JPH0769923A - タンパク質含有溶液からのバクテリアリポ多糖類の分離法 - Google Patents
タンパク質含有溶液からのバクテリアリポ多糖類の分離法Info
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- JPH0769923A JPH0769923A JP6191236A JP19123694A JPH0769923A JP H0769923 A JPH0769923 A JP H0769923A JP 6191236 A JP6191236 A JP 6191236A JP 19123694 A JP19123694 A JP 19123694A JP H0769923 A JPH0769923 A JP H0769923A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 タンパク質含有溶液からバクテリアリポ多糖
類（ＬＰＳ）を分離する方法であって、ＬＰＳを少なく
とも１種の適した可溶化剤を用いることにより溶液中に
遊離させ、溶液をガラス表面と接触させ、その後ＬＰＳ
−吸着ガラス表面をタンパク質含有溶液から分離する方
法。さらに溶液からのＬＰＳは、最初に上記の方法で該
ＬＰＳをガラス表面に結合させることにより、従来の方
法を用いて容易に検出することができる。 【効果】 動物又はヒトに有害なバクテリアリポ多糖類
を含まない医薬又は生化学的薬剤を製造することができ
る。
類（ＬＰＳ）を分離する方法であって、ＬＰＳを少なく
とも１種の適した可溶化剤を用いることにより溶液中に
遊離させ、溶液をガラス表面と接触させ、その後ＬＰＳ
−吸着ガラス表面をタンパク質含有溶液から分離する方
法。さらに溶液からのＬＰＳは、最初に上記の方法で該
ＬＰＳをガラス表面に結合させることにより、従来の方
法を用いて容易に検出することができる。 【効果】 動物又はヒトに有害なバクテリアリポ多糖類
を含まない医薬又は生化学的薬剤を製造することができ
る。
Description
【０００１】本発明はタンパク質含有溶液からバクテリ
アリポ多糖類を分離する方法、及びリポ多糖類の検出の
方法に関する。
アリポ多糖類を分離する方法、及びリポ多糖類の検出の
方法に関する。
【０００２】内毒素として知られるバクテアリリポ多糖
類（ＬＰＳ）は動物及びヒトに投与すると（重大な）発
熱反応を起こすことは周知である。かくしてショック、
熱、白血球減少症、高血糖症、血管内凝固及び他などの
ＬＰＳ−媒介の生物学的効果が認識されてきた。この理
由で、ある閾濃度を越えるＬＰＳが存在すると、動物又
はヒトに投与するための医薬又は生化学的薬剤の承認は
許されないであろう。
類（ＬＰＳ）は動物及びヒトに投与すると（重大な）発
熱反応を起こすことは周知である。かくしてショック、
熱、白血球減少症、高血糖症、血管内凝固及び他などの
ＬＰＳ−媒介の生物学的効果が認識されてきた。この理
由で、ある閾濃度を越えるＬＰＳが存在すると、動物又
はヒトに投与するための医薬又は生化学的薬剤の承認は
許されないであろう。
【０００３】溶液中でＬＰＳはリン脂質の二重層と類似
の二重層として配置されている。Ｃａ2+などの２価カチ
オンがこの二重層を安定化する。これらの巨大な二重層
構造は界面活性剤又は胆汁酸塩を用いて大きさを減少さ
せることができる。かくして形成されたＬＰＳと界面活
性剤又は胆汁酸塩の混合ミセルの分子量は比較的小さ
く、限外濾過又は精密濾過法により生成物からミセル−
結合ＬＰＳを分離する機会を与える。
の二重層として配置されている。Ｃａ2+などの２価カチ
オンがこの二重層を安定化する。これらの巨大な二重層
構造は界面活性剤又は胆汁酸塩を用いて大きさを減少さ
せることができる。かくして形成されたＬＰＳと界面活
性剤又は胆汁酸塩の混合ミセルの分子量は比較的小さ
く、限外濾過又は精密濾過法により生成物からミセル−
結合ＬＰＳを分離する機会を与える。
【０００４】バクテリアＬＰＳの塩基性を利用し、問題
の生成物からのＬＰＳの除去をクレイムするいくつかの
他の方法が記載された。これらの中にはフェノール、三
塩化酢酸又はフェノール／クロロホルム／石油エーテル
混合物などの有機物質の適用、あるいは内毒素結合タン
パク質（ＥＮＰ）によるＬＰＳの中和などがある。この
後者の方法は実験室規模における除去に適しているが、
かなりのタンパク質損失を与える。さらにＬＰＳは、キ
レート剤と組み合わせた、又は組み合わせない合成樹
脂、帯電フィルター、硫酸バリウム、界面活性剤及び胆
汁酸又はそれらの誘導体（例えば米国特許第４３１５９
１９号明細書及びＳｗｅａｄｎｅｒ ｅｔａｌ．，Ａｐ
ｐｌ．ａｎｄ Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３
４，１９７７，３８２−３８５を参照）を利用して除去
されてきた。
の生成物からのＬＰＳの除去をクレイムするいくつかの
他の方法が記載された。これらの中にはフェノール、三
塩化酢酸又はフェノール／クロロホルム／石油エーテル
混合物などの有機物質の適用、あるいは内毒素結合タン
パク質（ＥＮＰ）によるＬＰＳの中和などがある。この
後者の方法は実験室規模における除去に適しているが、
かなりのタンパク質損失を与える。さらにＬＰＳは、キ
レート剤と組み合わせた、又は組み合わせない合成樹
脂、帯電フィルター、硫酸バリウム、界面活性剤及び胆
汁酸又はそれらの誘導体（例えば米国特許第４３１５９
１９号明細書及びＳｗｅａｄｎｅｒ ｅｔａｌ．，Ａｐ
ｐｌ．ａｎｄ Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３
４，１９７７，３８２−３８５を参照）を利用して除去
されてきた。
【０００５】上記の方法は実験室規模で種々の程度にタ
ンパク質含有溶液からＬＰＳを除去することができた
が、これらの方法のいずれも工業的規模で原価効率の高
い有効な方法でそのような溶液からＬＰＳを分離するの
には適していない。
ンパク質含有溶液からＬＰＳを除去することができた
が、これらの方法のいずれも工業的規模で原価効率の高
い有効な方法でそのような溶液からＬＰＳを分離するの
には適していない。
【０００６】本発明の目的はタンパク質含有溶液からＬ
ＰＳを除去するための簡単で信頼できる方法の提供であ
る。この方法は工業的規模で十分に用いることができ
る。
ＰＳを除去するための簡単で信頼できる方法の提供であ
る。この方法は工業的規模で十分に用いることができ
る。
【０００７】いくつかの目的で、溶液中のバクテリアＬ
ＰＳの定量的又は定性的測定のための診断法が必要とさ
れている（ＬＡＬ試験）。この目的のための古典的試験
はゲルクロット試験（ｇｅｌ ｃｌｏｔ ｔｅｓｔ）及
び関連する色素産生試験（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｔ
ｅｓｔ）である。しかし正確に行うために、これらの両
試験は反応条件に関する要求が厳しい。従って結果は説
明の困難なことが多く、特にＬＰＳ量が検出範囲の低領
域である場合にそうである。従って本発明のもう１つの
目的は溶液中、特に干渉化合物を含む溶液中のＬＰＳの
検出及び／又は定量のための簡単で信頼できる方法の提
供である。
ＰＳの定量的又は定性的測定のための診断法が必要とさ
れている（ＬＡＬ試験）。この目的のための古典的試験
はゲルクロット試験（ｇｅｌ ｃｌｏｔ ｔｅｓｔ）及
び関連する色素産生試験（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｔ
ｅｓｔ）である。しかし正確に行うために、これらの両
試験は反応条件に関する要求が厳しい。従って結果は説
明の困難なことが多く、特にＬＰＳ量が検出範囲の低領
域である場合にそうである。従って本発明のもう１つの
目的は溶液中、特に干渉化合物を含む溶液中のＬＰＳの
検出及び／又は定量のための簡単で信頼できる方法の提
供である。
【０００８】驚くべきことに、タンパク質含有溶液に少
なくとも１種の適した可溶化剤を加え、この溶液をガラ
ス表面と接触させ、続いてタンパク質含有溶液からＬＰ
Ｓ−吸着ガラス表面を分離することにより、この溶液か
らＬＰＳを有効に分離できることが見いだされた。本発
明の方法は水溶性、ならびに膜結合タンパク質を含む溶
液からのＬＰＳの実質的除去を可能にする。本発明の方
法は重度にＬＰＳで汚染されたタンパク質含有溶液から
のＬＰＳの除去に特に適していることが証明された。本
発明の方法は非常に簡単なので、容易に工業的規模で適
用することができる。
なくとも１種の適した可溶化剤を加え、この溶液をガラ
ス表面と接触させ、続いてタンパク質含有溶液からＬＰ
Ｓ−吸着ガラス表面を分離することにより、この溶液か
らＬＰＳを有効に分離できることが見いだされた。本発
明の方法は水溶性、ならびに膜結合タンパク質を含む溶
液からのＬＰＳの実質的除去を可能にする。本発明の方
法は重度にＬＰＳで汚染されたタンパク質含有溶液から
のＬＰＳの除去に特に適していることが証明された。本
発明の方法は非常に簡単なので、容易に工業的規模で適
用することができる。
【０００９】本発明の方法で用いるのに適した可溶化剤
は界面活性剤である。そのような界面活性剤は非イオン
性及びイオン性界面活性物質の両方を含む。非イオン性
界面活性物質には胆汁酸塩、例えばコレイン酸塩も含ま
れ、イオン性界面活性物質は双極性イオン構造を有する
物質も含む。選ばれる可溶化剤はタンパク質含有溶液に
望まれている生物活性に影響を与えてはならない。
は界面活性剤である。そのような界面活性剤は非イオン
性及びイオン性界面活性物質の両方を含む。非イオン性
界面活性物質には胆汁酸塩、例えばコレイン酸塩も含ま
れ、イオン性界面活性物質は双極性イオン構造を有する
物質も含む。選ばれる可溶化剤はタンパク質含有溶液に
望まれている生物活性に影響を与えてはならない。
【００１０】ガラス表面はガラス質表面、すなわちセラ
ミック材料などのガラス質材料からの表面も含むと理解
するべきである。しかしガラス、特に正常な非予備処理
ガラスが好ましい。本発明の方法で用いるのに適したガ
ラス表面の例はガラスビーズ、ガラスビン、ガラス管、
ガラス板及びガラスフィルターである。
ミック材料などのガラス質材料からの表面も含むと理解
するべきである。しかしガラス、特に正常な非予備処理
ガラスが好ましい。本発明の方法で用いるのに適したガ
ラス表面の例はガラスビーズ、ガラスビン、ガラス管、
ガラス板及びガラスフィルターである。
【００１１】本発明の方法は、タンパク質含有溶液の組
成、及びその成分の性質、特にタンパク質及び／又は汚
染ＬＰＳの性質に依存するある好ましい条件下で行うの
が好ましい。条件は、タンパク質含有溶液に望まれる生
物活性が影響を受けないように選ばねばならない。イオ
ン強度の低い実質的水溶液を用いるのが好ましい。処理
の間の溶液の温度はあまり重要でないが、一般に大体室
温が十分適している。溶液は、例えば約８〜９．５の範
囲などの十分に高いｐＨを有するのが好ましい。ｐＨは
適した緩衝液、例えばリン酸塩緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝
液又はＴＲＩＳ緩衝液を加えることにより調節すること
ができる。溶液はガラス表面で終夜処理（インキュベー
ト）することができるが、一般に１時間より短時間の、
約１０分のインキュベーション時間でも十分である。
成、及びその成分の性質、特にタンパク質及び／又は汚
染ＬＰＳの性質に依存するある好ましい条件下で行うの
が好ましい。条件は、タンパク質含有溶液に望まれる生
物活性が影響を受けないように選ばねばならない。イオ
ン強度の低い実質的水溶液を用いるのが好ましい。処理
の間の溶液の温度はあまり重要でないが、一般に大体室
温が十分適している。溶液は、例えば約８〜９．５の範
囲などの十分に高いｐＨを有するのが好ましい。ｐＨは
適した緩衝液、例えばリン酸塩緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝
液又はＴＲＩＳ緩衝液を加えることにより調節すること
ができる。溶液はガラス表面で終夜処理（インキュベー
ト）することができるが、一般に１時間より短時間の、
約１０分のインキュベーション時間でも十分である。
【００１２】さらに本発明のもう１つの特徴に従い、ガ
ラス表面に結合することにより溶液から分離したＬＰＳ
の量を、例えば市販のゲルクロット試験又は色素澱粉試
験キットにより、キットの供給者が薦める条件下で検出
し、正確に測定することができる。
ラス表面に結合することにより溶液から分離したＬＰＳ
の量を、例えば市販のゲルクロット試験又は色素澱粉試
験キットにより、キットの供給者が薦める条件下で検出
し、正確に測定することができる。
【００１３】従って本発明の方法は、実験室用途からＬ
ＰＳ−非含有生化学的薬剤の製造まで、広い用途を有す
る。例えば多くの場合ＬＰＳで汚染されていることが見
いだされる動物由来のタンパク質（例えばアルブミン）
を、例えば組織培養成分としてさらに使用する前に精製
することができる。かくして臨床的及び実験室目的のモ
ノクローナル抗体、治療用タンパク質、酵素、ウィルス
及びバクテリア両ワクチン、及び生体応答調節剤（成長
因子など）を、例えば組織培養媒地又はバクテリア細胞
壁に由来する、あるいは培養後加工から生じたＬＰＳ汚
染から精製することができる。例えば不活化ワクチンな
どの卵由来ワクチンを容易に汚染除去することができ
る。
ＰＳ−非含有生化学的薬剤の製造まで、広い用途を有す
る。例えば多くの場合ＬＰＳで汚染されていることが見
いだされる動物由来のタンパク質（例えばアルブミン）
を、例えば組織培養成分としてさらに使用する前に精製
することができる。かくして臨床的及び実験室目的のモ
ノクローナル抗体、治療用タンパク質、酵素、ウィルス
及びバクテリア両ワクチン、及び生体応答調節剤（成長
因子など）を、例えば組織培養媒地又はバクテリア細胞
壁に由来する、あるいは培養後加工から生じたＬＰＳ汚
染から精製することができる。例えば不活化ワクチンな
どの卵由来ワクチンを容易に汚染除去することができ
る。
【００１４】さらに本発明の方法を以下の通りに説明す
ることができる。第１に、好ましくは上記の好ましい条
件下で少なくとも１種の可溶化剤、一般に界面活性剤を
加えることにより、又は数種の可溶化剤を適用すること
により、例えば界面活性剤とキレート剤を組み合わせた
使用により、ＬＰＳを遊離し、小ミセルの一部とする。
適した金属イオンキレート剤はポリ（アセトキシル化ア
ミン）、例えばＥＤＴＡ、ＤＴＰＡなど、及び場合によ
りヒドロキシル化されたポリカルボン酸、例えばクエン
酸、シュウ酸、酒石酸など、ならびにそれらのアルカリ
金属塩である。小さいミセルを形成し、かくして実質的
水溶液から容易に除去できる界面活性剤、例えばコレイ
ン酸塩（例えばデオキシコレイン酸塩（ＤＯＣ）又はそ
の類似体）を用いるのが好ましい。その後、適したガラ
ス表面に吸着し、続いてＬＰＳ−吸着ガラス表面を除去
することにより、ＬＰＳをバルク溶液から除去する。次
の段階で、例えば（ダイア）フィルトレーション又は合
成樹脂（例えばＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（商標））への結合
により界面活性剤を除去することができる。得られるタ
ンパク質溶液はほとんど完全にＬＰＳを含まない。
ることができる。第１に、好ましくは上記の好ましい条
件下で少なくとも１種の可溶化剤、一般に界面活性剤を
加えることにより、又は数種の可溶化剤を適用すること
により、例えば界面活性剤とキレート剤を組み合わせた
使用により、ＬＰＳを遊離し、小ミセルの一部とする。
適した金属イオンキレート剤はポリ（アセトキシル化ア
ミン）、例えばＥＤＴＡ、ＤＴＰＡなど、及び場合によ
りヒドロキシル化されたポリカルボン酸、例えばクエン
酸、シュウ酸、酒石酸など、ならびにそれらのアルカリ
金属塩である。小さいミセルを形成し、かくして実質的
水溶液から容易に除去できる界面活性剤、例えばコレイ
ン酸塩（例えばデオキシコレイン酸塩（ＤＯＣ）又はそ
の類似体）を用いるのが好ましい。その後、適したガラ
ス表面に吸着し、続いてＬＰＳ−吸着ガラス表面を除去
することにより、ＬＰＳをバルク溶液から除去する。次
の段階で、例えば（ダイア）フィルトレーション又は合
成樹脂（例えばＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（商標））への結合
により界面活性剤を除去することができる。得られるタ
ンパク質溶液はほとんど完全にＬＰＳを含まない。
【００１５】例えばガラスビーズ（例えば直径が５ｍｍ
で表面が７４．２ｍｍ2）の形態のガラス表面は、少な
くとも１０μｇのＬＰＳ又は≧１０5ＥＵ（＝ＬＡＬ試
験で測定される内毒素単位；１ｎｇのＬＰＳ＝約１０Ｅ
Ｕ）を結合することが見いだされた。界面活性剤である
ＤＯＣは、カットオフ値（ｃｕｔ ｏｆｆ ｖａｌｕ
ｅ）が少なくとも３０又は５０Ｋｄである膜を用いた限
外濾過により容易に除去することができる。界面活性剤
の除去に適した周知の方法及び材料を適用すると、≧９
５％のタンパク質の回収が可能である。血球凝集素含有
溶液からの内毒素の除去の場合に、満足できるデータが
得られた：実施例を参照。界面活性剤の除去の前に単純
放射拡散法によるタンパク質測定及び免疫化学的測定に
より測定したウィルス膜タンパク質の回収は１００％で
あり、ガラスへの吸着によるタンパク質の損失が検出で
きないことを示している。
で表面が７４．２ｍｍ2）の形態のガラス表面は、少な
くとも１０μｇのＬＰＳ又は≧１０5ＥＵ（＝ＬＡＬ試
験で測定される内毒素単位；１ｎｇのＬＰＳ＝約１０Ｅ
Ｕ）を結合することが見いだされた。界面活性剤である
ＤＯＣは、カットオフ値（ｃｕｔ ｏｆｆ ｖａｌｕ
ｅ）が少なくとも３０又は５０Ｋｄである膜を用いた限
外濾過により容易に除去することができる。界面活性剤
の除去に適した周知の方法及び材料を適用すると、≧９
５％のタンパク質の回収が可能である。血球凝集素含有
溶液からの内毒素の除去の場合に、満足できるデータが
得られた：実施例を参照。界面活性剤の除去の前に単純
放射拡散法によるタンパク質測定及び免疫化学的測定に
より測定したウィルス膜タンパク質の回収は１００％で
あり、ガラスへの吸着によるタンパク質の損失が検出で
きないことを示している。
【００１６】以下の特定の実施例により本発明をさらに
詳細に説明する。
詳細に説明する。
【００１７】
実施例１ 実施例において、以下の一般的方法を用いる。
【００１８】リン酸塩緩衝液の調製の場合、以下の物質
を混合し、水に溶解する：ＥＤＴＡ・２Ｎａ（１８６０
ｍｇ／ｌ）、ＮａＣｌ（８７７．５ｍｇ／ｌ）、Ｎａ2
ＨＰＯ4（７１０ｍｇ／ｌ）。０．５モル／ｌのＮａＯ
Ｈを加えることによりｐＨを９．５に調節する。
を混合し、水に溶解する：ＥＤＴＡ・２Ｎａ（１８６０
ｍｇ／ｌ）、ＮａＣｌ（８７７．５ｍｇ／ｌ）、Ｎａ2
ＨＰＯ4（７１０ｍｇ／ｌ）。０．５モル／ｌのＮａＯ
Ｈを加えることによりｐＨを９．５に調節する。
【００１９】デオキシコレイン酸塩（ＤＯＣ）原液は、
水中で１０％ｖ／ｖのＤＯＣの溶液を上記と同様の方法
でｐＨ９．５に調節することにより調製する。他の界面
活性剤原液は、対応する方法で調製する。
水中で１０％ｖ／ｖのＤＯＣの溶液を上記と同様の方法
でｐＨ９．５に調節することにより調製する。他の界面
活性剤原液は、対応する方法で調製する。
【００２０】バクテリアＬＰＳで重度に汚染された（例
えば約３００，０００ＥＵ／ｍｌ）タンパク質、例えば
インフルエンザ血球凝集素を含む出発溶液は、９体積の
上記の緩衝液を用いて希釈する。得られたタンパク質濃
度は１２５μｇ／ｍｌである。
えば約３００，０００ＥＵ／ｍｌ）タンパク質、例えば
インフルエンザ血球凝集素を含む出発溶液は、９体積の
上記の緩衝液を用いて希釈する。得られたタンパク質濃
度は１２５μｇ／ｍｌである。
【００２１】ＤＯＣ原液を１％の最終濃度まで加え、混
合物を２０℃で少なくとも１時間インキュベートする。
合物を２０℃で少なくとも１時間インキュベートする。
【００２２】すべての実験はステンレススチール管中で
行う。
行う。
【００２３】次にガラスビーズ（直径５ｍｍ、表面７
４．２ｍｍ2）を加える。混合物を２０℃で終夜穏やか
に渦回転させ、その後ガラスビーズに結合していない遊
離の内毒素の量をＬＡＬ試験法を用いて測定する。添加
するべきガラスの最少量は、最初のＬＰＳ含有量及び上
記で与えられる情報から算出することができる。過剰の
ガラスはＬＰＳの除去に影響を与えない。
４．２ｍｍ2）を加える。混合物を２０℃で終夜穏やか
に渦回転させ、その後ガラスビーズに結合していない遊
離の内毒素の量をＬＡＬ試験法を用いて測定する。添加
するべきガラスの最少量は、最初のＬＰＳ含有量及び上
記で与えられる情報から算出することができる。過剰の
ガラスはＬＰＳの除去に影響を与えない。
【００２４】溶液を他の容器に移し、かくしてガラスビ
ーズから溶液を分離することによりほとんどＬＰＳ非含
有（例えば０．５〜５０ＥＵ／ｍｌ）のタンパク質の溶
液を得ることができる。ガラス結合ＬＰＳの量は色素産
生試験法により検出することができる。
ーズから溶液を分離することによりほとんどＬＰＳ非含
有（例えば０．５〜５０ＥＵ／ｍｌ）のタンパク質の溶
液を得ることができる。ガラス結合ＬＰＳの量は色素産
生試験法により検出することができる。
【００２５】低イオン強度及び７以上のｐＨの上記の条
件下で、ＤＯＣは例えば適した分子量カットオフ（ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ ｏｆｆ）（Ｍ
ＷＣＯ）のフィルターを用いた限外濾過により容易に除
去することができる。用いるフィルターの選択は問題の
タンパク質の大きさ及び界面活性剤ミセルの大きさに大
きく依存することが明らかである。例えば所望の緩衝液
に対して５０ＫｄのＭＷＣＯの膜を用いたダイアフィル
トレーションを行うと、インフルエンザ血球凝集素試料
からＤＯＣを有効に除去することができる。
件下で、ＤＯＣは例えば適した分子量カットオフ（ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ ｏｆｆ）（Ｍ
ＷＣＯ）のフィルターを用いた限外濾過により容易に除
去することができる。用いるフィルターの選択は問題の
タンパク質の大きさ及び界面活性剤ミセルの大きさに大
きく依存することが明らかである。例えば所望の緩衝液
に対して５０ＫｄのＭＷＣＯの膜を用いたダイアフィル
トレーションを行うと、インフルエンザ血球凝集素試料
からＤＯＣを有効に除去することができる。
【００２６】代わりにＤＯＣを適した合成樹脂（例えば
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−４）に結合させることが
できる。
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−４）に結合させることが
できる。
【００２７】種々の界面活性剤の使用 内毒素で重大に汚染されたインフルエンザ血球凝集素を
含む溶液（Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）０１１１Ｂ４の外
膜から）を上記の一般的方法の条件下で種々の界面活性
剤の存在下において２つのガラスビーズで処理する。適
用する界面活性剤はデオキシコレイン酸塩（ＤＯＣ）、
Ｎ−オクチルグルコシド（Ｎ−ｏｃｔ．−ｇｌ．）、セ
チルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、及
びＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ１００である。以下の結果が
得られる。
含む溶液（Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）０１１１Ｂ４の外
膜から）を上記の一般的方法の条件下で種々の界面活性
剤の存在下において２つのガラスビーズで処理する。適
用する界面活性剤はデオキシコレイン酸塩（ＤＯＣ）、
Ｎ−オクチルグルコシド（Ｎ−ｏｃｔ．−ｇｌ．）、セ
チルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、及
びＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ１００である。以下の結果が
得られる。
【００２８】 実施例ＩＩ 界面活性剤濃度の変化 実施例Ｉに記載の条件と同一の条件下で種々の界面活性
剤濃度を調べる。この実施例ではＨＡ−タンパク質を用
いる。以下の結果が得られる。
剤濃度を調べる。この実施例ではＨＡ−タンパク質を用
いる。以下の結果が得られる。
【００２９】 実施例ＩＩＩ タンパク質における変化 実施例Ｉに記載の条件と同一の条件下で種々のタンパク
質の汚染除去に本発明の方法を用いる。以下のタンパク
質を用いる：血球凝集素（ＨＡ）、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、及びウサギ免疫グロブリン（ＩｇＧ）。以
下の結果が得られる。
質の汚染除去に本発明の方法を用いる。以下のタンパク
質を用いる：血球凝集素（ＨＡ）、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、及びウサギ免疫グロブリン（ＩｇＧ）。以
下の結果が得られる。
【００３０】 実施例ＩＶ 内毒素汚染における変化 実施例Ｉに記載の条件と同一の条件下で種々の内毒素、
すなわちＥ．コリ０１１１：Ｂ４、サルモネラ・ミネソ
タ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）Ｒｅ
５９５（Ｒｅ突然変異株）、及びシュードモナス・アエ
ルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａ）１０で汚染されたＨＡ−タンパク質を本発明の方
法において研究する。以下の結果が得られる。
すなわちＥ．コリ０１１１：Ｂ４、サルモネラ・ミネソ
タ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）Ｒｅ
５９５（Ｒｅ突然変異株）、及びシュードモナス・アエ
ルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａ）１０で汚染されたＨＡ−タンパク質を本発明の方
法において研究する。以下の結果が得られる。
【００３１】 実施例Ｖ ガラス表面の存在又は不在 重度に内毒素で汚染されたＨＡ−タンパク質（１２５μ
ｇ／ｍｌ）、０％又は１．１％のＤＯＣ及びリン酸塩緩
衝液の溶液４ｍｌをガラスビーズの存在下又は不在下で
実施例１に記載の条件と同一の条件下で処理する。以下
の結果が得られる： サルモネラ・ミネソタで汚染されたＨＡタンパク質を用
いて対応する実験を行い、以下の結果を得る： 本発明の主たる特徴及び態様は以下の通りである。
ｇ／ｍｌ）、０％又は１．１％のＤＯＣ及びリン酸塩緩
衝液の溶液４ｍｌをガラスビーズの存在下又は不在下で
実施例１に記載の条件と同一の条件下で処理する。以下
の結果が得られる： サルモネラ・ミネソタで汚染されたＨＡタンパク質を用
いて対応する実験を行い、以下の結果を得る： 本発明の主たる特徴及び態様は以下の通りである。
【００３２】１．リポ多糖類（ＬＰＳ）を少なくとも１
種の適した可溶化剤を用いて溶液中に遊離させ、溶液を
ガラス表面と接触させた後にＬＰＳ−吸着ガラス表面を
タンパク質含有溶液から分離することを特徴とする、タ
ンパク質含有溶液からバクテリアＬＰＳを分離する方
法。
種の適した可溶化剤を用いて溶液中に遊離させ、溶液を
ガラス表面と接触させた後にＬＰＳ−吸着ガラス表面を
タンパク質含有溶液から分離することを特徴とする、タ
ンパク質含有溶液からバクテリアＬＰＳを分離する方
法。
【００３３】２．適した界面活性剤の添加によりＬＰＳ
を遊離させることを特徴とする、上記１項に記載の方
法。
を遊離させることを特徴とする、上記１項に記載の方
法。
【００３４】３．適した界面活性剤及び金属イオンキレ
ート剤を組み合わせて添加することによりＬＰＳを遊離
させることを特徴とする、上記１項に記載の方法。
ート剤を組み合わせて添加することによりＬＰＳを遊離
させることを特徴とする、上記１項に記載の方法。
【００３５】４．界面活性剤としてデオキシコレイン酸
塩又はその類似体を用いることを特徴とする、上記２又
は３項に記載の方法。
塩又はその類似体を用いることを特徴とする、上記２又
は３項に記載の方法。
【００３６】５．低イオン強度及び約８〜９．５の範囲
のｐＨの実質的水溶液中で方法を行う事を特徴とする、
上記２、３又は４項に記載の方法。
のｐＨの実質的水溶液中で方法を行う事を特徴とする、
上記２、３又は４項に記載の方法。
【００３７】６．ＬＰＳを溶液中に遊離させる試薬を、
ＬＰＳ−吸着ガラス表面の除去の後にタンパク質含有溶
液から除去することを特徴とする、上記１〜５項のいず
れか１つに記載の方法。
ＬＰＳ−吸着ガラス表面の除去の後にタンパク質含有溶
液から除去することを特徴とする、上記１〜５項のいず
れか１つに記載の方法。
【００３８】７．ＬＰＳをガラス表面に結合させ、続い
てＬＰＳ−吸着ガラス表面を分離し、その後ガラス表面
に結合したＬＰＳの量をそれ自体既知の方法により決定
することを特徴とする溶液中のバクテリアＬＰＳの測定
法。
てＬＰＳ−吸着ガラス表面を分離し、その後ガラス表面
に結合したＬＰＳの量をそれ自体既知の方法により決定
することを特徴とする溶液中のバクテリアＬＰＳの測定
法。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｂ０１Ｄ 17/022 (72)発明者 ヨハネス・ビー・スローターク オランダ・ウエースプ・シージエイバンホ ウテンラーン36 (72)発明者 グスターフ・ジエイ・エム・バン・シヤレ ンブルク オランダ・ウエースプ・シージエイバンホ ウテンラーン36 (72)発明者 ボウデウイーン・シー・ブレトシユナイー ダー オランダ・ウエースプ・シージエイバンホ ウテンラーン36 (72)発明者 ルデイ・ブランツ オランダ・ウエースプ・シージエイバンホ ウテンラーン36
Claims (2)
- 【請求項１】 リポ多糖類（ＬＰＳ）を少なくとも１種
の適した可溶化剤を用いて溶液中に遊離させ、溶液をガ
ラス表面と接触させた後にＬＰＳ−吸着（ｌｏａｄｅ
ｄ）ガラス表面をタンパク質含有溶液から分離すること
を特徴とする、タンパク質含有溶液からバクテリアＬＰ
Ｓを分離する方法。 - 【請求項２】 ＬＰＳをガラス表面に結合させ、続いて
ＬＰＳ−吸着ガラス表面を分離し、その後ガラス表面に
結合したＬＰＳの量をそれ自体既知の方法により決定す
ることを特徴とする溶液中のバクテリアＬＰＳの測定
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93202201 | 1993-07-26 | ||
| NL93202201.5 | 1993-07-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0769923A true JPH0769923A (ja) | 1995-03-14 |
Family
ID=8214007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6191236A Pending JPH0769923A (ja) | 1993-07-26 | 1994-07-22 | タンパク質含有溶液からのバクテリアリポ多糖類の分離法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0769923A (ja) |
| CN (1) | CN1106021A (ja) |
| BR (1) | BR9402892A (ja) |
| CA (1) | CA2128547A1 (ja) |
| FI (1) | FI943467A (ja) |
| IL (1) | IL110418A0 (ja) |
| NO (1) | NO942733L (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018502066A (ja) * | 2014-11-26 | 2018-01-25 | ルスロ・ベスローテン・フェンノートシャップＲｏｕｓｓｅｌｏｔ Ｂ．Ｖ． | ゼラチン精製 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN102746414B (zh) * | 2012-07-20 | 2014-04-16 | 成都生物制品研究所有限责任公司 | 一种细菌脂多糖的沉降方法 |
-
1994
- 1994-07-21 FI FI943467A patent/FI943467A/fi not_active Application Discontinuation
- 1994-07-21 BR BR9402892A patent/BR9402892A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-07-21 CA CA 2128547 patent/CA2128547A1/en not_active Abandoned
- 1994-07-21 NO NO942733A patent/NO942733L/no unknown
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- 1994-07-22 JP JP6191236A patent/JPH0769923A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP2021008480A (ja) * | 2014-11-26 | 2021-01-28 | ルスロ・ベスローテン・フェンノートシャップＲｏｕｓｓｅｌｏｔ Ｂ．Ｖ． | ゼラチン精製 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2128547A1 (en) | 1995-01-27 |
| IL110418A0 (en) | 1994-10-21 |
| CN1106021A (zh) | 1995-08-02 |
| FI943467A0 (fi) | 1994-07-21 |
| NO942733D0 (no) | 1994-07-21 |
| FI943467A (fi) | 1995-01-27 |
| BR9402892A (pt) | 1995-04-11 |
| NO942733L (no) | 1995-01-27 |
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