JPH0867699A - インターロイキン４シグナルトランスデューサー、及びｉｌ−４スタット調節遺伝子発現と関連する病気の診察又は処置に有用な薬物の同定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 インターロイキン４シグナルトランスデュー
サー及び転写活性化体IL-4によって調節された遺伝子発
現を伴う病気の診察又は処置に有用な薬物を同定する方
法及び組成物の提供。 【解決手段】 IL-4スタットペプチド及びIL-4受容体ペ
プチド及びそのようなペプチドをコードする核酸が治療
上有用であることがわかった。目的物組成物にはIL-4ス
タット及びIL-4受容体ペプチド、それらの一部、それら
をコードする核酸、及び特異性抗体が含まれる。開示す
る薬理学的スクリーニング法は、特に高処理量のスクリ
ーニングに好適であって、１以上の工程が、軸方向に回
転可能なアームを有するコンピュータ制御電気機械ロボ
ットにより処理される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明の分野は、インターロ
イキン４シグナル・トランスデューサー（tansducer ）
である。

【０００２】

【発明の背景】新しい医薬の同定及び開発は、米国だけ
で数十億ドル単位の工業である。遺伝子特異性転写因子
は、該遺伝子特異性転写因子及びその他のヒトの病気に
関する新規な治療学をターゲットとする将来性のある分
野を提供する。遺伝子転写のレベルで活性な薬物（phar
macological agents or drugs ）を同定する有効な方法
が、緊急に必要とされる。自動化した、費用効率のよ
い、高処理量でドラッグスクリーニングを分析できるな
らば、そのような方法は、即座に国内及び国際的な医薬
及び生物工学上の薬剤の開発プログラムに広範囲な応用
があるであろう。移植、アレルギー、及び過敏症、自己
免疫等の他の形態を含む広範囲な環境で、免疫抑制が治
療上要求される。自己免疫に効果がある薬剤として広く
用いられるシクロスポリン（cyclosporin ）は、カルシ
ノイリン（calcineurin ）、ある転写因子を活性化させ
るホスファターゼ（phosphatase ）を阻害することによ
って作用すると考えられている。しかし、副作用及び毒
性のため、シクロスポリン（及びより最近に開発された
ＦＫ５０６）の臨床の結果は限られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】インターロイキン−４
（IL-4）は、活性化Ｔリンパ球、好塩基球、及び肥満細
胞によって分泌した、免疫調節サイトカイン（immunomo
dulatory cytokine ）である。IL-4は、ヘルパーＴ細胞
サブセットのバランスを調整し、Ｔｈ１と比較してＴｈ
２の拡張を援助する重要な役割を有する。これらのＴリ
ンパ球サブセットの平衡異常は、アレルギー、炎症、及
び自己免疫疾患を含む免疫学上の疾患と関係する。よっ
て、IL-4シグナリングの形質導入を特に妨害する薬剤を
同定することが望まれる。不幸なことに、そのような治
療のための高処理量のスクリーニング分析の開発に必要
な試薬は入手不可能である。最近の参考文献として、
（W.E. Paul ）（R.A. Seder）（1994年）Cell 76 巻、
241-251 頁、ダーネル（Darnell ）らの（1994年）Scie
nce 264 巻、1415頁を参照のこと。より特定の参考文献
として以下のものが挙げられる。シュアイ（Shuai ）ら
の（1992年）Science 258 巻、1808-1812 頁；コタニド
（Kotanides ）及びライヒ（Reich ）の（1993年）Scie
nce 262 巻、1265-1267 頁；シンドラー（Schindler ）
らの（1994年）EMBO J 13 巻、1350-1356 頁；イングリ
ット・コーラー（Ingrid Kohler ）及びライバー（E.P.
Reiber ）の（1993年）Eur J Immunol 23巻、3066-307
1 頁である。ＩＦＮ−γ受容体及びp91 に関する最近の
研究として、シュアイ（Shuai ）ら及びグリーンルンド
（Greenlund ）らの（1994年）EMBO J 13 巻、4604-461
0 頁を参照のこと。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、インターロイ
キンシグナル・トランスデューサー及び転写活性化体、
即ちIL-4スタットを含む転写複合体によって調節した、
１以上の遺伝子の発現と関連する病気の診察又は処置に
有用な薬物を同定する方法及び組成物を提供する。本発
明は、また、所望でない細胞成長、分化、及び／又はサ
イトカイン・シグナル応答性と関連する病気の診察又は
治療に有用な方法及び組成物を提供する。本発明は、IL
-4スタットの結合ターゲットと選択的に結合可能な組換
えヒトIL-4スタットペプチドを提供する。そのような結
合ターゲットは、天然細胞内結合ターゲットであるか、
又はそれから誘導されるものであって、転写因子、ホス
ファターゼ又はキナーゼのような酵素、IL-4受容体のよ
うな細胞受容体、及び１以上のIL-4スタット結合配列を
コードする核酸のような核酸が含まれる。目的物IL-4ス
タットの一部をコードする核酸、ベクター、及びそのよ
うな核酸を有する細胞は、IL-4スタット相同物及び／又
はIL-4スタットペプチドを組換え製造するプローブとし
て用いられる。本発明は、また、サイトカイン受容体ペ
プチドのようなIL-4スタット結合ターゲット、特に、IL
-4スタットペプチドと選択的に結合するIL-4受容体ペプ
チド、そのような受容体ペプチドをコードする核酸、及
びそのようなペプチド又はIL-4スタットペプチドと選択
的に結合する抗体のような結合試薬を提供する。

【０００５】ある態様として、本発明は、IL-4スタット
調節遺伝子の発現と関連する病気の診察又は処置に有用
な薬物を同定する方法を提供する。一般に、この方法
は、IL-4スタットの天然細胞結合ターゲット、及びIL-4
スタットに選択的に結合するのに十分なIL-4の天然細胞
ターゲットの少なくとも一部、フラグメント、又は構造
類似体を選択的に結合可能なIL-4スタットペプチド、並
びに候補薬物を化合する工程を含む。候補薬物が存在し
なければ、IL-4スタットペプチドが結合ターゲットと選
択的に結合する条件下で、得られた混合物を培養する。
その後、IL-4スタットペプチドと結合ターゲットとの選
択的な結合の存在又は不存在を検知する。選択的結合が
ないことにより、候補薬物が、遺伝子発現のようなIL-4
スタット調節化機能を選択的に阻害することができるこ
とがわかる。このような薬物は、病気、特に遺伝子発現
と関連する免疫病の診察又は処置に有用である。

【０００６】本発明は、IL-4スタット、即ち、転写因子
の新規なファミリーに関する方法及び組成物を提供す
る。IL-4スタットｃＤＮＡ及びアミノ酸配列を配列番号
１及び配列番号２にそれぞれ開示する。IL-4スタット
は、サイトカイン受容体の細胞内領域への選択的結合、
及び表１に示されるようなIL-4スタット結合部位をコー
ドする核酸によって特徴付けられる。好ましい結合部位
には、配列中２つのトリヌクレオチド（ＴＴＣ及びＧＡ
Ａ）が含まれる。ここで、このトリヌクレオチドは、１
〜５個のヌクレオチドによって分離される。IL-4スタッ
トは、配列番号２と実質上同様な配列を共有するアミノ
酸配列であるＳＨ２及びＳＨ３領域構造を含む。好まし
いIL-4スタットは、配列番号１と実質上同様な配列を共
有するｃＤＮＡを有する。実質上同様の配列を有するポ
リペプチドは、少なくとも約５５％、好ましくは少なく
とも約７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も
好ましくは少なくとも約９０％配列が同定されたものを
提供する。この同定は、ＥＭＢＬによって配布されてい
るＣＬＵＳＴＡＬ Ｖタンパク質配列ソフトウェアを用
いて行った対距離マトリクス比較すること（pair-wise
distance matrix comparison）により決定した。ＳＨ２
領域内でファミリーのメンバーは、対距離マトリクス比
較によって決定すると、少なくとも約６５％、好ましく
は少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８
５％、最も好ましくは少なくとも約９５％が同定された
ものである。配列が異なる場合、差異が控え目であるの
が好ましく、即ち、酸性アミノ酸を酸性アミノ酸で置換
したものである。

【０００７】実質上同一、又は相同な核酸配列が、高切
迫条件下、例えば、５５℃で生理食塩水０．９Ｍ／クエ
ン酸ナトリウム０．０９Ｍ（ＳＳＣ）緩衝液中にホルム
アルデヒド５０％を含有するハイブリッド形成緩衝液
で、それらの各々の補体とハイブリッド形成し（hybrid
ize ）、５５℃でＳＳＣ／ホルムアルデヒド緩衝液で洗
浄すると結合（bound ）が残る。配列が異なる場合、差
異は、好ましくは目立たないものであり、即ち、ヌクレ
オチド変化が余分な（redundant ）コドンをもたらす
か、又は、控え目であり、即ち、ヌクレオチド変化が保
守的なアミノ酸置換をもたらすものである。

【０００８】本発明は、少なくとも１つの天然IL-4スタ
ット結合ターゲットと選択的に結合可能なIL-4スタット
ペプチドを提供する。IL-4スタットペプチドは、新規な
ペプチドを提供するのに十分な長さである。本明細書で
用いられるとき、ペプチドは長さが、少なくとも５個、
一般に少なくとも約６個、より一般的に少なくとも約８
個、最も一般的に少なくとも約１０個のアミノ酸であ
り、５０個までのアミノ酸である。ペプチドは、フリー
な状態であっても、ペプチド、融解ペプチド、又はポリ
ペプチド（即ち、ペプチドがより大きなポリペプチドの
一部として存在する）等の反応性基（例えば、アミン、
カルボキシルなど）を化学的に防護するための保護基
（blocking group）のような他の成分と結合していても
よい。

【０００９】IL-4スタットペプチドは、少なくとも１つ
の天然IL-4スタット結合ターゲットと選択的に結合可能
なものである。結合ターゲットの例として、サイトカイ
ン受容体、特にインターロイキン受容体、特にIL-4受容
体又は実質的にIL-4受容体と同様な配列を有する受容
体、IL-4スタットＤＮＡ結合部位を１以上有する核酸、
IL-4スタットそのものを含む転写因子などが挙げられ
る。他の天然のIL-4スタット結合ターゲットは、開示さ
れた材料及び方法並びに当業界で既知の他の方法による
スクリーニング細胞、膜、並びに細胞抽出物及びフラク
ションによって容易に同定される。結合ターゲットは、
IL-4スタットペプチドと選択的に結合可能である。即
ち、少なくとも約１０⁴ Ｍ^-1、好ましくは少なくとも約
１０⁶ Ｍ^-1、より好ましくは少なくとも約１０⁸ Ｍ^-1の
平衡定数を有し、同条件下での完全な長さを有する天然
IL-4スタットと結合ターゲットとの結合平衡定数より６
桁以上、好ましくは４桁以上、より好ましくは２桁以上
である。

【００１０】好ましいペプチドは、結合力及び天然IL-4
スタットと同様な特異性を有するペプチド（又はIL-4ス
タットペプチドを含有するポリペプチド）を提供するの
に十分なIL-4スタットアミノ酸残基を含む。好ましいペ
プチド、並びに必須特異性及び親和力を付与可能なター
ゲットの一部分は、当業者によって容易に同定できる。
広範囲な分子及び生化学的な方法は、好ましい部分を発
生させるのに利用可能である。Molecular Cloning, A L
aboratory Manual（第２版、Sambrook, Fritsch and Ma
niatis, Cold Spring Harbor）、Current Protocols in
Molecular Biology（Eds. Aufubel, Brent, Kingston,
More, Feidman, Smith and Stuhl, Greene Publ. Asso
c., Wiley-Interscience, NY, NY, 1992）、又はそれ以
外に当業界で既知のものを参照のこと。例えば、選択的
なタンパク質、又は本明細書で記載したもの、もしくは
蛍光共鳴エネルギー遷移（ＦＲＥＴ）もしくは電気泳動
移動度シフト分析（ＥＭＳＡ）のような他の分析を含む
結合分析を用いて直接的に配列特異性結合によって、欠
失変異株をスクリーンする。

【００１１】目的物IL-4スタットペプチドと選択的に結
合する新規な薬物をも提供する。天然細胞結合ターゲッ
ト及び抗体の新規な一部も含まれる。発表された完全な
長さのIL-4受容体のような天然物及び既知の生成物は、
除外される。しかし、サイトカイン受容体、特にインタ
ーロイキン受容体、特にIL-4受容体は、IL-4スタットと
選択的に結合するペプチドを含んでいることを本明細書
で示す。このように、本発明は、天然で結合しているア
ミノ酸残基以外のものが結合した既知のタンパク質（例
えば、IL-4受容体ペプチド）の新規なペプチドを提供す
る。しかし、ペプチドは、天然状態でペプチドに天然で
結合していない１以上のアミノ酸残基が一つの末端又は
両末端に結合していてもよく、ペプチドが末端のペプチ
ド結合なしのアミノ酸で終了してもよい。即ち、他のア
ミノ酸と結合しない、少なくとも１つのＮ又はＣ末端残
基を有してもよい。そのような薬物（例えば、IL-4受容
体ペプチドをコードする核酸）を製造する材料又は方法
は、本明細書又は当業界で既知の他のものに開示されて
いる。IL-4スタットペプチド特異性抗体及びIL-4受容体
ペプチド特異性抗体（モノクローナルを含む）を製造す
る方法は、ハーロー（Harlow）及びレーン（Lane）のAn
tibodies（A laboratory Manual, Cold Spring Harbor,
1988 ）に記載されている。

【００１２】本発明は、IL-4スタット及びIL-4受容体調
節細胞機能、特に遺伝子転写レベルで活性な薬物を同定
する有効な方法を提供する。この方法は、自動化の、費
用効率のよい、高処理量のドラッグスクリーニングで分
析でき、国内の及び国際的な医療上の及び生物工学上の
薬物の開発プログラムに広範囲にわたって即座に応用で
きる。目標となる治療上の適応は、目標の細胞機能（例
えば、遺伝子発現）が、IL-4スタット又はIL-4受容体、
及び／又はその天然細胞結合ターゲットとの特異性相互
作用（例えば、遺伝子又は調節遺伝子領域）を有する複
合体（例えば、転写複合体）の形成の変性によって阻害
を受けることだけには限定されない。広範囲の遺伝子が
IL-4スタット又はIL-4受容体調節遺伝子転写を受けるの
で、目標となる適用には、ウィルス、バクテリア及び真
菌の感染、代謝性の病気、遺伝子性の病気、細胞成長、
並びに、新形成（neoplasia ）、炎症、及び過敏症など
のような調節機能不全がある。しばしば、目標となる適
用には、例えば、移植及び移入における所望でない免疫
応答、アレルギーのような即時型のタイプ及び遅延型タ
イプを含む全てのタイプの過敏症、ＨＩＶのようなウィ
ルス感染によって誘導されるものを含む自己免疫が挙げ
られる。

【００１３】本発明は、IL-4受容体又はIL-4スタット調
節遺伝子転写を妨害する化合物の広範囲な結合及び発現
分析を提供する。次の説明は主にIL-4スタットの分析に
関するが、IL-4受容体ペプチドをベースとした分析にも
同じように適用可能である。IL-4スタット結合の分裂
は、IL-4スタットペプチド（又はポリペプチドを含むペ
プチド）及びIL-4スタットと結合するIL-4受容体ペプチ
ドで検知することができる。各々の成分をラベル化し、
例えば、ＨＭＫを用いて放射性元素でラベル化したリン
酸塩を用いてラベル化し、かつ、各々の成分を固定す
る、例えば、ビオチンでラベル化し、アビジンをコート
した基質と結合することによって固定することができ
る。また、IL-4スタット−IL-4スタット２量体の分裂、
又はIL-4スタット−ＤＮＡ結合の分裂を分析することが
できる。IL-4スタットペプチドを、いかなる簡便な方法
によって、例えば、化学合成、ワクシニア（vaccinia）
での発現、又はバキュロウィルス−ベースの発現系など
によって得ることができる。活性な、チロシン・ホスホ
リル化IL-4スタットを得るために、IL-4をＪＡＫキナー
ゼで共発現する（coexpress ）ことができる。また、組
換えIL-4スタットを、細胞抽出物又はそれらの精製した
配合物の形態で、外因性IL-4スタットキナーゼで処理す
ることができる。

【００１４】開示された方法中に用いたペプチド（又は
そのようなペプチドを含むポリペプチド）は、通常、単
離した、一部純粋な又は純粋な形態で添加され、代表的
には組換えて製造される。本明細書で用いるとき、『単
離した』ペプチドは、少なくとも天然状態で会合させ
た、あるサンプル中全タンパク質（ペプチドを含む）の
重量の少なくとも約０．５％、好ましくは少なくとも約
２％、より好ましくは少なくとも約５％を構成する、少
なくともいくつかの材料を伴わないものである。一部純
粋なペプチドは、あるサンプル中全タンパク質の重量の
少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約３０％、
より好ましくは少なくとも約６０％を構成する。及び、
純粋なペプチドは、あるサンプル中全タンパク質の重量
の少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約９０
％、より好ましくは少なくとも約９５％構成する。ペプ
チドが、他のペプチド又はポリペプチド、例えば、タン
パク質−タンパク質結合、配列特異性核酸結合、又は分
析条件（例えば、検知のためのタッグ（tag ）又はアン
カーリング（anchoring ））下での安定性をもたらす
か、又は増大させることができるポリペプチドとの融合
生成物（fusion product）の一部であるのがしばしば望
ましい。

【００１５】この分析混合物は、IL-4受容体ペプチド、
又は天然IL-4スタットが天然で結合し、IL-4スタットペ
プチド（又はペプチドを含むポリペプチド）の配列−特
異性結合をもたらす遺伝子又は遺伝子調節領域と同様
な、十分な配列を共有する、配列を有する核酸のような
天然細胞IL-4スタット結合ターゲットの少なくとも一部
を有する。核酸には、さらに、核酸とIL-4スタットペプ
チドとを協同的に結合する（即ち、少なくとも一方は、
他方のＤＮＡ結合の結合力又は特異性を増加させる）第
２の転写因子ペプチド（又はポリペプチドを含むペプチ
ド）の結合を促進する配列を１以上有する。天然結合タ
ーゲットを用いる場合、ある一部分が分析において簡便
に測定可能なIL-4スタットペプチドとの結合力及び親和
力をもたらすものである限り、その一部分（例えば、ペ
プチド、核酸フラグメント）又はその類似体（即ち、分
析のために天然結合ターゲットのIL-4結合特性を模倣す
る薬物）を用いるのが好ましい。

【００１６】核酸の結合部位の部分は、少なくとも約４
個、好ましくは少なくとも約６個、より好ましくは少な
くとも約８個のヌクレオチドを構成する。IL-4スタット
結合部位を有する核酸は、表１のヌクレオチド配列の一
部を少なくとも含み、TTC とGAA が約１〜５個のヌクレ
オチドによって分離されている１つのストランド上に配
列TTC-GAA を含んでいるのが好ましい。

【００１７】

【表１】 −→ ＦｃγＲＩ ５’−ＧＴＡＴＴＴＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＡＡＣ -33/-14 （配列番号３） ＣＡＴＡＡＡＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＴＧ ←− −−→ ＦｃεＲＩＩａ −ＣＴＣＴＴＡＣＣＴＧＡＧＡＡＡＴＧＧ -131/-114 （配列番号４） ←− −−→ ＦｃεＲＩＩｂ −ＧＡＡＴＴＴＣＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧ -230/-214 （配列番号５） ←− −−→ Ｃγ１ −ＡＣＡＴＴＣＡＣＡＴＧＡＡＧＴＡ -126/-111 （配列番号６） ←−− −−→ Ｃε −ＡＡＣＴＴＣＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧ -119/-104 （配列番号７） ←−− −−→ ｍＭＨＣＩＩＥβ −ＡＡＧＧＴＴＴＣＡＧＡＡＧＧＧ -165/-152 （配列番号８） ←−− −−→ ｈＭＨＣＩＩＤＲα −ＣＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＧ -115/-99 （配列番号９） ←−−

【００１８】他の転写因子の結合配列は、国立医学図書
館の国立生物工学情報センター（theNational Center f
or Biotechnology Information at the National Libra
ry for Medicine, in Faisst and Meyer(1991年) Nucle
ic Acids Research 20, 3-26）の転写因子データベース
のような情報源、及び当業者に既知のもので見出すこと
ができる。ペプチドが結合した核酸の一部分は、連続で
あっても、断片であってもよい。さらにヌクレオチドを
用いて、結合又は安定性などを増大するか、又は減少さ
せる構造をもたらすことができる。例えば、組合せＤＮ
Ａ結合は、オリゴヌクレオチド上の異なるか、又は同じ
転写因子へのＤＮＡ結合部位を２以上含むことによって
影響を受け得る。このことにより、２以上の因子の協同
的又は相互依存的なＤＮＡ結合の研究が与えられる。さ
らに、核酸は、転写因子結合部位が目的物の分析に使用
するために簡便にスプライシングされるカセットを有す
ることができる。

【００１９】核酸は、通常線状、かつ二重らせんＤＮＡ
であるが、IL-4スタット配列−特異性結合が保持される
限り、円形プラスミド又は他の核酸又は構造類似体が置
換されてもよい。ある適用において、スーパーコイルＤ
ＮＡは、最適な配列−特異性結合をもたらし、これが好
ましい。核酸はしばしば再結合し、天然の染色体上に結
合するヌクレオチド以外のヌクレオチドと結合する配列
を有することを意味する。単離された核酸は、あるフラ
クションに存在する全核酸重量の、少なくとも約０．５
重量％、好ましくは少なくとも約５重量％を構成する。
純粋な核酸は、あるフラクションに存在する全核酸重量
の、少なくとも８０重量％、好ましくは少なくとも９５
重量％を構成する。核酸は、分析条件及び要求で分析で
きる、いかなる長さのものであってもよい。代表的に
は、核酸は８ｂｐ〜５ｋｂであり、好ましくは約１８ｂ
ｐ〜２５０ｂｐであり、最も好ましくは、約２７〜５０
ｂｐであるのがよい。

【００２０】分析混合物は候補薬物も有する。候補薬物
とし、多くの化学分類を含むが、代表的には、それらは
有機化合物であり、好ましくは小さい有機化合物であ
る。候補薬物は、合成又は天然の化合物のライブラリー
を含む広範囲な供給源から得られる。得られた混合物
を、候補薬物が存在しないならば、IL-4スタットペプチ
ド（又はポリペプチドを含むIL-4スタットペプチド）が
選択的に細胞結合ターゲット、その一部、又は類似体と
結合する条件下で培養した。混合物成分を、必要な結合
をもたらすように添加することができる。培養は、最適
な結合が促進されるいかなる温度でも行われるが、代表
的には４〜４０℃、より一般的には１５〜４０℃であ
る。培養期間もまた、最適結合のために選択されるが、
迅速、高処理量のスクリーニングを促進するために最小
化され、代表的には、０．１〜１０時間であり、好まし
くは５時間未満で、より好ましくは２時間未満である。

【００２１】培養後、IL-4スタットペプチドと１以上の
結合ターゲットとの選択的な結合が存在するか、否か
が、いかなる簡便な方法によっても検知される。しばし
ば、分離の工程を用いて、非結合化合物から結合化合物
を分離する。分離の工程に、さまざまな方法を伴うこと
ができる。都合のよいのは、成分のうち少なくとも１つ
を、非結合成分を好都合に分離することができるいかな
る固体であってもよい固体基質上に固定化する。固体基
質は、広範囲な形状、例えば、マイクロタイタ・プレー
ト、マイクロビーズ（microbead ）、計深棒（dipstic
k）、樹脂粒径などの広範囲な材料からなっていてもよ
い。この基質はシグナル：ノイズ比を最大にし、主にバ
ックグランドの結合を最小化するように、容易な洗浄と
費用により選択される。

【００２２】分離は、例えば、ビーズまたは計深棒を貯
蔵所（reservoir ）から除去するか、マイクロタイタ・
プレート井戸（well）のような貯蔵所を空にするか、又
は希釈するか、又は、ビーズ（例えば、鉄の核を有する
ビーズが容易に単離でき、磁気を用いて洗浄できる）、
粒子、クロマトグラフのカラム、もしくはフィルターを
洗浄溶液もしくは溶媒でゆすぐことにより、なすことが
できる。代表的には、分離工程は、さらにゆすぐ工程又
は洗浄工程又は２以上のゆすぐ工程もしくは洗浄工程を
含むであろう。例えば、固体基質がマイクロタイタ・プ
レートの場合、井戸を、代表的には、塩、緩衝液、界面
活性剤、及び非特異的タンパク質などのような特異的な
結合で沈澱しない培養混合物の成分を含む洗浄溶液で数
回洗浄することがよく、該洗浄溶液は、ポリペプチドの
リガンドと特異的に結合する、抗体又は受容体のような
ポリペプチド特異性結合試薬を活用することもできる。

【００２３】検知は、いかなる簡便な方法によってもな
すことができる。しばしば、その成分のうちの１つが、
ラベルを有するか、又はラベルと結合する。広範囲なラ
ベル、本質的には、結合タンパク質の検知を提供する、
いかなるラベルも使用することができる。ラベルは、放
射能、蛍光、光学又は電気密度などのような直接検知、
又はエピトープ・タッグ（epitope tag ）、酵素などの
ような間接検知で提供することができる。ラベルをタン
パク質、例えばリンの放射性同位元素を含有するホスフ
ェート基に付加するか、又はタンパク質構造、例えばイ
オウの放射性同位元素を含有するメチオニン残基に組み
込むことができる。

【００２４】さまざまな方法を用いて、ラベル及び他の
分析成分の性質に依存するラベルを検知することができ
る。例えば、ラベルは、固体基質と結合して検知するこ
とができ、又は、ラベルを含む結合複合体の一部を固体
基質から分離することもでき、その後、ラベルを検知し
た。ラベルを、光学的もしくは電気的密度、放射線、非
放射性エネルギー遷移などにより直接検知するか、又は
抗体抱合体などで間接的に検知することができる。例え
ば、放射性ラベルの場合、放射線を直接、例えば粒子計
数器で、又は間接的にシンチレーションカクテル及び計
数器で検知できる。IL-4ペプチド−ターゲット結合又は
転写複合体形態を阻害することを示す候補薬物が、動物
及びヒトの試験のための医薬業に価値ある試薬を提供す
る。

【００２５】この方法は、特に自動化した、高処理量の
薬物スクリーニングに適している。好ましい態様とし
て、個々のサンプルの培養体積を約５００μｌ未満、好
ましくは約２５０μｌ未満、より好ましくは約１００μ
ｌ未満にするのがよい。そのような小さなサンプル体積
は、希少な候補薬物の使用、高価な転写複合体成分、及
び有害な放射性廃棄物を最小化する。さらに、この方法
は、自動化、特にコンピューターによる自動化の準備を
する。よって、この方法の工程は、好ましくは、コンピ
ュータ制御された電気機械ロボットによって行われるの
が好ましい。個々の工程は分離して自動化されるが、好
ましい態様として、混合物形成工程、培養工程、及び分
離工程を行う複数のワークステーションへの、及びそれ
からの軸方向に回転する単一のアームを有する単一のコ
ンピュータ制御多機能ロボットを提供するのがよい。コ
ンピュータは、アーム及びワークステーションの操作を
指示する命令を提供するソフトウェアをロードし、入力
手段（例えば、キーボード及び／又はマウス）及びディ
スプレイ手段（例えば、モニター）を、調整する操作者
に提供する。

【００２６】他の態様として、方法には、第１のIL-4ス
タットペプチド（又はペプチドを含むポリペプチド）、
IL-4スタットペプチド結合ターゲットのラベル化形態
（例えば、異なる転写因子ペプチド（又はペプチドを含
むポリペプチド））、候補薬物、固体基質に固定化した
受容体、及び受容体と特異的に結合可能なリガンドと抱
合した核酸を化合する工程が含まれる。

【００２７】IL-4スタットペプチド及び核酸は、上記の
インビトロ（in vitro）の結合分析に加えて、広範囲な
使用に提供することができる。例えば、IL-4受容体ペプ
チド（又はペプチドを含むポリペプチド、例えば、完全
な長さの受容体）をトランスフェクションすること、ル
シフェラーゼのようなIL-4スタット誘導受容体を有する
ＴｈＰ１のような細胞を発現することを含む、細胞ベー
スの分析を提供する。細胞機能を媒介したIL-4スタット
を調節する試薬を、その後リポーター（reporter）の変
化を通して検知する。他のアプローチには、過渡的な発
現分析がある。この方法において、細胞は、機能性IL-4
スタット結合部位を有するプロモーター（promoter）の
転写制御下で、天然IL-4スタットとリポーターとを選択
的に結合可能なIL-4スタットの一部を有するポリペプチ
ドを要するにコードする、１以上の構成物で形質移入
（transfect ）される。この細胞は、IL-4スタット活性
化体、通常はチロシンキナーゼ、特にジャック（Jak ）
キナーゼをコードする構成物でも共形質移入（cotransf
ect ）される。

【００２８】目的物のペプチドは、結合分析及び治療
（後述）に有用な構造類似体を設計するのに有用な手本
となる化合物を提供する。さらに、目的物の核酸は、実
質上同様な配列を有するIL-4スタットｃＤＮＡ相同物を
同定するためのハイブリッド形成プローブとして使用で
きることがわかる。ｃＤＮＡ及び遺伝子ライブラリーを
プローブし、相同体を再生する（recover ）ための目的
物のプローブ、材料、及び方法は、当業界で知られてい
る。好ましいライブラリーは、ヒト免疫細胞、腫瘍細
胞、神経細胞である。より好ましいものは、分化ヒトリ
ンパ系細胞からのｃＤＮＡライブラリーである。これら
のIL-4スタットｃＤＮＡ相同体は、次に本明細書で記載
する結合分析及び治療に用いる、付加的なスタットペプ
チドを提供する。

【００２９】目的の組成物は、治療上の応用も提供す
る。例えば、阻害ペプチドNH₂-GPPGEAGYKAFSSLL （配列
番号１０）-COOH 及びNH₂-ASSGEEGYKPFQDLI （配列番号
１１）-COOH のようなIL-4スタットペプチド又はIL-4受
容体ペプチド、並びに、それらの一部を含むホスホチロ
シンが、所望でない細胞成長、分化、特に免疫細胞分
化、及びサイトカイン、特にインターロイキン、より特
にIL-4の応答性と関連する病気を処置するのに有用であ
ることがわかる。治療上の使用で、本明細書で開示する
成分及び薬物は、いかなる簡便な方法、特に非経口で、
生理的に許容できる坦体、例えば、リン酸緩衝液化生理
食塩水、生理食塩水、又は脱イオン水などにより簡便に
投与することができる。代表的には、その成分を血液又
は滑液（synovial fluid）のような維持生理液（retain
ed physiological fluid）に加える。一般に、投与量は
経験的に決められ、代表的には、受容者の約１０〜１０
００μｇ／ｋｇの範囲であろう。ペプチド薬物の場合、
濃度は一般に、投与薬中約１００〜５００μｇ／ｍｌの
範囲であろう。安定剤、殺菌剤などのような他の添加剤
を含んでいてもよい。これらの添加剤は、従来における
量で存在するであろう。

【００３０】IL-4スタットペプチド−及びIL-4受容体−
コード核酸は、治療上遺伝子治療に有用であることがわ
かる。例えば、そのような核酸を、ウィルス及び形質移
入（trasfect）するのに用いられるウィルスにクローン
し、腫瘍細胞へのサイトカイン応答性を与える（confe
r）。IL-4スタット形質移入細胞の移入を含む遺伝子治
療の場合、投与は、経験的に確認される、多くの変数に
依存するであろう。例えば、細胞の数は、移入した細胞
の安定性によって変化するであろう。移入媒体は、代表
的には、緩衝液化した生理食塩水溶液、又は他の薬理学
上許容できる溶液である。他の投与する成分、例えば形
質移入した核酸、タンパク質などの量は、投与の方法、
及び治療の目的などに同様に依存するであろう。

【００３１】

【実施例】IL-4誘導ＤＮＡ結合タンパク質の精製 ヒト単球Ｔｈｐ−１細胞を懸濁液中で成長させ、IL-4に
短時間さらし、収集し、分裂させ、分別して、細胞核と
細胞質のタンパク質に分離した。IL-4処理細胞（コント
ロール細胞からはない）から調製した核抽出物には、ヒ
トＦｃｇＲＩ遺伝子の上流に位置するIL-4応答要素に対
応する、二重らせんの、合成オリゴヌクレオチドと特異
的な相互作用が可能なＤＮＡ結合活性が含まれることが
観察された。この活性体を、３つのクロマトグラフィー
工程の組合せによって精製し、ポリアクリルアミドのゲ
ル電気泳動を変性させることによって分子量を測定した
とき、およそ１００Ｋｄの分子量で拡散したポリペプチ
ドによって特定されることがわかった。１００Ｋｄポリ
ペプチドは、抗ホスホチロシン抗体（anti-phosphotyro
sine）と反応した。

【００３２】精製した、１００Ｋｄポリペプチドをlys-
Ｃに温浸（digest）させ、得られたペプチドをキャピラ
リーＨＰＬＣによって分別した。アミノ酸配列を、６つ
のペプチドフラグメントから得られた。これらの配列か
ら設計した合成オリゴヌクレオチドを、Ｔｈｐ−１細胞
からのｍＲＮＡを用いて調製したｃＤＮＡのＰＣＲ増幅
に用いた。これにより、配列ペプチドのうち３つをコー
ドするＰＣＲ断片を単離した。ｃＤＮＡクローンを得
て、１００Ｋｄポリペプチドに対応する読み取り枠を予
測することによって、配列させた。最長のｃＤＮＡクロ
ーンの５’末端から１８２塩基対下流に位置するイニシ
エーターのメチオニン・コドンで開始して、配列は長さ
８４８残基の読み取り枠を予測する。精製した１００Ｋ
ｄポリペプチドをlys-Ｃ温浸（digestion ）することに
よって発生した、６つのペプチド配列がすべて、概念的
に翻訳した読み取り枠中に見出された。

【００３３】ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴデータベースの調査
から、１００Ｋｄの１次アミノ酸配列、IL-4誘導タンパ
ク質、及び乳腺因子（ＭＧＦ）タンパク質（転写因子の
スタットファミリーに属するプロラクチン誘導ＤＮＡ結
合タンパク質（ワカオ（Wakao ）ら、1994年））が実質
的に同様であることがわかった。あまり目立たないが、
配列の同一性が、IL-4誘導タンパク質、及びスタットフ
ァミリーの残りの４つの間にも観察された。全ての場合
で、３つの領域に対応する配列の同一性の最も重要なセ
グメントは、１つ目が６つのタンパク質のすべてのアミ
ノ末端に位置するおよそ５０のアミノ酸からなることで
あり、２つ目がＳＨ２及びＳＨ３領域を明記するように
予測された、より中央に位置する領域である。IL-4誘導
タンパク質とスタットタンパク質との関連性が大きく、
潜在状態から活性状態への転化と関連する、迅速な、ホ
スホチロシンと結びつけることによって、我々はこのタ
ンパク質をIL-4スタットと呼んだ。

【００３４】ノーザン法分析により、IL-4スタットｍＲ
ＮＡの存在を確認し、その長さは約４キロベースであっ
た。このｍＲＮＡ種は広範囲にヒト組織に観察され、胎
盤、肺、肝臓、腎臓、胸腺、前立腺、卵巣、及び末梢血
リンパ球に高レベルで生じる。ノーザン法により、ほん
の少し小さいｍＲＮＡも見出され、腎臓に最も豊富に観
察された。長さがおおよそ４．８、５．５、及び６キロ
ベースの３つのより大きなｍＲＮＡ種も観察された。
４．８及び６キロベースの種は、脾臓及び胸腺に最も豊
富に見られる一方、５．５キロベースの種は、末梢血リ
ンパ球にしか見られなかった。

【００３５】受容体ペプチドによるIL-4スタットＤＮＡ
結合活性の阻害 IL-4受容体とそれを活性化させる転写因子間の有り得る
カップリングを調査するために、我々は、活性化IL-4ス
タットによりＤＮＡ結合上のヒトIL-4R 受容体の細胞内
領域から誘導した５つのホスホチロシン・ペプチドの阻
害効果を試験した。コントロールとして、我々は、潜在
的にp91 活性化をブロックすることが以前からわかって
いるＩＦＮ-g受容体のホスホチロシン・ペプチドの阻害
作用をも試験した。各々のペプチドは、中央に位置した
ホスホチロシンを含み、ヒトIL-4R サブユニットの天然
配列によって特定した７つのアミノ酸をＮＨ₂ 及びＣＯ
ＯＨの末端に結合させた。IL-4誘導Thp-1 細胞から調製
した核抽出物のサンプルを各々のホスホペプチドで培養
し、その後、活性IL-4スタットの保持によるゲル移動シ
フト分析により試験した。IL-4R サブユニットの細胞内
領域から誘導した５つのホスホペプチドのうち２つは、
濃度が１００〜３００μＭの範囲で、IL-4スタットのＤ
ＮＡ結合活性を阻害した。ＩＦＮ-g誘導ホスホペプチド
は、ＤＮＡ結合活性に影響を与えなかった。さらに、阻
害性の、IL-4R 誘導ペプチドの双方の活性は、チロシン
・ホスホリル化に大きく依存した。非ホスホリル化ペプ
チドは阻害活性を示さなかった。

【００３６】驚くことには、IL-4R から誘導した２つの
阻害性ペプチドは、１次アミノ酸配列（ＮＨ₂-ＧＰＰＧ
ＥＡＧＹＫＡＦＳＳＬＬ（配列番号１０）−ＣＯＯＨ、
及び、ＮＨ₂-ＡＳＳＧＥＥＧＹＫＰＦＱＤＬＩ（配列番
号１１）−ＣＯＯＨ）と関連する。中央に位置するホス
ホチロシンと比較して、２つのペプチドは＋１及び＋３
の位置で同一であることに注目すべきである。ＳＨ２：
ホスホチロシンペプチド相互作用の詳細な研究により、
＋１及び＋３の位置がホスホチロシンペプチド：ＳＨ２
の相互作用の選択性を特定するのに重要であろうことが
示唆された。IL-4受容体誘導ホスホペプチドが直接IL-4
スタットと相互作用するのか否かを試験するために、我
々は、精製した転写因子のＤＮＡ結合活性上での５つの
合成ペプチドの効果を調査した。IL-4誘導Thp-1 細胞か
ら精製したIL-4スタットを、２つのIL-4受容体誘導ホス
ホペプチドで培養したものは、原料核抽出物中で試験し
たとき阻害活性を示した。各々のペプチドの対応する非
ホスホリル化バージョンも分析し、先行の研究でp91 の
阻害作用を示したＩＦＮ-g受容体から誘導したチロシン
ホスホリル化ペプチドについても分析した。我々は、再
度、２つのIL-4R 誘導ペプチドによるホスホチロシン依
存阻害を観察し、ＩＦＮ-gホスホペプチドによる阻害効
果を認識しなかった。

【００３７】クーマシー染色法（Coomassie stainig ）
で判断することにより、本研究で用いたIL-4スタットは
純粋であった。２つの受容体誘導の阻害性ペプチドが、
IL-4スタットＤＮＡ結合活性を完全に除去することがで
きることがわかったので、いかなる間接的な態様の阻害
であっても触媒メカニズムが引き合いに出されなければ
ならない。あるそのようなメカニズムは、IL-4スタット
の脱ホスホリル化、及びホスホチロシンに特異的な抗体
を用いる免疫ブロット分析によって除去される可能性を
必要とするであろう。阻害性ホスホペプチドを３００μ
Ｍで培養することによって、IL-4スタットＤＮＡ結合活
性を完全に阻害することに続き、抗ホスホチロシン抗体
を用いてタンパク質をウェスターン法（Western blotti
ng）で分析した。この分析で判断すると、IL-4スタット
は、受容体誘導、阻害性ペプチドにさらすという結果だ
けではホスホチロシンを失わない。

【００３８】受容体誘導ホスホチロシンペプチドがIL-4
スタット２量体を阻害する IL-4スタット受容体から誘導した阻害性ペプチドは、IL
-4スタットのＳＨ２領域に結合し、それによって、相互
のＳＨ２：ホスホチロシン相互作用（そうでなければ、
２量体の付着を促進する）を分裂させるであろうことが
想像できた。IL-4スタットが本当に２量体の状態で存在
するのか否かを試験するために、精製したタンパク質を
独立に２つの化学架橋剤、即ちグルタルアルデヒド及び
ＤＳＧにさらした。双方の試薬により、時間依存性のIL
-4架橋が生じ、共有結合２量体を得た。全てのIL-4スタ
ットが共有結合の２量体に架橋するのに量的に十分な時
間さらしても、高次（３量体又は４量体）のオリゴマー
は観察されなかった。この架橋の限界の性質は、タンパ
ク質濃度が非常に低いときに観察されるという事実とあ
いまって、機能的なIL-4スタットが２量体の状態で存在
するという確固とした証拠をもたらす。

【００３９】IL-4スタットの単量体：２量体平衡が、Ｄ
ＮＡ結合を阻害することが観察されたIL-4受容体誘導ペ
プチドによって影響を受けるのか否かということを試験
する手段を化学架橋は提供する。精製したIL-4スタット
を、ＤＮＡ結合阻害分析で試験した同じ５つのペプチド
にさらした。短時間の培養に続いて、サンプルを、IL-4
スタットと架橋するのに量的に十分な条件下でＤＳＧに
さらした。チロシンがホスホリル化された場合、２つの
IL-4受容体誘導ペプチドは、濃度に依存するように、共
有結合IL-4スタットの形成を妨害する。同じ２つのペプ
チドの非ホスホリル化変形体をテストしたとき、効果は
観察されなかった。同じように、ＩＦＮ-g受容体から誘
導されたホスホペプチドは、ＤＳＧ媒介した架橋を妨害
しなかった。受容体誘導ホスホペプチドがＤＮＡ結合を
阻害する濃度は、IL-4スタット２量体の架橋を妨害する
のに必要な値と密接に対応する。ゆえに、もし同種の受
容体が単量体：２量体の平衡に影響を与えるのならば、
IL-4スタットをチロシンホスホリル化ペプチドと培養す
ることが、細胞内領域から誘導されること、及び、IL-4
スタットの２量体の分離によって、受容体誘導ホスホペ
プチドがＤＮＡ結合を阻害するメカニズムを表している
ことを我々は結論づけた。

【００４０】さらなる観察から、IL-4スタット活性は、
２つの特異的なチロシン残基（Ｙ５７８及びＹ６０６、
IL-4受容体の細胞内に位置する）のいずれか、又は双方
との過渡的なカップリングを必要とするということを我
々は結論付けた。IL-4受容体のこれらの領域に対応する
合成ペプチドの阻害活性が、チロシンホスホリル化を必
要とすることから、IL-4との過渡的な受容体のカップリ
ングは、チロシンホスホリル化に同様に依存する。本明
細書で報告する研究からの第２の結論は、ＤＳＧ媒介し
たIL-4スタットの架橋を選択的に阻害するIL-4受容体誘
導ホスホペプチドの能力から得られる。そのような阻害
は、ＤＮＡ結合活性を阻害するのに必要な濃度と同様な
濃度で観察された。これらの結果から、阻害ペプチドが
IL-4スタット２量体を分離し、これにより、ＤＮＡ結合
活性を阻害することが生じることがわかる。我々はさら
に、IL-4スタットは同じポリペプチド領域を使用して、
過渡的な受容体相互作用及び２量化を媒介することを結
論づけた。次の実施例は、例示のために提供するもので
あり、決して限定するものではない。

【００４１】

【実施例１】 IL-4スタットのための実験記録。IL-4依存転写因子結合
分析。 Ａ．試薬 ・IL-4スタット：ＰＢＳ中に２０μｇ／ｍｌ活性化、切
形の（truncated)（ＳＨ２領域）IL-4スタット。 ・遮断緩衝液（blocking buffer ）：ＰＢＳ中に５％Ｂ
ＳＡ、０．５％ツィーン２０（Tween 20）；室温で１時
間。 ・分析緩衝液：１００ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．６、０．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、１％グリ
セロール、０．５％ＮＰ- ４０，５０ｍＭ ＢＭＥ、１
ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、プロテアーゼ阻害剤の混合物。 ・ ³³Ｐ IL-4スタット１０×ストック：１０^-8〜１０^-6
Ｍ『冷』IL-4スタット類似体（ラベルしたIL-4スタット
類似体の２００，０００〜２５０，０００ｃｐｍで補っ
た（ベックマン・カウンター（Beckman counter
）））。スクリーニングの間、４℃の小さな冷蔵庫に
置いた。 ・プロテアーゼ阻害混合物（１０００Ｘ）：１０ｍｇト
リプシン阻害剤（ＢＭＢ＃１０９８９４）、１０ｍｇア
プロチニン（ＢＭＢ＃２３６６２４）、２５ｍｇベンズ
アミジン（シグマ＃Ｂ−６５０６）、２５ｍｇロイペプ
チン（ＢＭＢ＃１０１７１２８）、１０ｍｇ ＡＰＭＳ
Ｆ（ＢＭＢ＃９１７５７５）、及びＰＢＳ１０ｍｌ中に
２ｍＭ ＮａＶｏ₃ （シグマ＃Ｂ−６５０８）。

【００４２】Ｂ．分析プレートの調製 ・容器当りにストックIL-4スタットを１２０μｌで４℃
で一晩十分にコートした。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 ・遮断緩衝液１５０μｌで遮断した。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 Ｃ．分析 ・分析緩衝液８０μｌ／容器を添加した。 ・化合物又は抽出物１０μｌを添加した。 ・33Ｐ-IL-4 スタット（２０，０００- ２５，０００ｃ
ｐｍ／０．３ｐｍｏｌ／容器＝３×１０^-9Ｍ最終濃度）
を添加した。 ・２５℃で１５分間攪拌した。 ・２５℃でさらに４５分間培養した。 ・ＰＢＳ２００μｌで４回洗浄することにより反応を停
止した。 ・シンチレーション混合物１５０μｌを添加した。 ・トップカウントをカウントした。 Ｄ．すべての分析に対するコントロール（各々のプレー
トに位置する） a.非特異的な結合（IL-4スタットを添加しない） b.８０％阻害した低温IL-4スタット

【００４３】

【実施例２】IL-4スタットのための実験記録。IL-4受容
体ペプチド結合分析。 Ａ．試薬 ・中性化アビジン（Neutralite Avidin ）：ＰＢＳ中に
２０μｇ／ｍｌ。 ・遮断緩衝液：ＰＢＳ中に５％ＢＳＡ、０．５％ツィー
ン２０；室温で１時間。 ・分析緩衝液：１００ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．６、０．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、１％グリ
セロール、０．５％ＮＰ- ４０，５０ｍＭ ＢＭＥ、１
ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、プロテアーゼ阻害剤の混合物。 ・³³Ｐ IL-4スタット１０×ストック：１０^-8〜１０^-6
Ｍ『冷』不活性（tyr ホスホリル化（tyr-phosporylate
d ）していない）で、IL-4スタット（ラベルした、不活
性で、切形のIL-4スタット（ベックマン・カウンター）
の２００，０００〜２５０，０００ｃｐｍで補った）。
スクリーニングの間、４℃の小さな冷蔵庫に置いた。 ・プロテアーゼ阻害混合物（１０００Ｘ）：１０ｍｇト
リプシン阻害剤（ＢＭＢ＃１０９８９４）、１０ｍｇア
プロチニン（ＢＭＢ＃２３６６２４）、２５ｍｇベンズ
アミジン（シグマ＃Ｂ−６５０６）、２５ｍｇロイペプ
チン（ＢＭＢ＃１０１７１２８）、１０ｍｇ ＡＰＭＳ
Ｆ（ＢＭＢ＃９１７５７５）、及びＰＢＳ１０ｍｌ中に
２ｍＭ ＮａＶｏ₃ （シグマ＃Ｂ−６５０８）。 ・IL-4受容体ペプチド：各々のIL-4受容体ビオチニル化
ペプチドを１０^-8〜１０ ^-5Ｍ：ＰＢＳ中にＮＨ₂-ＧＰＰ
ＧＥＡＧＹＫＡＦＳＳＬＬ（配列番号１０）−ＣＯＯＨ
及びＮＨ₂-ＡＳＳＧＥＥＧＹＫＰＦＱＤＬＩ（配列番号
１１）−ＣＯＯＨであった。

【００４４】Ｂ．分析プレートの調製 ・容器当りにストック中性化アビジン１２０μｌで４℃
で一晩十分にコートした。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 ・遮断緩衝液１５０μｌで遮断した。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 Ｃ．分析 ・分析緩衝液４０μｌ／容器を添加した。 ・化合物又は抽出物１０μｌを添加した。 ・³³Ｐ-IL-4 スタット（２０，０００- ２５，０００ｃ
ｐｍ／０．１- １０ｐｍｏｌ／容器≒１０^-9−１０^-7Ｍ
最終濃度）を添加した。 ・２５℃で１５分間攪拌した。 ・２５℃でさらに４５分間培養した。 ・IL-4スタット受容体ペプチド混合物を添加した（分析
緩衝液に０．１- １０ｐｍｏｌ／４０μｌ）。 ・１時間室温で培養した。 ・ＰＢＳ２００μｌで４回洗浄することにより反応を停
止した。 ・シンチレーション混合物１５０μｌを添加した。 ・トップカウントをカウントした。 Ｄ．すべての分析に対するコントロール（各々のプレー
トに位置する） a.非特異的な結合（受容体ペプチドを添加しない） b.８０％阻害した溶解物（非ビオチニル化受容体ペプチ
ド）

【００４５】

【実施例３】IL-4スタット依存因子のための実験記録。
ＤＮＡ結合分析。 Ａ．試薬 ・中性化アビジン：ＰＢＳ中に２０μｇ／ｍｌ。 ・遮断緩衝液：ＰＢＳ中に５％ＢＳＡ、０．５％ツィー
ン２０；室温で１時間。 ・分析緩衝液：１００ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．６、０．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、１％グリ
セロール、０．５％ＮＰ- ４０，５０ｍＭ ＢＭＥ、１
ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、プロテアーゼ阻害剤の混合物。 ・ ³³Ｐ IL-4スタット１０×ストック：１０^-6〜１０^-8
Ｍ『冷』IL-4スタット（上記参照）（ラベルしたIL-4ス
タットの２００，０００〜２５０，０００ｃｐｍで補っ
た（ベックマン・カウンター））。スクリーニングの
間、４℃の小さな冷蔵庫に置いた。 ・プロテアーゼ阻害混合物（１０００Ｘ）：１０ｍｇト
リプシン阻害剤（ＢＭＢ＃１０９８９４）、１０ｍｇア
プロチニン（ＢＭＢ＃２３６６２４）、２５ｍｇベンズ
アミジン（シグマ＃Ｂ−６５０６）、２５ｍｇロイペプ
チン（ＢＭＢ＃１０１７１２８）、１０ｍｇ ＡＰＭＳ
Ｆ（ＢＭＢ＃９１７５７５）、及びＰＢＳ１０ｍｌ中に
２ｍＭ ＮａＶｏ₃ （シグマ＃Ｂ−６５０８）。 ・オリゴヌクレオチド・ストック：（特異的なビオチニ
ル化）ビオチニル化オリゴ１７ｐｍｏｌ／μｌ、IL-4ス
タット結合部位：（ＢＩＯＴＩＮ） ＧＴＡＴＩＴＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＡＡＣ（配列番号
３）

【００４６】Ｂ．分析プレートの調製 ・容器当りにストック中性化アビジン１２０μｌで４℃
で一晩十分にコートした。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 ・遮断緩衝液１５０μｌで遮断した。 ・ＰＢＳ２００μｌで２回洗浄した。 Ｃ．分析 ・分析緩衝液４０μｌ／容器を添加した。 ・化合物又は抽出物１０μｌを添加した。 ・33Ｐ-IL-4 スタット（２０，０００- ２５，０００ｃ
ｐｍ／０．１- １０ｐｍｏｌ／容器≒１０^-9−１０^-7Ｍ
最終濃度）を添加した。 ・２５℃で１５分間攪拌した。 ・２５℃でさらに４５分間培養した。 ・オリゴ混合物４０μｌを添加した（ss- ＤＮＡを１ｎ
ｇ有する分析緩衝液中１．０ｐｍｏｌ／４０μｌ）。 ・１時間室温で培養した。 ・ＰＢＳ２００μｌで４回洗浄することにより反応を停
止した。 ・シンチレーション混合物１５０μｌを添加した。 ・トップカウントをカウントした。 Ｄ．すべての分析に対するコントロール（各々のプレー
トに位置する） a.非特異的な結合（オリゴ物を添加しない） b.８０％阻害した特異的な溶解オリゴ物

【００４７】前述の発明を、明確に理解するために例示
及び実施例により、ある程度詳細に説明したが、添付の
特許請求の範囲の精神及び範囲を逸脱しない範囲で、あ
る変形及び改質がなされるのは、当業者にとって、本発
明の教示により明らかであろう。

【００４８】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３０４６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列の特徴： 特徴を表す記号：CDS 存在位置：166..2706 配列 ATCTTATTTT TCTTTTTGGT GGTGGTGGTG GAAGGGGGGA GGTGCTAGCA GGGCCAGCCT 60 TGAACTCGCT GGACAGAGCT ACAGACCTAT GGGGCCTGGA AGTGCCCGCT GAGAAAGGGA 120 GAAGACAGCA GAGGGGTTGC CGAGGCAACC TCCAAGTCCC AGATC ATG TCT CTG 174 Met Ser Leu 1 TGG GGT CTG GTC TCC AAG ATG CCC CCA GAA AAA GTG CAG CGG CTC TAT 222 Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln Arg Leu Tyr 5 10 15 GTC GAC TTT CCC CAA CAC CTG CGG CAT CTT CTG GGT GAC TGG CTG GAG 270 Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp Trp Leu Glu 20 25 30 35 AGC CAG CCC TGG GAG TTC CTG GTC GGC TCC GAC GCC TTC TGC TGC AAC 318 Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe Cys Cys Asn 40 45 50 TTG GCT AGT GCC CTA CTT TCA GAC ACT GTC CAG CAC CTT CAG GCC TCG 366 Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu Gln Ala Ser 55 60 65 GTG GGA GAG CAG GGG GAG GGG AGC ACC ATC TTG CAA CAC ATC AGC ACC 414 Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His Ile Ser Thr 70 75 80 CTT GAG AGC ATA TAT CAG AGG GAC CCC CTG AAG CTG GTG GCC ACT TTC 462 Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val Ala Thr Phe 85 90 95 AGA CAA ATA CTT CAA GGA GAG AAA AAA GCT GTT ATG GAA CAG TTC CGC 510 Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu Gln Phe Arg 100 105 110 115 CAC TTG CCA ATG CCT TTC CAC TGG AAG CAG GAA GAA CTC AAG TTT AAG 558 His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu Lys Phe Lys 120 125 130 ACA GGC TTG CGG AGG CTG CAG CAC CGA GTA GGG GAG ATC CAC CTT CTC 606 Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile His Leu Leu 135 140 145 CGA GAA GCC CTG CAG AAG GGG GCT GAG GCT GGC CAA GTG TCT CTG CAC 654 Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val Ser Leu His 150 155 160 AGC TTG ATA GAA ACT CCT GCT AAT GGG ACT GGG CCA AGT GAG GCC CTG 702 Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser Glu Ala Leu 165 170 175 GCC ATG CTA CTG CAG GAG ACC ACT GGA GAG CTA GAG GCA GCC AAA GCC 750 Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala Ala Lys Ala 180 185 190 195 CTA GTG CTG AAG AGG ATC CAG ATT TGG AAA CGG CAG CAG CAG CTG GCA 798 Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln Gln Leu Ala 200 205 210 GGG AAT GGC GCA CCG TTT GAG GAG AGC CTG GCC CCA CTC CAG GAG AGG 846 Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu Gln Glu Arg 215 220 225 TGT GAA AGC CTG GTG GAC ATT TAT TCC CAG CTA CAG CAG GAG GTA GGG 894 Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln Glu Val Gly 230 235 240 GCG GCT GGT GGG GAG CTT GAG CCC AAG ACC CGG GCA TCG CTG ACT GGC 942 Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser Leu Thr Gly 245 250 255 CGG CTG GAT GAA GTC CTG AGA ACC CTC GTC ACC AGT TGC TTC CTG GTG 990 Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys Phe Leu Val 260 265 270 275 GAG AAG CAG CCC CCC CAG GTA CTG AAG ACT CAG ACC AAG TTC CAG GCT 1038 Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys Phe Gln Ala 280 285 290 GGA GTT CGA TTC CTG TTG GGC TTG AGG TTC CTG GGG GCC CCA GCC AAG 1086 Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala Pro Ala Lys 295 300 305 CCT CCG CTG GTC AGG GCC GAC ATG GTG ACA GAG AAG CAG GCG CGG GAG 1134 Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln Ala Arg Glu 310 315 320 CTG AGT GTG CCT CAG GGT CCT GGG GCT GGA GCA GAA AGC ACT GGA GAA 1182 Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser Thr Gly Glu 325 330 335 ATC ATC AAC AAC ACT GTG CCC TTG GAG AAC AGC ATT CCT GGG AAC TGC 1230 Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro Gly Asn Cys 340 345 350 355 TGC TCT GCC CTG TTC AAG AAC CTG CTT CTC AAG AAG ATC AAG CGG TGT 1278 Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile Lys Arg Cys 360 365 370 GAG CGG AAG GGC ACT GAG TCT GTC ACA GAG GAG AAG TGC GCT GTG CTC 1326 Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys Ala Val Leu 375 380 385 TTC TCT GCC AGC TTC ACA CTT GGC CCC GGC AAA CTC CCC ATC CAG CTC 1374 Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro Ile Gln Leu 390 395 400 CAG GCC CTG TCT CTG CCC CTG GTG GTC ATC GTC CAT GGC AAC CAA GAC 1422 Gln Ala Leu Ser Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly Asn Gln Asp 405 410 415 AAC AAT GCC AAA GCC ACT ATC CTG TGG GAC AAT GCC TTC TCT GAG ATG 1470 Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe Ser Glu Met 420 425 430 435 GAC CGC GTG CCC TTT GTG GTG GCT GAG CGG GTG CCC TGG GAG AAG ATG 1518 Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp Glu Lys Met 440 445 450 TGT GAA ACT CTG AAC CTG AAG TTC ATG GCT GAG GTG GGG ACC AAC CGG 1566 Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly Thr Asn Arg 455 460 465 GGG CTG CTC CCA GAG CAC TTC CTC TTC CTG GCC CAG AAG ATC TTC AAT 1614 Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys Ile Phe Asn 470 475 480 GAC AAC AGC CTC AGT ATG GAG GCC TTC CAG CAC CGT TCT GTG TCC TGG 1662 Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser Val Ser Trp 485 490 495 TCG CAG TTC AAC AAG GAG ATC CTG CTG GGC CGT GGC TTC ACC TTT TGG 1710 Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe Thr Phe Trp 500 505 510 515 CAG TGG TTT GAT GGT GTC CTG GAC CTC ACC AAA CGC TGT CTC CGG AGC 1758 Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys Leu Arg Ser 520 525 530 TAC TGG TCT GAC CGG CTG ATC ATT GGC TTC ATC AGC AAA CAG TAC GTT 1806 Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys Gln Tyr Val 535 540 545 ACT AGC CTT CTT CTC AAT GAG CCC GAC GGA ACC TTT CTC CTC CGC TTC 1854 Thr Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu Leu Arg Phe 550 555 560 AGC GAC TCA GAG ATT GGG GGC ATC ACC ATT GCC CAT GTC ATC CGG GGC 1902 Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val Ile Arg Gly 565 570 575 CAG GAT GGC TCT CCA CAG ATA GAG AAC ATC CAG CCA TTC TCT GCC AAA 1950 Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe Ser Ala Lys 580 585 590 595 GAC CTG TCC ATT CGC TCA CTG GGG GAC CGA ATC CGG GAT CTT GCT CAG 1998 Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp Leu Ala Gln 600 605 610 CTC AAA AAT CTC TAT CCC AAG AAG CCC AAG GAT GAG GCT TTC CGG AGC 2046 Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala Phe Arg Ser 615 620 625 CAC TAC AAG CCT GAA CAG ATG GGT AAG GAT GGC AGG GGT TAT GTC CCA 2094 His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly Tyr Val Pro 630 635 640 GCT ACC ATC AAG ATG ACC GTG GAA AGG GAC CAA CCA CTT CCT ACC CCA 2142 Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu Pro Thr Pro 645 650 655 GAG CTC CAG ATG CCT ACC ATG GTG CCT TCT TAT GAC CTT GGA ATG GCC 2190 Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu Gly Met Ala 660 665 670 675 CCT GAT TCC TCC ATG AGC ATG CAG CTT GGC CCA GAT ATG GTG CCC CAG 2238 Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met Val Pro Gln 680 685 690 GTG TAC CCA CCA CAC TCT CAC TCC ATC CCC CCG TAT CAA GGC CTC TCC 2286 Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln Gly Leu Ser 695 700 705 CCA GAA GAA TCA GTC AAC GTG TTG TCA GCC TTC CAG GAG CCT CAC CTG 2334 Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu Pro His Leu 710 715 720 CAG ATG CCC CCC AGC CTG GGC CAG ATG AGC CTG CCC TTT GAC CAG CCT 2382 Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe Asp Gln Pro 725 730 735 CAC CCC CAG GGC CTG CTG CCG TGC CAG CCT CAG GAG CAT GCT GTG TCC 2430 His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His Ala Val Ser 740 745 750 755 AGC CCT GAC CCC CTG CTC TGC TCA GAT GTG ACC ATG GTG GAA GAC AGC 2478 Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val Glu Asp Ser 760 765 770 TGC CTG AGC CAG CCA GTG ACA GCG TTT CCT CAG GGC ACT TGG ATT GGT 2526 Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr Trp Ile Gly 775 780 785 GAA GAC ATA TTC CCT CCT CTG CTG CCT CCC ACT GAA CAG GAC CTC ACT 2574 Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln Asp Leu Thr 790 795 800 AAG CTT CTC CTG GAG GGG CAA GGG GAG TCG GGG GGA GGG TCC TTG GGG 2622 Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly Ser Leu Gly 805 810 815 GCA CAG CCC CTC CTG CAG CCC TCC CAC TAT GGG CAA TCT GGG ATC TCA 2670 Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser Gly Ile Ser 820 825 830 835 ATG TCC CAC ATG GAC CTA AGG GCC AAC CCC AGT TGG TGATCCCAGC 2716 Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp 840 845 TGGAGGGAGA ACCCAAAGAG ACAGCTCTTC TACTACCCCC ACAGACCTGC TCTGGACACT 2776 TGCTCATGCC CTGCCAAGCA GCAGATGGGG AGGGTGCCCT CCTATCCCCA CCTACTCCTG 2836 GGTCAGGAGG AAAAGACTAA CAGGAGAATG CACAGTGGGT GGAGCCAATC CACTCCTTCC 2896 TTTCTATCAT TCCCCTGCCC ACCTCCTTCC AGCACTGACT GGAAGGGAAG TTCAGGCTCT 2956 GAGACACGCC CCAACATGCC TGCACCTGCA GCGCGCACAC GCACGCACAC ACACATACAG 3016 AGCTCTCTGA GGGTGATGGG GCTGAGCAGG 3046

【００４９】配列番号：２ 配列の長さ：８４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Ser Leu Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln 1 5 10 15 Arg Leu Tyr Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp 20 25 30 Trp Leu Glu Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe 35 40 45 Cys Cys Asn Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu 50 55 60 Gln Ala Ser Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His 65 70 75 80 Ile Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val 85 90 95 Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu 100 105 110 Gln Phe Arg His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu 115 120 125 Lys Phe Lys Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile 130 135 140 His Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val 145 150 155 160 Ser Leu His Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser 165 170 175 Glu Ala Leu Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala 180 185 190 Ala Lys Ala Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln 195 200 205 Gln Leu Ala Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu 210 215 220 Gln Glu Arg Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln 225 230 235 240 Glu Val Gly Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser 245 250 255 Leu Thr Gly Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys 260 265 270 Phe Leu Val Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys 275 280 285 Phe Gln Ala Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala 290 295 300 Pro Ala Lys Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln 305 310 315 320 Ala Arg Glu Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser 325 330 335 Thr Gly Glu Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro 340 345 350 Gly Asn Cys Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile 355 360 365 Lys Arg Cys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys 370 375 380 Ala Val Leu Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro 385 390 395 400 Ile Gln Leu Gln Ala Leu Ser Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly 405 410 415 Asn Gln Asp Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe 420 425 430 Ser Glu Met Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp 435 440 445 Glu Lys Met Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly 450 455 460 Thr Asn Arg Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys 465 470 475 480 Ile Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser 485 490 495 Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe 500 505 510 Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys 515 520 525 Leu Arg Ser Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys 530 535 540 Gln Tyr Val Thr Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu 545 550 555 560 Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val 565 570 575 Ile Arg Gly Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe 580 585 590 Ser Ala Lys Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp 595 600 605 Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala 610 615 620 Phe Arg Ser His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly 625 630 635 640 Tyr Val Pro Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu 645 650 655 Pro Thr Pro Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu 660 665 670 Gly Met Ala Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met 675 680 685 Val Pro Gln Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln 690 695 700 Gly Leu Ser Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu 705 710 715 720 Pro His Leu Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe 725 730 735 Asp Gln Pro His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His 740 745 750 Ala Val Ser Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val 755 760 765 Glu Asp Ser Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr 770 775 780 Trp Ile Gly Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln 785 790 795 800 Asp Leu Thr Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly 805 810 815 Ser Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser 820 825 830 Gly Ile Ser Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp 835 840 845

【００５０】配列番号：３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GTATTTCCCA GAAAAGGAAC 20

【００５１】配列番号：４ 配列の長さ：１８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CTCTTACCTG AGAAATGG 18

【００５２】配列番号：５ 配列の長さ：１７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GAATTTCTAA GAAAGGG 17

【００５３】配列番号：６ 配列の長さ：１６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ACATTCACAT GAAGTA 16

【００５４】配列番号：７ 配列の長さ：１６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 AACTTCCCAA GAACAG 16

【００５５】配列番号：８ 配列の長さ：１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 AAGGTTTCAG AAGGG 15

【００５６】配列番号：９ 配列の長さ：１７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CCTTCCCCTA GCAACAG 17

【００５７】配列番号：１０ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly Tyr Lys Ala Phe Ser Ser Leu Leu 1 5 10 15

【００５８】配列番号：１１ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Ser Ser Gly Glu Glu Gly Tyr Lys Pro Phe Gln Asp Leu Ile 1 5 10 15

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 インツァオ ホウ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94080 サウス サン フランシスコ イ ースト グランド アベニュー 270 テ ュラリク インコーポレイテッド内

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも１つの天然細胞内IL-4結合タ
   ーゲットと選択的に結合可能な、単離したインターロイ
   キン-4シグナルトランスデューサー及び転写ペプチド活
   性化体（IL-4スタットペプチド）。
2. 【請求項２】 配列番号２の残基１と４０により境界を
   定めた配列内の配列を有する請求項１記載のIL-4スタッ
   トペプチド。
3. 【請求項３】 配列番号２の残基４０１と６５０により
   境界を定めた配列内の配列を有する請求項１記載のIL-4
   スタットペプチド。
4. 【請求項４】 請求項１記載のIL-4スタットペプチドを
   コードする核酸。
5. 【請求項５】 請求項１記載のIL-4スタットペプチドと
   選択的に結合するサイトカイン受容体ペプチドであっ
   て、前記サイトカイン受容体ペプチドがチロシン残基を
   含有し、前記サイトカイン受容体が、天然で該サイトカ
   イン受容体ペプチドと結合するアミノ酸残基以外のもの
   によって結合されているサイトカイン受容体ペプチド。
6. 【請求項６】 前記ペプチドが、ＧＰＰＧＥＡＧＹＫＡ
   ＦＳＳＬＬ（配列番号１０）又はＡＳＳＧＥＥＧＹＫＰ
   ＦＱＤＬＩ（配列番号１１）のアミノ酸配列である請求
   項５記載のサイトカイン受容体ペプチド。
7. 【請求項７】 請求項５記載のサイトカイン受容体ペプ
   チドをコードする核酸。
8. 【請求項８】 請求項１又は請求項５記載のペプチドと
   選択的に結合可能な抗体。
9. 【請求項９】 IL-4スタットによって調節される遺伝子
   の発現と関連する病気の診察又は処置に有用な薬物を同
   定する方法であって、請求項１記載のIL-4スタットペプ
   チドと、前記IL-4スタットペプチドと選択的に結合可能
   な天然細胞内IL-4スタット結合ターゲットの少なくとも
   一部と、候補薬物とを含有する混合物を形成する工程、
   前記候補薬物が存在しない場合、前記IL-4スタットペプ
   チドが前記結合ターゲットの一部と選択的に結合する条
   件下で前記混合物を培養する工程、並びに、前記IL-4ス
   タットペプチドと前記結合ターゲットの一部との選択的
   結合が存在するか、否かを検知する工程を有し、前記選
   択的結合が存在しなければ前記候補薬物がIL-4スタット
   依存遺伝子発現を阻害可能な薬物であることを示す、IL
   -4スタットによって調節される遺伝子の発現と関連する
   病気の診察又は処置に有用な薬物を同定する方法。
10. 【請求項１０】 前記結合ターゲットの一部が、請求項
    ５記載のサイトカイン受容体ペプチド、又は配列ＴＴＣ
    及びＧＡＡの２つのトリヌクレオチドを含有する核酸で
    あり、前記トリヌクレオチドが１〜５個のヌクレオチド
    によって分離する、請求項９記載の方法。