JPH08502948A - カラノライド抗ウイルス性化合物、組成物およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、式（Ｉ）および（II）で示されるカラノライド化合物と呼ばれる新規抗ウイルス性化合物、およびその誘導体を提供する。該化合物は、本発明の方法に従ってCalophyllum属の植物から単離することができる。該化合物およびその誘導体は単独でまたは他の抗ウイルス剤と組合わせ、医薬組成物のような組成物として、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不全ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）の増殖または複製を阻害するために使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 カラノライド抗ウイルス性化合物、組成物およびその用途 発明の技術分野 本発明は、抗ウイルス性化合物、特にCalophyllum属の植物から単離される抗 ウイルス性化合物、詳細にはカラノライド（calanolide）化合物と呼ばれる化合 物に関する。本発明はまたCalophyllum属の植物からカラノライド化合物を単離 する方法、カラノライド化合物を含有する組成物、ならびに該組成物を抗ウイル ス療法およびウイルス感染予防のような臨床適用に使用する方法に関する。 発明の背景 後天性免疫不全症候群（acquired immune deficiency syndrome；AIDS）は非 常に重篤な疾患であり、その報告症例はこの数年で劇的に増加している。非常に 近い将来の報告症例も劇的に増加し続けると推定される。従って、ＡＩＤＳを克 服する薬剤およびワクチンの開発に多大の努力がなされている。 ＡＩＤＳウイルスは1983年に初めて確認され、幾つかの名前および頭文字で知 られている。ＡＩＤＳウイルスは３番目に見出されたＴリンパ球ウイルス（HTLV −III）であり、免疫系の細胞内における複製能を有し、広範な細胞破壊を引き 起こす。ＡＩＤＳウイルスはレトロウイルス、すなわち複製の際に逆転写酵素を 使用するウイルスである。この特定のレトロウイルスはリンパ節腫脹関連ウイル ス（lymphadenopathy-associated virus；LAV）、ＡＩＤＳ関連ウイルス（AIDS- related virus；ARV）としても知られ、最近はヒト免疫不全ウイルス（human im munodeficiency virus；HIV）として知られている。現在まで２つの異なるタイ プのＨＩＶが報告されている。すなわちＨＩＶ−１とＨＩＶ−２である。ここで は、一般にＨＩＶウイルスを意味する語としてＨＩＶという略語を使用する。 特に、ＨＩＶはＣＤ４＋ヘルパー／インデューサーＴ細胞（helper／inducer Tーcell）に対し広範な細胞変性効果を及ぼすことにより、免疫系に重篤な害を及 ぼすことが知られている。またＨＩＶ感染は神経学的衰退を生じさせ、ついには 感染個体の死に至る。 ウイルス化学療法の分野は、レトロウイルス、特にＨＩＶに対して有効な薬剤 の要求に応えて発展してきた。薬剤が抗レトロウイルス活性を示す経路は数多く ある。例えば、ＨＩＶは複製のために少なくとも４つのウイルス蛋白を必要とす る。逆転写酵素（ＲＴ）、プロテアーゼ、トランスアクチベータ蛋白（ＴＡＴ） 、およびヴィリオン蛋白発現のレギュレータ（regulator of virion-protein exー pression；REV）である。従って、理論的にはウイルス複製に関係する蛋白のい ずれか一つまたは全てを阻害することによりウイルス複製を阻害することができ る。 ＡＺＴやｄｄＣのような抗レトロウイルス剤がＲＴを阻害することが知られて いる。またＴＡＴを阻害する抗ウイルス剤も存在する。 ＡＺＴのようなヌクレオシド誘導体が、現在、抗ウイルス療法のために用いる ことができる唯一の臨床的に活性な薬剤である。ＡＺＴおよびその関連化合物は 非常に有用であるが、毒性と十分に適切な治療には治療指数が不足しているため その利用可能性は限りがある。 ＡＩＤＳ治療においてレトロウイルスのプロテアーゼの阻害剤として使用でき る可能性のあるものとして合成ペプチドも開発されている。しかしながら、これ らの阻害剤はレトロウイルスのプロテアーゼが機能するのを防ぐには有効である が、幾つかの明確な欠点を有する。第一に、プロテアーゼの活性部位が邪魔され ている、すなわちプロテアーゼの残りの部分に比べて接近しにくいため、阻害剤 がプロテアーゼの活性部位に接近して結合する能力が損なわれる。第二に、プロ テアーゼの活性部位に結合するペプチド阻害剤が一般に水難溶性であり、ドラッ グデリバリーの点で大きな問題を生じる。 従って、ＨＩＶに対する有効な抗ウイルス療法のために、単独であるいはAZT および／または他の薬剤と組合わせて使用される新たな種類の抗ウイルス剤が早 急に求められている。またＨＩＶ感染を予防するために使用する新規薬剤も重要 である。 発明の要旨 本発明の目的は、新規抗ウイルス性化合物、特にCalophyllum属の植物から単 離される抗ウイルス性化合物、詳細にはカラノライド（calanolide）化合物と呼 ば れる化合物およびその誘導体を提供することにある。 本発明の他の目的は、Calophyllum属の植物、特にCalophyllum lanigerumから 新規抗ウイルス性化合物、特にカラノライド化合物およびその誘導体を単離する 方法を提供することにある。 また本発明の他の目的は、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不 全ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）の増殖または複製を阻害す る組成物、特に医薬組成物を提供することにある。 さらに本発明の目的は、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不全 ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）による動物（特にヒト）の感 染を予防する組成物、特に医薬組成物を提供することにある。 さらに本発明の他の目的は、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫 不全ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）に感染した動物（特にヒ ト）を治療する方法を提供することにある。 さらに本発明の目的は、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不全 ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）による感染を予防するための 動物（特にヒト）の処置方法を提供することにある。 これらの目的ならびに本発明のその他の目的は、さらなる発明的特徴と同様に 以下の記載から明らかとなるであろう。 本発明は、新規抗ウイルス性化合物、特にCalophyllum属の植物から単離され る抗ウイルス性化合物、詳細にはカラノライド化合物と呼ばれる化合物およびそ の誘導体を実質的に純粋な形態で提供する。本発明はまた、Calophyllum属の植 物、特にCalophyllum lanigerumからカラノライド化合物およびその関連する誘 導体を単離および精製する方法を提供する。単離された化合物は医薬組成物のよ うな組成物として使用されうる。該組成物はさらに一または二以上の他の抗ウイ ルス剤を含有していてもよい。かかる組成物はウイルス（特にレトロウイルス、 詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２のようなヒト免疫不全ウイルス）の増殖ま たは複製を阻害することが見出された。従って、該組成物は、ウイルス（特にレ トロウイルス、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２のようなヒト免疫不全ウイ ルス）に感染した動物（特にヒト）の治療処置、ならびにウイルス感染を予防す るための動物（特にヒト）の予防処置に利用できると期待される。 図面の簡単な説明 図１はCalophyllum lanigerumから単離したカラノライド化合物および関連誘 導体（化合物１〜８）の構造を示す。化合物１がカラノライドＡであり、化合物 ４がカラノライドＢである。 図２は他の文献で報告された従来公知の構造（化合物９〜１３）を示す。 図３はカラノライドＡおよびＢの絶対立体配置を決定するために用いたカラノ ライドＡ（１）およびカラノライドＢ（４）の（Ｒ）−および（Ｓ）−ＭＴＰＡ エステルの¹Ｈ−ＮＭＲ値（Δδ＝δ_s−δ_R ５００ＭＨｚにおけるヘルツ）を示 す。 図４、Ａ〜Ｄはカラノライド化合物の抗−ＨＩＶ−１活性の例を示す。図４Ａ 、４Ｂ、および４Ｃは、培養６日後に測定した、非感染ＣＥＭ−ＳＳ細胞（○） およびＨＩＶ−１に感染させたＣＥＭ−ＳＳ細胞（●）に及ぼすカラノライドＡ の各濃度の効果を示す。図４ＡはＢＣＥＣＦアッセイで評価したＣＥＭ−ＳＳ細 胞の相対生菌数を表す。図４Ｂはそれぞれの培地の相対ＤＮＡ含量を示す。図４ ＣはＸＴＴアッセイで評価したＣＥＭ−ＳＳ細胞の相対生菌数を表す。図４Ｄは 感染性ウイルスまたはウイルス複製の指標に及ぼすカラノライドＡの各濃度の効 果を示す。これらの指標にはウイルス逆転写酵素（▲）、ウイルスコア蛋白ｐ２ ４（◆）およびシンシチウム（融合細胞）形成単位（■）が含まれる。図４Ａ、 ４Ｂ、および４Ｃでは、データは非感染、非薬剤処理コントロール値のパーセン トとして表されている。図４Ｄでは、データ点は感染、非薬剤処理コントロール 値のパーセントとして表されている。 図５はカラノライド化合物とその誘導体（シリーズ１）および７，８−ジヒド ロカラノライド化合物とその誘導体（シリーズ２）をさらに一般的に示す。式中 、 Ｃ₆アルキルまたはアリール）、およびR⁴およびR⁵は同一または異なってそれぞ 発明の詳細な説明 本発明は、下記の構造を有する実質的に純粋な形態の新規抗ウイルス性化合物 （以下、「カラノライド化合物」と呼ぷ）、およびその誘導体を提供する。 抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス性誘導体は一般的に下記 本発明はまた、次の工程からなるCalophyllum属の植物、特にCalophyllum lanigerum からカラノライド化合物およびその関連誘導体を単離および精製する 方法を提供する。 a)有機溶媒で乾燥植物材料を抽出し、粗抽出物を得て、 b)該粗抽出物を液−液分配して非極性画分中に抗ウイルス性化合物を濃縮し、 c)該非極性画分をゲル浸透クロマトグラフィーまたは減圧液体クロマトグラフ ィー（vacuumliquid chromatography）に付し、 d)シリカゲルおよびＣ₁₈逆相カラム上のＨＰＬＣによりカラノライド化合物を 単離および精製する。 本発明の方法に従って得られたカラノライド化合物およびその誘導体は、医薬 組成物のような組成物中で、単独でまたは他の抗ウイルス剤と組合わせて、レト ロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不全ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１ またはＨＩＶ−２）の増殖または複製を阻害するために使用されうる。かかる組 成物は、一または二以上の上記ウイルスに感染した動物（特にヒト）の治療処置 、ならびに一または二以上の同ウイルスによる感染の危険のある動物（特にヒト ）の予防処置に利用できると期待される。 本発明が基づく発見以前には、カラノライド化合物およびその誘導体は単離あ るいは報告されていなかった。そのような化合物を単離する方法は決定されてい なかった。従って、これらの化合物の抗ウイルス活性は従来知られていなかった のであり、これらの化合物を医薬組成物のような組成物として、動物（特にヒト ）のウイルス感染の治療および予防処置において使用できる可能性は認識されて いなかった。 本発明に至る発見は、Calophyllum lanigerumからの抽出物の抗−ＨＩＶスク リーニングにおける抗ウイルス活性である。このスクリーニングはユー．エス． ナショナル・キャンサー・インスティチュート（U.S．National Cancer Insti-t ute）により1988年から行われてきたものである（Boyd，M.R.，AIDS，Etiology ，Diagnosis，Treatment and Prevention （DeVita V.T.，Jr.，Hellman S.， Rosenberg S.A.編），pp.305-319（Philadelphia：Lippincott，1988）参照）。 Calophyllum lanigerumはCalophyllum属植物の約187の種の一つを表す。こ の植物の記載はD.J．Mabberley，“The Plant Book,”Cambridge University Pr ess，1987，p.92に見られる。この属は主にインドネシアに見られるが、タヒチ から東アフリカで報告されている。本実施例で利用した植物材料は、D．Soejart oとのユー．エス．ナシヨナル・キャンサー・インスティチュート契約の下で、J .S．BurleyとB．Leeにより、北緯２度、東経１１０度、高度３メートルのSarawa kにて収集された。 従来のCalophyllum属の植物化学研究により、Calophyllum属が二次代謝産物の 豊富な供給源であることが見出されている。Calophyllum属の種から得られるこ とが報告された化合物の中には、キサントン類（Dharmaratne，H.R.W．ら，Phyt ochemistry ，25：1957-1959（1986）；Kumar，V.，Phytochemistry，21：807-80 9（1982）；Somanathan，R.ら，J．Chem．Soc．Perkin I，2515-1517（1974）） 、ステロイド類（Gunasekera，S.P.ら，J．Chem．Soc．Perkin I，2215-2220（1 975））、トリテルペン類（Gunatilaka，A.A.L.ら，Phytochemistry，23：323-3 28（1984）；Dahanayake，M.ら，J．Chem．Soc．Perkin I，2510-2514（1974） ）、クマリン類（Samaraweera，U．ら，Tetrahedron Lett.，22：5083-5086（19 81）；Gautier，J.ら，Tetrahedron Lett.，27：2715-2718（1972）、およびベ ンゾピラン類（Stout，G.H.，J．Org．Chem.，33：4185-4190（1968）がある。 しかしながら、抗ウイルス活性はこれまでこの属と関連づけられていない。 Calophyllum lanigerumの抽出物から個々の生物活性化合物を単離および精製 するために、バイオアッセイを指標とする特別の手順を用いた。この手順では、 適用する全ての化学的単離方法に関する決定、およびその個々の工程の性質を生 物学的試験データを判断することにより決定した。この方法で用いる抗−ＨＩＶ スクリーニングアッセイ（Weislow，O.S．ら，J．Natl．Cancer Inst.，81(8)： 577-586（1989））は、ヒトＴ−リンパ芽球細胞をＨＩＶの細胞変性効果から保 護する程度を測定した。抽出物のフラクションは種々の化学的手法を用いて調製 され、一次スクリーニングで盲目的に試験した。活性フラクションをさらに選別 し、得られたサブフラクションをスクリーニングで盲目的に試験した。活性、す なわち抗ウイルス活性を有する、純粋化合物であることを示すフラクションを得 るた めに必要な回数だけこの方法を繰り返した。次いで、そのフラクションを詳細な 化学分析に供し、構造を解析した。このようにして、以下に詳述する新規な種類 の抗ウイルス性化合物が見出された。 本発明ではカラノライド化合物の主な供給源としてCalophyllum lanigerumを 使用したが、同属の他の種からもかかる化合物が得られることが認識されるであ ろう。 カラノライド化合物の化学的単離には種々の方法を用いることができる。これ らの方法の中で、抽出、液−液分配、フラッシュまたは減圧液体クロマトグラフ ィー、ゲル浸透クロマトグラフィー、および種々の結合相を用いるＨＰＬＣが挙 げられる。化合物の単離はＵＶ、ＴＬＣ、および抗−ＨＩＶバイオアッセイによ りモニターすることができる。代表的な単離法を以下に示す。 葉、小枝、実または樹皮からなる約０．２キログラムの風乾植物材料をまずす りつぶして微粉末にし、１：１ MeOH-CH₂Cl₂で抽出した。次いで２回目の抽出を メタノールで行った。これらの有機抽出物の総量は通常、出発植物材料の固まり の約５〜２０％である。最初の粗抽出物を４：１ MeOH-H₂Oに溶解し、CCl₄で３ 回抽出した。濃縮したCCl₄相を、Bio-Beads S-X4（Bio-Rad Laboratories，Inc. ；Richmond，CA）上のゲル浸透クロマトグラフィーまたはシリカゲル上の減圧液 体クロマトグラフィーのいずれかにより分画した。ＨＩＶ阻害活性を示すこれら のカラムフラクションから、続いてシリカ（３：７ EtOAc−ヘキサンで溶出）お よびＣ₁₈逆相（９：１ MeO₂H-H₂Oで溶出）カラム上のＨＰＬＣによりカラノライ ド化合物が精製された。この一般法を用いてカラノライドＡまたはカラノライド Ｂのいずれか、あるいは両方を約０．０５〜０．２％の総収率で得ることができ る。抽出物中に存在する関連化合物も同様の収率で得ることができる。C．Ianig erum からのカラノライド化合物およびその誘導体の単離は、実施例１により詳細 に記載されている。 上記の一般法でCalophyllum lanigerumの抽出物から単離することのできるカ ラノライド化合物および関連誘導体の化学構造を図１に示す。この構造の証拠は 、一次スペクトル解析（例えば、高分解能ＮＭＲおよび質量分析法、赤外線およ び ＵＶ分光法）を含む方法を組合わせることにより、関連文献の先例のスペクトル および物理化学的性質と比較することにより、さらに絶対立体化学を決定するた めのような選択された誘導体に導く方法により得られた。C．lanigerumから得た カラノライドＡ、Ｂ、およびその誘導体の構造の証拠は、実施例２に詳細に記載 され、表１および２にまとめて示されている。 当業者には、ここで特定して説明した以外の抗ウイルス性カラノライド化合物 およびその誘導体を、他のCalophyllum属の種および他の天然源から単離しても よく、またかかる抗ウイルス性カラノライド化合物およびその誘導体は化学的に 合成してもよいことが理解されるであろう。この系列の化合物の一般構造式を実 施例４および図５に詳述する。 純粋なカラノライド化合物またはその誘導体の抗ウイルス活性を、相関性のあ る一連のin vitroアッセイ（Gulakowski，R.J.ら，J．Virol．Methods 33：87-1 00（1991））によりさらに実証することができる。これらのアッセイはヒトにお ける化学化合物の抗ウイルス活性を正確に予測する。これらのアッセイは、HIV の複製および／またはヒト標的細胞に及ぼすＨＩＶの細胞変性効果を防護する化 合物の能力を測定する。これらの測定は、in vivoのＨＩＶ誘導疾患の病原性と 直接相関する。従って、実施例３に記載し、図４Ａ〜Ｄに示した、C．lanigerum から得たカラノライド化合物およびその誘導体の抗ウイルス活性の分析結果は、 ヒトにおけるこれらの化合物の抗ウイルス活性を正確に予測すると考えられてい る。 本発明の化合物は、ヒト免疫不全ウイルスのようなレトロウイルス、特にＨＩ Ｖ−１およびＨＩＶ−２を阻害することが示される。当業者には、本発明の化合 物が他のレトロウイルスを阻害し、またレトロウイルス以外のウイルスも阻害し うることが認識されるであろう。本発明に従って処置することのできるウイルス の例としては、Ｃ型およびＤ型レトロウイルス、ＨＴＬＶ-１、ＨＴＬＶ-２、Ｈ ＩＶ、ＦＬＶ、ＳＩＶ、ＭＬＶ、ＢＬＶ、ＢＩＶ、ウマ伝染性貧血症ウイルス、 ラウス肉腫ウイルス（rous sarcoma virus；RSV）のようなニワトリ肉腫ウイル ス（aviansarcoma viruses）、Ａ型、Ｂ型、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス、ヘルペス ウイルス、 サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、アルボウイルス、水痘ウイル ス、はしかウイルス、おたふくかぜウイルス、風疹ウイルスが挙げられるが、こ れらに限定されない。 抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス性誘導体は、治療およ び予防処置方法に用いるための各種組成物の形態に製剤化することができる。本 発明の組成物は、ウイルスに感染した動物（例えばヒト）の治療に用いることが できる。本発明の組成物は、レトロウイルスのようなウイルス（特にヒト免疫不 全ウイルス、詳細にはＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）の増殖または複製を阻害す るのに特に有用である。また当該組成物は、先に列挙したもののような他のウイ ルスに感染した動物（例えばヒト）の治療にも有用であると考えられる。さらに 、このような組成物は、ウイルスによる感染の危険のある動物（例えばヒト）の 予防処置に利用できることが見出されるであろう。 本発明の予防または治療処置方法に用いられる組成物は、一または二以上の抗 ウイルス性カラノライド化合物またはその抗ウイルス性誘導体、ならびに医薬上 許容される担体を含有してなるものである。医薬上許容される担体は、当業者に とっては好適な投与手段として周知のものである。担体の選択は、一部は特定の 用いられるカラノライド化合物により、ならびに当該組成物の投与に用いる特定 の方法により決定される。 各種の薬剤投与経路を用いることができ、また、特定の薬剤を投与するのに二 以上の経路を用いてもよいが経路によっては別の経路よりも迅速かつ効果的な反 応が得られることが当業者には理解されるであろう。さらに、用いられる特定の 医薬担体が、一部は用いられる特定化合物および選択された投与経路により決定 されることが当業者には理解されるであろう。したがって、本発明の組成物の好 適な製剤としては広範なものがある。 経口投与に好適な製剤は、有効量の上記化合物を希釈液（例えば水、塩水また はオレンジ果汁）に溶解したような液剤；それぞれ所定量の有効成分を固形また は顆粒として含有するカプセル、薬袋（sachet）または錠剤；水性液体中の液剤 または懸濁剤；ならびに水中油型乳剤または油中水型乳剤で構成することができ る。錠剤の形態は、ラクトース、マンニトール、コーンスターチ、バレイショデ ンプン、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状シリカ、クロ スカルメロースナトリウム（croscarmellose sodium）、タルク、ステアリン酸 マグネシウム、ステアリン酸およびその他の賦形剤、着色料、希釈剤、緩衝剤、 湿潤剤、保存剤、香料ならびに薬理学的に適合性の担体のうちの一または二以上 を含んでいてよい。 抗ウイルス性カラノライド化合物またはその抗ウイルス性誘導体は、単独でま たは他の抗ウイルス性化合物と組合わせて、エアロゾル剤に製剤化して吸入法に より投与することもできる。これらのエアロゾル剤は、ジクロロジフルオロメタ ン、プロパン、窒素などの許容される噴射剤を与圧したものに含ませてもよい。 局所投与に好適な製剤には、有効成分を香料、通常はスクロースおよびアラビ アゴムもしくはトラガントの中に含有する舐剤（lozenge）；有効成分をゼラチ ンおよびグリセリンのような不活性基剤、またはスクロースおよびアラビアゴム 中に含有する香錠（pastille）；適当な液状担体中に有効成分を含有する含嗽剤 ；ならびに有効成分に加え当該分野で公知の担体を含有するクリーム、エマルジ ョン、ゲルなどが含まれる。 直腸投与用の製剤は、例えばカカオ脂またはサリチル酸塩よりなる適当な基剤 とともに坐剤としてもよい。 膣投与に好適な製剤は、有効成分に加え当該分野で適当なものとして知られる 担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫剤（fo am）または噴霧剤の剤形としてもよい。同様に、有効成分をコンドーム上のコー ティングとして潤滑剤と組み合わせてもよい。 非経口投与に好適な製剤には、水性および非水性の等張性無菌注射溶液が含ま れ、この溶液は、酸化防止剤、緩衝剤、制菌剤および当該製剤を投与対象者の血 液と等張とする溶質を含有していてもよく、また、この製剤には、懸濁化剤、可 溶化剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含んでいてもよい水性および非水性の 無菌懸濁液も含まれる。この製剤は、単位投与量または多回投与量を封入したア ンプルおよびバイアルのような容器中に入れて提供することができ、また、使用 直前に例えば注射用水等の無菌液状担体を加えるだけでよいような凍結乾燥条件 下に貯蔵してもよい。用時調製の注射溶液および懸濁液は、無菌の散剤、顆粒お よび前記のような錠剤から調製してもよい。 本発明において、動物（特にヒト）に投与する用量は、妥当な時間にわたって 、感染した個体に予防的または治療的反応を生じさせるのに十分な量とすること が必要である。上記用量は、用いるカラノライド化合物の効力、病状の重さ、な らびに感染した個体の体重および年齢により決定される。上記用量はまた、用い るその特定化合物に伴うかもしれない副作用の有無によっても決定される。可能 な限り副作用は最小となるようにすることが望ましい。 上記用量は、錠剤またはカプセルのような単位投与形態としてもよい。ここで いう「単位投与形態」とは、ヒトおよび動物の患者にとって単位投与量として好 適な物理的に分離した単位のことをいい、各単位は、医薬上許容される希釈液、 担体または賦形剤と共に所望の薬効を生じさせるのに十分な量として算出した所 定量のカラノライド化合物またはその誘導体を、単独でまたは他の抗ウイルス剤 と組合わせて含有する。 本発明の単位投与形態の詳細については、用いる特定化合物（二以上でもよい ）および得られる薬効により、ならびに宿主（host）内での各化合物に関連する 薬力学により決定される。投与される量は、「抗ウイルス有効量」または個々の 患者において「有効なレベル」を達成するのに必要な量であることが必要である 。 「有効なレベル」は、用量の好ましい終点として用いているため、実際の投与 量や投与スケジュールは、薬物動態、薬物分布および代謝における個人差に応じ て異なっていてよい。この「有効なレベル」は、例えば、患者において望ましい 血液または組織濃度として規定してもよく、これは、化学化合物の臨床上の抗ウ イルス活性を予測できることが知られているアッセイにおいて、ＨＩＶのような ウイルスを阻害する一または二以上のカラノライド化合物またはその誘導体の濃 度に相当する。また本発明化合物の「有効なレベル」は、本発明の組成物をAZT または他の公知の抗ウイルス性化合物あるいはこれらを組み合わせたものと併用 する場合には変わりうる。 当業者は、個々の患者において望ましい「有効濃度」を得るために、用いられ る組成物の厳密な組成に対する適切な投与量、投与スケジュールおよび投与方法 を容易に決定することができる。また当業者は、適当な患者の試料（例えば血液 および／または組織）を直接的に（例えば分析的化学分析）または間接的に（例 えばｐ２４またはＲＴのような代用指標を用いて）分析することによって、本発 明化合物の「有効濃度」の適当な指標を容易に決定し、用いることができる。 ウイルスに感染した個体の治療においては、「メガ用量（mega-dosing）」規 制を用いることが好ましく、これは、大用量のカラノライド化合物またはその誘 導体を投与し、当該化合物が作用するだけの時間を与え、この後適当な試薬を個 体に投与してカラノライド化合物またはその誘導体を不活性化するものである。 医薬組成物は、後天性免疫不全症候群（AIDS）の治療に用いる場合、カラノラ イド化合物またはその誘導体とともに他の医薬を含有していてもよい。このよう な併用医薬の代表的な例には、抗ウイルス性化合物、免疫調節剤（immunomodula -tor）、免疫促進剤および抗生物質が含まれる。典型的な抗ウイルス性化合物に は、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル（gancyclovir）、フッ素化ジデ オキシヌクレオチド、ネビラピン（nevirapine）［Shihら，PNAS88：9878-9882 （1991）］のような非ヌクレオシド類縁化合物、Ｒ82913［Whiteら，Antiviral Research16：257-266（1991）］のようなＴＩＢＯ誘導体、Ｒｏ31-8959［Craig ら，Antiーviral Research 16：295-305（1991）］、BI-RJ-70［Shihら］、アシ クロビル（acyclovir）、α−インターフェロンおよび組換えＣＤ４［Meriganら ，The American Journal of Medicine 90（Suppl．4A）：8S-17S（1991）］が含 まれる。典型的な免疫調節剤および免疫促進剤には、各種インターロイキン、Ｃ Ｄ４、サイトカイン、抗体製剤、輸血剤および細胞輸注剤が含まれる。典型的な 抗生物質には、抗真菌剤、抗菌剤および抗ニューモシスティス・カリニ（pneumo cysitiscarnii）剤が含まれる。 他の抗レトロウイルス剤とともに、特にｄｄＣ、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＡのよ うな公知の逆転写酵素（ＲＴ）阻害剤、または抗ＴＡＴ剤のような他のＨＩＶ蛋 白に対して作用する他の阻害剤とともに阻害化合物を投与することによって、一 般にウイルスのライフサイクルのうち、複製期の大部分または全てを阻害する。 ＡＩＤＳまたはＡＲＣ患者に用いるｄｄＣおよびＡＺＴの用量についてはこれま でに発表されている。ｄｄＣのウイルス抑制範囲は、一般に０．０５μＭから１ ．０μＭまでである。約０．００５〜０．２５mg/kg体重の範囲で大部分の患者 においてウイルス抑制性を示す。経口投与にあたっての予備投与量の範囲はこれ よりも幾分広く、例えば０．００１〜０．２５mg/kgを１回または２、４、６、 ８、１２時間等の時間間隔で２回以上投与する。一般に０．０１mg/kg体重のｄ ｄＣを８時間毎に与えるのが好ましい。併用投与療法の場合、他の抗ウイルス性 化合物は、例えば、カラノライド化合物と同時に投与してもよく、あるいは適宜 時間をずらして投与するようにしてもよい。また、これら二つの薬剤を組み合わ せて一つの組成物としてもよい。それぞれの薬剤の用量は、組み合わせて用いる 場合は、いずれかを単独で用いる場合よりも少なくてもよい。 本発明の化合物および方法を、以下の実施例によりさらに詳細に説明する。こ れらの実施例は本発明をさらに具体的に示すためのものであって、発明の範囲を 限定することを意図するものではない。実施例１ この実施例は、Calophyllum lanigerumの抽出物からのカラノライド化合物お よびその誘導体の単離を説明する。Calophyllum lanigerumの乾燥した実および 小枝（763g）を−20℃で保存し、この材料を粉砕し、１：１CH₂Cl₂/MeOHで濾過 し、100％MeOHで洗浄した。減圧下で溶媒を留去し、72.5ｇの有機抽出物を得た 。 有機抽出物の一部10ｇを液−液分配プロトコールに供した。有機抽出物の一部 10ｇを500ml CH₃OH-H₂O（9:1）に懸濁させ、ヘキサン（3×300ml）で抽出した。 極性相の水含有量が20％に増加し、そこで第二の抽出はCCl₄（3×300ml）で行っ た。全ての画分の抗ＨＩＶ活性を、通常の一次スクリーニングアッセイ（Weisーl ow，O.S．ら，J．Natl．Cancer Inst.，81（8）：577-586（1989））を用いて、 各クロマトグラフィー工程で評価した。抗ＨＩＶ活性をヘキサン（770mg）およ びCCl₄（590mg）可溶画分中に濃縮した。活性画分を、ヘキサン/EtOAcの混合物 を用 いるシリカゲル（10g）上の減圧液体クロマトグラフィー（ＶＬＣ）によって個 別に分離した。10-25％EtOAcで溶離した活性成分を、ＴＬＣおよび¹Ｈ ＮＭＲ プロフィールに基づいて集め、２つの活性画分を得た。個々の画分をヘキサン／ EtOAc混合物による漸次段階−勾配溶離を用いるシリカ上のＶＬＣによってさら に分離した。最終精製で８つの化合物（１〜８）を得た。その構造を図１に示し た。シリカＨＰＬＣで７：３ヘキサン/Et0Acを用いて溶離し、カラノライドＡ （１）（11.7mg）、カラノライドＢ（４）（5.0mg）および化合物７（12.5mg） を得た。他の成分の精製は、９：１MeOH/H₂Oを用いたＣ₁₈ＨＰＬＣによって行い 、１２−アセトキシカラノライドＡ（２）（７mg）、１２−メトキシカラノライ ドＡ（３）（５mg）、１２−メトキシカラノライドＢ（５）（16mg）、化合物６ （４mg）および化合物８（11mg）を得た。図２に、以前に他の情報源で報告され た５つの関連ある構造（９〜１３）を示す。図１の新規な化合物を、図２の公知 の化合物と比較することによって、本発明の化合物が以前に他の情報源で報告さ れた化合物と異なることがわかる。実施例２ この実施例は、実施例１で得られたCalophyllum lanigerumからのカラノライ ドＡおよびＢ並びに関連誘導体に関する構造証明について述べる。カラノライド Ａ（１）は、光学活性な油状物（［α］_D＝＋60゜）として単離され、分子式 Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅を示すm/z370.1736ドルトンにHREIMS親イオンを与えた。質量スペク トルはＭ⁺-CH₃（m/z355，100%），Ｍ⁺-CH₃-H₂O（m/z337，12%）およびＭ⁺-C₅H₁₁ （m/z 299，29％）の重要なフラグメントイオンを含んでいた。赤外線スペクト ルは、ヒドロキシル基（3300cm^-1）およびカルボニル基（1735cm^-1）に相当する バンドを示した。¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける１１ｓｐ²炭素に関する共鳴 は、共役エステル（δ160.4）、フェニル基に共役した２置換オレフィン（δ126 .9［1H］および116.5［1H］）、カルボニルに共役した３置換オレフィン（δ158 .9および110.1［1H］）、および３つの酸素部分を有する全置換ベンゼン環（δ1 54.5、153.1、151.1、106.3、106.4および104.0）が存在することを示した。分 子式中、事実上含まれた二重結合当量の数を考慮すると、カラノ ライドＡ（１）は４環であると決定された。¹Ｈ ＮＭＲスペクトルは２つのメ チル一重線（δ1.49および1.44）、２つのメチルニ重線（δ1.44および1.13）お よび１つのメチル三重線（δ1.01）を示した。ほかのプロトンシグナルには、ア リルのメチレン（δ2.87［2H］，m）、脂肪族メチレン（1.63［2H］，m）および ３つのオレフィンプロトン（δ6.60 d，J=9.5 Hz；5.92 t，J=1.0 Hz；5.52d，J =9.5Hz）が含まれていた。これらデータは、カラノライドＡ（１）がコスタトラ イド（costatolide）（９）、以前に報告されたCalophyllum costatumからの代 謝産物（Stout，G.H.，J．Org．Chem．，29：3604-3609（1964））と関連するク マリン誘導体であることを示唆した。 ヘテロ核相関実験（ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣ）で検出された一結合（one-bond ）、遠隔（long-range）プロトンにより、カラノライドＡ（１）の¹Ｈ ＮＭＲ スペクトル（表１）および¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル（表２）の両方の完全な帰属 がなされた。Ｈ８と炭素４ｂ、６、８ａおよび８ｂの間の相関を含めた重要な相 関から、２，２−ジメチルクロメン系の位置を確立した。Ｃ４にｎ−プロピル基 が位置することは、Ｃ１３アリルのメチレンプロトンおよびＣ３オレフィンプロ トンの間の1.0Hzアリルカップリングにより、およびＣ１３メチレンプロトンか らＣ３およびＣ４ａへの三結合（three-bond）ヘテロ核相関により決定された。 クマリン核に関する残りの置換パターンは、Ｈ１２と炭素８ｂ、１０、１１、１ ２ａ、１２ｂおよび１９の間の相関によって決定された。これにより、カラノラ イドＡ（１）はコスタトライド（９）と同じ骨格を有するが、それらは２，３− ジメチルクロマノール環の置換基の相対立体配置について異なることが確認され た。 化合物１の¹Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて、Ｈ１２ベンジルのカルビノール プロトンはＨ１１と8.0Hzのカップリングを示し、これによりこれらの２つのプ ロトンがｔｒａｎｓ−ジアキシアル配向を有することが示された。Ｈ11とＨ10の 間の9.0HzカップリングはＨ１０もまたアキシアルであることを確立した。この 帰属はジアキシアルＨ１０およびＨ１２プロトンの間に見られたｎＯｅ増大（３ ％）によって支持された。従って、カラノライドＡ（１）は、それぞれ10.5Hzお よび3.5HzであるＪ_10ー11およびＪ_11-12を示すコスタトライド（９）（Stout， G.H.ら，J．Org．Chem.，29：3604-3609（1964））のＣ１２エピマーであること が決定された。報告によれば、２つの関連したクマリン誘導体、イノフィルムＢ （inophyllum B）（１０）（Bandara，B.M.R.ら，Phytochemistry，25(2)：425ー 428（1986））およびコルダトライドＡ（cordatolide A）（１１）（Dharmaratn e，H.R.W.ら，Phytochemistry，24：1553-1557（1985））は、クロマノール環に ついて化合物１に見られるのと同じ相対立体化学的特徴を有するが、Ｃ４置換基 が異なる。カラノライドＡ（１）において観察されたＪ_10-11およびＪ_11-12カッ プリング定数は、化合物１０および１１に関して上記の刊行物において記載され たものとよく一致する。 カラノライドＡ（１）の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りで ある。［α］_D＝＋60゜（CHCl₃，c0.7）；UVλ_max（MeOH）325（ε13,700），28 4（ε22,800），228（ε22,200）nm；IR（フィルム）ν_max 3439，2966，1735， 1713，1582，1111cm^-1；HREIMS 測定値m/z 370．1764，Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅の計算値370 ．1780；低分解能（low res.）MS m/z 370（38%），355（100%），337（12%）， 299（29%） １２−アセトキシカラノライドＡ（２）（［α］_D＝＋20゜）は、分子式Ｃ₂₄ Ｈ₂₈Ｏ₆に相当するm/z 412.1825ドルトンにHREIMS親イオンを与えた。Ｍ⁺-CH₃（ m/z 397，41%），Ｍ⁺-AcOH（m/z 352，30%）およびＭ⁺-AcOH-CH₃（m/z 337，100 %）に重要なフラグメントイオンがみられた。¹Ｈ ＮＭＲスペクトルのδ2.10に おける鋭い３Ｈ一重線、およびδ21.2（3H）および170.7の¹³Ｃ ＮＭＲ共鳴に より、アセテート基の存在が示唆された。化合物２の残りの¹Ｈおよび¹³Ｃ Ｎ ＭＲシグナルは、化合物２のＨ１２共鳴がδ5.97の低磁場にシフトした以外は、 カラノライドＡ（１）で記録されたものと非常によく似ていた。これは、化合物 ２がカラノライドＡ（１）の１２−アセトキシ誘導体であることを示唆した。化 合物２におけるＪ_10-11（6.5Hz）およびＪ_11-12（6.0Hz）のカップリングは、ク ロマノール環プロトンが擬アキシアル配向であることを支持する。化合物２にお いてわずかに減少したクロマノールプロトンカップリングは、おそらくフレキシ ブルなクロマノール環のわずかなねじれに起因すると考え られる。さらに、提案された置換基の立体配置の証拠が、Ｈ１０およびＨ１２の 間で測定された２％のｎＯｅ増大の差により与えられた。 化合物２の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである。［α］_D ＝＋20゜（CHCl₃，ｃ0.6）；IR（フィルム）λ_max2960，1738，1585，1376，12 30，1138cm^-1；HREIMS 測定値m/z 412.1825，Ｃ₂₄Ｈ₂₈Ｏ₆の計算値412.1886； 低分解能（low res.）MS m/z 412（13%），397（41%），352（30%），337（10 0%），299（8%） １２−メトキシカラノライドＡ（３）（［α］_D＝＋32゜）のHREIMSは、分子 式Ｃ₂₃Ｈ₂₈Ｏ₅に相当するm/z 384.1924ドルトンに親イオンを示した。Ｍ⁺-CH₃（ m/z 369，12%），Ｍ⁺-CH₃OH（m/z 352，9%）およびＭ⁺-CH₃OH-CH₃（m/z 337，10 0%）に見られる重要なフラグメントイオンは、メトキシ基の存在を示唆し、これ は¹Ｈ ＮＭＲ一重線（δ3.59，3H）および対応するδ57.6の炭素共鳴により確 認された。¹Ｈおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、化合物３がカラノライドＡ（ １）と同じ骨格を持つことを明らかにした。しかしながら、重要な相違がクロマ ノール環置換基の幾つかのシグナルに見られた。Ｊ_10-11（3.5Hz）およびＪ_{11-1 2} （3.7Hz）のビシナルカップリングに加えて、1.3HzのＷカップリングが、化合 物３のＨ１０およびＨ１２の間に認められた。このＷカップリングは、Ｃ10およ びＣ１２プロトンに関して擬ジエクアトリアル立体配置であることを必要とする 。Ｈ１１、およびＣ１０メチル基（3.5%）とＣ１２メトキシ基（3.5%）の両方と の間の著しいｎＯｅ増大は、Ｈ11がこれら２つの置換基に対してｃｉｓであり、 従ってクロマノール環についてエクアトリアル配向を有することを示した。１２ −メトキシカラノライドＡ（３）において、クロマノール環の望ましい立体配座 はカラノライドＡ（１）と相対的に反対であることが明らかになった。従って、 両方の化合物においてＨ１０、Ｈ１１およびＨ１２は、それぞれα、β、αに配 向しているが、カラノライドＡ（１）における３つのプロトンは全てアキシアル であり、１２−メトキシカラノライドＡ（３）においてそれらは全てエクアトリ アルであった。 化合物３の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである。［α］_D ＝＋32゜（CHCl₃，ｃ0.8）；IR（フィルム）λ_max2960，1731，1584，1380，113 7cm^-1；HREIMS 測定値m/z 384.1924，Ｃ₂₃Ｈ₂₈Ｏ₅の計算値384.1937；低分解能 （low res．）MS m/z 384（5%），369（12%），352（9%），337（100%） カラノライドＢ（４）（［α］_D＝＋８゜）も、分子式Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅に相当する m/z 370.1747ドルトンにHREIMS親イオンを示したので、カラノライドＡ（１）の 異性体であった。カラノライドＢ（４）の¹Ｈおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは 、クロマノール環からのシグナルにおけるいくつかの変化を除いて、カラノライ ドＡ（１）のスペクトルとほとんど同じであった。化合物４が、クロマノール環 置換基の立体化学的配置においてのみ、化合物１と異なることがスペクトルデー タから明らかであった。プロトン−プロトンカップリング定数分析は、10.5HzＪ_10-11 カップリングおよび3.3HzＪ_11-12カップリングを示した。従って、Ｈ１１ およびＨ１２は、Ｈ１２が擬エクアトリアル配向であるｃｉｓ配置であるのに対 して、Ｈ１０およびＨ１１はｔｒａｎｓ−ジアキシアルであった。カラノライド Ｂ（４）は、コスタトライド（９）と同じ相対立体配置を有するが、その旋光度 は化合物９に関して報告されたもの（Stout，G.H．ら，J．Org．Chem.，29：360 4-3609（1964））と反対であり、従って化合物４および９は鏡像異性体である。 カラノライドＢ（４）の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りで ある。［α］_D＝＋10゜（アセトン，ｃ1.0）UVλ_max（MeOH）325（ε13,700）， 284（ε22,800），228（ε22,200）nm；IR（フィルム）ν_max3470，2970，1732 ，1640，1608，1587cm^-1；HREIMS 測定値m/z 370.1747，Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅の計算値3 70.1780；低分解能（low res.）MS m/z 370（3%），355（100%），337（13%）， 300（5%），299（20%） １２−メトキシカラノライドＢ（５）（［α］_D＝＋34゜）は、分子式Ｃ₂₃Ｈ_{2 8} Ｏ₅に相当するm/z 384.1890ドルトンにHREIMS親イオンを与えた。さらに、Ｍ⁺- CH₃（m/z 369，12%），Ｍ⁺-CH₃OH（m/z 352，13%），Ｍ⁺-CH₃OH-CH₃（m/z 337， 100%）のフラグメントイオンがみられた。化合物５の¹Ｈおよび¹³ＣＮＭＲスペ クトルは実質的に化合物４で記録されたものと同一であり、さらに鋭 い３Ｈ一重線がδ3.58に、対応する炭素共鳴がδ59.4に測定された。これらのデ ータは化合物５がカラノライドＢ（４）の１２−メトキシ誘導体であることを示 す。この帰属は、化合物５（２mg）をＴＨＦ／Ｈ₂Ｏ（４００μｌ）および６Ｎ ＨＣｌ（８μｌ）中、室温で４８時間、酸加水分解することにより化合物４が 唯一の生成物として得られたことから確認された。 化合物５の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである。［α］_D ＝＋34゜（CHCl₃，ｃ0.5）；IR（フィルム）λ_max2966，1734，1716，1700，15 58，1540，1506，1457cm^-1；HREIMS 測定値m/z 384.1890，Ｃ₂₃Ｈ₂₈Ｏ₅の計算 値384.1937；低分解能（low res.）MS m/z 384（4%），369（12%），352（13%） ，337（100%） 化合物６（［α］_D＝＋68゜）もまたカラノライドＡ（１）の異性体であった 。なぜなら、化合物６は分子式Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅と一致するm/z 370.1695ドルトンに 同様のHREIMS親イオンを示した。フラグメントイオンがＭ⁺-CH₃（m/z 355，100% ），Ｍ⁺-CH₃-H₂O（m/z 337，25%），Ｍ⁺-C₅H₁₁（m/z 299，35%）に測定された。 再び、化合物６の¹Ｈおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルと化合物１で記録されたス ペクトルとの間の顕著な違いはクロマノール環に関連する共鳴だけであった。化 合物６のＪ_10-11が2.5Hzであるのに対し、Ｊ_11-12は6.0Hzであった。これらのカ ップリング定数は、炭素１０、１１および１２の相対立体配置を決定するには不 十分であった。しかし、Ｃ１２ヒドロキシプロトンが、Ｈ１２との1.5Hzのカッ プリングを伴う鋭いピークを示したことから、ＯＨプロトンの交換速度がＯ１と の水素結合のため低下していることが示唆される。Ｏ１との水素結合はＣ１２が エクアトリアルＯＨであることを必要とする。Ｈ１０とＨ１２の間で５％ｎＯｅ 増大があったことから、これらのプロトンはそれぞれアキシアル配向であること が確認された。これにより、Ｈ１１はエクアトリアルでなければならない。従っ て、化合物６はカラノライドＡ（１）のＣ１１エピマーであり、これまでに報告 されているクマリン誘導体、イノフィルムＡ（inophyllum A）（１２）（Bandar a，B.M.R．ら，Phytochemistry 25：425-428（1986））とクロマノール環に関し て同じ置換パターンおよび相対立体配置を有している。従来報告されている化合 物 １２のＪ_10-11値（3.3Hz）およびＪ_11-12。値（5.4Hz）は、化合物６で測定され たそれぞれのカップリングとよく一致する。 化合物６の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである。［α］_D ＝＋68゜（CHCl₃，ｃ0.7）；IR（フィルム）λ_max2960，1729，1620，1582，11 20cm^-1；HREIMS 測定値m/z 370.1695，Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅の計算値370.1780；低分解 能（low res.）MS m/z 370（52%），355（100%），337（25%），200（35%） 化合物７（［α］_D＝＋60゜）は、分子式Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₅に相当するm/z 353.135 2にHREIMS分子イオンを与えた。これは化合物７がカラノライドＡ（１）より一 つ大きい不飽和度を有することを必要とする。1734と1697cm^-1のバンドを有する 赤外線スペクトルから、さらにカルボニル基を有することが示唆される。ヘテロ 核相関実験により、化合物７の¹Ｈおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルの完全な帰属 がなされた。化合物７の¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ほぼカラノライドＡ（１） と同様であるが、化合物７のＣ１２ピークがδ192.9の低磁場にシフトしている ことから、α，β−不飽和ケトン官能基があることを示す。化合物７のＣ１１プ ロトン共鳴がδ2.61にシフトしていることは、Ｃ１１がケトンカルボニルに対し てα位であることを支持する。 Ｈ１０とＨ１１の間で測定された小さなカップリング（Ｊ_10-11＝3.0Hz）は、 これらのプロトンのうち少なくとも一つがエクアトリアルであることを示してい る。これまでに報告されているソウラトロライド（soulattrolide）の酸化生成 物（１３）（Gunasekera，S.P.ら，J.Chem.Soc.，1505-1511（1977））が、同様 の２，３−ジメチルベンゾピラノン環系を有している。化合物１３ではＨ10とＨ １はｔｒａｎｓであり、Ｊ_10-11カップリングは11.0Hzと報告されている。これ はＨ１０とＨ１１のプロトンがｔｒａｎｓのとき、環はこれらの２つのプロトン がジアキシアル配向の配座をとることを示している。従って、化合物７における Ｈ１０とＨ１１のプロトンの相対立体配置はｃｉｓでなければならない。Ｃ１０ およびＣ１１の絶対立体配置は決定されていないので、図１では便宜上対応する 両方のメチルをαで表している。 化合物７の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである。［α］_D ＝＋60゜（CHCl₃，ｃ0.5）；IR（フィルム）λ_max2960，1734，1697，1684，157 5，1558cm^-1；HREIMS 測定値m/z 368.1213，Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₅の計算値368.1624； 低分解能（low res.）MS m/z 368（25%），353（100%），297（68%） 化合物８（［α］_D＝＋30゜）は、HREIMS親イオンm/z 388.1890ドルトンが示 すように分子式Ｃ₂₂Ｈ₂₈Ｏ₆を有していた。またＭ⁺-CH₃（m/z 373，100%），Ｍ⁺ -C₃H₇（m/z 345，3%），Ｍ⁺-CO₂CH₃（m/z 329，5%），Ｍ⁺-C₃H₇O₂（m/z313，3% ），Ｍ⁺-COCHCH₃CHOHCH₃（m/z 287，3%）のフラグメントイオンが測定された。 ｎＯｅ実験およびヘテロ核相関から得られた情報により、化合物８の¹Ｈおよび^{1 3} Ｃ ＮＭＲスペクトルが完全に帰属された。¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、不飽 和ケトン（δ201.0）、飽和エステル（δ178.6）、ジ置換オレフィン（δ125.6 ［1H］および115.6［1H］）、および３つの酸素原子を有する完全に置換された ベンゼン環（δ160.0［2C］，157.3，108.9，102.6，および101.2）のシグナル を含んでいた。従って、化合物８は、カラノライド系列の他の化合物にみられる ４つの環のうち３つの環しか有していない。ＴＬＣ上でバニリン／Ｈ₂ＳＯ₄と共 に加熱したときに鮮やかな青色のスポットを与える化合物１〜７とは対照的に、 化合物８は褐色がかった緑色のスポットを与えた。 化合物８の¹Ｈおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、化合物１〜７のクマリンお よび２，２−ジメチルクロメン環系と非常によく対応する幾つかの共鳴を示した 。しかし、化合物１〜７のＣ３／Ｃ４二重結合は化合物８では完全に飽和されて いた。便宜上、図２に示すように、化合物８の炭素原子にカラノライドＡ（１） で示した番号と同じように番号を付けた。この番号はこの系列の他の化合物（す なわち化合物２〜７）にも同様に適用する。二重結合の飽和は、Ｃ４ベンジルの メチン（δ3.67m）とカップリングする、ラクトンカルボニルに対してα位のメ チレン（δ2.81dd，Ｊ＝15.0，9.0Hzおよび2.67dd，Ｊ＝15.0，6.5Hz）であると 結論される。Ｃ４プロトンはまた、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４ａ、Ｃ１２ｂ、Ｃ１３およ びＣ１４とヘテロ核相関を示し、このことはＣ４にｎ−プロピル置換基を有する ３，４−ジヒドロクマリン骨格の存在を支持する。Ｈ８とＣ４ｂ、Ｃ６、および Ｃ８ｂとの間のヘテロ核相関を含めたヘテロ核相関から、クロメン官能基は クマリン環系上に位置することが確認された。これは、化合物１〜７に存在する クロマノール環系が化合物８では開裂していることを示唆する。 Ｃ８ｂ上にフェノールがあることは、フェノールのプロトンからＣ８ａ、Ｃ８ ｂ、およびＣ１２ａへのヘテロ核相関およびＨ８とのｎＯｅ相互作用により確立 された。分子中に残るケトン基が不飽和なので、該ケトン基はＣ１２に位置しな ければならない。この位置ではケトン基がＣ８ｂフェノールプロトンと水素結合 することができ、Ｃ８ｂフェノールプロトンはδ12.40の鋭い一重線として現れ る。Ｈ１１の低磁場へのシフト（δ2.52dq，Ｊ＝3.5，6.5Hz）は、ケトンのα位 に位置するメチンに適している。Ｃ１０カルビノールメチンプロトン（δ4.49dq ，Ｊ＝7.0，3.5Hz）は、Ｈ１１およびＣ１８メチル基とビシナルカップリングを 示した。Ｃ１９メチルプロトンからＣ１０、Ｃ１１およびＣ１２へのヘテロ核相 関を含めた全てのヘテロ核相関は、提案された化合物８の構造と完全に一致する 。 化合物８（図１）の他の物理化学的およびスペクトルデータは次の通りである 。［α］_D＝＋30゜（CHCl₃，ｃ0.5）；IR（フィルム）λ_max2960，1706，1644， 1625，1442，1131cm^-1；HREIMS 測定値m/z 388.1890，Ｃ₂₂Ｈ₂₈Ｏ₆の計算値388 .1886； 低分解能（low res.）MS m/z 388（19%），373（100%），345（3%）， 329（5%），313（3%），287（3%） カラノライドＡ（１）およびカラノライドＢ（４）の絶対立体配置をMosher法 の改変法（Ohtani，I.ら，Tetrahedron Lett.，30（24）：3147-3150（1989）；J．Org．Chem.，56 ：1296-1298（1991））により決定した。第二級アルコールの メトキシ（トリフルオロメチル）−フェニル酢酸（ＭＴＰＡ）エステルの¹Ｈ N MRスペクトルに誘導した異方性シフトを利用する手法により絶対立体配置を決定 した。化合物１と４の（＋）−（Ｒ）−および（−）−（Ｓ）−ＭＴＰＡエステ ル（図３）を共に調製した。（Ｒ）−メトキシ（トリフルオロメチル）−フェニ ル酢酸クロリド溶液（ベンゼン５０μｌ中に２．５mg）を、カラノライドＡ（１ ）３mgを乾燥ベンゼン３ml中に溶解した溶液に添加した。０．０３mgアリコート のジメチルアミノピリジンおよびトリエチルアミン１０μｌを添加し、反応混合 物を還流させた。３時間後、（Ｒ）−ＭＴＰＡ−クロリド２．５mg分を再び添加 し、 反応混合物をさらに２１時間還流させた。混合物を冷却し、ベンゼン１０mlを添 加し、有機層を１０％ＨＣｌ、１Ｎ ＮａＨＣＯ₃、および水の順で洗浄した。 溶液をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、乾固するまで溶媒留去し、シリカの短いプラグ（１ cm×２cm）上ですばやくクロマトグラフィー処理した（ヘキサン／EtOAcの混合 物で溶出した）。脱離生成物とみられる化合物が最初に５％ＥｔＯＡｃで溶出さ れ、所望の（Ｒ）−ＭＴＰＡエステルが１２％ＥｔＯＡｃで溶出された。（Ｓ） −ＭＴＰＡ−クロリドを用いて同様の操作を繰り返し、（Ｓ）−ＭＴＰＡエステ ルを得た。カラノライドＢ（２）の（Ｒ）−および（Ｓ）−ＭＴＰＡエステルを 、２回目のＭＴＰＡ−クロリドの添加後、反応混合物をさらに２時間だけ還流し た（還流時間の合計は５時間）以外は同様にして調製した。５００ＭＨｚ ¹Ｈ ＮＭＲスペクトルからのΔδ値（図３）を計算した（Δδ＝δ_S−δ_R）。この方 法により、Ｃ１２の絶対立体配置はカラノライドＡ（１）では１２Ｓ、カラノラ イドＢ（４）では１２Ｒであると決定された。前に確立したように、カラノライ ドＡ（１）［１０Ｒ，１１Ｒ，１２Ｓ］およびカラノライドＢ（４）［10Ｒ，１ １Ｒ，１２Ｒ］はＣ１２エピマーであった。 カラノライドＡ（１）のエステル化は徐々に起こり（化合物１は２４時間還流 であるのに対し、化合物４は５時間である）、¹Ｈ ＮＭＲ解析によればエステ ル化によりクロマノール環の配座に変化が生じる。化合物１のＭＴＰＡエステル では、Ｊ_10-11＝2.5Hz（前は9.0Hz）およびＪ_11-12＝2.5Hz（前は8.0Hz）である ことから、メチルおよびエステル基がエクアトリアル位置からアキシアル位置に 動いている。さらに、Ｈ１０とＨ１２の間に1.5Hzの４−結合Ｗカップリングが 観測された。同様のクロマノール環の配座の変化が前に化合物３でみられた。Ｍ ＴＰＡエステルにおいて誘導された異方性シフトは、かさ高いＭＴＰＡ基がクマ リン環ラクトンにより立体的に反発されることを示している。従って、分子のプ ロトン共鳴をΔδ−正数およびΔδ−負数に分割する平面が、Ｃ１２とＯ９を通 ってジヒドロピラン環をきれいに二等分していない。カラノライドＡ（１）では 分割面がＣ６に近づき、カラノライドＢ（４）ではＣ８ｂに近づいていると考え られる。化合物１のＭＴＰＡエステルにおけるＣ１０β−メチル基およびＣ １２βエステル基の１，３−ジアキシアル配向のために、前者のメチル基はエス テルにより非常に強く影響を受ける（Δδ＝＋２４０、Ｃ１１α−メチルで測定 された＋１６と比べて）。 化合物１〜８（図１）の５００ＭＨｚ ¹Ｈ ＮＭＲデータおよび１２５ＭＨｚ¹³ Ｃ ＮＭＲデータをそれぞれ表１および２にまとめて示す。 ^a CDCl₃中で記録したスペクトルであり、結合するプロトンをDEPTパルスシー クエンスにより決定した。^b、c 欄内の共鳴は置き換えてもよい。 ^d アセチル共鳴 ^e メトキシ共鳴 ^f CD₃OD中ではこれらのシグナルはδ161.20，161.16およびδ161.10，161.03 の二重線ピークとしてあらわれた。実施例３ この実施例は、Calophyllum lanigerum由来のカラノライド化合物および関連化 合物の抗ウイルス活性を説明するものである。まず、精製化合物について、既に 文献（Boyd，M.R.，AIDS Etiology，Diagnosis，Treatment and Prevention（De Vita V.T.，Jr.，Hellman S.，Rosenberg S.A.編）pp 305-319（Philadel-phia ：Lippincontt，1988年）；Gustafson，K.R．ら、J．Med．Chem．（印刷中）；W eislow，O.S．ら、J．Natl．Cancer Inst.，81：577-586（1989）；Gulakowski ，R.J．ら、J．Virol．Methods， 33：87-100（1991））に記載のＸＴＴ−テト ラゾリウム 抗−ＨＩＶ 一次スクリーニングアッセイを用いて、抗ウイルス活 性の評価を行った。全てのアッセイに用いたＣＥＭ−ＳＳヒトリンパ球標的細胞 株は、フェノールレッドを含有せず、５％ ウシ胎児血清，２ｍＭ Ｌ−グルタ ミン及び５０μｇ／ｍｌ ゲンタマイシンを加えたＲＰＭＩ １６４０培地（Gi bco，Grand Island，NY）（完全培地）中で培養した。 指数関数的に増殖した細胞をペレット状にし、ついで完全培地で２．０×１０⁵ 細胞／ｍｌの濃度に再懸濁した。初めから終わりまで、ハイチ人のＨＩＶ変異 体であるＨＴＬＶ−ＩＩＩ_RF（３．５４×１０⁶ＳＦＵ／ｍｌ）を使用した。凍 結したウイルスストック溶液を使用する直前に溶解して、完全培地に再懸濁し、 １．２×１２⁵ＳＦＵ／ｍｌとした。抗ＨＩＶを評価するための精製化合物の適 当量を１００％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、それから完全培 地で所望の初期濃度となるよう希釈した（そして、最終ＤＭＳＯ量は１％を越さ ない）。薬物の系列希釈、試薬の添加、およびプレートからプレートへの移動と いった全ての行為は自動バイオメック（Biomek）１０００ワークステーション（ Beckman Instruments，Palo Alto，CA）で行った。 カラノライドＡ（１）は広い濃度範囲にわたり（＜０．１〜＞１０μＭ）、一 次スクリーニングアッセイでＨＩＶ−１感染の細胞変性効果を完全に防護し、特 にヒトＴ−リンパ芽球（ＣＥＭ−ＳＳ）細胞でのＨＩＶ−１再産生を停止させた 。化合物１のＣ１２エピマーであるカラノライドＢ（４）もまた、このアッセイ でＨＩＶ−１を完全に阻害し、ＥＣ₅₀＝0.4μＭおよびＩＣ₅₀＝15.0μＭであっ た。そのエステル誘導体である１２−アセトキシカラノライドＡ（２）も、幾分 その強さは劣るものの（ＥＣ₅₀＝2.7μＭおよびＩＣ₅₀＝１３μＭ）、ＨＩＶ− １に対して活性を有していた。化合物６は、１２−メトキシカラノライドＢ（５ ）がそうであったように、弱くはあったが、検出可能な抗−ＨＩＶ活性を有して いた。しかしながら、対応する１２−メトキシカラノライドＡ（３）の抗ウイル ス活性は、一次スクリーンでは検出されなかった。化合物７および８は一次スク リーニングアッセイでは活性がなく、このことは、Ｃ−１２位に完全に還元され た酸素官能基、またはその誘導性置換基が必要であること、またさらに、化合物 １〜６が共通して有する特徴的な完全な中心炭素骨格が必要であることを示して いる。 純粋な化合物の抗−ＨＩＶ活性についてさらなる証明をするため、他の文献（ Gulakowski，R.J.ら、J．Virol．Methods， 33：87-100（1991））に詳述してあ るような一連の相互に関係のあるアッセイを９６穴のマイクロタイタープレート のそれぞれのウエル上で行った。概説すれば、その方法は以下の通りである。非 感染のＣＥＭ−ＳＳ細胞を完全培地５０μｌ中に１×１０⁴細胞の密度となるよ うにおく。次いで、希釈したＨＩＶ−１ウイルスを適当なウエルに５０μｌ量加 え、感染多重度が0.6になるようにする。適当な細胞，ウイルスおよび薬物コン トロールを各実験操作であわせて、それぞれのマイクロタイターウエルの最終量 を２００μｌとした。ウイルス感染細胞用に４つのウエルを使用し、また非感染 細胞用には２つのウエルを使用した。プレートを５％ＣＯ₂を含む雰囲気下で37 ℃で６日間インキュベーシションした。引き続いて、バイオメックを用いて、各 ウエルから細胞を含まぬ上清部分を除去し、文献（Gulakowski，R.J.ら、J．Vir ol．Methods，33 ：87-100（1991））に記載のように、逆転写酵素活性、ｐ２４ 抗原産生および感染ヴィリオンの合成を調べた。それから細胞増殖または育ち度 合を、文献（Gulakowski，R.J.ら、J．Virol．Methods， 33：87-100（1991）） に記載のように、ＸＴＴアッセイ（Weislow，O.S．ら、J．Natl．Cancer Inst. ， 81：577-586（1989））、ＢＣＥＣＦアッセイ（Rink，T.L.ら、J．Cell．Blo l. ， 95：189-196（1982））およびＤＡＰＩアッセイ（McCaffrey，T.A.ら、In Vltro Cell Develop．Biol. ，24：247-252（1988））を用いて、各ウエルの残留内容物で評 価した。グラフ表示やデータの比較を容易にするために、個々の実験的アッセイ の結果（少なくとも個々の４つの測定値の結果）を平均化し、そしてその平均値 を用いて、適当なコントロールに対する割合（％）を計算した。これらの計算に 使用した平均値の標準誤差は、平均で、一般的にそれぞれの平均値の１０％未満 であった。 図４Ａ〜Ｄに示すように、カラノライドＡはin vitroでＣＥＭ−ＳＳヒト リ ンパ芽球標的細胞に対するＨＩＶ−１の細胞変性効果を完全に阻害することがで きた（ＥＣ₅₀ 0.1μＭ）。またこの化合物の標的細胞に対する直接の細胞毒性 は、１００倍高い濃度でのみ見られることを示している（ＩＣ₅₀ １３μＭ；in vitro 「治療指数」≧１３０）。カラノライドＡはまた、それら同じ阻害効果 濃度の範囲で、ＨＩＶ−１−感染ＣＥＭ−ＳＳでのＲＴ，ｐ２４，およびＳＦＵ の産生を著しく阻害し、ウイルスの複製停止を示唆した。図４Ａ−Ｄにおいてカ ラノライドＡについて叙述したと同様の結果（データ示さず）が、カラノライド Ｂについてもまた得られ、非細胞毒性濃度でＨＩＶ−複製を完全に阻害し、また ＨＩＶ細胞変性効果に対して完全に防護することができた。実施例４ この実施例は抗ウイルス性カラノライド誘導体について説明するものである。 当業者であれば、実施例２のカラノライド化合物および誘導体に加えて、他の抗 ウイルス性カラノライド化合物またはその抗ウイルス性誘導体が、天然原料から 単離され得、および／または化学的に合成され得ると判断するであろう。抗ウイ ルス性カラノライド化合物またはその抗ウイルス性誘導体は、図５で、より一般 的に示されるように、２つの異なるシリーズを含みうる。例えば、実施例２で得 られるカラノライドＡ（１）はシリーズ１に属し、ここにおいてR¹はCH₂CH₂CH₃ ， カラノライドＢ（４）はシリーズ１に属し、ここにおいてR¹はCH₂CH₂CH₃，R²は る。天然の化合物（Stout，G.H.，J．Org．Chem.，29：3604-3609（1964））で あるコスタトライド（costatolide）（図２の化合物９）はシリーズ１に属する 一つ 化合物７は、Calophyllum lanigerumに由来する関連の天然産物であり、シリー ズ１のメンバーを特徴づける炭素骨格と同じ骨格を有する。 上記実施例は、図５の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス 性誘導体に関連するＣ−１０，Ｃ−１１およびＣ−１２についての特徴的構造 （立体化学的および置換基）の性状について重要な先例を提供するものであるが 、Ｃ−４位にバリエーションを有する関連の天然化合物によって提供される、Ｒ¹ でのバリエーションについての先例も存在する。例えば、図５の抗ウイルス性 カラノライド化合物およびその抗ウイルス性誘導体を特徴づける同じ基本炭素骨 格を有する化合物について、Ｃ−４位にＣＨ₃またはアリール置換基を有するも のが単離されている（Bandara，B.M.R.，ら、Phytochemistry，24：1553-1557 （1985）；Gunasekera，S.P.ら、J．Chem．Soc.，1505-1511（1977））。しかし 、それはカラノライドを特徴づけるＣ−１０，Ｃ−１１およびＣ−１２位の立体 化学および／または置換基において相違している。 上記実施例は、天然の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス 性誘導体の単離、及びシリーズ１の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその 誘導体の重要な構造上の特徴を示す他の天然産物の単離についての先例を提供す るものであるが、当業者ならば、抗ウイルス性カラノライド化合物またはその抗 ウイルス性誘導体を調製することを目的として、標準の有機化学的方法を用いて 多くの構造修飾体を作ることができることを理解するであろう。例えば、シリー ズ２の抗ウイルス性カラノライド化合物および抗ウイルス性誘導体は、シリーズ １のカラノライド化合物またはその誘導体から作ることができる。より具体的に は、シリーズ１の抗ウイルス性のメンバーは、Ｃ７およびＣ８位が完全に飽和さ れたシリーズ２の対応するメンバーに変換されうる。シリーズ２の７，８−ジヒ ドロカラノライドＡは７，８オレフィン結合部の酸化白金により触媒された水素 添加によってシリーズ１のカラノライドＡから調製できる。 ーズ２のいずれかの抗ウイルス性のメンバーは、対応する酸ハライドＸ−ＯＣＲ³ またはＸ−Ｏ₂ＳＲ³（ＸはＣｌ，ＢｒまたはＩ、Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたは アリール）を用いた反応、または無水ピリジン中またはトリエチルアミン中での 、対応する酸ＨＯ₂ＣＲ³またはＨＯ₃ＳＲ³（Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリ ール）およびジシクロヘキシルカルボジイミドを直接用いた反応のい あり、またＲ³がＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリールであるシリーズ１または２ １２位がエステル化されたカラノライド誘導体は、血漿または組織のエステラー で用いることができる。 本明細書において参照した全ての文献の全体は言及により本明細書に組み入れ られるものである。 好適な実施態様を強調して本発明を説明したが、当業者には好適な化合物、組 成物、および方法を変更し得ることが明らかであろう。本明細書で詳細に説明し た以外でも本発明を実施できることが意図される。従って、以下に示す請求の範 囲の精神および範囲内に包含される全ての変形を本発明は含む。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年４月１５日 【補正内容】 当業者は、個々の患者において望ましい「有効濃度」を得るために、用いられ る組成物の厳密な組成に対する適切な投与量、投与スケジュールおよび投与方法 を容易に決定することができる。また当業者は、適当な患者の試料（例えば血液 およぴ／または組織）を直接的に（例えは分析的化学分析）または間接的に（例 えばｐ２４またはＲＴのような代用指標を用いて）分析することによって、本発 明化合物の「有効濃度」の適当な指標を容易に決定し、用いることができる。 ウイルスに感染した個体の治療においては、「メガ用量（mega-dosing）」規 制を用いることが好ましく、これは、大用量のカラノライド化合物またはその誘 導体を投与し、当該化合物が作用するだけの時間を与え、この後適当な試薬を個 体に投与してカラノライド化合物またはその誘導体を不活性化するものである。 医薬組成物は、後天性免疫不全症候群（AIDS）の治療に用いる場合、カラノラ イド化合物またはその誘導体とともに他の医薬を含有していてもよい。このよう な併用医薬の代表的な例には、抗ウイルス性化合物、免疫調節剤（immunomodula -tor）、免疫促進剤および抗生物質が含まれる。典型的な抗ウイルス性化合物に は、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル（gancyclovir）、フッ素化ジデ オキシヌクレオチド、ネビラピン（nevirapine）［Shihら，PNAS 88：9878-9882 （1991）］のような非ヌクレオシド類縁化合物、R82913［Whiteら，Antiviral R esearch 16：257-266（1991）］のようなＴＩＢＯ誘導体、Ｒｏ31-8959［Craig ら，Anti-viral Research 16：295-305（1991）］、BI-RJ-70［Shihら］、アシ クロビル（acyclovir）、α−インターフェロンおよび組換えＣＤ４［Meriganら ，The American Journal of Medicine 90（Suppl．4A）：8S-17S（1991）］が 含まれる。 典型的な免疫調節剤および免疫促進剤には、各種インターロイキン 、ＣＤ４、サイトカイン、抗体製剤、輸血剤および細胞輸注剤が含まれる。典型 的な抗生物質には、抗真菌剤、抗菌剤および抗ニューモシスティス・カリニ（Pn eumocystis carinii）剤が含まれる。 他の抗レトロウイルス剤とともに、特にｄｄＣ、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＡのよ うな公知の逆転写酵素（ＲＴ）阻害剤、または抗ＴＡＴ剤のような他のＨＩＶ蛋 白に対して作用する他の阻害剤とともに阻害化合物を投与することによって、一 る。天然の化合物（Stout，G.H.，J．Org．Chem.，29：3604-3609（1964））で あるコスタトライド（costatolide）（図２の化合物９）はシリーズ１に属する 一つ 化合物７は、Calophyllum lanigerumに由来する関連の天然産物であり、シリー ズ１のメンバーを特徴づける炭素骨格と同じ骨格を有する。 上記実施例は、図５の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス 性誘導体に関連するＣ−１０，Ｃ−１１およびＣ−１２についての特徴的構造 （立体化学的および置換基）の性状について重要な先例を提供するものであるが 、Ｃ−４位にバリエーションを有する関連の天然化合物によって提供される、Ｒ¹ でのバリエーションについての先例も存在する。例えば、図５の抗ウイルス性 カラノライド化合物およびその抗ウイルス性誘導体を特徴づける同じ基本炭素骨 格を有する化合物について、Ｃ−４位にＣＨ₃またはアリール置換基を有するも のが単離されている （Dharmaratne，H.R.W.，ら、Phytochemistry，24：1553- 1556（1985）；Gunasekera，S.P.ら、J．Chem．Soc.，1505-1511（1977））。し かし、それはカラノライドを特徴づけるＣ−１０，Ｃ−１１およびＣ−１２位の 立体化学および／または置換基において相違している。 上記実施例は、天然の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその抗ウイルス 性誘導体の単離、及びシリーズ１の抗ウイルス性カラノライド化合物およびその 誘導体の重要な構造上の特徴を示す他の天然産物の単離についての先例を提供す るものであるが、当業者ならば、抗ウイルス性カラノライド化合物またはその抗 ウイルス性誘導体を調製することを目的として、標準の有機化学的方法を用いて 請求の範囲 １．（補正後） およびジヒドロソウラトロライド からなる群より選択される実質的に純粋な形態の化合物。 ２．（補正後） である実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の化合物。 ３．（補正後） である実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の化合物。 ４．（補正後） である実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の化合物。 ５．（補正後） である実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の化合物。 ６．（補正後） である実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の化合物。 ７．（補正後）次の工程からなる、Calophyllum属の植物からカラノライド化 合物を単離する方法。 （a）有機溶媒て乾燥植物材料を抽出し、粗抽出物を得て、 （b）該粗抽出物を液−液分配して非極性画分中にカラノライド化合物を濃縮し 、 （c）該非極性画分をゲル浸透クロマトグラフィーまたは減圧液体クロマトグラ フィーに付し、 （d）シリカゲルおよびＣ₁₈逆相カラム上のＨＰＬＣにより該カラノライド化合 物を単離および精製する。 ８．（補正後）該植物材料がCalophyllum lanigerumである請求の範囲第４項 記載の方法。 ９．（補正後）抗レトロウイルス有効量の、 からなる群より選択される少なくとも一つの化合物、および医薬的に許容される 担体を含有する抗レトロウイルス性組成物。 10．（補正後）該化合物がカラノライドＡ、ジヒドロカラノライドＡ、カラノ ライドＢ、ジヒドロカラノライドＢおよびジヒドロソウラトロライドからなる群 より選択される請求の範囲第９項記載の組成物。 11．（補正後）該化合物がカラノライドＡ、ジヒドロカラノライドＡ、カラノ ライドＢ、およびジヒドロカラノライドＢからなる群より選択される請求の範囲 第10項記載の組成物。 12．（補正後）カラノライドＡ、カラノライドＢ、コスタトライド、ソウラト ロライド、ジヒドロカラノライドＡ、ジヒドロカラノライドＢ、ジヒドロコスタ トライド、およびジヒドロソウラトロライドからなる群より選択される化合物以 外の少なくとも一つの併用抗ウイルス性化合物の抗ウイルス有効量をさらに含有 する請求の範囲第10項記載の組成物。 13．（補正後）抗レトロウイルス有効量の少なくとも一つの化合物（該化合物 は、該化合物により阻害される逆転写酵素を含有するレトロウイルスを阻害する ことかできる）をヒトに投与することからなるレトロウイルス感染の予防または 治療方法であって、該化合物が はＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリール）、およびＲ⁴およびＲ⁵は同一または異なっ からなる群より選択されるレトロウイルス感染の予防または治療方法。 14．（補正後）請求の範囲第13項に記載のシリーズ１およびシリーズ２からな る群より選択される化合物以外の少なくとも一つの併用抗ウイルス性化合物の抗 ウイルス有効量をさらに併用投与することからなる請求の範囲第13項記載の方法 。 15．（補正後）該レトロウイルス感染が、該抗レトロウイルス性化合物により 阻害される逆転写酵素を含有するレトロウイルスによるものである請求の範囲第 13項記載の方法。 16．（補正後）該レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求の範囲第 15項記載の方法。 17．（補正後）該化合物が からなる群より選択される請求の範囲第13項記載の方法。 18．（削除） 19．（削除） 20．（削除） 21．（削除）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 カーデリナ、ジョン エイチ．、ザ セカ ンド アメリカ合衆国、メリーランド州 21793、 ウォーカーズヴィル、ハイランダー ブー ルヴァード、9374 (72)発明者 グスタフソン、カーク アール. アメリカ合衆国、メリーランド州 21771、 マウント エアリィ、ヘロン コート、 10095 (72)発明者 マクマホン、ジェイムズ ビー. アメリカ合衆国、メリーランド州 21701、 フレデリック、チャカー コート、584 (72)発明者 フラー、リチャード ダヴリュー. アメリカ合衆国、メリーランド州 20779、 トレイシーズ ランディング、フランクリ ン ギブソン ロード、5877 (72)発明者 クラッグ、ゴードン エム. アメリカ合衆国、メリーランド州 20814、 ベセスダ、エルスメア アヴェニュー、 5117 (72)発明者 カシュマン、ヨエル イスラエル国、ジー4372、テル アビブ、 ルース ストリート、５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． はＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリール）、およびR⁴およびR⁵は同一または異なっ からなる群より選択される実質的に純粋な形態の抗ウイルス性カラノライド化合 物またはその抗ウイルス性誘導体。 ２． からなる群より選択される実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の抗ウ イルス性カラノライド化合物。 ３． はＣ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリール）、およびR⁴およびR⁵は同一または異なっ からなる群より選択される実質的に純粋な形態の請求の範囲第１項に記載の抗ウ イルス性カラノライド誘導体。 ４．次の工程からなる、Calophyllum属の植物からカラノライド化合物および その誘導体を単離する方法。 (a)有機溶媒で乾燥植物材料を抽出し、粗抽出物を得て、 (b)該粗抽出物を液−液分配して非極性画分中にカラノライド化合物を濃縮し、 (c)該非極性画分をゲル浸透クロマトグラフィーまたは減圧液体クロマトグラフ ィーに付し、 (d)シリカゲルおよびＣ₁₈逆相カラム上のＨＰＬＣにより該カラノライド化合物 を単離および精製する。 ５．該植物材料がCalophyllum lanigerumである請求の範囲第４項記載の方法 。 ６．抗ウイルス有効量の請求の範囲第２項記載の少なくとも一つの化合物、お よび医薬的に許容される担体を含有する抗ウイルス性組成物。 ７．請求の範囲第２項記載の抗ウイルス性化合物以外の少なくとも一つの併用 抗ウイルス性化合物の抗ウイルス有効量をさらに含有する請求の範囲第６項記載 の組成物。 ８．併用抗ウイルス性化合物がＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル、フ ッ素化ジデオキシヌクレオチド、ネビラピン、Ｒ８２９１３、Ro３１−８９５９ 、ＢＩ−ＲＪ−７０、アシクロビル、α−インターフェロン、および組換えＣＤ ４からなる群より選択される請求の範囲第７項記載の組成物。 ９．抗ウイルス有効量の請求の範囲第３項記載の少なくとも一つの化合物、お よび医薬的に許容される担体を含有する抗ウイルス性組成物。 10．請求の範囲第３項記載の抗ウイルス性化合物以外の少なくとも一つの併用 抗ウイルス性化合物の抗ウイルス有効量をさらに含有する請求の範囲第９項記載 の組成物。 11．併用抗ウイルス性化合物がＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル、フ ッ素化ジデオキシヌクレオチド、ネビラピン、Ｒ８２９１３、Ro３１−８９５９ 、ＢＩ−ＲＪ−７０、アシクロビル、α−インターフェロン、および組換えＣＤ ４からなる群より選択される請求の範囲第10項記載の組成物。 12．抗ウイルス有効量の請求の範囲第２項記載の少なくとも一つの化合物をヒ トに投与することからなるウイルス感染の予防または治療方法。 13．請求の範囲第２項記載の抗ウイルス性化合物以外の少なくとも一つの併用 抗ウイルス性化合物の抗ウイルス有効量をさらに併用投与することからなる請求 の範囲第12項記載の方法。 14．併用抗ウイルス性化合物がＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル、フ ッ素化ジデオキシヌクレオチド、ネビラピン、Ｒ８２９１３、Ro３１−８９５９ 、ＢＩ−ＲＪ−７０、アシクロビル、α−インターフェロン、および組換えＣＤ ４からなる群より選択される請求の範囲第13項記載の方法。 15．該ウイルス感染がレトロウイルスによるものである請求の範囲第12項記載 の方法。 16．該レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求の範囲第15項記載の 方法。 17．抗ウイルス有効量の請求の範囲第３項記載の少なくとも一つの化合物をヒ トに投与することからなるウイルス感染の予防または治療方法。 18．請求の範囲第３項記載の抗ウイルス性化合物以外の少なくとも一つの併用 抗ウイルス性化合物の抗ウイルス有効量をさらに併用投与することからなる請求 の範囲第17項記載の方法。 19．併用抗ウイルス性化合物がＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ガンシクロビル、フ ッ素化ジデオキシヌクレオチド、ネビラピン、Ｒ８２９１３、Ro３１−８９５９ 、ＢＩ−ＲＪ−７０、アシクロビル、α−インターフェロン、および組換えＣＤ ４からなる群より選択される請求の範囲第18項記載の方法。 20．該ウイルス感染がレトロウイルスによるものである請求の範囲第17項記載 の方法。 21．該レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求の範囲第20項記載の 方法。