JPH0823549B2 - 毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロビン変異種の分析方法及びその分析用緩衝液 - Google Patents
毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロビン変異種の分析方法及びその分析用緩衝液Info
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- JPH0823549B2 JPH0823549B2 JP5112378A JP11237893A JPH0823549B2 JP H0823549 B2 JPH0823549 B2 JP H0823549B2 JP 5112378 A JP5112378 A JP 5112378A JP 11237893 A JP11237893 A JP 11237893A JP H0823549 B2 JPH0823549 B2 JP H0823549B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、一般的には試料一般の
分析に関し、より詳しくは毛管電気泳動法を利用した試
料の分析に関する。特に好ましい態様においては、本発
明は毛管電気泳動法によるヘモグロビン変異種に関する
臨床試料の分析に関する。
分析に関し、より詳しくは毛管電気泳動法を利用した試
料の分析に関する。特に好ましい態様においては、本発
明は毛管電気泳動法によるヘモグロビン変異種に関する
臨床試料の分析に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】正常ヒ
トヘモグロビンは約68,000ダルトンの分子量をもつタン
パク質である。ヘモグロビンは４個のグロビン鎖からな
り、それぞれのグロビン鎖は結合したヘム基を有する。
正常ヘモグロビンのグロビン鎖のうちの２個は“α（ア
ルファー）鎖”と呼ばれ、一方、他の２個の非α鎖はβ
（ベータ）鎖、γ（ガンマ）鎖又はδ（デルタ）鎖から
選択される。結果として生じる４個の鎖の分子は“四量
体”と呼び得る。典型的には、ヘモグロビンの種類はこ
れらの鎖に基づいて命名される。すなわち、α2 β2 又
はα2 δ2 はそれぞれ２個のα鎖、２個のβ鎖及び２個
のγ鎖、２個のδ鎖を示す。正常な成人に存在するヘモ
グロビンは、ヘモグロビンＡ（α2 β2 )(これは総ヘモ
グロビンの約97％を占める）と、ヘモグロビンＡ2 （α
2 δ2 ）及びヘモグロビンＦ（α2 δ2 ）（これらは総
ヘモグロビンの残り３％を占める）である。
トヘモグロビンは約68,000ダルトンの分子量をもつタン
パク質である。ヘモグロビンは４個のグロビン鎖からな
り、それぞれのグロビン鎖は結合したヘム基を有する。
正常ヘモグロビンのグロビン鎖のうちの２個は“α（ア
ルファー）鎖”と呼ばれ、一方、他の２個の非α鎖はβ
（ベータ）鎖、γ（ガンマ）鎖又はδ（デルタ）鎖から
選択される。結果として生じる４個の鎖の分子は“四量
体”と呼び得る。典型的には、ヘモグロビンの種類はこ
れらの鎖に基づいて命名される。すなわち、α2 β2 又
はα2 δ2 はそれぞれ２個のα鎖、２個のβ鎖及び２個
のγ鎖、２個のδ鎖を示す。正常な成人に存在するヘモ
グロビンは、ヘモグロビンＡ（α2 β2 )(これは総ヘモ
グロビンの約97％を占める）と、ヘモグロビンＡ2 （α
2 δ2 ）及びヘモグロビンＦ（α2 δ2 ）（これらは総
ヘモグロビンの残り３％を占める）である。
【０００３】前記の４個の鎖の配向は、ヘモグロビン部
分(moiety)がその外面上に割れ目すなわち“ポケット”
を構成するような配向である。この割れ目は酸素の取込
みと放出の部位を含み、酸素の取込みと放出がヘモグロ
ビンの主要な機能である。前記分子の部分同志の間には
空間的関係において変化を可能にする４個のグロビン鎖
の相互作用があり、これが酸素の取込みと放出を促進す
る。ヘモグロビン分子の構造の異常は、例えば酸素の取
込みと放出を適切に調節することができなくなることを
招き得る。
分(moiety)がその外面上に割れ目すなわち“ポケット”
を構成するような配向である。この割れ目は酸素の取込
みと放出の部位を含み、酸素の取込みと放出がヘモグロ
ビンの主要な機能である。前記分子の部分同志の間には
空間的関係において変化を可能にする４個のグロビン鎖
の相互作用があり、これが酸素の取込みと放出を促進す
る。ヘモグロビン分子の構造の異常は、例えば酸素の取
込みと放出を適切に調節することができなくなることを
招き得る。
【０００４】前記α鎖はアミノ酸141 個からなり、非α
鎖はアミノ酸146 個からなる。これらのアミノ酸の正確
な種類、個数及び具体的な配列は、グロビン鎖のそれぞ
れの種類に特有であり、前記アミノ酸の配列の変化は異
常グロビン鎖を生じ、結果として異常ヘモグロビンの産
生を招く。異常グロビン鎖は、“ヘモグロビン異常症(h
emoglobinopathies)”と集合的に呼ばれる一群の遺伝病
(inherited disorders) の一要素である。
鎖はアミノ酸146 個からなる。これらのアミノ酸の正確
な種類、個数及び具体的な配列は、グロビン鎖のそれぞ
れの種類に特有であり、前記アミノ酸の配列の変化は異
常グロビン鎖を生じ、結果として異常ヘモグロビンの産
生を招く。異常グロビン鎖は、“ヘモグロビン異常症(h
emoglobinopathies)”と集合的に呼ばれる一群の遺伝病
(inherited disorders) の一要素である。
【０００５】ヘモグロビン異常症は、ヘモグロビン分子
を形成するグロビン鎖の不完全合成の結果である。かか
る欠陥は、少なくとも２つの方法で、すなわち (1)遺伝
子レベルにおける構造的に異常なグロビン鎖の合成と、
(2)構造的に正常なグロビン鎖の産生の減少（それによ
ってα鎖及び非α鎖が釣合わない量すなわち異なる量で
合成される）で生じる。その結果として生じた不均衡な
鎖の産生が正常ヘモグロビンの不十分な産生を引き起こ
し、それが不安定な四量体を形成する。かかるアンバラ
ンスな鎖の産生から生じる状態は、“サラセミア(thala
ssemia) 症候群”と呼ばれる。
を形成するグロビン鎖の不完全合成の結果である。かか
る欠陥は、少なくとも２つの方法で、すなわち (1)遺伝
子レベルにおける構造的に異常なグロビン鎖の合成と、
(2)構造的に正常なグロビン鎖の産生の減少（それによ
ってα鎖及び非α鎖が釣合わない量すなわち異なる量で
合成される）で生じる。その結果として生じた不均衡な
鎖の産生が正常ヘモグロビンの不十分な産生を引き起こ
し、それが不安定な四量体を形成する。かかるアンバラ
ンスな鎖の産生から生じる状態は、“サラセミア(thala
ssemia) 症候群”と呼ばれる。
【０００６】構造上の欠陥については、グロビン鎖につ
いて約400 種類の構造異常が報告されている。これらの
大部分は、臨床的徴候も血液的徴候も呈さない。これら
のヘモグロビン構造変異種は、主として点突然変異、グ
ロビン遺伝子をコードするヌクレオチドの挿入又は欠
失、あるいはこれらグロビン遺伝子の欠失又は融合によ
るものである。ヘモグロビンＳ(HbSと略記する) は、臨
床上の重要性の点からずばぬけて最も重要な異常ヘモグ
ロビン変異種である。HbS に関する２個の遺伝子〔HbS
に関して“ホモ接合性(homozygous)”〕を有する個人
は、鎌状赤血球貧血をもち、しかも深刻な生命を脅かす
危機の危険な状態にあるであろう。“鎌状赤血球”とい
う用語は、HbS に特有に認められる鎌の形状した赤血球
に由来する。鎌状赤血球貧血をもつ個人は、鎌状赤血球
が動脈の閉塞を引き起こし、結果として血管閉鎖や組織
梗塞を招く場合には、つらい鎌状赤血球化(sickling)危
機に遭遇し得る。
いて約400 種類の構造異常が報告されている。これらの
大部分は、臨床的徴候も血液的徴候も呈さない。これら
のヘモグロビン構造変異種は、主として点突然変異、グ
ロビン遺伝子をコードするヌクレオチドの挿入又は欠
失、あるいはこれらグロビン遺伝子の欠失又は融合によ
るものである。ヘモグロビンＳ(HbSと略記する) は、臨
床上の重要性の点からずばぬけて最も重要な異常ヘモグ
ロビン変異種である。HbS に関する２個の遺伝子〔HbS
に関して“ホモ接合性(homozygous)”〕を有する個人
は、鎌状赤血球貧血をもち、しかも深刻な生命を脅かす
危機の危険な状態にあるであろう。“鎌状赤血球”とい
う用語は、HbS に特有に認められる鎌の形状した赤血球
に由来する。鎌状赤血球貧血をもつ個人は、鎌状赤血球
が動脈の閉塞を引き起こし、結果として血管閉鎖や組織
梗塞を招く場合には、つらい鎌状赤血球化(sickling)危
機に遭遇し得る。
【０００７】ヘモグロビン異常症の第２の型、すなわち
サラセミア症候群に関しては、α鎖合成の低下が“α-
サラセミア”と呼ばれる状態を招く。α- サラセミアは
人間に最もありふれた遺伝病であると考えられる。α-
サラセミアの臨床的発現は、全く無いものから非常に深
刻なものにまで及び、これらの発現はヘモグロビンの分
析によって調べることができる。すなわち、３個の欠失
したα遺伝子をもつ個人は、典型的にはヘモグロビンＦ
の増加と、ヘモグロビンＨの出現とを明確に示す。β-
サラセミアは同様の種々の程度の臨床的発現を有し、β
- サラセミアもまたヘモグロビンを分析することによっ
て調べることができる。すなわち、ある種のβ- サラセ
ミアについては、ヘモグロビンＡは存在しないが、δβ
- サラセミアについてはヘモグロビンＦが総ヘモグロビ
ンの５〜20％まで特徴的に増加する。
サラセミア症候群に関しては、α鎖合成の低下が“α-
サラセミア”と呼ばれる状態を招く。α- サラセミアは
人間に最もありふれた遺伝病であると考えられる。α-
サラセミアの臨床的発現は、全く無いものから非常に深
刻なものにまで及び、これらの発現はヘモグロビンの分
析によって調べることができる。すなわち、３個の欠失
したα遺伝子をもつ個人は、典型的にはヘモグロビンＦ
の増加と、ヘモグロビンＨの出現とを明確に示す。β-
サラセミアは同様の種々の程度の臨床的発現を有し、β
- サラセミアもまたヘモグロビンを分析することによっ
て調べることができる。すなわち、ある種のβ- サラセ
ミアについては、ヘモグロビンＡは存在しないが、δβ
- サラセミアについてはヘモグロビンＦが総ヘモグロビ
ンの５〜20％まで特徴的に増加する。
【０００８】ヘモグロビン異常症の多くは、人種特異的
である。例えば、アフリカ−アメリカ人の約30％及び東
南アジア生まれの人々はα- サラセミアの遺伝子をも
つ。β- サラセミアは地中海沿岸住民及びアジア人に頻
繁に生じる。
である。例えば、アフリカ−アメリカ人の約30％及び東
南アジア生まれの人々はα- サラセミアの遺伝子をも
つ。β- サラセミアは地中海沿岸住民及びアジア人に頻
繁に生じる。
【０００９】異常ヘモグロビンの存在のスクリーニング
は、典型的には臨床上重要なヘモグロビンと臨床的に活
動していない(silent)異常ヘモグロビンの両方を検出す
る目的で行われる。例えば、HbS の存在について麻酔法
を受けている非北欧生まれの人々を選別することは必要
不可欠である。これは、HbS の存在が、適切な麻酔法が
利用されるような酸素の取り込みを適切に調節すること
が実行不可能であることを示すという理由からである。
また、かかる選別は、遺伝カウンセリングにも役立つ。
例えば、HbS 遺伝子について“ヘテロ接合性(heterozyg
ous)”である個人（HbS の一つの遺伝子；鎌状赤血球保
有者）は、鎌状赤血球形成傾向をもち、しかも臨床的徴
候を呈し得ない。しかしながら、２人のかかる個人同志
が子をもうける場合には、彼らの子孫は両方のHbS 遺伝
子を遺伝する見込みを50％、すなわちHbS 遺伝子がヘテ
ロ接合性でありしかも鎌状赤血球貧血をもつ見込みを50
％有する。
は、典型的には臨床上重要なヘモグロビンと臨床的に活
動していない(silent)異常ヘモグロビンの両方を検出す
る目的で行われる。例えば、HbS の存在について麻酔法
を受けている非北欧生まれの人々を選別することは必要
不可欠である。これは、HbS の存在が、適切な麻酔法が
利用されるような酸素の取り込みを適切に調節すること
が実行不可能であることを示すという理由からである。
また、かかる選別は、遺伝カウンセリングにも役立つ。
例えば、HbS 遺伝子について“ヘテロ接合性(heterozyg
ous)”である個人（HbS の一つの遺伝子；鎌状赤血球保
有者）は、鎌状赤血球形成傾向をもち、しかも臨床的徴
候を呈し得ない。しかしながら、２人のかかる個人同志
が子をもうける場合には、彼らの子孫は両方のHbS 遺伝
子を遺伝する見込みを50％、すなわちHbS 遺伝子がヘテ
ロ接合性でありしかも鎌状赤血球貧血をもつ見込みを50
％有する。
【００１０】現在、ヘモグロビン変異種の分離と検出に
は、２つの主要なアプローチすなわち(a) スラブゲル(s
lab-gel)電気泳動法と、(b) 等電点電気泳動法とが利用
されている。上記２つの方法は、複数のヘモグロビン変
異種の電気泳動移動度の違いによるそれぞれから分離さ
れるべき複数のヘモグロビン変異種の能力に基づいてい
る。ヘモグロビン変異種の組成におけるアミノ酸の相違
は、電荷における差異を招き、このことが電気泳動移動
度の相違を生み出す。帯電した場の影響下では、ヘモグ
ロビン変異種の全ては、該変異種の帯電と反対の指定さ
れた帯電方向に移動するであろう。低い電気泳動移動度
をもつ変異種は（比較して）高い電気泳動移動度をもつ
変異種よりも遅く移動するので、高い電気泳動移動度を
もつ変異種から分離される。
は、２つの主要なアプローチすなわち(a) スラブゲル(s
lab-gel)電気泳動法と、(b) 等電点電気泳動法とが利用
されている。上記２つの方法は、複数のヘモグロビン変
異種の電気泳動移動度の違いによるそれぞれから分離さ
れるべき複数のヘモグロビン変異種の能力に基づいてい
る。ヘモグロビン変異種の組成におけるアミノ酸の相違
は、電荷における差異を招き、このことが電気泳動移動
度の相違を生み出す。帯電した場の影響下では、ヘモグ
ロビン変異種の全ては、該変異種の帯電と反対の指定さ
れた帯電方向に移動するであろう。低い電気泳動移動度
をもつ変異種は（比較して）高い電気泳動移動度をもつ
変異種よりも遅く移動するので、高い電気泳動移動度を
もつ変異種から分離される。
【００１１】前記の方法は両方共に、分離化媒体として
数種のゲル物質を使用することに基礎を置いている。ス
ラブゲル電気泳動法では、試料は適当な電気泳動媒体
（例えば、紙、酢酸セルロース膜、寒天など）の上に置
かれる。該媒体は適当な電圧で電気泳動されてヘモグロ
ビン変異種同志の分離を生起する。次いで、電気泳動さ
れたゲルは固定され、染色される。この方法は幾分複雑
であり、技術を必要とし、しかも臨床上有用な結果を得
るためには最大で約１時間を必要とする。スラブゲル電
気泳動法のよく知られしかも広く受け入れられている種
類の具体例は、PARAGON(登録商標）スラブゲル電気泳動
装置(system)及びAPPRAISE（登録商標）デンシトメータ
ー電気泳動装置（米国カリフォルニア州フラートン所在
のBeckmanInstruments Inc.社から入手し得る）であ
る。ヘモグロビン変異種のスラブゲル電気泳動分離につ
いては、ヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビ
ンＳ及びヘモグロビンＣが、塩基性緩衝液（例えば、50
mM バルビタール緩衝液、pH 8.6）を使用して分離され
ている。しかしながら、一緒に移動する変異種（例え
ば、ヘモグロビンＤ及びＧ）からヘモグロビンＳの不明
瞭でない分離を達成するためには、酸性緩衝液を使用し
なければならない（例えば、70 mM マレイン酸塩、pH
6.0）。
数種のゲル物質を使用することに基礎を置いている。ス
ラブゲル電気泳動法では、試料は適当な電気泳動媒体
（例えば、紙、酢酸セルロース膜、寒天など）の上に置
かれる。該媒体は適当な電圧で電気泳動されてヘモグロ
ビン変異種同志の分離を生起する。次いで、電気泳動さ
れたゲルは固定され、染色される。この方法は幾分複雑
であり、技術を必要とし、しかも臨床上有用な結果を得
るためには最大で約１時間を必要とする。スラブゲル電
気泳動法のよく知られしかも広く受け入れられている種
類の具体例は、PARAGON(登録商標）スラブゲル電気泳動
装置(system)及びAPPRAISE（登録商標）デンシトメータ
ー電気泳動装置（米国カリフォルニア州フラートン所在
のBeckmanInstruments Inc.社から入手し得る）であ
る。ヘモグロビン変異種のスラブゲル電気泳動分離につ
いては、ヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビ
ンＳ及びヘモグロビンＣが、塩基性緩衝液（例えば、50
mM バルビタール緩衝液、pH 8.6）を使用して分離され
ている。しかしながら、一緒に移動する変異種（例え
ば、ヘモグロビンＤ及びＧ）からヘモグロビンＳの不明
瞭でない分離を達成するためには、酸性緩衝液を使用し
なければならない（例えば、70 mM マレイン酸塩、pH
6.0）。
【００１２】等電点電気泳動法は、ヘモグロビンＡ、
Ｆ、Ｓ及びＣの同時分離を可能にする。例えば、Zhu. M
らの論文：J. Chrom.,559,479-488(1991) “Optimizing
Separati on Parameters in Capillary Isoelctric Fo
cusing”が参考にされ、該論文は本明細書において参照
される。しかしながら、等電点電気泳動法は、かかるヘ
モグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣの同時分離に広く受け入れ
られている方法ではない。この方法は、ヘモグロビン変
異種が電気泳動法によって、pHが該変異種の等電点に相
当するゾーンすなわち帯域まで移動するような安定なpH
勾配を使用することを必要とする。かかるゾーンにおい
ては、ヘモグロビン変異種の有効電荷がゼロになり、移
動が止まる。ヘモグロビン変異種の等電点電気泳動は、
毛管電気泳動法を使用して行われており、そこではキャ
リアー両性電解質（導電性であり且つ必要なpH勾配を提
供する化合物）を含んだ緩衝溶液を含有するポリアクリ
ルアミド被覆微細毛管カラムが分離媒体として使用され
る。等電点電気泳動法には微細毛管カラムの被覆が必要
不可欠である。複数のヘモグロビン変異種を種々のゾー
ンで分離した後に、電気泳動電流が加えられ、分離され
た変異種は、それらが微細毛管カラムを通って検出装置
を通り過ぎて移動するので連続的に検出される。
Ｆ、Ｓ及びＣの同時分離を可能にする。例えば、Zhu. M
らの論文：J. Chrom.,559,479-488(1991) “Optimizing
Separati on Parameters in Capillary Isoelctric Fo
cusing”が参考にされ、該論文は本明細書において参照
される。しかしながら、等電点電気泳動法は、かかるヘ
モグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣの同時分離に広く受け入れ
られている方法ではない。この方法は、ヘモグロビン変
異種が電気泳動法によって、pHが該変異種の等電点に相
当するゾーンすなわち帯域まで移動するような安定なpH
勾配を使用することを必要とする。かかるゾーンにおい
ては、ヘモグロビン変異種の有効電荷がゼロになり、移
動が止まる。ヘモグロビン変異種の等電点電気泳動は、
毛管電気泳動法を使用して行われており、そこではキャ
リアー両性電解質（導電性であり且つ必要なpH勾配を提
供する化合物）を含んだ緩衝溶液を含有するポリアクリ
ルアミド被覆微細毛管カラムが分離媒体として使用され
る。等電点電気泳動法には微細毛管カラムの被覆が必要
不可欠である。複数のヘモグロビン変異種を種々のゾー
ンで分離した後に、電気泳動電流が加えられ、分離され
た変異種は、それらが微細毛管カラムを通って検出装置
を通り過ぎて移動するので連続的に検出される。
【００１３】毛管電気泳動等電点電気泳動法（すなわち
毛管電気泳動等電点分離法）は、特有の問題を有する
が、毛管ゾーン電気泳動法は重要である。毛管ゾーン電
気泳動法（以下、“CZE ”と略記する）は、帯電物質を
迅速に且つ効率的に分離させる方法である。臨床試料
（すなわち、全血、血漿、血清、尿、脳脊髄液）の諸成
分の分離は、20分未満で、典型的には10分未満で達成で
きる。一般に、CZE は毛管すなわち内径約２〜約2000ミ
クロン（“μｍ”）を有する管中に試料を導入するこ
と、及び該管に対して電場を印加することを必要とす
る。電場の電位によって試料が毛管を通って引き寄せら
れ且つ該試料がその諸成分部分に分離される。すなわ
ち、試料成分のそれぞれはそれ自体の電気泳動移動度を
有し、大きな移動度を有する試料成分は、遅い移動度を
有する試料よりも早く毛管を通って移動する。その結果
として、試料の諸成分は、毛管を通って移動する間に毛
管中の個々のゾーン中に解離する。オンライン検出器
は、この分離を連続的に監視するのに使用でき、しかも
個々のゾーンに基づく種々の成分についてのデータを提
供できる。
毛管電気泳動等電点分離法）は、特有の問題を有する
が、毛管ゾーン電気泳動法は重要である。毛管ゾーン電
気泳動法（以下、“CZE ”と略記する）は、帯電物質を
迅速に且つ効率的に分離させる方法である。臨床試料
（すなわち、全血、血漿、血清、尿、脳脊髄液）の諸成
分の分離は、20分未満で、典型的には10分未満で達成で
きる。一般に、CZE は毛管すなわち内径約２〜約2000ミ
クロン（“μｍ”）を有する管中に試料を導入するこ
と、及び該管に対して電場を印加することを必要とす
る。電場の電位によって試料が毛管を通って引き寄せら
れ且つ該試料がその諸成分部分に分離される。すなわ
ち、試料成分のそれぞれはそれ自体の電気泳動移動度を
有し、大きな移動度を有する試料成分は、遅い移動度を
有する試料よりも早く毛管を通って移動する。その結果
として、試料の諸成分は、毛管を通って移動する間に毛
管中の個々のゾーン中に解離する。オンライン検出器
は、この分離を連続的に監視するのに使用でき、しかも
個々のゾーンに基づく種々の成分についてのデータを提
供できる。
【００１４】CZE は一般的に、毛管カラムの内容物に基
づいて２つの種類に区別できる。“ゲル”CZE において
は、毛管には適当なゲル例えばポリアクリルアミドゲル
が満たされる。試料中の諸成分の分離は、ゲルマトリッ
クスを通って移動する成分の大きさと荷電によって部分
的に断定される。ゲルCZE は、幾つかの欠点、特にゲル
物質について非予測性を有する。すなわち、かかるゲル
は、最後には“分解”するか、又は限定された分析試験
に使用し得るのみである。かかる非予測性は、多数の分
析試験が行われる環境(setting) においては許容し得な
い。
づいて２つの種類に区別できる。“ゲル”CZE において
は、毛管には適当なゲル例えばポリアクリルアミドゲル
が満たされる。試料中の諸成分の分離は、ゲルマトリッ
クスを通って移動する成分の大きさと荷電によって部分
的に断定される。ゲルCZE は、幾つかの欠点、特にゲル
物質について非予測性を有する。すなわち、かかるゲル
は、最後には“分解”するか、又は限定された分析試験
に使用し得るのみである。かかる非予測性は、多数の分
析試験が行われる環境(setting) においては許容し得な
い。
【００１５】“開放(open)”CZE においては、毛管には
電気的に導電性の緩衝液が満たされる。毛管のイオン化
に際して、マイナスに帯電した毛管壁は緩衝液から陽イ
オンの層を引き付ける。これら陽イオンは電位の影響下
では陰極方向に流れるので、内部(bulk)溶液（すなわ
ち、緩衝液と分析される試料）もまたこの方向に流れて
電気的中性を維持しなければならない。この電気浸透性
の流れは、陰極方向への帯電にも拘らず中性種とイオン
種の両方を駆動する固定速度成分を提供する。開放CZE
中の緩衝液は、ゲルCZE に利用されるゲルと同様に導入
と拡散に対して安定である。従って、開放CZE において
は、分離はゲルを基剤とした電気泳動法において得られ
た分離と全く同様に得ることができる。
電気的に導電性の緩衝液が満たされる。毛管のイオン化
に際して、マイナスに帯電した毛管壁は緩衝液から陽イ
オンの層を引き付ける。これら陽イオンは電位の影響下
では陰極方向に流れるので、内部(bulk)溶液（すなわ
ち、緩衝液と分析される試料）もまたこの方向に流れて
電気的中性を維持しなければならない。この電気浸透性
の流れは、陰極方向への帯電にも拘らず中性種とイオン
種の両方を駆動する固定速度成分を提供する。開放CZE
中の緩衝液は、ゲルCZE に利用されるゲルと同様に導入
と拡散に対して安定である。従って、開放CZE において
は、分離はゲルを基剤とした電気泳動法において得られ
た分離と全く同様に得ることができる。
【００１６】石英ガラスは、主として毛管用材料として
利用される。その理由は、石英ガラスがCZE に使用され
る比較的高い電圧に耐えることができ、しかも毛管内壁
がイオン化して所望の電気浸透性流を生起するマイナス
帯電を創り出すからである。しかしながら、アルミナ、
ベリリウム、テフロン（登録商標）被覆された材料、ガ
ラス及びこれらの組み合わせ（石英ガラスと共に又は石
英ガラスなしで）もまた利用できる。毛管カラムは、典
型的には約10ボルト／センチメートル（以下、“v/cm”
と略記する）〜約1000v/cmの間の広範囲の印加電気泳動
場に耐えることができる。毛管カラムは取扱い易いよう
に外面を被覆されていてもよい（例えば、ポリアミド材
料を使用して）。毛管カラムの内壁は、処理されていな
くてもよいし、又は特に内部溶液が電気浸透的に流れる
間、内壁に対する吸着を低減できる材料で被覆されてい
てもよい。しかしながら、典型的な被膜は予測できない
方法で破損する傾向をもつという理由から、内壁は典型
的には被覆されていないことが好ましい。
利用される。その理由は、石英ガラスがCZE に使用され
る比較的高い電圧に耐えることができ、しかも毛管内壁
がイオン化して所望の電気浸透性流を生起するマイナス
帯電を創り出すからである。しかしながら、アルミナ、
ベリリウム、テフロン（登録商標）被覆された材料、ガ
ラス及びこれらの組み合わせ（石英ガラスと共に又は石
英ガラスなしで）もまた利用できる。毛管カラムは、典
型的には約10ボルト／センチメートル（以下、“v/cm”
と略記する）〜約1000v/cmの間の広範囲の印加電気泳動
場に耐えることができる。毛管カラムは取扱い易いよう
に外面を被覆されていてもよい（例えば、ポリアミド材
料を使用して）。毛管カラムの内壁は、処理されていな
くてもよいし、又は特に内部溶液が電気浸透的に流れる
間、内壁に対する吸着を低減できる材料で被覆されてい
てもよい。しかしながら、典型的な被膜は予測できない
方法で破損する傾向をもつという理由から、内壁は典型
的には被覆されていないことが好ましい。
【００１７】開放CZE は臨床試料分析に関して多数の望
ましい特性を有する。その理由は、分析はゲルが満たさ
れたカラムを必要とせず、特別なゲルが満たされたカラ
ムを用いて行われる多数の分析試験に固有の制限が回避
され、毛管カラムが処理されていない場合には被覆され
たカラムに関連し得る非予測性の発散物(aura)が回避さ
れ、試料サイズが小さく（通常的には希釈試料５〜200
μl のオーダー）、試料分析時間が早い、すなわち約20
分未満であり、しかも方法がそれ自体自動化に適してお
り、従って効率的でしかも有効な試料分析に必要な熟練
労働を減らすからである。これまで、ヘモグロビン変異
種の分離、特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣの明白な
分離は、開放CZE 法を使用して実際にやられていなかっ
た。
ましい特性を有する。その理由は、分析はゲルが満たさ
れたカラムを必要とせず、特別なゲルが満たされたカラ
ムを用いて行われる多数の分析試験に固有の制限が回避
され、毛管カラムが処理されていない場合には被覆され
たカラムに関連し得る非予測性の発散物(aura)が回避さ
れ、試料サイズが小さく（通常的には希釈試料５〜200
μl のオーダー）、試料分析時間が早い、すなわち約20
分未満であり、しかも方法がそれ自体自動化に適してお
り、従って効率的でしかも有効な試料分析に必要な熟練
労働を減らすからである。これまで、ヘモグロビン変異
種の分離、特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣの明白な
分離は、開放CZE 法を使用して実際にやられていなかっ
た。
【００１８】開放CZE に関連した利点及びヘモグロビン
変異種を選別する必要性を仮定すると、ヘモグロビン変
異種の分析に開放管CZE 法を行うことは好都合である。
変異種を選別する必要性を仮定すると、ヘモグロビン変
異種の分析に開放管CZE 法を行うことは好都合である。
【００１９】
【課題を解決するための手段】本発明は、ヘモグロビン
及びヘモグロビンの変異種の毛管ゾーン電気泳動を用い
た分析方法であって、 (a) ヘモグロビン及びヘモグロビン変異種を含有する試
料を、内部に緩衝液を含有する毛管に導入する工程であ
って、該緩衝液がバルビツール酸、バルビツール酸誘導
体又はそれらの組合わせを少なくとも約100 mM含有する
ものであり、該緩衝液が少なくとも約8.0 のpHを有する
ものである上記工程； (b) 前記毛管に対してヘモグロビン及びヘモグロビン変
異種を分離させるのに十分な電圧の電場を印加する工
程；及び (c) 前記のモグロビン及びヘモグロビン変異種を検出す
る工程を有してなることを特徴とする、ヘモグロビン及
びヘモグロビンの変異種の毛管ゾーン電気泳動分析方法
を提供することによって前記の要求を満たすものであ
る。前記緩衝液は、約240mM のバルビツール酸を含有
し、しかも約8.5 〜約8.7 のpHを有するのが最も好まし
い。
及びヘモグロビンの変異種の毛管ゾーン電気泳動を用い
た分析方法であって、 (a) ヘモグロビン及びヘモグロビン変異種を含有する試
料を、内部に緩衝液を含有する毛管に導入する工程であ
って、該緩衝液がバルビツール酸、バルビツール酸誘導
体又はそれらの組合わせを少なくとも約100 mM含有する
ものであり、該緩衝液が少なくとも約8.0 のpHを有する
ものである上記工程； (b) 前記毛管に対してヘモグロビン及びヘモグロビン変
異種を分離させるのに十分な電圧の電場を印加する工
程；及び (c) 前記のモグロビン及びヘモグロビン変異種を検出す
る工程を有してなることを特徴とする、ヘモグロビン及
びヘモグロビンの変異種の毛管ゾーン電気泳動分析方法
を提供することによって前記の要求を満たすものであ
る。前記緩衝液は、約240mM のバルビツール酸を含有
し、しかも約8.5 〜約8.7 のpHを有するのが最も好まし
い。
【００２０】ヘモグロビン及びヘモグロビン変異種は、
検出域を通り過ぎて移動する個々のゾーンに解離するの
で、該ゾーンは例えば種々の幅と高さとを有するピーク
として又はかかるピークについて積分された面積に基づ
いた数値として表わし得る。言い換えると。これを利用
してヘモグロビンとヘモグロビン及びヘモグロビン変異
種の相対比並びに特定の試料内のそれぞれの濃度を測定
できる。CZE に関連した効率と速さのゆえに、ヘモグロ
ビン変異種の存在と同定について多数の試料を迅速に選
別できる。前記の方法を利用して、特にゲルを詰めた毛
管カラムを必要とせずに単一の分析試験でヘモグロビン
Ａ、Ｆ、Ｓ及びＣを分離できることが最も重要である。
検出域を通り過ぎて移動する個々のゾーンに解離するの
で、該ゾーンは例えば種々の幅と高さとを有するピーク
として又はかかるピークについて積分された面積に基づ
いた数値として表わし得る。言い換えると。これを利用
してヘモグロビンとヘモグロビン及びヘモグロビン変異
種の相対比並びに特定の試料内のそれぞれの濃度を測定
できる。CZE に関連した効率と速さのゆえに、ヘモグロ
ビン変異種の存在と同定について多数の試料を迅速に選
別できる。前記の方法を利用して、特にゲルを詰めた毛
管カラムを必要とせずに単一の分析試験でヘモグロビン
Ａ、Ｆ、Ｓ及びＣを分離できることが最も重要である。
【００２１】ヘモグロビン変異種同志は、ほとんど同じ
アミノ酸配列を有する。かかるアミノ酸配列の相違はか
かるヘモグロビン変異種の産生をもたらす。ヘモグロビ
ン変異種のそれぞれの電気泳動移動度もまた非常に似て
いる。従って、分離法がかかる小さな相違を容易にしか
も効率的に識別できるということは必要不可欠である。
CZE 法に関しては、毛管カラム内の緩衝液はかかる識別
に基づいている。本発明者は、本明細書に記載の条件下
でバルビツール酸又はバルビツール酸の誘導体を含有す
る緩衝液が、開放CZE システムにおいてヘモグロビン変
異種を効率的に識別できることを知見した。
アミノ酸配列を有する。かかるアミノ酸配列の相違はか
かるヘモグロビン変異種の産生をもたらす。ヘモグロビ
ン変異種のそれぞれの電気泳動移動度もまた非常に似て
いる。従って、分離法がかかる小さな相違を容易にしか
も効率的に識別できるということは必要不可欠である。
CZE 法に関しては、毛管カラム内の緩衝液はかかる識別
に基づいている。本発明者は、本明細書に記載の条件下
でバルビツール酸又はバルビツール酸の誘導体を含有す
る緩衝液が、開放CZE システムにおいてヘモグロビン変
異種を効率的に識別できることを知見した。
【００２２】従来、低いイオン強度（すなわち約50〜75
mM）のバルビツール酸は、スラブゲル電気泳動法におい
てヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビンＳ及
びヘモグロビンＣの分離に利用されているが、バルビツ
ール酸はヘモグロビンＳを他のヘモグロビン変異種から
明白に分離させる能力を示していなかった。しかしなが
ら、少なくとも約100mM よりも大きいイオン強度と少な
くとも約8.0 のpHをもつバルビツール酸及びバルビツー
ル酸の誘導体（例えば、フェノバルビタール、メフォバ
ルビタール、バルビタール、アモバルビタール、ベータ
バルビタール、セコバルビタール、ペントバルビター
ル、チオバルビタールなど）が、開放CZE方式において
特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣを効率的にしかも有
効に分離させることが予想外にも知見された。このこと
は、これまでのヘモグロビン変異種の分離法とは異なる
少なくとも２つの利点：すなわち、1)臨床上重要なヘモ
グロビン変異種、特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣを
単一の試料を用いて分析して等電点電気泳動法を使用し
て達成される分離と同様の分離を達成できるという利
点；2)処理されていないカラムを用いる開放CZE 方式を
使用して分析を行うことができるので、分離用ゲルに関
連した種々の制限、カラムの充填に使用されるゲル物質
と、利用されない程度にまで被覆された毛管カラムの両
方に関連した予測し得ない発散物(aura)が除かれるとい
う利点を有する。
mM）のバルビツール酸は、スラブゲル電気泳動法におい
てヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビンＳ及
びヘモグロビンＣの分離に利用されているが、バルビツ
ール酸はヘモグロビンＳを他のヘモグロビン変異種から
明白に分離させる能力を示していなかった。しかしなが
ら、少なくとも約100mM よりも大きいイオン強度と少な
くとも約8.0 のpHをもつバルビツール酸及びバルビツー
ル酸の誘導体（例えば、フェノバルビタール、メフォバ
ルビタール、バルビタール、アモバルビタール、ベータ
バルビタール、セコバルビタール、ペントバルビター
ル、チオバルビタールなど）が、開放CZE方式において
特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣを効率的にしかも有
効に分離させることが予想外にも知見された。このこと
は、これまでのヘモグロビン変異種の分離法とは異なる
少なくとも２つの利点：すなわち、1)臨床上重要なヘモ
グロビン変異種、特にヘモグロビンＡ、Ｆ、Ｓ及びＣを
単一の試料を用いて分析して等電点電気泳動法を使用し
て達成される分離と同様の分離を達成できるという利
点；2)処理されていないカラムを用いる開放CZE 方式を
使用して分析を行うことができるので、分離用ゲルに関
連した種々の制限、カラムの充填に使用されるゲル物質
と、利用されない程度にまで被覆された毛管カラムの両
方に関連した予測し得ない発散物(aura)が除かれるとい
う利点を有する。
【００２３】バルビツール酸を使用するのが好ましく、
5,5-ジエチルバルビツール酸を使用するのが特に好まし
い。バルビツール酸のイオン強度は、少なくとも約100
mM、好ましくは約175 mM〜約250 mMであるのが好まし
い。毛管カラムはその内壁を被覆する必要がない。かか
るカラムと共に使用されるバルビツール酸及びバルビツ
ール酸の誘導体のイオン強度は、約240 mMであることが
最も好ましい。また被覆されたカラムも使用できる。か
かる被覆されたカラムと共に使用されるバルビツール酸
及びバルビツール酸の誘導体のイオン強度は、約100 mM
〜約200 mMであることが好ましい。しかしながら、毛管
カラムの内壁の状態とは関わりなく、バルビツール酸及
びバルビツール酸の誘導体のイオン強度は約100 mM〜約
250 mMであるべきである。
5,5-ジエチルバルビツール酸を使用するのが特に好まし
い。バルビツール酸のイオン強度は、少なくとも約100
mM、好ましくは約175 mM〜約250 mMであるのが好まし
い。毛管カラムはその内壁を被覆する必要がない。かか
るカラムと共に使用されるバルビツール酸及びバルビツ
ール酸の誘導体のイオン強度は、約240 mMであることが
最も好ましい。また被覆されたカラムも使用できる。か
かる被覆されたカラムと共に使用されるバルビツール酸
及びバルビツール酸の誘導体のイオン強度は、約100 mM
〜約200 mMであることが好ましい。しかしながら、毛管
カラムの内壁の状態とは関わりなく、バルビツール酸及
びバルビツール酸の誘導体のイオン強度は約100 mM〜約
250 mMであるべきである。
【００２４】約8.6 のpHでは、全てのヘモグロビン種は
正味の負電荷を含有する。分離されるべきヘモグロビン
変異種には正味負電荷が必要である。その理由は、電場
の影響下ではかかる負電荷種は内部溶液の電気浸透性流
の影響下で陰極方向に移動するからである。例えばバル
ビツール酸は約5.5 〜6.0 のpHを有する。従って、バル
ビツール酸のpHを、pH調整剤すなわち溶液のpHを所望の
値に調整できる物質を用いてアルカリ性値の方向に調整
することが必要である。好ましいpH調整剤としては、例
えばアルカリ金属塩（ナトリウム、カリウム、リチウ
ム、ルビジウム、フランシウム）や、アンモニウムイオ
ン含有化合物すなわち燐酸アンモニウム及び炭酸アンモ
ニウムが挙げられる。個々のpH調整剤は、それ自体にお
いて及びそれ自体については、特に重要なことではな
い。重要なことは、緩衝液のpHが、少なくとも約8.0 、
好ましくは約8.0 〜約10.0、より好ましくは約8.0 〜約
9.0 、特に好ましくは約8.5 〜約8.7 であることであ
る。最も好ましいpH調整剤は水酸化ナトリウムである。
正味の負電荷を含有する。分離されるべきヘモグロビン
変異種には正味負電荷が必要である。その理由は、電場
の影響下ではかかる負電荷種は内部溶液の電気浸透性流
の影響下で陰極方向に移動するからである。例えばバル
ビツール酸は約5.5 〜6.0 のpHを有する。従って、バル
ビツール酸のpHを、pH調整剤すなわち溶液のpHを所望の
値に調整できる物質を用いてアルカリ性値の方向に調整
することが必要である。好ましいpH調整剤としては、例
えばアルカリ金属塩（ナトリウム、カリウム、リチウ
ム、ルビジウム、フランシウム）や、アンモニウムイオ
ン含有化合物すなわち燐酸アンモニウム及び炭酸アンモ
ニウムが挙げられる。個々のpH調整剤は、それ自体にお
いて及びそれ自体については、特に重要なことではな
い。重要なことは、緩衝液のpHが、少なくとも約8.0 、
好ましくは約8.0 〜約10.0、より好ましくは約8.0 〜約
9.0 、特に好ましくは約8.5 〜約8.7 であることであ
る。最も好ましいpH調整剤は水酸化ナトリウムである。
【００２５】当業者により認められるように、ヘモグロ
ビン変異種を効果的に分析するためには、ヘモグロビン
を先ず赤血球から遊離させなければならない。従って、
赤血球を溶解する(lysing)（もちろん遊離されたヘモグ
ロビンを損傷させることなく）ことができる薬剤を利用
できる。かかる薬剤は周知であり、本明細書では詳しく
述べない。好ましい溶解剤は、ノニルフェノールポリエ
チレングリコールエーテルであり、かかる薬剤はBeckma
n Instruments Inc.社から市販されている〔均質溶解試
薬(Homolysing Reagent)、PARAGON(登録商標）ヘモグロ
ビン電気泳動キット；特許番号(P/N)441780 ；ノニルフ
ェノールポリエチレングリコールエーテル0.4 ％(w/v)
を含有する〕。前記の別法は、先ず全血試料から赤血球
を（例えば遠心分離によって）分離し、次いで分離した
赤血球を溶解する方法である。この方法により、例えば
分析するべき試料から血清タンパク質が有益に取り除か
れる。
ビン変異種を効果的に分析するためには、ヘモグロビン
を先ず赤血球から遊離させなければならない。従って、
赤血球を溶解する(lysing)（もちろん遊離されたヘモグ
ロビンを損傷させることなく）ことができる薬剤を利用
できる。かかる薬剤は周知であり、本明細書では詳しく
述べない。好ましい溶解剤は、ノニルフェノールポリエ
チレングリコールエーテルであり、かかる薬剤はBeckma
n Instruments Inc.社から市販されている〔均質溶解試
薬(Homolysing Reagent)、PARAGON(登録商標）ヘモグロ
ビン電気泳動キット；特許番号(P/N)441780 ；ノニルフ
ェノールポリエチレングリコールエーテル0.4 ％(w/v)
を含有する〕。前記の別法は、先ず全血試料から赤血球
を（例えば遠心分離によって）分離し、次いで分離した
赤血球を溶解する方法である。この方法により、例えば
分析するべき試料から血清タンパク質が有益に取り除か
れる。
【００２６】臨床試料中のヘモグロビンの標準濃度は約
60mg/ml であり、かかる濃度は、主として試料が毛管中
に過剰負荷されるという理由から、毛管電気泳動法によ
って分析するのにはあまりにも高すぎる。従って、該試
料は分析する前に希釈されることが好ましい。分析すべ
き試料中のヘモグロビンの濃度は約15.0 mg/ml未満、好
ましくは約7.0 mg/ml 未満、最も好ましくは約2.0 mg/m
l 未満であるのが好ましい。また、適用し得る希釈剤は
当業者には周知であり、本明細書では詳しく述べない。
該希釈剤は中性のpHをもつのが好ましく、燐酸緩衝塩溶
液が代表的希釈剤である。
60mg/ml であり、かかる濃度は、主として試料が毛管中
に過剰負荷されるという理由から、毛管電気泳動法によ
って分析するのにはあまりにも高すぎる。従って、該試
料は分析する前に希釈されることが好ましい。分析すべ
き試料中のヘモグロビンの濃度は約15.0 mg/ml未満、好
ましくは約7.0 mg/ml 未満、最も好ましくは約2.0 mg/m
l 未満であるのが好ましい。また、適用し得る希釈剤は
当業者には周知であり、本明細書では詳しく述べない。
該希釈剤は中性のpHをもつのが好ましく、燐酸緩衝塩溶
液が代表的希釈剤である。
【００２７】記載したヘモグロビン変異種用の緩衝液の
最も好適な態様は、下記の成分である。 成 分 分子量 g/100ml* mM ───────────────────────────────── 5,5-ジエチルバルビツール酸 206.9 4.12 200.0 5,5-ジエチル バルビツール酸ナトリウム塩 184.19 0.74 40.0 合計 4.86 pH： 8.6±0.1 ＊は脱イオン水であることを示す。
最も好適な態様は、下記の成分である。 成 分 分子量 g/100ml* mM ───────────────────────────────── 5,5-ジエチルバルビツール酸 206.9 4.12 200.0 5,5-ジエチル バルビツール酸ナトリウム塩 184.19 0.74 40.0 合計 4.86 pH： 8.6±0.1 ＊は脱イオン水であることを示す。
【００２８】
【実施例】以下の実施例は、本明細書に記載の発明の好
ましい態様に関するものであるが、該実施例は明細書の
記載又は本発明を限定するものではなく、また限定する
と解釈されるべきものでもない。 I.材料及び方法 Ａ．毛管電気泳動方法 試料の毛管電気泳動は、Beckman Instruments Inc.社製
の高性能毛管電気泳動装置（米国カリフォルニア州フラ
ートン所在のBeckman Instruments Inc.社製の装置型式
No.357573)で行った。データ分析は、システム Gold(登
録商標）ソフトウエア（Beckman Instruments Inc.社
製）で行った。前記の毛管電気泳動装置は、オンライン
検出用の内蔵200 、206 、214 、280 、240 及び415nm
狭域フィルターを含んでいる。電気泳動は、内径（以
下、“i.d.”と略記する）75μｍ，長さ25cm；i.d.25μ
ｍ，長さ35cm；及びi.d.50μｍ，長さ25cmの被覆されて
いない石英ガラス管（米国アリゾナ州フェニックス所在
のPolymicro Technologies社の製品No.TSP-075337 、N
o.TSP-025375 及びNo.TSP- 050375）を使用して行っ
た。検出窓はカラム出口から約6.5cm に設けた。また、
i.d.50μｍ，長さ25cmの被覆された毛管カラム(Supelc
o, Bellefonte,PA 16823 USA ；製品No.CElect-P150 7-
5001)も使用した。分析する前に、カラムをヘモグロビ
ン変異種緩衝液で満たした。
ましい態様に関するものであるが、該実施例は明細書の
記載又は本発明を限定するものではなく、また限定する
と解釈されるべきものでもない。 I.材料及び方法 Ａ．毛管電気泳動方法 試料の毛管電気泳動は、Beckman Instruments Inc.社製
の高性能毛管電気泳動装置（米国カリフォルニア州フラ
ートン所在のBeckman Instruments Inc.社製の装置型式
No.357573)で行った。データ分析は、システム Gold(登
録商標）ソフトウエア（Beckman Instruments Inc.社
製）で行った。前記の毛管電気泳動装置は、オンライン
検出用の内蔵200 、206 、214 、280 、240 及び415nm
狭域フィルターを含んでいる。電気泳動は、内径（以
下、“i.d.”と略記する）75μｍ，長さ25cm；i.d.25μ
ｍ，長さ35cm；及びi.d.50μｍ，長さ25cmの被覆されて
いない石英ガラス管（米国アリゾナ州フェニックス所在
のPolymicro Technologies社の製品No.TSP-075337 、N
o.TSP-025375 及びNo.TSP- 050375）を使用して行っ
た。検出窓はカラム出口から約6.5cm に設けた。また、
i.d.50μｍ，長さ25cmの被覆された毛管カラム(Supelc
o, Bellefonte,PA 16823 USA ；製品No.CElect-P150 7-
5001)も使用した。分析する前に、カラムをヘモグロビ
ン変異種緩衝液で満たした。
【００２９】試料を前記毛管電気泳動装置の内部トレー
上に置いた。試料は、幾つかの方法例えば電気力学的注
入法、加圧注入法などによりカラム中に注入できる。こ
れらの方法は当業者に知られている。例えば、試料を、
電気力学的方法を使用してカラムに対して約３〜10秒間
1.0kV を印加することによって導入した。ヘモグロビン
変異種は、75μｍ i.d. のカラムには200 V/cm（電流：
140 μA)のカラム電圧勾配；25μｍ i.d. のカラムには
450 V/cm（電流：34μA)のカラム電圧勾配；50μｍ i.
d. のカラムには200 V/cm（電流：86μA)のカラム電圧
勾配；及びバルビツール酸100mM を使用する50μｍ i.
d. の被覆カラムには200 V/cm（電流：42μA)のカラム
電圧勾配をそれぞれ使用して分離した。
上に置いた。試料は、幾つかの方法例えば電気力学的注
入法、加圧注入法などによりカラム中に注入できる。こ
れらの方法は当業者に知られている。例えば、試料を、
電気力学的方法を使用してカラムに対して約３〜10秒間
1.0kV を印加することによって導入した。ヘモグロビン
変異種は、75μｍ i.d. のカラムには200 V/cm（電流：
140 μA)のカラム電圧勾配；25μｍ i.d. のカラムには
450 V/cm（電流：34μA)のカラム電圧勾配；50μｍ i.
d. のカラムには200 V/cm（電流：86μA)のカラム電圧
勾配；及びバルビツール酸100mM を使用する50μｍ i.
d. の被覆カラムには200 V/cm（電流：42μA)のカラム
電圧勾配をそれぞれ使用して分離した。
【００３０】分析に際して、ヘモグロビン変異種は415n
m で検出した。分析は周囲温度（25℃）で行った。毛管
カラムは、各試験の間に１N 水酸化ナトリウムを用いて
２分間、次いで脱イオン水で30秒間洗浄し、再状態調整
した。
m で検出した。分析は周囲温度（25℃）で行った。毛管
カラムは、各試験の間に１N 水酸化ナトリウムを用いて
２分間、次いで脱イオン水で30秒間洗浄し、再状態調整
した。
【００３１】Ｂ．比較スラブゲル分析 比較分析は、Beckman Instruments Inc.社製のPARAGON
(登録商標）電気泳動装置（製品No.441780)を使用して
寒天スラブゲル電気泳動法により行った。ヘモグロビン
Ａ、Ｃ及びＳの分析に関しては、前記の装置の“Acid-H
b ゲル”部分を利用した。試験は製造者の使用説明書に
従って行った。
(登録商標）電気泳動装置（製品No.441780)を使用して
寒天スラブゲル電気泳動法により行った。ヘモグロビン
Ａ、Ｃ及びＳの分析に関しては、前記の装置の“Acid-H
b ゲル”部分を利用した。試験は製造者の使用説明書に
従って行った。
【００３２】Ｃ．ヘモグロビン変異種対照試料 ２種類のヘモグロビン変異種対照試料(control) を使用
した。第１の対照試料は、ヘモグロビンＡ、Ｃ及びＳか
らなり、Beckman Instruments Inc.社から入手した〔I.
-D.Zone （登録商標）Hemoglobin AF/ASCelectrophores
iskit 、製品No.667630 〕。第２の対照試料はヘモグロ
ビンＡ、Ｆ、Ｃ及びＳからなり、米国オハイオ州アクロ
ン所在のIsolab Inc. 社から入手した（製品No.66763
0)。試料は、試料１部をICS(登録商標）希釈剤（Beckma
n Instruments Inc.社製、製品No.663630)10部に希釈し
た。希釈剤は燐酸塩緩衝液(pH7.0）からなる。かかる希
釈比率は約2.0 〜約5.0 mg/ml のヘモグロビン濃度を与
えた。
した。第１の対照試料は、ヘモグロビンＡ、Ｃ及びＳか
らなり、Beckman Instruments Inc.社から入手した〔I.
-D.Zone （登録商標）Hemoglobin AF/ASCelectrophores
iskit 、製品No.667630 〕。第２の対照試料はヘモグロ
ビンＡ、Ｆ、Ｃ及びＳからなり、米国オハイオ州アクロ
ン所在のIsolab Inc. 社から入手した（製品No.66763
0)。試料は、試料１部をICS(登録商標）希釈剤（Beckma
n Instruments Inc.社製、製品No.663630)10部に希釈し
た。希釈剤は燐酸塩緩衝液(pH7.0）からなる。かかる希
釈比率は約2.0 〜約5.0 mg/ml のヘモグロビン濃度を与
えた。
【００３３】Ｄ．ヘモグロビン変異種患者試料 ヘモグロビンＣヘテロ接合体(heterozygote)患者(UCLA
Harbor General Hospital)から得た包装した赤血球を、
それとBeckman Hemolyzing Reagentとを１：４の希釈比
で混合することにより調製した。その後に、この混合物
をBeckman ICS（登録商標）希釈剤を用いて１：４の希
釈比で希釈した。最終的なヘモグロビン濃度は約2.0 〜
約3.0 mg/ml であった。
Harbor General Hospital)から得た包装した赤血球を、
それとBeckman Hemolyzing Reagentとを１：４の希釈比
で混合することにより調製した。その後に、この混合物
をBeckman ICS（登録商標）希釈剤を用いて１：４の希
釈比で希釈した。最終的なヘモグロビン濃度は約2.0 〜
約3.0 mg/ml であった。
【００３４】Ｅ．ヘモグロビン変異種緩衝液 ヘモグロビン変異種緩衝液は、5,5-ジエチルバルビツー
ル酸を脱イオン水と混合してイオン強度100mM 、200mM
及び240mM を得ることによって調製した。1.0N 水酸化
ナトリウムを使用して上記緩衝液のpHを 8.6±0.1 に調
整した。pH8.6では、該緩衝液の溶解度が幾分“下がる
(sluggish)”ので、5,5-ジエチルバルビツール酸と混合
する前に、若干加温し得る。緩衝液全部を使用前にo.45
μm(孔径）のフィルターを通して濾過した。
ル酸を脱イオン水と混合してイオン強度100mM 、200mM
及び240mM を得ることによって調製した。1.0N 水酸化
ナトリウムを使用して上記緩衝液のpHを 8.6±0.1 に調
整した。pH8.6では、該緩衝液の溶解度が幾分“下がる
(sluggish)”ので、5,5-ジエチルバルビツール酸と混合
する前に、若干加温し得る。緩衝液全部を使用前にo.45
μm(孔径）のフィルターを通して濾過した。
【００３５】II. 実施例１：ヘモグロビン変異種Ａ、
Ｃ、Ｓ及びＦの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｆ、Ｃ及びＳ対照試料の分析
は、処理していない75μｍ i.d. 毛管カラムを使用し
て、240mM バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行っ
た。図１により、上記変異種の優れた分離が10分未満で
達成されることが示される。得られた結果により、特に
本発明の緩衝液を使用して開放管CZE 方式で単一の分析
試験で上記変異種の全てが分離されることが示される。
Ｃ、Ｓ及びＦの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｆ、Ｃ及びＳ対照試料の分析
は、処理していない75μｍ i.d. 毛管カラムを使用し
て、240mM バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行っ
た。図１により、上記変異種の優れた分離が10分未満で
達成されることが示される。得られた結果により、特に
本発明の緩衝液を使用して開放管CZE 方式で単一の分析
試験で上記変異種の全てが分離されることが示される。
【００３６】II. 実施例２：ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ
及びＳの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析は、処
理していない25μｍi.d.毛管カラムを使用して、240mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図２に
より、上記変異種の優れた分離が７分未満で達成される
ことが示される。
及びＳの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析は、処
理していない25μｍi.d.毛管カラムを使用して、240mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図２に
より、上記変異種の優れた分離が７分未満で達成される
ことが示される。
【００３７】III.実施例３: ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ
及びＳの比較分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳを、前記のPARAGON(登
録商標）装置及びAPPRAISE（登録商標）装置を使用して
分析した。結果を図３に示した。相対ピーク高さは、図
２及び図３の対応する変異種についての相対ピーク高さ
とほぼ同じであることが認められる〔当業者によって認
められるように、CZE 電気泳動図は“先入れ後出し方式
(first-in-last-art) ”配置を表わす。これはヘモグロ
ビンＡ変異種のピークが左方向から右方向への画法で続
いて現われるからである〕。
及びＳの比較分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳを、前記のPARAGON(登
録商標）装置及びAPPRAISE（登録商標）装置を使用して
分析した。結果を図３に示した。相対ピーク高さは、図
２及び図３の対応する変異種についての相対ピーク高さ
とほぼ同じであることが認められる〔当業者によって認
められるように、CZE 電気泳動図は“先入れ後出し方式
(first-in-last-art) ”配置を表わす。これはヘモグロ
ビンＡ変異種のピークが左方向から右方向への画法で続
いて現われるからである〕。
【００３８】IV. 実施例４: ヘモグロビン変異種Ａ、Ｓ
及びＣの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析を、50
μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、200mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図４に
より、上記変異種の優れた分離が８分未満で達成される
ことが示される。
及びＣの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析を、50
μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、200mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図４に
より、上記変異種の優れた分離が８分未満で達成される
ことが示される。
【００３９】V.実施例５: ヘモグロビンＣヘテロ接合体
患者試料の分析 ヘモグロビンＣヘテロ接合体患者から得た試料の分析
を、50μｍ i.d. 毛管カラムを使用して、200mM バルビ
タール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図５の電気泳
動図によって明らかにされるように、ヘモグロビンＣ変
異種のヘモグロビンＡから優れた分離が約８分未満で達
成された。
患者試料の分析 ヘモグロビンＣヘテロ接合体患者から得た試料の分析
を、50μｍ i.d. 毛管カラムを使用して、200mM バルビ
タール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図５の電気泳
動図によって明らかにされるように、ヘモグロビンＣ変
異種のヘモグロビンＡから優れた分離が約８分未満で達
成された。
【００４０】VI. 実施例６: ヘモグロビン変異種Ａ、Ｓ
及びＣの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析を、50
μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、100mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図６に
より、上記変異種の優れた分離が約５分未満で達成され
ることが示される。
及びＣの分析 ヘモグロビン変異種Ａ、Ｃ及びＳ対照試料の分析を、50
μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、100mM
バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。図６に
より、上記変異種の優れた分離が約５分未満で達成され
ることが示される。
【００４１】VII.実施例７: ヘモグロビンＣヘテロ接合
体患者試料の分析 ヘモグロビンＣヘテロ接合体患者から得た試料の分析
を、50μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、
100mM バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。
図５の電気泳動図によって明らかにされるように、ヘモ
グロビンＣ変異種の優れた分離が約５分未満で達成され
た。
体患者試料の分析 ヘモグロビンＣヘテロ接合体患者から得た試料の分析
を、50μｍ i.d.Supelco製被覆毛管カラムを使用して、
100mM バルビタール緩衝液(pH8.6) を使用して行った。
図５の電気泳動図によって明らかにされるように、ヘモ
グロビンＣ変異種の優れた分離が約５分未満で達成され
た。
【００４２】前記のデータにより、本発明の方法を使用
してCZE 方式で、ヘモグロビン及びヘモグロビンの変異
種を分析できることが例証される。前記の諸実施例は本
発明を限定するものと解釈されるべきでないことが理解
されるべきである。本発明の方法は、本明細書中で使用
した特定の高性能毛管電気泳動装置に限定されない。例
えば、レーザー誘導蛍光に基づいた装置が使用できる。
さらにまた、本発明の方法がヘモグロビン及び／又はヘ
モグロビン変異種を含有する非臨床試料、例えば対照試
料、非人間試料などに対して広い用途を有するという点
で、本発明の方法が臨床試料の分析に限定されると解釈
されるべきではない。さらにまた、当業者に知られてい
る方法を使用して、本発明の方法を、特に試料中のヘモ
グロビン及び／又はヘモグロビン変異種の濃度、並びに
かかる試料中のこれらの相対割合を測定するのに利用す
ることもできることが理解されるべきである。それ自
体、実施例の前記の詳細な説明は、本発明を限定するも
のではなく、限定すると解釈されるべきでもない、当業
者の範囲内の改良、改良物及び均等物は本発明の範囲内
に包含されるとみなされる。例えば試料の分取試料及び
本発明の緩衝液を単一混合物として毛管中に導入するこ
とは、該試料を、該緩衝液を含有する毛管中に導入する
ことと均等であると認められる。
してCZE 方式で、ヘモグロビン及びヘモグロビンの変異
種を分析できることが例証される。前記の諸実施例は本
発明を限定するものと解釈されるべきでないことが理解
されるべきである。本発明の方法は、本明細書中で使用
した特定の高性能毛管電気泳動装置に限定されない。例
えば、レーザー誘導蛍光に基づいた装置が使用できる。
さらにまた、本発明の方法がヘモグロビン及び／又はヘ
モグロビン変異種を含有する非臨床試料、例えば対照試
料、非人間試料などに対して広い用途を有するという点
で、本発明の方法が臨床試料の分析に限定されると解釈
されるべきではない。さらにまた、当業者に知られてい
る方法を使用して、本発明の方法を、特に試料中のヘモ
グロビン及び／又はヘモグロビン変異種の濃度、並びに
かかる試料中のこれらの相対割合を測定するのに利用す
ることもできることが理解されるべきである。それ自
体、実施例の前記の詳細な説明は、本発明を限定するも
のではなく、限定すると解釈されるべきでもない、当業
者の範囲内の改良、改良物及び均等物は本発明の範囲内
に包含されるとみなされる。例えば試料の分取試料及び
本発明の緩衝液を単一混合物として毛管中に導入するこ
とは、該試料を、該緩衝液を含有する毛管中に導入する
ことと均等であると認められる。
【００４３】
【発明の効果】本発明の緩衝液によれば、バルビツール
酸又はバルビツール酸の誘導体を含有することにより、
開放CZE システムにおいてヘモグロビン変異種を効率的
に分離、分析することができる。本発明の分析方法によ
れば、前記緩衝液を用いることにより開放CZE 方式での
分析ができ、ゲルを詰めた毛管カラムを用いる際の種々
の制限もなく、単一の試験でヘモグロビン誘導体を迅
速、効率的に分析できる。
酸又はバルビツール酸の誘導体を含有することにより、
開放CZE システムにおいてヘモグロビン変異種を効率的
に分離、分析することができる。本発明の分析方法によ
れば、前記緩衝液を用いることにより開放CZE 方式での
分析ができ、ゲルを詰めた毛管カラムを用いる際の種々
の制限もなく、単一の試験でヘモグロビン誘導体を迅
速、効率的に分析できる。
【図１】処理されていない毛管カラムを用いた開放CZE
による、240mM 緩衝液(pH8.6)を使用した、ヘモグロビ
ン変異種Ａ、Ｆ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳
動図である。
による、240mM 緩衝液(pH8.6)を使用した、ヘモグロビ
ン変異種Ａ、Ｆ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳
動図である。
【図２】図１について説明した条件を使用したヘモグロ
ビン変異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動
図である。
ビン変異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動
図である。
【図３】酸-Hb PARAGON(登録商標）ゲル電気泳動装置に
よって得た、図２で使用した同じ試料のデンシトメータ
ー読取り図である。
よって得た、図２で使用した同じ試料のデンシトメータ
ー読取り図である。
【図４】市販の被覆毛管カラムを用いた開放CZE によ
る、200mM 緩衝液(pH8.6) を使用した、ヘモグロビン変
異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動図であ
る。
る、200mM 緩衝液(pH8.6) を使用した、ヘモグロビン変
異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動図であ
る。
【図５】処理されていない毛管カラムを用いた開放管CZ
E による、200mM 緩衝液(pH8.6）を使用した、ヘモグロ
ビン変異種Ｃヘテロ接合体患者試料の電気泳動図であ
る。
E による、200mM 緩衝液(pH8.6）を使用した、ヘモグロ
ビン変異種Ｃヘテロ接合体患者試料の電気泳動図であ
る。
【図６】市販の被覆毛管カラムを用いた開放管CZE によ
る、100mM 緩衝液(pH8.6) を使用した、ヘモグロビン変
異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動図であ
る。
る、100mM 緩衝液(pH8.6) を使用した、ヘモグロビン変
異種Ａ、Ｓ及びＣを含有する対照試料の電気泳動図であ
る。
【図７】図６の条件を使用した図５の患者試料の電気泳
動図である。
動図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/72 Ａ
Claims (27)
- 【請求項１】 毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロビ
ン及びヘモグロビンの変異種の分析方法であって、 (a) ヘモグロビン及びヘモグロビンの変異種を含有する
試料を毛管に導入する工程であって、前記毛管が緩衝液
を含有するものであり、該緩衝液がバルビツール酸、バ
ルビツール酸誘導体、バルビツール酸とバルビツール酸
誘導体の組合わせ及びバルビツール酸誘導体の組合わせ
からなる群から選択される化合物を少なくとも約100 mM
含有するものであり、該緩衝液が少なくとも約8.0 のpH
を有するものである前記工程； (b) 前記毛管に対して、前記試料中に存在し得るヘモグ
ロビン及びヘモグロビンの変異種のそれぞれを互いに分
離させるのに十分な電圧の電場を印加する工程；及び (c) 存在する前記ヘモグロビン及びヘモグロビンの変異
種を検出する工程を有してなることを特徴とする毛管ゾ
ーン電気泳動法によるヘモグロビン及びヘモグロビンの
変異種の分析方法。 - 【請求項２】 前記化合物が、5,5-ジメチルバルビツー
ル酸、フェノバルビタール、メフォバルビタール、バル
ビタール、アモバルビタール、ベータバルビタール、セ
コバルビタール、ペントバルビタール及びチオバルビタ
ールからなる群から選択されるものである請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 前記化合物が5,5-ジエチルバルビツール
酸である請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 前記化合物のイオン強度が約100 mM〜約
250 mMである請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 前記化合物のイオン強度が約175 mM〜約
250 mMである請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 前記化合物のイオン強度が約240 mMであ
る請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 前記緩衝液のpHが約8.0 〜約10.0である
請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 前記緩衝液のpHが約8.0 〜約9.0 である
請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 前記緩衝液のpHが約8.5 〜約8.7 である
請求項１記載の方法。 - 【請求項１０】 前記緩衝液が少なくとも１種のpH調整
剤をさらに含有してなるものである請求項１記載の方
法。 - 【請求項１１】 前記毛管の内径が約２〜約2000μｍで
ある請求項１記載の方法。 - 【請求項１２】 前記電場の電圧が前記毛管の単位長さ
（cm）あたり約10ボルト〜約1000ボルトである請求項１
記載の方法。 - 【請求項１３】 前記毛管が石英ガラス、アルミナ、ベ
リリウム、テフロン(登録商標名)、ガラス及びこれらの
組合わせからなる群から選択される材料から構成される
ものである請求項１記載の方法。 - 【請求項１４】 前記毛管の内壁が被覆材料で被覆され
ている請求項１記載の方法。 - 【請求項１５】 前記試料を含有する前記毛管に対して
前記電場を印加した後の前記Hb（ヘモグロビン）の検出
時間が約20分未満である請求項１記載の方法。 - 【請求項１６】 前記ヘモグロビン変異種の少なくとも
１種が、ヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビ
ンＳ及びヘモグロビンＣからなる群から選択されるもの
である請求項１記載の方法。 - 【請求項１７】 毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロ
ビン及びヘモグロビンの変異種分析用の緩衝液であっ
て、 a)i) バルビツール酸； ii) バルビツール酸誘導体； iii)バルビツール酸と前記バルビツール酸誘導体の組合
わせ；及び iv) 前記バルビツール酸誘導体の組合わせ；からなる群
から選択される化合物を少なくとも約100 mM含有してな
り、該緩衝液のpHが少なくとも約8.0 であることを特徴
とする毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロビン及びヘ
モグロビンの変異種分析用の緩衝液。 - 【請求項１８】 前記化合物が5,5-ジエチルバルビツー
ル酸、フェノバルビタール、メフォバルビタール、バル
ビタール、アモバルビタール、ベータバルビタール、セ
コバルビタール、ペントバルビタール及びチオバルビタ
ールからなる群から選択されるものである請求項１７記
載の緩衝液。 - 【請求項１９】 前記化合物が5,5-ジエチルバルビツー
ル酸である請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２０】 前記化合物のイオン強度が約100 mM〜
約250 mMである請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２１】 前記化合物のイオン強度が約175 mM〜
約250 mMである請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２２】 前記化合物のイオン強度が約240 mMで
ある請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２３】 前記の緩衝液のpHが約8.0 〜約10.0で
ある請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２４】 前記の緩衝液のpHが約8.0 〜約9.0 で
ある請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２５】 前記の緩衝液のpHが約8.5 〜約8.7 で
ある請求項１７記載の緩衝液。 - 【請求項２６】 前記緩衝液が少なくとも１種のpH調整
剤をさらに含有してなるものである請求項１７記載の緩
衝液。 - 【請求項２７】 ヘモグロビンＡ、ヘモグロビンＦ、ヘ
モグロビンＳ及びヘモグロビンＣからなる群から選択さ
れるヘモグロビン変異種の少なくとも１種をさらに含有
してなる請求項１７記載の緩衝液。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/870,531 US5202006A (en) | 1992-04-17 | 1992-04-17 | Analysis of hemoglobin variants by capillary zone electrophoresis |
| US870,531 | 1992-04-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06102243A JPH06102243A (ja) | 1994-04-15 |
| JPH0823549B2 true JPH0823549B2 (ja) | 1996-03-06 |
Family
ID=25355578
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5112378A Expired - Lifetime JPH0823549B2 (ja) | 1992-04-17 | 1993-04-16 | 毛管ゾーン電気泳動法によるヘモグロビン変異種の分析方法及びその分析用緩衝液 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5202006A (ja) |
| EP (1) | EP0566289B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0823549B2 (ja) |
| AT (1) | ATE134039T1 (ja) |
| CA (1) | CA2091944A1 (ja) |
| DE (1) | DE69301491T2 (ja) |
| ES (1) | ES2086190T3 (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5540825A (en) * | 1993-08-02 | 1996-07-30 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Noise suppressing capillary separation system |
| ATE180056T1 (de) * | 1993-10-07 | 1999-05-15 | Beckman Coulter Inc | Verwendung von kapillarer elektroforese zur quantitativen bestimmung von proteinkomponenten und des gesamten proteingehaltes in flussigkeiten |
| WO1995028637A1 (en) * | 1994-04-13 | 1995-10-26 | Beckman Instruments, Inc. | Analysis of analytes in biological fluids |
| US5536382A (en) * | 1994-05-23 | 1996-07-16 | Advanced Molecular Systems, Inc. | Capillary electrophoresis assay method useful for the determination of constituents of a clinical sample |
| US5431793A (en) * | 1994-07-29 | 1995-07-11 | Beckman Instruments, Inc. | Quantitative analysis of glycosylated hemoglobin by immunocappillary electrophoresis |
| FR2819889B1 (fr) * | 2001-01-19 | 2003-08-01 | Sebia Sa | Procede d'electrophorese capillaire en solution libre a ph alcalin |
| FR2878033B1 (fr) * | 2004-11-18 | 2007-05-04 | Sebia Sa | Procede d'analyse de l'hemoglobine par electrophorese capillaire, trousse pour electrophorese capillaire et utilisation de ralentisseur de flux dans un tel procede |
| US20070014699A1 (en) | 2005-06-23 | 2007-01-18 | Beckman Coulter, Inc, | Methods and apparatus for improving the sensitivity of capillary zone electrophoresis |
| WO2008139866A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-20 | Arkray, Inc. | 電気泳動チップおよび電気泳動装置 |
| KR102291911B1 (ko) * | 2016-09-08 | 2021-08-23 | 헤멕스 헬스, 인크. | 진단 시스템 및 방법 |
| US10349589B2 (en) | 2016-09-08 | 2019-07-16 | Hemex Health, Inc. | Diagnostics systems and methods |
| CN106546755B (zh) * | 2016-11-18 | 2018-06-29 | 曲阜师范大学 | 一种潜血速测用毛细管阵列制备方法及应用 |
| WO2020264182A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | Hemex Health, Inc. | Diagnostics systems and methods |
| WO2024081928A1 (en) * | 2022-10-14 | 2024-04-18 | Prolong Pharmaceuticals Llc | A stable hemoglobin protein composition |
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|---|---|---|---|---|
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