JPH08333391A - ペプチド及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【解決手段】 配列番号１のアミノ酸配列から成るペプ
チド等。 配列番号１ 【効果】 ペプチドはスギ花粉アレルゲンに特異的なイ
ムノグロブリンＥ抗体に実質的に反応しないので、ヒト
を含む哺乳類一般に投与すると、実質的にアナフィラキ
シーを引起こすことなく、スギ花粉アレルゲンに特異的
なＴ細胞を活性化できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、スギ花粉アレル
ゲンに特異的に反応するＴ細胞を活性化するペプチド、
及び、そのペプチドを有効成分として含んでなる免疫療
法剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】ここ数十年来、我国においては、春先に
なるとスギ花粉症による鼻炎や結膜炎を訴える人の数が
増加し続けている。スギ花粉症はアルレギー症の一種で
あり、その主因はスギ花粉中の抗原性物質、すなわち、
スギ花粉症アレルゲンであるといわれている。大気中に
飛散したスギ花粉がヒトの体内に侵入すると、スギ花粉
アレルゲンに対するイムノグロブリンＥ抗体が産生す
る。この状態で次にスギ花粉が侵入すると、その花粉中
のアレルゲンとこのイムノグロブリンＥ抗体が免疫反応
を起し、アレルギー症状を呈することとなる。

【０００３】スギ花粉中に抗原性の相違する少なくとも
二種類のアレルゲンの存在することが現在までに知られ
ている。その一つは、ヤスエダ等が『ジャーナル・オブ
・アレルギー・アンド・クリニカル・イムノロジー』、
第７１巻、第１号、第７７〜８６頁（１９８３年）に報
告しているアレルゲンであり、今日、これは「Ｃｒｙｊ
１」と呼称されている。なお、Ｃｒｙｊ１ はその全長
アミノ酸配列が決定され、国際出願されている（ＷＯ
９３／０１２１３）。

【０００４】もう一つは、タニアイ等『エフ・イー・ビ
ー・エス・レターズ』、第２３９巻、第２号、第３２９
〜３３２頁（１９８８年）やサカグチ等『アレルギ
ー』、第４５号、第３０９〜３１２頁（１９９０年）に
報告されているアレルゲンであり、今日、これは「Ｃｒ
ｙ ｊ ２」と呼称されている。なお、Ｃｒｙ ｊ ２
はその全長アミノ酸配列が決定され、国際出願されてい
る（ＷＯ ９４／１１５１２）。また、 Komiyama らも
別個にＣｒｙｊ２の全長アミノ酸配列を決定しているが
（ Biochem. Biophys. Res, Comm., vol.201, No.2, 10
21-1028, (1994))、ＷＯ ９４／１１５１２記載のアミ
ノ酸配列とはアミノ酸残基が４か所異なっている。

【０００５】スギ花粉中には、通常、Ｃｒｙｊ１とＣｒ
ｙｊ２が約５０：１乃至５：１の割合で存在し、花粉症
患者から採取した血清の殆どがＣｒｙｊ１にもＣｒｙｊ
２にも反応すると云われている。澤谷らは、『アレルギ
ー』、第４２巻、第６号、第７３８〜７４７頁（１９９
３年）において、Ｃｒｙｊ２は、皮内反応試験やＲＡＳ
Ｔ試験において、Ｃｒｙｊ１と同程度の抗原性を発揮す
ると報告している。

【０００６】このように、スギ花粉アレルゲンが既に幾
つか単離され、その性質、性状もある程度解明されたこ
とから、精製スギ花粉アレルゲンをヒトに投与して減感
作することにより、スギ花粉症を治療・予防できる見通
しがついてきた。最近ではそのための減感作剤も幾つか
考案されており、例えば、特開平１−１５６９２６号公
報や特開平３−９３７３０号公報には、Ｎ末端からのア
ミノ酸配列がＡｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ
−Ｓｅｒ又はＡｌａ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ
−Ａｓｎで表わされるスギ花粉アレルゲンに糖質を共有
結合せしめ、生成した複合体を減感作剤としてヒトに投
与する提案が為されている。

【０００７】しかしながら、アレルギー症の診断や減感
作療法には、通常、高純度のアレルゲンが大量に必要と
され、スギ花粉中のアレルゲンは僅少であるうえに安定
性が低く、スギ花粉症の診断剤や減感作剤をスギ花粉だ
けで賄おうとすると、多大の困難が伴なう。このような
ことから、最近のアレルギー疾患の治療・予防において
は、これまでのように、患者にアレルゲン全体を投与す
るのではなく、アレルゲン中のＴ細胞が特異的に認識す
る最小領域、すなわち、本質的にＴ細胞エピトープのみ
からなる低分子のペプチドを投与する免疫療法が注目さ
れている。

【０００８】一般に、アレルゲンは、マクロファージな
どの抗原提示細胞に取込まれると、そこで消化され、消
化断片が免疫提示細胞表層のＨＬＡ（Human Leucocyte
Antigen ）蛋白質に結合し、抗原提示されることとな
る。抗原提示される断片は、ＨＬＡ蛋白質に対する親和
性などにより、アレルゲンにおける一部の特定領域に限
られ、斯かる領域のうち、Ｔ細胞が特異的に認識する領
域は、通常、「Ｔ細胞エピトープ」と呼称される。実質
的にＴ細胞エプトープのみからなるペプチドを投与する
免疫療法には、

【０００９】（ｉ） ペプチドがＢ細胞エピトープを欠
いている、すなわち、アレルゲンに特異的なイムノグロ
ブリンＥ抗体が反応しないので、従来の粗製又は精製ア
レルゲンで頻発していたアナフィラキシーなどの副作用
が起こり得ない。 (ii) 少量からスタートし、有効投与量に達するまでの
期間が、従来の減感作剤に比較して、大幅に短縮でき
る。 (iii) 経口免疫寛容を誘導し、アレルゲンに対するアレ
ルギー反応を減弱することができる。などの利点があ
る。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記Ｔ
細胞エピトープを構成する最小単位のアミノ酸配列を見
出し、本発明を完成した。この発明の第一の課題は、本
質的のスギ花粉アレルゲンのＴ細胞エピトープのみから
なるペプチドを提供することにある。この発明の第二の
課題は、有効成分として上記ペプチドを含んでなる抗ス
ギ花粉症剤を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１） 配列
番号１のアミノ酸配列から成るペプチド、（２） 配列
番号２のアミノ酸配列から成るペプチド、（３） 配列
番号３のアミノ酸配列から成るペプチド、（４） 配列
番号３のアミノ酸配列を含むことから成るペプチド、
（５） 配列番号４のアミノ酸配列から成るペプチド、
（６） 配列番号５のアミノ酸配列から成るペプチド、
（７） 配列番号６のアミノ酸配列から成るペプチド、
（８） 配列番号６のアミノ酸配列を含むことから成る
ペプチド、（９） 配列番号７のアミノ酸配列から成る
ペプチド、（１０）配列番号７のアミノ酸配列を含むこ
とから成るペプチド、

【００１２】（１１）配列番号８のアミノ酸配列から成
るペプチド、（１２）配列番号８のアミノ酸配列を含む
ことから成るペプチド、（１３）配列番号９のアミノ酸
配列から成るペプチド、（１４）配列番号９のアミノ酸
配列を含むことから成るペプチド、（１５）配列番号１
０のアミノ酸配列から成るペプチド、（１６）配列番号
１１のアミノ酸配列から成るペプチド、（１７）配列番
号１２のアミノ酸配列から成るペプチド、（１８）配列
番号１２のアミノ酸配列を含むことから成るペプチド、
（１９）配列番号１３のアミノ酸配列から成るペプチ
ド、（２０）配列番号１４のアミノ酸配列から成るペプ
チド、

【００１３】（２１）配列番号１４のアミノ酸配列を含
むことから成るペプチド、（２２）配列番号１５のアミ
ノ酸配列から成るペプチド、（２３）配列番号１６のア
ミノ酸配列から成るペプチド、（２４）配列番号１７の
アミノ酸配列から成るペプチド、（２５）配列番号１７
のアミノ酸配列を含むことから成るペプチド、（２６）
配列番号１８のアミノ酸配列から成るペプチド、（２
７）配列番号１９のアミノ酸配列から成るペプチド、
（２８）配列番号１９のアミノ酸配列を含むことから成
るペプチド、（２９）配列番号２０のアミノ酸配列から
成るペプチド、（３０）配列番号２０のアミノ酸配列を
含むことから成るペプチド、

【００１４】（３１）配列番号２１のアミノ酸配列から
成るペプチド、（３２）配列番号２１のアミノ酸配列を
含むことから成るペプチド、（３３）配列番号２２のア
ミノ酸配列から成るペプチド、（３４）配列番号２３の
アミノ酸配列から成るペプチド、（３５）配列番号２３
のアミノ酸配列を含むことから成るペプチド、（３６）
配列番号２４のアミノ酸配列から成るペプチド、（３
７）配列番号１のアミノ酸配列から成るペプチドを有効
成分とする抗スギ花粉症剤、（３８）配列番号２のアミ
ノ酸配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉
症剤、（３９）配列番号３のアミノ酸配列から成るペプ
チドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（４０）配列番
号３のアミノ酸配列を含むことから成るペプチドを有効
成分とする抗スギ花粉症剤、

【００１５】（４１）配列番号４のアミノ酸配列から成
るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（４２）
配列番号５のアミノ酸配列から成るペプチドを有効成分
とする抗スギ花粉症剤、（４３）配列番号６のアミノ酸
配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（４４）配列番号６のアミノ酸配列を含むことから
成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（４
５）配列番号７のアミノ酸配列から成るペプチドを有効
成分とする抗スギ花粉症剤、

【００１６】（４６）配列番号７のアミノ酸配列を含む
ことから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（４７）配列番号８のアミノ酸配列から成るペプチ
ドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（４８）配列番号
８のアミノ酸配列を含むことから成るペプチドを有効成
分とする抗スギ花粉症剤、（４９）配列番号９のアミノ
酸配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（５０）配列番号９のアミノ酸配列を含むことから
成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、

【００１７】（５１）配列番号１０のアミノ酸配列から
成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（５
２）配列番号１１のアミノ酸配列から成るペプチドを有
効成分とする抗スギ花粉症剤、（５３）配列番号１２の
アミノ酸配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ
花粉症剤、（５４）配列番号１２のアミノ酸配列を含む
ことから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（５５）配列番号１３のアミノ酸配列から成るペプ
チドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、

【００１８】（５６）配列番号１４のアミノ酸配列から
成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（５
７）配列番号１４のアミノ酸配列を含むことから成るペ
プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（５８）配列
番号１５のアミノ酸配列から成るペプチドを有効成分と
する抗スギ花粉症剤、（５９）配列番号１６のアミノ酸
配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（６０）配列番号１７のアミノ酸配列から成るペプ
チドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、

【００１９】（６１）配列番号１７のアミノ酸配列を含
むことから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（６２）配列番号１８のアミノ酸配列から成るペプ
チドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（６３）配列番
号１９のアミノ酸配列から成るペプチドを有効成分とす
る抗スギ花粉症剤、（６４）配列番号１９のアミノ酸配
列を含むことから成るペプチドを有効成分とする抗スギ
花粉症剤、（６５）配列番号２０のアミノ酸配列から成
るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、

【００２０】（６６）配列番号２０のアミノ酸配列を含
むことから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症
剤、（６７）配列番号２１のアミノ酸配列から成るペプ
チドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（６８）配列番
号２１のアミノ酸配列を含むことから成るペプチドを有
効成分とする抗スギ花粉症剤、（６９）配列番号２２の
アミノ酸配列から成るペプチドを有効成分とする抗スギ
花粉症剤、（７０）配列番号２３のアミノ酸配列から成
るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（７１）
配列番号２３のアミノ酸配列を含むことから成るペプチ
ドを有効成分とする抗スギ花粉症剤、（７２）配列番号
２４のアミノ酸配列から成るペプチドを有効成分とする
抗スギ花粉症剤、に関する。

【００２１】以下、本発明を詳しく説明する。本発明に
おける好ましいペプチドの例は表１の通りである。

【００２２】

【表１】 ─────────────────────────────────── (1) Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser(ペプチド１） (2) Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser(ペプチド２） (3) Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser(ペプチド３） (4) Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly(ペプチド４） (5) Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met (ペプチド５） (6) Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu (ペプチド６） (7) His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln(ペプチド７） (8) Arg-Ala-Glu-Val-Ser-Tyr-Val-His-Val-Asn-Gly-Ala-Lys-Phe(ペプチド８） (9) Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser (ペプチド９） (10)Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser-Trp （ペプチド１０） (11)Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu （ペプチド１１） (12)Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu （ペプチド１２） (13)Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met （ペプチド１３） (14)Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu （ペプチド１４） (15)Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met （ペプチド１５） (16)Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly （ペプチド１６） (17)Ile-Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn （ペプチド１７） (18)Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn-Thr （ペプチド１８） (19)Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn （ペプチド１９） (20)Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu （ペプチド２０） (21)Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu （ペプチド２１） (22)Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn （ペプチド２２） (23)Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn （ペプチド２３） (24)Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn-Asp （ペプチド２４） ───────────────────────────────────

【００２３】なお、上記のペプチド１は、配列表の配列
番号１のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプ
チド２は、配列表の配列番号２のアミノ酸配列で示され
るペプチド、上記のペプチド３は、配列表の配列番号３
のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチド４
は、配列表の配列番号４のアミノ酸配列で示されるペプ
チド、上記のペプチド５は、配列表の配列番号５のアミ
ノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチド６は、配
列表の配列番号６のアミノ酸配列で示されるペプチド、
上記のペプチド７は、配列表の配列番号７のアミノ酸配
列で示されるペプチド、上記のペプチド８は、配列表の
配列番号８のアミノ酸配列で示されるペプチド、

【００２４】上記のペプチド９は、配列表の配列番号９
のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチド１
０は、配列表の配列番号１０のアミノ酸配列で示される
ペプチド、上記のペプチド１１は、配列表の配列番号１
１のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチド
１２は、配列表の配列番号１２のアミノ酸配列で示され
るペプチド、上記のペプチド１３は、配列表の配列番号
１３のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチ
ド１４は、配列表の配列番号１４のアミノ酸配列で示さ
れるペプチド、上記のペプチド１５は、配列表の配列番
号１５のアミノ酸配列で示されるペプチド、

【００２５】上記のペプチド１６は、配列表の配列番号
１６のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプチ
ド１７は、配列表の配列番号１７のアミノ酸配列で示さ
れるペプチド、上記のペプチド１８は、配列表の配列番
号１８のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペプ
チド１９は、配列表の配列番号１９のアミノ酸配列で示
されるペプチド、上記のペプチド２０は、配列表の配列
番号２０のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記のペ
プチド２１は、配列表の配列番号２１のアミノ酸配列で
示されるペプチド、上記のペプチド２２は、配列表の配
列番号２２のアミノ酸配列で示されるペプチド、上記の
ペプチド２３は、配列表の配列番号２３のアミノ酸配列
で示されるペプチド、上記のペプチド２４は、配列表の
配列番号２４のアミノ酸配列で示されるペプチド、をそ
れぞれ表す。

【００２６】上記（１）乃至（３６）に記載のペプチド
は、「固相法」又は「液相法」として知られる斯界にお
いて慣用のペプチド合成法により、容易に調製すること
ができる。例えば、社団法人日本生化学会編『新生化学
実験講座』、第１巻、「タンパク質ＶＩ」、第３〜４４
頁、１９９２年、東京化学同人発行などにはペプチド合
成の詳細が記載されている。また、該ペプチドは、マル
チペプチドシンセサイザー SYMPHONY （プロティンテク
ノロジー社製）を用い、Fmoc (9-fluorenyl methyloxyc
arbonyl) 固相合成法にて同装置のプロトコールに従っ
て合成することができる。すなわち、合成する各ペプチ
ドのＣ末端に相当するアミノ酸が導入されている Fmoc-
L-アミノ酸 Wang 樹脂を上記ペプチド合成装置の反応容
器にセットし、デプロテクション溶液を用いて Fmoc を
除く。さらにＣ末端から２番目のアミノ酸に相当するア
ミノ酸溶液とアクチベーター溶液を反応せしめ、反応後
再び Fmoc 基のデプロテクションを行い、同様の操作を
繰り返すことにより、目的とするペプチドを合成するこ
とができる。

【００２７】本発明のペプチドは化学合成により調製さ
れたものに限定されず、例えば、スギの花粉又は雄花か
ら採取するか、組換えＤＮＡ技術により調製したスギ花
粉アレルゲンを適宜分解し、分解物から採取したもので
あってもよく、例えば、上記（１）乃至（３６）に記載
されたペプチドをコードするＤＮＡを調製し、これを自
律複製可能なベクターに挿入して組換えＤＮＡとし、こ
れを大腸菌、枯草菌、放線菌、酵母などの適宜宿主に導
入して形質転換体とし、その培養物からこの発明のペプ
チドを採取してもよい。

【００２８】さらに、この発明のペプチドは、斯くして
得られるペプチドに糖質やポリエチレングリコールを付
加して得られる複合体としての形態、さらには、ペプチ
ドをアセチル化、アミド化及び／又は多官能試験により
架橋重合させて得られる誘導体又は重合体としての形態
であってもよい。

【００２９】この発明のペプチドは、比較的粗な形態で
投与しても所期の治療・予防効果を発揮するが、通常は
使用に先立って精製される。精製には、例えば、濾過、
濃縮、遠心分離、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル電気泳
動、等電点電気泳動などのペプチド乃至蛋白質を精製す
るための斯界における慣用の方法が用いられ、必要に応
じて、これら方法を適宜組合せればよい。そして、最終
使用形態に応じて、精製したペプチドを濃縮、凍結乾燥
して液状又は固状にすればよい。

【００３０】本発明のペプチドがＴ細胞エピトープとし
ての活性を有することは、スギ花粉アレルゲンに特異的
なＴ細胞の ³Ｈ−チミジンの取込みを計測することによ
り確認することができる。この計測には、例えば以下の
方法を用いることができる。すなわち、フィコール・ハ
イパック比重遠心法等により花粉症患者の末梢血または
Ｃｒｙｊ２で免疫したマウス等の実験動物からＣｒｙｊ
２に特異的なＴ細胞を含む単核細胞群を分離し、この細
胞群をRPMI 1640 等の培地に浮遊させ、９６ウェルマイ
クロプレート上に分注する。次に被検物質であるペプチ
ドを加えインキュベートする。このインキュベートの温
度・時間は各実験毎に適宜調整することができるが、３
７℃、２日間が好適である。その後 ³Ｈ−チミジンを培
地に加え、さらに一定時間インキュベーションを続け、
単核細胞群における ³Ｈ−チミジンの取り込み量を測定
することにより、本発明のペプチドのＴ細胞エピトープ
としての活性を算定することができる。なお、本発明で
は、同時にペプチドを含まない系を設けてこれを陰性対
照とし、 ³Ｈ−チミジンの取り込み量が陰性対照の２倍
以上に達した系を「陽性」、達しなかった系を「陰性」
とした。

【００３１】スギ花粉アレルゲンに特異的なＴ細胞の ³
Ｈ−チミジンの取込みの計測は、以下の方法によっても
行うことができる。予めマウス等の実験動物をＣｒｙｊ
２で免疫し、その後顎下リンパ節等よりリンパ球を採取
する。その後、上記と同様の方法により被検体であるペ
プチドで刺激し、 ³Ｈ−チミジンの取り込み量を測定す
ることにより、本発明のペプチドのＴ細胞エピトープと
しての活性を算定することができる。ペプチドの「陽
性」及び「陰性」の判定は、上記と同様の基準で行っ
た。

【００３２】本発明のペプチドが花粉症患者に予防効果
を有することは、例えば以下の実験により確認すること
ができる。予めマウス等の実験動物に対し本発明のペプ
チドを投与し、該ペプチドに対する免疫寛容を誘導して
おく。一定期間経過後に当該実験動物にＣｒｙｊ２をコ
レラ毒素等のアジュバントとともに投与し免疫する。さ
らに、一定期間経過後に当該実験動物より顎下リンパ節
細胞を摘出し細胞懸濁液を調製する。

【００３３】また、これとは別の無処理の実験動物より
脾臓を抽出し脾臓細胞懸濁液を調製して、これにＸ線を
照射し細胞増殖活性を消失させこれを抗原提示細胞含有
懸濁液とする。このものを先の顎下リンパ節細胞懸濁液
と混合し、これにＣｒｙｊ２を添加して培養を継続し、
さらに ³Ｈ−チミジンを添加して、このものの取り込み
を測定し、Ｔ細胞の増殖を測定することができる。

【００３４】予め本発明のペプチドで免疫寛容を誘導し
ていない動物では、Ｃｒｙｊ２による免疫化によりその
Ｔ細胞が抗原提示細胞に結合したＣｒｙｊ２に反応し増
殖する。一方、予め本発明のペプチドで免疫寛容を誘導
した動物では、その後Ｃｒｙｊ２による免疫を行っても
Ｔ細胞が抗原提示細胞に結合したＣｒｙｊ２に反応せず
増殖しない。その差を測定することにより、本発明のペ
プチドの花粉症に対する予防効果を確認することができ
る。

【００３５】さらに、上述の免疫動物の顎下リンパ節細
胞懸濁液と抗原提示細胞含有懸濁液の混合液にＣｒｙｊ
２を添加して培養を継続した場合に培養液中にインター
ロイキン４等のサイトカインが分泌されるが、本発明の
ペプチドを前投与し免疫寛容誘導を行った実験動物と前
投与しなかった実験動物とで、このサイトカインの分泌
量を比較することによっても、本発明のペプチドの花粉
症に対する予防効果を確認することができる。

【００３６】本発明のペプチドが花粉症患者に治療効果
を有することは、例えば以下の実験により確認すること
ができる。予めマウス等の実験動物に対し、Ｃｒｙｊ２
をコレラ毒素のアジュバンドとともに投与し免疫する。
一定期間経過後に当該実験動物にＣｒｙｊ２をコレラ毒
素のアジュバンドとともに投与し追加免疫する。さら
に、一定期間経過後に当該実験動物より顎下リンパ節細
胞を摘出し細胞懸濁液を調製した後、上記と同様の方法
によりＴ細胞の増殖を測定する。

【００３７】本発明のペプチドで治療を施していない動
物では、Ｃｒｙｊ２による免疫によりそのＴ細胞が抗原
提示細胞に結合したＣｒｙｊ２に反応し増殖する。一
方、本発明のペプチドで治療した動物では、その後Ｃｒ
ｙｊ２による免疫を行ってもＴ細胞が抗原提示細胞に結
合したＣｒｙｊ２に反応せず増殖しない。その差を測定
することにより、本発明のペプチドの花粉症に対する治
療効果を確認することができる。

【００３８】

【作 用】本発明のペプチドは、スギ花粉アレルゲンに
特異的なイムノグロブリンＥ抗体に実質的に反応しない
ので、ヒトを含む哺乳類一般に投与すると、実質的にア
ナフィラキシーを引起こすことなく、スギ花粉アレルゲ
ンに特異的なＴ細胞を活性化することができる。有効成
分としてかかるペプチドを含んでなる本発明の抗スギ花
粉症剤は、ヒトを含む哺乳類一般に投与すると、実質的
にアナフィラキシーを引起こすことなくスギ花粉症に対
して顕著な治療・予防効果を発揮する。

【００３９】有効成分としてこの発明のペプチドを含ん
でなる抗スギ花粉症剤は、スギ花粉症に罹患してヒトを
含む哺乳類一般に投与すると、アナフィラキシーなどの
副作用を実質的に引起こすことなく、スギ花粉症を治療
することができる。一方、この発明の抗スギ花粉症例
を、スギ花粉が飛散し始める前に健常な個体や潜在的な
スギ花粉症の個体に投与するときには、スギ花粉症に対
して顕著な予防効果を発揮するとともに、発症時のアレ
ルギー症状の緩解に著効を発揮する。

【００４０】この発明の抗スギ花粉症剤につきさらに詳
しく説明すると、この発明の抗スギ花粉症剤は、通常、
この発明によるペプチドの１種又は２種以上を0.０１乃
至１００％(w/w) 、望ましくは、0.０５乃至５０％(w/
v) 、さらに望ましくは、0.５乃至5.０％(w/w) 含んで
なる。この発明の抗スギ花粉症剤は、当該ペプチド単独
の形態はもとより、その以外の生理的に許容される、例
えば、血清アルブミン、ゼラチン、マンニトールなどの
担体、賦形剤、免疫助成剤、安定剤、さらには、必要に
応じて、ステロイドホルモンやクリモグリク酸ナトリウ
ムなどの抗炎症剤や抗ヒスタミン剤を含む１種又は２種
以上の他の薬剤との組成物としての形態を包含する。さ
らに、この発明の抗スギ花粉症剤は、投薬単位形態の薬
剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤とは、この発明
のポリペプチドを、例えば、１日当たりの用量又はその
整数倍（４倍まで）又はその約数（１／４０まで）に相
当する量を含有し、投与に適する物理的に分離した一体
の剤形にある薬剤を意味する。このような投薬単位形態
の薬剤としては、散剤、細粒剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、
カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、軟鋼剤、
硬膏剤、パップ剤、坐剤、点眼剤、点鼻剤、噴霧剤、注
射剤などが挙げられる。

【００４１】この発明の抗スギ花粉症剤の使用方法につ
いて説明すると、この発明の抗スギ花粉症剤は、スギ花
粉症の治療・予防を目的に、ヒトを含む哺乳類一般に経
皮、経口、点鼻、点眼又は注射投与される。ヒトにおけ
る投与量は、投与の目的や症状に依っても変わるが、通
常、対象者の症状や投与後の経過を観察しながら、成人
１日当たり0.０１乃至1.０g 、望ましくは、0.０１乃至
0.１g を目安に、毎週１回乃至毎月１回の頻度で、約１
乃至６カ月間、通常、用量を増やしながら反復投与され
る。

【００４２】本発明のポリペプチドの急性毒性 常法により、生後２０日のマウスに後述の製剤例１乃至
４の方法により得た免疫治療剤を経口又は腹腔内投与し
た。その結果、これら免疫療法剤は、いずれの投与経路
によって２００mg/kg 以上のLD₅₀であることが判明し
た。このことは、この発明のペプチドが、ヒトを含むほ
乳類に対する免疫療法剤に安全に配合使用し得ることを
示している。

【００４３】試験例１．スギ花粉症患者より単離したＴ
細胞を用い、本発明のペプチド１乃至ペプチド６、及び
ペプチド９乃至ペプチド２４がスギ花粉抗原Ｔ細胞エピ
トープ活性を有することを確認した。皮膚テストにおい
て、スギ花粉アレルゲンに対し陽性を示し、かつ、抗ス
ギ花粉アレルゲン IgE 反応に陽性を示す患者から２０m
lの末梢血を採取した。遠心分離後、バフィーコートを
得て、更にフィコール・パック比重遠心法により、末梢
血単核球（Peripheral Blood Mononuelear Cells：ＰＢ
ＭＣ）を採取した。このＰＢＭＣを培地（RPMI-1640 、
５％の熱不活性化ヒトＡＢ型血清を含む。）に、7.５×
１０⁵ 細胞／mlになるように懸濁した。

【００４４】９６ウェルの丸底プレートにおいて、1.５
×１０⁵ の細胞を、各ウェル２００μl の培地中で２０
ngのペプチドと３７℃５％CO₂ 存在下で４８時間培養し
た。その後、１μCiのトリチウム化チミジンを加え、さ
らに１６時間培養した。細胞に取り込まれたカウントを
測定するため、セルハーベスターを用いて細胞をガラス
繊維フィルター上に集め、液体シンチレーションカウン
ターで測定した。この結果を以下の表２に示す。

【００４５】

【表２】 ──────────────────────────────── ペプチド Ｔ細胞エピトープ活性 ──────────────────────────────── ペプチド１ 陽 性 ペプチド２ 陽 性 ペプチド３ 陽 性 ペプチド４ 陽 性 ペプチド５ 陽 性 ペプチド６ 陽 性 ペプチド９ 陽 性 ペプチド１０ 陽 性 ペプチド１１ 陽 性 ペプチド１２ 陽 性 ペプチド１３ 陽 性 ペプチド１４ 陽 性 ペプチド１５ 陽 性 ペプチド１６ 陽 性 ペプチド１７ 陽 性 ペプチド１８ 陽 性 ペプチド１９ 陽 性 ペプチド２０ 陽 性 ペプチド２１ 陽 性 ペプチド２２ 陽 性 ペプチド２３ 陽 性 ペプチド２４ 陽 性 ──────────────────────────────── 以上の結果より、これらのペプチドは、Ｃｒｙｊ２アレ
ルゲンのＴ細胞エピトープを含有していることが示され
た。

【００４６】試験例２．Ｃｒｙｊ２を文献記載の方法
（Allergy, 1990, 45, 309-312) で精製した。精製した
Ｃｒｙｊ２ １μg とコレラ毒素Ｂサブユニット１μg
（コレラ毒素0.５％含有）を0.01M リン酸緩衝液（pH
7.4) に溶解させた抗原溶液を、アバチン麻酔下の Balb
/c マウス（５〜６週齢：チャールズリバージャパン
社）に点鼻投与し免疫した。その２週間後、再び同様の
方法により同マウスを追加免疫した。その１週間後、マ
ウスの顎下リンパ節細胞を摘出した。これをナイロンメ
ッシュに通し、さらに培地（RPMI 1640 10％子牛胎児血
清含有）に懸濁して懸濁液を調製した。

【００４７】また、Ｃｒｙｊ２で免疫化していないマウ
スより脾臓細胞を摘出し、上記と同様の方法でリンパ節
細胞懸濁液を調製した。この懸濁液に3000 RadのＸ線を
照射して細胞の増殖活性を消失させ、抗原提示細胞懸濁
液として用いた。平底９６ウェルプレート（コーニング
社）に、１ウェル当たりリンパ節細胞３×１０⁶ 、抗原
提示細胞６×１０⁵ となるように分注し、ペプチド７又
はペプチド８の存在下（0.５μg/ml）、あるいはこれら
ペプチドの非存在下で、３７℃、５％CO₂ の条件下３日
間培養した。

【００４８】最後の１６時間は、 ³H-Thymidine 存在下
で培養し、この間に細胞核内ＤＮＡに取り込まれた ³H-
Thymidine 量を、ガラスフィルターに吸着したＤＮＡの
放射線量を液体シンチレーション法により測定すること
により算定した。ペプチド存在下での ³H-Thymidine 取
り込み量を、ペプチド非存在下での取り込み量で割った
値を反応倍率として、これを細胞増殖活性の指標とし
た。

【００４９】リンパ節細胞は、ペプチド７に対しては３
倍程度、ペプチド８に対しては５倍程度増殖率が増大し
た。従って、これらのペプチドは、Ｃｒｙｊ２アレルゲ
ンのＴ細胞エピトープを含有していることが示された。

【００５０】試験例３．ペプチド７又は８について、 B
alb/c マウスに対して免疫寛容を誘導した。すなわち、
リン酸緩衝液（0.01M (pH 7.4)) に溶解させた各ペプチ
ド溶液について、マウス尾静脈に一匹当たり２０μg の
ペプチド量となるように静脈投与を行った。または、同
ペプチド溶液を、１匹１回当たり１mgのペプチド量とな
るように経口投与を行い、この経口投与を２週間に４回
繰り返した。その後、当該マウスについて、試験例２と
同様の方法で、Ｃｒｙｊ２による免疫を行った。

【００５１】試験例２と同様の方法で該マウスより顎下
リンパ節細胞を摘出して顎下リンパ節細胞懸濁液とし、
また、ペプチドによる寛容化とＣｒｙｊ２による免疫誘
導を行っていない別個のマウスより脾臓を摘出してＸ線
により増殖活性を消失させ抗原提示細胞懸濁液として、
これらをＣｒｙｊ２の存在（１μg/ml）下で共培養し
て、試験例２と同様の方法で ³H-Thymidine 取り込み量
を測定し細胞増殖活性を算定した。

【００５２】また、リンパ節細胞及び抗原提示細胞の懸
濁液を調製培地により調製した。１ウェル当たりリンパ
節細胞1.５×１０⁶ 、抗原提示細胞３×１０⁶ となるよ
うに、２４ウェルプレート（コーニング）に分注し、こ
れらの細胞をＣｒｙｊ２（１μg/ml）と共に３７℃、５
％CO₂ の条件下で３日間培養した。培養終了後、培養上
清液を採取し、測定に用いるまで２０℃で凍結保存し
た。培養液中に含まれるインターロイキン４の量を市販
の測定キット（Endogen 社）にて測定した。

【００５３】（１）ペプチド７の静脈投与による免疫寛
容の誘導 マウス尾静脈にペプチド７の溶液を投与した。対照群の
マウスには、リン酸緩衝液（0.01M (pH 7.4)) のみを静
脈投与した。その後、上記の方法に従って、両群のマウ
スをＣｒｙｊ２で経鼻的に免疫した。その後、当該マウ
スより摘出した顎下リンパ節細胞及び他のマウスより摘
出した抗原提示細胞をＣｒｙｊ２と共に培養すると、あ
らかじめペプチド７を投与したマウスからのリンパ節細
胞の増殖活性は、対照群に比較して29.5％低下してい
た。これによりペプチド７には、スギアレルゲンに対す
る免疫応答を抑制する活性があることが明らかとなっ
た。

【００５４】（２）ペプチド７の経口投与による免疫寛
容の誘導 マウスにＴ細胞ペプチド７の溶液を２週間の間に４回、
上記の方法に従い経口投与した。対照群のマウスには、
リン酸緩衝液（0.01M (pH 7.4)) のみを経口投与した。
その後、両群のマウスをＣｒｙｊ２で経鼻的に免疫し
た。その後、当該マウスより摘出した顎下リンパ節細胞
及び他のマウスより摘出した抗原提示細胞をＣｒｙｊ２
と共に３日間培養し、その培養上清中のサイトカイン量
を測定した。その結果、あらかじめペプチド７を投与し
たマウスからのリンパ節細胞から産生されるインターロ
イキン４の量は、対照群に比較して49.8％低下してい
た。これによりペプチド７を経口的に投与することによ
り、スギアレルゲンに対する免疫応答を抑制することが
示された。

【００５５】（３）ペプチド８の静脈投与による免疫寛
容の誘導 マウス尾静脈にペプチド８の溶液を投与した。対照群の
マウスには、リン酸緩衝液（0.01M (pH 7.4)) のみを静
脈投与した。その後、上記の方法に従って、両群のマウ
スをＣｒｙｊ２で経鼻的に免疫した。その後、当該マウ
スより摘出した顎下リンパ節細胞及び他のマウスより摘
出した抗原提示細胞をＣｒｙｊ２と共に培養すると、あ
らかじめペプチド８を投与したマウスからのリンパ節細
胞の増殖活性は、対照群に比較して30.9％低下してい
た。これによりペプチド８には、スギアレルゲンに対す
る免疫応答を抑制する活性があることが明らかとなっ
た。

【００５６】（４）ペプチド８の経口投与による免疫寛
容の誘導 マウスにＴ細胞ペプチド８の溶液を２週間の間に４回、
上記の方法に従い経口投与した。対照群のマウスには、
リン酸緩衝液（0.01M (pH 7.4)) のみを経口投与した。
その後、両群のマウスをＣｒｙｊ２で経鼻的に免疫し
た。その後、当該マウスより摘出した顎下リンパ節細胞
及び他のマウスより摘出した抗原提示細胞をＣｒｙｊ２
と共に培養すると、あらかじめペプチド８を投与したマ
ウスからのリンパ節細胞の増殖活性は、対照群に比較し
て73.1％低下していた。これによりペプチド８には、ス
ギアレルゲンに対する免疫応答を抑制する活性があるこ
とが明らかとなった。

【００５７】試験例４ ペプチド８について、Balb/cマウスに対して、治療を施
した。すなわち、精製したＣｒｙｊ２ １μｇとコレラ
毒素Ｂサブユニット１μｇ（コレラ毒素０．５％含有）
を0.01Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解させた抗原
溶液を、アバチン麻酔下の２群のBalb/cマウス（５〜６
週齢：チャールズリバージャパン社）に点鼻投与し免疫
した。一週間後より、実験群のマウスに対して、0.01Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解させたペプチド８の
溶液を、一匹について一回あたり200 μｇのペプチド量
となるように経口投与し、この経口投与を２週間の間に
４回繰り返した。対照群のマウスには、0.01Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．４）のみを同様に投与した。４回目の経
口投与から４日後に、両群のマウスに再度Ｃｒｙｊ２で
経鼻的に免疫した。一週間後、試験例３と同様の方法に
より当該マウスより摘出した顎下リンパ節細胞と他のマ
ウスより摘出した抗原提示細胞とをＣｒｙｊ２と共に培
養すると、実験群マウス由来のリンパ節細胞の増殖は、
対照群に比較して46.0％低下していた。この結果より、
ペプチド８は、スキアレルゲンで免疫された後のマウス
に投与した場合にも、スキアレルゲンに対する免疫応答
を抑制する活性を有することが明らかとなった。

【００５８】以上のように、本発明のペプチドは、ヒト
を含む哺乳類一般に投与すると、実質的にアナフィラキ
シーを引起こすことなく、スギ花粉アレルゲンに特異的
なＴ細胞を活性化することができる。有効成分として斯
かるペプチドを含んでなる本発明の抗スギ花粉症剤は、
ヒトを含む哺乳類一般に投与すると、実質的にアナフィ
ラキシーを引起こすことなくスギ花粉症に対して顕著な
治療・予防効果を発揮する。

【００５９】有効成分としてこの発明のペプチドを含ん
でなる抗スギ花粉症剤は、スギ花粉症に罹患してヒトを
含む哺乳類一般に投与すると、アナフィラキシーなどの
副作用を実質的に引起こすことなく、スギ花粉症を治療
することができる。一方、この発明の抗スギ花粉症剤
を、スギ花粉が飛散し始める前に健常な個体や潜在的な
スギ花粉症の個体に投与するときには、スギ花粉症に対
して顕著な予防効果を発揮するとともに、発症時のアレ
ルギー症状の緩解に著効を発揮する。

【００６０】

【発明の実施の形態】以下、実施例、製剤例により本発
明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによりそ
の技術的範囲が限定されるものではない。 実施例１ ペプチド１： Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Al
a-Ser 樹脂に固定したアミノ酸誘導体に１個ずつアミノ酸をカ
ルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成
法）でペプチドを化学合成した。各サイクルで使用する
アミノ酸はαアミノ基及び残基部分の反応基が保護基で
ブロックされた特殊なアミノ酸誘導体を用いた。ここ
で、それぞれのαアミノ基が Fmoc (9-fluorenyl methy
loxycarbonyl) によりブロックされているアミノ酸を用
いた（Fmoc法）。また、ペプチド合成は樹脂に結合した
アミノ酸のαアミノ基の Fmoc を脱保護し、次にカルボ
キシル基が活性化したアミノ酸誘導体を結合させるとい
う反応を順次繰り返して行った。

【００６１】実験に用いる各ペプチドは、マルチペプチ
ドシンセサイザー SYMPHONY (Protein Technologies, I
nc.)を用い上記の Fmoc 固相合成法にて同装置のプロト
コールに従って合成した。すなわち、合成するペプチド
のＣ末端残基に相当するアミノ酸（Ser）が導入されて
いる Fmoc-Ser(tBu)-Wang-樹脂（0.52mmol/g) の２５μ
mol 相当を上記ペプチド合成装置の反応容器にセット
し、デプロテクション溶液（20％ piperidine / Dimeth
yl formamide (DMF)) 1.25mlを５分間２回反応させ、樹
脂に結合しているアミノ酸の Fmoc 基を除いた。DMF 液
1.25mlで３０秒間６回洗浄後、Ｃ末側から２番目のアミ
ノ酸に相当する２００mMの Fmoc-Ala/DMF 溶液1.25mlと
２００mMのアクチベータ溶液(200mM O-Benzotriazole-
N,N,',N',-Tetramethyl-Uronium-Hexafluoro phosphate
／400mM N-methylmorpholine／DMF ）1.25mlを加え
（それぞれ理論等量の10倍：250μmol 相当）、２０分
間室温で反応させた。ここで生成した Fmoc-Ala-Ser(tB
u)-Wang-樹脂をDMF 1.25mlにて３０秒間６回洗浄後、再
び Fmoc 基のデプロテクションを用い、DMF 1.25mlにて
３０秒間６回洗浄後、Fmoc-Pro 溶液とアクチベーター
溶液を加え反応させた。同様の操作を繰り返すことによ
り、目的とするペプチド (Fmoc-Lys(Boc)-Val-Asp(OtB
u)-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-
Pro-Ala-Ser(tBu)-Wang- 樹脂) を合成した。

【００６２】ここで合成に使用したアミノ酸は以下のと
おりである（日清紡（株）製）。( ) 内は残基部分の
反応基を保護する保護基を表す。 Fmoc-Ala, Fmoc-Pro, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Ile, Fmoc-Gly, Fmoc-Asp(OtBu), Fmoc-Val, Fmoc-Lys(Boc), ペプチド合成装置 SYMPHONY を用い、装置内でクリべー
ジ反応を行った。

【００６３】まず、上記ように合成し得られた保護ペプ
チド樹脂（Fmoc-Lys(Boc)-Val-Asp(OtBu)-Gly-Ile-Ile-
Ala-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Ser(tB
u)-Wang- 樹脂）に、デプロテクション液1.25mlを５分
間２回反応させてＮ末端Fmoc基を脱保護した。次に1.25
mlのDMF にて３０秒間６回洗浄後、CH₂Cl₂ にて同様に
洗浄し、 N₂を吹き付け１０分間乾燥後、クリべージ溶
液（Trifluoroacetic acid：Phenol：水：Tioanisole：
Ethanedithiol ＝82.5：５：５：５：2.５) を2.５ml加
え室温で２時間反応させ（D.S.King, Int.J.Peptide Pr
otein Reg., 36, 255(1990))、樹脂からのペプチドの切
断およびアミノ酸側鎖保護基の除去を行い、ペプチド
（Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-
Ala-Ser）を得た。

【００６４】反応終了後、このペプチド溶液をフィルタ
ーを用いて濾過し、樹脂と濾液に分けた。さらに樹脂を
洗浄した液2.５mlと合わせ遠心管に回収した。回収した
ペプチド溶液を装置から取り出し、５mlの冷エーテルを
加え、ペプチドを沈澱させた。しばらく冷却後これを遠
心して（3000rpm 10分間）沈澱物を集め、再び冷エーテ
ルを加えて分散させては回収することを５〜６回繰り返
してペプチドを洗浄した。

【００６５】得られたペプチドを乾燥させ、粗ペプチド
を得た（50.5mg）。粗ペプチドは0.１％ TFAを含む１０
％アセトニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel
ODS-12OT, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、
0.１％ TFAを含む２１％アセトニトリルにて展開し（流
速９ml／分、検出波長 220nm) 、３１〜３５分に溶出さ
れた画分を分取し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とする
ペプチドを得た（15.9mg）。この合成したペプチド 50
pmolについて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津
製作所(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったと
ころ、上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００６６】実施例２ ペプチド２： Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Se
r 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Val-Asp(OtBu)
-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Pr
o-Ala-Ser(tBu)-Wang-樹脂）を合成し、クリべージ反応
を行いペプチド（Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gl
n-Asn-Pro-Ala-Ser）を得、このペプチド溶液を遠心管
に回収した。その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチド
を得た（55.5mg）。

【００６７】粗ペプチドは0.１％ TFAを含む１０％アセ
トニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel ODS-12
0T, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％
TFAを含む２２％アセトニトリルにて展開し（流速９ml
／分、検出波長 220nm) 、２６〜２９分に溶出された画
分を分取し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチ
ドを得た（7.1mg)。この合成したペプチド 50 pmolにつ
いて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所
(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、
上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００６８】実施例３ ペプチド３： Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Asp(OtBu)-Gly
-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Al
a-Ser(tBu)-Wang-樹脂）を合成し、クリべージ反応を行
いペプチド（Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pr
o-Ala-Ser）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し
た。その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た
（47.9mg）。

【００６９】粗ペプチドは0.１％ TFAを含む１０％アセ
トニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel ODS-12
0T, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％
TFAを含む２１％アセトニトリルにて展開し（流速９ml
／分、検出波長 220nm) 、２５〜２８分に溶出された画
分を分取し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチ
ドを得た（13.8mg) 。この合成したペプチド 50 pmolに
ついて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所
(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、
上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００７０】実施例４ ペプチド４： Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Me
t-Gly 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Trp-Leu-Gln-
(Trt)-Phe-Ala-Lys(Boe)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tB
u)-Leu-Met-Gly-Wang- 樹脂）を合成した。ただし、Ｃ
末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Gly-Wang- 樹脂（0.50mol
べージ/g）を２５μmol 相当用いた。合成に使用したア
ミノ酸は以下のとおりである。

【００７１】 Fmoc-Met, Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Phe, Fmoc-Gly, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Trp, 実施例１と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-M
et-Gly ）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、
その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た（63.3
mg）。

【００７２】粗ペプチドは0.１％ TFAを含む２０％アセ
トニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel ODS-12
0T, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％
TFAを含む３８％アセトニトリルにて展開し（流速９ml
／分、検出波長 220nm) 、２５〜３１分に溶出された画
分を分取し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチ
ドを得た（2.0mg)。この合成したペプチド 50 pmolにつ
いて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所
(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、
上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００７３】実施例５ ペプチド５： Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Me
t 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Trp-Leu-Gln-
(Trt)-Phe-Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tB
u)-Leu-Met-Wang- 樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端
アミノ酸樹脂には Fmoc-Met-Wang- 樹脂（0.75mmol/g）
を２５μmol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は実
施例４と同じである。実施例１と同様の操作でクリべー
ジ反応を行いペプチド(Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-T
hr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met- ）を得、このペプチド溶液を
遠心管に回収し、その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプ
チドを得た（29mg）。

【００７４】粗ペプチドは0.１％ TFAを含む２０％アセ
トニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel ODS-12
0T, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％
TFAを含む３６％アセトニトリルにて展開し（流速９ml
／分、検出波長 220nm) 、３２〜３４分に溶出された画
分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た
（1.1mg)。この合成したペプチド 50 pmolについて、ア
ミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を
用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示され
るアミノ酸配列が確認された。

【００７５】実施例６ ペプチド６： Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Trp-Leu-Gln(T
rt)-Phe-Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)
-Leu-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸
樹脂には Fmoc-Leu-Wang- 樹脂（0.69mmol/g）を２５μ
mol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は実施例４と
同じである。

【００７６】実施例１と同様の操作でクリべージ反応を
行いペプチド(Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-P
he-Thr-Leu ）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収
し、その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た
（35.6mg）。粗ペプチドは0.１％ TFAを含む２０％アセ
トニトリル水溶液に溶解後、ODS カラム(TSKgel ODS-12
0T, 21.5mm×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％
TFAを含む３８％アセトニトリルにて展開し、２６〜３
０分に溶出された画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的と
するペプチドを得た（6.3mg)。この合成したペプチド 5
0 pmolについて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島
津製作所(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行った
ところ、上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００７７】実施例７ ペプチド７： His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Ty
r-Gln 実施例１記載の Fmoc 法により、Milligen / Biosearch
社製 9050 ペプチド合成機を用い、粗ペプチド４００mg
を得た。粗ペプチドは0.１％ TFA水溶液に溶解後、μBO
NDASPHERE ５μ C18C120 Aカラム（19×150mm）に供与
し、0.１％ TFAを含む９０％アセトニトリル溶液にて展
開し（流速５ml／分、検出波長214nm)、２８〜２９分に
溶出された画分をエバポレート後、凍結乾燥を行い目的
とするペプチドを得た（36mg）。この合成したペプチド
50 pmolについて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型
(島津製作所(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行っ
たところ、上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００７８】実施例８ ペプチド８： Arg-Ala-Glu-Val-Ser-Tyr-Val-His-Val-Asn-Gly-Ala-Ly
s-Phe 実施例１記載の Fmoc 法により、Milligen / Biosearch
社製 9050 ペプチド合成機を用い、粗ペプチド５５０mg
を得た。粗ペプチドは0.１％ TFA水溶液に溶解後、μBO
NDASPHERE ５μ C18C120 Aカラム（19×150mm）に供与
し、0.１％ TFAを含む９０％アセトニトリル溶液にて展
開し（流速５ml／分、検出波長214nm)、２６〜２７分に
溶出された画分をエバポレート後、凍結乾燥を行い目的
とするペプチドを得た（60mg）。この合成したペプチド
50 pmolについて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型
(島津製作所(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行っ
たところ、上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００７９】実施例９ ペプチド９： Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser 樹脂に固定したアミノ酸誘導体に１個ずつアミノ酸をカ
ルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成
法）でペプチドを化学合成した。各サイクルで使用する
アミノ酸はαアミノ基及び残基部分の反応基が保護基で
ブロックされた特殊なアミノ酸誘導体を用いた。ここ
で、それぞれのαアミノ基が Fmoc (9-fluorenyl methy
loxycarbonyl) によりブロックされているアミノ酸を用
いた（Fmoc法）。また、ペプチド合成は樹脂に結合した
アミノ酸のαアミノ基の Fmoc を脱保護し、次にカルボ
キシル基が活性化したアミノ酸誘導体を結合させるとい
う反応を順次繰り返して行った。

【００８０】実験に用いる各ペプチドは、マルチペプチ
ドシンセサイザー SYMPHONY (Protein Technologies, I
nc.)を用い上記の Fmoc 固相合成法にて同装置のプロト
コールに従って合成した。すなわち、合成するペプチド
のＣ末端残基に相当するアミノ酸（Ser）が導入されて
いる Fmoc-Ser(tBu)-Wang-樹脂（0.52mmol/g) の２５μ
mol 相当を上記ペプチド合成装置の反応容器にセット
し、デプロテクション溶液（20％ piperidine / Dimeth
yl formamide (DMF)) 1.25mlを５分間２回反応させ、樹
脂に結合しているアミノ酸の Fmoc 基を除いた。DMF 液
1.25mlで３０秒間６回洗浄後、Ｃ末側から２番目のアミ
ノ酸に相当する２００mMの Fmoc-Ala/DMF 溶液1.25mlと
２００mMのアクチベータ溶液(200mM O-Benzotriazole-
N,N,',N',-Tetramethyl-Uronium-Hexafluoro phosphate
／400mM N-methylmorpholine／DMF ）1.25mlを加え
（それぞれ理論等量の10倍：250μmol 相当）、２０分
間室温で反応させた。ここで生成した Fmoc-Ala-Ser(tB
u)-Wang-樹脂をDMF 1.25mlにて３０秒間６回洗浄後、再
び Fmoc 基のデプロテクションを用い、DMF 1.25mlにて
３０秒間６回洗浄後、Fmoc-Pro 溶液とアクチベーター
溶液を加え反応させた。同様の操作を繰り返すことによ
り、目的とするペプチド (Fmoc-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-T
yr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Ser(tBu)-Wang-樹
脂) を合成した。

【００８１】ここで合成に使用したアミノ酸は以下のと
おりである（日清紡（株）製）。( ) 内は残基部分の
反応基を保護する保護基を表す。 Fmoc-Ala, Fmoc-Pro, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Ile, Fmoc-Gly, ペプチド合成装置 SYMPHONY を用い、装置内でクリべー
ジ反応を行った。

【００８２】まず、上記ように合成し得られた保護ペプ
チド樹脂（Fmoc-Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Tr
t)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Ser(tBu)- Wang- 樹脂）に、デプ
ロテクション液1.25mlを５分間２回反応させてＮ末端Fm
oc基を脱保護した。次に1.25mlのDMF にて３０秒間６回
洗浄後、CH₂Cl₂ にて同様に洗浄し、 N₂を吹き付け１０
分間乾燥後、クリべージ溶液（Trifluoroacetic acid：
Phenol：水：Tioanisole：Ethanedithiol ＝82.5：５：
５：５：2.５) を2.５ml加え室温で２時間反応させ（D.
S.King, Int.J.Peptide Protein Reg., 36, 255(199
0))、樹脂からのペプチドの切断およびアミノ酸側鎖保
護基の除去を行い、ペプチド（Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Ty
r-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser）を得た。

【００８３】反応終了後、このペプチド溶液をフィルタ
ーを用いて濾過し、樹脂と濾液に分けた。さらに樹脂を
洗浄した液2.５mlと合わせ遠心管に回収した。回収した
ペプチド溶液を装置から取り出し、５mlの冷エーテルを
加え、ペプチドを沈澱させた。しばらく冷却後これを遠
心して（3000rpm 10分間）沈澱物を集め、再び冷エーテ
ルを加えて分散させては回収することを５〜６回繰り返
してペプチドを洗浄した。

【００８４】得られたペプチドを乾燥させ、粗ペプチド
を得た。得られた粗ペプチドのうち11mgを２mlの0.１％
TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解後、３回
に分けてODS カラム(TSKgel ODS-12OT, 7.8mm×30cm：
東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む２１％ア
セトニトリルにて展開し（流速２ml／分、検出波長 220
nm) 、９．２〜１１分に溶出された画分を分取し、濃縮
後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た（５mg
）。この合成したペプチド 50 pmolについて、アミノ
酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を用い
てアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示されるア
ミノ酸配列が確認された。

【００８５】実施例１０ ペプチド１０： Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser-Trp 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Gly-Ile-Ile-A
la-Ala-Tyr(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Ser(tBu)
-Trp-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸
樹脂には Fmoc-Trp-Wang- 樹脂（0.66mmol/g）を２５μ
mol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は以下のとお
りである。

【００８６】 Fmoc-Ala, Fmoc-Pro, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Ile, Fmoc-Gly, Fmoc-Ser(tBu) 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Gly-Ile-Ile-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser-Trp）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【００８７】得られた粗ペプチドのうち９mgを４mlの0.
１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む２３
％アセトニトリルにて展開し、３２〜３８分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（2.5mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【００８８】実施例１１ ペプチド１１： Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Le
u 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Ile-Trp-Leu-G
ln(Trt)-Phe-Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr
(tBu)-Leu-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端ア
ミノ酸樹脂には Fmoc-Leu-Wang- 樹脂（0.69mmol/g）を
２５μmol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は以下
のとおりである。

【００８９】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Phe, Fmoc-Gly, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Trp, Fmoc-Ile, 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-L
eu）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その
後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【００９０】得られた粗ペプチドのうち７mgを４mlの0.
１％ TFAを含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
３回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む３７
％アセトニトリルにて展開し（流速２ml／分、検出波長
220nm) 、１７〜２０分に溶出された画分を分取し、濃
縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た ( 0.7
mg) 。この合成したペプチド 50 pmolについて、アミノ
酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を用い
てアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示されるア
ミノ酸配列が確認された。

【００９１】実施例１２ ペプチド１２： Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Leu-Gln(Trt)-
Phe-Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)-Leu
-Wang- 樹脂）を合成し、クリべージ反応を行いペプチ
ド（Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収した。その後、
ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。合成に使用し
たアミノ酸は以下のとおりである。

【００９２】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Phe, Fmoc-Gly, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), 得られた粗ペプチドのうち 9.6mgを２mlの0.１％ TFAを
含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、２回に分け
てODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30cm：東ソー
（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む３２％アセトニ
トリルにて展開し（流速２ml／分、検出波長 220nm) 、
１１〜１６分に溶出された画分を分取し、濃縮後、凍結
乾燥を行い目的とするペプチドを得た（６.4mg) 。この
合成したペプチド 50 pmolについて、アミノ酸配列分析
装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を用いてアミノ酸
配列分析を行ったところ、上記に示されるアミノ酸配列
が確認された。

【００９３】実施例１３ ペプチド１３ Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Leu-Gln(Trt)-
Phe-Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)-Leu
-Met-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸
樹脂には Fmoc-Met-Wang- 樹脂（0.75mmol/g）を２５μ
mol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は実施例１２
と同じである。実施例９と同様の操作でクリべージ反応
を行いペプチド(Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe
-Thr-Leu-Met）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収
し、その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【００９４】得られた粗ペプチドのうち８mgを２mlの0.
１％ TFAを含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む３０
％アセトニトリルにて展開し、２５〜３２分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（1.1mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【００９５】実施例１４ ペプチド１４： Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Gln(Trt)-Phe-
Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)-Leu-Wan
g-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸樹脂には
Fmoc-Leu-Wang- 樹脂（0.69mmol/g）を２５μmol 相当
用いた。合成に使用したアミノ酸は実施例１２と同じで
ある。実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペ
プチド(Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu）を
得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペプ
チドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【００９６】得られた粗ペプチドのうち 2.5mgを１mlの
0.１％ TFAを含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
３０％アセトニトリルにて展開し、１０〜１２分に溶出
された画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチ
ドを得た（0.6mg)。この合成したペプチド 50 pmolにつ
いて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所
(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、
上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【００９７】実施例１5 ペプチド１5 ： Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Gln(Trt)-Phe-
Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)-Leu-Met
-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸樹脂
には Fmoc-Met-Wang- 樹脂（0.75mmol/g）を２５μmol
相当用いた。合成に使用したアミノ酸は実施例１２と同
じである。実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行
いペプチド(Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu
-Met）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その
後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【００９８】得られた粗ペプチドのうち７mgを４mlの0.
１％ TFAを含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む３０
％アセトニトリルにて展開し、１５〜２０分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（1.9mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【００９９】実施例１６ ペプチド１６： Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Gln(Trt)-Phe-
Ala-Lys(Boc)-Leu-Thr(tBu)-Gly-Phe-Thr(tBu)-Leu-Met
-Gly-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ末端アミノ酸
樹脂には Fmoc-Gly-Wang- 樹脂（0.50mmol/g）を２５μ
mol 相当用いた。合成に使用したアミノ酸は以下のとお
りである。

【０１００】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Phe, Fmoc-Gly, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Met 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【０１０１】得られた粗ペプチドのうち13mgを６mlの0.
１％ TFAを含む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
３回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む２９
％アセトニトリルにて展開し、１７〜２０分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（0.9mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【０１０２】実施例１７ ペプチド１７： Ile-Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Ile-Phe-Ala-S
er(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-His(Trt)-Leu-Gln(Tr
t)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Wang- 樹脂）を合成した。ただ
し、Ｃ末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Asn(Trt)-Wang-樹脂
（0.60mmol/g）を２５μmol 相当用いた。合成に使用し
たアミノ酸は以下のとおりである。

【０１０３】 Fmoc-Leu, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Ile, Fmoc-Phe, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-His(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Ser(tBu), 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Ile-Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【０１０４】得られた粗ペプチドのうち 3.8mgを４mlの
0.１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
１８％アセトニトリルにて展開し（流速２ml／分、検出
波長 220nm) 、１２〜１５分に溶出された画分を分取
し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た
（1.9mg)。この合成したペプチド 50 pmolについて、ア
ミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を
用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示され
るアミノ酸配列が確認された。

【０１０５】実施例１8 ペプチド１8 ： Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn-Thr 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Phe-Ala-Ser(t
Bu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-His(Trt)-Leu-Gln(Trt)-Ly
s(Boc)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Wang-樹脂）を合成した。た
だし、Ｃ末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Thr(tBu)-Wang-樹
脂（0.50mmol/g）を２５μmol 相当用いた。合成に使用
したアミノ酸は以下のとおりである。

【０１０６】 Fmoc-Leu, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Phe, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-His(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Ser(tBu), 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn-Thr）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【０１０７】得られた粗ペプチドのうち５mgを４mlの0.
１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む１５
％アセトニトリルにて展開し、２２〜３０分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（3.5mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【０１０８】実施例１９ ペプチド１９： Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Phe-Ala-Ser(t
Bu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-His(Trt)-Leu-Gln(Trt)-Ly
s(Boc)-Asn(Trt)-Wang- 樹脂）を合成し、クリべージ反
応を行いペプチド(Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-G
ln-Lys-Asn）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し
た。その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。
合成に使用したアミノ酸は実施例１８と同じである。

【０１０９】得られた粗ペプチドのうち６mgを４mlの0.
１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解後、
２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30
cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む１５
％アセトニトリルにて展開し、２０〜２８分に溶出され
た画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを
得た（3.8mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【０１１０】実施例２０ ペプチド２０： Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Leu-Lys(Boc)-
Leu-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ile-Ala-Ser(tB
u)-Cys(Trt)-Leu-Wang-樹脂）を合成した。ただし、Ｃ
末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Leu-Wang- 樹脂（0.69mmol
/g）を２５μmol相当用いた。合成に使用したアミノ酸
は以下のとおりである。

【０１１１】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gly, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Cys(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Ile 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【０１１２】得られた粗ペプチドのうち 10mg を４mlの
0.１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、３回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
２３％アセトニトリルにて展開し（流速２ml／分、検出
波長 220nm) 、１８〜２２分に溶出された画分を分取
し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た
（0.9mg)。この合成したペプチド 50 pmolについて、ア
ミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を
用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示され
るアミノ酸配列が確認された。

【０１１３】実施例２１ ペプチド２１： Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Lys(Boc)-Leu-
Thr(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ile-Ala-Ser(tBu)-Cy
s(Trt)-Leu-Wang- 樹脂）を合成し、クリべージ反応を
行いペプチド（Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-
Cys-Leu ）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し
た。その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。
合成に使用したアミノ酸は実施例２０と同じである。

【０１１４】得られた粗ペプチドのうち 6.6mgを２mlの
0.１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
１９％アセトニトリルにて展開し（流速２ml／分、検出
波長 220nm) 、１７〜２２分に溶出された画分を分取
し、濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチドを得た
（1.5mg)。この合成したペプチド 50 pmolについて、ア
ミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を
用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に示され
るアミノ酸配列が確認された。

【０１１５】実施例２２ ペプチド２２： Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn 実施例１と同様の操作でペプチド（Fmoc-Lys(Boc)-Leu-
Thr(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ile-Ala-Ser(tBu)-Cy
s(Trt)-Leu-Asn(Trt)-Wang- 樹脂）を合成した。ただ
し、Ｃ末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Asn(Trt)-Wang-樹脂
（0.60mmol/g）を２５μmol 相当用いた。合成に使用し
たアミノ酸は実施例２０と同じである。実施例９と同様
の操作でクリべージ反応を行いペプチド(Gln-Phe-Ala-L
ys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu）を得、このペプチド溶液
を遠心管に回収し、その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペ
プチドを得た。

【０１１６】得られた粗ペプチドのうち 6.9mgを１mlの
0.１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、２回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
２２％アセトニトリルにて展開し、９〜１２分に溶出さ
れた画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチド
を得た（1.6mg)。この合成したペプチド 50 pmolについ
て、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所(株)
製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、上記に
示されるアミノ酸配列が確認された。

【０１１７】実施例２３ ペプチド２３： Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Leu-Thr(tBu)-
Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ile-Ala-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Le
u-Asn(Trt)-Wang-樹脂）を合成し、クリべージ反応を行
いペプチド（Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Le
u-Asn ）を得、このペプチド溶液を遠心管に回収した。
その後、ペプチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。合成
に使用したアミノ酸は以下のとおりである。

【０１１８】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Gly, Fmoc-Cys(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Ile 得られた粗ペプチドのうち６mgを１mlの0.１％ TFAを含
む２０％アセトニトリル水溶液に溶解後、３回に分けて
ODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm ×30cm：東ソー
（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む１９％アセトニ
トリルにて展開し（流速２ml／分、検出波長 220nm) 、
１５〜１７分に溶出された画分を分取し、濃縮後、凍結
乾燥を行い目的とするペプチドを得た（０.9 mg)。この
合成したペプチド 50 pmolについて、アミノ酸配列分析
装置 PPSQ-10型(島津製作所(株) 製) を用いてアミノ酸
配列分析を行ったところ、上記に示されるアミノ酸配列
が確認された。

【０１１９】実施例２４ ペプチド２４： Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn-Asp 実施例９と同様の操作でペプチド（Fmoc-Leu-Thr(tBu)-
Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ile-Ala-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Le
u-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Wang-樹脂）を合成した。ただ
し、Ｃ末端アミノ酸樹脂には Fmoc-Asp(OtBu)-Wang- 樹
脂（0.42mmol/g）を２５μmol 相当用いた。合成に使用
したアミノ酸は以下のとおりである。

【０１２０】 Fmoc-Leu, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Gly, Fmoc-Cys(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Ile Fmoc-Asn(Trt) 実施例９と同様の操作でクリべージ反応を行いペプチド
(Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn-Asp）
を得、このペプチド溶液を遠心管に回収し、その後、ペ
プチドを沈澱させ、粗ペプチドを得た。

【０１２１】得られた粗ペプチドのうち 7.5mgを１mlの
0.１％ TFAを含む１０％アセトニトリル水溶液に溶解
後、３回に分けてODS カラム(TSKgel ODS-120T, 7.8mm
×30cm：東ソー（株）製）に供与し、0.１％ TFAを含む
１８％アセトニトリルにて展開し、１７〜１９分に溶出
された画分を濃縮後、凍結乾燥を行い目的とするペプチ
ドを得た（0.6mg)。この合成したペプチド 50 pmolにつ
いて、アミノ酸配列分析装置 PPSQ-10型(島津製作所
(株) 製) を用いてアミノ酸配列分析を行ったところ、
上記に示されるアミノ酸配列が確認された。

【０１２２】製剤例１．液剤 実施例１乃至２４記載の方法により得た２４種類のペプ
チドのいずれかを最終濃度0.１g/mlになるように安定剤
として１％(w/v) 精製ゼラチンを含む蒸留水に溶解し、
常法により滅菌濾過して２４種類の液剤を得た。

【０１２３】本発明のペプチドに対する感受性は個体毎
に変わるのが通例であるから、本品は個々の個体に最も
適した組成になるよう、２４種類の液剤を適宜配合して
使用する。本品は安定性に優れているので、スギ花粉症
を治療・予防するための点眼剤、点鼻剤、口腔内噴霧剤
用の液剤として有用である。

【０１２４】製剤例２．注射剤 安定剤として１％(w/v) ヒト血清アルブミンを含む生理
食塩水に実施例１乃至２４記載の方法により得た２４種
類のペプチドをそれぞれ最終濃度0.01、0.１又は１mg/m
l になるように溶解し、滅菌濾過した後、滅菌バイアル
瓶に２mlずつ分注し、凍結乾燥し、密栓した。

【０１２５】本品は投与に先立ち、まず、バイアル瓶内
に注射用蒸留水等を１ml加え、次いで、内容物を均一に
溶解して使用する。安定性に優れ、有効成分として本発
明による２４種類のポリペプチドを含んでなる本品は、
スギ花粉症を治療・予防するための乾燥製剤として有用
である。

【０１２６】製剤例３．錠剤 平均分子量約20,000ダルトンの精製プルラン２g を蒸留
水１００mlに均一に溶解し、溶液に塩化シアヌルの1.７
％(w/v) アセトン溶液を２ml加え、５％(w/v)炭酸ナト
リウム水溶液でpHを７付近に保ちつつ、攪拌下、５℃で
２時間反応させた。その後、同様にして反応物のpHを７
付近に保ちながら、４℃の冷水に対して一晩透析し、活
性化プルランを含む水溶液２０mlを得た。

【０１２７】実施例１乃至２４記載の方法により得たペ
プチドをそれぞれ0.２mg加え、溶液のpHを７付近に保ち
つつ、穏やかに攪拌しながら、３７℃で１２時間反応さ
せた。反応後、反応物にグリシンを４g を加え、穏やか
に攪拌しながら、３７℃で５時間インキュベートし、未
反応の活性基をブロックした。反応物を濃縮し、あらか
じめ0.１M リン酸緩衝液（pH 7.0) で平衡化させておい
たセファデックス G-50 カラムに供与し、カラムに新鮮
な同一緩衝液を通液して、この発明のペプチドとプルラ
ンの複合体を含む画分を採取した。収量は、原料ペプチ
ド固形分当たり、約３０％であった。

【０１２８】常法に従って、この画分を滅菌濾過し、濃
縮し、凍結乾燥し、粉砕後、マンニトールを均一に混合
し、混合物を打錠して製品１錠（200mg）当たり複合体
を２、１０又は５０mg含む錠剤を得た。摂取性、安定性
に優れた本品は、スギ花粉症を治療・予防するための舌
下剤として有用である。

【０１２９】製剤例４．シロップ剤 大腸菌由来の精製リボ多糖１g を１０mMリン酸カルシウ
ム溶液１００mlに溶解し、溶液に１００mM過ヨウ素酸ナ
トリウムを６ml加え、室温下で２０分間反応させてリボ
多糖を活性化した。反応物を４℃の１M グリシン−塩酸
緩衝液（pH 4.4) に対して一晩透析して未反応の過ヨウ
素酸を除去した後、0.１M 炭酸水素ナトリウム緩衝液に
よりpH 9.5付近に調整する一方、別途、実施例１乃至２
４記載の方法により得た２４種類のペプチドを0.１M リ
ン酸緩衝液（pH 7.0) １００mlにそれぞれ１０mgずつ溶
解し、活性化リボ多糖を含む上記反応物に加え、室温下
で１２時間静置して反応させた。

【０１３０】その後、新たに得られた反応物を製剤例３
の方法により精製し、得られた本発明のペプチドとリボ
多糖の複合体を含む画分を濃縮し、凍結乾燥し、粉砕し
て固状物とした。収量は、原料ペプチド固形分当たり、
約３０％であった。この固形物を蔗糖をそれぞれ最終濃
度が0.１若しくは１mg/ml 又は５０％(w/w) になるよう
に安定剤として精製ゼラチンを１％(w/w) 含む蒸留水に
溶解し、溶液を常法により滅菌濾過してシロップ状物を
得た。このシロップ状物を２mlずつ滅菌バイアル瓶に分
注し、密栓して製品とした。安定性に優れ、有効成分と
してこの発明のペプチドとリボ多糖の複合体を含む本品
は、スギ花粉症を治療・予防するためのシロップ剤とし
て有用である。

【０１３１】

【発明の効果】本発明により、スギ花粉アレルゲンのＴ
細胞エピトープのみからなるペプチド及びそれらを有効
成分として含んでなる抗スギ花粉症剤を提供することが
できた。そして、本発明のペプチドは、スギ花粉アレル
ゲンに特異的なイムノグロブリンＥ抗体に実質的に反応
しないので、ヒトを含む哺乳類一般に投与すると、実質
的にアナフィラキシーを引起こすことなく、スギ花粉ア
レルゲンに特異的なＴ細胞を活性化することができる。

【０１３２】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Val Asp Gly Ile Ile Ala Ala Tyr Gln Asn Pro Ala Ser 1 5 10

【０１３３】配列番号：２ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Val Asp Gly Ile Ile Ala Ala Tyr Gln Asn Pro Ala Ser 1 5 10

【０１３４】配列番号：３ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１３５】配列番号：４ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Trp Leu Gln Phe Ala Lys Leu Thr Gly Phe Thr Leu Met Gly 1 5 10

【０１３６】配列番号：５ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Trp Leu Gln Phe Ala Lys Leu Thr Gly Phe Thr Leu Met 1 5 10

【０１３７】配列番号：６ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１３８】配列番号：７ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 His Phe Thr Phe Lys Val Asp Gly Ile Ile Ala Ala Tyr Gln 1 5 10

【０１３９】配列番号：８ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Arg Ala Glu Val Ser Tyr Val His Val Asn Gly Ala Lys Phe 1 5 10

【０１４０】配列番号：９ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４１】配列番号：１０ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４２】配列番号：１１ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu 1 5 10

【０１４３】配列番号：１２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４４】配列番号：１３ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４５】配列番号：１４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４６】配列番号：１５ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４７】配列番号：１６ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４８】配列番号：１７ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１４９】配列番号：１８ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５０】配列番号：１９ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５１】配列番号：２０ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５２】配列番号：２１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５３】配列番号：２２ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５４】配列番号：２３ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【０１５５】配列番号：２４ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

フロントページの続き (72)発明者 平原 一樹 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 白石 明郎 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 芹澤 伸記 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 栗本 雅司 岡山県岡山市学南町２丁目７番25号 (72)発明者 日野 克彦 岡山県岡山市奥田１丁目７番10−204号

Claims (72)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
2. 【請求項２】 配列番号２のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
3. 【請求項３】 配列番号３のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
4. 【請求項４】 配列番号３のアミノ酸配列を含むことか
   ら成るペプチド。
5. 【請求項５】 配列番号４のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
6. 【請求項６】 配列番号５のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
7. 【請求項７】 配列番号６のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
8. 【請求項８】 配列番号６のアミノ酸配列を含むことか
   ら成るペプチド。
9. 【請求項９】 配列番号７のアミノ酸配列から成るペプ
   チド。
10. 【請求項１０】 配列番号７のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチド。
11. 【請求項１１】 配列番号８のアミノ酸配列から成るペ
    プチド。
12. 【請求項１２】 配列番号８のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチド。
13. 【請求項１３】 配列番号９のアミノ酸配列から成るペ
    プチド。
14. 【請求項１４】 配列番号９のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチド。
15. 【請求項１５】 配列番号１０のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
16. 【請求項１６】 配列番号１１のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
17. 【請求項１７】 配列番号１２のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
18. 【請求項１８】 配列番号１２のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
19. 【請求項１９】 配列番号１３のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
20. 【請求項２０】 配列番号１４のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
21. 【請求項２１】 配列番号１４のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
22. 【請求項２２】 配列番号１５のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
23. 【請求項２３】 配列番号１６のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
24. 【請求項２４】 配列番号１７のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
25. 【請求項２５】 配列番号１７のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
26. 【請求項２６】 配列番号１８のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
27. 【請求項２７】 配列番号１９のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
28. 【請求項２８】 配列番号１９のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
29. 【請求項２９】 配列番号２０のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
30. 【請求項３０】 配列番号２０のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
31. 【請求項３１】 配列番号２１のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
32. 【請求項３２】 配列番号２１のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
33. 【請求項３３】 配列番号２２のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
34. 【請求項３４】 配列番号２３のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
35. 【請求項３５】 配列番号２３のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチド。
36. 【請求項３６】 配列番号２４のアミノ酸配列から成る
    ペプチド。
37. 【請求項３７】 配列番号１のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
38. 【請求項３８】 配列番号２のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
39. 【請求項３９】 配列番号３のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
40. 【請求項４０】 配列番号３のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
41. 【請求項４１】 配列番号４のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
42. 【請求項４２】 配列番号５のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
43. 【請求項４３】 配列番号６のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
44. 【請求項４４】 配列番号６のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
45. 【請求項４５】 配列番号７のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
46. 【請求項４６】 配列番号７のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
47. 【請求項４７】 配列番号８のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
48. 【請求項４８】 配列番号８のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
49. 【請求項４９】 配列番号９のアミノ酸配列から成るペ
    プチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
50. 【請求項５０】 配列番号９のアミノ酸配列を含むこと
    から成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
51. 【請求項５１】 配列番号１０のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
52. 【請求項５２】 配列番号１１のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
53. 【請求項５３】 配列番号１２のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
54. 【請求項５４】 配列番号１２のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
55. 【請求項５５】 配列番号１３のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
56. 【請求項５６】 配列番号１４のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
57. 【請求項５７】 配列番号１４のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
58. 【請求項５８】 配列番号１５のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
59. 【請求項５９】 配列番号１６のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
60. 【請求項６０】 配列番号１７のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
61. 【請求項６１】 配列番号１７のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
62. 【請求項６２】 配列番号１８のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
63. 【請求項６３】 配列番号１９のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
64. 【請求項６４】 配列番号１９のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
65. 【請求項６５】 配列番号２０のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
66. 【請求項６６】 配列番号２０のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
67. 【請求項６７】 配列番号２１のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
68. 【請求項６８】 配列番号２１のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
69. 【請求項６９】 配列番号２２のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
70. 【請求項７０】 配列番号２３のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
71. 【請求項７１】 配列番号２３のアミノ酸配列を含むこ
    とから成るペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。
72. 【請求項７２】 配列番号２４のアミノ酸配列から成る
    ペプチドを有効成分とする抗スギ花粉症剤。