JPH08503139A

JPH08503139A - 鱗翅目および鞘翅目害虫に対し活性な新規バシラスチューリンゲンシス

Info

Publication number: JPH08503139A
Application number: JP6514477A
Authority: JP
Inventors: リウ，チーリ; フレモントアダムス，リー; エー．ルフバロー，パトリシア; デビッドトーマス，マイケル
Original assignee: ノボノルディスクエントテック，インコーポレイティド
Priority date: 1992-12-15
Filing date: 1993-12-13
Publication date: 1996-04-09
Anticipated expiration: 2014-11-15
Also published as: EP0674704B1; CA2151586A1; EP1227154A2; EP1227154A3; DE69332742D1; AU678210B2; ATE233808T1; IL108032A0; CA2151586C; WO1994013785A2; WO1994013785A3; AU5984394A; EP0674704A1; JP2977903B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、分子量130,000ダルトンを有するデルタ−エンドトキシンから本質的に成る双ピラミッド結晶並びに２種のデルタ−エンドトキシン（各々分子量約33,000ダルトンを有する）から本質的に成るひし形結晶を生産する鱗翅目および鞘翅目害虫に対し活性な新規な生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス（B.t.）、並びにその胞子、結晶、デルタ−エンドトキシンおよび／又は変異体に関する。本発明は又それから得ることのできる殺虫剤組成物に関する。本発明は更に鱗翅目および鞘翅目からの昆虫害虫を駆除するための殺虫剤組成物の使用に関する。本発明は又デルタ−エンドトキシンをエンコードする単離されたDNA配列に関する。

Description

【発明の詳細な説明】鱗翅目および鞘翅目害虫に対し活性な新規バシラスチューリンゲンシス１．発明の分野本発明は、鱗翅目および鞘翅目害虫に対して活性な新規な生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）（B.t.）菌株に関し、この菌株は分子量約130,000ダルトンを有するデルタ−エンドトキシンから本質的に成る双ピラミッド（biopyramidal）結晶および２個のデルタ−エンドトキシン（各々、分子量約33,000ダルトンを有する）から本質的に成るひし形結晶を生成する。更に本発明は該菌株の胞子、結晶、デルタ−エンドトキシンおよび／又は変異体に関する。本発明は又、それらから得ることのできる殺虫剤組成物に関する。本発明は更に鱗翅目および／又は鞘翅目からの昆虫害虫を駆除するための殺虫剤組成物の使用に関する。本発明は又、デルタ−エンドトキシンをエンコードする単離されたDNA配列にも関する。２．発明の背景食物、繊維および種々の家庭用植物を含めた世界の商業的に重要な農業作物の重要部分は、毎年害虫のまん延に至るまで失なわれ、数百万ドルの損失をもたらしている。このような害虫を駆除するための種々の戦略が用いられてきた。一つの戦略は広域スペクトル殺虫剤、すなわち広範囲の活性を有する化学的殺虫剤の使用である。しかし、そのような化学的殺虫剤を用いることには多数の欠点がある。特に、それらの広域スペクトル活性のため、これらの殺虫剤は非目標生物、例えば有益な昆虫および有害な害虫の寄生動物を駆除するかもしれない。加えて、これらの化学的殺虫剤はしばしば動物およびヒトに対し毒性であり、そして目標にされた害虫は、そのような物質にくり返し暴露されるとしばしば耐性が増大する。別の戦略は、作物への昆虫、菌類および雑草のまん延を駆除するための自然発生病原菌を利用する生物殺虫剤の使用を含んでいる。生物殺虫剤は、毒素を生成する天然に発生する生物であり、その毒素は化学的殺虫剤よりも全体として非目標生物および環境に対し一般により害が少ない感染剤に対し毒性の物質である。最も広く用いられている生物殺虫剤は、バシラスチューリンゲンシス（Baci llus thuringiensis）（B.t.）である。B.t.は広く分布した、棒形状、好気性で胞子形成微生物である。その胞子形成サイクル中に、B.t.は細胞内に結晶状含有体を形成するデルタ−エンドトキシンとして知られているタンパク質を生産する。デルタ−エンドトキシンは分子量27−140kDを有しそして摂取により昆虫の幼虫を殺す。デルタ−エンドトキシンは組換えDNA法により生産されてきた（例えば、テラー等、1992, Molecular Microbiology 6：1211-1217；毒素は鱗翅目および鞘翅目害虫に対し活性である；ペイニ等、米国特許第5,045,469；毒素は鱗翅目に対し活性である）。組換えDNA法によって生産されたデルタ−エンドトキシンは結晶形であるかもしれず、又はそうでないかもしれない。多くのB.t.菌株は単離され、鱗翅目の昆虫害虫に対し活性であることが見出された。B.t.subsp.クルスタキ（kurstaki）HD-lは胞子形成中各細胞内に双ピラミッドおよびひし形結晶を生産する（ルーシ等、in Microbial and Viral pestici des，E．クルスターク，マーセルデッカー編、ニューヨーク、1982、35−74頁：双ピラミッド結晶は３個のcryＩA遺伝子によりエンコードされることが見出された（アロンソン等、1986 ，Microbiol.Rev．50：1-50）。B.t.subsp．クルスタキ（kurstaki）HD73は、Cr yＩA(c)タンパク質を含む（アダンク等、1985，Gene 36：289-300）。B.t.subsp ．デンドロリムス（dendrolimus）HD-7およびHD37は、cryＩAおよびcryIIタンパク質を含む；B.t.subsp．ソトー（sotto）は、正基準標本CryＩA(a)とは２４個のアミノ酸だけ異なるアルカリ可溶性タンパク質である：B.t.サブトキカス（su btoxicus）HD-10は、CryＩAおよびCryＩBタンパク質を含有する；B.t.subsp．トルウォルチー（tolworthi）HD-121は、CryＩAおよびCryIIタンパク質を含有する：そしてB.t.subsp．アイザワ（aizawai）HD-68はCryＩAタンパク質を含む（ホフテおよびワイテレー、1989，Microbiol.Reviews 53：242-255）。レニー（米国特許第4,990,332号、1993年2月5日発行）はB.t.PS85AIの単離物および単離物P S85AIの変異体を開示し、これらは双方ともプルテラキシロステラ（Pulutela xylostella）、鱗翅目に対して活性でありそして分子量130,000および60,000ダルトンを有するアルカリ可溶性タンパク質を生産する。レニー（米国特許第5,04 5,469号、1991年9月3日発行）は、PS81Fと命名されたB.t.単離物を開示し、これはまた分子量130,000および60,000ダルトンを有するアルカリ可溶性タンパク質でありそしてスポドプテラエキグア（Spodoptera exigua）およびＴ．ニー（n i）に対し活性を有する；PS8IFからの毒素遺伝子はB.t.subsp．カルスタキ（kur staki）HD-1からの毒素遺伝子との相同性は少ないと思われる。ペニー（米国特許第5,206,166号、1992年6月25日発行）は、B.t.単離物PS81A2およびPS81RR1を開示しており、これらは133,601および133,367ダルトンのアルカリ可溶性タンパク質であり；双方ともトリコプルシアニー（Trichoplusia ni）、スポドプテラエキグア（Spodoptera ex igua）およびプルテラキシロステラ（Plutella xylostella）に対し活性でありそしてB.t.subsp．カルスタキ（kurstaki）HD-1および他のB.t.単離物とは異なる。バーニール等（米国特許第 5,061,489号および WO 90／03434）は、少なくとも３個の遺伝子：６．６−，５．３−、および４．５−タイプ遺伝子（cry ＩA(a)，cryＩb(b)およびcryＩA(c)によりエンコードされたデルタ−エンドトキシンを生産する菌株A20を開示する。チェスチュキナ等（1988，FEBS Lett．232 ：249-51）はB.t.subsp．ガレリエ（galleriae）が２個のデルタ−エンドトキシン（双方とも鱗翅目に対し活性である）を生産することを開示する。他の菌株、例えばバシラスチューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）subsp．テネブリオニス（tenebrlonis）（クリーク等、1988、米国特許第 4,766,203号）は、鞘翅目に対して特異的であることを見出した。他の鞘翅目毒性バシラスチューリンゲンシスが1986年に報告された（ハーンスタット等、 Bio／Technology v ol.4，305-308，1986、米国特許第4,764,372号、1988年）。「バシラスチューリンゲンシスsubsp．サンジエゴ（san diego）」、Ｍ−７と命名されたこの菌株は、寄託番号NRRL B-15939のもとでノーザンレジオナルリサーチラボラトリー（米国）に寄託された。しかし'372特許の譲受人であるマイコーゲン社は、バシラスチューリンゲンシスsubsp．サンジエゴは、バシラスチューリンゲンシスsubsp．テネブリオニス（tenebrionis）であると公に認めた。他の単離された菌株は２種類の害虫に対して活性であることが見出された。パジュラ（19 90，Microbiol.Lett．66：257-262）は、２種のデルターエンドトキシン、すなわち鱗翅目害虫に対して活性を有する144kDタンパク質および蚊に対して活性を有する66kDタンパク質を含有する２種の変異体の単離を開示する。ブラッドフッシュ等（米国特許第5,208,017号）は、B.t.単離物PS86A1およびP S86Q3を開示しており、それらはそれぞれ分子量58,000および45,000ダルトン並びに155,000，135,000，98,000，62,000および58,000ダルトンをそれぞれ有するアルカリ可溶性タンパク質を生産しそしてそれらは鱗翅目および鞘翅目害虫に対して活性を有している。PCT出願WO 90／13651およびテラー（１９９２年、Molec ular Microbiology 6：1211-1217）はB.t.菌株を開示しており、これは鱗翅目および鞘翅目に対して毒性でありそして分子量81kDを有する毒素を生産する。新規毒素を生産するためバシラスチューリンゲンシス（Bacillus thuringie nsis）の新規菌株を単離することが好都合でありその結果与えられる如何なる昆虫害虫に対し広域スペクトルの生物殺虫剤が存在する。３．発明の要約本発明は、新規な生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）菌株又はその胞子、結晶もしくは変異体に関しこの菌株又は変異体は従来技術において開示されたB.t.菌株と異なり、鱗翅目の昆虫害虫および鞘翅目の昆虫害虫に対し活性を有し、約130,000ダルトンを有するデルタ−エンドトキシン（以下、「130,000ダルトルのデルタ−エンドトキシン」という）および双方が分子量約33,000を有する２種のデルタ−エンドトキシン（以下、「33 ,000ダルトンのデルタ−エンドトキシン」という）を生産する。33,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンの一方は、 MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有する。もう一方の33,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンは、 MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列を有する。130,000および33,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンは単独で鱗翅目害虫に対し活性を有しそして一緒になって鱗翅目および鞘翅目害虫に対し殺虫作用を有する。デルタ−エンドトキシンは、所望により結晶形であってよく；130,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンは双ピラミッドでありそして33,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンはひし形である。本発明の特異的態様において、本発明のチューリンゲンシス（thuringiensis ）菌株は、それぞれNRRL B-21019およびNRRL B-21020の同定特性を有するEMCC00 75およびEMCC0076である。新規バシラスチューリンゲンシス菌株、胞子、変異体又は結晶および／又はデルタ−エンドトキシンは本発明の範囲内であり各々殺虫剤組成物に製剤化できる。一つの態様において、菌株、胞子、変異体、結晶および／又はデルタ−エンドトキシンは殺虫剤担体と共に組合せてもよい。本発明の菌株又は変異体および／又はその胞子および／又はその結晶を含んでなる殺虫剤組成物は、害虫にそのような殺虫剤組成物の昆虫−駆除有効量を暴らすことを含んでなる方法において、鱗翅目の昆虫害虫および／又は鞘翅目の昆虫害虫の駆除のため使用できる。４．図面の簡単な説明図１は、アガロースゲル電気泳動によるcryＩ遺伝子に対するバシラスチューリンゲンシスのPCR分析の結果を示す。レーン１は分子量マーカー（1kbラダー（ladder）、BRL-GIBSO）を示す。レーン２およびレーン３は図１で示されるcry ＩDオリゴヌクレオチドプライマーによる菌株EMCC0075およびEMCC0076の分析を示す。レーン４〜６はcyrＩDプライマーによるバシラスチューリンゲンシスsubsp．テネブリオニス（telebrionis）、未知のバシラスチューリンゲンシス菌株およびバシラスチューリンゲンシスsubsp．アイザワ（aizawai）の分析を示す。バシラスチューリンゲンシスsubsp．テネブリオニスはcryIIIA遺伝子のみを含有する；未知のバシラスチューリンゲンシスはcryＩD遺伝子を含有しない；そしてバシラスチューリンゲンシスsubsp．アイザワはcryＩDを含む幾つかのcryＩ遺伝子を含有する。５．発明の詳細な記載５．１．デルタ−エンドトキシンの入手本発明の胞子および結晶は、本発明の菌株から得ることができる。本発明の菌株は、当業者に公知の培地および発酵技術（例えば、ロブコ等、1969，J.Invert ebrate Path．14：122-129 ；ダルマーゲ等.，1971，J.Invertebrate Path．18 ：353-358 ；ダルマーゲ等.，in Microbial Control of Pests and Plant Disea ses，H.D．バーゲス編.，Academic Press，N.Y.，1980）を用いて培養できる。発酵サイクルの完了後、結晶および胞子は、当業者に周知の方法により、例えば遠心分離によりB.t.胞子および結晶を分離することにより集めることができる。胞子および結晶はペレット内に含まれる。上記第２節において示したように、結晶は本質的に（１以上の）デルタ−エンドトキシンから成る。本発明の菌株は、２種のタイプの結晶を生産する。一つは 130,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンから本質的に成る双ピラミッド結晶である。もう一つは２個の33,000ダルトンのデルタ−エンドトキシンから本質的に成るひし形結晶である。結晶又はデルタ−エンドトキシンの精製は、密度勾配遠心法、クロマトグラフィー法（例えばイオン交換、アフィニティクロマトグラフィー、疎水およびサイズ排除クロマトグラフィー）、電気泳動法、分化溶解性又はタンパク質の精製に対し他の標準技術を含めて（これらに制限されないが）、当業者に公知の種々の手段により行うことができる。デルタ−エンドトキシンはまた組換えＤＮＡ発現系から得ることもできる。特に、各毒素をエンコードするＤＮＡは適当なＤＮＡ発現ベクター内にクローン化される。デルタ−エンドトキシンをエンコードする特異的DNA断片の同定は、アガロース中での断片の電気泳動分離（サザーン、1975，J.Mol.Biol．98：503）、ニトロセルロース、ナイロン又は他の適当な支持媒質への分離されたDNA断片の移行および逐次的エデマン（Edman）分解により測定される如きタンパク質のアミノ酸配列に基づく変性したオリゴヌクレオチドプローブを用いた移行せしめられた断片のプローブすることを含めて（これらに制限されない）、多くの方法で達成できる。択一的に、対象のタンパク質と高い相同性を有すると考えられるタンパク質の読み取り枠に相当するラベル化遺伝子断片を用いてプローブし得る。対象の遺伝子の高い相同性は、一群の関連タンパク質の整列およびエンコードするDN Aセグメントにおける高度の保存領域の同定によって決定され得る（例えば、グリブスコブ，K.，およびJ．デベレックス編、in Sequence Analysis Primer、スックトン出版、N.N.，1991）。明快でかつ信頼できる方法は対象のタンパク質から酵素的又は化学的手段によって発生させた少なくとも２種のペプチド断片のアミノ酸配列を決定すること、これらの領域をエンコードするDNAを認識するであろう縮重したオリゴヌクレオチドを設計し、そしてDNAの介在領域の完全な又はほゞ完全なコピーを増強するためポリメラーゼ鎖反応（PCR）技術を適用することである。一度同定すると、デルタ−エンドトキシン又はその一部をエンコードする遺伝子を有するDNA断片は、PBR322，pUC1l8，PACYCl94およびpBCSKプラスミドおよび大腸菌内での形質転換のためのそれらの変異体；又はpUB110，pBD64，pBC16，pH Pl3，pEl94，pC194、およびバシラスSPP内での形質転換のためのそれらの変異体を含めて（これらに制限されないが）、適当なベクター内に、対象の遺伝子を有させることが期待される断片のサイズ−選択ライブラリーの結合によってクローン化され得る。バクテリオファージベクター、例えばラムダーおよびその誘導体も又Ｅ．コリー内に遺伝子をクローン化するため用いられ得る。商業的に有用なレベルでデルタ−エンドトキシン又はその一部の生産は、プラスミドベクター内にエンコード遺伝子をサブクローン化することによって達成でき、そのベクターは適当な宿主内で安定な発現および維持を許容する。しばしば、許容できる発現が、デルタ−エンドトキシンをエンコードするDNA断片上に存在する天然の調節要素を用いて達成できる。しかし、転写調節シグナル（プロモータ、開始スター卜部位、オペレーター、活性化領域、ターミネーター）並びに選択宿主細胞内でデルタ−エンドトキシン遺伝子の増強されたか又はより調節された発現のための転写調節シグナル（リボソーム結合部位、開始コドン）を添加又は変更したいと望むであろう。プラスミドに加えて、デルタ−エンドトキシン遺伝子および適当な調節要素がバシラスチューリンゲンシスの天然プラスミドおよび／又は他の選択された宿主の一つの内に、又は染色体DNA内に「遺伝子変換」（例えば、イグレシアスおよびトラウトナー、1983，Mol Gen.Genet．189：73-76；ダンカン等、1978，Pro c.Natl.Acad .Sci．U.S.A．75：3664-3665）又はベクターおよび宿主菌株間の共有DNA相同性の部位での相同の組換え（例えば、フェラリー等、1983，J.Bacteriol．154：15 13-1515）を介して導入され得る。有効な「２−プラスミド」システムが相同組換えを介して遺伝子をバシラスに導入するために使用できる（例えば、PCT特許W O 91／09129参照）。トランスポゾンも又cry遺伝子を選択された宿主菌株に導入するため使用され得る。例えば、バシルスにおいて、トランスポゾン例えばTn91 7およびその誘導体が使用できる（ヤングマン等、1989，In Regulation of Prok aryotic Development，I.スミス、R.スレペキー、およびP.セトロ一編、America n Society for Microbiology、ワシントン，D.C.）。バシラスチューリンゲンシス内に並びに他の生物内にクローン化されたデルタ−エンドトキシン遺伝子の移入は、細胞のプロトプラスト化すること（チャンおよびコーヘン、Mol.Gen.Genet．168：111-115；クローフォワード等、1987，J .Bacteriol．169：5423-5428）；エレクトロポーレーション（electroporation ）（例えば、シュテル等、1989，Mol.Gen.Genet．218：177-181およびマカルソ等、1991，J.Bacteriol．173：1353-1356）；粒子衝撃（例えばシァーク等、199 1，Appl.Environ.Microbiol．57：480-485）；細胞のシリコンカーバイド繊維− 介存形質転換（ケプラー等、1992，Theor.Appl.Genet．84：560-566）；共役（ゴンザレッツ等、1982，Proc.Natl.Acad.Sci．U.S.A．79：6951-6955）；又はバクテリオファージによる形質導入を含めて（これらに制限されないが）、多様の技術によって達成できる。形質導入されたコロニーは、結晶デルタ−エンドトキシンを生産するための、該特異的デルタ−エンドトキシンに対して向けられた抗体を結合させるための又は敏感な害虫例えは節足動物又は線虫をバイオアッセイにおいて殺すためのそれらの能力によって検出できる。生産用の特定の宿主の選択に対する基準は、制限されないが、遺伝子を宿主に導入しやすさ、発現系の入手性およびデルタ−エンドトキシンをエンコードする遺伝子の安定維持性および発現を含む。宿主は微生物、例えばバシラスチューリンゲンシスそれ自身、又はフィトスフェア（phytosphere）、例えばフィロプレーン（phylloplane）（植物の表面）および／又は根圏（根物根の周りの土壌）および／又は水生環境の棲息動物であってよくそして野生型微生物と特定の環境（作物および他の昆虫の住地）内で競うことができるべきである。そのような微生物の例は細菌に制限されないが、例えば属バシラス（Bacillus）、シュドモナス（Pseudomonas）、エルウィニア（Erwinia）、セレイシア（Serratia）、クレブシェラ（Klebsiella）、キサントモナス（Xanthomonas）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、リゾビウム（Rhizobium）、ロドシュードモナス（Rhodo pseudomonas）、メチロフィリウス（Methylophilius）、アガロバクテリウム（A grobacterium）、アセトバクター（Acetobacter）、ラクトバシラス（Lactobaci llus）、アルトバクター（Arthrobacter）、アゾトバクター（Azotobacter）、リューコノストック（Leuconostoc）、アルカリゲネス（Alcaligenes）、およびクロストリジウム（Clostridium）；アルゲ（algae）、例えば科シナノフィセエ（Cyanophyceae）、プロクロロフイセエ（Prochlorophyceae）、ロドフィセエ（ Rhodophyceae）、ジノフィセエ（Dinophyceae）、クリソフィセエ（Chrysophyce ae）、プリネシオフィセエ（Phymnesiophyceae）、キサントフィセエ（Xanthoph yceae）、ラフィドフィセエ（Raphidophyceae）、バシラリオフィセエ（Bacilla riophyceae）、エスティガマトフィセエ（Eustigmatophyceae）、クリプトフィセエ（Cryptophyceae）、オイグレエンフイセエ（Euglenophyceae）、プラシノフイセエ（Prasinophyceae）、およびグリロフィセエ（Chlorophyceae）：および菌類、特に酵母、例えば属サッカロマイセス（Saccharomyces）、クリプトコッカス（Cryptococcus）、クルベロマイセス（Kluyveromyces）、スポロボロマイセス（Sporobolomyces）、ロドトルラ（Rhodotorula）、およびアウレオバシジウム（Aureobasidium）が含まれる。本発明の（１以上の）エンドトキシン又はその一部をエンコードする遺伝子は又、デルタ−エンドトキシンに敏感な昆虫で寄生されることが知られている適当な植物の染色体内にその後の導入のため適当なクローニングベクター内に挿入でき、あるいは又一方では直接殺虫剤として使用できる特異的バクロウィルス（ba culoviruses）に挿入できる。５．２．変異体本発明は又親株よりもより多量のおよび／又はより大きい結晶を生産する変異体B.t.菌株に関する。本発明において定義される「親株」は、突然変異前の原バシラスチューリンゲンシス菌株である。このような変異体を得るため、親株は例えば、化学的手段例えばＮ−メチル− Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン又はエチルメタンスルホネート、γ−射照、Ｘ−線又はＵＶ−射照による変異誘発要因によって処理され得る。特に、バシラスチューリンゲンシス菌株を突然変異させそしてそのような変異体を選択する一の方法において次の手順が用いられる。ｉ）親菌株を変異誘発要因で処理し； ii）このようにして正常発生の変異体を変異体菌株の選択に対して適当な培地内で増殖させ；次いで iii）変異体菌株を選択する。本発明の好ましい態様によれば、選択されたコロニーは通常の生産媒地中で増殖させ次いで増加せしめられるデルタ−エンドトキシンの生産が可能な菌株に対しての最終選択が行なわれる。択一的に、変異体は当業者に公知の組換えDNA法を用いて得ることができる。例えば、デルタ−エンドトキシンをコードする遺伝子を有するDNA配列は、適当な発現ベクター内に挿入され次いで引き続き当業者に公知の手順を用い親株に導入される。択一的に、デルタ−エンドトキシンをコードする遺伝子を含有するDN A配列は、ゲノム内への組換えのためおよび引き続き増幅のため適当なベクター内に挿入され得る。５．３．バイオアッセイ種々の昆虫害虫に対する本発明のB.t.菌株又はその胞子、変異体、結晶又はエンドトキシンの活性は、当業者に公知の手順、例えば人工的昆虫ダイエット混入分析、人工的ダイエットオーバーレイ、葉彩色、葉浸漬および葉状散布を用いて分析できる。このような分析の特異的例は下記の６節で述べられる。５．４．組成物上記の本発明の菌株、胞子、結晶、デルタ−エンドトキシン又は変異体は適当な担体と共に殺虫剤組成物、例えば懸濁液、溶液、散布剤、分散性顆粒、水和剤、乳化性コンセントレート、エアゾール又は含浸顆粒に製剤化できる。上記の如き組成物は、界面活性剤、不活性担体、防腐剤、保湿剤、感覚刺激剤、誘引物質、封入剤、結合剤、乳化剤、染料、紫外線保護剤、緩衝剤、流動化剤、又は製品の取扱いおよび特定標的害虫に対する適用を促進するための他の成分の添加によって得ることができる。適当な界面活性剤には、制限されないが、カルボキシレー卜の如きアニオン性化合物、例えば長鎖脂肪酸の金属カルボキシレート：Ｎ−アシルサルコシネート；脂肪アルコールエトキシレートとリン酸のモノ又はジ−エステル又はそのようなエステルの塩：脂肪アルコールスルフェー卜例えばナトリウムドデシルスルフェート、ナトリウムオクタデシルスルフェートもしくはナトリウムセチルスルフェート；エトキシル化脂肪アルコールスルフェート；エトキシル化アルキルフェノールスルフェート；リグニンスルフェート；石油スルフェート；アルキルアリールスルホネート、例えばアルキルーベンゼンスルホネー卜又は低級アルキルナフタレンスルホネート、例えばブチルーナフタレンスルホネート、スルホン化ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物の塩：又はより複雑なスルホネート例えばアミドスルホネート、例えばオレイン酸およびＮ−メチルタウリンのスルホン化縮合生成物又はジアルキルスルホネート例えばナトリウムスルホネート又はジオクチルスクシネートが含まれる。非イオン性試剤には、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪酸アミド又は脂肪アルキル−もしくはアルケニル−置換フェノールと酸化エチレンの縮合生成物、多価アルコールエーテルの脂肪エステル、例えばソルビタン脂肪酸エステル、そのようなエステルと酸化エチレンの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、酸化エチレンと酸化プロピレンのブロックコポリマー、アセチレン性グリコール例えば２，４，７，９−テトラエチル−５−デシン−４，７−ジオール、又はエトキシル化アセチレン性グリコールが含まれる。カチオン性界面活性剤の例には、例えばアセテート、ナフテネート又はオレエートとして脂肪族モノ−、ジ−又はポリアミン：酸素含有アミン例えばポリオキシエチレンアミンの酸化アミン；カルボン酸とジ−もしくはポリアミンの縮合によって得られるアミド−結合アミン；又は四級アンモニウム塩が含まれる。不活性物質の例には、制限されないが無機物質、例えはカオリン、フィロ珪酸塩、カーボネート、スルフェート、ホスフェート又は植物学上の物質、例えばコルク、粉末化とうもろこしの穂軸、ピーナッツ外皮、米外皮およびくるみの殻が含まれる。本発明の組成物は直接適用に対して適当な形態で又は適用前に適当量の水又は他の希釈剤による希釈を要求するコンセントレート又は一次粉末として存在し得る。殺虫剤の濃度は特定の剤形の性質、特にそれがコンセントレートであるか又は直接用いられるかによって変化するであろう。組成物は１〜98％の固体又は液体の不活性担体および０〜50％、好ましくは0.1〜50％の界面活性剤を含有する。これらの組成物は商業製品に対してラベル表示された割合で、好ましくは乾燥形の場合１エーカ当たり0.01ポンド〜5.0ポンドでそして液体形の場合１エーカ当たり0.01pts〜10ptsで適用されるであろう。別の態様において、本発明の菌株、胞子、結晶、デルタ−エンドトキシン又は変異体は、前処理が結晶デルタ−エンドトキシンに有害でない限り、目標害虫の環境に施用する場合殺虫作用を持続させるため製剤化の前に処理できる。そのような処理は処理が組成物の性質を有害に影響しない限り物理的および／又は化学的手段によってなされ得る。化学的試剤の例には、制限されないがハロゲン化剤；アルデヒド例えばホルムアルデヒドおよびグルタルアルデヒド；抗−感染剤、例えば塩化ゼピラン；アルコール、例えばイソプロパノールおよびエタノール；および組織学の固定液、例えばボーイン（Bouin's）固定液およびヘリー（Helly 's）固定液（例えば、ヒューアソン、Animal Tissue Techniques，W.H.Freeman and Co.，1967参照）。本発明の組成物は、害虫が植物上に出現する時に又は害虫の出現前に保護手段として例えば散布又は散粉により植物に直接施用できる。本発明の範囲内で保護されるべき植物には、制限されないが、穀物（小麦、大麦、ライムギ、オートムギ、米、モロコシおよび関連作物）、ビート（テンサイおよび飼料ビート）、核果、なし状果および小果樹（リンゴ、西洋ナシ、プラム、もも、アーモンド、さくらんぼ、ストロベリー、きいちごおよび黒いちご）、マメ科植物（むらさきうまごやし、そら豆、レンズ豆、えんどう豆、大豆）、油脂植物（西洋あぶらな、からし、ポピー、オリーブ、ひまわり、ココナッツ、とうごま植物、カカオ豆、落花生、きゅうり植物（きゅうり、西洋カボチャ、メロン）、繊維植物（綿、亜麻、麻、ジュート）、かんきつ類果実（オレンジ、レモン、グレープフルーツ、マンダリンみかん）、野菜（ほうれんそう、レタス、アスパラガス、キャベツおよび他のアブラナ属植物、にんじん、たまねぎ、トマト、じゃがいも、パプリカ）、クスノキ科（アボカド、シナモン、しょうのう）、落葉樹および針葉樹（例えば、ぼだいじゅの木、イチイ木、オークの木、はんの木、ポプラ、かばの木、もみの木、からまつ、パイン）、又はとうもろこしの如き植物、芝ふ植物、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、茶、ワインのホップ、バナナおよび天然ゴム植物並びに観賞用植物が含まれる。大抵の場合、好ましい施用の態様は葉面散布による。土壌害虫に対する施用の好ましい態様はすきあと施用によるか又は「レイバイ（lay-by）」施用による。植物成長の初期段階で害虫の良好な駆除を得ることが一般に重要である、何故ならこの時が植物が最大にひどく損なわれ得る時期であるからである。スプレー又は粉剤はもしこれが必要と考えられる場合、他の殺虫剤を好都合に含有できる。好ましい態様において、本発明の組成物は植物に直接施用される。本発明の組成物は、制限されないが次の害虫を含んだ害虫に対して有効であろう：鱗翅目、例えばアキロイアグリセラ（Achroia grisella）、アクレリスグロベラナ（Acleris gloverana）、アクレリスバリアナ（Acler is variana）、アドキソフィレスオラナ（Adoxophyes orana）、アゴロチスイプシロン（Agrotis ipsilon）、アラバマアルギラセ（Alabama argillacea ）、アルソフィラポメタリア（Alsophila pometaria）、アメロイストランシテラ（Amyelois transitella）、アナガスタクーニラ（Anagasta kuehniell a）、アナルシアリネアテラ（Anarsia lineatella）、アニソタセナトリア（Anisota senatoria）、アンテレアペルニー（Antheraea pernyi）、アンチカルシアゲマタリス（Anticarsia gemmatalis）、アルシプス（Archips）sp. ，アルグリロテニー（Argyrotaenia）sp.，アテチスミンダラ（Athetis minda ra）、ボムビーモリ（Bombyx mori）、ブクラトリックスチューリンベリラ（Bucculatrix thurberiella）、カドラカルテラ（Cadra cautella）、コリストニウラ（Choristoneura）sp.，コキラスホスペス（Cochylls hospes）、コリアスオイレチーメ（Colias eurytheme）、コルシラセファロニカ（Corcyr a cephalonica）、シジララチフェレナス（Cydia latiferreanus）、シジラポモネラ（Cydia pomonella）、ダタナインテグリマ（Datana integerrima）、デンドロリマスシベリカス（Dendrolimus sibericus）、デスミアフネラリス（Desmia funeralis）、ジアファニアハイアリナタ（Diaphania hyalinat a）、ジアファニアニチダリス（Diaphania nitidalis）、ジアトラセグランジオセラ（Diatraea grandiosella）、ジアトラセサックラリス（Diatraea sa ccharalis）、エンモスザブシグナリア（Ennomos subsignaria）、エレウマロフチニ（Eoreuma loftini）、エフェスチアエルテラ（Ephestia elutella）、エラニスチラリア（Erannis tilaria）、エチゲメネアクレア（Estig mene acrea）、ユリアサルブリロラ（Eulia salubricola）、ユポコリアアムビグラ（Eupocoellia ambiguella）、ユポシリアアムビグラ（Eupoecilia a mbiguella）、ユポクチスシリスレア（Euproctis chrysorrhoea）、ユオアメソリア（Euxoa messoria）、ガレリアメロネラ（Galleria mellonella）、グラフォリタモレスタ（Grapholita molesta）、ハリシナアメリカナ（Harr isina americana）、ヘリコベルパスブフレカ（Helicoverpa subflexa）、ヘリコベルパジー（Helicoverpa zea）、ヘリオチスビレネセンス（Heliothis virescens）、ヘミレウカオリビエ（Hemileuca oliviae）、ホモエソマエレクテラム（Homoeosoma electellum）、ヒファントリアクネー（Hyphantria cunea）、ケイフェリアロイコペルシセラ（Keiferia lycopersicella）、ラムジナフィセラリアフィセラリア（Lambdina fiscellaria fiscellaria）、ラムジナフィセラリアルグブロサ（Lambdina fiscellaria lugubrosa）、リューコマサリシス（Leucoma salicis）、ロベシアボトラナ（Lobesia botrana ）、ロキソステジスチクチカリス（Loxostege sticticalis）、リアントリアジスパー（Lymantria dispar）、マカラチュリシサリス（Macalla thyrsisa lis）、マラコソマ（Malacosoma）sp.，マメストラブラシカエ（Mamestra bra ssicae）、マメストラコンフィグラタ（Mamestra configurata）、マンジュカキンクマクラタ（Manduca quinquemaculata）、マンジュカセクタ（Manduca s exta）、マムカテスチュラチス（Maruca testulalis）、メランチカピクタ（Melanchra picta）、オペロフテラグルマタ（Operophtera brumata）、オグリア（Orgyia）sp.，オストリニアヌビラリス（Ostrinia nubilalis）、パレアクリタベルナタ（Paleacrita vernata）、パピロコレスホンテス（Papili o cresphontes）、ペクチオオラゴスシピラ（Pectinophora gossypi ella）、フィリガニジアカリフォルニカ（Phryganidia californica）、フィロノリクターブランカルデラ（Phyllonorycter blancardella）、ピリスナピ（Pieris napi）、ピリスレパ（Pieris rapae）、プラチペナスカブラ（P lathypena scabra）、プラチノタフォエンダナ（Platynota flouendana）、プラチノタスチュラタナ（Platynota stultana）、プラチピチリアカルジダクチラ（Platyptilia carduidactyla）、プロジアインテルパンクテラ（Plodia interpunctella）、プルテラキシロステラ（Plutella xylostella）、ポニチアプロトジセ（Pontia protodice）、シューダレチアウニプンカ（Pseudale tia unipuncta）、シュードプラシアインクルデンス（Pseudoplasia includen s）、サブロデスエーグロタタ（Sabulodes aegrotate）、シズラコンシナ（ Schizura concinna）、シトトロガセレアレラ（Sitotroga cerealella）、スピロノタオセラナ（Spilonota ocellana）、スポドプテラ（Spodoptera）sp. ，タウンストポエピチカメパ（Thaurnstopoea pityocampa）、チネオラビセリラ（Tineola bisselliella）、トリコプルシアニー（Trichoplusia ni）、ウデアムビガリス（Udea rubigalis）、キシロマイゲスクリアリス（Xylomy ges curialis）、ヨポノメウタパデラ（Yponomeuta padella）および／又は鞘翅目の害虫、例えばレプチオタルサ（Leptinotarsa）sp.，アカントスセリデスオブテクタス（Acanthoscelides obtectus）、カロソブルチュースシネンシス（Callosobruchus chinensis）、エピラカナバリベスチス（Epilachna vari vestis）、ピハルタルテオラ（Pyrrhalta luteola）、クリラスホルミカリウスエレガンチュルス（Cylas formicarius elegantulus）、リストロノヌスオレゴネンシス（Listronotus oregonensis）、シトフィラス（Sitophilus）s p.，シクロセファボレリス（Cyclocephala borealis）、シクロセファライマクラタ（Cyclocephala immaculata）、マクロダクチルラスサブスビノサス（Macrodactylus subspinosus）、ポピリジャポニカ（Popillia japo nica）、リボトロガスマジァリス（Rhizotrogus majalis）、アリフィトブラスジアベリナス（Alphitoblus diaperinus）、パロラスラトゼベルギ（Palo rus ratzeburgi）、テネブリオモリタ（Tenebrio molitor）、テネブリオオブスクルス（Tenebrio obscurus）、トリボリウムカスタネウム（Tribolium c astaneum）、トリボリウムコンフスム（Tribolium confusum）、トリボリムスデストムクトル（Tribolius destructor）。特異的態様において、130,000ダルトンのデルターエンドトキシンおよび／又は２種の33,000ダルトンのデルターエンドトキシンを含んでなる組成物は、鱗翅目害虫に対して有効である。本発明の菌株および／又は胞子、又は130,000ダルトンのデルターエンドトキシンおよび２種の33,000ダルトンのデルターエンドトキシンを含んでなる組成物は鱗翅目および鞘翅目害虫に対して有効である。本発明は次の実施例により非制限的に説明する。６．実施例６．１．例１：B.t.菌株EMCC0075およびEMCC0076の培養普通ブロス寒天斜面上で保持されたEMCC0075およびEMCC0076の継代培養物を用い、下記の組成を有する50mlの培地を含有する250mlのバッフル付振とうフラスコに接種する：コーンスティープリカー 15ｇ／ｌマルトリン（Maltrin）−100 40ｇ／ｌじゃがいもデンプン 30ｇ／ｌ KH₂PO₄ 1.77ｇ／ｌ K₂HPO₄ 4.53ｇ／ｌ培地のpHを、10ＮのNaOHを用いて7.0に調節する。接種後、振とうフラスコを、回転振とう器上で30℃で250rpmの振とうをもって 72時間インキュベートする。上記発酵において得られる、B.t.結晶を、ソルバール（Sorvall）RC-5B遠心機を用い、15,000rpmで15分間遠心分離することによって回収する。６．２．例２：B.t.菌株EMCC0075およびEMCC0076胞子および結晶の試験 EMCC0075およびEMCC0076を上記例１で記載した如き振とうフラスコ中で培養する。EMCC0075およびEMCC0076が鱗翅目害虫に対して活性であるか否かを決定するために、培養ブロスの１：50希釈を作成する。このような希釈培養ブロス５mlを、50mlのポリプロピレン遠心管に移す。抗生物質を含有する20mlの人工昆虫ダイエット（diet）を遠心管に加える。引き続き、混合物をバイオアッセイ用トレー内に分与する。ビート行列うじ（スポドプテラエキギ（Spodoptere exigua））又はタバコ鱗翅目昆虫の幼虫（ヘリオチスビレスセンス（Heliothis viresc ens））のいずれかの３〜６個の卵を、「ダイエット」の表面上に適用する。マイラー（Mylar）をバイオアッセイトレー上にかぶせ次いでトレーを２８℃でインキュベートする。評価を７日および11日に行なう。 EMCC0075およびEMCC0076が鞘翅目の昆虫害虫に対して活性であるか否かを測定するため、５mlの培養ブロスを振とうフラスコから除きそして50mlのポリプロピレン遠心管に直接移す。次いで（公知の抗生物質を含有する）20mlの人工昆虫ダイエットに加え（最終試験濃度＝20％ｗ／ｗ）次いで激しく混合する。とうもろこし根食い昆虫の幼虫（ジアブロチカウンデシムパンクタタ（Diabrotica und ecimpunctata））の３〜６個の卵を「ダイエット」の表面に適用する。マイラーをバイオアッセイトレー上にかぶせ次いでトレーを28 ℃でインキュベートする。評価を７日および11日に行う。スポドプテラエキギ（Spodoptere exigua）およびジアブロチカウンデシムパンクタタ（Diabrotica undecimpunctata）に対するEMCC0075およびEMCC0076 の生物活性を、発育阻止点数（SS）を用いて表わす。発育阻止点数はトレーを７日間インキュベーションした後測定する。このシステムにおいて、４＝現寸の幼虫（対照幼虫）；３＝対照幼虫の３／４の大きさ、２＝対照幼虫の１／２の大きさ：１＝対照幼虫の１／４の大きさ；そして０＝死亡。数字が小さい程、B.t.活性は高い。結果を表Ｉに示す。EMCC0075およびEMCC0076が鱗翅目および鞘翅目害虫に対して活性を有していることは明らかである。６．３．例３：EMCC0075およびEMCC0076に対するcry遺伝子プロフィール EMCC0075およびEMCC0076に対するcry遺伝子プロフィールを、パーキンエルマーシータスジーンAmp（商標）PCRレージェントキット文献に記載されたPC R法を用いて測定する。二重鎖DNAを熱変性し次いでcryＩA(a)遺伝子（配列番号：３および配列番号：４としてそれぞれ配列表中に記載）、cryＩA(b)遺伝子（配列番号：５および配列番号：６としてそれぞれ配列表中に記載）、cryＩA(c) 遺伝子（配列番号：７および配列番号：８としてそれぞれ配列表中に記載）、cr yＩD遺伝子（配列番号：９および配列番号：10としてそれぞれ配列表中に記載）、cryIIIＡ遺伝子（配列番号：11および配列番号：12としてそれぞれ配列表中に記載）、cryIIIＢ遺伝子（配列番号：13および配列番号：14としてそれぞれ配列表中に記載）、cryIIIＣ遺伝子（配列番号：15および配列番号：16としてそれぞれ配列表中に記載）およびcryIIIＤ遺伝子（配列番号：17および配列番号：18としてそれぞれ配列表中に記載）に対応する２種のオリゴヌクレオチドを低温度でアニールし次いで中間温度で伸長する。 PCR分析は両菌株がcryＩD−様遺伝子を有することを示した。cryＩDに特異的プローブは又、両菌株からの制限遺伝子DNAのサザン（Southern）分析においてc ryＩD−様遺伝子を検出した。cryＩA(a)、cryＩA(b)およびcryＩA(c)を検出できるプローブを用いたEMCC0075およびEMCC0076からの遺伝子DNAからの制限断片のサザン分析は、cryＩA−様分析の存在を確認した。６．４．例４：EMCC0075双ピラミッドおよびひし形結晶の精製普通ブロス寒天斜面上に保持されたEMCC0075の継代培養物を用い、下記の例５で記載する組成と同じ組成を有する500mlの培地を含有するバッフル付振とうフラスコに接種する。接種後、振とうフラスコを回転振とう器上30℃で250rpmで72 時間インキュベートする。結晶および胞子を10,000rpmで30分間遠心分離する（ソルバルGSA回転機）ことにより回収する。ペレットを脱イオン水で洗い、15,00 0rpmで遠心し（ソルバルSS34回転機）、次いで１ml当たり0.1ｇの湿量の濃度に音波処理により脱イオン水に再懸濁させる。１ｇの湿量の粗製結晶を脱イオン水で33.2mlに希釈し次いで250mlの分液ロート内に装入する。10mlの３Ｍ塩化ナトリウム、23.4mlの20％ポリエチレングリコール8000、および33.4mlの20％ナトリウムデキストランスルフェートを含んでなる底部相溶液を、250mlの分液ロートに加え次いで混合し、次いで0.3ｇのナトリウムデキストランスルフェート、70.3ｇのポリエチレングリコール8000、および脱イオン水１ｌ当たり17.5ｇの塩化ナトリウムを含んでなる 100mlのポリエチレングリコール上相溶液を加える。懸濁液を激しく振とうし、次いで二相を室温で30分間分離せしめる。多量の胞子を有する上相をピペットで除く。低相は結晶および残留胞子を有する。上相が本質的に胞子を有しなくなるまで、抽出を数回くりかえす。次いで低相を100mlの脱イオン水で希釈し、次いで10,000rpmで45分５℃で遠心分離し（ソルバルGSA回転機）、結晶を回収する。回収した結晶を200mlの脱イオン水で洗いそして前記の如く再度遠心分離する。上相からの胞子を、上記洗浄手順を用いて回収する。次いで、双ピラミッドおよびひし形結晶を、0.2Ｍトリス−HCIでpH2.5に調節した3.8mlの75％Ludox（商標）ｖ／ｖ、3.8mlの50％Ludox（商標）ｖ／ｖおよび 3.8mlの38％Ludox（商標）ｖ／ｖを含んでなる不連続Ludox（商標）HS-40（デュポン）勾配を用い密度勾配遠心法により更に精製する。100μｌの脱イオン水中の10mgの結晶を勾配の頂部上に加層し、次いでベックマン超遠心機中10,000rpm （ベックマン41 Tiローター）で20℃で15分間遠心する。４個の分離したバンドが得られる。１つのバンドは純粋なひし形結晶を有しそしてもう一つのバンドは双ピラミッド結晶を有する。２つの他のバンドは２種の結晶タイプの混合物を有する。純粋な結晶バンドを回収し、脱イオン水で洗いそしてバイオアッセイに用いる。６．５．例４：EMCC0075およびEMCC0076からのデルターエンドトキシンのSDS-PA GE分析普通ブロス寒天斜面上に保持されたEMCC0075およびEMCC0076の継代培養物を用い、下記の組成を有する50mlの培地を含有する250mlのバッフル付振とうフラスコに接種する：グルコース 2.0ｇ／ｌ KH₂PO₄ 0.86ｇ／ｌ K₂HPO₄ 0.55ｇ／ｌクエン酸ナトリウム 2.0ｇ／ｌ CaCl₂ 0.1ｇ／ｌ MnCl₂・4H₂O 0.16ｇ／ｌ MgCl₂・6H₂O 0.43ｇ／ｌ ZnCl₂ 0.007ｇ／ｌ FeCl₃ 0.003ｇ／ｌカザミノ酸 5ｇ／ｌ接種後、振とうフラスコを回転振とう器上で250rpmで30℃で72時間インキュベートする。EMCC0075およびEMCC0076の前記発酵中で得られたB.t.結晶を、10,000 rpmで30分間遠心分離により（ソルバルGSAローター）回収する。次いで、前記例４で説明した如きナトリウムデキストランスルフェートおよびポリエチレングリコールを用い二相抽出により精製する。 EMCC0075およびEMCC0076からのB.t.結晶製品をSDS-PAGEにより分析する。特に、SDS-PAGEは、ファルマシアのPhast System（商標）を用い10−15％公配ゲルについて行った。タンパク質バンドをファルマシアGelscan（商標）ソフトウェアを用いファルマシアデンシトメーターで分析する。結果は、以下の内容を示す；すなわち両菌株により生産された結晶は分子量約130,000ダルトンおよび33,000 ダルトンを有する少なくとも２種のタンパク質を有する。６．６．例６：スポドプテラエキギ（SPODOPTERA EXIGUA）を用い、新規鱗翅目活性バシラスチューリンゲンシス菌株の活性を測定するためのバイオアッセイ精製された双ピラミッドおよびひし形結晶が、鱗翅目害虫に対し活性であるかを測定するため、結晶をスポドプテラエキギ（Spodoptere exigua）に対してバイオアッセイを行う。結晶製品のサンプルを、ウェル当たり500μｌの人工昆虫ダイエットを含有するゼリー状トレーの各ウェルに適用する。種々のサンプルを含むトレーを風乾する。２−４匹の第二齢又は初期第三齢のスポドプテラエキギ（Spodoptere exigua）を乾燥試験サンプルを含有する各ウェルに加える。次いで、トレーを、空気交換用の穴を有する穴あけされたマイラー（Mylar）でシールする。次いで例２で記載した如く、発育阻害の程度を記録する。結果を表IIに示す。次の内容が明らかである；すなわち、驚くべきことに双ピラミッド結晶およびひし形結晶の双方ともスポドプテラエキギ（Spodoptere e xigua）に対し活性を有する。胞子は又スポドプテラエキギに対しても活性を示す。６．７．例７．ジアブロチカウンデシムパンクタタ（DIABROTICA UNDECIMPUNC TATA）を用いるバイオアッセイ精製した双ピラミッドおよびひし形結晶製品が鞘翅目害虫に対して活性であるかどうかを測定するため、表面加層分析を用い結晶を生物検定する。結晶製品のサンプルをウェル当たり200μｌの固化人工昆虫ダイエットを有するマイクロタイタープレートの各ウェルに適用する。ジアブロチカウンデシムパンクタタ（ Diabrotica undecimpunctata）の２〜４匹の新生児を、ペイントブラッシを用い各ウェル内に静かに入れる。次いで、マイクロタイタープレート、空気交換用の穴を有する穴あけしたマイラー（Mylar）を用いてシールし次いで30℃でかつ80 ％の湿度でインキュベートする。死亡率％に対する評価を５日目に行う。結果を表IIIに示す。以下の内容が明らかである；すなわち双ピラミッド結晶およびひし形結晶は、ジアブロチカウンデシムパンクタタに対し活性である。胞子のみは又、ジアブロチカウンデシムパンクタタに対し活性を有する。６．８．例８：EMCCのひし形結晶タンパク質からのデルターエンドトキシンのタンパク質配列決定 60μｌの50％三フッ化酢酸（TFA）を、25μｇのひし形結晶に加える。混合物の15μｌアリコート４種を、バイオブレネコートしかつTFA予備処理されたミクロカートリッジガラス繊維フィルター上にスポット乾燥する。Ｎ−末端配列決定は、アプライドバイオシステム社のプロテインシークエンサモデル476Aで、オン−ラインHPLCおよび液相TFAデリバリーを用いて行う。フェニルチオヒダントイン−アミノ酸のHPLC測定は、プレミックス緩衝系（ABI社）を用いて行うことによってなされる。データはABI's 610データ分析ソフトウェアを用いマッキントッシュIIsiに集められる。二重配列が、約60／40比で認められる。データを分析しそして配列を次の如く区別する：「MIVDL」：MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）「MKHHK」：MKHHKNFDHI （配列番号：２）６．９．例９：「MIVDL」および「MKHHK」タンパク質をエンコードする遺伝子のクローニング「MIVDL」タンパク質、MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRPのために最初に決定されたアミノ酸配列は、配列ATG ATH GTN GAY YTN TAY MGN TAY YTN GG N GGN YTN GCN GCN GTN AAY GCN GTN YTN CAY TTY TAY GAR CCN MGN CCN（配列番号：19）によってエンコードされる。この配列に基づき7lntオリゴマーが設計され、ここで混合デオキシヌクレオチドが２−重レダンダント（redundant）部位で用いられそしてデオキシイノシンがミスマッチでの塩基識別および不正確塩基（マーチン，F.H.，およびM.M．カストロ，1985，Nucleic Acids Res．13：89 2-8938）：ATG ATI GTI GAY YTI TAY MGI TAY YTI GGI GGI YTI GCI GCI GTI AA Y GCI GTI YTI CAY TTY TAY GAR CC（配列番号：20）で選択的に減少させるために用いられる。「MKHHK」タンパク質、すなわちMKHHKNFDHIに対し決定されたアミノ酸配列は、２個以上のコドンにより特定化されたアミノ酸の不存在のため、より識別するプローブの設計を許容する。更に、識別が次の仮定によって許容される；すなわち、As又はTsはB.t.菌株の全体的低％Ｇ＋Ｃ含量のため（約34モル％、クラウス，Ｄ.,およびR.C.M．バーケリ 1986，Genus Bacillus，p 1112，In P.H.A．スエース（編）、Bergey's manual of systematic bacteriology，v.z．The William s and Wilkins Co.,ボルチモア）、Gs又はCsに優先して暗号配列において使用されるであろう。次のプローブが合成される：ATG AAA CAT AAA AAT TTT GAT CAT AT（配列番号21）。MIVDLおよびMKHHKプローブの双方に、製造者の指示（ベーリンガーマンハイムゲニナスシステム（商標）ウセルスガイド、バージョン2.0）に従い、ジゴキシゲニン−dUTPを末端につなぐ。 EMCC0075遺伝子DNAは、製造者により提供される緩衝液中で一夜、EcoRＩ，Eco RＶ，HindIII，PstＩ）又はこれらの酵素の組合せにより消化され、0.5×TBE中0 .8％アガロースを通して電気泳動され（TRIS−ボレート−EDTA緩衝液；ザムブルック等、1989，in Mol ecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring LaboratoryPress，Cold S pring Harbor，N.Y.）、10×のSSCを、10×のSSC中のストラタゲンポジブロッター（Stratagene Posiblotter）を用いたベーリングマンハイムナイロン膜に移し、次いで下記の如くプローブする。ハイブリッド形成および48℃で0.5× のSSCによる堅縮洗浄後、MIVDLプローブはEcoRＶおよびPstＩ断片12kb又はそれ以上の大きさ、約10kbのEcoRＩ断片および約3.5kbのHindIII断片を検出する。ハイブリッド形成および48℃で５×のSSCによる堅縮洗浄後、MKHHKプローブは、MI VDLプローブと同様に、同じ大きさのEcoRＩ，EcoRＶ、およびPstＩ断片を検出した。この結果は２種の遺伝子が多分互いに極めて近接して存在することを示す。追加的に、MKHHKプローブは約６kbのHindIII断片を検出した。「MIVDL」および「MKHHK」タンパク質の少なくとも一部をエンコードするHind III断片をクローン化するため、pUC118をHindIIIで消化し次いで５´末端を脱リン酸化するため子ウシの腸のホスファターゼを用いて処理し、このようにしてベクターのリゲートを防止する。制限されかつホスファターゼ処理されたpUC118を次いでHindIIIで予じめ完全に消化されたEMCC0075遺伝子DNAと混合する。連結後、反応混合物を用いE.coli菌株XL1-Blue MRF´（ストラタジーン社，La Jolla， CA）を形質転換する。所望のDNA断片を有するコロニーを、サムブルック等（198 9，Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring Laboratory Press ，Cold Spring Harbor，NY）によって記載される手順により、前記の「MIVDL」および「MKHHK」プローブを用い「コロニーハイブリッド形成」により検出する。７．微生物の寄託バシラスチューリンゲンシスの次の菌株を、アグリカルチュアルリサーチサービスパテントカルチュアコレクシヨン（NRRL）（ノーザンレジオナルリサーチセンター，1815 ユニバーシティストリート，ペオリア，イリノイス，61604，米国）に寄託した。菌株受託番号寄託日 EMCC0075 NRRL B-21019 1992年12月３日 EMCC0076 NRRL B-21020 1992年12月３日菌株は次の条件で寄託された；すなわち37 C.F.R．§1．14および35 U.S.C． §122のもとおよびブダペスト条約の条件の下で特許庁長官により権利を付与すべきことが決定された人に対し本特許出願の係属中、培養株への利用機会が得られるであろう。寄託物は、各寄託された菌株の生物学的に純粋な培養物を表わす。寄託物は、本出願又はその分割出願の同等物が出願された国の外国特許法の要求に従って入手できる。しかし、次のように理解されるべきである；すなわち寄託物の入手容易性は、政府の働きにより付与された特許権の信用低下において本発明の実施のための契約を構成するものでない。ここで記載されかつ権利要求された発明は、本明細書で開示した特定の態様によりその範囲は制限されない；何故ならこれらの態様は発明の幾つかの態様を説明することを意図しているからである。等価の態様も本発明の範囲内に入る。実際、本明細書で示しかつ記載した態様に加えて発明の種々の態様は前記の記載から当業者に明らかであろう。そのような変形も又添付の請求の範囲内に含まれることが意図される。種々の文献が本明細書において引用されたが、それらの開示はそれを引用して本明細書に加えられる。配列表（１）一般情報（ｉ）出願人：リー，チーリアダムス，リーＦ．ラフブロウ，パトリシアＡ．トーマス，ミハエルＤ．（ii）発明の名称：鱗翅目および鞘翅目害虫に対して活性な新規バシラスチューリンゲンシス菌株（iii）配列の数：36 （iv）通信住所：（Ａ）住所：ノボノルディスクオブノースアメリカ社（Ｂ）街：405レキシントン街（Ｃ）市：ニューヨーク（Ｄ）州：ニューヨーク（Ｅ）国：米国（Ｆ）ZIP:10174-6201 （ｖ）コンピューター読みとり方式（Ａ）媒体のタイプ：フロッピーディスク（Ｂ）コンピューター：IBM PCコンパチブル（Ｃ）作動システム：PC-DOS／MS-DOS （vi）現出願データ（Ａ）出願番号：（Ｂ）出願日：1993年12月13日（Ｃ）分類：（vii）先願データ（Ａ）出願番号：US 07／991,073 （Ｂ）出願日：1992年12月15日（viii）代理人／代理店情報（Ａ）名称：アグリス，チェリルＨ．（Ｂ）登録番号：34,086 （Ｃ）照会：ドケット番号：3778.204-WO （ix）通信情報（Ａ）電話：212-867-0123 （Ｂ）テレファックス：212-878-9655 （２）配列番号：１に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：26個のアミノ酸（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列：配列番号：１：（２）配列番号：２に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：１０個のアミノ酸（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列：配列番号：２：（２）配列番号：３に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：20個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：３：（２）配列番号：４に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：４：（２）配列番号：５に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：５：（２）配列番号：６に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：27個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：６：（２）配列番号：７に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：７：（２）配列番号：８に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：26個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：８：（２）配列番号：９に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：９：（２）配列番号：10に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：26個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：10：（２）配列番号：11に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：11：（２）配列番号：12に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：24個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：12：（２）配列番号：13に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：13：（２）配列番号：14に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：14：（２）配列番号：15に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：24個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：15：（２）配列番号：16に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：16：（２）配列番号：17に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：17：（２）配列番号：18に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：23個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：18：（２）配列番号：19に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：54個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：19：（２）配列番号：20に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：57個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：20：（２）配列番号：21に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：29個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：21：（２）配列番号：22に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：31個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：22：（２）配列番号：23に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：23：（２）配列番号：24に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：46個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：24：（２）配列番号：25に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：23個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：25：（２）配列番号：26に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：24個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：26：（２）配列番号：27に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：23個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：27：（２）配列番号：28に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：28：（２）配列番号：29に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：21個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：29：（２）配列番号：30に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：24個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：30：（２）配列番号：31に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：24個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：31：（２）配列番号：32に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：32：（２）配列番号：33に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：23個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：33：（２）配列番号：34に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：22個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：34：（２）配列番号：35に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：23個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：35：（２）配列番号：36に対する情報：（ｉ）配列の特徴（Ａ）長さ：19個の塩基対（Ｂ）タイプ：核酸（Ｃ）鎖の数：一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：cDNA （xi）配列：配列番号：36：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ 9282−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:07）Ｃ１２Ｒ 1:07） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者ルフバロー，パトリシアエー. アメリカ合衆国，カリフォルニア 95616, デイビス，メイドゥプレイス 3603 (72)発明者トーマス，マイケルデビッドアメリカ合衆国，カリフォルニア 95616, デイビス，ニューポートテラス 3175

Claims

【特許請求の範囲】１．鱗翅目の昆虫害虫および鞘翅目の昆虫害虫に対して殺虫作用を有する生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）菌株又はその胞子、結晶又は変異体であって、その菌株又は変異体は分子量約33,000ダルトンおよび MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有する１種のデルタ−エンドトキシンおよび分子量約33,000ダルトンおよび MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列を有する１種のデルタ−エンドトキシン並びに分子量約130,000ダルトンの分子量を有するデルタ−エンドトキシンを生産し、ここにおいて該デルタ−エンドトキシンが鱗翅目の昆虫害虫に対して殺虫作用を有する、前記生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス菌株、又はその胞子、結晶又は変異体。２．バシラスチューリンゲンシス菌株が、NRRL B-21019の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシスEMCC0075である、請求の範囲第１項記載の生物学的に純粋なチューリンゲンシス菌株。３．バシラスチューリンゲンシス菌株が、NRRL B-21020の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシスEMCC0076である、請求の範囲第１項記載の生物学的に純粋なチューリンゲンシス菌株。４．分子量約33,000および MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシン。５．デルタ−エンドトキシンが、NRRL B-21019の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシスEMCC0075、又はバシラスチューリンゲンシスEMCC0075と実質的に同じ性質を有するその胞子又は変異体、又はNR RL B-21020の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシス、又はバシラスチューリンゲンシスEMCC0076と実質的に同じ性質を有するその胞子もしくは変異体から得られる、請求の範囲第４項記載のデルタ−エンドトキシン。６．分子量約33,000ダルトンおよび MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシン。７．デルタ−エンドトキシンが、NRRL B-21019の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシスEMCC0075、又はバシラスチューリンゲンシスEMCC0075と実質的に同じ性質を有するその胞子もしくは変異体又はNRRL B-21020の同定特性を有するバシラスチューリンゲンシスEMCC0076又はバシラスチューリンゲンシスEMCC0076と実質的に同じ性質を有するその胞子もしくは変異体から得られる、請求の範囲第６項記載のデルタ−エンドトキシン。８．分子量約33,000および MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシン又は鱗翅目もしくは鞘翅目の昆虫害虫に対する殺虫作用を有する該デルタ−エンドトキシンの一部をエンコードする核酸配列を含む核酸断片。９．分子量約33,000ダルトンおよび MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシンをエンコードする核酸配列を有する核酸断片、又は鱗翅目もしくは鞘翅目の昆虫害虫に対し殺虫作用を有する該デルタ−エンドトキシンの一部をエンコードするその断片。 10．鱗翅目の昆虫害虫および鞘翅目の昆虫害虫に対し活性を有する生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス菌株又はその胞子、結晶もしくは変異体並びに殺虫剤担体を含んでなる殺虫剤組成物であって、該菌株もしくは変異体が分子量約33,000および MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシン、分子量約33,000および MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列、および分子量約130,000ダルトンを有するデルタ− エンドトキシンを生産するものであり、ここにおいて該デルタ−エンドトキシンが鱗翅目の昆虫害虫に対して殺虫作用を有する、前記殺虫剤。 11．殺虫剤担体と共に、分子量約33,000および MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシン、分子量約33,000および MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列、および分子量約130,000ダルトンを有するデルタ− エンドトキシンを含んでなる殺虫剤組成物であって、該デルタ−エンドトキシンが鱗翅目の昆虫害虫に対して殺虫作用を有する、前記殺虫剤組成物。 12．殺虫剤組成物が更に、鱗翅目の昆虫害虫および鞘翅目の昆虫害虫に対し活性を有する生物学的に純粋なバシラスチューリンゲンシス菌株の胞子を含んで成り、該菌株もしくは変異体が分子量約33,000ダルトンおよび MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）を有するデルタ−エンドトキシン、分子量約33,000および MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列および分子量約130,000ダルトンを有するデルタ−エンドトキシンを生産し、ここにおいて該デルタ−エンドトキシンが鱗翅目の昆虫害虫に対して殺虫作用を有する、請求の範囲第10又は11項記載の殺虫剤組成物。 13．殺虫剤担体と共に、分子量約33,000ダルトンおよび MIVDLYRYLGGLAAVNAVLHFYEPRP （配列番号：１）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシンおよび分子量約33,000ダルトンおよび MKHHKNFDHI （配列番号：２）のＮ−末端アミノ酸配列を有するデルタ−エンドトキシンを含んでなる殺虫剤組成物。 14．請求の範囲第10又は11又は13項記載の殺虫剤組成物の昆虫−駆除有効量を害虫に暴らすことを含んでなる、鱗翅目の昆虫害虫を駆除する方法。 15．請求の範囲第10又は11項記載の殺虫剤組成物の昆虫−駆除有効量を害虫に暴らすことを含んでなる、鞘翅目の昆虫害虫を駆除する方法。