JPH0868795A - 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 - Google Patents
高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法Info
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- JPH0868795A JPH0868795A JP20682994A JP20682994A JPH0868795A JP H0868795 A JPH0868795 A JP H0868795A JP 20682994 A JP20682994 A JP 20682994A JP 20682994 A JP20682994 A JP 20682994A JP H0868795 A JPH0868795 A JP H0868795A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 煩雑な分画分離操作の不要な簡便な高密度リ
ポ蛋白（ＨＤＬ）中のコレステロールの定量法を提供す
る。 【構成】 高密度リポ蛋白とジメチル−β−シクロデキ
ストリンとを水性液中で混合して濁りを生成させ、該混
合液の濁度を測定することを特徴とする高密度リポ蛋白
中のコレステロールの定量法。
ポ蛋白（ＨＤＬ）中のコレステロールの定量法を提供す
る。 【構成】 高密度リポ蛋白とジメチル−β−シクロデキ
ストリンとを水性液中で混合して濁りを生成させ、該混
合液の濁度を測定することを特徴とする高密度リポ蛋白
中のコレステロールの定量法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、高密度リポ蛋白（ＨＤ
Ｌ）に含まれるコレステロール（以下、ＨＤＬコレステ
ロールという）の定量法に関する。
Ｌ）に含まれるコレステロール（以下、ＨＤＬコレステ
ロールという）の定量法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＨＤＬは、動脈壁を含めた各組織からコ
レステロールを受け取るため細胞内に蓄積したコレステ
ロールの除去作用に関係し、冠動脈硬化症をはじめとす
る各種動脈硬化症の危険予防因子であり、その血中レベ
ルは動脈硬化性疾患の発症予知に有用な指針となること
が知られている。従来のＨＤＬコレステロールの定量法
は、大きく分けて分画操作とコレステロール定量操作の
２段階からなる。分画操作法には、超遠心法、免疫化学
的方法、電気泳動法、沈殿法などがある。超遠心法を用
いる場合には、分離用超遠心器で比重の差によってＨＤ
Ｌを分離し、そのコレステロール量を測定する。しかし
ながら、定量性、簡便性、経済性などの面で欠点があ
る。免疫化学的方法には、免疫電気泳動法、一元免疫拡
散法（ＳＲＩＤ法）、オクタロニー法などがあるが、こ
れらの方法を用いる場合にはアポ蛋白を認識しており、
正確にはリポ蛋白を認識していないという問題がある。
電気泳動法を用いる場合には、セルロースアセテート膜
やアガロースゲルなどを支持体として分離し、酵素法に
よりコレステロールを定量する。この方法は、簡便性、
経済性などの面で問題がある。沈殿法を用いる場合に
は、低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）、超低密度リポ蛋白（Ｖ
ＬＤＬ）およびカイロミクロン（ＣＭ）の表面に存在す
るアポ蛋白Ｂにポリエチレングリコール、ヘパリン、リ
ンタングステン酸、デキストラン硫酸などのポリアニオ
ンと２価の陽イオンを結合させ、不溶性沈殿物を形成さ
せ、これを遠心分離操作によって除去し、上清中のＨＤ
Ｌコレステロールを定量する（臨床検査法提要、第２９
版、金井泉著、金原出版、４７１頁、１９８３年）。こ
の方法は最も簡便であるが、遠心分離器による遠心分離
操作を行うため、多数検体処理、迅速測定および臨床検
査の分野で多く使用されている自動分析装置には不向き
である。
レステロールを受け取るため細胞内に蓄積したコレステ
ロールの除去作用に関係し、冠動脈硬化症をはじめとす
る各種動脈硬化症の危険予防因子であり、その血中レベ
ルは動脈硬化性疾患の発症予知に有用な指針となること
が知られている。従来のＨＤＬコレステロールの定量法
は、大きく分けて分画操作とコレステロール定量操作の
２段階からなる。分画操作法には、超遠心法、免疫化学
的方法、電気泳動法、沈殿法などがある。超遠心法を用
いる場合には、分離用超遠心器で比重の差によってＨＤ
Ｌを分離し、そのコレステロール量を測定する。しかし
ながら、定量性、簡便性、経済性などの面で欠点があ
る。免疫化学的方法には、免疫電気泳動法、一元免疫拡
散法（ＳＲＩＤ法）、オクタロニー法などがあるが、こ
れらの方法を用いる場合にはアポ蛋白を認識しており、
正確にはリポ蛋白を認識していないという問題がある。
電気泳動法を用いる場合には、セルロースアセテート膜
やアガロースゲルなどを支持体として分離し、酵素法に
よりコレステロールを定量する。この方法は、簡便性、
経済性などの面で問題がある。沈殿法を用いる場合に
は、低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）、超低密度リポ蛋白（Ｖ
ＬＤＬ）およびカイロミクロン（ＣＭ）の表面に存在す
るアポ蛋白Ｂにポリエチレングリコール、ヘパリン、リ
ンタングステン酸、デキストラン硫酸などのポリアニオ
ンと２価の陽イオンを結合させ、不溶性沈殿物を形成さ
せ、これを遠心分離操作によって除去し、上清中のＨＤ
Ｌコレステロールを定量する（臨床検査法提要、第２９
版、金井泉著、金原出版、４７１頁、１９８３年）。こ
の方法は最も簡便であるが、遠心分離器による遠心分離
操作を行うため、多数検体処理、迅速測定および臨床検
査の分野で多く使用されている自動分析装置には不向き
である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、煩雑
な分画分離操作の不要な簡便なＨＤＬコレステロールの
定量法を提供することにある。
な分画分離操作の不要な簡便なＨＤＬコレステロールの
定量法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、リポ蛋白
含有試料とジメチル−β−シクロデキストリン（ＤＭ−
β−ＣｙＤ）とを水性液中適当な条件下で混合すること
によりＤＭ−β−ＣｙＤと試料中のＨＤＬとが特異的に
作用して濁りを形成し、このときの該混合液の濁度がＨ
ＤＬコレステロール濃度とよい相関性を示すことを見い
出し、本発明に至った。
含有試料とジメチル−β−シクロデキストリン（ＤＭ−
β−ＣｙＤ）とを水性液中適当な条件下で混合すること
によりＤＭ−β−ＣｙＤと試料中のＨＤＬとが特異的に
作用して濁りを形成し、このときの該混合液の濁度がＨ
ＤＬコレステロール濃度とよい相関性を示すことを見い
出し、本発明に至った。
【０００５】本発明は、ＨＤＬとＤＭ−β−ＣｙＤとを
水性液中で混合して濁りを生成させ、該混合液の濁度を
測定することを特徴とするＨＤＬコレステロールの定量
法に関する。次に、本発明の定量法について説明する。
本発明を実施するに際しては、まず、ＤＭ−β−ＣｙＤ
を適当な緩衝液、例えば５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩
衝液（ｐＨ７．４）に溶解して試薬を調製する。ＤＭ−
β−ＣｙＤの濃度は、試料と共存した場合に例えば１０
ｍＭ未満、好ましくは５ｍＭの濃度になるように調整す
る。次いで、試料そのものもしくは必要に応じて水ある
いは生理食塩水で希釈した試料を上記試薬で、１０〜５
０℃、好ましくは３０〜４０℃で１〜３０分間処理す
る。その後、混合液の濁度を３００〜５００ｎｍ、好ま
しくは３３０〜４００ｎｍ、例えば３４０ｎｍでの吸光
度により測定し、吸光度の値からＨＤＬコレステロール
量を算出する。
水性液中で混合して濁りを生成させ、該混合液の濁度を
測定することを特徴とするＨＤＬコレステロールの定量
法に関する。次に、本発明の定量法について説明する。
本発明を実施するに際しては、まず、ＤＭ−β−ＣｙＤ
を適当な緩衝液、例えば５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩
衝液（ｐＨ７．４）に溶解して試薬を調製する。ＤＭ−
β−ＣｙＤの濃度は、試料と共存した場合に例えば１０
ｍＭ未満、好ましくは５ｍＭの濃度になるように調整す
る。次いで、試料そのものもしくは必要に応じて水ある
いは生理食塩水で希釈した試料を上記試薬で、１０〜５
０℃、好ましくは３０〜４０℃で１〜３０分間処理す
る。その後、混合液の濁度を３００〜５００ｎｍ、好ま
しくは３３０〜４００ｎｍ、例えば３４０ｎｍでの吸光
度により測定し、吸光度の値からＨＤＬコレステロール
量を算出する。
【０００６】試料として血清から超遠心により分画され
たＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＣＭの各フラクショ
ンを使用し、上記定量法に従って吸光度を測定した。５
ｍＭの各種糖化合物含有試薬を調製して測定した結果を
図１に示す。（図中、ＣｙＤはシクロデキストリンを表
し、ＨＥはヒドロキシエチルを表し、ＨＰはヒドロキシ
プロピルを表し、ＤＭはジメチルを表し、ＴＭはトリメ
チルを表し、ＣＭはカルボキシメチルを表し、Ｇｌｕは
グルコシルを表し、Ｍａｌはマルトシルを表し、ＰＭは
パーシャリーメチルを表す） 図１に示すように、糖化合物としてＤＭ−β−ＣｙＤを
用いた場合にＨＤＬの存在下でのみ濁りが形成されるこ
とが確認された。
たＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＣＭの各フラクショ
ンを使用し、上記定量法に従って吸光度を測定した。５
ｍＭの各種糖化合物含有試薬を調製して測定した結果を
図１に示す。（図中、ＣｙＤはシクロデキストリンを表
し、ＨＥはヒドロキシエチルを表し、ＨＰはヒドロキシ
プロピルを表し、ＤＭはジメチルを表し、ＴＭはトリメ
チルを表し、ＣＭはカルボキシメチルを表し、Ｇｌｕは
グルコシルを表し、Ｍａｌはマルトシルを表し、ＰＭは
パーシャリーメチルを表す） 図１に示すように、糖化合物としてＤＭ−β−ＣｙＤを
用いた場合にＨＤＬの存在下でのみ濁りが形成されるこ
とが確認された。
【０００７】次に、実施例によって本発明の態様を説明
する。
する。
【０００８】
実施例１ ＤＭ−β−ＣｙＤ（５ｍＭ）および５０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）からなる試薬を調製し
た。血清から超遠心で分画し各種濃度に希釈したＨＤＬ
のサンプル５０μｌ（ＨＤＬコレステロール濃度は酵素
法により別途測定）を上記試薬３ｍｌで３７℃で１５分
間処理し、得られた溶液の吸光度を測定した。
−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）からなる試薬を調製し
た。血清から超遠心で分画し各種濃度に希釈したＨＤＬ
のサンプル５０μｌ（ＨＤＬコレステロール濃度は酵素
法により別途測定）を上記試薬３ｍｌで３７℃で１５分
間処理し、得られた溶液の吸光度を測定した。
【０００９】その結果を第２図に示す。第２図は、ＨＤ
Ｌコレステロール濃度と吸光度との相関関係を示すもの
で、ＨＤＬコレステロール濃度は吸光度とよい相関を示
した。
Ｌコレステロール濃度と吸光度との相関関係を示すもの
で、ＨＤＬコレステロール濃度は吸光度とよい相関を示
した。
【００１０】実施例２ 血清から超遠心で分画し各種濃度に希釈したＨＤＬのサ
ンプルの代わりに血清サンプルを用いる以外は実施例１
と同様の操作を行って吸光度を測定し、第１図を基準に
血清サンプル中のＨＤＬコレステロール濃度を求めた。
対照法として、リンタングステン酸−デキストラン硫酸
−Ｍｇ沈殿法〔デタミナーＨＤＬ（協和メデックス社
製）で沈殿〕（臨床化学、初版、荻三男著、医典社、１
１０頁、１９８７年）を用いて、血清サンプル中のＨＤ
Ｌコレステロール濃度を求めた。
ンプルの代わりに血清サンプルを用いる以外は実施例１
と同様の操作を行って吸光度を測定し、第１図を基準に
血清サンプル中のＨＤＬコレステロール濃度を求めた。
対照法として、リンタングステン酸−デキストラン硫酸
−Ｍｇ沈殿法〔デタミナーＨＤＬ（協和メデックス社
製）で沈殿〕（臨床化学、初版、荻三男著、医典社、１
１０頁、１９８７年）を用いて、血清サンプル中のＨＤ
Ｌコレステロール濃度を求めた。
【００１１】その結果、本発明の方法による結果は沈殿
法による結果と良好な相関を示した〔本発明の方法での
平均値（ｙ）＝４９．８ｍｇ／ｄｌ、沈殿法での平均値
（ｘ）＝４８．１ｍｇ／ｄｌ、相関係数ｒ＝０．８５０
６、回帰式ｙ＝１．００６ｘ＋１．４０６（ｎ＝６
２）〕。
法による結果と良好な相関を示した〔本発明の方法での
平均値（ｙ）＝４９．８ｍｇ／ｄｌ、沈殿法での平均値
（ｘ）＝４８．１ｍｇ／ｄｌ、相関係数ｒ＝０．８５０
６、回帰式ｙ＝１．００６ｘ＋１．４０６（ｎ＝６
２）〕。
【００１２】
【発明の効果】本発明により、煩雑な分画分離操作の不
要な簡便なＨＤＬコレステロールの定量法が提供され
る。
要な簡便なＨＤＬコレステロールの定量法が提供され
る。
【図１】各リポ蛋白分画と各種ＣｙＤとを共存させたと
きの吸光度を示すものである。
きの吸光度を示すものである。
【図２】ＨＤＬコレステロール濃度と本発明の方法によ
り測定された吸光度との相関関係を示すものである。
り測定された吸光度との相関関係を示すものである。
Claims (1)
- 【請求項１】 高密度リポ蛋白とジメチル−β−シクロ
デキストリンとを水性液中で混合して濁りを生成させ、
該混合液の濁度を測定することを特徴とする高密度リポ
蛋白中のコレステロールの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20682994A JP2598233B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20682994A JP2598233B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0868795A true JPH0868795A (ja) | 1996-03-12 |
| JP2598233B2 JP2598233B2 (ja) | 1997-04-09 |
Family
ID=16529769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20682994A Expired - Lifetime JP2598233B2 (ja) | 1994-08-31 | 1994-08-31 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2598233B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7223546B2 (en) | 1995-07-21 | 2007-05-29 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring the amount of constituent contained in a specific lipoprotein |
-
1994
- 1994-08-31 JP JP20682994A patent/JP2598233B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7223546B2 (en) | 1995-07-21 | 2007-05-29 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring the amount of constituent contained in a specific lipoprotein |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2598233B2 (ja) | 1997-04-09 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 19961105 |