JPH07507876A

JPH07507876A - キャピラリー電気泳動のための、および、一般的な表面変更のためのシロキサンジオールのコーティング

Info

Publication number: JPH07507876A
Application number: JP6515429A
Authority: JP
Inventors: カルガー，バーリー　エル．; シュマルジング，ディーター; フォレット，フランチェスク
Original assignee: ノースイースタンユニバーシティ
Priority date: 1992-12-23
Filing date: 1993-12-22
Publication date: 1995-08-31
Also published as: EP0627079A1; US5322608A; AU5874194A; WO1994015209A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】の　のシロ　ンジ　−ルのコー−ン光萌Ω分立　゛この発明は、表面用のコーティング、そして、特に詳しくは、キャピラリー電気泳動カラムに適したコーティングに関するものである。

光咀Ω背景キャピラリー電気泳動分離技術は、生化学関連のサイ゛ヱンスにおいて広い応用範囲があるものである。ペプチド、プロティン、オリゴ核酸塩およびオリゴ糖類のような分子種は、電界の影響下でバッフ１−溶液中を移動させることで分離される。この分離は、電気泳動分離中に、ゾーンの崩れを生じさせる熱の放出をなくすために、薄い壁で細いボアのキャピラリーチューブ内で行われるのが通常である。

とりわけゾーンのくずれを生じさせるメカニズムは、不均一な電気浸透と、分離すべき物質がキャピラリーの内面に吸着してしまうことである。しかしながら、吸着と不均一な電気浸透は、電気泳動チューブの内壁に各種のポリマー物質をコーティングすることで解決できる。

米国特許第４．６８０．２０１号において、ヒエルチン（Ｈｊｅｒｔａｎ）は、細いボアのキャピラリーの内壁に、例えば、γ−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシランのような三官能試薬の手段によってキャピラリーの内壁に結合されるポリアクリルアミドのモノモルキュラー・ポリマー・コティングを施ス方法を記載している。これらのキャピラリーは、オープンチューブにおけるフリーゾーン電気泳動に使用できる。

ノポトニー他の米国特許第５．０７４．９８２号は、電気泳動分離に使用されるシリカキャピラリーの内壁が加水分解安定性のため、グリニヤール試薬を用いる三官能試薬でコーティングできることを記載している。

ホロウェイの米国特許第５．１１０，４３９号は、ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動カラムを示し、これは、溶融シリカチューブ、ポリアクリルアミドＯゲルＯマトリックスおよび該チューブき該ゲルマトリックスとの間でラジアルにクロスリンクされておらず、そして、該チューブと該ゲルマトリックスとの両者に共有付着しているポリデメチルシロキサンの鎖を有している。

ファング他（ＪＪＩｃｒｏｌ　、５ｐｅｎｓ、４：１３５−１４３．１９９２）　は、マイクロキャピラリーチューブの面にポリエチレン・グリコールおよびポリエチレン・イミンを結合する手順をリポートしている。該キャピラリーの面は、まず最初、シリコン水素化物ポリマーの結合のための７ラノール基の均一で、濃厚な分布を作るように処理される。例えば、２５０’　Ｃのような昇温された温度で、ポリマーミクスチュアーにおける５ｉ−Ｈ基はキャピラリーの面でシラノール基と反応し、５ｉ−Ｈ基交差結合ポリマー鎖を残す。５ｉ−Ｈ＊基を介しての遊離基反応がさらにポリマー鎖をクロスリンクさせる。

光咀曵概皿本発明は、キャピラリー電気泳動カラムにおいて見い出されるような面に適したコーティングを大まかな特徴とする。該コーティングは、ユニバーサルで、高度にクロスリンクされたサブレイヤーで、この上に可変のトップレイヤーまたは複数の層がアタッチされる副層を含む。発明のコーティングの副層（ＳＵｂ−１ａｙｅｒ）は、概略的には、二つの核末端基（例えば、シロキサンジオール）と交差結合試薬を用いるコーティングマテリアルのクロスリンキング・インディピノユアル・ポリマー類とを有するシロキサン誘導体からなるポリマー・コーティングマテリアルの層を所望の面に付着させることによって形成されるものである。

クロスリンキングの工程は、付着工程の前後いずれでも行え、前記面とポリマーコーティングマテリアルとの間の付着は、電子対共有か、または、電子対共有のものではないのいずれでもよい。好ましいコーティングマテリアルは、ポリメチルビニルシロキサンジオールポリマーコーティングマテリアルが、前記コーティングの第２の層を電子対共有的に、または、非電子対共有的に更に付着するサイトになる多数の非求核付着センターを含むことが好ましい。第２の層のポリマーは、これもまた、クロスリンクされる。好ましい第２の層のコーティングマテリアルは、ポリアクリルアミドであり、これは、アミノ基を介してフォルムアルデヒドとクロスリンクされる。

発明の好ましいマイクロキャピラリーカラムは、内部キャビティト内面をもつ壁；交差結合剤で高度にクロスリンクされ、前記壁の内面に電子対共存的に、または、非電子対共有的に付着されたシロキサンジオール・ポリマー・コーティングマテリアルのサブレイヤー；および前記サブレイヤー・コーティングマテリアルに電子対共存的に、または、非電子対共存的に付着されたクロスリンクされた、または、クロスリンクされていないコーティングマテリアルのトップレイヤーを有するマイクロキャピラリーを含む。

発明のコーティングは、新しい安定した面（サーフエース）を作り、広範なｐＨ範囲にわたり、該コーティングを安定させ、必要に応じて、トップレイヤーまたはトップの複数の層のグラフティングおよび／または吸着を高効率化させる。キャピラリー電気泳動に使用されているように、前記コーティングは、電気浸透フローを抑制し、または、コントロールし、カラム表面への分析物の吸着を防ぐ。

フリーラジカルフォーメーシーンの既知の方法の代わりに、前記コーティングを安定させるためにクロスリンキング剤を使用することは、クロスリンキング反応が室温で行えることを意味する。これによって、非求核付着センターとしてのポリマーコーティングマテリアルと組める基のタイプと数の範囲が広まる。フリーラジカルクロスリンキングの間、より高い温度においては、例えば、ビニル基、エポキシ基などの多数の好ましい基が死滅する。したがって、発明のコーティングがマルチレイヤー構成のサブレイヤーとして作用するとき、他のマテリアルの場合に較べて、より濃厚な第２の層が形成される。前記コーティングの重合、クロスリンキングそしてモディフィケーシヨンのための化学反応は、極めて簡単に行え、バラエティに富んだ特性と用途が得られる。

図面例面巣立記述発明の他の特徴と利点は、添付の図面に関連しての好ましい実施例の下記の記述から明らかになるもので、図面において：図１は、発明の一実施例のコーティングされたマイクロキャピラリー・カラムの断面図を示し；図２は、シロキサンジオールを合成するための酸または塩基の開環を示し；図３は、室温における、クロスリンキング剤を用いてのシロキサンジオール・ポリマーのクロスリンキングを示し；図４は、発明の７０キサンジオールのサブレイヤｍ−コーティングのフリービニル基へアクリルアミド・ポリマーをグラフトする状態を示し；図５は、発明のマイクロキャピラリーカラムを用いた、ｐＨ４，４における塩基性プロティンのオープンチューブキャピラリーゾーン電気泳動を示し図６は、発明のマイクロキャピラリーカラムを用いた、ｐＨ８，８における酸性プロティンのオープンチューブキャピラリーゾーン電気泳動を示し；図７は、発明のマイクロキャピラリーカラムを用いた、プロティンのＳＤＳポリマーネットワーク分離を示し；図８は、発明のマイクロキャピラリーカラムを用いた、ＤＮＡのポリマーネットワーク分離を示し；そして、図９は、発明のマイクロキャピラリーカラムを用いた、ＤＮＡ反応プロダクツのポリマーネットワーク分離を示す。

光期Ω詳庭な記述キャピラリー電気泳動に実施される発明は、分離キャピラリーの内面への高度にクロスリンクされたコーティングを提供する。図１に示すように、発明のマイクロキャピラリーカラムは、マイクロキャピラリー１ｏ；例えば、シロキサンジオールのような二つの核末端基を有するシロキサン誂導体のサブレイヤーで、マイクロキャピラリーの内面１４に電子対共存的または非電子対共存的に付着され、クロスリンキング剤を用いて、フリーラジカルフォーメーシＷンではなく、好ましくは室温で、広範囲にクロスリンクされたサブレイヤー１２；およびクロスリンクされたシロキサンジオール層の多数のインターナル非求核センターへ付着（電子対共有的または非電子対共存的に）できる分子のトップコーティングレイヤー１６を含む。

マイクロキャピラリーは、電気泳動に使用される検知システムが使用される特定のマテリアルと適当に機能することができるものであれば、多種類のマテリアルから作ることができる。適当なマテリアルは、溶融シリカ、ガラス、アルミナ、ベリリアおよびテフロン（商標）を含む。マイクロキャピラリーは、溶融シリカで作られることが好ましい。

第１の内面コーティング！！Ｉ（サブレイヤー１２）は、分離カラムの内面に電子対共有付着された高度にクロスリンクされたポリメチルビニルシロキサンジオールからなるのが好ましい。このシロキサンジオールのベース層は、コーティングにｐＨ安定性を与え、その二重結合を介して、濃厚な最終のトップレイヤーにグラフトまたは吸着するプラットフォームを提供する。トップレイヤー１６は、シロキサンジオールにグラフトされた高度にクロリンクされたポリメチロールアクリルアミドからなるのが好ましい。ポリメチロールアクリルアミドのトップレイヤーは、電気浸透フローを抑制またはコントロールするものであり、前記カラムの面に分析物が吸着されるのを防ぐ。さらに、前記コーティングは、広いｐＨ範囲にわたり安定性を確保し、高度の実験再現性を与える。前記カラムは、高い電界においての数百回にのぼる使用に耐えることができる。

サブレイ＋−１２の！Ｉｌ製に使用されるシロキサンジオールは、確立すれた工程により、１，３，５，７テトラビニルテトラメチルシクロテトラシロキサンから酸性触媒または塩基性触媒によって合成されるものである（例えば、ジェイ。

ダブリュ、ディーン、′シリコン・アドヘ７ブ−シーランツ・アンド・アドヘシブズ、アービングΦスケイスド、ハン゛ブー　・オ　・アドヘシ　ズ、ニューヨーク：ヴアン・ノストランド、ラインホルト（１９９０）参照）。図２を参照すると、１，３，５，７テトラビニルテトラメチルシクロテトラシロキサンが開環され、縮合反応されて、シロキサンジオールの長いポリマーが作られる。シロキサンジオールの分子量は、１，３，５，７テトラビニルテトラメチルシクロテトラシロキサンに対する酸または塩基それぞれのレシオによってコントロールされる。

このようにして作られたシロキサンジオールは、ア７レキルドリアセトキシンランのようなりロスリンカ−と共に無水エーテルのような無水溶剤に適当なレシオ（例えばＮ　２０　：　１　＋　ｗ／　ｖ　）で溶解される（図３）。二つのコンポーネンツは、ついで、”スタティック”方法を用いて、電気泳動カラム（例えば、溶融シリカのもの）の内面に施されるもので、該方法においては、前記カラムには、該溶液が溝たされ、一端を閉止し、他端からヴ１キュウムをかける。

溶剤蒸発後、付着した皮膜は、約２４時間に亙って、大気中の湿気にさらされ、クロスリンキングおよび共付結合される。また別の手段としては、例えば、アシロキシシロキサンジオールのような単一コンポーネントシステムを用いることもできる。このフンバウンドは、同じ分子内にシロキサンジオール拳ポリマーとクロスリンカ−を含む。ついで、湿気にさらして、クロスリンキング工程が部分的に開始される。

スターティングのシロキサンジオール拳ポリマーのジオール末端基のみがサブレイヤーｅクロスリンキングΦプロセスに関連するので、サブレイヤー・マトリックスの内面ビニル側鎖がトップレイヤーの付着に完全に利用される。

このような付着を行うには、クロスリンクされたポリメチルビニルシロキサンジオールでコーティングされたカラムにアクリルアミド、Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎξテトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）および過硫酸アンモニウムの溶液を充填する。

アクリルアミド分子は、重合し、図４に示すように、遊離ビニル基と反応してシロキサンジオールの面にグラフトされる。約１２時間の後、グラフトされないポリアクリルアミドは、注射器で追い出される。

７０キサンジオール−ポリアクリルアミドの皮膜をさらに安定化させるために、該カラムにｐＨを１０に調節したフォルムアルデヒドの水溶液を充填する。ハント他の米国特許第３．２１４．４２０号に示されているように、前記フォルムアルデヒドは、アクリアミドの内面のアミド基と反応して、メチロールアクリルアミドを形成し、これは、強くクロスリンクして、ポリメチロールアクリルアミドまたはトップレイヤー１６を形成する（図１）。約３時間の後、フォルムアルデヒド溶液は、注射器で追い出され、前記カラムは、使用準備完了になる。この二工程クロスリンキング・プロセスは、例えば、ビスアクリルアミドを使用したり、または、キャピラリー内でメチルアクリルアミドを直接重合して、ポリアクリルアミド分子をクロスリンクするスタンダードな一工程方法よりも簡単にコントロールされるものである。多種類の他のマテリアル（例えば、実施例Ｂに示されるようなもの）もクロスリンクされたシロキサンジオール・サブレイヤーに同じようにして付着される。さらに、ファイナルなトップレイヤーを電気対共有付着の代わりに、吸着によってサブレイヤーにグラフトできる。とりわけ吸着されるコンポーネンツは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）　、セルロース誘導体、デキストランまたはポリビニルアルコールである。

発［１１１のコーティングは、ガスクロマトグラフィ、ＨＰＬＣおよび超音速流体クロマトグラフィにおける不動態化固定相として、使用されることもできる。

この用途のためには、シロキサンジオールｐｍ＜クロマトグラフィのサポートに高度にクロスリンクされ、電子対共有付着されたもの）がそれ自体相互に作用する面として機能する。原理的には、疎水性または親水性のシロキサンジオールを使用してサーフエースのレイヤーを形成する。例えば、逆相クロマトグラフィには、ポリアルキルシロキサンジオールが使用できるものである。アルキル基のタイプとレシオを変えることで、異なったクロマトグラフ選択性を得ることができる。特定の選択性は、特別の選別子（例えば、キラルセレクター）をシロキサンジオール層に結合することによってイントロデユースされることができる。

高度にクロスリンクされたポリメチルビニルシロキサンジオールは、はとんどどのようなマリアルの上に平滑でしっかりしたフィルムを形成するから、そして、その二重結合が広い範囲にわたるモノマーとポリマーとに異なる特性をグラフトさせるから、発明のコーティングは、試料マテリアルの吸着を防ぐことが必要であるすべての分野に亙って使用されるものである。これらの用途としては、例えば、ガラスプレート、試料容器、ステンレススチールのジヨイント、ピペット先端、エレクトロスプレィ・マス分光器チップなどのコーティングである。

シロキサンジオールのサブユニットを重合する化学反応は、極めて簡単に行える。したがって、サブレイヤーの多数の付随的なモディフィケーシ目ンもまた発明の範囲内にある。例えば請求核末端基のいずれか（例えば、ソアミノまたはジチオール）をもつシロキサンポリマーは、シロキサンジオール形成の反応条件を変えることで作ることができる。これらのポリマーは、アルキルトリアセトキシシランまたは各種の適当なりロスリンカ−（例えば、メチルトリメトキシンラン、メチルトリス（メチルエチルケトキシイミノ）シラン、メチルトリス（シクロへキシルアミノ）シラン、メチルトリス（Ｎ−メチルアセトアミド）シラン、テトラニドキシンランなど）と同じようにクロスリンクできるものである。さらに、クロスリンクされたンロキサンジオール層は、第２のコーティングの付着のために、各種バラエティに富んだ基を含むことができる。上記したビニル反応性センターのほかに、適当な反応性または相互作用の基は、限定されるものではないが、アルキル、アリル、オレフィン、カルボニルまたは非求核エイジェントを含むものである。さらに、付加的コーティング層の取り付けのサイトは、ポリマーの混合体により提供されるものである。

実施例Ａ）　ポリメチルビニルシロキサンジオールは、塩基性触媒（実施例Ｉ）および酸性触媒（実施例■）により合成できる（図２）。

実施［２５ｍ１の１．３．５．７−テトラビニルテトラメチル７クロテトラシロキサンと０．　１４４７ｇのパウダー杖のＮａＯＨを１４０°Ｃに加熱する。３時間後、粘稠性の混合体をエーテルに溶解し、水洗して中性にする。エーテル溶液は、Ｎａａ　Ｓ。

４の上で乾燥され、溶剤が蒸発した。黄色みを帯びたポリメチルビニルシロキサンジオールは、粘度約７１ボイズを有するものである。

実施例一旦２５ｍ］の１．３，５．７−テトラビニルテトラメチルシクロテトラシロキサンと６．９ｍｌの濃縮Ｈ２ＳＯ４とを２５ｍ１の無水エーテルに溶解する。３日の後、室温で撹拌し、粘稠性の混合物を水洗して中性にする。エーテル溶液は、Ｎａｇ　Ｓ。

４の上で乾燥され、溶剤が蒸発した。無色のポリメチルビニルシロキサンジオールは、粘度約７５ポイズを宵するものである。

Ｂ）　高度にクロスリンクされたシロキサンジオールコーティングは、実施例■ に示されているようなスタティックな方法により施すことができる。周囲温度で夜通し、キャピラリーの面にシロキサンジオールをクロスリンクさせ、結合させた後（図３）、アクリルアミド（実施例■）、ビニル−ピロリドン（実施例■）またはＮ−アクリロイルトリス（ヒドロキシメチル基）アミノエタン（ＮＡＴ）（実施例■）のいずれかをポリマーサブレイヤーにグラフトする。グラフトされたポリアクリルアミドは、さらに、フォルムアルデヒドれは、それ自身と自動的にクロスリンクする（実施例■）。使用できる他のモノマーは、例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）　、酢酸ビニル、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、Ｎ−メタクリロイルトリス（ヒドロキシメチル）−アミノエタン、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ．Ｎ− ジメチルアクリルアミド、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルフォン酸、ジアリルジメチルアンモニウムクロライドである。

災施桝−皿５０ｍｇのポリメチルビニルシロキサンジオールと３μｌのビニルトリアセトキシシランとを４．６ｍｌの無水エーテルに溶解する。該混合物を注射器によって溶融シリカカラム（内径＝７５μｍ１長さ＝７０ｃｍ）へ充填する。該カラムの一端を隔壁で閉止し、他端にヴアキュウムをかける。溶剤が完全に蒸発した後、該隔壁を除去し、該カラムを２４時間にわたり、空気中の湿気にさらす。皮膜の厚さは、約０．２μｍである。

実施例−■ １ｍｌの水に５０ｍｇのアクリルアミドの溶液（５％モノマー）を３０分間、ヘリウムを介してのバブリングにより脱ガスする。１０μｍのＴＥＭＥＤ　（水に１０重量％）および１０μＩのＡＰＳ　（水に１０重量％）を添加する。該混合物を注射器により直ちに／ロキサンジオールをコティングしたカラムへ注入する。１２時間の後、重合されているが、グラフトされていないアクリルアミドが追い出される。該カラムは、使用準備完了である。

実施例−■ １ｍｌの水に４００ｍｇのビニルピロリドン溶液（４０％モノマー）　ヲ３　０　分間、ヘリウムを介してのバブリングにより脱ガスする。Ｉ）Ｈを水酸化アンモニウム（４０％）で１０に調節し、７μ五のＨ２　０２　（３０％）を添加する。該混合物を注射器によりシロキサンジオールがコーティングされたカラムへ注入する。５０°Ｃ，３０分後、該カラムを５０μｌの水でリンスする。該カラムは、使用準備完了である。

実施例−■ １ｍｌの水に４０ｍｇのＮ−アクリロイルトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＮＡＴ）の溶液（４０％モノマー）を３０分間、ヘリウムを介してのバブリングにより脱ガスする。３μｌのＴＥＭＥＤ　（水に１０重量％）および３μ ｌのＡＰＳ（水に１０重量％）を添加する。該混合物を注射器により直ちにシロキサンジオールをコティングしたカラムへ注入する。１２時間の後、重合されているが、グラフトされていないＮＡＴが追い出される。該カラムは、使用準備完了である。

実施例−■ 実施例■のポリアクリルアミド・カラムにＮａＯＨでｐＨを１０に調節したフォルムアルデヒドの３７％溶液を充填する。３時間後、該溶液を５０μｌの水でリンスする。該カラムは、使用準備完了である。

Ｃ）　ポリメチルビニルシロキサンジオールのサブレイヤー皮膜を形成した後、ビニル基二重結合は、また、エポキシ基（実施例■）またはジオール基（実施例 ■）へコンバートできる。酸性触媒、塩基性触媒または加熱処理により、エポキシ基は請求核ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミンまたはポリビニルアルコール基を使用して、ビニルモノマー（アクリルアミド、酢酸ビニル、ビニル・ピロリドンなど）をシロキサンジオールΦコアヘゲラットさせ、重合させる（実施例■ ）。さらに、チャージされた基をビニル基二重結合を介してサブレイヤーに添加すれば、それらは、電界を作用させたとき、電気浸透フローをエスタブリツシュするのに役立つ。（実施例Ｘ１ＸＩ）。これらのチャージされた基は、適当に選択されたトップレイヤー、例えば、ポリエーテルによってスクリーンされることができ、この結果、移動する溶質イオンは、静電的に吸着されることはない。

実施例−■ カラムに１ｍｌのエーテルにクロロ過安息香酸０．４ｇ　（５０〜６０％）の溶液をオーバーナイトで充填した。翌日、該カラムに１ｍｌのジオキサンに０．２ｇのＰＥＧ，３０ μｌのＢＦ３の溶液を充填した。１００″′０１　１時間後、該カラムをメタノールで，ついで、水でリンスした。

実施例−■ カラムに０．５ｍｌの水、０．２ｍｌのアセトン、２４ｍｇ　（０．０９ｍモル）の０８０４およびＯ．１８２ｇ　（１．０６ｍＭ）のＮ−メチルモルフォリン −Ｎ−オキサイド・２ＨＱＯの溶液を充填した。２４時間後、該カラムを水洗し，０．５ｇのアクリルアミド、１０ｍｌの水、１Ｍの硝酸に０．１Ｍの４価のセリウムを含む硫酸アンモニウム０．２５ｍｌの溶液を充填した。１２時間後、該カラムを水でリンスした。

実五［１ｍｌの水におけるマイナスチャージの２　アクリルアミド−２−メチルプロツインスルフォン酸４ｏｍｇをへ１功ムを介してのバブリングにより脱ガスする。

５μｌのＴＥＭＥＤ　（１０重■％）と５μｌのＡＰＳ（１０重量％）を添加する。シラツノオールをコーティングしたカラムに該溶液が直ちに充填され、１２時間後、該溶液を追い出し、該カラムは、使用準備完了となる。ネガティブにチャージされたニアーｆ４７グは、カソードに対し強い　ｅｏｆ　ｒＥＩｅｃｔｒｏｏｓｍ。

ｔｉｃ　ｆｌｏｗｌＴｏｗｎｓ　ａｎｄ　ＲｅｇｎｉｅｒｓＡｎａｌ、Ｃｈｅｍ、Ｖｏｌ、６４：２４７３−２４７８　（１９９２年）による」を作る。

実施例−ｘｌ１ｍｌの水におけるプラススチャージのジアリルジメチル塩化アンモニウムの３２０ｍｇをヘリウムを介してのバブリングにより脱ガスする。　２０μｌのＴＥＭＥＤ（１０重量％）と２０μｍのＡＰＳ　（１０重量％）を添加する。シランジオールをコーティングしたカラムに該溶液が直ちに充填され、１２時間後、該溶液を追い出し、該カラムは、使用準備完了となる。ポジティブにチャージされたコーティングは、アノードに対し強いｅｏｆを作る。

Ｄ）　発明の複層コーティングは、プロティンのオープンチューブＣＺＥ分離（実施例Ｘ■、ＸＩＩＩ）に、プロティンのＳＤＳゲル分離（実施例ＸＩＶ）に、ＤＮＡのゲル分離（実施例ＸＶ）に、ＤＮＡンーケンシング分離（実施例ＸＶＩ）に成功裡に使用されている。他の用途も除外されるべきものではない。

実施例−Ｘ旦（図５）。試料：　（１）リゾチーム、（２）シトクロムｃｓ　（３）リボヌクレアーゼ、（４）ミオグロビン、（５）トリプンノゲン。　コーティング：実施例ＩＸ。

条件：　全長Ｌ：５６ｃｍ、注大端部から検知器への長さＩ＝２８ｃｍ１内径＝７５μｍ検知：　紫外線２１４ｎｍ、１５ｋＶ、７μＡ：　バッフｙ　：２０ｍＭと一アミノカプロン酸　（ｐＨ４，４）。

天動Ｊ（Σ（■ （図６）。試料：　（１）グルコース−６−燐酸脱水素酵素、（２）トリプシン拳インヒビタ、（３）β−ラクトグロブリン　Ａ１　（４）Ｌ−アスパラギナーゼ、（５）αラクタルブミン。　コーティング：　実施例■。

条件：　バッファー：２０１ＭＥＴＡＰＳ　（ｐＨ８，８）以外は、実施例Ｘ■ と同じである。

天動［（図７）。試料：還元されたプロティン−３ＤＳ　錯体、（１）ミオグロビン、（２）炭酸脱水酵素、（３）オバルブミン、（４）牛血清蛋白、（５）加燐酸分解酵素　Ｂｏコーティング：　実施例■。

条件：　全長Ｌ＝２５ｃｍ１注大端部から検知器への長さ１＝１８ｃｍ１内径＝７５μｍ定電流３０　ｕ　Ａ　２５分間、６．５ｋＶ；７０ｍＭアミノ−メチルプロパンジオール、０．６％　ＳＤＳ／ＴＥＳ　（ｐＪ８．１）に溶解されたバッファーおよびポリマーΦネットワーク１０％（ｗ／ｖ）デキストラン（ＭＷ　２，０００゜０００）。

実施例−Ｘｆｆｉ（図８）。試料：ＤＮＡ　ΦＸ１７４−　ＨａｅＩ［Ｉ。　コーティング：　実施例■条件：　全長Ｌ＝５６ｃｒｒｈ注入端部から検知器への長さＩ＝３０ｃｍ１内径＝７５μｍ検知：　紫外線２Ｅ３０μｍ：　３００ｖ／ｃｍ＋　１３μＡ；バッファーおよびポリマー・ネットワーク３％ポリアクリルアミド。

実茄Ｊに【■ （図９）。試料：　ＦＡＭ−ラベルされたＭ１３（−２１）プライマース（ＡＢＩ）、（Ａ＞Ｇ）−を用いるＭ１３ｍｐ１８シングル・ストランドのファージＤＮＡの連鎖。

コーティング：　実施例■。　全長Ｌ＝３３ｃｍ、注入端部から検知器への長さ１＝１８ｃｍ１内径＝７５μｍ０エレクトロフェログラム（通電クロマトグラム）の断面が示されている。分離マトリックス：　１００％ＴＥＭＥＤの０．５μ ｍおよび１０％ＡＰＳの１．０１１］で重合された６％Ｔアクリルアミド。　電界：２５０Ｖ／ｃｍ。

分離温度：２４’Ｃ，界面導電インンエクンｅン：７秒。

ゲルバッフｙ−＋Ｉ　Ｘ　ＴＢＥ＋３０％（ｖ／ｖ）フォルムアミド＋３．５Ｍ尿素。

Ｅ）　他の実施例においては、トップレイヤーは、吸着性コーティングにより施すことができる。

実施例Ｘ■ ンロキサンをコーティングしたカラムらにセルロースの１％水ｉｔＪ　（高粘１ｉ性）を充填する。１２時間後、該溶液を追い出し、使用準備完了となる。セルロースの代わりに、０．５％ＰＶＡ１２４　０００水溶液が同じ用途に使用できる。

発明の他の実施例は、本明細書を考慮し、または、ここに記載された発明のプラクティスから当業者に明らかである。以下の請求の範囲に示された発明の真の範囲とスピリットで、明細言と実施例は、例示的のみとしてみなされるべきであることが意図されている。

ＦＩＧ、４ＦＩＧ、５ＴＩＭＥ　（ＭＩＮ）ＦＩＧ、９Ａフロントページの続き（７２）発明者　フォレット、フランチェスクツ州　マルデン　ナンバー　４０　ハイランド　アへニュー　５２５

Claims

【特許請求の範囲】

１．高精度で高いバフォーマンスの電気泳動のためのマイクロキャピラリーカラムで、以下の構成からなるもの：内部キャビティと内面をもつ壁とを有するマイクロキャピラリー；クロスリンキング剤と高度にクロスリンクされ、前記壁の前記内面に共有付着または非共有付着されたシロキサンジオール・ポリメリック・コーティングマテリアルのサブレイヤー；および前記サブレイヤー・コーティングマテリアルに共有付着または非共有付着されたコーティングマテリアルのトップレイヤー。
２．前記マイクロキャピラリーが溶融シリカで作られている請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
３．コーティングマテリアルの前記トップレイヤーがクロスリンクされている請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
４．前記サブレイヤー・コーティングマテリアルがポリメチルビニルシロキサンジオールである請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
５．コーティングマテリアルの前記トップレイヤーは、クロスリンクされていないポリアクリルアミドからなる請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
６．コーティングマテリアルの前記トップレイヤーは、クロスリンクされたポリアクリルアミドからなる請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
７．コーティングマテリアルの前記トップレイヤーは、ポリメチロールアクリルアミドからなる請求の範囲１のマイクロキャピラリーカラム。
８．高精度で高いパフォーマンスの電気泳動のためのマイクロキャピラリーカラムで、以下の構成からなるもの：内部キャビティと内面をもつ壁とを有する溶融シリカのマイクロキャピラリー；前記壁の前記内面に共有結合され、高度にクロスリンクされたポリメチルビニルシロキサンジオールであるコーティングマテリアルのサブレイヤー；および前記コーティングマテリアルのサブレイヤーに共有結合されているポリアクリルアミドからなるトップレイヤー。
９．前記ポリアクリルアミドがクロスリンクされたポリアクリルアミドである請求の範囲８のマイクロキャピラリーカラム。
１０．前記ポリアクリルアミドがポリメチロールアクリルアミドである請求の範囲８のマイクロキャピラリーカラム。
１１．下記の工程からなる面にコーティングを形成する方法：コーティング付着の面を準備する；二つの求核末端基をもつシロキサン誘導体からなるポリマー・コーティングマテリアルの層を前記面に付着する；および前記ポリマー・コーティングマテリアルの個々のポリマーを架橋剤を用いてクロスリンクさせること。
１２．前記の付着工程において、前記のポリマー・コーティングマテリアルの層が前記の面に共有結合されている請求の範囲１１の方法。
１３．前記の付着工程において、前記のポリマー・コーティングマテリアルの層が前記の面に非共有的に関連されている請求の範囲１１の方法。
１４．前記の付着工程において、シロキサン誘導体は、シロキサンジオールである請求の範囲１１の方法。
１５．前記の付着工程は、前記のクロスリンキング工程に先立って行われる請求の範囲１１の方法。
１６．前記クロスリンキング工程において、前記架橋剤は、前記ポリマー・コーティングマテリアルからセパレートのものである請求の範囲１１の方法。
１７．前記架橋剤は、前記クロスリンキング工程に先立つパーシャルのクロスリンキング工程における前記ポリマー・コーティングマテリアルの個々のポリマーに予め付着されている請求の範囲１１の方法。
１８．前記ポリマー・コーティングマテリアルは、複数の非求核付着センターを備える請求の範囲１１の方法。
１９．前記非求核付着センターは、ビニル基からなる請求の範囲１８の方法。
２０．前記非求核付着センターは、アルキル基からなる請求の範囲１８の方法。
２１．前記面に付着の前記層は、サブレイヤーであって、前記方法は、さらに、前記コーティングの第２の層の分子を前記ポリマー・コーティングマテリアルの前記複数の非求核付着センターに付着させる工程を含む請求の範囲１８の方法。
２２．前記第２の層のための前記分子がそれら自身クロスリンクされている請求の範囲２１の方法。
２３．前記第２の層のための前記分子が前記第２の層のための前記分子を付着する前記工程の後にクロスリンクされる請求の範囲２２の方法。
２４．前記ポリマー・コーティングマテリアルは、ポリメチルビニルシロキサンジオールである請求の範囲２１の方法。
２５．前記コーティングの第２の層のための前記の分子は、ポリアクリルアミドである請求の範囲２１の方法。
２６．第２の層のための分子を付着させる工程において、第２の層のための前記の分子は、前記ポリメチルビニルシロキサンジオールのビニル基と共有的に反応する請求の範囲２４の方法。
２７．第２の層のための分子を付着させる工程において、第２の層のための前記の分子は、前記ポリメチルビニルシロキサンジオールと非共有的に結合する請求の範囲２４の方法。
２８．下記の工程からなる、面に複層コーティングを形成する方法：コーティング付着の面を準備すること；シロキサンジオール・ポリマー・コーティングマテリアルの副層を前記面に付着すること；架橋剤を用いて個々のシロキサンジオール・ポリマーをクロスリンクさせること；および前記複層コーティングのトップ層のための分子を前記クロスリンクされたシロキサンジオール・ポリマー・コーティングマテリアルの非求核付着センターへ付着させること。
２９．下記を備える、面へマルチレイヤー・コーティング：前記面へ共有結合または非共有結合されているポリマー・コーティングマテリアルのサブレイヤーで、前記ポリマー・コーティングマテリアルは、二つの求核末端基をもつシロキサン誘導体からなり、前記コーティングマテリアルの個々のポリマーは、架橋剤を用いてクロスリンクされており、前記ポリマー・コーティングマテリアルは、さらに複数の非求核付着センターを備えているものであるサブレイヤー；および前記ポリマー・コーティングマテリアルの前記複数の非求核付着センターへ共有的に、又は、非共有的に付着されているコーティングマテリアルの第２の層。
３０．前記シロキサン誘導体は、シロキサンジオールである請求の範囲２９のマルチレイヤー・コーティング。
３１．前記非求核付着センターは、ビニル基である請求の範囲２９のマルチレイヤー・コーティング。
３２．下記を備える、面への一般的なコーティング：前記面へ共有付着または非共有付着されているポリマー・コーティングマテリアルで、前記ポリマー・コーティングマテリアルは、二つの求核末端基をもつシロキサン誘導体からなり、前記コーティングマテリアルの個々のポリマーは、架橋剤を用いてクロスリンクされているもの。