JPH085918B2 - モノクロ−ナル抗体及び分析 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体及び分析Info
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- JPH085918B2 JPH085918B2 JP61501630A JP50163086A JPH085918B2 JP H085918 B2 JPH085918 B2 JP H085918B2 JP 61501630 A JP61501630 A JP 61501630A JP 50163086 A JP50163086 A JP 50163086A JP H085918 B2 JPH085918 B2 JP H085918B2
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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Description
【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 本発明は、モノクローナル抗体、これらモノクローナ
ル抗体を使用する診断方法、並びに活性化Ｂ−細胞の検
出に関するものである。
ル抗体を使用する診断方法、並びに活性化Ｂ−細胞の検
出に関するものである。
Ｂ−リンパ球は、細菌の細胞外相及びウイルス感染に
対する体液性又は循環性の免疫反応に関与する。特定の
抗原若しくはミトゲン刺戟への露出により活性化される
と、ヒトＢ−リンパ球は増殖し、次いで抗体分泌性細胞
まで分化する。活性化の期間中、Ｂ−細胞は寸法が増大
し、DNAとRNAとの両者を合成すると共に、細胞表面構造
の変化を受ける。Ｂ−細胞における新生物変化、たとえ
ばＢ−細胞起源の白血病又はリンパ腫も、細胞表面抗原
の発現における変化を誘発する。
対する体液性又は循環性の免疫反応に関与する。特定の
抗原若しくはミトゲン刺戟への露出により活性化される
と、ヒトＢ−リンパ球は増殖し、次いで抗体分泌性細胞
まで分化する。活性化の期間中、Ｂ−細胞は寸法が増大
し、DNAとRNAとの両者を合成すると共に、細胞表面構造
の変化を受ける。Ｂ−細胞における新生物変化、たとえ
ばＢ−細胞起源の白血病又はリンパ腫も、細胞表面抗原
の発現における変化を誘発する。
トーレ−ローソン等（1982）、セル、第30巻、第415
〜425頁は、ミトゲン又はエプスタイン−バール・ウイ
ルス（EBV）による刺戟の２〜３日後にＢ−リンパ球の
表面に出現するＢ−細胞制限抗原（B-LAST-1）を記載し
ている。B-LAST-1は分子量45kdを有する一本鎖ポリペプ
チドである。さらに、B-LAST-1は慢性リンパ球白血症
（CLL）細胞及び分化の不十分なリンパ腫細胞にも見ら
れる。マウス起源の抗−B-LAST-1モノクローナル抗体の
アイソタイプは、IgG2bであると報告されている。
〜425頁は、ミトゲン又はエプスタイン−バール・ウイ
ルス（EBV）による刺戟の２〜３日後にＢ−リンパ球の
表面に出現するＢ−細胞制限抗原（B-LAST-1）を記載し
ている。B-LAST-1は分子量45kdを有する一本鎖ポリペプ
チドである。さらに、B-LAST-1は慢性リンパ球白血症
（CLL）細胞及び分化の不十分なリンパ腫細胞にも見ら
れる。マウス起源の抗−B-LAST-1モノクローナル抗体の
アイソタイプは、IgG2bであると報告されている。
ヨコチ等（1982）、ジヤーナル・イミユノロジー、第
128巻、第823-827頁は、EBV及びミトゲン活性化された
ヒト及びその他の非ヒト霊長動物のＢ−細胞の表面に出
現するＢ−細胞抗原、すなわちBB-1を報告している。BB
-1抗原の分子量は37,000である。発現はEBV活性化の４
〜５日後に検出され、かつ７日後にピークとなる。さら
に、BB-1は試験された骨髄腫の50％にも見出された。
128巻、第823-827頁は、EBV及びミトゲン活性化された
ヒト及びその他の非ヒト霊長動物のＢ−細胞の表面に出
現するＢ−細胞抗原、すなわちBB-1を報告している。BB
-1抗原の分子量は37,000である。発現はEBV活性化の４
〜５日後に検出され、かつ７日後にピークとなる。さら
に、BB-1は試験された骨髄腫の50％にも見出された。
本発明は活性化ヒトＢ−細胞上の抗原決定基を認識す
るモノクローナル抗体を提供し、その抗原はB-LAST-1
〔トーレ−ローソン等（1982）、セル、第30巻、第415-
425頁に記載されている〕及びBB-1〔ヨコチ等（198
2）、ジヤーナル・イミユノロジー、第128巻、第823-82
7頁〕とは異なる蛋白質であることを特徴とする。この
抗体は、未刺戟のヒトＢ−細胞に対し実質的に反応しな
い。
るモノクローナル抗体を提供し、その抗原はB-LAST-1
〔トーレ−ローソン等（1982）、セル、第30巻、第415-
425頁に記載されている〕及びBB-1〔ヨコチ等（198
2）、ジヤーナル・イミユノロジー、第128巻、第823-82
7頁〕とは異なる蛋白質であることを特徴とする。この
抗体は、未刺戟のヒトＢ−細胞に対し実質的に反応しな
い。
さらに本発明は、還元条件下で約75,000ダルトンの見
掛分子量を有しかつ非還元条件下で67,000ダルトンの見
掛分子量を有する一本鎖ポリペプチドの抗原決定子と実
質的に同一の抗原決定子を有するほぼ純粋な蛋白をも提
供し、一本鎖ポリペプチドは活性化ヒトＢ−細胞の表面
に存在する蛋白である。
掛分子量を有しかつ非還元条件下で67,000ダルトンの見
掛分子量を有する一本鎖ポリペプチドの抗原決定子と実
質的に同一の抗原決定子を有するほぼ純粋な蛋白をも提
供し、一本鎖ポリペプチドは活性化ヒトＢ−細胞の表面
に存在する蛋白である。
他の面において本発明は、抗原蛋白の製造方法を提供
し、この方法はエプスタイン−バール・ウイルス、ヨウ
シュヤマゴボウミトゲン、蛋白Ａ又は抗−免疫グロブリ
ンにより活性化された末梢若しくは脾臓−ヒトＢ−細胞
を培養し、またはバーキツトリンパ腫細胞ラインRamos
若しくはプラスマ細胞白血病ラインRPMI8226を培養し、
かつこれら細胞から蛋白を分離することを特徴とする。
し、この方法はエプスタイン−バール・ウイルス、ヨウ
シュヤマゴボウミトゲン、蛋白Ａ又は抗−免疫グロブリ
ンにより活性化された末梢若しくは脾臓−ヒトＢ−細胞
を培養し、またはバーキツトリンパ腫細胞ラインRamos
若しくはプラスマ細胞白血病ラインRPMI8226を培養し、
かつこれら細胞から蛋白を分離することを特徴とする。
さらに本発明は、本発明の抗原を発現する細胞の存在
につき生物学的試料を分析しかつ本発明の抗原を発現す
る細胞に対する抗体の存在につき生物学的試料を分析す
るのに有用なキットをも提供する。これらのキツトは１
個若しくはそれ以上の容器を備え、そのそれぞれは別々
に検知可能に標識した又は標識されていない抗体、或い
は本発明の抗原を含有すると共に、他の分室には免疫複
合体の形成を検出する手段を備える。
につき生物学的試料を分析しかつ本発明の抗原を発現す
る細胞に対する抗体の存在につき生物学的試料を分析す
るのに有用なキットをも提供する。これらのキツトは１
個若しくはそれ以上の容器を備え、そのそれぞれは別々
に検知可能に標識した又は標識されていない抗体、或い
は本発明の抗原を含有すると共に、他の分室には免疫複
合体の形成を検出する手段を備える。
図面において、第１図は抗‐Ig抗体で活性化された脾
臓Ｂ−細胞に対する抗−B1及び抗−B5モノクローナル抗
体の反応性を示す一連のヒストグラムであり、 第２図は抗−Ig抗体で活性化する前（Ａ）及び活性化
した後（Ｂ）における脾臓Ｂ−細胞に対する抗−B1及び
抗−B5モノクローナル抗体の反応性を示す一対のヒスト
グラムであり、 第３図は抗−Ig抗体で活性化されていない（Ａ）及び
抗−Ig抗体で活性化されている（Ｂ）脾臓Ｂ−細胞、並
びに活性化されていない単核細胞（Ｃ）に対する抗−B1
及び抗−B5モノクローナル抗体の反応性を示す一連のヒ
ストグラムであり、 第４図は抗−B5モノクローナル抗体により免疫沈降さ
れた標識細胞表面蛋白のSDS-PAGE特性表示である。
臓Ｂ−細胞に対する抗−B1及び抗−B5モノクローナル抗
体の反応性を示す一連のヒストグラムであり、 第２図は抗−Ig抗体で活性化する前（Ａ）及び活性化
した後（Ｂ）における脾臓Ｂ−細胞に対する抗−B1及び
抗−B5モノクローナル抗体の反応性を示す一対のヒスト
グラムであり、 第３図は抗−Ig抗体で活性化されていない（Ａ）及び
抗−Ig抗体で活性化されている（Ｂ）脾臓Ｂ−細胞、並
びに活性化されていない単核細胞（Ｃ）に対する抗−B1
及び抗−B5モノクローナル抗体の反応性を示す一連のヒ
ストグラムであり、 第４図は抗−B5モノクローナル抗体により免疫沈降さ
れた標識細胞表面蛋白のSDS-PAGE特性表示である。
活性化Ｂ−細胞の作成 正常なヒト脾臓Ｂ−リンパ球を、10％のFCSと2mMのグ
ルタミンと1mMのピルビン酸ナトリウムとを補充したRPM
I1640中にて組織培養フラスコ内で1.5×106個の細胞/ml
にてそれぞれ４回異なる刺戟を与えながら１日間、３日
間及び６日間培養した。（１）ヨウシュヤマゴボウミト
ゲン（PWM）:1:300の最終濃度。１日間、３日間及び６
日間にわたり全脾臓単核細胞を使用した。（２）抗−I
g:アフィニティー精製したウサギ抗−ヒトIgをアフイゲ
ル702ビーズに結合させ、ウシ血清アルブミン、抗−B1
若しくは抗−B2抗体（それらはいずれもＢ細胞刺戟を示
さない）に結合されているアフイゲル702ビーズを試験
することにより特異性を検査した。１日目及び３日目の
刺戟につき抗−Igビーズを、高度に精製されたＢ細胞と
共に培養し、これらＢ細胞は脾臓単核細胞のＥロゼット
陰性フラクシヨンを抗−Mo1、抗−Mo2、抗−T4及び抗−
T8で溶解させる（補体を追加）ことにより得られた。６
日目の刺戟は、未分画の脾臓単核細胞を使用した。
（３）蛋白A:蛋白Ａは10g/mlの最終濃度で使用した。上
記したように、高度精製したＢ細胞は1.5×106個/mlの
濃度にて１日間及び３日間培養した、６日目の刺戟は未
分画の脾臓単核細胞を利用した。（４）EBV:脾臓単核細
胞のＥロゼット陰性フラクシヨンをEBV（EBV産生するキ
ヌザル細胞ラインB955からの1:4希釈上澄液）と共に１
日間、３日間及び６日間培養した。全活性化試料の表現
型分析な先立ち、これら細胞を収穫しかつ抗−Mo1、抗
−Mo2、抗−T4及び抗−T8で溶解させ、（補体を追
加）、それぞれ単核細胞及びＴ細胞を清澄させ、かつこ
れら試料からＢ細胞フラクシヨンを濃縮した。
ルタミンと1mMのピルビン酸ナトリウムとを補充したRPM
I1640中にて組織培養フラスコ内で1.5×106個の細胞/ml
にてそれぞれ４回異なる刺戟を与えながら１日間、３日
間及び６日間培養した。（１）ヨウシュヤマゴボウミト
ゲン（PWM）:1:300の最終濃度。１日間、３日間及び６
日間にわたり全脾臓単核細胞を使用した。（２）抗−I
g:アフィニティー精製したウサギ抗−ヒトIgをアフイゲ
ル702ビーズに結合させ、ウシ血清アルブミン、抗−B1
若しくは抗−B2抗体（それらはいずれもＢ細胞刺戟を示
さない）に結合されているアフイゲル702ビーズを試験
することにより特異性を検査した。１日目及び３日目の
刺戟につき抗−Igビーズを、高度に精製されたＢ細胞と
共に培養し、これらＢ細胞は脾臓単核細胞のＥロゼット
陰性フラクシヨンを抗−Mo1、抗−Mo2、抗−T4及び抗−
T8で溶解させる（補体を追加）ことにより得られた。６
日目の刺戟は、未分画の脾臓単核細胞を使用した。
（３）蛋白A:蛋白Ａは10g/mlの最終濃度で使用した。上
記したように、高度精製したＢ細胞は1.5×106個/mlの
濃度にて１日間及び３日間培養した、６日目の刺戟は未
分画の脾臓単核細胞を利用した。（４）EBV:脾臓単核細
胞のＥロゼット陰性フラクシヨンをEBV（EBV産生するキ
ヌザル細胞ラインB955からの1:4希釈上澄液）と共に１
日間、３日間及び６日間培養した。全活性化試料の表現
型分析な先立ち、これら細胞を収穫しかつ抗−Mo1、抗
−Mo2、抗−T4及び抗−T8で溶解させ、（補体を追
加）、それぞれ単核細胞及びＴ細胞を清澄させ、かつこ
れら試料からＢ細胞フラクシヨンを濃縮した。
抗−B5モノクローナル抗体の作成 ６週令の雌BALB/Cマウスに、リン酸塩緩衝塩水（PB
S）における凍結保存したＢ細胞拡散細網肉腫（DHL）細
胞の５×106個を腹腔内接種した。これらの腫瘍細胞
は、モノクローナル細胞表面IgM、Ｒ並びにＢ細胞関連
抗原Ia、B1及びB4を発現する点においてＢ細胞起源であ
る。これに対し、これらの腫瘍細胞は、一般的な急性白
血病抗原（CALLA）;T細胞抗原T3、T4、T8及びT11;並び
に骨髄性／単核細胞抗原Mo1、Mo2及びMY7に対するモノ
クローナル抗体に対し非反応性であつた。28日後、この
動物に５×106個の腫瘍細胞を静脈内接種し、かつナド
ラー等により〔ジヤーナル・イミユノロジー（1980）、
第125巻、第570頁〕に記載された改変を伴うコーラー及
びミルスタイン〔ネイチヤー（1977）、第256巻、第495
頁〕の方法により体細胞のハイブリツド化を行なつた。
ネズミ脾細胞（1.5×108）に、30％ポリエチレングリコ
ール並びに２×107個のP3/NS1/1-Ag4-1骨髄腫細胞を有
するダルベッコのMEMを融合させた。融合後、これら細
胞をアミノプテリン含有倍地中で５％CO2の湿潤雰囲気
下に37℃で培養した。10〜28日後、約300種の巨視的ク
ローンを同定し、そのうち125種が間接的免疫螢光分析
で測定して免疫化DHL細胞に対し反応性であつた。要す
るに、0.5〜１×106個の洗浄した生存DHL細胞を、増殖
を示すハイブリドーマ培養物からの上澄液100μｌで処
理し、４℃にて30分間培養しかつ３回洗浄した。つい
で、細胞をヤギ抗−マウスIgG及びヤギ抗−マウスIgMの
1:50希釈物100μｌで処理し、フルオレセインイソチオ
シアネートと結合させ、４℃にて30分間培養し、３回洗
浄し、EPICSVセルソータで分析した。陽性細胞の割合
を、EASY免疫プログラムを用いて測定した。次いで、産
生クローンを分画末梢血液及び腫瘍細胞のパネルでスク
リーニングした。抗−B5と命名した１種のハイブリツド
クローンは、免疫化DHL細胞、数種の他のＢ細胞DHL細胞
ラインと反応することが判明したが、これらは分画末梢
血液単核細胞に対しては反応性でなかつた。次いで、ハ
イブリツドクローン抗−B5を限界希釈により３回サブク
ローン化させ、かつBALB/Cマウスに移して悪性腹水を生
成させた。上澄液及び腹水抗−B5は、間接的免疫螢光分
析により同様な反応性パターンを有することが示され
た。B5腹水は、1/20,000倍希釈まで免疫化DHL細胞に対
し反応性を示したが、それは、1/50,000倍希釈でバック
グラウンドまで減少した。B5抗体は、マウスIgMアイソ
タイプであることが決定された。その後の全実験におい
て、B5腹水を使用した。
S）における凍結保存したＢ細胞拡散細網肉腫（DHL）細
胞の５×106個を腹腔内接種した。これらの腫瘍細胞
は、モノクローナル細胞表面IgM、Ｒ並びにＢ細胞関連
抗原Ia、B1及びB4を発現する点においてＢ細胞起源であ
る。これに対し、これらの腫瘍細胞は、一般的な急性白
血病抗原（CALLA）;T細胞抗原T3、T4、T8及びT11;並び
に骨髄性／単核細胞抗原Mo1、Mo2及びMY7に対するモノ
クローナル抗体に対し非反応性であつた。28日後、この
動物に５×106個の腫瘍細胞を静脈内接種し、かつナド
ラー等により〔ジヤーナル・イミユノロジー（1980）、
第125巻、第570頁〕に記載された改変を伴うコーラー及
びミルスタイン〔ネイチヤー（1977）、第256巻、第495
頁〕の方法により体細胞のハイブリツド化を行なつた。
ネズミ脾細胞（1.5×108）に、30％ポリエチレングリコ
ール並びに２×107個のP3/NS1/1-Ag4-1骨髄腫細胞を有
するダルベッコのMEMを融合させた。融合後、これら細
胞をアミノプテリン含有倍地中で５％CO2の湿潤雰囲気
下に37℃で培養した。10〜28日後、約300種の巨視的ク
ローンを同定し、そのうち125種が間接的免疫螢光分析
で測定して免疫化DHL細胞に対し反応性であつた。要す
るに、0.5〜１×106個の洗浄した生存DHL細胞を、増殖
を示すハイブリドーマ培養物からの上澄液100μｌで処
理し、４℃にて30分間培養しかつ３回洗浄した。つい
で、細胞をヤギ抗−マウスIgG及びヤギ抗−マウスIgMの
1:50希釈物100μｌで処理し、フルオレセインイソチオ
シアネートと結合させ、４℃にて30分間培養し、３回洗
浄し、EPICSVセルソータで分析した。陽性細胞の割合
を、EASY免疫プログラムを用いて測定した。次いで、産
生クローンを分画末梢血液及び腫瘍細胞のパネルでスク
リーニングした。抗−B5と命名した１種のハイブリツド
クローンは、免疫化DHL細胞、数種の他のＢ細胞DHL細胞
ラインと反応することが判明したが、これらは分画末梢
血液単核細胞に対しては反応性でなかつた。次いで、ハ
イブリツドクローン抗−B5を限界希釈により３回サブク
ローン化させ、かつBALB/Cマウスに移して悪性腹水を生
成させた。上澄液及び腹水抗−B5は、間接的免疫螢光分
析により同様な反応性パターンを有することが示され
た。B5腹水は、1/20,000倍希釈まで免疫化DHL細胞に対
し反応性を示したが、それは、1/50,000倍希釈でバック
グラウンドまで減少した。B5抗体は、マウスIgMアイソ
タイプであることが決定された。その後の全実験におい
て、B5腹水を使用した。
寄託 ハイブリドーマB5と命名した抗−B5−産生ハイブリド
ーマ細胞ラインをアメリカン・タイプ・カルチヤー・コ
レクシヨン、ロツクビル在、MDに寄託し、ATCC受託番号
第HB8716が付与された。
ーマ細胞ラインをアメリカン・タイプ・カルチヤー・コ
レクシヨン、ロツクビル在、MDに寄託し、ATCC受託番号
第HB8716が付与された。
活性化Ｂ−細胞表面抗原の発現 第Ｉ表に示したように、培養前にはこれら細胞はB5を
発現しなかつた。培地のみの存在下では３日間の培養後
に約10〜15％の細胞がB5を発現したが、これら細胞の生
存性は僅か10〜20％であつた。第１図に示したように蛋
白Ａ、抗−Ig抗体又はEBVで刺戟すると（生存性は約70
〜80％）、約10〜15％の細胞が１日後にB5を弱く発現し
たのに対し、３日間の培養により65％の細胞がより強度
に抗原を発現した。６日目のB5の発現レベルは１日目と
同様であり、かつ10日目（抗−Ig抗体の存在下）ではB5
抗原の発現が再びバツクグランドレベルとなつた。PWM
は、細胞がB5並びに抗−Ig抗体、EBV若しくは蛋白Ａを
発現するよう誘導させないと思われ、細胞の個数はバツ
クグランドの僅か２倍であつた。
発現しなかつた。培地のみの存在下では３日間の培養後
に約10〜15％の細胞がB5を発現したが、これら細胞の生
存性は僅か10〜20％であつた。第１図に示したように蛋
白Ａ、抗−Ig抗体又はEBVで刺戟すると（生存性は約70
〜80％）、約10〜15％の細胞が１日後にB5を弱く発現し
たのに対し、３日間の培養により65％の細胞がより強度
に抗原を発現した。６日目のB5の発現レベルは１日目と
同様であり、かつ10日目（抗−Ig抗体の存在下）ではB5
抗原の発現が再びバツクグランドレベルとなつた。PWM
は、細胞がB5並びに抗−Ig抗体、EBV若しくは蛋白Ａを
発現するよう誘導させないと思われ、細胞の個数はバツ
クグランドの僅か２倍であつた。
B5が活性化Ｂ細胞で発現されるのをさらに証明するた
め、Ｂ細胞につき濃縮した脾臓単核細胞をビーズに結合
された抗−Igで３日間刺戟した。生存細胞を収穫し、か
つ直接にフルオレセイン化した抗−B1及び直接にビオチ
ニル化した抗−B5で標識し、テキサス−レツド−アビジ
ンで発色させ、次いで二重レーザーフローサイトメトリ
ー分析によつて測定した。第２図に示したように、パネ
ルＡの未刺戟細胞はB1抗原のみを発現したが、B5を発現
しなかつた。抗−Igと共に３日間培養した後、全細胞は
B5を発現すると共にB1抗原をも発現した。
め、Ｂ細胞につき濃縮した脾臓単核細胞をビーズに結合
された抗−Igで３日間刺戟した。生存細胞を収穫し、か
つ直接にフルオレセイン化した抗−B1及び直接にビオチ
ニル化した抗−B5で標識し、テキサス−レツド−アビジ
ンで発色させ、次いで二重レーザーフローサイトメトリ
ー分析によつて測定した。第２図に示したように、パネ
ルＡの未刺戟細胞はB1抗原のみを発現したが、B5を発現
しなかつた。抗−Igと共に３日間培養した後、全細胞は
B5を発現すると共にB1抗原をも発現した。
B5はＢ−細胞起源の細胞ライン及び腫瘍細胞で発現さ
れる。第２表に示すように、抗−B5はEBV形質転換リン
パ芽球Ｂ細胞ライン、バーキツトリンパ腫ライン、５種
のDHLラインのうち４種、及びプラスマ細胞白血病細胞
ラインRPMI8226の全てを包含するＢ系列の細胞ラインに
対し反応性であつた。早期の新生物Ｂ細胞起源であるこ
とが知られた非Ｔ細胞ALLラインLaz220及びCML急性化
（blast crisis）ラインNalm1の両者は抗−B5に対し非
反応性であつた。Ｔ細胞ライン又はIa＋Ｔ細胞クローン
については反応性が見られなかつた。これらの結果、並
びにB5骨髄性細胞ラインHL-60、KG-1、U937及びSU-DHL1
及び赤血球ラインK562の発現欠如は、抗−B5がＢ細胞誘
導体の細胞に対し制限された反応性を有することを示し
ている。
れる。第２表に示すように、抗−B5はEBV形質転換リン
パ芽球Ｂ細胞ライン、バーキツトリンパ腫ライン、５種
のDHLラインのうち４種、及びプラスマ細胞白血病細胞
ラインRPMI8226の全てを包含するＢ系列の細胞ラインに
対し反応性であつた。早期の新生物Ｂ細胞起源であるこ
とが知られた非Ｔ細胞ALLラインLaz220及びCML急性化
（blast crisis）ラインNalm1の両者は抗−B5に対し非
反応性であつた。Ｔ細胞ライン又はIa＋Ｔ細胞クローン
については反応性が見られなかつた。これらの結果、並
びにB5骨髄性細胞ラインHL-60、KG-1、U937及びSU-DHL1
及び赤血球ラインK562の発現欠如は、抗−B5がＢ細胞誘
導体の細胞に対し制限された反応性を有することを示し
ている。
a.陽性程度はフローサイトメトリーによつて定量評価し
た。O:バツクグランド と比較して検出しうる反応性な
し；＋：弱乃至中庸（１日目のB5、第２図） ；＋
＋：強力（３日目のB5、第２図）；＋＋＋：最も強力な
反応性（３日目 のB1、第２図）。
た。O:バツクグランド と比較して検出しうる反応性な
し；＋：弱乃至中庸（１日目のB5、第２図） ；＋
＋：強力（３日目のB5、第２図）；＋＋＋：最も強力な
反応性（３日目 のB1、第２図）。
各種のＢ−細胞悪性に対する抗−B5の反応性を次いで
検査した（第３表）。このシリーズの新生物は、正常な
Ｂ細胞分化の段階を示す。試験した非Ｔ細胞急性リンパ
芽球白血球（ALL）は全て、Ia及びB4の発現によりＢ−
細胞起源であつた。これら早期の新生物Ｂ細胞は、いず
れもB5を発現しなかつた。Ｂ細胞慢性リンパ球白血病
（CLL）及び検査したDHLの約半数はB5を発現し、それよ
り小割合の貧弱に分化したリンパ球リンパ腫（PDL）は
抗原を発現した。検査したワルデンストロームの高分子
グロブリン血症細胞及び骨髄腫におけるB5の発現欠如と
共に、B5抗原の発現は正常Ｂ細胞分化の中間段階（mid-
stage）に相当する細胞に限ぎられた。リンパ芽球リン
パ腫及びDHLを含むＴ細胞由来のALL、CLL及びＴ細胞非
ホジキンス氏リンパ腫を有する患者からの細胞は抗−B5
に対し非反応性であつた。さらに、B5抗原は急性骨髄芽
細胞白血病（AML）を有する患者からの細胞で発現しな
かつた。これらの観察はB5のＢ細胞特異性を確認すると
共に、B5が正常Ｂ細胞分化の中間段階におけるＢリンパ
球の集団で発現されることを示している。
検査した（第３表）。このシリーズの新生物は、正常な
Ｂ細胞分化の段階を示す。試験した非Ｔ細胞急性リンパ
芽球白血球（ALL）は全て、Ia及びB4の発現によりＢ−
細胞起源であつた。これら早期の新生物Ｂ細胞は、いず
れもB5を発現しなかつた。Ｂ細胞慢性リンパ球白血病
（CLL）及び検査したDHLの約半数はB5を発現し、それよ
り小割合の貧弱に分化したリンパ球リンパ腫（PDL）は
抗原を発現した。検査したワルデンストロームの高分子
グロブリン血症細胞及び骨髄腫におけるB5の発現欠如と
共に、B5抗原の発現は正常Ｂ細胞分化の中間段階（mid-
stage）に相当する細胞に限ぎられた。リンパ芽球リン
パ腫及びDHLを含むＴ細胞由来のALL、CLL及びＴ細胞非
ホジキンス氏リンパ腫を有する患者からの細胞は抗−B5
に対し非反応性であつた。さらに、B5抗原は急性骨髄芽
細胞白血病（AML）を有する患者からの細胞で発現しな
かつた。これらの観察はB5のＢ細胞特異性を確認すると
共に、B5が正常Ｂ細胞分化の中間段階におけるＢリンパ
球の集団で発現されることを示している。
抗−B5モノクローナル抗体の反応性 失活した分画末梢血球並びに正常なリンパ性及び骨髄
性組織に対する抗−B5の反応性を検査した。フイコール
−ハイパツク密度沈降法によつて分離した末梢血液単核
細胞（PBMC）の１％未満が抗原を発現した（第４表）の
に対し、これらはＢ−細胞、Ｔ−細胞及び単核細胞抗原
に指向するモノクローナル抗体に対し顕著な反応性を示
した。
性組織に対する抗−B5の反応性を検査した。フイコール
−ハイパツク密度沈降法によつて分離した末梢血液単核
細胞（PBMC）の１％未満が抗原を発現した（第４表）の
に対し、これらはＢ−細胞、Ｔ−細胞及び単核細胞抗原
に指向するモノクローナル抗体に対し顕著な反応性を示
した。
Ｅ−ロゼツト化により分離したＴ細胞は、検出可能な
B5発現を同様に欠如した。Ｂ−細胞、単核細胞及びヌル
細胞を含有するＥ−ロゼツテ陰性フラクシヨンを、さら
に付着性によりＢ細胞につき濃縮した。Ｂ細胞濃縮した
PBMCを、直接的にフルオレセイン化した抗−B1及び直接
的にビオチン結合した抗−B5で染色し、アビジン−テキ
サス−レツトで発色させた。二重レーザーフローサイト
メトリー分析を用いて、抗−Ig抗体による刺戟の前（パ
ネルＡ）及び３日後（パネルＢ）に、第３図に示したよ
うに細胞を検査した。パネルＡに見られるように、極め
て少数の二重標識細胞が観察されたのに対し、パネルＢ
においては明らかにB1＋B5＋細胞が検出されたことを示
した。さらに単核細胞を、直接にフルオレセイン化した
抗−Mo1及び直接的にビオチン結合した抗−B5で染色
し、アビジン−テキサス−レツド（パネルＣ）で染色し
かつ同様に分析した。付着性単核細胞が、分析した細胞
の10〜20％につきB5を弱く発現することが認められた。
しかしながら、単核細胞を表現型分類の前に10％ヒト血
清中で１時間培養したが、いずれの細胞もB5とMo1とを
発現しなかつた。同様に、顆粒細胞、RBC及び血小板調
製物は抗−B5に対する反応性を欠如した。リンパ性組織
におけるB5を有するフイコール−ハイパツク単核細胞の
割合を第５表に示す。
B5発現を同様に欠如した。Ｂ−細胞、単核細胞及びヌル
細胞を含有するＥ−ロゼツテ陰性フラクシヨンを、さら
に付着性によりＢ細胞につき濃縮した。Ｂ細胞濃縮した
PBMCを、直接的にフルオレセイン化した抗−B1及び直接
的にビオチン結合した抗−B5で染色し、アビジン−テキ
サス−レツトで発色させた。二重レーザーフローサイト
メトリー分析を用いて、抗−Ig抗体による刺戟の前（パ
ネルＡ）及び３日後（パネルＢ）に、第３図に示したよ
うに細胞を検査した。パネルＡに見られるように、極め
て少数の二重標識細胞が観察されたのに対し、パネルＢ
においては明らかにB1＋B5＋細胞が検出されたことを示
した。さらに単核細胞を、直接にフルオレセイン化した
抗−Mo1及び直接的にビオチン結合した抗−B5で染色
し、アビジン−テキサス−レツド（パネルＣ）で染色し
かつ同様に分析した。付着性単核細胞が、分析した細胞
の10〜20％につきB5を弱く発現することが認められた。
しかしながら、単核細胞を表現型分類の前に10％ヒト血
清中で１時間培養したが、いずれの細胞もB5とMo1とを
発現しなかつた。同様に、顆粒細胞、RBC及び血小板調
製物は抗−B5に対する反応性を欠如した。リンパ性組織
におけるB5を有するフイコール−ハイパツク単核細胞の
割合を第５表に示す。
正常リンパ結節、扁桃及び脾臓から分離した単核細胞
は抗−B5に対し弱反応性であり、分析した細胞の６％未
満が陽性であつた。細胞の70〜80％がB1抗原を発現する
正常脾臓のＥ−集団も同様にB5を弱く発現した。胸腺及
び骨髄からの単核細胞は抗−B5に対し非反応性であつ
た。
は抗−B5に対し弱反応性であり、分析した細胞の６％未
満が陽性であつた。細胞の70〜80％がB1抗原を発現する
正常脾臓のＥ−集団も同様にB5を弱く発現した。胸腺及
び骨髄からの単核細胞は抗−B5に対し非反応性であつ
た。
活性化した分画末梢血球に対する抗−B5モノクローナ
ル抗体の反応性も測定した。Ｅ−ロゼツト化し、付着さ
せ、次いで残存細胞を抗−Ｔ細胞（T4及びT8）及び抗−
単核細胞（Mo1及びMo2）抗体で溶解させかつ補足するこ
とによりＢ細胞を作成した。このＢ細胞濃縮したフラク
シヨン（50％B1＋）を、ビーズに結合した抗−Ig抗体の
存在下で培養した。３日後、これら細胞（60％B1＋）を
収穫し、その生存性は60〜80％の範囲であつた。これら
の細胞は、H3TdRの吸収により測定して増殖性であつた
ので（刺戟指数＝５〜10）、活性化されたと考えられ、
次いで細胞の形態学上約2/3がリンパ芽球の出現が増大
した。次いで、B5発現につき間接的免疫螢光性及びフロ
ーサイトメトリー分析により細胞を検査した。増殖して
いる末梢血液Ｂ細胞とは異なり、細胞の約25％がB5を発
現した。B5の発現が活性化Ｂ細胞に限られることを示す
ため、細胞をフルオレセインに直接結合された抗B1及び
ビオチンに結合された抗−B5で標識し、次いでテキサス
−レッド−アビジンで発色させた。二重レーザーフロー
サイトメトリー分析を用いて、未刺戟細胞の大部分がB1
のみを発現し、僅かな細胞がB1とB5とを発現したことが
明らかに示された（第３図）。しかしながら、抗−Ig抗
体と共に３日間培養した後、細胞の25％がB5を発現しか
つB5を発現しているすべての細胞がB1をも同時発現し
た。これに対し、Ｅ−ロゼツト化により分離したＴ細胞
をPHAと共に６日間培養した。生存細胞を分離し、かつ
２日間及び６日間の刺戟後に細胞表面の表現型を検査し
た。これらの細胞はその強力なT11の発現により均一な
Ｔ細胞であり、Ia（細胞の30％が６日目にIaを発現し
た）及びIL-2リセプタ（細胞の90％が２日目に1L-2Rを
発現し、70％が６日目に発現した）の発現により決定さ
れるように活性化していた。これらの活性化Ｔ細胞は、
検出しうるB5抗原を示さなかつた。同様に、単核細胞を
PHA−白血球調整した培地（PHA-LCM）で１晩活性化さ
せ、これらの細胞はMo1、Mo2及びIaを強力に発現した
が、B5を発現しなかつた。
ル抗体の反応性も測定した。Ｅ−ロゼツト化し、付着さ
せ、次いで残存細胞を抗−Ｔ細胞（T4及びT8）及び抗−
単核細胞（Mo1及びMo2）抗体で溶解させかつ補足するこ
とによりＢ細胞を作成した。このＢ細胞濃縮したフラク
シヨン（50％B1＋）を、ビーズに結合した抗−Ig抗体の
存在下で培養した。３日後、これら細胞（60％B1＋）を
収穫し、その生存性は60〜80％の範囲であつた。これら
の細胞は、H3TdRの吸収により測定して増殖性であつた
ので（刺戟指数＝５〜10）、活性化されたと考えられ、
次いで細胞の形態学上約2/3がリンパ芽球の出現が増大
した。次いで、B5発現につき間接的免疫螢光性及びフロ
ーサイトメトリー分析により細胞を検査した。増殖して
いる末梢血液Ｂ細胞とは異なり、細胞の約25％がB5を発
現した。B5の発現が活性化Ｂ細胞に限られることを示す
ため、細胞をフルオレセインに直接結合された抗B1及び
ビオチンに結合された抗−B5で標識し、次いでテキサス
−レッド−アビジンで発色させた。二重レーザーフロー
サイトメトリー分析を用いて、未刺戟細胞の大部分がB1
のみを発現し、僅かな細胞がB1とB5とを発現したことが
明らかに示された（第３図）。しかしながら、抗−Ig抗
体と共に３日間培養した後、細胞の25％がB5を発現しか
つB5を発現しているすべての細胞がB1をも同時発現し
た。これに対し、Ｅ−ロゼツト化により分離したＴ細胞
をPHAと共に６日間培養した。生存細胞を分離し、かつ
２日間及び６日間の刺戟後に細胞表面の表現型を検査し
た。これらの細胞はその強力なT11の発現により均一な
Ｔ細胞であり、Ia（細胞の30％が６日目にIaを発現し
た）及びIL-2リセプタ（細胞の90％が２日目に1L-2Rを
発現し、70％が６日目に発現した）の発現により決定さ
れるように活性化していた。これらの活性化Ｔ細胞は、
検出しうるB5抗原を示さなかつた。同様に、単核細胞を
PHA−白血球調整した培地（PHA-LCM）で１晩活性化さ
せ、これらの細胞はMo1、Mo2及びIaを強力に発現した
が、B5を発現しなかつた。
B5の生化学的特性化 バーキツトリンパ腫細胞ラインRamos及びプラスマ細
胞白血病細胞ラインRPMI8226を、B5細胞表面抗原の分離
用に使用した。ボイド等、ジヤーナル・イミユノロジー
（1981）、第126巻、第2461頁に記載されているラクト
ペルオキシダーゼ結合沃素化技術の変法を用いて、I125
により細胞表面蛋白を標識した。この手順で得られた沃
素化細胞を冷PBSで２回洗浄し、かつ氷上で細胞溶解緩
衝液（50mMトリスHCl、0.4M NaCl、１％トリエンX-10
0、2mM DMSF、5mM EDTA、50mMイオドアセタミド、pH8）
にて溶解させた。30分後、溶解物を800gにて10分間遠心
分離して未溶解の細胞、核及びその他の不溶性物質を除
去した。上澄液を免疫沈降により分析するまで−80℃で
凍結させた。
胞白血病細胞ラインRPMI8226を、B5細胞表面抗原の分離
用に使用した。ボイド等、ジヤーナル・イミユノロジー
（1981）、第126巻、第2461頁に記載されているラクト
ペルオキシダーゼ結合沃素化技術の変法を用いて、I125
により細胞表面蛋白を標識した。この手順で得られた沃
素化細胞を冷PBSで２回洗浄し、かつ氷上で細胞溶解緩
衝液（50mMトリスHCl、0.4M NaCl、１％トリエンX-10
0、2mM DMSF、5mM EDTA、50mMイオドアセタミド、pH8）
にて溶解させた。30分後、溶解物を800gにて10分間遠心
分離して未溶解の細胞、核及びその他の不溶性物質を除
去した。上澄液を免疫沈降により分析するまで−80℃で
凍結させた。
細胞上澄液と細胞溶解物とを10,000gにて30分間遠心
分離し、かつ新たな試験管に移した。免疫沈降に先立
ち、細胞溶解物を20mgのウサギ抗−ヒトIg抗体と混合
し、４回予備清澄させた。さらに、パンソルビンで４℃
にて１時間にわたり２回、かつセフアロース4Bビーズで
１回、最後にウサギ抗−マウス抗体と無関係のマウス免
疫グロブリンとの予備生成複合体で処理した。予備清澄
化させた試料を次のいずれかと混合した：（１）抗−B5
ウサギ抗−マウスIg複合体；（２）ウサギ抗マウスIgと
の無関係のモノクローナルIgM複合体；（３）B5−結合
セフアロース4B;又は（４）無関係のIgM−結合セフアー
ロース4B。これらの混合物を氷上で０℃にて２時間保つ
た後、試料を10,000gにて５分間遠心分離し、かつ上澄
液を捨てた。ペレツトをRIPA緩衝液（0.2mMリン酸ナト
リウム、5mM EDTA、5mM EGTA、1mM NaF、pH7.4）におけ
る１％トリトンX-100/0.2％デオキシリコン酸ナトリウ
ムで４回洗浄した。第４図に示すように、これら沈澱物
を非還元性条件（レーン１〜５）及び還元性条件（50mM
ジチオスレイトール）（レーン６〜10）の下で10％SDS
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分析した:Ram
os細胞ライン：セフアロース4Bに結合した抗−B5（レー
ン１及び５）を、セフアロース4Bに結合した無関係の抗
体（レーン２及び６）と比較した。RPMI8226細胞ライ
ン：抗−B5ウサギ抗−ネズミIg予備生成複合体（レーン
４及び８）を無関係の抗体ウサギ−抗−マウスIg予備生
成複合体（レーン３及び７）と比較した。還元性条件下
における75キロダルトン（Kd）及び非還元性条件下にお
ける67KdのB5の見掛分子量（m.w.）は、鎖間のジスルフ
イド結合の存在を反映する。（B5抗原のこの生化学的特
性化は、これが一本鎖細胞表面蛋白であることを示
す）。
分離し、かつ新たな試験管に移した。免疫沈降に先立
ち、細胞溶解物を20mgのウサギ抗−ヒトIg抗体と混合
し、４回予備清澄させた。さらに、パンソルビンで４℃
にて１時間にわたり２回、かつセフアロース4Bビーズで
１回、最後にウサギ抗−マウス抗体と無関係のマウス免
疫グロブリンとの予備生成複合体で処理した。予備清澄
化させた試料を次のいずれかと混合した：（１）抗−B5
ウサギ抗−マウスIg複合体；（２）ウサギ抗マウスIgと
の無関係のモノクローナルIgM複合体；（３）B5−結合
セフアロース4B;又は（４）無関係のIgM−結合セフアー
ロース4B。これらの混合物を氷上で０℃にて２時間保つ
た後、試料を10,000gにて５分間遠心分離し、かつ上澄
液を捨てた。ペレツトをRIPA緩衝液（0.2mMリン酸ナト
リウム、5mM EDTA、5mM EGTA、1mM NaF、pH7.4）におけ
る１％トリトンX-100/0.2％デオキシリコン酸ナトリウ
ムで４回洗浄した。第４図に示すように、これら沈澱物
を非還元性条件（レーン１〜５）及び還元性条件（50mM
ジチオスレイトール）（レーン６〜10）の下で10％SDS
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分析した:Ram
os細胞ライン：セフアロース4Bに結合した抗−B5（レー
ン１及び５）を、セフアロース4Bに結合した無関係の抗
体（レーン２及び６）と比較した。RPMI8226細胞ライ
ン：抗−B5ウサギ抗−ネズミIg予備生成複合体（レーン
４及び８）を無関係の抗体ウサギ−抗−マウスIg予備生
成複合体（レーン３及び７）と比較した。還元性条件下
における75キロダルトン（Kd）及び非還元性条件下にお
ける67KdのB5の見掛分子量（m.w.）は、鎖間のジスルフ
イド結合の存在を反映する。（B5抗原のこの生化学的特
性化は、これが一本鎖細胞表面蛋白であることを示
す）。
用途 本発明のモノクローナル抗体は検出可能なラベルで標
識することができ、たとえば常法によつて放射性標識す
ることができ、かつ生物学的試料にて或いはインビボに
て活性化Ｂ細胞の定量測定を可能にする。
識することができ、たとえば常法によつて放射性標識す
ることができ、かつ生物学的試料にて或いはインビボに
て活性化Ｂ細胞の定量測定を可能にする。
Ｂ−細胞分化の中間段階に対応するＢ−細胞起源の新
生物に対する特異性のため、本発明のモノクローナル抗
体は生物学的試料におけるこれら細胞型の存在を検出す
るのに使用することができる。本発明のモノクローナル
抗体は、Ｂ細胞から生ずる各種のリンパ腫及び白血病の
細胞型を特性化する際の診断助剤として使用することが
できる。さらに、本発明の放射性標識したモノクローナ
ル抗体を用いるインビボの映像化は、これら細胞型（た
とえばリンパ腫）を検出しかつ位置決定するための非侵
襲性手段を与えることができる。
生物に対する特異性のため、本発明のモノクローナル抗
体は生物学的試料におけるこれら細胞型の存在を検出す
るのに使用することができる。本発明のモノクローナル
抗体は、Ｂ細胞から生ずる各種のリンパ腫及び白血病の
細胞型を特性化する際の診断助剤として使用することが
できる。さらに、本発明の放射性標識したモノクローナ
ル抗体を用いるインビボの映像化は、これら細胞型（た
とえばリンパ腫）を検出しかつ位置決定するための非侵
襲性手段を与えることができる。
本発明のモノクローナル抗体は、さらに活性化Ｂ細胞
を特徴とする自己免疫病、感染及びその他の病気、たと
えば器官拒否における活性化Ｂ細胞の役割を規定するに
も有用である。
を特徴とする自己免疫病、感染及びその他の病気、たと
えば器官拒否における活性化Ｂ細胞の役割を規定するに
も有用である。
その他の実施態様については次の請求の範囲に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 5/10 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 9358−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 シユロスマン，ステユアート アメリカ合衆国 02159 マサチユ−セツ ツ，ニユートン センター，ワン フオツ クス プレイス（番地なし) (56)参考文献 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，160［６ ］（1984）Ｐ．1919−1924 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，160［５ ］（1984）Ｐ．1450−1466 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍ ｕｎｏｌｏｇｙ，131［４］（1983）Ｐ. 1754−1761
Claims (13)
- 【請求項１】活性化ヒトＢ−細胞表面上の抗原を認識す
るモノクローナル抗体であって、（ａ）前記抗原はＢ−
細胞表面蛋白質B-LAST-1及びBB-1とは異なる蛋白質であ
り且つ（ｂ）還元条件下で75,000ダルトンかつ非還元条
件下で67,000ダルトンの見掛分子量を有し、前記の抗体
は未刺戟ヒトＢ−細胞に対し非反応性であることを特徴
とするモノクローナル抗体。 - 【請求項２】刺戟された若しくは休止中のＴ−細胞及び
単核細胞又は非Ｂ−細胞起源の腫瘍又はＢ−細胞分化の
中間段階とは異なる分化段階に相当するＢ−細胞起源の
腫瘍に対し非反応性である特許請求の範囲第１項記載の
抗体。 - 【請求項３】前記の抗体がIgMアイソタイプである特許
請求の範囲第１項記載の抗体。 - 【請求項４】前記の抗体が、ハイブリドーマB5（ATCCHB
8716）により産生されるモノクローナル抗体が反応する
のと同じＢ細胞抗原と反応する、特許請求の範囲第１項
に記載の抗体。 - 【請求項５】前記の抗体がハイブリドーマB5（ATCC HB8
716）により産生される、特許請求の範囲第１項に記載
の抗体。 - 【請求項６】前記の抗原がエプスタイン−バール・ウイ
ルス、ヨウシュヤマゴボウミトゲン、蛋白質Ａ若しくは
抗−免疫グロブリンで活性化された末梢若しくは脾臓ヒ
トＢ−細胞から得られる特許請求の範囲第１項記載の抗
体。 - 【請求項７】前記の抗体が検出可能な標識で標識されて
いる特許請求の範囲第１項記載の抗体。 - 【請求項８】前記の標識が放射性標識である特許請求の
範囲第７項記載の抗体。 - 【請求項９】還元条件下で75,000ダルトンかつ非還元条
件下で67,000ダルトンの見掛分子量を有する活性化ヒト
Ｂ−細胞表面蛋白質を発現する細胞の存在につき生物学
的試料を分析するに際し、前記試料を、活性化ヒトＢ−
細胞表面上の抗原を認識するモノクローナル抗体と共に
インキュベートし、かつ免疫複合体が形成されるかどう
かを測定することを特徴とする生物学的試料の分析方法
であって、該抗原は、Ｂ−細胞表面蛋白質B-LAST-1及び
BB-1とは異なる蛋白質であり且つ還元条件下で75,000ダ
ルトンかつ非還元条件下で67,000ダルトンの見掛分子量
を有し、該抗体は未刺戟ヒトＢ−細胞に対し非反応性で
ある、上記の分析方法。 - 【請求項１０】前記の試料がヒト末梢血液、骨髄又はリ
ンパ組織を含む特許請求の範囲第９項記載の方法。 - 【請求項１１】前記の試料がヒトＢ−細胞又はＢ−細胞
起源の腫瘍を含む特許請求の範囲第９項記載の方法。 - 【請求項１２】前記の抗体が還元条件下で75,000ダルト
ンかつ非還元条件下で67,000ダルトンの見掛分子量を有
する活性化ヒトＢ細胞表面蛋白質を認識し、該蛋白質
は、エプスタイン−バール・ウイルス、ヨウシュヤマゴ
ボウミトゲン、蛋白質Ａ若しくは抗−免疫グロブリンで
活性化された末梢若しくは脾臓ヒトＢ−細胞から得られ
る特許請求の範囲第９項記載の方法。 - 【請求項１３】非ヒト哺乳動物における活性化Ｂ−細胞
含有部位を検出するに際し、前記哺乳動物へ活性化ヒト
Ｂ−細胞表面上の抗原を認識する標識モノクローナル抗
体を投与し、かつ放射性標識された免疫複合体を検出す
ることを特徴とする検出方法であって、該抗原は、Ｂ−
細胞表面蛋白質B-LAST-1及びBB-1とは異なる蛋白質であ
り且つ還元条件下で75,000ダルトンかつ非還元条件下で
67,000ダルトンの見掛分子量を有し、該抗体は未刺戟ヒ
トＢ−細胞に対し非反応性である、上記の検出方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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