JPH08502902A

JPH08502902A - ヒト５−ｈｔ▲下２▼レセプター

Info

Publication number: JPH08502902A
Application number: JP7507408A
Authority: JP
Inventors: キャレイ，ジャネット・エリザベス; フラニガン，トーマス・パトリック
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1993-08-20
Filing date: 1994-08-18
Publication date: 1996-04-02
Also published as: DE69413944T2; WO1995006117A1; EP0665887B1; DE69413944D1; EP0665887A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、５−ＨＴ₂サブクラスの新規セロトニンレセプター、該レセプターをコードする単離された核酸、セロトニンレセプターをコードするＤＮＡで形質転換された組換え宿主細胞、ならびに薬剤スクリーニングおよび開発における、ならびに治療および診断的使用における発現レセプターと核酸配列の使用を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト５−ＨＴ₂レセプター本発明は５−ＨＴ₂サブクラスのセロトニンレセプターの新規構成員、該レセプターをコードする単離された核酸、セロトニンレセプターをコードするＤＮＡで形質転換された組換え型宿主細胞および薬剤のスクリーニングおよび開発ならびに治療および診断用途における発現レセプターおよび核酸配列の使用に関する。さらに詳しくは、本発明は新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターに関する。５−ヒドロキシトリプタミン（種々、５−ＨＴ、またはセロトニンとも称される）は、セロトニン作動性神経細胞にて見られる細胞表面レセプターを介してその効果を発揮する、有効な天然に存在する神経伝達物質である。少なくとも４種の主要ファミリーの５−ＨＴレセプター（５−ＨＴ_1-4）が知られている。各ファミリーは、例えば、５−ＨＴ_1a、５−ＨＴ_1b、５−ＨＴ_1c、５−ＨＴ_1dまたは５−ＨＴ_1eと称される１またはそれ以上のタイプからなる。さらには、あるタイプの５−ＨＴレセプターには、５−ＨＴ_1dαまたは５−ＨＴ_1dβのような種々のサブタイプが知られている。かなり定まってはいるが、新規レセプターが同定されたり、または新規特性が既存のレセプターに基づくものとされるため、この分野における命名法は、流動し、かつ修正される状況にあるということはしかたがないことである。近年、ピー・ピー・エイ・ハンフリー（P.P.A.Humphrey）らは、「５−ＨＴレセプターについての新規命名法」、１９９３年，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシス（Trends Pharmacol.Sci.）第１４巻，２３３−２３６頁において該命名法を検討しており、その内容を出典明示により本明細書の一部とする。簡単には、レセプターは、特定のファミリー、タイプまたはサブタイプの他の構成員と共通するその分子生物学的、薬理学的および生化学的特性に基づき、個々のファミリー、タイプまたはサブタイプに割り当てられる。また、何かの理由で、認識されているクラスに明白に分類できるように未だ十分に特徴付けられていないレセプターに対する区分けも普遍化されている。これらのレセプターは、いわゆる、「オーファン」レセプターである。特に有用な技法は、急速濾過放射リガンド検定として知られており、種々の放射活性として標識化されたリガンドに対する相対親和性に基づき、レセプターを特徴付けるものである。例えば、５−ＨＴ₁ファミリーのレセプターは、ほとんど、５−ＨＴおよび５−カルボキシアミノトリプタミン（５−ＣＴ）に対して１０ｎＭより小さい親和性を示し、メチセルギド、メチオセピン、クイパジンおよびｍ−トリフルオロメチルフェニルピペラジン（ＴＦＭＰＰ）に対して１０−１０００ｎＭの親和性を示し、３−アルファ−トロパニル−１Ｈ−インドール−３ −カルボン酸エステル（ＩＣＳ２０５−９３０）および１−アルファＨ、３−アルファ、５−アルファＨ−トロパン３イル−３，５−ジクロロベンアート（ＭＤＬ７２２２２）に対して１０００ｎＭより大きい親和性を示す。一般に、５−ＨＴ₁ファミリーは、ａ、ｂ、ｄおよびｅのタイプからなる。５−ＨＴ_1cタイプレセプターは、構造相同性、薬理活性および刺激移入経路に基づき、５−ＨＴ_2aおよび５−ＨＴ_2bタイプの属する５−ＨＴ₂ファミリーの構成員として特徴付けられ、５−ＨＴ_2cと改名された。分子生物学的特性に基づき、ファミリーのあるものは、いわゆる、スーパーファミリーに配置できる。例えば、５−ＨＴ_{2c、2a、2b、1dα、1dβ}および_1eレセプターはすべて、７つの推定膜内外ドメインを有するスーパーファミリーのレセプターに属し、Ｇタンパク結合型である。ラット・胃底調製は、相当の期間、セロトニン（５−ＨＴ）についてのin vit ro生物検定として用いられていた。該胃底レセプターは、５−ＨＴ、ラウオルシン（rawolscine）およびヨヒンビンに対して高親和性を有し、スピペロンおよびケタンセリンに対して感受性を有しない。近年の分子クローニング操作により、「ラットの胃底レセプター」の単離、発現および薬理学的特性が得られ（フォギュエット（Foguet）ら、ＥＭＢＯＪ．１１（９）３４８１−３４８７；カーサー（Kursar）ら、１９９２年、モレキュラー・ファーマコロジー（Mol.Pharmasol. ）４２，５４９−５５７）、それらの操作はこの５−ＨＴレセプターが５−ＨＴ_1c/2 レセプターサブファミリーの第３の構成員を構成することを示唆している。したがって、このレセプターは、一時的に５−ＨＴ_2bサブタイプとして分類された。このレセプターが種−特異的でないことは、このレセプターのマウス等価物を単離したロリック（Loric）らにより、ＦＥＢＳレター（Let ter）３１２（２，３）２０３−２０７，１９９２）にて主張されており、その薬理特性はそれが５−ＨＴ₂レセプターサブファミリーのメンバーであることと矛盾しない。フォギュエットら（１９９２）およびカーサー（１９９２）は、ラット・底レセプターが胃底外部にて発現することについて証拠を見いだせなかったが、ロリックら（１９９２）は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用い、マウスの腸、心臓、腎臓および脳におけるレセプターｍＲＮＡの存在を証明した。これは、このレセプターが（少なくともマウスにおいて）以前に考えられていたよりもより広範に分布していることを示唆するものである。種の違いはこれら研究におけるレセプターｍＲＮＡ分布に見られるずれの原因となるが、用いた分析技法の感度の違いがさらに納得のいく説明を提供する。実際、胃底外部にて「ファンディック（fundic）」５−ＨＴレセプターｍＲＮＡを検出するには、ネステッドＰＣＲのような増幅操作を必要とし、それはこの転写が低頻度でこれらの組織にて起こることを示唆する。また、これらのデータはこのレセプターｍＲＮＡの高度に局所化された局在化を反映し、細胞型を特定するかもしれない。フォギュエットら（１９９２年、前掲）は、ゲノムＤＮＡのＰＣＲ増幅により決定されるように、基底５−ＨＴレセプター遺伝子がヒトゲノム中に存在すると注釈している。本発明は５−ＨＴ₂タイプの新規なヒトレセプターを提供するものである。本明細書に開示されている特異的配列を有する本発明のＤＮＡは、該ＤＮＡがこの新規サブタイプのレセプターを発現するのに必要な遺伝情報をコードするのに有用である。加えて、該配列は、ファミリー、タイプおよびサブタイプのさらなる構成員を単離および同定するための、ならびに新規遺伝子の典型的でない発現により特徴付けられる症状についてのアンチセンス療法の基礎を形成する、プローブとして用いてもよい。本明細書に記載の試薬についてのこれらおよび付加的な使用は、当業者であれば、本明細書を読むにつれて明らかとなるであろう。死後のヒト皮質、海馬および扁桃の試料（ドクター・ビー・マクドナルド（Dr .MacDonald），デプト・オブ・ニューロパソロジー（Dept.of Neuropathology），ラドクリッフ・インファーマリー，オックスフォード）を用い、ラット・基底５−ＨＴレセプターヌクレオチド配列に由来するオリゴヌクレオチドの対と共に、ＲＴ−ＰＣＲに用いるためのポリ（Ａ）⁺ｍＲＮＡを調製した（フォギュエットら、１９９２年）。各試料で、得られた主要ＲＴ−ＰＣＲ産物は、ラット（マウス）のヌクレオチド配列より推定される大きさに等しい大きさを示した。このように、ラット・基底５−ＨＴレセプターのヒト相同性は皮質、海馬および扁桃ならびに胃および小腸における転写機能にあると考えられる。本発明は、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡを包含する新規ヒト５−ＨＴ₂レセプター、ならびにそのアンチセンスアナログおよびその生物学上活性なおよび診断学上または治療学上有用なフラグメントをコードする単離された核酸分子を提供する。特に、本発明は：（ａ）配列番号１または配列番号３に対応する塩基からなる核酸分子、および（ｂ）同じタンパクをコードするが、遺伝暗号のデジェネラシーによりコドン配列における（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子からなる群より選択される単離された核酸分子を提供する。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂タンパクまたはペプチドの組換え産生における試薬として有用な組換えベクター、例えばクローニングおよび発現プラスミド、ならびに新規５−ＨＴ₂核酸配列からなる組換え原核および／または真核宿主細胞を提供する。本発明はまた、既知リガンドとの関連で同定されるリガンドの結合を測定することにより、新規５−ＨＴ₂レセプターとの結合能を有するリガンドを同定する方法を提供する。本発明はさらに、新規５−ＨＴ₂レセプターと相関し、結合する化合物を同定するための薬剤のスクリーン法を提供する。そのレセプターは溶液中の単離形態であるかまたは固定化形態であってもよく、または組換え宿主細胞の表面で発現させてもよい。レセプターの形態にかかわらず、多数の候補となる薬剤を、薬剤／レセプター結合複合体を形成させるに十分な条件下、レセプターと接触させ、該複合体の形成、強化または妨害能を有する薬剤を検出する。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂配列に特異的にハイブリダイズさせるに十分な長さの核酸分子からなる核酸プローブを提供する。本発明はまた、ｍＲＮＡの翻訳を防止するように新規５−ＨＴ₂レセプターをコードする該ｍＲＮＡとの結合能を有する配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂レセプターをコードする核酸分子からなるヒト以外の遺伝子導入動物を提供する。さらに、種々のレセプターの発現、変異およびＳＡＲ（構造／活性の関係）を評価するためのモデルとして、ならびにリガンドおよび薬剤スクリーンにおける、該遺伝子導入動物の使用方法を提供する。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂レセプタードメインと、分析上検出可能なシグナルを発することができるレセプター／リガンド結合インジケータードメインとからなる融合タンパクを提供する。さらに、検出可能なシグナルを形成し、強化しまたは妨害することにより薬剤をスクリーンする方法を提供する。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂レセプターに結合する化合物を同定するためのスクリーン方法であって；細胞表面にて、該化合物が該レセプターに結合することに応答して検出可能なシグナルを発しうる第２の成分と結合する、新規５−ＨＴ₂レセプターを発現する組換え宿主細胞を提供し；化合物がレセプターに結合するに十分な条件下、候補となる多数の化合物を該宿主細胞と接触させ；該第２の成分により発せられるシグナルを検出することによってレセプター結合能を有する化合物を同定することからなるスクリーン法を提供する。本発明はさらに新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターを提供する。本発明のさらなる記載において、以下の語句が用いられており、次に示すように定義されるものである。「融合タンパク」とは、少なくとも２つの機能上連結した異種の暗号配列の発現により得られるタンパクをいう。５−ＨＴ₂タンパクまたはそのフラグメントおよび第２の関連しないペプチド配列からなるタンパクは融合タンパクの一例である。ＲＮＡポリメラーゼが２つの暗号配列をシングルｍＲＮＡに転写し、ついでそれが両方の暗号配列より誘導されるアミノ酸を有するシングルポリペプチドに翻訳される場合、一の暗号配列は別の暗号配列に「機能上連結」している。発現される配列が、最終的に、所望のタンパクを産生するように処理されている限り、暗号配列は相互に隣接している必要はない。「組換え」ポリペプチドは、組換えＤＮＡ技法により産生される、すなわち、所望のポリペプチドをコードする外来性ＤＮＡ構築物によって形質転換された細胞により産生されるポリペプチドをいう。「合成」ポリペプチドは化学合成により製造されるものである。「レプリコン」は、in vivoにてＤＮＡ複製の自律単位として機能する、すなわち、それ自身の調節下で複製能を有する、いずれの遺伝因子（例、プラスミド、染色体、ウイルス）でもある。「ベクター」は、プラスミド、ファージまたはコスミドのようなレプリコンであり、結合セグメントの複製が引き起こされるように、それに別のＤＮＡセグメントが結合していてもよい。「二本鎖ＤＮＡ分子」とは、弛緩したおよび超螺旋状の、二本鎖ヘリックスにおけるポリマー形のデオキシリボヌクレオチド（アデニン、グアニン、チミンまたはシトシン塩基）をいう。この語は一次および二次構造の分子のみをいい、分子を何ら三次形態に限定するものではない。すなわち、この語は、判明している二本鎖ＤＮＡ、とりわけ、線状ＤＮＡ分子（例、制限フラグメント）、ウイルス、プラスミドおよび染色体を包含する。個々の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を考える場合、本明細書中、配列は、ＤＮＡのセンス鎖に沿って５’から３’の方向にある配列のみを付与する正規の慣習に従って記載する。ＤＮＡ「暗号配列」または個々のタンパクを「コードするヌクレオチド配列」は、適当な調整配列の調節下に置かれた場合、転写され、ポリペプチドに翻訳されるＤＮＡ配列である。「プロモーター配列」は、細胞にてＲＮＡポリメラーゼの結合能を有し、下流（３’方向）の暗号配列の転写を開始能を有するＤＮＡ調整領域である。プロモーター配列内に、転写開始部位（都合よくは、遺伝地図作製によりヌクレアーゼＳ１で定義される）、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク結合ドメイン（コンセンサス配列）が見られる。真核生物のプロモーターは、常時ではないが、しばしば、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスを有する。ＤＮＡ「調節配列」は、集合的に、プロモーター配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調整ドメイン、エンハンサーなどをいい、包括的には、宿主細胞にて暗号配列の発現（すなわち、転写および翻訳）を付与するものである。ＲＮＡポリメラーゼがプロモーター配列と結合し、その暗号配列をｍＲＮＡに転写し、ついでその暗号配列によりコードされたポリペプチドに翻訳される場合、調節配列が細胞にて暗号配列の「発現を指向させる」。「宿主細胞」は、外来性ＤＮＡ配列により、形質転換されるかまたはトランスフェクションされ、あるいは形質転換またはトランスフェクションされる可能性のある細胞である。外来性ＤＮＡが細胞膜中に導入された場合、細胞はそのような外来性ＤＮＡにより「形質転換」される。外来性ＤＮＡは、細胞のゲノムを形成する染色体ＤＮＡに組み込まれても、または組み込まれていなくてもよい（共有結合）。原核生物および酵母において、例えば、外来性ＤＮＡが、プラスミドのようなエピゾーム因子に維持されていてもよい。真核細胞に関して、しっかりと形質転換またはトランスフェクションされた細胞は、外来性ＤＮＡが染色体中に組み込まれ、その結果、染色体の複製を介して娘細胞により遺伝される細胞である。この安定性は、真核細胞が外来性ＤＮＡを含有する一群の娘細胞からなる細胞系またはクローンを確立する能力により測定される。「クローン」は有糸分裂により単細胞または共通の祖先に由来する一群の細胞である。「細胞系」は、数世代にわたって、in vitroにて安定した増殖能を有する初代細胞のクローンである。分子の所定の長さにわたって少なくとも８５％（好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも約９５％）のヌクレオチドまたはアミノ酸が適合する場合、２つのＤＮＡまたはポリペプチド配列は「実質的に同種」または「実質的に同一」である。本明細書にて用いる場合、実質的に同種とはまた特定のＤＮＡまたはポリペプチド配列について同一性を示す配列をいう。実質的に同種であるＤＮＡ配列は、例えば、個々の系について定義されているような、厳しい条件下、サザーン・ハイブリダイゼーション実験にて同定できる。適当なハイブリダイゼーション条件を定義することは当該分野の範囲内である。例えば、「カーレント・プロトコル・イン・モレキュラー・バイオロジー（Current Protocol s in Mol.Biol.）」Vol．I＆II，ウィリー・インターサイエンス（Wiley Inters cience）．アウスベル（Ausbel）ら（編）（１９９２）参照のこと。実質的に同一であるタンパク配列は、タンパク分解消化、ゲル電気泳動およびミクロ配列決定により同定できる。「機能上等価」なる語は、該タンパクのアミノ酸配列が、前記したように、特定の５−ＨＴ₂ペプチドに等価なセロトニン作動性応答を発揮する配列を意図するものである。ＤＮＡ構築物の「異種」領域は、天然において他の分子と関連して見られない別のＤＮＡ分子内にあるかまたは結合したＤＮＡの同定可能なセグメントである。かくして、異種領域がレセプター遺伝子をコードする場合、該遺伝子は、通常、供給源の動物のゲノム中の遺伝子をフランクしないＤＮＡによってフランクされる。異種暗号配列の別の例は、暗号配列それ自体が天然で見られない（例えば、天然遺伝子と異なるコドンを有する合成配列の）構築物である。対立遺伝子変異または天然の変異事象は、本明細書にて用いるＤＮＡの異種領域で生じない。本発明は新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターをコードする単離された核酸分子を提供する。そのようなレセプターは前記の基準により定義される。新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターをコードする核酸を単離する一の方法は、その分野にて公知の操作（例えば、「カーレント・プロトコル・イン・モレキュラー・バイオロジー（Current Protocols in Molecular Biology）」，アウスベル・エフ・エム（Au subel,F.M.）（編）グリーン・パブリッシュイング・アソシエーション・アンド・ウィリー・インターサイエンス（Greene Publishing Assoc．and Wiley Inter science），ニューヨーク，１９８９，１９９２参照）を用い、天然のまたは人工的に設計されたプローブでヒトゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーを探査することである。このために特に有用な一のプローブは、本明細書中、配列番号１および３に開示されている配列のＤＮＡのすべてを、またはハイブリダイゼーション可能なフラグメントを組み入れたプローブである。こうして得られた単離核酸分子は、ヒト、哺乳動物または他の動物の供給源からゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡの相補的なコピーを得るか、または前記の転写調整および調節因子ならびに他の安定性、プロセシング、翻訳および組織特異性−決定領域（本明細書に開示の暗号配列に対する５’および／または３’領域に由来する）からなる関連配列のためにかかる供給源をスクリーンするのに用いてもよい。付加配列が配列番号１または３の配列と少なくとも約８５％の相同性を有するならば、本明細書に開示の操作により単離された付加的な暗号配列は、配列番号１および３にて得られる暗号配列と実質的に同一であると考えられる。本発明はまた新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターである単離されたタンパクを提供する。このレセプターは配列番号２および４に列挙されたアミノ酸配列について定義されており、本明細書にて同定した新規５−ＨＴ₂レセプターのレセプター結合活性を保有している以外、実質的に同種のアミノ酸配列を有する変異体を包含する。特に、本発明は、配列番号２に対応する残基からなるか、または配列番号４に対応する残基からなる、新規５−ＨＴ₂レセプターを提供する。本発明はさらには、本発明の新規５−ＨＴ₂レセプターをコードする単離された核酸分子を提供する。本発明のタンパクは組換え型遺伝工学技法により調製されることが好ましい。したがって、本発明は、新規５−ＨＴ₂レセプターの製法であって、該レセプターをコードするＤＮＡを発現させ、その発現産物を回収することからなる製法を提供する。単離された核酸、特にＤＮＡは、ＤＮＡを遺伝子発現て要求される必須発現調節領域（例、調整領域）に機能上連結させることにより、発現ベクター中に導入できる。該ベクターは、その分野における周知方法（アウスベルら、前掲）により、原核生物（例、細菌）または真核生物（例、酵母、昆虫または哺乳動物）のような適当な宿主細胞中に導入できる。調製または単離される所望のタンパクについての暗号配列は、適当なベクターまたはレプリコン中にクローンされ得る。多数のクローニングベクターが当業者に公知であり、適当なクローニングベクターを選ぶことが問題である。クローニング用組換えＤＮＡベクターおよびそれらが形質転換できる宿主細胞の例は、バクテリオファージλ（イー・コリ（E.coli .））、ｐＢＲ３２２（イー・コリ）、ｐＡＣＹＣ１７７（イー・コリ）、ｐＫＴ２３０（グラム陰性細菌）、ｐＧＶ１１０６（グラム陰性細菌）、ｐＬＡＦＲ１（グラム陰性細菌）、ｐＭＥ２９０（イー・コリ以外のグラム陰性細菌）、ｐＨＶ１４（イー・コリおよびバチルス・サブチリス（Bacillus subtilis））、ｐＢＤ９（バチルス）、ｐＩＪ６１（ストレプトミセス（Streptomyces））、ｐＵＣ６（ストレプトミセス）、ＹＩｐ５（サッカロミセス（Saccharomyces）、バクロウイルス昆虫細胞系，ＹＣｐ１９（サッカロミセス）を包含する。一般に「ＤＮＡクローニング（DNA Cloning）」：Vol．I＆II、グローバー（Glover）ら編、ＩＲＬ・プレス・オックスフォード（１９８５）（１９８７）およびティー・マニアティス（T．Maniatis）「モレキュラー・クローニング（Molecular C loning）」コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（１９８２）参照のこと。遺伝子はプロモーター、リボゾーム結合部位（細菌発現の場合）および、所望により、オペレーター（以下、集合的に「調節」因子という）の調節下に置くことができ、その結果、所望のタンパクを発現するＤＮＡ配列は、この発現構築物を含有するベクターにより形質転換される宿主細胞のＲＮＡ中に転写される。該暗号配列はシグナルペプチドまたはリーダー配列を含有していても、いなくてもよい。本発明のタンパクは、例えば、イー・コリｔａｃプロモーターまたはタンパクＡ遺伝子（ｓｐａ）プロモーターおよびシグナル配列を用いて発現させることができる。リーダー配列は、翻訳後プロセシングの細菌宿主により除去できる。例えば、米国特許第４，４３１，７３９号；第４，４２５，４３７号；第４，３３８，３９７号参照のこと。調節配列に加えて、宿主細胞の増殖に関連してタンパク配列の発現の調整を可能とする調整配列を加えることが望ましい。調整配列は当業者に公知であり、例えば、調整化合物の存在を含め、化学的または物理的刺激に応答して、刺激を与えまたは除去するように遺伝子の発現を生じさせるものを包含する。他に調整因子は、ベクター、例えばエンハンサー配列中に存在してもよい。発現ベクターは、個々の暗号配列が適当な調整配列と共にベクター中に配置されるように構築され、調節配列に関して暗号配列の位置付けおよび指向が、調節配列の「調節」下、該暗号配列が転写される（すなわち、調節配列でＤＮＡ分子に結合するＲＮＡポリメラーゼが暗号配列を転写する）ようにする。暗号配列の修飾は、この終わりに行うことが望ましい。例えば、ある場合には、適当な指向を有する調節配列に結合させるように、すなわちリーディングフレームを維持するように、配列を修飾してもよい。調節配列および他の調整配列を、前記したクローニングベクターのような、ベクターに挿入する前に暗号配列にライゲートしてもよい。また、暗号配列を、すでに調節配列および適当な制限部位を含有する発現ベクター中に直接クローン化してもよい。暗号配列の修飾はまた、選択される宿主細胞を発現強化に適応させるようにコドンの使用を変えて行ってもよい。ある場合には、宿主生物由来のポリペプチドの分泌を生じさせ、つづいて分泌シグナルの切断を引き起こす、配列を加えることが望ましい。さらに、注目するレセプターの変異体またはアナログを生じさせることも望ましい。変異体またはアナログは、タンパクをコードする配列の一部を欠失することにより、配列の挿入により、および／または配列中の１またはそれ以上のヌクレオチドの置換により調製してもよい。部位定方向突然変異のようなヌクレオチド配列の修飾法は当業者によく知られている。例えば、ティー・マニアティス（T.Maniatis）ら、前掲；ＤＮＡ・クローニング，Vol．IおよびII，前掲；核酸ハイブリダイゼーション，前掲を参照のこと。多くの原核生物用発現ベクターが当該分野にて知られている。例えば、米国特許第４，５７８，３５５号；第４，４４０，８５９号；第４，４３６，８１５号；第４，４３１，７４０号；第４，４３１，７３９号；第４，４２８，９４１号；第４，４２５，４３７号；第４，４１８，１４９号；第４，４１１，９９４号；第４，３６６，２４６号；第４，３４２，８３２号を参照；また、英国特許出願ＧＢ２，１２１，０５４；ＧＢ２，００８，１２３；ＧＢ２，００７，６７５；および欧州特許出願１０３，３９５参照のこと。酵母用発現ベクターもまた当該分野において知られている。例えば、米国特許第４，４４６，２３５号；第４，４４３．５３９号；第４，４３０，４２８号参照；また、欧州特許出願１０３，４０９；１００，５６１；９６，４９１参照のこと。ＳＶ４０後期プロモーターを用い、哺乳動物細胞にて発現を生じさせるｐＳＶ２ｎｅｏ（ジャーナル・オブ・モレキュラー・アンド・アプライド・ジネティックス（J.Mol.Appl.Genet. ）１：３２７−３４１に記載）またはｐＣＤＮＡ１ｎｅｏまたはｐＣＤＮＡ３、ＣＭＶプロモーターを用いて発現を生じさせるｐＣＤＮＡＩ（モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー（Mol.CellBiol.）７：４１２５−２９）から誘導されるベクターを参照のこと。これらのうち後者の２つのベクターは共に哺乳動物細胞にて一時的なまたは安定な（Ｇ４１８耐性を用いる）発現のために使用することができる。好ましくは、ＣＭＶプロモーターを用い、Ｇ４１８にて増殖する能力に基づいてトランスフェクション体を選択するためのネオマイシン耐性遺伝子およびＤＨＦＲ^-細胞にてトランスフェクションされた遺伝子の増幅を可能とするジヒドロフォラート・レダクターゼ遺伝子をコードするベクターを用いることが好ましい。昆虫細胞発現系、例えば、ドロソフィラ・アンド・スポドプテラ（Drosophila and Spodoptera）もまた有用である、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９０／０６３５８およびＷＯ９２／０６２１２ならびにＥＰ２９０，２６１− Ｂ１参照のこと。本発明のタンパクは、選択される発現系および宿主に依存して、注目するタンパクが発現される条件下、前記の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞を増殖させることにより産生される。ついで、該タンパクを宿主細胞から単離し、精製する。発現系がタンパクを増殖培地中に分泌する場合、タンパクは培地より直接精製できる。タンパクが分泌されない場合、細胞溶解質より単離するかまたは細胞膜フラクションより回収する。ここで、タンパクが細胞表面に局在化される場合、所望の遺伝子産物の検定可能な起源として、全細胞または単離された膜を用いることができる。適当な増殖条件および回収方法の選択は当該分野の技術範囲内である。本発明のタンパクを同定する別の方法は、遺伝子ライブラリーを構築し、得られたクローンを用いてイー・コリを形質転換させ、所望のレセプターに対するポリクローナル血清またはモノクローナル抗体を用いて個々のコロニーをプールし、スクリーンすることによるものである。本発明のタンパクはまた、公知アミノ酸配列または注目する遺伝子のＤＮＡ配列から派生するアミノ酸配列を用い、固相ペプチド合成のような化学合成により産生してもよい。そのような方法は当業者に公知である。ペプチドの化学合成はとりわけ好ましくはない。本発明のタンパクまたは少なくとも１つのエピトープからなるそのフラグメントを用い、ポリクローナルおよびモノクローナルの両方の抗体を産生できる。ポリクローナル抗体が望ましい場合、選択される噛乳動物（例、マウス、ラビット、ヤギ、ウマなど）を本発明のレセプター、またはそのフラグメント、あるいは変異レセプターで免疫する。免疫動物からの血清を収集し、公知技法に従って処理する。ポリクローナル抗体含有の血清を用いる場合、該ポリクローナル抗体はイムノアフィニティークロマトグラフィーまたは他の公知操作により精製できる。本発明のタンパクに対する、およびそのフラグメントに対するモノクローナル抗体もまた、当業者であれば容易に産生できる。ハイブリドーマ技法を用いてモノクローナル抗体を産生する方法が一般によく知られている。不死抗体産生細胞系は細胞融合により、また腫瘍原性ＤＮＡによるＢリンパ球の直接形質転換、またはエプスタイン・バー（Epstein-Barr）ウイルスでのトランスフェクションのような他の技法により造り出すことができる。例えば、エム・シュライアー（M. Schreier）ら、「ハイブリドーマ・テクニックス（Hybridoma Techniques）」（１９８０）；ハンマーリング（Hammerling）ら、「モノクローナル抗体およびＴ−細胞ハイブリドーマ（Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas）」（１９８１）；ケンネット（Kennett）ら、「モノクローナル抗体（Monoclonal Antibodies）」（１９８０）；さらに、米国特許第４，３４１，７６１号；第４．３９９，１２１号；第４，４２７，７８３号；第４，４４４，８８７号；第４，４５２，５７０号；第４，４６６，９１７号；第４，４７２，５００号；第４，４９１，６３２号および第４，４９３，８９０号を参照のこと。注目する抗原またはそのフラグメントに対抗して産生される一群のモノクローナル抗体は、種々の特性；すなわち、イソタイプ、エピトープ、アフィニティーなどに関してスクリーンできる。モノクローナル抗体は、イムノアフィニティー技法を用い、関連する個々の抗原を精製するのに有用である。別法として、注目するモノクローナルをコードする遺伝子を当該分野において公知のＰＣＲ技法によりハイブリドーマから単離し、適当なベクターにてクローン化して発現させてもよい。本発明の抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルのいずれであっても、イムノアッセイ、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡなどにて試薬として用いることができる有用性を有する。本発明は、新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターに結合することが前以て分かっていないリガンドが、そのようなレセプターに結合しうるかどうかの測定方法であって、かかるレセプターに結合するとして前以て同定されたリガンドが結合するに十分な条件下、同定されるべきリガンドを、新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターの暗号配列からなる細胞と接触させ、その表面に同一物を発現させることからなる方法を提供する。他に、固体支持体上で自由もしくは固定されたレセプターまたは単離レセプターからなる細胞膜フラクションを用い、試験されるべきリガンドの結合を測定してもよい。組換え細胞をレセプターの発現のために用いる場合、あるとすれば、結合が注目する発現レセプターの存在によるものであるように、外来性レセプター活性のほとんどまたは全くない細胞を用いることが好ましい。好ましい細胞はヒト真核腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３細胞）、サル腎臓、線維芽細胞（ＣＯＳ）、チャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ドロソフィラまたはマウスＬ−細胞を包含する。宿主細胞として、また第２のメッセンジャー系に応答するレセプターが存在する細胞を用いることが好ましい。よく知られた第２のメッセンジャー系は、限定されるものではないが、ホスホイノシチド加水分解、アデニラートシクラーゼ、グアニラートシクラーゼまたはイオンチャネル活性の細胞外レセプタードメインに結合するリガンドに対する応答の増加または減少を包含する。さらなる具体的において、特別に設計されたレセプター結合のインジケーターを構築させることができる。例えば、本発明のレセプターをレセプターリガンド結合に対して感受的であるタンパクドメインと融合させることにより、融合タンパクを調製できる。本明細書に言うところのインジケータードメインとしてのかかるドメインは、それ自身、または補助分子と一緒になって、レセプターリガンド結合を示唆する分析上検出可能なシグナルの発生能を有する。また、トランスフェクションまたは形質転換された細胞に由来する細胞膜調製物を用いてもよい。そのような場合には、分析上検出可能なリガンドの結合を測定する。放射活性および非放射活性的に標識化したリガンドの使用は本発明の意図するところである。リガンドの同定に有用な前記技法はすべて、薬剤スクリーニングおよび薬剤開発プロトコルにおいてもまた有用である。化合物をスクリーンする本発明の具体例においては、単離された、免疫化または細胞結合形の新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターを、多数の候補となる分子と接触させる。これらの候補分子は、レセプターと結合し、相互作用するものを選択する。結合または相互作用は、放射活性的に標識化された注目の候補となる化合物を用いることにより、または候補化合物の相互作用または結合に由来する第２のメッセンジャー効果により直接測定できる。別法として、候補となる化合物は競合スクリーニング検定に供することができる。その検定においては、好ましくは分析上検出可能な試薬で標識化された、最も好ましくは放射活性的に標識化された公知リガンドを、試験薬剤と共に導入し、標識化されたリガンドの結合を阻害または強化する化合物の力量を測定する。注目するレセプターに対するアフィニティーおよび選択性の増加について化合物をスクリーンする。本発明はまた、前記方法にて同定した場合、例えばアゴニストまたはアンタゴニストである化合物と、医薬上許容される担体とからなる医薬組成物に関する。本発明のタンパク様（proteineous）薬剤の医薬組成物は、特に、非経口投与、すなわち、皮下的、筋肉内または静脈内投与に有用である。非経口投与用の組成物は、通常、本発明の化合物の溶液または適当な担体、好ましくは水性担体に溶けるそのカクテルからなる。種々の水性担体、例えば、水、緩衝水、０．４％塩溶液、０．３％グリシンなどを用いることができる。これらの溶液は滅菌状態であり、一般に粒子体を含まない。これらの溶液は、従来の周知滅菌技法により滅菌操作に付してもよい。組成物は、ｐＨ調整剤および緩衝剤などの適当な生理学的条件に要求される医薬上許容される助剤を含有してもよい。このような医薬処方中の本発明の化合物の濃度は、広範に、すなわち、約０．５重量％、通常１重量％または少なくとも１重量％以下から、１５または２０重量％まで変化してもよく、主として流動体積、粘度等、選択される投与方法に基づいて選択される。かくして、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物は、１ｍｌの滅菌緩衝水および５０ｍｇの本発明の化合物を含有するように調製できる。同様に、静脈内注入用の本発明の医薬組成物は、２５０ｍｌの滅菌リンゲル溶液、および１５０ｍｇの本発明の化合物を含有するように調製できる。非経口投与可能な組成物の製法は周知であるか、または当業者に明らかであり、例えば、レミントンの製薬科学（ Remington's Pharmaceutical Science）、第１５版、マック．パブリッシング・カンパニー（Mack Publishing Company）、イーストン、ペンシルベニアに詳細に記載されている。本明細書に記載の化合物は、貯蔵用に凍結乾燥させ、使用前に適当な担体で復元できる。この技法は通常のタンパクで効果的であることがわかっており、公知凍結乾燥操作および復元操作を用いることができる。同定された薬剤が非タンパク様である状況においては、それを単独でまたは医薬上許容される担体と組み合わせて投与してもよい。その割合は、化合物の溶解および化学特性、選択される投与経路および標準的製薬慣習により決定される。例えば、医薬組成物は、澱粉、乳糖、ある種のクレイなどのような賦形剤を含有する錠剤またはカプセル剤の形態にて経口投与してもよい。該組成物は、活性成分をショ糖およびコーンシロップ、フレーバー剤および色素と混合し、ついで固体形に打錠するのに適するように十分に脱水された、トローチまたはロゼンジの形態にて舌下投与してもよい。該組成物は、非経口注射、すなわち、筋肉内、静脈内または皮下注射される溶液の形態にて経口投与してもよい。非経口投与の場合、該組成物は、他の溶質、例えば、等張溶液を調製するのに十分なセイラインまたはグルコースを含有する滅菌溶液の形態にて用いてもよい。内科医は最適の治療薬の用量を決定するであろう。その用量は投与形態および選択される特定の化合物で変化し、その上、治療を受ける個々の患者で変化するであろう。一般に、最適量よりも実質的に少量の化合物で治療を開始し、その環境下、最適な効果に達するまで用量を少量づつ増加させることが望ましい。一般に、組成物を経口投与する場合、少量を非経口投与したと同一の効果を得るのにより多量の活性薬剤を必要とする。該化合物は他のセロトニン作動剤と同様に有用であり、通常、用量レベルは、これら他の治療剤で用いるのと同じレベルである。該治療用量は、一般に、１〜１０ｍｇ／日およびそれ以上であるが、数個の用量単位に分けて投与してもよい。０．５〜１０ｍｇの活性剤を含有する錠剤が特に有用である。患者の症状に依存し、アンタゴニストまたはアゴニストからなる本発明の医薬組成物は、各々、過剰または不十分な５−ＨＴ₂レセプター活性化に付随する症状の予防および／または治療処理に対して投与できる。治療処理においては、疾患およびその併発症を治癒または少なくとも部分的に阻止するに十分な量にて、既に疾患を患っている患者に投与する。予防処理においては、本発明の化合物またはそのカクテルを含有する組成物を、未だ症状のない患者に投与し、その患者の耐性を亢進させる。医薬組成物の単一または複数投与は、治療医により選択される用量レベルおよび方法で実施できる。いずれの事象において、本発明の医薬組成物は患者を効果的に治療するに十分な量を提供すべきである。本発明の核酸は、具体的に、新規ヒト５−ＨＴ₂配列との特異的ハイブリダイゼーション能を有するプローブの提供において特に有用である。プローブ技法は当該分野にて周知であり、そのプローブの大きさは広範に変化しうるが、プローブは長さが少なくとも１５個のヌクレオチドであることが好ましい。また、かかるプローブは、分析上検出可能な試薬で標識化でき、または好ましくは標識化され、そのプローブの同定を促進する。有用な試薬は、限定されるものではないが、放射活性体、蛍光色素または検出可能な生成物を形成する触媒能を有する酵素を包含する。本発明は、例えば、異常な、たとえばレセプター遺伝子発現の増大または減少レベルにより特徴付けられる症状の診断にて、レセプターをコードするプローブを用いることを意図するものである。別法として、該プローブを用い、該レセプターをコードする遺伝子にて染色体または分子変異体を有する対象を同定することができる。当業者が採用する条件に依存して、プローブを同定し、他の細胞型および対象からこのレセプターの付加的な例を回収するのに用いることができる。一般に、ハイブリダイゼーション条件を緊縮すればするほど、より近似関係にある遺伝子が回収される。新規５−ＨＴ₂レセプターについて本明細書に開示されている配列に基づいて断定されるアンチセンスオリゴヌクレオチドもまた本発明の範囲内である。合成オリゴヌクレオチドまたは関連アンチセンス化学構造アナログは、レセプター遺伝子をコードする標的核酸を認識し、特異的に結合し、遺伝子発現、例えば、標的核酸がｍＲＮＡである場合、遺伝子の翻訳を阻害するように設計される。アンチセンス薬剤の作用機構について、特定の論理に制限したくはないが、かかる薬剤は、以下の１またはそれ以上の機構により；ｍＲＮＡに結合し、ＲNaseＩのような外来性ヌクレアーゼによる分解を誘発することにより、または産生タンパク合成に必須の調整因子または染色体成分に結合することによりｍＲＮＡの翻訳を阻害して作用すると考えることができる。加えて、アンチセンス配列は複合的マクロモレキュラー配列の成分として有用である。ここに、該配列をリボザイム配列または化学反応基と組み合わせ、注目するｍＲＮＡを特異的に標的とし、該ｍＲＮＡを分解し、または化学的に修飾するのに用いる。アンチセンス技法は、出典明示により本明細書の一部とする、以下の開示により説明されている（コヘン・ジェイ・エス（Cohen,J.S.）、トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシス（Trends in Pharm.Sci.）１０：４３５（１９８９）およびウェイントラウブ・エッチ・エム（Weintraub,H.M.）サイエンティック・アメリカン・ジャン（Scientific American Jan.）、４０頁）。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂レセプターからの本明細書に開示されているアミノ酸配列に対応するエピトープに依存するモノクローナルまたはポリクローナル抗体を包含する。免疫学的な目的について、特に重要な領域は、レセプターの細胞外ドメインと関連する親水性領域である。該領域に依存する抗体は、そのレセプター・リガンド相互作用に対する効果のため、診断および治療的適用にて特に有用である。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製法は周知である；例えば、アウスベルら（前掲）の第１１章参照のこと。本発明はまた、新規５−ＨＴ₂レセプターに対して関連付けられる有効量の抗体からなり、レセプター活性化に付随する症状を治療または回復させるために、天然のリガンドのその５−ＨＴ₂レセプターへの結合を遮断することからなる医薬組成物を提供する。その診断例においては、５−ＨＴ₂レセプター含有細胞を本発明の抗体と接触させ、抗体／レセプター複合体を測定することにより、細胞表面にある該レセプターを検出することができる。抗体を、放射活性体、蛍光体または酵素のような分析上検出可能な試薬で標識化する場合、該抗体を用い、レセプターの存在または不在および／またはその定量レベルを検出できる。ヒト以外のトランスジェニック動物は、宿主の適当な受精卵または胚を本明細書に開示の新規５−ＨＴ₂レセプターをコードする核酸でトランスフェクションさせることにより得られる；例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；第５，１７５，３８５号；第５，１７５，３８４号および第５，１７５，３８６号参照のこと。得られたトランスジェニック動物はレセプター・リガンド相互作用の研究用のモデルとして用いることができる。特に、有用なトランスジェニック動物は、レセプターの発現に付随して検出可能な表現型を示す動物である。薬剤を、次に、関連する表現型を逆転または悪化させるその能力についてスクリーンする。本発明はまた、種々の温度または代謝条件に特異的に反応する調整因子にレセプター暗号遺伝子を機能的に連結し、それらの条件に応答してその表現発現を効果的に生じさせまたは停止させる。本発明を限定するものではないが、本発明を例示する実験データを示す。実施例１−新規ヒト・５−ＨＴ₂レセプターの単離（ａ）５−ＨＴ_2bプローブの調製ラット・５−ＨＴ_2b遺伝子（１９９２年Ｅｍｂｏジャーナル（Embo.J.）第１１巻，３４８１〜３４８７頁）のｃＤＮＡ配列およびマウスの等価物のゲノム構造（ニューロレポート（Neuroreport）第３巻，３４５〜３４８頁，１９９２年）が記載されている。この情報を用いて、オリゴヌクレオチドＡ＋Ｂを設計してエキソン３の約３９６ｂｐフラグメントのＰＣＲ増幅を行った。オリゴヌクレオチドＡ：５′CGTAACTTTAGCTCTGTGTGATTCC オリゴヌクレオチドＢ：５′CTTGGTCTTCTACTTTGTCACC １μｇのヒト・ゲノムＤＮＡに関するＰＣＲ反応を、１ｘＰＡＲＲバッファー（アドバンスト・バイオテクノロジーズ（Advanced Biothchnologies）社製（１０ｍＭＴｒｉｓｐＨ８、１．５ｍＭＭｇＣｌ₂、０．１ｍｇ／ｍｌゼラチンおよび特許成分））、０．２ｍＭｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、オリゴヌクレオチドＡおよびＢ各１μｇを含有する１００μｌの全反応体積としてセットアップした。９４℃７分、４５℃１分、７２℃１分の最初のサイクルを、５ユニットのＴ３ＤＮＡポリメラーゼ（アドバンスト・バイオテクノロジーズ社製）を添加して４５℃で行った。これに続けて、９４℃１分、４５℃１分、７２℃１分を３０サイクル行い、ついで、５分間の最終サイクルにおいて伸長ステップを行った。テクネ・プログラマブル・ドライ−ブロックＰＨＣ−１（Te chne programmable Dri-block PHC-1）中で増幅反応を行った。ＰＣＲ生成物のうち１０μｌを、１μｇ／ｍｌのエチジウムブロミドを含有する３％ＴＢＥアガロースゲル上で泳動し、約４００ｂｐのバンド（Ｃ）を可視化した。ＰＣＲ反応物の残りを３％ＴＡＥアガロースゲル上で泳動し、Ｃを切り出し、ジェネクリーンIIキット（GenecleanII kit）（バイオ１０１（（Bio101））社製）を製造者の指示に従って用いて、ＤＮＡをＴＥバッファー１５μｌ中（最終体積）に溶出した。以下のごとく、製造者の指示に従い、アマーシャム（Amersham）社のブランティングキット（blunting kit）（カタログ番号ＲＰＮ１５０８）で、７μｌのＣを平滑末端に切断し、キナーゼ処理した。１０ｘブランティングバッファー１μ ｌ、１０ｍＭｒＡＴＰ０．５μｌ、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ１μｌ、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ０．５μｌ（ギブコ（Gibco）社製）を７μｌのＣに添加した。混合物を３７℃で３０分、ついで、６５℃で１５分インキュベーションして酵素を不活性化した。ついで、処理したフラグメントを、ＳｍａＩで切断され、ＢＡＰ（ファルマシア（Pharmacia）から市販されている切断されたベクター：カタログ番号２７−４８６０−０１）で処理されているｐＵＣ１９中に以下のごとくライゲーションした：すなわち、アマーシャム社のブランティングキット（ＲＰＮ１５０８）からの試薬を用いて、８μｌのフラグメントＣとＳｍａＩで切断した５ｎｇのｐＵＣ１９とを製造者の指示に従いライゲーションした。得られたプラスミド（ベクターＤ）を細菌宿主ＪＭ１０１に形質転換した（サムブルック・ジェイ（Sambrook,J）ら，モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Molecular Cloning:A Laboratory Manual）記載の標準的方法を用いた）。挿入された配列を、サンガー（Sanger）のジデオキシターミネーション法およびシークエンス・バージョンＩ（Sequence Version）１（ＵＳＢ）を用いて決定した。得られた３９６ｂｐのＤＮＡ配列は、ヌクレオチド１２５５ないし１６５２の間の領域において、公表されたラット・ｃＤＮＡ配列に対して８４．９％の相同性を示した。（ｂ）組織局在性の研究：ヒト・皮質、扁桃、海馬、胃および小腸のＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲおよびネスティッドＰＣＲ分析齧歯類の５−ＨＴ_2bレセプターは薬理学的に十分特徴づけられているが、これの組織への分配についての情報はきわめて少ない。ロリック（Loric）ら（Ｆｅｂｓ第３１２巻第２，３号２０３〜２０７頁）には、脳、心臓および小腸におけるネズミ・５−ＨＴ_2bレセプターの発現が示されているが、フォウゲト（Fouget ）らは（Ｅｍｂｏジャーナル第１１巻（９）３８４１〜３８４７頁）、ラットの胃底における発現を示したにすぎなかった。（ｉ）脳試料尿素−塩化リチウム、フェノール・クロロホルム抽出およびエタノール／酢酸沈澱を用いて、切り取ったヒト・皮質、扁桃、海馬および全脳から全ＲＮＡを調製した。製造者の指示に従い、ダイナビーズ（ダイナル・リミテッド製（Dynal Ltd.））を用いてポリＡ⁺ＲＮＡを単離した。２０ｍＭＴｒｌｓＨＣｌｐＨ８．４、５０ｍＭＫＣｌ、２．５ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭｄＮＴＰ（ファルマシア社製）、０．５μＭオリゴヌクレオチドＢ、ＲＮＡｓｉｎ（プロメガ（Promega）社製）１２．５ユニット、ＡＭＶ逆転写酵素（ファルマシア社製）１０ユニットを含有する最終体積１０μｌ中で、４５℃において６０分間、ｍＲＮＡ１μｇを逆転写した。５ｍＭＥＤＴＡＮ５０ｍＭＮａＯＨの存在下、６５℃で６０分間ＲＮＡを加水分解し、ついで、ＨＣｌで中和した。体積を水で１００μｌに増加させ、生成物を即座に以下ののＰＣＲに使用した：１０ｍＭＴｒｌｓｐＨ８．３、５０ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、各ｄＮＴＰ２００μＭ、オリゴヌクレオチドＡ＋Ｂ各１μＭおよびアンプリタック（Amplitaq ）（パーキン・エルマー（Perkin Elmer）社製）１．２５ユニットを含有する５０μ１の反応液中に逆転写産物１０μｌを入れた。反応液に鉱油を重層し、９４ ℃７分、５５℃１分、ついで７２℃２分の最初のサイクルを行った。ついで、９４℃１分、５５℃３０秒、７２℃１分を３０ラウンド行った。ついで、この反応混合物１０μｌを、同じ反応条件を用い、オリゴヌクレオチドＡおよびＢの代わりに、オリゴヌクレオチドＥ：５′GGGTAGGCTACGTTTCCTCGGGおよびオリゴヌクレオチドＦ：５′AAGACTGAATGGTTGAACTTCG を用いてさらに３０サイクルのネスティッドＰＣＲに付した。ＰＣＲ生成物のうち５μｌを、１μｇ／ｍｌのエチジウムブロミドを含有する１％ＴＢＥアガロースゲル上で泳動した。約２７０ｂｐのバンドを可視化した。扁桃試料からのＰＣＲ生成物をゲル精製し、７μｌを、ＳｍａＩで切断してあるｐＵＣ１９にサブクローン化し、上記のごとく部分的に配列決定を行った。得られた１５０ｂｐの配列は、生成物Ｃの一部と同じであった。（ii）胃および小腸５ＨＴ２ｂプローブの調製について記載したのと同じ条件で、ヒト・胃（カタログ番号〜７１２６−１）および小腸（タログ番号〜７１７６−１）由来のクイッククローン（QuickClone）^TMｃＤＮＡ（クローンテック（Clontech）社製）試料のうちの１０ｎｇの試料についてＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ精製物のうち１０μｌを、エチジウムブロミド１μｇ／ｍｌを含有する３％ＴＢＥアガロースゲル上で泳動し、約４００ｂｐのサイズのバンドをはっきりと可視化した。小腸試料からのＰＣＲ生成物をサブクローン化し、上記のごとく配列決定を行い、ヒト・ゲノムＤＮＡ（生成物Ｃ）から単離された配列と同じ配列であることがわかった。（ｃ）ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングヒト・小腸由来の市販されているλＧＴ１０ｃＤＮＡライブラリー（クローンテック社製）を、下記のごとく、プローブとしてベクターＤを用いてスクリーニングした。ライブラリーをプレートに撒き、サムブルック・ジェイら，モレキュラー・クロ−ニング：ア・ラボラトリー・マニュアルにより記載のごとくプラークを釣り上げた。６ｘＳＳＣ、１０ｘデンハーツ（Denhardt's）、０．２５％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌサケ・精子ＤＮＡ中、６５℃で一夜、フィルターをハイブリダイズさせ、０．５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳの緊縮条件下、６５℃で３０分間、２回洗浄した。ついで、陽性シグナルに対応するオートラジオグラフィー（増強スクリーンを用いて−７０℃で１６時間行った）の部位を拾いあげ、数ラウンドのプラーク精製に付した。このスクリーニングによりクローン８．２をを単離した。（ｄ）クローン８．２の分析上記λファージ単離体は、１４３０ｂｐの挿入物（配列番号１）を有することがわかった。該クローンの配列分析により、ラットおよびマウスの５−ＨＴ_2bレセプター配列と強い相同性を有するＧタンパク結合レセプターファミリーに属する新規ヒト遺伝子であることがわかった。該クローンの配列分析により、３９９個のアミノ酸からなるタンパクフラグメントを表す１１９７ｂｐのオープンリーディングフレームであることがわかり、該配列はストップコドンを含んでいなかった。ラットおよびマウスの５−ＨＴ_2b遺伝子は、それぞれ４７９個および５０４個のアミノ酸を含有している。推定タンパクのヒドロパシー分析（ゴルドマン（Goldman）は、エンゲルマン（Engelman）およびシュタイツ（Steitz））は、７個の疎水性ドメイン（このレセプターファミリーのすべての構成員が有している鍵となる特徴）を示す。Ｎ結合型グリコシレーションに関する５個の可能性のある部位が存在し、ホスホリレーションに関する一致したシグナルが、ラット、マウスと推定上の１Ｃ３ループ領域におけるこのヒトの配列との間で保存されている。８．２の推定アミノ酸配列（配列番号２）を他のＧタンパク結合レセプターと比較することにより、それが５−ＨＴ₂レセプターファミリーと最も強力な相同性を有しており、８．２をこのファミリーの新規構成員であるというのが適当であることが示される。このグループ内において、８．２は最も密接にラットおよびマウスの５−ＨＴ_2b遺伝子と関連している（それぞれ８１．２％および８２．２％）。クローン８．２を、その全体を放射標識プローブとして用いて、レセプター、例えば、ヒト・胃または脳のｃＤＮＡライブラリーのごとき他の組織由来のライブラリーをスクリーニングすることができる。別のアプローチは、クローン化したＤＮＡを、制限酵素ＥｃｏＮＩ（暗号領域中ヌクレオチド５７１において開裂）およびＳｔｙＩ（暗号領域中ヌクレオチド９７５において開裂）で消化することにより、レセプターの３’末端において指向された短いプローブを得ることであろう。かかるフラグメントとしては、ＥＣ２ループ、ＴＭ５およびＩＣ３ループが挙げられるであろう。これを放射標識し、ヒト・ゲノムライブラリーのスクリーニングに使用することができる。レセプター暗号領域の残りの部分を含んでいるいずれのクローンも８．２にスプライシングされて完全タンパク暗号配列を形成しうる。完全なｃＤＮＡは、実施例２記載の組織培養系において発現されて、リガンド結合アッセイに使用する膜または第２のメッセンジャーアッセイに使用する全細胞系を提供しうる。（ｅ）３’プローブの調製（ｄ）のλファージ単離体由来の１４３０ｂｐのＥｃｏＲＩ挿入物をＥｃｏＲＩで切断したｐＵＣ１９中にサブクローン化してベクターＧを形成することができる。クローン８．２の３’末端由来の短いプローブであるフラグメントＨを、ＥｃｏＮＩ（ＯＲＦ中のヌクレオチド５７５において開裂）およびＳｔｙＩ（ＯＲＦ中のヌクレオチド９７５において開裂）でのベクターＧの消化により得た。（ｆ）ヒト・ゲノムＤＮＡライブラリーのスクリーニングアマーシャムのメガプライムシステム（Megaprime system）を用い、製造者の指示にしたがってフラグメントＨを標識し、市販されているヒト・白血球ＤＮＡ由来のＥＭＢＬ３ゲノムライブラリー（クローンテック（Clonetech）社製）をスクリーニングするのに用いた。ライブラリーをプレートに撒き、サムブルック・ジェイら，モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアルにより記載のごとくプラークを釣り上げた。フィルターをハイブリダイズさせ、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングについて記載したのと同じ条件で洗浄した（実施例１ｃ）。オートラジオグラフィー（増強スクリーンを用いて−７０℃で１６時間行った）後、複製されたシグナルに対応する領域を拾い上げ、数ラウンドのプラーク精製に付した。このスクリーニングによりクローン８Ｇを単離した。（ｇ）クローン８Ｇの分析ＥＭＢＬ３ファージ単離体は、１３ｋｂより大きいサイズの挿入物を含んでいることがわかった。該ＤＮＡをＡｃｃＩで開裂し、サムブルック・ジェイら，モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアルにより記載のごとくサザンブロットを行い、フラグメントＨおよびベクターＤで順次プローブした。ベクターＤのみにハイブリダイズする約１．４ｋｂのサイズのバンドを同定した。これを平滑末端にし、ＳｍａＩにより切断されたｐＵＣ１９中にサブクローン化してベクターＪを形成した。分析により、このフラグメントが、クローン８．２中のＤＮＡ配列（暗号領域中ヌクレオチド１１３６ないし１１９７）を含み、さらにＴＡＧストップコドンまでの２４９ｂｐまで伸長していることがわかった。クローン８．２と８Ｇをオーバーラップさせることにより誘導されたＯＲＦは長さ１４４３ｂｐであり（配列番号３）、４８１個のアミノ酸からなるタンパク（配列番号４）をコードしている。推定タンパクのヒドロパシー分析（ゴルドマン（Goldman）は、エンゲルマン（Engelman）およびシュタイツ（Steitz））は、７個の疎水性ドメイン（このレセプターファミリーのすべての構成員が有している鍵となる特徴）を示す。推定アミノ酸配列を他のＧタンパク結合レセプターと比較することにより、それが５−ＨＴ₂レセプターファミリーと最も強力な相同性を有しており、８．２をそのファミリーの新規構成員であるというのが適当であることが示される。このグループ内において、それは最も密接にラットおよびマウスの５−ＨＴ_2b遺伝子と関連している（各々、８０．４％および８１．３％）。Ｎ結合型グリコシレーションに関する５個の可能性のある部位が存在し、ホスホリレーションに関する一致したシグナルが、ラット、マウスの５−ＨＴ_2b 遺伝子と推定上の１Ｃ３ループ領域におけるこのヒト配列との間で保存されている。（ｈ）完全タンパク暗号領域の構築クローン８．２および８Ｇ由来の制限フラグメントをライゲーションすることにより、完全タンパク暗号領域を構築した。約１．４ｋｂの制限フラグメントを、標準的条件下におけるＥｃｏＲＩおよびＢｓｐＭＩでの消化により、ベクターＧから単離した。約９００ｂｐの制限フラグメントを、ＢｇｌIIおよびＫｐｎＩでの消化により、ベクターＪから単離した。これらを、リンカーＫを介してＥｃｏＲＩ／ＫｐｎＩ消化されたｐＵＣ１９中に一緒にライゲーションしてベクターＬを形成した。リンカーＫを形成するオリゴヌクレオチド５′ACCGGGCCACAAAGTCAGTAAAAACTCTCAGAAAACGCTCCAGTAA ５′GATCTTACTGGAGCGTTTTCTGAGAGTTTTTACTGACTTTGTGGCC 酵素ＸｂａＩおよびＫｐｎＩでの開裂による挿入ＤＮＡの単離、ついで、ＸｂａＩ／ＫｐｎＩで切断されたｐＵＣ１９中への再ライゲーションによりｐＵＣ１９中の混成クローンの方向を変更してベクターＭを形成した。（ｉ）３’非翻訳配列の除去３’非翻訳配列はタンパク生成に必要でなく、適当な真核細胞発現ベクターへのサブクローニングを妨害しうる。ＴＡＧストップコドンを越えて５７ｂｐの地点まで伸長したフラグメントを、ヒト・ゲノムＤＮＡに対するＰＣＲを用いて調製した。オリゴヌクレオチドＮおよびＰをＰＣＲに用いた。オリゴヌクレオチドＮ：５′TATAACTTTAGTTTTATGTGATTCC オリゴヌクレオチドＰ：５′CTCATCATTATGTTTGATGACAACTGCC ５ＨＴ２ｂプローブの調製について記載したのと同じ条件下で、ヒト・ゲノムＤＮＡ１μｇに対してＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ生成物のうち１０μｌを、３％ゲル上で泳動し、約４２０ｂｐのバンド（Ｑ）を可視化した。該バンドを単離し、実施例１（ａ）記載のごとく、ＳｍａＩにより切断されたｐＵＣ１８中にサブクローン化した。得られたベクター（Ｒ）を細菌宿主ＪＭ１０１に形質転換した。該挿入物を、ｐＵＣ１８ポリリンカー中のＢａｍＨＩ部位に隣接する遺伝子の３’末端とともに方向づけた。挿入配列は、同じ領域のゲノムクローン８Ｇにおいて見られる配列と同じであることが確認された。（ｊ）完全暗号領域の真核発現ベクターへの転移ベクターＭ由来の１５００ｂｐのＨｉｎｄIII／ＥｃｏＲＩフラグメント（５ ’非翻訳配列およびタンパク暗号領域の大部分を含む）を、ベクターＲ由来の２００ｂｐのＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩフラグメント（タンパク暗号領域の残りを含む）と一緒に、ＨｉｎｄIII／ＢａｍＨＩで切断されている真核発現ベクターＣＤＮ（図２）中にライゲーションしてベクターＳを形成した。該ベクターは、トランスフェクションされた細胞にて高レベル発現を行うためにＣＭＶプロモーターを用いている。さらに、該ベクターは、Ｇ４１８中で増殖する能力に基いてトランスフェクション体を選択するためのネオマイシン耐性遺伝子およびＤＨＦＲ^- 細胞におけるトランスフェクションされた遺伝子の増幅を可能にするジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子をコードしている。実施例２−異種発現（ａ）部分レセプター配列の発現部分レセプター配列は７個の推定上のトランスメンブレンドメインを含んでいるので、該配列を組織培養系で発現してリガンド結合アッセイに用いる膜を得ることが可能であることが証明されうる。クローン８．２をＳｍａＩ部位に有するｐＵＣ１９のごときホールディングベクターをＥｃｏＲＩおよびＢｓｐＭＩで消化することにより、これを行うことができる。得られる約１４３０ｂｐのフラグメントを、２個のストップコドンを有するリンカーＨ：とともに、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIIIで消化されているベクターＣＮＯＤ（図１）中にライゲーションしてベクターＪを形成することができる。ベクターＣＮＯＤは、トランスフェクションされた細胞における高レベル発現を行うためにＣＭＶプロモーターを用いている。さらに、該ベクターは、Ｇ４１８中で増殖する能力に基いてトランスフェクション体を選択するためのネオマイシン耐性遺伝子およびＤＨＦＲ^-細胞におけるトランスフェクションされた遺伝子の増幅を可能にするジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子をコードしている。かかるベクターは、ヒト・無血清培地中での増殖に用いられる非付着性ＤＨＦＲ^-細胞系であるＣＨＯＡＣＣ９８およびヒト胚腎２９３細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ１５７３）のごとき宿主細胞系におけるタンパク生産に指向されるべきである。トランスフェクションされた細胞系を、Ｇ４１８耐性により選択することができる。成功した細胞系は、少なくとも、細胞あたり５ｘ１０⁴〜１０⁵個のレセプター部位を発現し、５−ＨＴ、ラウオルシン（rauwolscine）およびケタンセリン（ketanserin ）のごとき既知リガンドの結合を示す。（ｂ）レセプター配列全長の発現レセプターを、ヒト胚腎２９３細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ１５７３）中で発現させてリガンド結合アッセイに使用する膜および結合アッセイ系で使用する全細胞を得た。トランスフェクション２４時間前に３０％０集密となるよう細胞を１２ウェルプレートに撒いた。２．５μｇ／ウェルのベクターＳを用いてりん酸カルシウム沈殿を形成させた。これを細胞に添加し、３％ＣＯ₂を満たしたインキュベーター中、３７℃で一晩インキュベーションした。ついで、単層上の培地をイーグル最少必須培地およびＬ−グルタミンと交換した。さらに２４時間インキュベーションした後、Ｇ４１８（ジェネティシン（Geneticin）社製）を培地中８００ｍｇ／ｍｌの濃度になるまで添加した。各ウェルに生成したコロニーを、最初の薬理学的特徴づけのために大量培養した。別法として、トランスフェクションされた哺乳動物細胞において高レベル発現を行うためにＣＭＶプロモーターを用いたｐｃＤＮＡ３（インビトロジェン（In vitrogen）社製）中にレセプターの暗号配列をサブクローン化することによっても発現を行うことができる。さらに、該ベクターは、Ｇ４１８中で増殖する能力に基いて安定なトランスフェクション体を選択するためのネオマイシン耐性遺伝子をコードしている。かかるベクターは、ＳＫＮ−Ｓ−Ｈヒト・神経芽細胞腫細胞（ＡＴＣＣＨＴＢ II）のごとき他の適当な宿主細胞系におけるタンパク生成に指向されるべきである。成功した細胞系は、細胞あたり５ｘ１０⁴〜１０⁵個のレセプター部位を発現し、５−ＨＴ、ラウオルシンおよびケタンセリンのごとき既知リガンドの結合を示す。実施例３−化合物のスクリーニング５−ＨＴ₂レセプターに対する新規で有効なアゴニスト／アンタゴニストを同定するために、全細胞、細胞ホモジネート物、または実施例２からの組み換えレセプターを発現する細胞系から単離された細胞膜について化合物のスクリーニングを行う。ウェインスコット，ディー・ビー（Wainscott,D.B.）ら，モレキュラー・ファーマコロジー（Mol.Pharmacol.）第４３巻：４１９〜４２６頁およびロリック，エス（Loric,S.）ら，ＦＥＢＳ第３１２巻：２０３〜２０７頁により記載されたような結合アッセイを用いて、調製された膜への放射標識化合物（例えば、³Ｈ−５−ＨＴまたは¹²⁵Ｉ−ＤＯＩ）の結合に対する阻害能より、レセプターに対する与えられた化合物の親和性を測定することができる。この方法を、新規５−ＨＴ₂レセプターにおいて測定可能な平衡離離定数を有する選択化合物を同定するための第１スクリーニングとして用いることができる。新規５−ＨＴ₂レセプターを発現している細胞の周囲の細胞外液の酸性化を引き起こす代謝活性の上昇を測定することによって、化合物の能力を評価することができる。サイトセンサー・マイクロフィジオメーター（cytosensor lnicro-ph ysiometer）により測定されるような、実施例２（ｂ）の形質転換されたヒト胚腎２９３細胞の５−ＨＴの最大刺激濃度に対する酸性化応答は明確である（典型的には、基本的な酸性化速度よりも１０％またはそれ以上大きい）。親の細胞系においては、かかる５−ＨＴに対する応答は検出されない。リガンドの親和性、能力および本来的な効率を、リガンドが酸性化応答を起こさせる能力、または５−ＨＴにより誘導された酸性化応答を小さくする能力により測定することができる。新規５−ＨＴ₂レセプターはＧタンパク結合型なので、ラゼレノ（Lazereno）およびバードサル（Birdsall）（１９９３年）ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー第１０９巻，１１２０〜１１２７頁により記載された方法と同様に方法でグアニンヌクレオチド交換を測定することにより、または該レセプターはこの第２の伝達系に適当な効率で結合すると信じられているため、ホスホリパーゼＣを刺激してポリホスホイノシチドを生成する能力もしくはかかる刺激を小さくする能力を測定することにより、化合物の活性を測定することもできる。他の系において、該レセプターは、ある程度の効率で他の第２の伝達系、例えば、アデニリルシクラーゼに結合することが見いだされうる。候補となる化合物は、グッドマン（Goodman）およびジルマン（Gilman）のザ・ファーマコロジカル・ベイシス・オブ・セラピューティクス・セブンス・エディション（The Pharmacological Basis of Therapeutics'7th ED）６２９〜６３１頁およびＥＰ０１８９００２に記載の疾患、例えば、不安症、鬱、脳関門または網膜関門機能に関連する病理、偏頭痛、食欲不振、強迫観念疾患、アルツハイマー症、睡眠障害、大食、恐怖発作、癲痴、薬剤乱用耽溺、精神分裂症をはじめとするＣＮＳ、心臓血管系および胃腸の障害の治療または予防に有用である可能性があり、これらの治療指標について適当な動物モデルにおいて試験される。図中、図１はベクターＣＮＯＤの図である。図２はベクターＣＤＮの図である。配列表配列番号１部分ヌクレオチド配列配列番号２部分ヌクレオチド配列配列番号３全ヌクレオチド配列配列番号４全ペプチド配列配列番号５（オリゴヌクレオチドＡ）配列番号６（オリゴヌクレオチドＢ）配列番号７（オリゴヌクレオチドＥ）配列番号８（オリゴヌクレオチドＦ）配列番号９（リンカーＫ）配列番号１０（リンカーＫ）配列番号１１（オリゴヌクレオチドＮ）配列番号１２（オリゴヌクレオチドＰ）配列番号１３（リンカーＨ）配列番号１４（リンカーＨ）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 Ｎ 9284−4ＣＣ０７Ｋ 14/72 8318−4ＨＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ 21/08 9358−4ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/577 Ｂ 8310−2Ｊ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者フラニガン，トーマス・パトリックイギリス国オックスフォード・オーエックス２・６エイチイー、ウッドストック・ロード、ラドクリフ・インファーマリー、エス・ケイ・ビー・センター、オックスフォード・ユニバーシティ（番地の表示なし)

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号１または配列番号３に対応する塩基からなる核酸分子、および（ｂ）同じタンパクをコードするが、遺伝暗号のデジェネラシーによりコドン配列における（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子からなる群より選択される単離核酸分子。２．ＤＮＡである請求項１記載の核酸分子。３．ＲＮＡである請求項１記載の核酸分子。４．請求項１に記載の核酸分子からなるベクター。５．請求項４に記載のベクターからなる組換え宿主細胞。６．請求項３に記載の核酸分子に結合する能力のある配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド。７．請求項１に記載の核酸分子によりコードされる新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターである単離タンパク。８．配列番号２および４に列挙されたアミノ酸配列に関して定義される新規ヒト５−ＨＴ₂レセプターであり、新規５−ＨＴ₂レセプターのレセプター結合活性を保持する以外、実質的に同種アミノ酸配列を有する変異体を包含する単離タンパク。９．配列番号２に対応する残基からなるか、または配列番号４に対応する残基からなる請求項８記載の新規５−ＨＴ₂レセプター。 10．該レセプターをコードするＤＮＡを発現させ、その発現産物を回収することからなる、請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターの製法。 11．請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターに依存する抗体。 12．モノクローナル抗体である請求項11記載の抗体。 13．請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターと相互作用し、結合する薬剤を同定するための薬剤のスクリーン法であって、薬剤／レセプター結合複合体を形成させるに十分な条件下、候補となる多数の薬剤を該レセプターと接触させ、該複合体を形成させ、強化し、または妨害能を有する薬剤を同定することからなる薬剤のスクリーン法。 14．請求項13に記載の方法により同定されるアンタゴニストまたはアゴニスト。 15．請求項14に記載のアンタゴニストまたはアゴニストと、医薬上許容される担体とからなる医薬組成物。 16．請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターに結合する化合物を同定するための化合物のスクリーン法であって、細胞表面にて、化合物が該レセプターに結合することに応答して検出可能なシグナルを発しうる第２の成分と結合する、該レセプターを発現する組換え宿主細胞を提供し、化合物がレセプターに結合するに十分な条件下、候補となる多数の化合物を該宿主細胞と接触させ、該第２の成分により発せられるシグナルを検出することによってレセプター結合能を有する化合物を同定することからなる化合物のスクリーン法。 17．細胞表面にある請求項７〜９のいずれか１つに記載の５−ＨＴ₂レセプターの診断法であって、レセプター保有細胞を請求項11に記載の抗体と接触させ、抗体・レセプター複合体を測定することからなる５−ＨＴ₂レセプターの診断法。 18．いずれかの細胞にて請求項２に記載のＤＮＡの発現能を有するヒト以外のトランスジェニック哺乳動物。 19．過剰の５−ＨＴ₂レセプター活性化に付随する疾患の治療法であって、天然に存在するリガンドが該レセプターに結合することを遮断するのに効果的である請求項11に記載の抗体を含有する医薬組成物を一定量、対象に投与し、該疾患を緩和することからなる疾患の治療法。 20．過剰の５−ＨＴ₂レセプター活性化に付随する疾患の治療法であって、天然に存在するリガンドが請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターに結合することを遮断するのに効果的であるアンタゴニスト含有の請求項15に記載の医薬組成物を一定量、対象に投与し、該疾患を緩和することからなる疾患の治療法。 21．５−ＨＴ₂レセプター活性化が不十分であることに付随する疾患の治療法であって、請求項７〜９のいずれか１つに記載のレセプターに結合するアゴニストを含有する請求項15に記載の医薬組成物を一定量、対象に投与し、該疾患を緩和することからなる治療法。