決手段】 動物細胞培養において生ずる培養細胞の
生理的な機能低下を抑制する、糖鎖合成阻害剤を含有す
る動物細胞培養用培地を提供する。 【効果】 生体内の細胞はそれぞれの分化の段階に応じ
て生理的な機能的役割を異にしている。動物細胞培養に
おいて、該細胞が担った生理的な機能を保持したまま培
養できることが望ましいが、通常培養を続けるに従いし
ばしば生理的な機能の低下が認められる。本願発明の糖
鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養用培地を用いるこ
とにより、細胞の有する生理的な機能の低下を抑制する
ことのできる培養を行うことができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】生体内の細胞はそれぞれの分
化の段階に応じて生理的な機能に関する役割を異にして
いる。動物細胞培養においては、それぞれの細胞が担っ
た生理的な機能を保持したまま培養できることが望まし
いが、通常培養を続けるに従いしばしば生理的な機能低
下が認められる。本願発明の培地を用いることにより、
動物細胞の有する生理的な機能の低下を抑制して動物細
胞を培養することができる。該培養を行うことができる
ことにより、本願発明は、該細胞の有する生理的な機能
の解明、その生理的な機能の障害に起因した各種疾患の
治療、該細胞の分泌する有用物質の医薬品としての利
用、該細胞を支持細胞として共培養した血球細胞を用い
た養子免疫療法または遺伝子治療法等に有用である。
化の段階に応じて生理的な機能に関する役割を異にして
いる。動物細胞培養においては、それぞれの細胞が担っ
た生理的な機能を保持したまま培養できることが望まし
いが、通常培養を続けるに従いしばしば生理的な機能低
下が認められる。本願発明の培地を用いることにより、
動物細胞の有する生理的な機能の低下を抑制して動物細
胞を培養することができる。該培養を行うことができる
ことにより、本願発明は、該細胞の有する生理的な機能
の解明、その生理的な機能の障害に起因した各種疾患の
治療、該細胞の分泌する有用物質の医薬品としての利
用、該細胞を支持細胞として共培養した血球細胞を用い
た養子免疫療法または遺伝子治療法等に有用である。
【０００２】
【従来の技術】動物細胞の培養法としては、高密度維持
培養法、無血清大量培養法、マイクロキャリア培養法、
神経細胞培養法、気管上皮細胞培養法、肝細胞培養法、
腎細胞培養法、膵ランゲルハンス島培養法、乳腺上皮細
胞培養法、血管内皮細胞培養法、筋肉細胞培養法、軟骨
細胞培養法、骨髄細胞培養法等が知られている〔朝倉邦
造、組織培養の技術（第二版）、朝倉書店（１９８
８）〕。
培養法、無血清大量培養法、マイクロキャリア培養法、
神経細胞培養法、気管上皮細胞培養法、肝細胞培養法、
腎細胞培養法、膵ランゲルハンス島培養法、乳腺上皮細
胞培養法、血管内皮細胞培養法、筋肉細胞培養法、軟骨
細胞培養法、骨髄細胞培養法等が知られている〔朝倉邦
造、組織培養の技術（第二版）、朝倉書店（１９８
８）〕。
【０００３】これらの培養法を用いた動物細胞培養にお
いては、それぞれの細胞が担った生理的な機能を保持し
たまま培養できることが望ましいが、通常長期継代培養
を行うと、細胞の生理的な機能低下が認められることが
多い。特に、生体組織から採取した細胞においては、初
代細胞はよく増殖するが、継代とともに次第に生理的な
機能低下が認められ、やがて増殖を停止して死滅する。
例えば、造血幹細胞においては、Dexterらの開発した長
期骨髄細胞培養法〔J. Cell. Physiol., 91, 335(197
7)〕に準じて培養が行われるが、造血幹細胞を維持する
には限界が認められ、維持期間を延ばすために、さい帯
血中（umbilical cord blood）に含まれる間質細胞〔Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA., 91, 12140(1994) 〕、bFG
F(basic Fibloblast Growth Factor)で刺激した骨髄間
質細胞〔Blood, 177, 954(1991)〕、マウス骨髄ストロ
ーマ細胞株MS-5〔マウス骨髄ストローマ細胞株を用いた
さい帯血幹細胞の長期培養，日本免疫学会学術集会記
録，24(H-06), 283(1994)〕あるいはマウス頭蓋冠間質
細胞株MC3T3-G2/PA6〔J. Cell. Physiol., 118, 89(198
4)〕等を支持細胞（フィーダー細胞）とした、共培養が
行われている。しかし、この共培養においても、約３ヵ
月間造血幹細胞を維持するのが限界である。その原因の
一つとして、支持細胞自身の生理的な機能の低下があげ
られている〔J. Exp. Med., 176, 351(1992）〕。
いては、それぞれの細胞が担った生理的な機能を保持し
たまま培養できることが望ましいが、通常長期継代培養
を行うと、細胞の生理的な機能低下が認められることが
多い。特に、生体組織から採取した細胞においては、初
代細胞はよく増殖するが、継代とともに次第に生理的な
機能低下が認められ、やがて増殖を停止して死滅する。
例えば、造血幹細胞においては、Dexterらの開発した長
期骨髄細胞培養法〔J. Cell. Physiol., 91, 335(197
7)〕に準じて培養が行われるが、造血幹細胞を維持する
には限界が認められ、維持期間を延ばすために、さい帯
血中（umbilical cord blood）に含まれる間質細胞〔Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA., 91, 12140(1994) 〕、bFG
F(basic Fibloblast Growth Factor)で刺激した骨髄間
質細胞〔Blood, 177, 954(1991)〕、マウス骨髄ストロ
ーマ細胞株MS-5〔マウス骨髄ストローマ細胞株を用いた
さい帯血幹細胞の長期培養，日本免疫学会学術集会記
録，24(H-06), 283(1994)〕あるいはマウス頭蓋冠間質
細胞株MC3T3-G2/PA6〔J. Cell. Physiol., 118, 89(198
4)〕等を支持細胞（フィーダー細胞）とした、共培養が
行われている。しかし、この共培養においても、約３ヵ
月間造血幹細胞を維持するのが限界である。その原因の
一つとして、支持細胞自身の生理的な機能の低下があげ
られている〔J. Exp. Med., 176, 351(1992）〕。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、動物
細胞培養において生ずる培養細胞の生理的な機能低下を
抑制する培地を提供することにある。
細胞培養において生ずる培養細胞の生理的な機能低下を
抑制する培地を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、動物細胞培養
において生ずる培養細胞の生理的な機能低下を抑制する
培地として、糖鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養用
培地を提供する。
において生ずる培養細胞の生理的な機能低下を抑制する
培地として、糖鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養用
培地を提供する。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明において用いられる細胞は、動物細胞であればい
ずれも用いることができるが、好ましくは支持細胞をあ
げることができる。支持細胞とは、単独では極めて生存
・増殖しにくい細胞と共培養することにより、該細胞に
栄養分や特殊な成長因子等を補給したり、該細胞にとっ
て有毒な代謝成分の蓄積物を解毒する等の機能を有する
細胞のことを言う。支持細胞の具体例として、さい帯血
中に含まれる間質細胞、bFGFで刺激した骨髄間質細胞、
マウス骨髄ストローマ細胞株MS-5、マウス頭蓋冠間質細
胞株MC3T3-G2/PA6をあげることができる。
本発明において用いられる細胞は、動物細胞であればい
ずれも用いることができるが、好ましくは支持細胞をあ
げることができる。支持細胞とは、単独では極めて生存
・増殖しにくい細胞と共培養することにより、該細胞に
栄養分や特殊な成長因子等を補給したり、該細胞にとっ
て有毒な代謝成分の蓄積物を解毒する等の機能を有する
細胞のことを言う。支持細胞の具体例として、さい帯血
中に含まれる間質細胞、bFGFで刺激した骨髄間質細胞、
マウス骨髄ストローマ細胞株MS-5、マウス頭蓋冠間質細
胞株MC3T3-G2/PA6をあげることができる。
【０００７】本発明の動物細胞培養用培地は、動物細胞
培養に用いられる培地を基礎培地として、これに糖鎖合
成阻害剤を添加し、調製することができる。基礎培地と
しては、Eagle MEM培地〔Science, 130, 432(1959)〕、
Alpha MEM培地〔Nature New Biology, 230, 52(197
1)〕、Dulbecco MEM培地〔Virology, 8, 396(1959)〕、
ハム培地〔Cell Res., 29, 515(1963)〕、RPMI 1640培
地〔J. A. M. A., 199, 519(1967)〕、Fischer's培地
〔Methods in Med. Res., 10(1964)〕、McCoy's培地〔
Proc. Soc. Exper. Biol.Med., 100, 115(1959)〕、ウ
イリアムスE培地〔Exp. Cell Res., 69, 106(1971)〕お
よびこれらの混合培地など、動物細胞培養に用いること
のできる培地であればいずれも用いることができる。更
に、これらの基礎培地に、血清または血清代替物として
の各種増殖因子を添加した培地、あるいは無蛋白培地で
あっても動物細胞を増殖させうるものであればいずれも
用いることができる。
培養に用いられる培地を基礎培地として、これに糖鎖合
成阻害剤を添加し、調製することができる。基礎培地と
しては、Eagle MEM培地〔Science, 130, 432(1959)〕、
Alpha MEM培地〔Nature New Biology, 230, 52(197
1)〕、Dulbecco MEM培地〔Virology, 8, 396(1959)〕、
ハム培地〔Cell Res., 29, 515(1963)〕、RPMI 1640培
地〔J. A. M. A., 199, 519(1967)〕、Fischer's培地
〔Methods in Med. Res., 10(1964)〕、McCoy's培地〔
Proc. Soc. Exper. Biol.Med., 100, 115(1959)〕、ウ
イリアムスE培地〔Exp. Cell Res., 69, 106(1971)〕お
よびこれらの混合培地など、動物細胞培養に用いること
のできる培地であればいずれも用いることができる。更
に、これらの基礎培地に、血清または血清代替物として
の各種増殖因子を添加した培地、あるいは無蛋白培地で
あっても動物細胞を増殖させうるものであればいずれも
用いることができる。
【０００８】本発明の動物細胞培養用培地に添加する糖
鎖合成阻害剤としては、動物細胞の糖鎖の合成を阻害す
る薬剤であればいずれも用いることができるが、好まし
くは、フラノース環またはピラノース環を有する糖鎖合
成阻害剤を挙げることができる。具体的には、ベンジル
２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクト
ピラノシド（Benzyl 2-Acetamide-2-Deoxy-α-D-Galact
opyranoside）、ｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロ
ピラノシド（p-Nitrophenyl β-D-Xylopyranoside）を
挙げることができる。糖鎖合成阻害剤の基礎培地への添
加量は０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜２ｍＭ
である。糖鎖合成阻害剤は一種類だけ培地に添加しても
よいが、上記濃度の範囲内で二種類以上を組み合わせて
添加してもよい。
鎖合成阻害剤としては、動物細胞の糖鎖の合成を阻害す
る薬剤であればいずれも用いることができるが、好まし
くは、フラノース環またはピラノース環を有する糖鎖合
成阻害剤を挙げることができる。具体的には、ベンジル
２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクト
ピラノシド（Benzyl 2-Acetamide-2-Deoxy-α-D-Galact
opyranoside）、ｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロ
ピラノシド（p-Nitrophenyl β-D-Xylopyranoside）を
挙げることができる。糖鎖合成阻害剤の基礎培地への添
加量は０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜２ｍＭ
である。糖鎖合成阻害剤は一種類だけ培地に添加しても
よいが、上記濃度の範囲内で二種類以上を組み合わせて
添加してもよい。
【０００９】本発明の培養法としては、用いる動物細胞
に適した培養法であればいずれも用いることができ、高
密度維持培養法、無血清大量培養法、マイクロキャリア
培養法、神経細胞培養法、気管上皮細胞培養法、肝細胞
培養法、腎細胞培養法、膵ランゲルハンス島培養法、乳
腺上皮細胞培養法、血管内皮細胞培養法、筋肉細胞培養
法、軟骨細胞培養法、骨髄細胞培養法等をあげることが
できる。
に適した培養法であればいずれも用いることができ、高
密度維持培養法、無血清大量培養法、マイクロキャリア
培養法、神経細胞培養法、気管上皮細胞培養法、肝細胞
培養法、腎細胞培養法、膵ランゲルハンス島培養法、乳
腺上皮細胞培養法、血管内皮細胞培養法、筋肉細胞培養
法、軟骨細胞培養法、骨髄細胞培養法等をあげることが
できる。
【００１０】支持細胞の具体的な培養方法を以下に示
す。動物細胞培養用培地（例えばAlpha MEM培地に０．
２２％の炭酸水素ナトリウムおよび１０％牛胎児血清を
加えた培地）に糖鎖合成阻害剤（例えば、ベンジル２−
アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノ
シド、ｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシド
等）を０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜２ｍＭ
添加した培地に支持細胞を０．５〜５ｘ１０4個／ｍｌ
の濃度で加える。得られた該細胞液１０ｍｌを２５ｃｍ
2細胞培養用フラスコに加え、３７℃で５％の二酸化炭
素を通気したＣＯ2インキュベーターにて３〜１０日培
養する。
す。動物細胞培養用培地（例えばAlpha MEM培地に０．
２２％の炭酸水素ナトリウムおよび１０％牛胎児血清を
加えた培地）に糖鎖合成阻害剤（例えば、ベンジル２−
アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノ
シド、ｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシド
等）を０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜２ｍＭ
添加した培地に支持細胞を０．５〜５ｘ１０4個／ｍｌ
の濃度で加える。得られた該細胞液１０ｍｌを２５ｃｍ
2細胞培養用フラスコに加え、３７℃で５％の二酸化炭
素を通気したＣＯ2インキュベーターにて３〜１０日培
養する。
【００１１】また、支持細胞を用いた造血幹肝細胞の具
体的な培養法を以下に示す。BDF1マウス尾静脈に５−フ
ルオロウラシルを体重１ｋｇあたり１５０ｍｇの割合で
投与する。２日経過後、骨髄より造血幹細胞を含む骨髄
細胞を取り出す。支持細胞の培養で用いた培地と同じ組
成の糖鎖合成阻害剤を含む培地にさらに１０％馬血清を
添加した培地に、該造血幹肝細胞を０．５〜５ｘ１０5
個／ｍｌの濃度で加える。得られた該細胞液１０ｍｌ
を、ほぼコンフルエント状態にまで細胞培養用フラスコ
中で培養した支持細胞上に加え、３７℃で５％の二酸化
炭素を通気したＣＯ2インキュベーターにて培養する。
体的な培養法を以下に示す。BDF1マウス尾静脈に５−フ
ルオロウラシルを体重１ｋｇあたり１５０ｍｇの割合で
投与する。２日経過後、骨髄より造血幹細胞を含む骨髄
細胞を取り出す。支持細胞の培養で用いた培地と同じ組
成の糖鎖合成阻害剤を含む培地にさらに１０％馬血清を
添加した培地に、該造血幹肝細胞を０．５〜５ｘ１０5
個／ｍｌの濃度で加える。得られた該細胞液１０ｍｌ
を、ほぼコンフルエント状態にまで細胞培養用フラスコ
中で培養した支持細胞上に加え、３７℃で５％の二酸化
炭素を通気したＣＯ2インキュベーターにて培養する。
【００１２】以下に本発明の実施例を示す。
【００１３】
実施例１ 蒸留水１，０００ｍｌに、第１表に示したＡｌｐｈａ
ＭＥＭ培地（極東製薬工業社製）、炭酸水素ナトリウム
２．２ｇおよび牛胎児血清を最終濃度１０％となるよう
に加え溶解し、Ａ培地を調製した。該Ａ培地にｐ−ニト
ロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシド（シグマ社製）
を１．０ｍＭ添加したＢ培地またはベンジル ２−アセ
トアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
（シグマ社製）を１．０ｍＭ添加したＣ培地を調製し
た。各培地は濾過滅菌し、動物細胞培養用培地として用
いた。
ＭＥＭ培地（極東製薬工業社製）、炭酸水素ナトリウム
２．２ｇおよび牛胎児血清を最終濃度１０％となるよう
に加え溶解し、Ａ培地を調製した。該Ａ培地にｐ−ニト
ロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシド（シグマ社製）
を１．０ｍＭ添加したＢ培地またはベンジル ２−アセ
トアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
（シグマ社製）を１．０ｍＭ添加したＣ培地を調製し
た。各培地は濾過滅菌し、動物細胞培養用培地として用
いた。
【００１４】
【表１】
【００１５】実施例２ 実施例１で調製したＡ培地、Ｂ培地またはＣ培地を用い
て、造血幹細胞を培養する際に用いる支持細胞の継代培
養を行い、継代培養後の支持細胞の造血幹細胞維持能力
を測定することにより、各培地における支持細胞の生理
的な機能の変化を調べた。支持細胞としてはマウス頭蓋
冠間質細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６を用いた。
て、造血幹細胞を培養する際に用いる支持細胞の継代培
養を行い、継代培養後の支持細胞の造血幹細胞維持能力
を測定することにより、各培地における支持細胞の生理
的な機能の変化を調べた。支持細胞としてはマウス頭蓋
冠間質細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６を用いた。
【００１６】凍結保存しておいたＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／Ｐ
Ａ６細胞を急速解凍後、該細胞をＡ培地、Ｂ培地または
Ｃ培地を用いて約１．５ｘ１０4個／ｍｌの細胞懸濁液
を調製した。該細胞懸濁液１０ｍｌを２５ｃｍ2細胞培
養用フラスコ（C. A. Greinerund Sohne GmbH ＆ KG, N
urtingen, Germany）に加え、３７℃で５％の二酸化炭
素を通気したＣＯ2インキュベーターにて７日間培養し
た。培養後コンフルエントになった細胞（培養用フラス
コ中で一つ一つの細胞が区別できない状態にまで増殖し
た細胞）を１０μｇ／ｍｌアクチナーゼＥ（ナカライテ
スク社製）を含む０．０２％ＥＤＴＡ溶液を用いて剥離
し、再び同じ組成の培地を用い約１．５ｘ１０4個／ｍ
ｌに調製し、同条件で培養することにより継代培養を行
った。継代培養は２、９または１６回繰り返した。
Ａ６細胞を急速解凍後、該細胞をＡ培地、Ｂ培地または
Ｃ培地を用いて約１．５ｘ１０4個／ｍｌの細胞懸濁液
を調製した。該細胞懸濁液１０ｍｌを２５ｃｍ2細胞培
養用フラスコ（C. A. Greinerund Sohne GmbH ＆ KG, N
urtingen, Germany）に加え、３７℃で５％の二酸化炭
素を通気したＣＯ2インキュベーターにて７日間培養し
た。培養後コンフルエントになった細胞（培養用フラス
コ中で一つ一つの細胞が区別できない状態にまで増殖し
た細胞）を１０μｇ／ｍｌアクチナーゼＥ（ナカライテ
スク社製）を含む０．０２％ＥＤＴＡ溶液を用いて剥離
し、再び同じ組成の培地を用い約１．５ｘ１０4個／ｍ
ｌに調製し、同条件で培養することにより継代培養を行
った。継代培養は２、９または１６回繰り返した。
【００１７】支持細胞の造血幹細胞維持能の測定は、Ko
damaらによって報告されているin vitro長期骨髄細胞培
養法〔Kodama, H., Y. Amagai, H. Koyama, ＆ S. Kasa
i. J. Cell. Physiol., 112, 89 (1982) 〕を応用して
行った。即ち、BDF1マウス尾静脈より５−フルオロウラ
シル（ナカライテスク社製）を体重１ｋｇあたり１５０
ｍｇの割合で投与し、２日経過後、骨髄より造血幹細胞
を含む骨髄細胞液を取り出し、ＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ
６細胞の継代培養で用いた培地と同じ組成の培地にさら
に１０％馬血清を添加した培地を用いて１ｘ１０ 5個／
ｍｌの濃度の造血幹細胞懸濁液を調製した。継代後４日
間培養し、ほぼコンフルエント状態になったＭＣ３Ｔ３
−Ｇ２／ＰＡ６細胞上に、該造血幹細胞懸濁液を１０ｍ
ｌ加え、１０日培養後に出現する骨髄の造血幹細胞由来
の細胞数を血球計算盤にて計数することによってＭＣ３
Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６細胞の造血幹細胞維持能を評価し
た。
damaらによって報告されているin vitro長期骨髄細胞培
養法〔Kodama, H., Y. Amagai, H. Koyama, ＆ S. Kasa
i. J. Cell. Physiol., 112, 89 (1982) 〕を応用して
行った。即ち、BDF1マウス尾静脈より５−フルオロウラ
シル（ナカライテスク社製）を体重１ｋｇあたり１５０
ｍｇの割合で投与し、２日経過後、骨髄より造血幹細胞
を含む骨髄細胞液を取り出し、ＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ
６細胞の継代培養で用いた培地と同じ組成の培地にさら
に１０％馬血清を添加した培地を用いて１ｘ１０ 5個／
ｍｌの濃度の造血幹細胞懸濁液を調製した。継代後４日
間培養し、ほぼコンフルエント状態になったＭＣ３Ｔ３
−Ｇ２／ＰＡ６細胞上に、該造血幹細胞懸濁液を１０ｍ
ｌ加え、１０日培養後に出現する骨髄の造血幹細胞由来
の細胞数を血球計算盤にて計数することによってＭＣ３
Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６細胞の造血幹細胞維持能を評価し
た。
【００１８】２、９および１６回継代培養後のＭＣ３Ｔ
３−Ｇ２／ＰＡ６細胞の造血幹細胞維持能の測定結果を
第２表に示した。
３−Ｇ２／ＰＡ６細胞の造血幹細胞維持能の測定結果を
第２表に示した。
【００１９】
【表２】
【００２０】第２表に示すように、糖鎖合成阻害剤、ｐ
−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシドあるいは
ベンジル ２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−
ガラクトピラノシドを含む本発明培地で継代培養を行っ
たＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６細胞は、糖鎖合成阻害剤を
含まない培地で継代培養した細胞と比較し、造血幹細胞
増殖支持能が強化されたのみならず、継代培養による造
血幹細胞増殖支持能の低下はほとんど認められなかっ
た。
−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシドあるいは
ベンジル ２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−
ガラクトピラノシドを含む本発明培地で継代培養を行っ
たＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６細胞は、糖鎖合成阻害剤を
含まない培地で継代培養した細胞と比較し、造血幹細胞
増殖支持能が強化されたのみならず、継代培養による造
血幹細胞増殖支持能の低下はほとんど認められなかっ
た。
【００２１】
【発明の効果】本発明の糖鎖合成阻害剤を含有する動物
細胞培養用培地を用いることにより、動物細胞の有する
生理的な機能を低下させることなく培養を行うことがで
きる。該培養が可能となることにより、該培養細胞の有
する生理的な機能の解明、その生理的な機能の障害に起
因した各種疾患の治療、該培養細胞の分泌する有用物質
の医薬品としての利用、該培養細胞を支持細胞として共
培養した血球細胞を用いた養子免疫療法または遺伝子治
療法等に用いることができる。
細胞培養用培地を用いることにより、動物細胞の有する
生理的な機能を低下させることなく培養を行うことがで
きる。該培養が可能となることにより、該培養細胞の有
する生理的な機能の解明、その生理的な機能の障害に起
因した各種疾患の治療、該培養細胞の分泌する有用物質
の医薬品としての利用、該培養細胞を支持細胞として共
培養した血球細胞を用いた養子免疫療法または遺伝子治
療法等に用いることができる。
Claims (9)
- 【請求項１】 糖鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養
用培地。 - 【請求項２】 糖鎖合成阻害剤がフラノース環またはピ
ラノース環を有する糖鎖合成阻害剤である請求項１記載
の培地。 - 【請求項３】 糖鎖合成阻害剤がベンジル ２−アセト
アミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシドま
たはｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシドで
ある請求項２記載の培地。 - 【請求項４】 動物細胞が支持細胞である請求項１、２
または請求項３記載の培養用培地。 - 【請求項５】 糖鎖合成阻害剤を含有する動物細胞培養
用培地を用いることを特徴とする動物細胞の培養方法。 - 【請求項６】 糖鎖合成阻害剤がフラノース環またはピ
ラノース環を有する糖鎖合成阻害剤である請求項５記載
の培養方法。 - 【請求項７】 糖鎖合成阻害剤がベンジル ２−アセト
アミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシドま
たはｐ−ニトロフェニル β−Ｄ−キシロピラノシドで
ある請求項６記載の培養方法。 - 【請求項８】 動物細胞が支持細胞である請求項５、６
または７記載の培養方法。 - 【請求項９】 請求項８記載の培養方法で得られる支持
細胞を用いる造血幹細胞の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7275690A JPH09107955A (ja) | 1995-10-24 | 1995-10-24 | 動物細胞培養用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7275690A JPH09107955A (ja) | 1995-10-24 | 1995-10-24 | 動物細胞培養用培地 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09107955A true JPH09107955A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=17559004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7275690A Withdrawn JPH09107955A (ja) | 1995-10-24 | 1995-10-24 | 動物細胞培養用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09107955A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT409379B (de) * | 1999-06-02 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen |
| WO2019004293A1 (ja) * | 2017-06-27 | 2019-01-03 | 味の素株式会社 | リボフラビン誘導体含有培地 |
-
1995
- 1995-10-24 JP JP7275690A patent/JPH09107955A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT409379B (de) * | 1999-06-02 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen |
| US8021881B2 (en) | 1999-09-28 | 2011-09-20 | Baxter Innovations Gmbh | Medium for the protein-free and serum-free cultivation of cells |
| US8722406B2 (en) | 1999-09-28 | 2014-05-13 | Baxter Innovations Gmbh | Medium for the protein-free and serum-free cultivation of cells |
| US9982286B2 (en) | 1999-09-28 | 2018-05-29 | Baxalta Incorporated | Medium for the protein-free and serum-free cultivation of cells |
| WO2019004293A1 (ja) * | 2017-06-27 | 2019-01-03 | 味の素株式会社 | リボフラビン誘導体含有培地 |
| JPWO2019004293A1 (ja) * | 2017-06-27 | 2020-04-23 | 味の素株式会社 | リボフラビン誘導体含有培地 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kuettner et al. | Synthesis of cartilage matrix by mammalian chondrocytes in vitro. I. Isolation, culture characteristics, and morphology. | |
| CA2400485C (en) | Pleuripotent stem cells generated from adipose tissue-derived stromal cells and uses thereof | |
| US6761887B1 (en) | Alginate layer system for chondrogenic differentiation of human mesenchymal stem cells | |
| Malda et al. | Low oxygen tension stimulates the redifferentiation of dedifferentiated adult human nasal chondrocytes | |
| KR930703434A (ko) | 사람 간세포-함유 조성물의 배양방법 및 형질전환 방법 | |
| EP3130668B1 (en) | In-vitro expansion of erythroid cells | |
| Mathis et al. | Biochemical characteristics of hyperplastic rat bile ductular epithelial cells cultured “on top” and “inside” different extracellular matrix substitutes | |
| CA2409317A1 (en) | Method of enhancing self renewal of stem cells and uses thereof | |
| JP2011520470A (ja) | 哺乳動物プロジェニター細胞をインスリン産生膵島細胞に分化させる方法 | |
| Aiuti et al. | Hematopoietic Support and Cytokine Expression of Murine–Stable Hepatocyte Cell Lines (Mmh) | |
| CN112522178B (zh) | 一种在体外长期培养和扩增成熟肝细胞的方法 | |
| EP3963050B1 (en) | Preparation of human allogeneic liver-derived progenitor cells | |
| CN110982776A (zh) | 肝细胞的体外扩增培养方法及应用 | |
| JPH09107955A (ja) | 動物細胞培養用培地 | |
| Naughton et al. | Hematopoiesis on suspended nylon screen-stromal cell microenvironments | |
| CN113564098B (zh) | 增强肝细胞功能性的培养方法及所使用的肝细胞培养液 | |
| JPH06292567A (ja) | ヒトリンパ球の癌細胞に対する傷害活性を高める方法 | |
| US20220220445A1 (en) | Preparation of human allogeneic liver-derived progenitor cells | |
| CN115361958A (zh) | 使用间充质谱系前体或干细胞治疗炎症性肺病的方法 | |
| CN115361960A (zh) | 用于治疗慢性移植物抗宿主病的方法 | |
| EP4282953A1 (en) | Method for producing mature chondrocytes and mature chondrocyte-containing composition | |
| US20110014260A1 (en) | System and method for liver cell culture and maturation | |
| CN114807028B (zh) | 一种无血清间充质干细胞培养基及干细胞培养方法 | |
| WO2011070084A1 (en) | Cell culture medium containing mogrosides for growing stem cells | |
| CN116640727B (zh) | 一种提高细胞活力的营养液及其制备方法、应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20030107 |