JPH08103266A - Yeast having antimicrobial activity - Google Patents
Yeast having antimicrobial activityInfo
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- JPH08103266A JPH08103266A JP6322125A JP32212594A JPH08103266A JP H08103266 A JPH08103266 A JP H08103266A JP 6322125 A JP6322125 A JP 6322125A JP 32212594 A JP32212594 A JP 32212594A JP H08103266 A JPH08103266 A JP H08103266A
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する酵母
に関する。酵母は、食品およびワインなどのアルコール
飲料の製造に用いられており、本発明は、食品およびア
ルコール飲料などの製造分野に利用できる。また、医
薬、農薬などの分野での利用可能性も有する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to yeast having antibacterial activity. Yeast is used for producing alcoholic beverages such as food and wine, and the present invention can be used in the field of producing foods and alcoholic beverages. It also has potential applications in fields such as medicine and agricultural chemicals.
【0002】[0002]
【従来の技術】抗菌活性を有する酵母に関しては、ナフ
サキノン系抗生物質を生産するオーレオバシディウム(A
ureobasidium) 属類縁の新菌種酵母〔ジャーナル・オブ
・アンチバイオティクス(J.Antibiotics) 37 ,No.4, 32
5(1984)〕、クリベロマイセス(Kluyveromyces) 属およ
びクロエケラ(Kloeckera) 属に属する酵母〔アプライド
・エンバイランメンタル・マイクロバイオロジー(App.
Environ.Microbiol.) 50,No.5, 1330(1985) 〕およびサ
ッカロマイセス属に属する酵母〔エー・エス・ビー・シ
ー・ジャーナル(ASBC Journal)42 ,No.4, 164(1984)〕
などが知られている。2. Description of the Related Art Regarding yeast having antibacterial activity, aureobasidium (A) which produces a naphthaquinone antibiotic is used.
ureobasidium) A new strain of yeast related to the genus (J. Antibiotics 37 , No. 4, 32
5 (1984)], yeast belonging to the genus Kluyveromyces and the genus Kloeckera (Applied Environmental Microbiology (App.
Environ.Microbiol.) 50 , No. 5, 1330 (1985)] and yeast belonging to the genus Saccharomyces (ASBC Journal 42 , No. 4, 164 (1984))
Etc. are known.
【0003】[0003]
【発明が解決しようとする課題】一般に、酒類、アルコ
ールの製造には、酵母による発酵の工程が必須である。
この発酵工程においては、しばしば野生酵母ならびに乳
酸菌、酢酸菌などの野生細菌による汚染が問題となる。
このうち、野生酵母による汚染の問題を解決するため
に、既に、優良キラーワイン酵母が実用化されている
〔ジャーナル・オブ・ファーメンテーション・テクノロ
ジー(J.Ferm.Technol.)63 ,No.5,421 (1985)、ヴァイ
ン・ヴィセンシャフト (WeinWissenschaft)No.4, 258(1
985)、インターナショナル・コングレス・オブ・ヴァイ
ン・アンド・ワイン(International Congress of vine
and wine) (OIV総会) 要旨集, p.23 (1985) 〕。しか
し、キラー酵母によって生産、分泌されるキラー物質
は、酵母には有効であるが、細菌に対して抗菌活性を示
さないため、細菌による汚染の問題は、既知のキラー酵
母によって解決することができない。従って、酵母、細
菌の両者に対して抗菌活性を有する醸造用酵母の育種
は、酒類、アルコールの製造上大変重要である。Generally, a fermentation process with yeast is indispensable for the production of alcoholic beverages and alcohols.
In this fermentation process, contamination with wild yeasts and wild bacteria such as lactic acid bacteria and acetic acid bacteria is often a problem.
Among these, excellent killer wine yeast has already been put to practical use in order to solve the problem of contamination by wild yeast [Journal of Fermentation Technology (J.Ferm.Technol.) 63 , No.5,421. (1985), Wein Wissenschaft No. 4, 258 (1)
985), International Congress of Vine and Wine
and wine) (OIV General Assembly), p.23 (1985)]. However, the killer substances produced and secreted by killer yeasts, although effective against yeasts, do not exhibit antibacterial activity against bacteria, so the problem of bacterial contamination cannot be solved by known killer yeasts. . Therefore, breeding of brewing yeast having antibacterial activity against both yeast and bacteria is very important for the production of alcoholic beverages and alcohol.
【0004】[0004]
【題解を解決するための手段】本発明者は、細菌に対し
て抗菌活性を有する酵母の検索を行った結果、抗菌活性
を有する酵母として、ブドウ果皮より3株を取得し、本
発明を完成した。[Means for Solving the Problem] As a result of searching yeast having antibacterial activity against bacteria, the present inventor obtained three strains from grape skin as yeast having antibacterial activity and completed the present invention. did.
【0005】以下、本発明を詳細に説明する。本発明
は、細菌に対して抗菌活性を有するキャンディダ・ピン
トロペシー(Candida pintolopesii)、キャンディダ・フ
ェニカ(Candida fennica) およびキャンディダ・スピー
シーズ(Candida sp.)A-31-2(FERM BP-1441 号) を提供
する。The present invention will be described in detail below. The present invention has antibacterial activity against bacteria (Candida pintolopesii), Candida fennica and Candida species (Candida sp.) A-31-2 (FERM BP-1441 No. ) I will provide a.
【0006】本発明の酵母菌株は、具体的にはそれぞ
れ、キャンディダ・スピーシーズA-31-2、キャンディダ
・ピントロペシーB-48-2、キャンディダ・フェニカN-6-
1 があげられ、次のような菌学的性質を示す。The yeast strains of the present invention are specifically, respectively, Candida species A-31-2, Candida pintrophesi B-48-2 and Candida phenica N-6-.
1 is mentioned and shows the following mycological properties.
【0007】I. キャンディダ・スピーシーズ A-31-2 本菌株は、山梨県においてブドウの果皮より分離された
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は光沢
のあるクリーム白色を呈し、カロチノイド色素の生成は
認められない。光学顕微鏡観察においては、亜球形ある
いは楕円形で、長さ 2.5〜4.5 μm 、幅1〜3 μm の栄
養細胞が認められる。栄養細胞は多極出芽によって増殖
する。真性菌糸ならびに偽菌糸は認められない。好気
性。テレオモルフは観察されない。本菌株は、硝酸塩、
イノシトールを資化できない。I. Candida species A-31-2 This strain was isolated from grape skin in Yamanashi prefecture, and its mycological properties are as follows. When cultivated on malt extract agar at 25 ℃, the colonies show a shiny cream white color and no carotenoid pigment is formed. Under an optical microscope, vegetative cells with a subspherical or elliptical shape with a length of 2.5 to 4.5 μm and a width of 1 to 3 μm are observed. Vegetative cells proliferate by multipolar sprouting. No true hyphae or pseudohyphae are observed. Aerobic. No teleomorphs are observed. This strain is nitrate,
Can't assimilate inositol.
【0008】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第3版」によって検索した結果、
上記の菌学的性質からキャンディダ(Candida) 属に属す
ると結論される。本菌株をキャンディダ・スピーシーズ
(Candida sp. )A-31-2(以下A-31-2という) と命名し、
微工研に、昭和62年8月7日付でFERM BP-1441号として
寄託した。[0008] As a result of searching this strain by "The Easts a taxonomy study 3rd edition",
From the above mycological properties, it is concluded that it belongs to the genus Candida. This strain is Candida species
(Candida sp.) A-31-2 (hereinafter referred to as A-31-2),
FERM BP-1441 was deposited with the Institute of Microscopy on August 7, 1987.
【0009】II. キャンディダ・ピントロペシーB-48-2 本菌株は、山梨県白根町においてブドウの果皮より分離
されたもので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽
エキス寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落
はクリーム色を呈する。光学顕微鏡観察においては、亜
球形あるいは卵形の栄養細胞のみ認められ、真性菌糸な
らびに偽菌糸は認められない。栄養細胞は多極出芽によ
って増殖する。好気性。テレオモルフは観察されず、カ
ロチノイド系色素の生成は認められない。本菌株は、デ
ィアゾニウム・ブルーB (DBB) 試験は陰性で、硝酸塩を
資化できない。イノシトール、エリスリトール、マルト
ース、マンニトール、ガラクトース、トレハロース、セ
ロビオース、キシロースの各種糖類を資化できない。グ
ルコースの発酵能を有するが、サッカロースの発酵能を
欠く。生育温度範囲は10〜37℃。ビタミン要求性を示
し、ビタミン非含有培地では生育できない。II. Candida pintrophesi B-48-2 This strain was isolated from grape skin in Shirane Town, Yamanashi Prefecture, and its mycological properties are as follows. When cultivated on malt extract agar at 25 ° C, the colonies show cream color. In the light microscopic observation, only subglobular or oval vegetative cells are observed, and true hyphae and pseudohyphae are not observed. Vegetative cells proliferate by multipolar sprouting. Aerobic. No teleomorphs were observed and no carotenoid pigment formation was observed. This strain has a negative diazonium blue B (DBB) test and cannot utilize nitrate. It cannot utilize various sugars such as inositol, erythritol, maltose, mannitol, galactose, trehalose, cellobiose, and xylose. It has the ability to ferment glucose, but lacks the ability to ferment sucrose. Growth temperature range is 10-37 ℃. It is auxotrophic for vitamins and cannot grow on medium containing no vitamins.
【0010】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第3版」に従って検索したとこ
ろ、上記の菌学的性質からキャンディダ・ピントロペシ
ー(Candida pintolopesii var. pintolopesii) と同定
し、キャンディダ・ピントロペシーB-48-2 (以下B-48-2
という) と命名して、微工研に昭和62年8月7日付でFE
RM BP-1440号として寄託した。[0010] When this strain was searched according to "The Easts a taxonomy study 3rd edition", it was identified as Candida pintolopesii var.・ Pintrophesy B-48-2 (hereinafter B-48-2
FE) on August 7, 1987
Deposited as RM BP-1440.
【0011】III.キャンディダ・フェニカN-6-1 本菌株は、山梨県においてブドウの果実より分離された
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は白色
を呈する。光学顕微鏡観察においては、真性菌糸がよく
発育し、まれに偽菌糸も観察される。栄養細胞は、真性
菌糸あるいは偽菌糸より、出芽型に形成される。同時
に、栄養細胞は多極出芽型の増殖様式を示す。栄養細胞
は球形、卵形あるいは楕円形を呈する。好気性。テレオ
モルフは観察されず、カロチノイド系色素の生成は見ら
れない。本菌株は、DBB 試験は陰性を示し、硝酸塩を資
化できない。また、イノシトール、L-ラムノース、ラク
トース、ガラクチトールの各種糖類は資化できないが、
エリスリトール、ラフィノースは資化できる。III. Candida phenica N-6-1 This strain was isolated from grape fruits in Yamanashi Prefecture, and its mycological properties are as follows. When cultivated on malt extract agar medium at 25 ° C, the colony turns white. In observation with an optical microscope, true hyphae grow well, and pseudohyphae are rarely observed. Vegetative cells are formed in a budding form from true hyphae or pseudohyphae. At the same time, vegetative cells exhibit a multipolar sprouting growth pattern. Vegetative cells have a spherical, oval or elliptical shape. Aerobic. No teleomorphs are observed and no carotenoid pigment formation is observed. This strain shows a negative DBB test and cannot utilize nitrate. Also, various sugars such as inositol, L-rhamnose, lactose and galactitol cannot be assimilated,
Erythritol and raffinose can be assimilated.
【0012】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第3版」に従って検索した結果、
上記の菌学的性質から、キャンディダ・フェニカ(Cand
idafennica ) と同定し、キャンディダ・フェニカN-6-1
( 以下N-6-1 という) と命名して、微工研に昭和62年
8月7日付でFERM BP-1442号として寄託した。[0012] As a result of searching this strain according to "The Easts a Taxonomy Study 3rd Edition",
From the above mycological properties, Candida Phenica (Cand
idafennica) and identified as Candida Fenica N-6-1
It was named (hereinafter referred to as N-6-1) and was deposited with MIC on August 7, 1987 as FERM BP-1442.
【0013】ここで得られたN-6-1 株は細菌、酵母に、
A-31-2株は細菌、酵母、カビに対して抗菌活性を示す。
また、B-48-2株はメチレンブルー存在下でのみバチルス
・ズブティリス(Bacillus subtilis) に抗菌活性を示
す。これらの酵母菌株、特にA-31-2は、例えば、細胞融
合、遺伝子操作などによる、醸造用酵母への上記の抗菌
活性の導入の際の材料として用いることができる。ま
た、これらの生産する抗菌性物質または酵母菌体そのも
のを農薬、動物薬、医薬、食品保存料などとして利用で
きる。The N-6-1 strain obtained here is used for bacteria and yeasts.
The A-31-2 strain exhibits antibacterial activity against bacteria, yeast and mold.
The B-48-2 strain shows antibacterial activity against Bacillus subtilis only in the presence of methylene blue. These yeast strains, particularly A-31-2, can be used as a material for introducing the above-mentioned antibacterial activity into brewing yeast by, for example, cell fusion, gene manipulation, or the like. Moreover, the antibacterial substances produced by these or the yeast cells themselves can be used as pesticides, veterinary drugs, pharmaceuticals, food preservatives, and the like.
【0014】本発明の抗菌活性を有する酵母の培養は、
通常の酵母の培養方法に従って行うことができる。たと
えば炭素源としては、グルコース、フラクトース、シュ
ークロース、グリセリン、マルトース、ガラクトース、
ソルビトールなどのうち各酵母菌株が資化可能なものを
用いる。窒素源としては、NH4Cl 、(NH4)2SO4 、カザミ
ノ酸、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、マルトエキ
ス、バクトトリプトン、コーンスティプリカー、ソイビ
ーンミール、ファーマメディアなどが、その他の栄養源
としては、K2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4 、ビタミン
B1、MgCl2 、ビオチンなどが使用できる。また、ブドウ
などの果実より得た果汁またはこれを濃縮したものを培
地として用いることもできる。培養はpH 2〜8 、温度10
〜35℃ (好適にはpH 5.0〜6.5 、温度20〜30℃) で24〜
90時間行われる。いずれの菌株においても静置培養した
場合、抗菌活性は微弱または不検出なので、静置培養よ
りも通気培養が望ましい。The culture of yeast having the antibacterial activity of the present invention comprises
It can be performed according to a usual yeast culture method. For example, carbon sources include glucose, fructose, sucrose, glycerin, maltose, galactose,
Among sorbitol, those that can be assimilated by each yeast strain are used. As the nitrogen source, NH 4 Cl, (NH 4 ) 2 SO 4, casamino acid, yeast extract, peptone, meat extract, malt extract, Bacto-tryptone, corn stay pre car, soybean meal, etc. Pharma media, other Nutrient sources include K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 , NaCl, MgSO 4 , vitamins
B 1 , MgCl 2 , biotin, etc. can be used. Also, fruit juice obtained from fruits such as grapes or a concentrate thereof can be used as a medium. Culture pH 2-8, temperature 10
~ 35 ℃ (preferably pH 5.0 ~ 6.5, temperature 20 ~ 30 ℃) 24 ~
90 hours. Aeration culture is preferable to static culture because static antibacterial activity is weak or undetectable when static culture is performed in any strain.
【0015】また、いずれの菌株においても、スラント
など固体培地上で保存すると、抗菌活性が低下するの
で、グリセリン中で低温保存 (最終グリセリン濃度10〜
40% で-30〜-80 ℃) することが望ましい。Further, in any of the strains, antibacterial activity is lowered when stored on a solid medium such as slant, so that the strain is stored at low temperature in glycerin (final glycerin concentration of 10-
40% to -30 to -80 ° C) is desirable.
【0016】以下に本発明の実施例を示す。Examples of the present invention will be shown below.
【0017】[0017]
実施例1 畑より摘みとった果粒2個分のブドウ果皮をペニシリン
G 100 単位/ml、ストレプトマイシン100 μg /ml含有
のYPD 培地 (グルコース2%、ペプトン2%、酵母エキス1
%、pH 6.0) 3mlに加えて、よく振り混ぜた後、25℃で
7日間静置培養した。その後、培養液をYPD 寒天培地
(YPD 培地に寒天2%を添加したもの、pH6.0)上に、シャ
ーレ1個当り酵母細胞数 100〜150 細胞になるように希
釈して塗布し、25℃でインキュベートした。5日後生じ
たコロニーをグルコースを1%含有するニュートリエント
ブロス寒天培地 (極東粉末ブイヨン2%、寒天2%、pH 6.
0; 以下NB寒天培地という) に105 細胞/mlになるよう
にバチルス・ズブティリスIAM1070 を接種したプレート
上にレプリカし、25℃で 2〜4 日間培養した。抗菌活性
を示すコロニー (コロニー周辺に、バチルス・ズブティ
リスの生育阻止円が認められたもの。栄養の取り合いに
よるバチルス・ズブティリスの生育不良のケースを除外
するために、阻止円が明瞭なもののみを選出した) を分
離し、単細胞分離を行った後、以下の3つの方法で抗菌
活性を検定した。Example 1 Penicillin was prepared from the grape skins of two grains picked from the field.
YPD medium containing G 100 units / ml and streptomycin 100 μg / ml (glucose 2%, peptone 2%, yeast extract 1
%, PH 6.0), shaken well, and then statically cultured at 25 ° C. for 7 days. Then, add the culture solution to YPD agar medium.
It was diluted and coated on (YPD medium to which 2% agar was added, pH 6.0) so that the number of yeast cells was 100 to 150 cells per dish, and the plate was incubated at 25 ° C. The colonies formed after 5 days were fed with a nutrient broth agar medium containing 1% glucose (Far East powder broth 2%, agar 2%, pH 6.
0; hereinafter referred to as NB agar medium) was replicated on a plate inoculated with Bacillus subtilis IAM1070 at 10 5 cells / ml, and cultured at 25 ° C. for 2 to 4 days. Colonies showing antibacterial activity (Bacillus subtilis growth inhibitory circles were observed around the colony. Only those with a clear inhibitory circle were selected to exclude cases of poor growth of Bacillus subtilis due to nutritional conflict. Was isolated and single cell separation was performed, and the antibacterial activity was assayed by the following three methods.
【0018】以下の3つの方法で、単細胞分離を行った
種々酵母の抗菌活性を検定し、抗菌活性を示す酵母とし
てA-31-2、B-48-2およびN-6-1 を選択した。 (1)方法I YPD 寒天培地上で25℃で3日間培養した酵母菌株を、1
白金耳ずつ、第1表に示した被検菌105 細胞/mlを含
む寒天培地上に塗布し、30℃で2日間、被検菌にロイコ
ノストック・オエノスを用いた場合は25℃で 3〜4 日間
それぞれ培養した。ここでいう被検菌105 細胞/mlを含
む寒天培地とは、乳酸菌以外の細菌は1%グルコースお
よび50mMクエン酸−リン酸緩衝液を含有するNB寒天培
地、乳酸菌はBL寒天培地(pH 7.2 、ただしロイコノスト
ック・オエノスについては塩酸でpH4.8に調整する。栄
研製) 、カビはマルトエキス寒天培地 (マルトエキス2
%、ペプトン0.1%、グルコース2%、寒天2%; pH5.0)、酵
母は100mM クエン酸−リン酸緩衝液含有YPD 寒天培地
(pH6.0)にそれぞれ105 細胞/mlになるように被検菌
を接種したものである。The antibacterial activity of various yeasts subjected to single cell isolation was assayed by the following three methods, and A-31-2, B-48-2 and N-6-1 were selected as yeasts showing antibacterial activity. . (1) Method I YPD 1 strain was prepared by culturing the yeast strain on an agar medium at 25 ° C for 3 days.
Each platinum loop was applied on an agar medium containing 10 5 cells / ml of the test bacterium shown in Table 1, and kept at 30 ° C for 2 days. At 25 ° C when Leuconostoc oenos was used as the test bacterium. Each culture was carried out for 3 to 4 days. Here, the agar medium containing test bacteria 10 5 cells / ml to say, the bacteria other than lactic acid 1% glucose and 50mM citrate - NB agar medium containing phosphate buffer, lactic acid bacteria BL agar medium (pH 7.2 However, for Leuconostoc oenos, adjust the pH to 4.8 with hydrochloric acid. Eiken), mold for malto extract agar medium (malto extract 2)
%, Peptone 0.1%, glucose 2%, agar 2%; pH 5.0), yeast is YPD agar medium containing 100 mM citrate-phosphate buffer.
(pH 6.0) was inoculated with the test bacteria at 10 5 cells / ml each.
【0019】培養後、塗りつけた酵母菌株の周辺に生ず
る、被検菌の増殖阻止領域を観察した。抗菌活性は、被
検菌の増殖阻止の程度によって次のように表示した。 +++ : 活性非常に強い、++ : 活性強い、+:活性中程
度、±:微弱な活性あり、−:活性なし 結果を第1表に示す。After culturing, the growth-inhibiting region of the test bacteria was observed around the smeared yeast strain. The antibacterial activity was expressed as follows depending on the degree of growth inhibition of the test bacteria. +++: Very strong activity, ++: Strong activity, +: Moderate activity, ±: Weak activity, −: No activity. The results are shown in Table 1.
【0020】(2)方法II(ウェル・テスト−1) YPD 培地中で28℃、2日間振とう培養した各酵母菌株
を、各々5mlのYPD 培地を含むL 型試験管に、1×10
6 細胞/mlの菌濃度になるよう接種し、28℃で振とう培
養を行った。培養はB-48-2およびN-6-1 は36時間、A-31
-2は60時間行った。培養後、各培養液を0.45μのセルロ
ースアセテート製メンブレインフィルターでろ過し、凍
結乾燥により約5倍に濃縮した後、各濃縮液を、方法I
と同様な、被検菌105 細胞/mlを接種した寒天平板上
にあけた穴(直径10mm)の中に、200 μl ずつ各々注
入し、30℃で培養した。2日後、穴の周囲に生じた、被
検菌の増殖阻止円の直径を測定して、抗菌活性の強さと
した(活性のないものは−として表示した)。結果を第
1表に示す。(2) Method II (Well Test-1) Each yeast strain that had been shake-cultured in a YPD medium at 28 ° C. for 2 days was placed in an L-type test tube containing 5 ml of each YPD medium at 1 × 10 5.
The cells were inoculated to a bacterial concentration of 6 cells / ml, and cultured at 28 ° C with shaking. 36 hours for B-48-2 and N-6-1, A-31
-2 went for 60 hours. After culturing, each culture solution was filtered through a 0.45μ cellulose acetate membrane filter and concentrated to about 5 times by freeze-drying.
In the same manner as in the above, 200 μl of each was injected into each hole (diameter 10 mm) formed on the agar plate inoculated with 10 5 cells / ml of the test bacterium, and cultured at 30 ° C. Two days later, the diameter of the growth-inhibiting circle of the test bacterium formed around the hole was measured and defined as the strength of the antibacterial activity (the one having no activity is represented by-). The results are shown in Table 1.
【0021】(3)方法III(ウェル・テスト−2) 被検菌を接種した寒天培地中にメチレンブルーを含有
(酵母、カビ用のプレートでは0.003%、細菌用のプレー
トでは、0.0015%)する以外は方法IIと同様にして抗菌活
性を測定した。ただし、この方法では、穴の周囲に生じ
た、死菌体に取り込まれたメチレンブルーによる円の直
径を測定して抗菌活性の強さとした( 活性のないものは
−として表示した)。方法I、II、と共に方法IIIにより
抗菌活性を検定した結果を第1表に示す。(3) Method III (Well Test-2) Other than containing methylene blue in the agar medium inoculated with the test bacteria (0.003% for yeast and mold plates and 0.0015% for bacteria plates) Measured the antibacterial activity in the same manner as in Method II. However, in this method, the diameter of the circle formed around the hole due to methylene blue taken up by dead cells was measured and defined as the strength of the antibacterial activity (the one with no activity is indicated as-). Table 1 shows the results of assaying antibacterial activity by Method III together with Methods I and II.
【0022】[0022]
【表1】 [Table 1]
【0023】A-31-2株は細菌、酵母、カビに対して抗菌
活性を示す。N-6-1 株は細菌、酵母に対して抗菌活性を
示し、B-48-2株は、メチレンブルー存在下でのみバチル
ス・ズブティリスに抗菌活性を示す。The A-31-2 strain exhibits antibacterial activity against bacteria, yeasts and molds. The N-6-1 strain shows antibacterial activity against bacteria and yeast, and the B-48-2 strain shows antibacterial activity against Bacillus subtilis only in the presence of methylene blue.
【0024】実施例2 YPD 培地中で28℃、2日間振とう培養した各酵母菌株
を、各々5mlのYPD 培地を含むL型試験管2本ずつに、
1×106 細胞/mlの菌濃度になるように接種し、28℃
で、一方は振とう培養し、一方は通気培養した。培養開
始後24、36、48、60時間目に、各々のL 型試験管から、
それぞれ0.5 mlの培養液を採取し、0.45μのセルロース
アセテート製メンブレインフィルターでろ過し、各ろ液
を、105細胞/mlのバチルス・ズブティリスIAM1070
を接種したNB寒天培地(1% グルコースと50mMクエン酸−
リン酸緩衝液含有、pH6.0)およびキャンディダ・グラブ
ラータ IFO 0622 を接種したYPD 寒天培地(100mM クエ
ン酸−リン酸緩衝液含有、pH6.0)上にあけた穴の中に、
200 μl ずつ各々注入し、30℃で培養した。抗菌活性の
判定は、A-31-2およびN-6-1 については実施例1の方法
IIに従って、B-48-2については方法IIIに従ってそれぞ
れ行った。結果を第2表に示す。Example 2 Each of the yeast strains, which had been shake-cultured at 28 ° C. for 2 days in YPD medium, was added to two L-type test tubes each containing 5 ml of YPD medium.
Inoculate to a bacterial concentration of 1 × 10 6 cells / ml, 28 ℃
One was shake-cultured and the other was aeration-cultured. At 24, 36, 48 and 60 hours after the start of culturing, from each L-shaped test tube,
0.5 ml of each culture solution was collected and filtered through a 0.45μ cellulose acetate membrane filter, and each filtrate was treated with 10 5 cells / ml of Bacillus subtilis IAM1070.
Inoculated NB agar (1% glucose and 50 mM citrate-
Phosphate buffer containing, pH 6.0) and Candida glabrata IFO 0622 inoculated YPD agar medium (100 mM citrate-phosphate buffer containing, pH 6.0) in the holes drilled,
200 μl of each was injected and cultured at 30 ° C. Antibacterial activity was determined by the method of Example 1 for A-31-2 and N-6-1.
II and for B-48-2 according to Method III, respectively. The results are shown in Table 2.
【0025】[0025]
【表2】 [Table 2]
【0026】いずれの酵母菌株においても振とう培養の
方が抗菌活性が高い。A-31-2株では抗細菌活性は、60時
間目まで上昇し続けた。また、抗酵母活性は36時間目以
降一定に推移した。各株は36時間目に活性のピークを有
していた。In any of the yeast strains, shaking culture has higher antibacterial activity. The antibacterial activity of the A-31-2 strain continued to increase until the 60th hour. The anti-yeast activity remained constant after 36 hours. Each strain had a peak activity at 36 hours.
【0027】実施例3 各酵母菌株の示す抗菌活性が、培養液中に存在する有機
酸や高級アルコールなどによるものではないことを確認
するために、実施例2と同様に各酵母菌株を培養し、各
酵母菌株の抗菌活性最高時の培養液、つまり、A-31-2は
60時間目、B-48-2およびN-6-1 は36時間目に採取した培
養液の有機酸、高級アルコールなどの分析およびバチル
ス・ズブティリスIAM1070 およびキャンディダ・グラブ
ラータIFO 0622に対する抗菌活性の検定を行った。対照
として、各アルコール類、有機酸類を、各々培養液の分
析値と等量ずつ、YPD 培地に添加したサンプルについて
も同様に抗菌活性の検定を行った。Example 3 Each yeast strain was cultured in the same manner as in Example 2 in order to confirm that the antibacterial activity exhibited by each yeast strain was not due to the organic acids and higher alcohols present in the culture solution. , The culture solution of the antibacterial activity of each yeast strain, that is, A-31-2
Analysis of organic acids, higher alcohols, etc. of the culture solution collected at 60 hours and 36 hours at B-48-2 and N-6-1 and assay of antibacterial activity against Bacillus subtilis IAM1070 and Candida glabrata IFO 0622 I went. As a control, the same antibacterial activity was assayed for a sample in which each alcohol and organic acid were added to the YPD medium in an amount equal to the analytical value of the culture solution.
【0028】抗菌活性の検定法は、B-48-2については方
法IIIにより、その他の菌株については方法IIによって
行った。また酢酸、エタノール、β−フェネチルアルコ
ールについては方法IIとIIIによって検定した。有機酸
分析は液体クロマトグラフィー法(カラム:Shodex C-8
11、検出器: 可視、UV検出器 UVIDEC100-VI、検出法:B
TB発色法) 、エタノールの分析はガスクロマトグラフィ
ー法〔カラム:20% APS-201/FlusionT (60〜80mesh) 、
検出器:FID検出器〕、高級アルコールの分析はガスクロ
マトグラフィー法〔カラム:PEG HT 5%-Uniport HP 60/8
0 、検出器 :FID 検出器(220℃) 、カラム温度:65〜19
0 ℃(5℃/minの昇温系) 、Injector温度:220℃〕によっ
て行った。The antibacterial activity was assayed by Method III for B-48-2 and Method II for other strains. In addition, acetic acid, ethanol and β-phenethyl alcohol were assayed by methods II and III. Organic acid analysis is performed by liquid chromatography (column: Shodex C-8
11, Detector: Visible, UV detector UVIDEC100-VI, Detection method: B
(TB color development method), ethanol is analyzed by gas chromatography (column: 20% APS-201 / FlusionT (60-80mesh),
Detector: FID detector], analysis of higher alcohols by gas chromatography [Column: PEG HT 5% -Uniport HP 60/8
0, detector: FID detector (220 ° C), column temperature: 65-19
0 ° C. (temperature rising system of 5 ° C./min), Injector temperature: 220 ° C.).
【0029】培養液の分析結果を第3表に、抗菌活性の
検定結果を第4表にそれぞれ示す。The results of analysis of the culture broth are shown in Table 3, and the results of the antibacterial activity assay are shown in Table 4.
【0030】[0030]
【表3】 [Table 3]
【0031】[0031]
【表4】 [Table 4]
【0032】[0032]
【表5】 [Table 5]
【0033】エタノールは2.0 %(V/V)の濃度、酢酸は10
00mg/l、β- フェネチルアルコールは300mg/lの濃
度でもバチルス・ズブティリスIAM 1070およびキャンデ
ィダ・グラブラータ IFO 0622 に抗菌活性を示さなかっ
た。また、その他のアルコール類、有機酸類について
も、これら5株の示す抗菌活性への寄与は全く認められ
なかった。これらのことから、これら酵母菌株の示す抗
菌活性は、酢酸をはじめとする有機酸、高級アルコー
ル、エタノールなどによるものではないことが明らかで
ある。Ethanol has a concentration of 2.0% (V / V) and acetic acid has a concentration of 10%.
00 mg / l and β-phenethyl alcohol showed no antibacterial activity against Bacillus subtilis IAM 1070 and Candida glabrata IFO 0622 even at a concentration of 300 mg / l. Also, regarding other alcohols and organic acids, no contribution to the antibacterial activity exhibited by these 5 strains was observed. From these facts, it is clear that the antibacterial activity exhibited by these yeast strains is not due to organic acids such as acetic acid, higher alcohols, and ethanol.
【0034】[0034]
【発明の効果】本発明の酵母菌株を利用すれば、野生細
菌、野生酵母などの汚染を防ぐことができ、酒類、アル
コールの製造上大きな利点となる。また、本発明は、酵
母菌体そのものの農薬、動物薬への利用、生産される抗
菌性物質の農薬、動物薬、医薬、食品添加物などへの利
用の可能性を提供する。EFFECTS OF THE INVENTION By using the yeast strain of the present invention, it is possible to prevent the contamination of wild bacteria and wild yeasts, which is a great advantage in the production of alcoholic beverages and alcohol. Further, the present invention provides the possibility of using yeast cells themselves as pesticides and veterinary drugs, and using the produced antibacterial substances as pesticides, veterinary drugs, pharmaceuticals, food additives and the like.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 安藤 勝彦 東京都町田市中町3−9−11 (72)発明者 秋山 裕一 東京都国立市西2−22−26ファイン国立 302号 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Katsuhiko Ando 3-9-11 Nakamachi, Machida-shi, Tokyo (72) Yuichi Akiyama 2-22-26 Fine National No. 302 West 22-22 Nishi, Tokyo
Claims (1)
ィダ・ピントロペシー(Candida pintolopesii)、キャン
ディダ・フェニカ(Candida fennica) およびキャンディ
ダ・スピーシーズ(Candida sp.) A-31-2 微工研条寄第
1441号から選ばれる酵母。1. Candida pintolopesii, Candida fennica, and Candida sp. A-31-2, which have antibacterial activity against bacteria First
Yeast selected from No. 1441.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP6322125A JP2526029B2 (en) | 1994-12-26 | 1994-12-26 | Yeast with antibacterial activity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP62274426A Division JPH0761258B2 (en) | 1987-10-29 | 1987-10-29 | Yeast with antibacterial activity |
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Publication Number | Publication Date |
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JPH08103266A true JPH08103266A (en) | 1996-04-23 |
JP2526029B2 JP2526029B2 (en) | 1996-08-21 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115851460A (en) * | 2022-08-10 | 2023-03-28 | 丁辰 | Bacterial strain with function of activating differentiation of mammalian stem cells, composition and application of bacterial strain |
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---|---|---|---|---|
CN110527639B (en) * | 2019-09-12 | 2021-05-04 | 天津农学院 | Meiji meiqi yeast and application thereof |
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1994
- 1994-12-26 JP JP6322125A patent/JP2526029B2/en not_active Expired - Lifetime
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