JPH07503013A

JPH07503013A - メチレンホスフィン酸を含むペプチド連結単位

Info

Publication number: JPH07503013A
Application number: JP5512613A
Authority: JP
Inventors: ジャンダ　キム　ディー; ワーシング　ピーター; イケダ　ショウジ
Original assignee: ザスクリップスリサーチインスティテュート
Priority date: 1992-01-09
Filing date: 1993-01-11
Publication date: 1995-03-30
Anticipated expiration: 2019-07-28
Also published as: NO942544D0; AU677949B2; ES2119888T3; JP3547432B2; EP0629210A1; FI943282A0; US5563121A; ATE167194T1; EP0629210B1; FI943282A; WO1993014114A1; AU3441893A; DK0629210T3; CA2127295A1; DE69319101D1; NO310919B1; NO942544L; DE69319101T2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】技術分野本発明は、ペプチド配列を繋ぐための連結単位、ペプチド及びプソイドペプチドを形成するためにかかる連結単位を使用すること、並びにアスパラギン酸プロテイナーゼ（ａｓｐａｒｔｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）酵素を阻害するプソイドペプチド（ｐｓｅｕｄ。

ｐｅｐｔｉｄｅ）に関する。より詳しくは、本発明は、アスパラギン酸プロテイナーゼ酵素により開裂されるペプチド配列内の位置においてアミド結合の代わりにホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合（破壊的遷移状態類似体（ｅｘｐｌｏｄｉｎｇけａｎｓｉｔｉｏｎ　５ｔａｔｅ　ａｎａｌｏｇ））を含むプソイドペプチドに関する。

背景技術ペプチド連結単位はペプチドの構築に用いられる。最も簡単な場合には、天然に存在するし一アミノ酸がペプチド連結単位として役立つ。しかしながら、種々の非天然Ｌ−アミノ酸や広い多様性のあるＤ−アミノ酸もペプチド連結単位として役立ち得る。該ペプチド連結単位は、その連結を形成するのにペプチド結合を用いなくてもよい。数種のプソイドペプチドが開示され、先行技術においてペプチド連結単位として用いられている。

ペプチド連結単位は、２つのペプチド配列を連結するのに用いてもペプチドの終端で用いてもよい。ペプチド連結単位のどちらかの側に存在するペプチドは、機能的に別のものであってもよい。

ペプチド連結単位は、合成プロテイナーゼ阻害物質の構築に用いられる。多くのプロテイナーゼ基質は、開裂部位のどちらかの側の側面に位置するブロテイナーセ結合領域又は認識領域を含んでいる。従って、合成プロテイナーゼ阻害物質の１つのクラスでは、既知のプロテイナーゼ基質の該結合領域又は認識領域と相同なアミノ酸配列を有するペプチドが用いられる。かかるペプチド２つを合成プロテイナーゼ阻害物質、即ち、開裂部位のとちらかの側の側面に位置する該結合領域又は認識領域と相同な配列を有するペプチドに用いる場合には、該２つのペプチドを用いて一緒に連結することができる。この場合、ペプチド連結単位は、開裂部位又はその近傍に位置することになろう。タンパク質分解に抵抗性でかつ該プロテイナーゼの活性部位に堅く結合するペプチド連結単位は、合成プロテイナーゼ阻害物質の構築に特に有用である。

アスパラギン酸プロテイナーゼ酵素（ＥＣ３，４，２３）は、タンパク質及びポリペプチド鎖を開裂（加水分解）する関連酵素の１フアミリーである。これら酵素は、中性の酸側で等電点を有し、菌類酵素では３５．０００〜４５，０００ダルトン（Ｄ）の分子量を有し、ペプシンについては約３５，５００ダルトンの分子量を有する。

このクラスの適例となる酵素には、哺乳動物の胃のプロテイナーゼであるペプシン、リゾソーム系の細胞内アスパラギン酸プロテイナーゼであってそのレベルが繰り返し発生する肺癌〔タントン（Ｔａｎｄｏｎ）ら、　Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３２２：２９７（１９９０））及びアルツハイマーベストにおけるアミロイド形成〔カタルド（Ｃａｔａｌｄｏ）ら、　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、、　５１３＋１８１　（１９９１））と正に相関するカテプンンＤ、アンギオテンンノーゲンを開裂してアンギオテンシンＩを生成することによって血圧を調節するレニン、及びチーズを作る際の最初の工程として乳タンパク質を開裂するキモンン（正式にはレンニンと呼ばれる）が含まれる。Ｐ、　ｊａｎｔｈｉｎｅｌｌｕ＋＋＋からの微生物酵素であるペニンロペブンンはこのファミリーのもう１つのメンノく−であるのに対して、嚢状葉植物の消化プロテイナーゼであるネペンテシン（ｎｅｐｅｎｔｈｅｓｉｎ）は植物アスパラギン酸プロテイナーゼの適例である。

１−（Ｉ　Ｖ−１ウイルスもアスパラギン酸プロテイナーゼを含有している。その酵素は、ｒ’ｒ５５”融合タンパク質のｐ１７〜ｐ２４領域を開裂することが知られている。モーア（Ｍｏｏｒｅ）ら、　ＢｉｏｃｈｅＩＩＮ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ−、１５９：４２０　（１９８９）。

このファミリーの酵素作用の正確なメカニズムはセリンプロテイナーゼのファミリーはどにはよく知られていないが、２つのアスパラギン酸基が活性部位で水と作用して加水分解されるペプチド結合の加水分解を起こすと考えられる。加水分解されたペプチド結合は、典型的には疎水性残基間の結合である。セリンプロテイナーゼファミリーの場合のような共有結合性中間体がこの酵素とその基質との間で形成されるとは考えられない。

このファミリーの酵素は、酵素−基質反応で一般的であるような酵素−基質複合体を形成する。結合は、共ｈ゛結合形成されなくても２段階プロセスであることかしばしば見出されている。

アスパラギン酸プロテイナーゼの作用を阻害する幾つかのペプチド及び偽ペプチド化合物が文献に報告されている。かかる阻害物質の適例となる議論は、リッチ（Ｒｉｃｈ）、　Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、　Ｃｈａｐｔｅｒ　５．　ＶｏｌｕＩＩＩｅ　１２．　Ｂａｒｒｅｔｔ@ａｎｄＳａｌｖｅｓｏｎ　ｅｄｓ、、Ｄｉｎｇｌｅ　ａｎｄ　Ｇｏｒｄｏｎ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｅｄｓ、、［！１ｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　ＢＹ、　Ａ＋ｎｓｔｅｒｄａｍ　（１９８６）　、及びリッチ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ。

Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ＣｈｅＩＩｉｓｔｒｙ、　Ｃｈａｐｔｅｒ　８．２．　Ｓａｍｎｅｓ　ｅｄｓ、、　Ｐ■窒■≠高盾■ Ｐｒｅｓｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｖｏｌｕｍｅ　２　（１９９０）に見られる。

幾つかの阻害物質には、酵素の天然基質に配列が類似し、天然に存在するし−アミノ酸の代わりに１又は２以上のＤ−アミノ酸も含むポリペプチドが含まれる。

もう１つのグループの阻害物質は、それらの間で加水分解が起こるＬｅｕとＡｌａの如き２つの残基の代わりにＡＨＭＨＡ又はスタチン（Ｓ　ｔ　ａ）と呼ばれる代用（３Ｓ、４Ｒ）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルへブタン酸を含有する。該スタチン含有グループの阻害物質は、最初、ベブシンカテブンンＤを約１ｏ−ＩＪ〜１０−”Ｍのに、値で及びレニンをｔｏ−’Ｍのに１値でそれぞれ阻害するペブスクチンとして知られる、天然に存在する阻害物質中に見出された。

ペプチド結合代用物としてヒドロキシエチルアミン部分を含有する阻害物質も報告されている。ここで特に興味のあるヒドロキシエチルアミン代用結合を含有する阻害物質が、ロベルツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２４８：３５８　（１９９０）　、クローン（Ｋｒｏｈｎ）ら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、、　３４：３７４０　（１９９１）及びリッチら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　ＣｈｅＩｎ、。

３４・＋２２２　（１９９１）に報告されている。幾つかのＨＩ　Ｖ関連アスパラギン酸プロテイナーゼ阻害物質についての結果を議論する考察が、ノ＼フ（Ｈｕｆｆ）、　Ｊ、　Ｍｅｄ。

ＣｈｅＩｎ、、　３４：２３０５　（１９９１）に見られる。

ルビイ（Ｌｕｂｙ）ら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　ＣｈｅｌＬ、　３１：５３２　（１９８８）に報告されたいま１つのグループの阻害物質は、開裂可能なＬｅｕ−Ｖａｌジペプチドがイソプロピルスルフィドエタノール誘導体代用物で置き換えられたアンギオテンシノーゲンのオリゴペプチド類似体を用いた。ロベルツらは、Ｊ、　Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、、　３３：２３２６　（１９９０）で、レニン阻害性分子内の開裂したアンギオテンシノーゲンＬｅｕ−Ｖａ　］結合のロイシンに隣接するアミノ末端３残基を置き換えるために、１，２．４−トリアゾロ［４，３ −ａ］　ピラジン誘導体を代用物として用いることを報告した。

他の最近の報文〔バートレット（口ａｒｔｌｅ４ｔ）ら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、　５５：６２６８（１９９０）　）に、ペプシン及びベニンロペブシンのホスホネート、ホスフィネート及びホスフィンアミド含有プソイドペプチド阻害物質が報告された。それら阻害物質は、それら酵素により正常に開裂されるであろう切断容易なアミド結合の代わりにリン含有結合を含むプソイドペプチドであった。

ホスホネート基は−Ｐ（ＯＸＯＨ）Ｏ−結合を有し、この場合、リン原子の示した結合手が炭素に結合してアミドカルボニル基の場所を占め、酸素のフリーの結合手が別の炭素原子に結合してアミド−ＮＨ−基の場所を占める。ホスフィネート基は−Ｐ（ＯＸＯＨ）−結合を有する結果、リン原子は２つの炭素原子に結合する。ホスフィンアミドは−Ｐ　（０）（ＮＨ，）−結合を有する結果、リン原子が２つの炭素原子に結合して＝ＮＨ□側基を含む。

」二の結合から分かるように、それぞれ約１．５及び３．０のｐＫＡ値を有するホスホネート及びホスフィネート含有化合物は、生理的ｐＨ値、例えば、ｐＨ７，２〜７．４でアニオン電荷を有すると考えられる。上のバートレットらは、ホスホン酸誘導体の調製における中間体としてホスホン酸エステル結合Ｃ−Ｐ　（ＯＸＯＣＲ、）０−）を含有する化合物の調製を開示したが、それらエステルを用いて開裂させ被分析ホスフィネ−１・を生成させた阻害データは報告されなかった。

発明の要旨本発明は、２つのペプチド配列、即ち、アミノ末端ペプチド配列とカルボキン末端ペプチド配列を繋ぐための連結単位を意図する。好ましい態様においては、該連結単位は、第１アミノ酸残基（ａａ、）、第２アミノ酸残基（ａａ２）、及び第１アミノ酸残基と第２アミノ酸残基との間の”破壊”結合を有するジペプチドを含む。第１アミノ酸残基は、主鎖カルボニル基を欠く代わりにホスフィン酸基を有する残基、即ち、（ａａ、−ＰＯＯＨ−）であることを除いては従来のものである。第２アミノ酸残基も従来のものであって、主鎖アミノ基を含む残基、即ち、（−ＮＲ−ａａ＝）（ＲはＩ−１又はＣである）である。第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間の破壊結合はペプチド結合を欠いているが、その代わりにメチレン基を有する。このメチレン基は、第１アミノ酸残基のホスフィン酸基と第２アミノ酸残基の主鎖アミノ基の両方に結合する。生成するホスフィン酸−メチレン−アミノ結合は“破壊”結合を形成する。

酸性ｐＨでは、この“破壊”結合は、次の式、即ち・（ａａｔ　ＰＯＯＨ）　ＣＨ２（ＮＲａａｚ）で表すことができる。生理的ｐＨヌはその近傍では、ホスフィン酸とアミノ基は両性イオンのホスフィネートとアンモニウム基になる。この場合、“破壊”結合は、次の式、即ち：（ａａｔ　ＰＯＯ−）　ＣＨｔ　（ＮＨＲ”　ａａｔ）て表すことができる。

上のジペプチドは、アミノ酸残基又は配列を連結するのに用いることができる連結単位を構成する。該ジペプチド内の第１アミノ酸残基（ａａ、）は、“フランキングアミノ酸のカルボキシル基と又はアミノ末端ペプチド配列のカルボキシル基とペプチド結合を形成するのに用いることができる結合可能なアミノ基を含んでもよい。更に又は別に、該ジペプチド内の第２アミノ酸残基（ａａ２）は、“ フランキングアミノ酸のアミノ基と又はカルボキシル末端ペプチド配列のアミン基とペプチド結合を形成するのに用いることができる結合可能なカルボキシル基を含んでもよい。生成するオリゴ又はポリペプチドは、“破壊”メチレン結合を有するそのジペプチドを伴う連結単位を含むので改良される。“破壊”メチレン結合は、２つのペプチド配列、即ち、アミン末端ペプチド配列とカルボキシル末端ペプチド配列の間に位置しても、これら配列の１つにだけ結合してもよい。

本発明は、アスパラギン酸プロテイナーゼ酵素の阻害物質も意図している。該阻害物質はプソイドペプチドであって、酵素により開裂されるペプチド性アミド結合の代わりに該プソイドペプチド配列内のその位置で、通常はホスフィネート− メチレン−アンモニウム結合（ＰＯ，−ＣＨ，ＮＨ，”　）として両性イオン型で存在するホスフィン酸−メチレン−アミン結合［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ，）を含み、“ａ”は０．１又は２である。ここではその新規な結合をときどき破壊性遷移状態類似体という。かくして、本発明の阻害物質のホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合により占められる位置でペプチド結合を有するオリゴペプチドは、アスパラギン酸プロテイナーゼにより開裂される。

プソイドペプチドアスパラギン酸プロテイナーゼ阻害物質は、典型的には、３〜約１５アミノ酸残基、好ましくは４〜約ｌＯ残基の長さを有し、リン原子がペプチド結合のカルボニル炭素原子の代わりにＰ、に結合し、メチレンアミンがペプチド結合のアミド窒素を置換しているホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合により構成されるＰｌからＰｌｏへの結合を含有する。

本発明の特に好ましいプソイドペプチドは、下記両性イオン式により表すことができる。

Ｒ’−Ｌ−ＸａａψＣＰＯ２−ＣＨ２ＮＨ，’ｌ　Ｘ２−２式中、Ｘｌは、アミノ酸残基又は約ＩＯアミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；ａは、Ｏｌｌ又は２の水素が存在できるように、それぞれ０．１又は２であり；Ｘａａは、アミノ酸側鎖を有する代用アミノ酸残基であり；Ｘ２は、アミノ酸残基又は約ＩＯアミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり：Ｚは、ＮＨ，、ＮＨ−Ｃ，〜Ｃ６アシル、ＯＨ，Ｏ−Ｃ，〜Ｃ６アルキル、ＮＨ −Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び２−アミドインダノールからなる群から選ばれ；そしてＲ１は、水素、０１〜Ｃ，アシル、トリフルオロアセチル、キノリン−２−イルカルボニル及びｔ−ＢＯＣからなる群から選ばれる。

プソイドペプチドは、約１０−６〜約１０−”　Ｍ、より好ましくは約ｌ０−８〜約１０−”Ｍの阻害定数でアスパラギン酸プロテイナーゼのｉｎ　ｖｒｔｒａ活性を好ましくは競合的に阻害する。

好ましい実施態様においては、ＸａａはＬｅｕ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ残基の側鎖を有し、Ｘ２のアミノ末端残基はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｖａ　ｌ、Ｍｅ　ｔ、Ｐｒｏ、Ａｌａ又はＰｈｅである。また、Ｘ２はピペリジン−２（Ｓ）カルボキシル基（Ｐ　Ｉ　Ｃ）又は（４ａＳ、　８　ａ　Ｓ）−デカヒドロイソキノリン−３（Ｓ）カルボキシル基（ＤＩＱ）、又はそのアミド若しくはエステルであってもよい。

生理学的に許容できるキャリヤー又は希釈剤中に溶解又は分散した上のプソイドペプチドを、アスパラギン酸プロテイナーゼを阻害するのに十分な量で含有する医薬組成物も意図している。

更に、アスパラギン酸プロテイナーゼを阻害する方法も意図している。そこでは、上の組成物を該酵素及び該酵素の基質と水性溶媒中で混合して阻害混合液を形成する。そうして形成した該阻害混合液を、該酵素のアスパラギン酸プロテイナーゼ活性が阻害されるのに十分な時間維持する。

定義本発明の化合物は、スバトラ（Ｓｐａｌｏｌａ）、　Ｃｈｅｍｊｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｓｔｒｙ　ｏｆ：Ａｍｔｎｏ　Ａｃ１ｄｓ、　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、　Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ、　ｅｄ、、　Ｖｏｌｕｍｅ　？、　Ｃ■≠垂狽■秩@５゜Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、　Ｉｎｃ、、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐａｇｅｓ　２６７−３５７　（１９８３）に記載された主鎖修飾を有するオリゴペプチド類似体についての“プサイ大括弧”　（ψ０命名法を用いて示される。その命名法に従えば：（ａ）アミノ酸残基間のハイフンは、該残基を繋ぐペプチド結合の存在を示し；（ｂ）ハイフンが存在せずに記号ψ（プサイ）と結び付いているのは、α−炭素及びその側鎖を残してアミドペプチド結合要素が除去されていることを示し；（Ｃ）ψ記号に隣接しかつその中の構造基と結合している残基の間にある大括弧０の存在は、該大括弧内で特定された構造基がペプチド性アミド結合と置き換わっていることを示し；（ｄ）　“代用物”という用語は、天然に存在する存在物の非天然置換物のことをいうので、プサイ付括弧で括られた構造基はペプチド性アミド結合の代用物であると同時に、該結合代用物を含有する残基はアミノ酸残基の代用物であり；（ｅ）　“プソイドペプチド”という用語は、ペプチド主鎖修飾を有するペプチド類似体のことをいい；（ｆ）　“プソイドジペプチド”は、代用結合又は代用アミノ酸残基を含有する修飾されたジペプチド構造単位であり；そして（ｇ）プソイドペプチド主鎖の一部ではないプソイドペプチド末端におけるハイフンは、単に結合を意味しているに過ぎない。

本発明の化合物は、ペプチド性アミドカルボニル基の代わりにＰ（ＯＨ）ＣＨ２基を含有する。かくして、そのような化合物は、ペプチド性アミド結合の代用物としてψ（ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ，’ｌで記されるホスフィン酸−メチレン− アミンの一部として５価の四面体リン原子を含有する。その結合は、両性イオン型のホスフィネート−メチレン−アンモニウムとしてψ［ＰＯ２−ＣＨ２ＮＨよ〕と記される。該結合は、以下で説明するように、Ｊ）Ｈ値及びＰ、゛のアミノ酸残基に依り、ψ　［ＰＯ，ＨＣＨＩ　ＮＨ’　〕、ψ　ｌ：Ｐｏ　（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ，”〕、ψ［ＰＯ，−ＣＨ，Ｎ］等として存在することもてきる。意図しているオリゴプソイドペプチドは、通常、両性イオン型で存在するので、該ペプチド性アミド結合代用物を、通常、ホスフィネート−メチレン−アンモニウム基又は結合という。

“オリゴペプチドという用語はその通常の意味で用いられ、１０又はそれより少ないアミノ酸残基を含有するペプチドを意味する。同じく、“オリゴプソイドペプチド”という用語は、ＩＯ又はそれより少ないアミノ酸残基及びそれらの代用物を含有するプソイドペプチドのことをいう。

ここて用いるもう１つの命名法は、ヒドロラーゼ酵素のペプチド基質を記載するために開発されたシェフター（Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒ）とバーガー（Ｂｅｒｇｅｒ）、　ＢｉｏｃｈｅａＢｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｕｎ、、　２７：１５７　（＋９６７）の命名法である。その命名法に従えば、ヒドロラーゼ酵素のペプチド基質は、加水分解点から２方向に番号付けされる。

開裂されるジペプチド部分のアミノ酸残基はＰｌ及びＰｌ“と番号付けされるが、これは、開裂後に、Ｐ１残基が一方の開裂部分のカルボキン末端残基になり、Ｐ１°残基が他方の部分のアミノ末端残基になるように付される。Ｐ１゛含有部分のカルボキノ末端に向かう残りの残基は、カルボキシ末端に向かってＲ２“、Ｐ、“、Ｐ、“・・・と番号付けされる。Ｐ１残基を含有する部分の残りの残基は、その部分のアミノ末端に向かってＲ２、Ｒ３、Ｐ、・・・と番号付けされる。

かくして、開裂されるヒドロラーゼ基質オリゴペプチドのジペプチド部分は、Ｐ、−Ｐ、’と定義される。ノエフターとバーガーの命名法は、Ｐｌ及びＰ１゛残基を連結している結合がペプチド結合であってもなくても、また加水分解が可能であってもなくても用いられるので、Ｐｉ−Ｐｌ゛が先に定義した開裂されないブソイドノペプチドを構成するプソイドペプチドで有用である。

従って、シェフターとバーカーの命名法は、その化合物がオリゴペプチド又はプソイドペプチドのいずれであるかに拘らず、正常に開裂する結合を特定するだけでなく、そのいずれの側の残基の位置をも特定する。その命名法に従えば、以下に記載する意図するプソイドペプチドの残基Ｐ、及びＰ、゛は、ホスフィネート −メチレン−アンモニウム基により繋がれる。

本発明は、アスパラギン酸プロテイナーゼに可逆的に結合してその活性を競合的に阻害するプソイドペプチド化合物に関する。意図するオリゴペプチド類似体は、該酵素の基質の存在下でその酵素活性を阻害するので、競合的阻害物質である。

ここで意図する化合物は、サブユニットアミノ酸の殆どがペプチド性アミド結合によって連結されているとはいえ、２つのかかる残基がペプチド性アミド結合代用物であるホスフィン酸−メチレン−アミン基（両性イオンとしてはホスフィネート−メチレン−アンモニウム基）によって連結されているので、プソイドペプチドという。このペプチド性アミド結合代用物をしばしば両性イオンの名称で呼ぶ。また、ペプチド結合及びアミノ酸側鎖を有する部分を連結する他の結合を含有する化合物もときどき偽ペプチド化合物と呼ぶ。

意図するプソイドペプチドは、アスパラギン酸プロテイナーゼに可逆的に結合して酵素−阻害物質複合体を形成する。かかる結合及び複合体形成は、酵素速度論の分野における専門化によく知られており、ときどき“自己不活化阻害物質（ｓｕｉｃｉｄｅ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ）″といわれる、酵素に非可逆的に結合して反応する物質の相互作用とは区別されるべきである。かくして、意図するプソイドペプチドは、アスパラギン酸プロテイナーゼに結合する（又は結合される）が、該酵素と化学的に反応することはない。

ボスホンアミデート含有化合物は、カルボキンペプチダーゼＡ、サーモリシン及びアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）の如きメタロペプチダーゼに対する遷移状態類似阻害物質として用いられてきた。例えば、リッチ、　ＰｅｐＬｉｄａｓｅｌｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｃｈａｐｔｅｒ　８．２．　Ｓａｍ高■刀A　ｅｄｓ、。

Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｖｏｌｕｍｅ　２　（１９９０）を参照のこと。加えて、幾つかのホスホンアミデートＳ−及び〇−エステルは、セリンプロテイナーゼの非可逆的リン酸化剤として研究されてきた。例えば、サンブソン（Ｓａｍｐｓｏｎ）ら、　Ｂｉｏｃｈｅｉ。

３０：２２５５　（＋９９１）　；オレクソスジン（Ｏｌｅｋｓｙｓｚｙｎ）ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

ＣｏｒＮｎ、、　１６１：　１４３　（１９８９）　；及びブラット（Ｐｒａｔｔ）、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２４６：９１７　（１９８９）@；及びバートレットら、　Ｂｉｏｏｒｇ、　ＣｈｅＩ！Ｌ、　１４：３５６　（１９８６）を参照のこと。

メタロペプチダーゼ及びセリンプロテイナーゼは、アスパラギン酸プロテイナーゼとは異なる様式でそれらの基質に作用する。加えて、未エステル化ホスホンアミデートは、アスパラギン酸プロテイナーゼ酵素が一般に作用する酸性ｐＨ条件下で不安定であるので、阻害物質に用いるには好ましくない候補である。ここで意図する破壊的遷移状態類似体含有プソイドペプチドは、アスパラギン酸プロテイナーゼが作用する酸性ｐＨて安定である。

アスパラギン酸プロテイナーゼ阻害物質の調製に用いる１つの戦略は、切断容易なＰ、−Ｐ、’ペプチド結合を、アミド結合加水分解の遷移状態の四面体炭素原子についての同配体（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）である非加水分解性結合代用物で置き換えることである。これまで記された、バートレットら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　ＣｈｅＩＩＬ、　５５：６２６Ｂ　（１９９０）に記載されたホスフィン酸及びホスホン酸プソイドペプチド誘導体及びペプスタチンＡのスタチン基は、その機能を満たしている。

ここに記載した化合物のホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合は、アミド加水分解遷移状態の同配体と見ることもできる。ホスフィネート−メチレン− アンモニウム結合は、アミド加水分解の後期遷移状態の同配体、即ち、カルボニル基／窒素原子結合が殆と壊れそうになるまで伸びて、水和したカルボニル基と窒素原子に電荷が発生する水和した酵素結合基質に対する同配体に相当すると考えられる。

ホスフィン酸］・−メチレン−アンモニウム結合の構造的特徴には、次のものが含まれる：（ａ）ペプチド結合の加水分解で発生する電荷を真似る正及び負の電荷、（ｂ）ホスフィネート部分が、水和した遷移状態において四面体になるアシル炭素の優れた相当物である。（Ｃ）メチレン単位が、約２，２人だけ２つの荷電したヘテロ原子を離すスペーサーとして作用する。（ｄ）このペプチド結合代用物は、ホスホネート及びホスホンアミデートに比較して酸性及び塩基性の両方で安定である。そして（ｅ）生理学的ｐＨ値、即ち、約ｐＨ７，２〜７．４における両性イオン性が、該プソイドペプチドの水溶性を高める。ここで両性イオンとして意図するホスフィネート−メチレン−アンモニウム基は、生活生体内で遭遇するｐＨ値で電気的に中性でもある（正味のイオン性電荷がない）から、プソイドペプチドが細胞膜を通過するのに寄与する。

１１、プソイドペプチド意図している好ましいプソイドペプチドアスパラギン酸プロテイナーゼ阻害物質は、３〜約１５、より好ましくは４〜約１０アミノ酸残基の長さを有することができ、リン原子が（ｉ）ペプチド結合のカルボニル炭素原子の代わりにＰｌで炭素に結合し、そして（ｉ　ｉ）ペプチド結合のアミド窒素原子の代わりに（両性イオンとしての）メチレン−アンモニウム基に結合するホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合（基）により構成されるＰｌからＰｌｏへの結合代用物を有する。

かかる阻害物質は、典型的には、１０−’〜１０−”Ｍの阻害定数、つまりＫ。

値で、アスパラギン酸プロテイナーゼのｉｎ　ｖｉｔｒｏ活性を阻害する。この阻害定数は、以下で説明するように、該酵素についての通常の負の基質の存在下で容易に確認することができる。

意図する阻害物質の残基の長さは、Ｐｌ−ＰＩ°位があたかもペプチド結合によって連結しているようにして決められる。かくして、このために、Ｐｉ位代用残基は、正常な場合に存在するカルボキシル基がたとえ四面体リン含有部分によって置換されていようとも、アミノ酸残基であるとして考慮される。

特に好ましい意図するプソイドペプチドは、下式を有する。

Ｒ’−Ｘｌ−Ｘａａψ［ＰＯ２−ＣＨ２ＮＨ，′］Ｘ、−Ｚ式中、Ｘｌは、アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり：ａは、０．１又は２であり；Ｘａａは、アミノ酸側鎖を有する代用アミノ酸残基てあり：Ｘ２は、アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；Ｚは、ＮＨ，、ＮＨ−Ｃ，〜Ｃ６アシル、０Ｈ１Ｏ−Ｃ，−Ｃ，アルキル、ＮＨ −０１〜Ｃ６アルキル及び２−アミドインダノールからなる群から選ばれ、そしてＲ冒ま、水素、Ｃ１〜Ｃ，アシル、トリフルオロアセチル、キノリン−２−イルカルボニル及びｔ−ＢＯＣからなる群から選ばれる。

ホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合代用ペプチド結合内の水素の隣の添字である“ａ”は、先に記したように、存在する水素（プロトン）の数を示し、ｐＨ値及びＰ１’残基に依りＯｌｌ又は２であってもよい。その代用物の窒素原子はアミドとしてよりはむしろアミンとして存在し、その結果、アミド窒素原子が普通はプロトン化されない生理学的ｐ　Ｈ値及びそれより低いＩ）Ｈ値でプロトン化され得る。そのアンモニウム基は、より高いｐＨ値では脱プロトン化されてフリーのアミンであることもてきる。

天然に存在するアミノ酸の全てのα−アミノ基は、２級アミンであり１つの水素原子だけを含有するプロリン（Ｐ　ｒ　ｏ）を除いて、２つの水素原子を含有する１級アミンである。かくして、プロリン以外の天然に存在するアミノ酸残基についての”ａ”は、非プロトン化（フリーのアミン）型で１であり、プロトン化（アンモニウム）型で２である。プロリンについては“ａ”は非プロトン化型で０てあり、プロトン化型でｌである。特異な２つアミノ酸である（以下に記載する）ＰＩＣ及びＤＩＱも２級アミンなのて、ＰＩＣ又はＤＩＱを含有するオリゴプソイドペプチドでは“ａ”は０又は１である。代用結合のアミノ基は、代用物のアミノ基の塩基仕度からみて、通常、ここではプロトン化されたものとして示されるから、“ａ”は通常ｌ又は２である。

前に説明したホスフィネート基の比較低いｐＫＡ値からみて、代用結合のホスフィネート含有部分は、アスパラギン酸プロテイナーゼが普通に機能する生理学的ｐＨ値及び僅かに酸性のｐＨ値において、普通、水溶液中で脱プロトン化されている。かくして、その部分をＰＯ２として示す。

従−〕て、〕代用ホスフィネートーメチレンーアンモニウム結は、ここではときとき、ホスフィネートが脱プロトン化されて負に荷電し、アミンがプロトン化されて正に荷電したものとして示される両性イオンとして示される。この両性イオンと非イオン化型とは等価であると解釈される。しかしながら、ホスフィネート及びアミノ部分のプロトン化は、プソイドペプチドが存在するか又はそれか得られる溶媒のｐＨ値で変動し得ることが理解されるへきである。

特に好ましいプソイドペプチドは、４〜約１０アミノ酸残基の長さを有し、約ＩＯ１〜約１０−”Ｍの阻害定数てアスパルチルプロテイナーゼ（ａｓｐ訂ｔｙ＋ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）のｉｎ　ｖｉｔｒｏ活性を競合的に阻害する。

Ｒ１及びＺの適例となるＣ１〜Ｃ，アシル基には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、イソブタノイル、イソバレリル（Ｉｖａ）、ヘキサノイル、シクロペンチルカルボニル等が含まれる。ｔ−ＢＯＣ基は、固相ペプチド合成において保護基としてしばしば用いられるターシャリー−ブチルオキシカルボニル基であり、ここではアミノ末端アミン又はリシン残基のε−アミノ基に結合させて用いられる。Ｎ−末端キノリン−２−イルカルボニル（ＱＣ）基も意図している。Ｚの適例となるＣ１〜Ｃ６アルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、５ｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ− ブチル、ター７ヤリーーブチル又は°Ｂｕ）、ペンチル、２−メチルブチル、シクロペンチル、ヘキシル、メタロヘキシル等が含まれるので、プソイドペプチドは、カルボキン末端Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルとして存在する。

Ｘａａ基は、アミノ酸の側鎖を有する代用アミノ酸残基である。Ｘａａは天然に存在する２０のアミノ酸のうちの１種の如何なる側鎖を有してもよいが、Ｘａａは好ましくはＬｅｕ、Ｔｙｒ又はＰｈｅアミノ酸の側鎖を有する。Ｘａａ基は、意図するプソイドペプチドの２１位にある。

ＸｌとＸ２それぞれは、アミノ酸残基又は約ＩＯまで、好ましくは約５アミノ酸残基までのオリゴペプチドであってもよい。ＸｌとＸ２の配列は、如何なるアミノ酸残基を含有していもよい。好ましくは、Ｘ２のアミノ末端残基（Ｐ１゛位残基）は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｖａ　Ｉ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ａｌａ及びＰｈｅからなる群から選ばれる。Ｘｌは、また、ピペリジン−２（ｓ）カルボニル基（ＰＩＣ）又は（４ａ３．８ａＳ）−デカヒドロイソキノリン−３（Ｓ）カルボキシル基（ＤＩＱ）であってもよい。これらＸ２部分は、プロリンの類似体とみることができる。

Ｒ’又はＺ基を除くプソイドペプチドの全長は、３〜約１５アミノ酸残基、より好ましくは４〜約１０アミノ酸残基である。かくして、ＸｌとＸ２それぞれの長さが別々に約１０アミノ酸残基までであるとはいえ、両方が１０アミノ酸残基を含むことはできない。

それでも、ＸＩはＩＯアミノ酸残基を含む（該配列の位置Ｐ２〜Ｐ１１を占める）ことができ、Ｎ２は４残基を含む（該配列の位ｆｆ１Ｐ、’〜Ｐ、′を占める）ことができる。同様に、Ｘ、がＩＯアミノ酸残基を含んで、Ｘｌが４残基を含むこともできる。

Ｘ、及びＸ、内にはあらゆるアミノ酸残基が存在してもよいが、システィンのメルカプタン、アスパラギン酸及びグルタミン酸のカルボキシル基の如きカルボキシル基、及びリンノのε−アミノ基の如き反応性側鎖は、一般的には、粘及びＸ、配列、及びＸａａ基の側鎖に存在しない。それら反応性側鎖は比較的親水性でもある。この親水性側鎖が存在しないことも、比較的疎水性の側鎖に、特にＰｌ及びＰ］°位に好みを示すこのファミリーの酵素の活性部位の機能である。

Ｘｌ及びＸ、のアミノ酸残基又はＸａａの側鎖は、Ｄ−又はＬ−のいずれの配置でオリゴペプチド類似体配列内に存在してもよく、以下には“Ｄ−”を前書きしていない限り全ての残基がＬ−配置である例が示されている。オリゴペプチド類似体に用いるのにＤ−及びＬ−アミノ酸残基の両方を意図しているだけでなく、特にプソイドペプチドのアミノ末端及びカルボキン末端において又はその隣においては、修飾されたアミノ酸残基及び特異なアミノ酸残基、アミン及びカルボン酸も意図している。

例えば、２．２−ジエチルグリジン又は２．２−ジメチルグリシン残基が両末端のいずれか又は双方に存在してもよく、又、２−アミノインダノールがカルボキシ末端残基にアミド結合して２−アミドインダノール基を形成してもよい。同様に、３−メチルブタノイル（イソバレリル；Ｉｖａ）の如き先に説明したＣ１〜Ｃ６アシル基がアミノ末端で有用であるが、カルボキシ末端で反応して３−メチルブチルアミド（イソアミルアミド＋Ｉａａ）を形成する３−メチルブチルアミン、アミルアミド（Ａｖｌ）を形成するアミノバレリアン酸もやはり有用である。

上の末端置換基及び修飾されたアミノ酸残基は、少なくとも２つの機能に役立つ。第１に、それらの存在がプソイドペプチドからイオン電荷を取り除いて膜の通過を助長する。第２に、それらは、ｉｎ　ｖｉｖｏで存在して他のやり方でプソイドペプチドを開裂するトリブノン及びカルボキシペプチダーゼＡの如き他のプロテイナーゼ及びペプチダーゼ酵素による分解からプソイドペプチドを保護するのを助長する。

意図するプソイドペプチドは、アスパラギン酸プロテイナーゼに結合して、通常分析される天然基質の存在下で約１０−ｓ〜約１ｏ−１１、好ましくは約１０− ”〜約１０−１１モル（Ｍ）の阻害定数、つまりに、で、該酵素のｉｎ　ｖｉけ０活性を阻害する。意図するプソイドペプチドの配列は、前に説明したようにホスホンアミデートエステル結合を除いては、所与のアスパラギン酸プロテイナーゼにより可逆的に結合されるオリゴペプチド、オリゴペプチド類似体、タンパク質又はポリタンパク質（基質）の配列である。

意図する阻害物質のに１値は、レニンについてのアンギオテンシノーゲンのように、酵素についての通常の基質の解離定数に比較して吟味することもできる。

意図する阻害物質は、通常の基質よりも約１０５〜１０’倍堅くそのアスパラギン酸プロテイナーゼに結合する。かくして、酵素とその基質についての解離定数が約１０−’である場合は、同じ酵素と意図する阻害物質についての解離定数は約１０−’〜１０１である。

アスパラギン酸プロテイナーゼファミリーの酵素の作用メカニズムは実質的に同一であるとはいえ、異なる基質及び阻害物質では、該酵素は異なる結合特性及び開裂特性を示す。かくしで、アスパラギン酸プロテイナーゼファミリーの異なるメンバーについては異なる配列の阻害物質を用いる。それでも、それぞれの意図する異なる配列は、該阻害物質のＰｌ及びＰ１°残基の間にホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合を含有する。

以下の表１に、アスパラギン酸プロテイナーゼファミリーのメンバーの実例及び該列挙した酵素それぞれについての適例となる意図する阻害物質の型を挙げる。

表１ｌ−ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃ）１２Ｎｔ＋］Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ　（配列番号：Ｉ）ｔ−ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ −Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｆｌ）Ｃｔ（、ＮＨ］Ｐｈｅ−Ａｖｌ　（配列番号・２）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌ’ｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃｔ（、ＮｔＯＬｅｕ　（配列番号：３）Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｌｌ）ＣＨ２ＮＨ］　Ｌｅｕ　（配列番号＝４）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃ）ｌｔＮＨ］Ｌｅｕ　（配列番号、５）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（０１１）ＣＨ＋ＮＨ］Ｌｅｕ−ＯＣｚｌｌｉ　（配列番号二〇）レニン１１ｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｌ＋ｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（Ｏｆｌ）Ｃ１１□Ｎｔｌ］Ｖａｌ−１１ｅ−Ｈｉｓ　（配列番号、７）トＢＯＣ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−１１ｉｓ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（０１（）Ｃ１ｂＮＨ］Ｖａｌ　１ｌｅ−ｔ（ｉｓ　（配列番号：８）Ｐｒｏ−旧５−１ｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ］Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ　（配列番号：９）Ａｒｇ−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−１１ｉｓ−［、ｅｕψ［ＰＯ（Ｏｔｌ）Ｃ１ｂＮＨ］Ｖａｌ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ｔ−ＢＯＣ）−０ＣＨ，（配列番号：　１０）１１ｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｔ（ｉｓ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃｔ（、ＮＨ］Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ　（配列番号：１１）１１ｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｉ！１ｓ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（０）１）ＣＢ＋Ｎ）Ｉ］Ｐｈｅ　Ｖａｔ−Ｔｙｒ　（配列番号：１２）Ａｓｐ−Ａｒｇ’Ｖａｌ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（Ｏｌｌ）ＣＨ，ＮＨ］Ｖａｌ−１１ｅ −Ｈｉｓ　（配列番号：　１３）キモンンＣＩＩ＋Ｃ（０）Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（０１１）ＣＨ，Ｎ１１１Ｐｅｔ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　（配列番号　１４）Ｃ１１，Ｃ（０）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（Ｏｌｌ）Ｃｔ＋＋ＮＩＩ］Ａｌａ−Ｌｅｕ　（配列番号：１５）ペニノロベプノンＩｖａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，Ｎｌ（］Ｐｈｅ−ＯＣＩ＋、　（配列番号、１６）ｌｖａ−Ｖａｌ−Ｖａｔ−Ｌｅｕψ［ｒ’０（ＯＨ）Ｃ１１，Ｎ１１１Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＣＩＩ、　（配列番号　１７）ペプシンＬｅｕ−Ｖａ　Ｉ　−ｈｏｍｏＡｒｇ−Ｖａ　Ｉ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（ＯｔＤＣＨ，ＮＨ］Ｖａｌ−Ａｒｇ−ｈｏｍｏＡｒｇ−ｈｏｍｏＡｒｇ−３ｅｒ− Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−１ｉｅ　（配列番号　１８）Ｃｔｌ＋Ｃ（０）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（Ｏｆ（）ＣＨｔＮＨ］ＡＩａ−Ａｌａ− Ｌｅｕ　（配列番号＝１９）Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（０）１）ＣＨ，Ｎｌ（］］Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ　（配列番号＝２０）ｌｖａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，Ｎｉｌ］Ａｌａ−＾１ａ−１ａａ　（配列番号：２１）ｌｖａ−Ｖａｌ　−Ｖａｌ−Ｌｅｕψ［ＰＯ（ＤＨ）ＣＨ２ＮＨ］Ａｌａ−Ａｌａ−ＱＣ２Ｈ，（配列番号；２２）ＨＩＶ−１プロテイナーゼＣｔ（＋Ｃ（０）−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｔｌ）Ｃ）１２Ｎ］Ｐｒｏ−１１ｅ−ｖａｌ−ＯＣｆ（、（配列番号：２R）ＣｓＨ）ｌＣ（０）−８ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｉｌ）ＣＨ，ＮｌＰｒｏ−１１ｅ−Ｖａｔ　−０ＣＩ（。

（配列番号＝２４）ＣＬＣ（０）−３ｅｒ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃ１１□ Ｎ］Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｖａｌ−ＯＣＨｚ（配列番号＝２５）Ｃ１１＋Ｃ（０）−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒψ［ｒ’０（ＯＨ）Ｃｔ１２ＮコＰｒｏ−１１ｅ−Ｖａｔ−ＯＣＨ，（配列番号：２６j ＣＨ，Ｃ（０）−３ｅｒルｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃ）１２Ｎコ円Ｃ−Ｎｆ＋−’Ｂｕ”　（配列番号・２７）ＣＨａＣ（０）−３ｅｒ−Ｌｅｕ −Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，ＮコＤＩＱ−ＮＨ−’Ｂｕ”　（配列番号：２８）ＣＨａＣ（０）−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）ＣＨＪＩＰＩＣ−ＮＨ−’Ｂｕ”　（配列番号：２９）Ｃ１１＋Ｃ（０）−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｉｌ）ＣＩ（□ＮＦＤＩＱ−ＮＨ−’Ｂｕ”　（配列番号：３０）ＱＣ−／ｊｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（ＯＨ）Ｃ）ｌ＋Ｎ］ＰＩＣ−Ｎｌ（’Ｂｕ”ＱＣ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ（Ｏｆ（）ＣＨ＋Ｎ］ＤＩＱ−ＮＨ −’Ｂｕ”傘ＱＣ−キノリンー２−カルボニルル：　Ｄ　Ｉ　Ｑ＝　（４ａＳ，８ａＳ）−デカヒトｏ　−　３　（Ｓ）−イソキノリンカルボニル：及び’　Ｂ　ｕ　＝ｔｅｒｔーブチル。

ＩＩ＋、プソイドペプチド合成意図するプソイドペプチドの合成は、殆どの分子長がオリゴペプチドにより構成されているが故に、比較的簡単である。１つの好ましい方法は、Ｐ２含有部分（ＸＩ　Ｘａａ）用の予備調製第１オリゴペプチドとＰ１゛含有部分（Ｎ２）用の予備調製第２オリゴペプチドを用いる。次いで、それら２つの部分をリン含有セグメントに繋いてこの分子を形成する。

配列Ｃ）１＋Ｃ（０）−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［ＰＯ＋−Ｃｔ（＋ＮＨ’］Ｐｒｏー１１ｅーＶａｔ　ＯＣＨｚ　（配列番号：２３）を有するＨＩＶ−１オリゴプソイドペプチド阻害物質の合成例を以下に示す。

上のオリゴプソイドペプチドの合成は、Ｎ−カルボベンゾキシ（ｃＢＺ）ホスフィン酸類似体（化合物１）で始めた。〔ベイリス（Ｂａｙｌｉｓ）ら、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、。

Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、Ｉ、　２８４５　（＋９８４）　］該著者らは、幾つかの関連する技術を用いて、幾つかのアミノ酸類似亜ホスホン酸の調製を報告した。説明すると、目的のアミノ酸側鎖を有するアルデヒドを還流しているジオキサン中で次亜リン酸のノフェニルメチルアミン塩と反応させる。続いて、臭化水素酸を用いて１００℃、４５〜１２０分間でジフェニルメチル基を切断する。

次いで、通常の技術を用いて目的のＣＢＺ誘導体を調製することができる。該著者らは、還流しているエタノール中で（＋）−α−メチルベンノルアミンと塩を形成することによってＣＢＺ保護亜リン酸を分割することも報告した。

塩化メチレン中、トリエチルアミン（ＥＴ、Ｎ）の存在下で化合物ｌと塩化トリメチルノリル（ＴＭＳ−ＣＩ）を５℃で約４時間反応させ、続いてホルムアルデヒド（ＣＩ、Ｏ）と反応させた後、亜リン酸トリメチルＣＰ　（ＯＭｅ）３：ｌと９゜０Ｃて約５時間反応させて、化合物２を約７０％収率で得た。塩化メチレン中、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）とＥＴ、Ｎの存在下で化合物２と塩化）・リフルオロメタンスルホニルを約−５０℃で約２時間反応させて、ヒドロキシメチル基をトリフルオロメタンスルホン酸エステル（化合物３）に転化した。これら工程を以下のスキーム１に纏める。

スキーム１オリゴプソイドペプチドの残りの合成はスキーム２に概説したようにして行い、以下に説明した。

スキーム２化合物３を、前もって調製したトリペプチドメチルエステルであるＰｒｏ−１１ｅ−Ｖａ　１−ＯＣＨ３と反応させて、代用Ｐ、−Ｐ、’結合並びに残基Ｐｔ’ 及びＰ、°を含有するテトラプソイドペプチド（化合物４）を得た。この反応は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、室温で約３時間行い、約６５％収率で化合物４を得た。

化合物４のｃＢＺ基を、メタノール／酢酸エチルを溶媒として活性炭担持パラジウムで室温で約３時間水素化することによって脱保護した。前もって調製した保護トリペプチドであるＡｃ−（０−ベンジル）Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎを、溶媒として酢酸エチル／ＤＭＦ混合液中、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール０−ＩＢＯＴ）の存在下で５℃で約２４時間、エチル〔（ジメチルアミノ）プロピルＪカルボジイミド（ＥＤＣ？）と反応させることによって、化合物４にカップリングさせて保護へブタプソイドペプチド（化合物５）を約６０％収率で得た。

その後、０−ベンジル（０−Ｂｎ）保護基を、メタノール／酢酸溶媒中、活性炭担持水酸化パラジウムＣＰｄ　（ＯＨ）２／Ｃ）で室温で約１８時間水素化するごとによって除去した。該脱保護工程後、乾燥ｔ−ブチルアミン（ｔ　ＢｕＮＨ＋）中、約４０〜５０℃で反応することにより該ホスフィン酸メチルエステルを除去して、脱保護したヘプタプソイドペプチド（化合物６）を約５０％収率てエナンチオマーである化合物６ａと６ｂの混合物として得た。Ｐ１残基におけるそれらの具体的な立体化学は不明であるが、説明のために上に示しである。

エナンチオマーの分割は、幾つかの工程のうちのいずれかで行うことができる。

例えば、保護した亜ホスホン酸（化合物１）を、プルノン又はα−メチルベンジルアミンの如き通常のアミン分割剤を用いて塩を形成することによって分割することができる。同様に、化合物４からのＣＢＺ基除去後に生成した脱保護テトラプソイドペプチドを、Ｒ−酒石酸を用いて塩を形成することによって分割することができる。合成し終えたオリゴプソイドペプチド阻害物質のカルボキシ末端がフリーのカルボン酸を含有する場合は、再度プルノンで分割を行うことができる。

同様に、合成し終えたオリゴプソイドペプチドがフリーのＮ−末端アミノ基を含ヂｊする場合は、分割するのにＲ−酒石酸を用いることができる。化合物５の如きオリゴプソイドペプチドエステルは、エステル基の存在のためにリン原子において第２のキうル中心を含有する結果、化合物５は、ここで行ったようにクロマトグラフィーで分割することかできる一対のジアステレオマーとして存在する。

その後、分割したジアステレオマーからエステル基を除去するとリンのキラル中心がなくなり、エナンチオマー化合物６ａと６ｂが得られる。当業者に周知のなお更なる分割方法を用いることもてきる。

阻害物質プソイドペプチドのＸｌとＸ２部分を構成する、先に記載した予備調製オリゴペプチドは、あらゆる周知の方法によって調製することがてきる。ここて用いた２つの保護トリペプチドは、標準的な溶液反応によって調製した。メリフィールド（Ｍｅｒｒｉ　ｆ　１ｅｌｄ）らによって開発された固相法も有用である。溶液及び固相合成法の両方は当業者によってよく知られている。

Ｃ５〜Ｃ，アシル基であるＲ’基は、Ｐ２含有ペプチド部分（ｘｌ−Ｘａａ）に、該ペプチドがその合成用樹脂上にある間に付加してもよく、また、ここで行ったように合成中にＮ−アシル保護（Ａｃ）アミノ酸の付加によって行ってもよい。

好ましくは、ペプチドをその合成樹脂から開裂させた後にトリフルオロアセチル又はｔ−ＢＯＣ基を付加する。

好ましくは、固相法を用いた場合にペプチドを樹脂から開裂させた後、Ｚ基をそのＰＩ゛含有ペプチド部分（Ｘ２）に付加する。Ｚ基の付加には周知のエステル及びアミド形成反応が用いられ、そのような反応はかなり周知であるのでここでは扱わない。なお、ここに記載した例においては、バリンメチルエステル塩酸塩を出発原料として用いたので、カップリング後のエステル化は不要であった。

ＨＩＶ−１ウイルスを阻害するのに用いるより短いプソイドペプチドの合成は、上に説明した合成に似ているが以下に説明する。かくして、例えば、酸ハライド又は無水物を用いてアセチル基をペプチドに付加する段階で、ＱＣ基を付加してもよい。同様に、まず、ＰＩＣ−ＮＨ＝’Ｂｕ又はＤＩＱ−ＮＨ−’Ｂｕをそれらのそれぞれのアミノ酸から合成し、次いで、上のスキーム２に示したトリペプチドエステルを用いる代わりに、該スキームに示した化合物３の如きリン含有化合物と反応させてもよい。

ＩＶ、医薬組成物生理学的に許容できるキャリヤー又は希釈剤中に溶解又は分散させた先に記載した本発明のプソイドペプチドを活性物質として含有する医薬組成物も意図している。かかる組成物中に、プソイドペプチド阻害物質は、選んだアスパラギン酸プロテイナーゼのアスパラギン酸プロテイナーゼ活性を阻害するのに十分な量（有効阻害ｌｌ）で存在する。

医薬組成物は、その全てのものがプソイドペプチド活性物質とそのキャリヤーを混合することを含む、薬学分野で周知のあらゆる方法によって調製される。治療的用途には、本発明で用いられるプソイドペプチドを通常の医薬組成物の形態で投与することができる。かかる組成物は、経口又は非経口投与に適するように、又は座薬として製剤することができる。これら組成物において、典型的には、この物質を生理学的に許容できるキャリヤー又は希釈剤中に溶解又は分散する１、キャリヤー又は希釈剤は活性化合物を投与するのに有用な物質であり、該組成物の他の成分と適合しか一つその受容者に有害ではないという意味において“薬学的に受け入れられるもの”でなければならない。かくして、こごで用いる場合、 “薬学的に許容されるもの”又は“薬学的に受け入れられるもの”という語句は交換可能であり、哺乳動物に投与（また際に胃の不調、めまい等の如きアレルギー又は類似の副作用を生じない分子状存在物及び組成物をいう。生理学的に許容できるキャリヤーは、投与のために望まれる製剤及び意図された投与経路に依り、広い多様性のある形態を取ることができる。

有用な組成物の例として、無菌懸濁液若しくは溶液の如き液体組成物中に又は適当な保存剤を含有する等強性製剤として、本発明の化合物（活性物質）を利用、溶解又は分散することができる。この目的に特によく適するものは、水性の注射可能な緩衝化された又は緩衝化されていない等強性で無菌の食塩水又はグルコース溶液により構成される注射可能な媒質、並びに水単独、又は水性エタノール溶液である。これら化合物を加えることのできる追加の投与用液体形態には、綿実油、ごま油、ココナツツ油、ビーナツツ油等の如き食用油、並びにエリキシル及び類似の製薬用溶剤での矯味エマルジョンが含まれる。適例となる更なる液体希釈剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　Ｈａｃｋ　Ｐｕｂｌ　ｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、　A　ＥａｓＬｏｎ。

ＰＡ　（１９８０）に見出すことができる。

活性物質は、リポソームの形態で投与することもできる。当該技術分野で既知であるように、リポソームは一般にリン脂質又は他の脂質物質から誘導される。

リポソームは、水性媒質中に分散された単ラメラ又は多重ラメラ水和液晶により形成される。リポソームを形成できるあらゆる無毒の薬学的に受け入れられかつ代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態にある本組成物は、活性物質に加えて安定剤、保存剤、賦形剤等を含有することができる。好ましい脂質は、天然及び合成両方のリン脂質及びホスファチジルコリン（レンチン）である。

リポソームを形成する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、プレスコツト（Ｐｒｅｓｃｏ口）、　Ｅｄ、、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、　ＸＩＶ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　ｐ窒■唐刀B Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎ、Ｙ、　（１９７Ｇ）、　ｐ、３３〜を参照のこと。

活性物質プソイドペプチドは、好ましくは、単位投与量の該化合物を含有する錠剤及び火剤の如き組成物にも用いることができる。この目的のために、該物質（活性成分）を、無毒で生理学的に許容できるギヤリヤーとしてのコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、ガム又は類似の物質の如き通常の錠剤成分と混合する。錠剤又は火剤を積層するか又は他の方法で混合して、長期間の又は遅延した作用を与える単位投与形態を提供することができる。

前述のキャリヤー成分に加えて、ここに記載した医薬組成物は、適切な場合には、希釈剤、緩衝剤、矯味剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑剤、保存剤（酸化防止剤を含む）等の如き１又は２以上の追加のキャリヤー成分、及び該製剤を意図する受容者の血液と等強性であるようにするための物質を含んでもよいことが理解されるべきである。

錠剤及び火剤は、胃内での崩壊に抵抗性であるようにして活性成分を無傷で十二指腸の中に通過させるのに又は徐放性であるのに役立つ薬袋の形で、腸溶性層で提供することもできる。ポリマー酸、又はそのような酸とシェラツク、ンエラックとセチルアルコール、セルロースアセテートフタレート等の如き物質との混合物を含む種々の物質を、かかる腸溶性層又はコーティングに用いることができる。特に適する腸溶性コーティングは、スチレン−マレイン酸コポリマーを該コーティングの腸溶性に寄与する既知の物質と共に含む。腸溶性コーティングされた錠剤の製造方法は、シポス（Ｓｉｐｏｓ）への米国特許第４，０７９，１２５号に記載されている。なお、該特許は参照によってここに組み入れられるものとする。

ここで用いる場合、“単位投与量”という用語は、温血動物に投与するのに１回分の投与量として適する物理的に分けられた単位をいい、かかる単位それぞれは、望ましい治療効果をもたらすように計算された所定量の活性物質を薬学的に受け入れられる希釈剤と共に含有する。本発明による適する単位投与形態の例は、錠剤、カプセル、火剤１．粉末小包、顆粒剤、オブラート剤、カシェ剤、茶匙での投与、点滴びんでの投与、アンプル剤、バイエル剤、これらの幾つかを別個に投与する形態等である。

本発明のプソイドペプチドは、望ましい阻害を行うのに有効な量でかかる医薬組成物中に存在する。例えば、　ｉｎ　ｖｉｌｒｏでの酵素阻害が目的である場合は、約ｌｎＭ〜約１μＭの酵素濃度及び約ｌＯ〜約２．　ＯＯＯマイクロモル（ μＭ）の基質濃度で、本発明の化合物を約０．Ｏ１〜約２．　ＯＯＯナノモル（ｎＭ）の濃度をもたらすのにト分な量で用いることができる。用いる酵素、基質及び阻害物質の量は都合に応して大きく変動するが、基質は典型的には酵素より大過剰（例えば、１００〜１０．００倍過剰）を用いる。ｉｎ　ｖｉｖｏで用いるには、本発明の化合物の有効量は、約０．１〜約５ｏｍｇ／ｋｇ体重又は血流に約０．０１〜約１００μｇ／ｍＬの濃度を供給するのに十分な量である。

■、方法アスパラギン酸プロテイナーゼを阻害する方法も意図している。ここでは、アスパラギン酸プロテイナーゼ阻害量の先に説明したプソイドペプチドを含有する先に説明した医薬組成物を、水性媒質中でアスパラギン酸プロテイナーゼと該酵素についての基質の存在下で混合して、阻害混合液を形成する。該阻害混合液を該阻害物質がアスパラギン酸プロテイナーゼを阻害するのに十分な時間、典型的には、５分間〜５時間維持する。

酵素の結合特性又は作用のメカニズムを研究する場合のようにｉｎ　ｖｉｔｒｏで行う場合は、例えば、阻害反応を典型的には分光光度計て追跡する。そのような場合における水性媒質は、典型的には緩衝溶液である。適例となるｉｎ　ｖｉけ０法をこのあとに開示する。

レニンが阻害される酵素であるような阻害反応をｉｎ　ｖ’＋ｖｏで行う場合は、水性媒質は、血液、リンパ液、胃液等の如き体液により構成され、酵素の阻害は、レニンについての血圧降下によるように、体機能によって分析される。適例となる分析をこのあとに説明する。

Ｖｌ、分析操作アスパラギン酸プロテイナーゼ酵素についての分析操作は、当該技術分野でよく知られている。従って、そのような分析の二、三種類だけをここに例として説ブタ胃粘膜ペプノン（シグマ化学）をクロマトグラフィーで精製して、使用直前にｐＨ３，５の０．１Ｍ酢酸すトリウム緩衝液中に溶解して希釈した。役に立つ基質は、バートレットら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ、　５５：６２６８　（＋９９０）に記載された次のオクタペプチド類似体：１、ｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｐ（ＮＯ＋）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ　（配列番号：３１）である。基質加水分解の初期速度は、基質及びプソイドペプチド阻害物質溶液を３７°Ｃてキュベツト中で約３分間平衡化した後、ｌｏｏｍＬ最終容量当たり３．０ピコモルのペブンンを添加して反応を開始させることによって測定する。基質加水分解は、３１０ｎｍでの吸光度の減少を観察することによって測定する。初期速度は、０．５分から１０％以下の基質が加水分解されるまでを測定する。次いで、普通の方法によって阻害定数を決定する。

Ｂ、ｉｎ　ＶｉｔｒＯレニン阻害分析精製したヒトレニン〔スティン（Ｓｔｅｉｎ）　ら、　Ｊ、　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、　Ｆｅｄ、　ＡＩＩＬ　ＳＯＣ。

Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、、　４４：１３６３　（１９８５）　）を、純粋なアンギオテンシノーゲン〔ドーラー（Ｄｏｒｅｒ）ら、　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　８７：１１　（１９７８））を用いて、ｐＨ６，０でマレイン酸緩衝液中で分析する。分析系の添加前に該溶液がｌＯ％ＤＭＳＯと０．５％ウシ血清アルブミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）を含有するように、阻害物質をＤＭＳＯ中に溶解させて希釈する。最終インキュベーション混合液（１００μＬ）は、０．１３５Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６，０）　、３ｍＭのＥＤＴＡ、１．４ｍＭのフッ化フェニルメタンスルホニル、０．２１μＭアンギオテンシノーゲン、０．２４ｍＧＵ（パンガム（Ｂａ、ｎｇｈａｍ）ら、　Ｃｌ１ｎ、　Ｓｃｉ、　Ｍｏ１ｅ、　Ｍｅｄ、、　４８：１３５５　（１９７５））　、ＢＳＡｏ、　４４％及■ １％のＤＭＳＯを含有する。

ＩＣ，。値（５０％活性を阻害する濃度）を夾叉する幾つかの濃度の阻害物質プソイドペプチドを３７℃で約５分間レニンと予備インキュベートする。次いで、基質を添加してインキュベーションを約１０分間続ける。メタノール／ドライアイス浴内て該溶液を凍結させることにより反応を停止し、４℃で解凍した後、市販キット（ＮＥＮリサーチ）を用いてアンギオテンンン■についてアリコートを分析する。加水分解反応の阻害率（％）を測定し、回帰分析によってＩＣｉ。値を計算する。

Ｃ，ｉｎ　ｖｉｖｏ　レニｙ阻害分析麻酔をかζＪたナトリウム除去マルモセット内での阻害物質プソイドペプチドの降圧活性をこの分析に用いる。２時間の平均動脈圧（ＭＡ　Ｐ）の降下量を分析値として用いる。

このモデルで用いられるカプトプリル（１，０ｍｇ／ｋｇ、ｉ　ｖ）又はＣＧＰ３８５−６０Ａと呼ばれる化合物〔プールメイヤー（Ｂｕｈｌｍｙｅｒ）ら、　Ｊ、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｍ、、　３１：１８３９　（１９８８）　；デガスバａ　（ＤｅＧａｓｐａｒｏ）　ら、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｐｈａｒｒｎａｃ、。

２７：５８７　（１９８９））の如き既知の降圧剤を用いる内部標準も用いることができる。

静脈内（ｉｖ）投与については、能書物質を医薬組成物巾約１〜５ｍｇ／ｋｇ与える。経口（ｐ　ｏ）投与については、１ｏ−１００ｍｇ／ｋｇのオーダーの量を用いる。

この研究のために用いたマルモセソトを２５ｍｇ／ｋｇ／日ｐｏのフロセミドで処理し低ナトリウム飼料を与えることによって、２日間ナトリウムを除去する。

最後の７０セミドを投与した１時間後に、イナクチン（ｌｎａｃｔｉｎ）を１２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内（ｉｌ））投与し、続いてｌ０ｍｇ／ｋｇ／時間でｉｖ維持点滴（ｉｖｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　１ｎｆｕｓｉｏｎ）　して麻酔を行う。

グールド・ストラサム（Ｇｏｕｌｄ　Ｓｔｒａｔｈａｍ）　Ｐ　２３圧力変換器及びｌツクトロメト（１，ｅｃけｏｍｅｄ）Ｍ　ｌ　９チヤートレコーダーで、頚動脈内のカテーテルから血圧を測定する。阻害物質注射及び麻酔点滴用に頚静脈にカニユーレを挿入する。各動物は、それ自身の血圧コントロールとして役立つ。

Ｄ、ＨＩＶ−ＩＰＲ阻害のＨＰ　Ｌ　Ｃ分析用操作典型的な反応は、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸酢酸ＤＴＡ）及び２ｍ、Ｍフチオス１ノイトール（ＤＴＴ）を含有する総容量１５０　ｕ　ｌの１００ｍＭ　ＭＥＳ緩衝液（ｐ１１６．２　）　−１−０，１％（ｖ／ｖ））’月−ンＸ−１００中で室温（２５℃）で行った。

まず、合成ＨＩＶ−］プロテイナーゼ〔０，５μｇ、スクリップス・リサーチ・インスティチュートのステフェン・ケント（Ｓｊｅｐｈｅｎ　Ｋｅ口（）博士から得た；Ｃｅ１ｌ。

５４：３６３−３６８　（Ｊｕｌｙ　２９．１９８８）を参照のこと〕を緩衝液中で種々の濃度の“阻害物質”と（又は阻害物質なして）２５℃で３０分間インキュベートした。次いて、）−Ｉ　Ｉ　Ｖ基ｍ１ＩＶ（バケム・バイオザイエンス（ＢａｃｈｅＥＩＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）社）を固定濃度で添加することによって、プロテイナーゼ反応を開始した。ＨＩＶ基質１ｖは、配列Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａ、ｌ−Ｎ１ｅ−ｐ−ＮＯ２Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｎｌｅ−ＮＨｔ　（配列番号：３２）を有する。

適当な３時点（普通は１５．３０及び４５分）で、該反応からの４０μｍアリコートを４０μｌの調製した停止溶液に添加することによって加水分解を停止した。該停止溶液は、１：４のアセトニトリル：水（３％トリフルオロ酢酸：ＴＦＡ）であり、ＨＰＩ、Ｃスタンダードとして役立つ１５０μＭｍ−トルイル酸を含有した。停止したアリコートを逆相ＨＰＬＣ（日立製装置；ＶＹＤＡＣＣ，。

カラムＮＯ，２０１７Ｐ５４）内に注入し、２０％アセトニトリル／８０％水（０，１％ＴＦＡ）の濃度勾配のない（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）混合液で２．Ｏｍｌ／分の流速で溶出させた。反応の進行は、２５４　ｎＭで検出される基質１ｖ開裂生成物の吸光度（ピークの高さ）の増加を追跡することによってモニターした。

阻害研究により、化合物６の一方の立体異性体は約６００μＭのに、を有するのに反して、他方の異性体のに１値は約１０±５ｎＭであることが示された。このより活性な異性体についての結果は、化合物６と同じ配列を有するが、そのＰ。

−Ｐ、“結合が、プロリン窒素に結合してヒドロキシエチルアミン同量体を形成するーＣＨＯＨＣＨ，−基を含むプソイドペプチドについての０．６６ｎＭというリッチ（Ｒｉｃｈ）ら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅａ、　３３：］２８８　（１９９０）により得られたに１の結果に比べて優っている。クローンら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、、　３４：３３４０　（１９９１）は、同じプソイドペプチドのＲ，Ｓ−及びＳ一体それぞれについて０，６及び２．４ｎＭのＩＣ，、値を報告した。

上の本発明に係わる結果は、ロベルトら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２４８・３５８　（１９９１）の結果に比べても優っている。彼らは、やはりヒドロキシエチレンアミン同量体を用いて下記の如き化合物について０．４ｎＭ未満までの数百のＩｃ５ｏ値を報告した。

ＣＢＺ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［Ｃｔ（（Ｏｌｌ）Ｃｔｌ、Ｎ］Ｐｒｏ−０’Ｂｕ　；ＱＣ−Ａｓｎ−Ｐｈｅψ［Ｃ１１（ＯＨ）ＣＨ＋Ｎ］円Ｃ−Ｎ１１−’Ｂｕ　；及びＱＣ−Δ５ｎ−Ｐｈｅψ［Ｃ）Ｉ（ＯＨ）ＣＩ＋Ｎ］ＤＩＱ−Ｎｔｌ−’ Ｂｕ式中、ＣＢＺ、　’Ｂｕ、ＱＣ，Ｐ（Ｃ及びＤＩＱは先に定義した通りである。該著者らは、ヒドロキシエチレンアミン同量体のＲ又はＳ立体化学に基つきＩＣ５゜値に約２〜約２０倍の差があり、Ｒ異性体がより大きな活性を有することも報告した。本発明のペプチド結合代用物はアキラルなので、ヒドロキシエチレンアミン同量体のＲ，Ｓ−異性体問題は存在しない。

Ｖｌ　＋、オリゴペプチド合成スキーム２に示した２つのトリペプチドを以下に説明する溶液反応を用いて調ＤＭＦ／酢酸エチル中、室温で、Ｎ−メチルモルホリン及びＨＯＢＴの存在下でＥＤＣＩを用いて、ＢＯＣ−イソロイシンを塩酸バリンメチルエステルにカップリングさせて、Ｎ−保護ジペプチドメチルを約９５％収率て生成させた。塩化メチレン中、室温で約１時間をかけてＴＦＡてＢＯＣ基を除去し、生成したジペプチドメチルエステルを炭酸水素ナトリウムで中和して、脱保護ジペプチドメチルエステルを約９８％収率て得た。

次いで、該脱保護ジペプチドメチルエステルを約４時間の反応時間で上のようにしてＣＢＺ−プロリンとカップリングさせて、Ｎ−保護トリペプチドメチルエステルを約９０％収率て得た。Ｐｄ／Ｃを用いて室温で約３時間水素化し、表題の化合物を約９０％収率て得た。かくして通し収率は約７５％となった。

Ｂ、Ａｃ−（０−Ｂｎ）Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎの調製ＢＯＣ−（０−Ｂｎ）セリンを３時間の反応時間で先に記載したようにして塩酸ロインンメチルエステルとカップリングさせて、二重保護ジペプチドメチルエステルを約９５％収率て得た。先に説明したようにしてＢＯＣ基を除去し、無水酢酸を用いて、ピリジン中、室温で３時間をかけて生成したＮ−末端アミンをアセチル化し、保護ジペプチドメチルエステル、つまり（Ｎ−アセチル）Ａｃ−（０−Ｂｎ）Ｓｅｒ−Ｌｅｕ −ＯＣＨ＋を約９６％収率て得た。ＴＨＦ中、室温で約３時間のＩＮ水酸化ナトリウムとの反応によりメチルエステルを除去し、保護ジペプチドのフリーの酸を約９０％収率て得た。

該保護ジペプチドのフリーの酸を先に記載したようにして塩酸アスパラギン酸ｔ −ブチルエステルとカンプリングさせて、保護トリペプチドｔ−ブチルエステルを約９０％収率で得た。塩化メチレン中、室温で約１時間のＴＦＡとの反応によりｔ−ブチルエステルを除去し、表題の化合物を約９０％収率で得た。ここでの通し収率は約６６％となった。

ここまで一定の好ましい態様によって本発明を説、明し、そしてそれに関して例を挙げてきたが、本発明の趣旨から逸脱することなく種々の修飾、変更、省略及び置換を行えることを、当業者は容易に理解できるであろう。

配列表（１）一般的情報：（ｉ）出願人：ジャンダ、キム（１、発明の名称、ペプチド連結単位（ｉｉｉ）配列の数＝３２（ｉｖ）通信連絡先：（Ａ）受信人二ザ・スクリブス・リサーチ・インスティチュート。

オフィス・オブ・パテント・カランセル。

（Ｂ）通り：ｌ０６６６ノーストレイ・パインズロード、ＴＰＣ８（Ｃ）市：ランヨラ（Ｄ）州：ＣＡ（Ｅ）国：アメリカ合衆国（Ｆ）　Ｚ　Ｉ　Ｐ　：　９２０３７（Ｖ）コンピューター読み取り可能型・（Ａ）媒体タイプ：フロッピィディスク（Ｂ）コンピューター：　ＩＢＭ　ＰＣ適合種（Ｃ）作動システム・ＰＣ−ＤＯ８／ＭＳ−ＤＯ８（Ｄ）ソフトウェア　ワードパーフェクト（ｖｌ）現出願データ：（Δ）出願番号（Ｉ３）出願日：（Ｃ）分類。

（ｖｉｉ）先行出願データ・（Ａ）出願番号：ＵＳ　Ｏ７／８１９．３５６（１３）出願日・１９９２年１月９日（ｖｉｉｉ）弁理＋：／代理人情報。

（Ａ）氏名　ルイス、ドナルドＧ（Ｂ）登録番号・２８，６３６（Ｃ）整理／ドケット番号：ｔｓｒｉ２７９．Ｏ（ＰＣ）（ｉｘ）電気通信情報。

（Ａ）電話＋１−６１９−５５４２９３７（Ｂ）テレファックス：１−６１９− ５５４−６３１２（２）配列番号；１の情報：（１）配列の特性。

（Ａ）長さ：６アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニ一本鎖（Ｄ）トポロジー・直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（目）配列の特徴・（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　１（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝　”ＸａａはＮ−（−ＢＤＣ−Ｄ −Ｐｈｅである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：＋ｎｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　３（Ｄ）他の情報：／ラベルーＸａａ　／注意＝”Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０）１）ＣＨｆｆ基によって置換されたＰｈｅである”（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：＋ｎｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・６（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａは１Ｇ−Ｔｒｐである” （ｘｉ）配列：配列番号　】Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　×ａａ（２）配列番号　２の情報（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ　４アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数　一本鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（１））配列の特徴（Ａ）名称７／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉ　Ｉｅ（Ｂ）存在位置　１（１））他の情報　／ラベル＝ｙＸａａ　／注意＝　”ＸａａはＮ−１−ＢＯＣ −Ｄ−Ｐｈｅである” （１ｘ）配列の特徴（Ａ、）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　３（Ｄ）他の情報　／′ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がｐｏ（ＯＨ）Ｃ１ｌ、基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称７／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｕｅ（Ｂ）存在位置　４（Ｄ）他の情報　／′ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはアミノバレリアン酸に結合したＰｈｅアミドである” （ｘｌ）配列、配列番号　２Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号　３の情報（ｉ）配列の特性。

（、へ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニ一本鎖（Ｄ）トポロジー・直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ペプチド（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・５（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０１１）ＣＩ（、基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｉ）配列、配列番号　３Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｌｅｕ（２）配列番号・４の情報・（１）配列の特性（Ａ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数　一本鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１り配列の種類　ペプチド（１ｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｕｅ（Ｂ）存在位置・２（Ｄ）池の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＤ−Ｐｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：１１１０（ｌｉｆｉｅ（１−５ｉｔｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）池の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基かＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｌ）配列、配列番号　４Ｇｌｙ　Ｘａａ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｘａａ　Ｌｅｕ（２）配列番号　５の情報二（１）配列の特性（Ａ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型アミノ酸（Ｃ）鎖の数・−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｒｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、３（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＤ−Ｌｅｕである”（１ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｌ）配列、配列番号　５Ｇ］、ｙ　Ｐｈｅ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｌｅｕ（２）配列番号　６の情報：（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸（Ｃ）鎖の数・−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉｉ）配列の種類、ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、５（Ｄ）他の情報：／ラベルーＸａａ　／注意＝″Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＤ−Ｐｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、６（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＬｅｕエチルエステルである” （ｘｉ）配列：配列番号、６：Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｘａａｌ５（２）配列番号・７の情報− （皿）配列の特性。

（Ａ）長さ二８アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニ一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｕｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨＩ基によって置換されたＬｅｕである”（Ｘｌ）配列、配列番号　７゜Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｖａｌ工１ｅ　Ｈｉｓ（２）配列番号　８の情報。

（１）配列の特性（Ａ）長さ　８アミノ酸（Ｂ）型・アミノ酸（Ｃ）鎖の数−一本鎖（Ｄ）トポロノー：直鎖状（百）配列の種類、ペプチド（ＩＸ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　１（Ｄ）他の情報、／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−ｔ−ＢＯＣ−ｔ（ｉｓである” （１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｌ）配列、配列番号　８Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｖａｌ　工１ｅ　Ｈｉｓ（２）配列番号　９の情報（１）配列の特性（Ａ）長さ　１０アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数　−末鎖（Ｄ）トポロノー　直鎖状（１１）配列の種類　ペプチド（ＩＸ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　６（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がｐｏ（ＯＨ）ＣＨ＋基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｌ）配列：配列番号・９：Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓｌ　５　１０（２）配列番号・１０の情報・（１）配列の特性：（Ａ）長さ＝ｌＯアミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸（Ｃ）鎖の数、−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置、６（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＬｅｕである”（ＩＸ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・１０（Ｄ）他の情報、／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−ε−＋−ＢＯＣ− Ｌｙｓメチルエステルである” （ｘｉ）配列、配列番号、ｌＯ・Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｖａｌ　工１ｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａｌ　５　１゜（２）配列番号：ｌＩの情報（１）配列の特性・（Ａ）長さ　８アミノ酸（Ｂ）型アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニー末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｌ）配列；配列番号：１１：Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ（２）配列番号　１２の情報。

（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ　８アミノ酸（Ｂ）型・アミノ酸（Ｃ）鎖の数　−末鎖（Ｄ））−ポロジー　直鎖状（１１）配列の種類　ペプチド（：Ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｒｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（Ｏｌｌ）ＣＩ＋＋基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｉ）配列、配列番号、１２Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ（２）配列番号、１３の情報（１）配列の特性（Ａ）長さ　１３アミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸（Ｃ）鎖の数・−末鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：＋ｎｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１Ｏ（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨＩ基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｉ）配列；配列番号：１３゜Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｖａｎ　Ｔｙｒ　工１ｅ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｖａｌ　工１ｅ　Ｈｉｓｌ　５　１０（２）配列番号＝１４の情報（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ　ｌＯアミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数、−末鎖（Ｄ）トポロジー・直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（１ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・１（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−Ｌｅｕである” （１ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｕｅ（Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａ　ｉｄそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＰｈｅである”（ｘｉ）配列、配列番号　１４Ｘａａ　Ｓｅｒ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ａ１．ａ工１ｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓｌ　５　１０（２）配列番号　１５の情報・（１）配列の特性：（Ａ）長さ＝５アミノ酸（Ｂ）型、アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニー末鎖（Ｄ）ｌ−ポロジー　直鎖状（１１）配列の種類、ペプチド（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−Ｖａｌである” （１ｘ）配列の特徴（Ａ　）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・３（Ｄ）他の情報　／ラベル；Ｘａａ／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（Ｏｌｌ）ＣＨ，基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｉ）配列、配列番号：１５：ｘａａ　ｖａｌ　Ｘａａ　入１ａ　Ｌｅｕ（２）配夕Ｉ］番号　１６の情報（１）配列の特性（Ａ　）長さ　４アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数　−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類、ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆ　１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置：１（Ｄ）他の情報：／ラベルーＸａａ　／注意＝″ＸａａはＮ−３−メチルブタノイル−Ｖａｌである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２基によって置換されたＬｅｕである”（１ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー＋　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報・／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＰｈｅメチルエステルである” （ｘｉ）配列、配列番号、１６Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号・１７の情報（ｉ）配列の特性。

（Ａ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型°アミノ酸（Ｃ）鎖の数　−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類、ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・ｌ（Ｄ）他の情報・／ラベルーＸａａ　／注意＝″ＸａａはＮ−３−メチルブタノイル−Ｖａｔである” （ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　Ｉ！１ｏｄｉ　ｆ　１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置　３（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ，基によって置換されたＬｅｕである”（」Ｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉ　ｒ　１ｅｄ−ｓｉ　【ｅ（Ｂ）存在位置　６（Ｄ）池の情報：／ラベルーＸａａ　／注意ニ“ＸａａはＡｌａメチルエステルである” （ｘｉ）配列：配列番号、１７Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｘａａ（２）配列番号・１８の情報・（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ　１６アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）Ｍの数　−末鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉ　［１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置・３（Ｄ）他の情報　、／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはｈｏｍｏ−Ａｒｇである”（１ｘ）配列の特徴（／’、）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、６（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０）１）ＣＩ２基によって置換されたＬｅｕである“（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー＋　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　９（Ｄ）他の情報：／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはｈｏｆｆｌｏ−Ａｒｇである”（１ｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー：　ｆｆ１ｏｄｉ　ｔｉｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置　ｌｏ（Ｄ）他の情報二／ラベル−Ｘａａ　／注意＝　’Ｘａａはｈａｍａ−Ａｒｇである”Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　工１ｅ（２）配列番号：１９の情報　１５（ｉ）配列の特性・（Ａ）長さ　６アミノ酸（Ｂ）型・アミノ酸（Ｃ）鎖の数ニー末鎖（Ｄ）　ｌ−ポロジー、直鎖状（１１）配列の種類・ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄＩｒｒｅｄ−ｓｒ　１ｅ（Ｂ）存在位置、１（Ｄ）他の情報　／ラベルニＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−Ｖａｌである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　３（Ｄ）他の情報　／′ラヘルーＸａ、ａ　／注意−“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（Ｏｌｌ）Ｃ）Ｉ２基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｌ）配列；配列番号　１９Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ（２）配列番号　２０の情報（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ・６アミノ酸（Ｂ）型、アミノ酸ＣＣ）鎖の数・−末鎖（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称、／キー　ｍｏｄ　ｉ　ｆ　ｉ　ｅｄ−ｓ　ｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置・３（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝　’Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（Ｏｌｌ）ＣＩ、基によって置換されたＬｅｕである”（ｘｌ）配列、配列番号・２０Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｘａａ　入１ａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ（２）配列番号　２１の情報。

（１）配列の特性（Ａ　）長さ　４アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数　−末鎖（Ｄ）トポロジー・直鎖状（ｉｉ）配列の種類・ペプチド（ＩＸ）配タリの特徴（ｌ＼）名称／キー　ｍｏｄｉｒｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　１（Ｄ）池の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−３−メチルブタノイル−Ｖａｔである” （ＩＸ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝２（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２基によって置換されたＬｅｕである”（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・４（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意と“ＸａａはＡｌａイソアミルアミドである” （ｘｉ）配列、配列番号　２１・Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｌａ　Ｘａａ（２）配列番号・２２の情報（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ　５アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｃ）鎖の数・−末鎖（Ｄ）トポロジー・直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・１（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−３−メチルブタノイル−Ｖａｌである” （ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、３（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０）１）Ｃ１，基によって置換されたＬｅｕである”（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置、５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″ＸａａはＡｌａｌミニチルエステルる” （ｘｉ）配列、配列番号、２２：Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ａｌａ　Ｘａａユ　５（２）配列番号、２３の情報：（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ　７アミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸ＣＤ）トポロン−９直鎖状（ｉｉ）配列の種類、ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・１（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−８ｅｔである” （１ｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｒｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、４（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０１（）ＣＩ＋。基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置ニア（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″ＸａａはＶａｌメチルエステルである” （ｘｉ）配列、配列番号＝２３：Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　工１ｅ　ｘａａ（２）配列番号：２４の情報：（ｉ）配列の特性・（Ａ）長さ、７アミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（２）配列の種類：ペプチド（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置、１（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−バレリル−３ｅｒである” （１ｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー＋　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意−“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＩｌ＋基によって置換されたＰｈｅである”（１ｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　７（Ｄ）他の情報・／ラベル＝Ｘａａ　／注意二“ＸａａはＶａｌメチルエステルである” （ｘｌ）配列、配列番号　２４Ｘａａ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｐｒｏ工１ｅ　Ｘａａ（２）配列番号　２５の情報（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ、７アミノ酸（Ｂ）型・アミノ酸（Ｄ）トポロジー、直鎖状（１１）配列の種類、ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｒｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　Ｉ（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−３ｅｒである” （１ｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー　ｍａｄ山６ｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置・２（Ｄ）他の情報・／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＤ−Ｌｅｕである”（１ｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＤＨ）ＣＨ，基によって置換されたＰｈｅである”（１ｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍａｄ　ｉ　ｆ　ｉ　ｅｄ−ｓ　ｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置　７（Ｄ）他の情報、／′ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＶａｌメチルエステルである” （ｘｉ）配列、配列番号＝２５・Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　エユｅ　Ｘａａ（２）配列番号：２Ｇの情報：（ｉ）配列の特性。

（Ａ）長さ、７アミノ酸（Ｂ）型・アミノ酸（Ｄ）　ｌ−ポロジ−６直鎖状（＋１）配列の種！Ｑ：ベブチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉ　ｒ　１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置、■ （Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″ＸａａはＮ−アセチル−５ｅｒである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（０１１）Ｃ）１２基によって置換されたＴｙｒである”（ｉｘ）配列の特＠：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆ　１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置ニア（Ｄ）他の情報・／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＶａｌメチルエステルである” （Ｘ］）配列、配列番号＝２６Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　工１ｅ　Ｘａａ（２）配列番号　２７の情報（１）配列の特性。

（Ａ）長さ、５アミノ酸（Ｂ）型二アミノ酸（Ｄ）トポロジー、直鎖状（１１）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｆｆ１０ｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝１（Ｄ）他の情報：／ラベルーＸａａ　／注意＝″ＸａａはＮ−アセチル−５ｅｒである” （ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：４ＣＤ）池の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴：（Δ）名称／キー　ｍｏｄｉ　ｆ　１ｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置　５（Ｄ）他の情報、／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″Ｘａａはピペリジン−２（Ｓ）　−カルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである”（ｘｌ）配列、配列番号　２７Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号：２８の情報・（ｉ）配列の特性。

（Ａ）長さ　５アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類　ペプチド（ＩＸ）配列の特徴（Ａ）名称／キー：　ｌｌ１ｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝１（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−３ｅｔである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー＋　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　４（Ｄ）他の情報；／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がｐｏ（０）１）Ｃ）Ｉｔ基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：ａ＋ｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：５　− （Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″Ｘａａは（４ａＳ、　８ａＳ） −デカヒドロ−３（Ｓ）−イソキノリンカルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである” （Ｘり配列；配列番号・２８・Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号・２９の情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：４アミノ酸（Ｂ）型、アミノ酸（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉ　ｉ）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴８（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・１（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−Ｌｅｕである” （ｉｘ）配列の特徴６（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置・３（Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　、／注意＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（Ｏｌｉ）ＣＨ２基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、４（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意−“Ｘａａはピペリジン−２（Ｓ） −カルボニルｔｅｒｌブチルアミドである”（ｘｉ）配列、配列番号、２９Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号　３０の情報・（１）配列の特性：（Ａ）長さ　４アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｄ）トポロジー　直鎖状（１１）配列の種類　ペプチド（ｉｘ）配列の特徴（Ａ）名称／キー　ｍｏｄＨｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置、１（Ｄ）他の情報、／ラベルーＸａａ　／注意＝“ＸａａはＮ−アセチル−Ｌｅｕである” （ｉｘ）配列の特徴（ｌ＼）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置　３（Ｄ）他の情報・／ラベルーＸａａ　／注量＝“Ｘａａはそのカルボニル基がＰＯ（ＯＩＤＣＩ１１基によって置換されたＰｈｅである”（ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉ　ｔｅ（Ｂ）存在位置・４（Ｄ）他の情報・／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“Ｘａａは（４ａＳ、　８ａＳ） −デカヒドロ−３（Ｓ）−イソキノリンカルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである” （ｘｌ）配列；配列番号＝３０＝Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号：３１の情報：（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ・８アミノ酸（Ｂ）型；アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ペプチド（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置二６（Ｄ）他の情報　／ラベルーＸａａ　／注意＝“Ｘ銘はＰ−ニトロ−Ｐｈｅである” （ｘｉ）配列：配列番号：３１：Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｘａａ　Ａｒｇ　Ｌａｕ（２）配列番号５３２の情報（ｉ）配列の特性（Ａ）長さ　９アミノ酸（Ｂ）型　アミノ酸（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉｉ）配列の種類　ペプチド（ｉｘ）配列の特徴。

（Ａ）名称／キー　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｕｅ（Ｂ）存在位置：５（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝″ＸａａはＮｌｅである”（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー　１ｎＯｄｉｆｉｅｄ−５ｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝６（Ｄ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝　”Ｘａａはｐ−＝トｏ−Ｐｈｅである” （ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）名称／キー：　ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置＝９　− （Ｄ）他の情報　／ラベル＝Ｘａａ　／注意＝“ＸａａはＮｌｅアミドである” （ｘｉ）配列、配列番号＝３２：ＬｙｌＳ　入１ａ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｘａａ国際調査報告　。ｒＴｌｌｌ、。１．。。９．。

Ｉｗ−一−ｋｍ四ｍ　Ｎ−ρＣＴ／ＵＳ　９３１００２２８フロントページの続き（７２）発明者　ワーシング　ビータ−アメリカ合衆国　カリフォルニア州９２０７５　ソラナ　ビーチ　ヴイア　ミルカンブレス　９３０（７２）発明者　イケダ　ショウジアメリカ合衆国　カリフォルニア州９２１２２　サン　ディエゴ　チャーマントドライヴ　７５４５

Claims

【特許請求の範囲】

１．２つのペプチド配列、即ち、アミノ末端ペプチド配列とカルボキシル末端ペプチド配列を繋ぐための連結単位であって、第１アミノ酸残基（ａａ１）、第２アミノ酸残基（ａａ２）、及び前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間に破壊結合を有するジペプチドを含み、前記第１アミノ酸残基は、主鎖カルボニル基を欠くがその代わりにホスフィン酸基を有する残基、即ち、（ａａ１− ＰＯＯＨ−）であり、前記第２アミノ酸残基は、主鎖アミノ基を有する残基、即ち、（−ＮＲ−ａａ２）（ＲはＨ又はＣである）であり、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間の前記破壊結合は、ペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基を有し、前記メチレン基は、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有し、前記メチレン基は、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有し、前記ジペプチドと該ホスフィン酸−メチレン−アミノ結合が、酸性ｐＨで式（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２−（ＮＲ−ａａ２）により表される前記破壊結合を形成し、それによって、前記ジペプチドの前記第１アミノ酸残基（ａａｌ）が前記アミノ末端ペプチド配列とペプチド結合を形成するのに使用でき、かつ前記ジペプチドの前記第２アミノ酸残基（ａａ２）が前記カルボキシル末端ペプチド配列とペプチド結合を形成するのに使用でき、それによって、前記メチレン基を含有する前記破壊結合で、前記カルボキシル末端ペプチド配列に前記アミノ末端ペプチド配列を連結する連結単位。
２．前記破壊結合の該ホスフィン酸−メチレン−アミノ結合が、生理学的ｐＨ近傍で、前記ジペプチド内で式（ａａ１−ＰＯＯ）−ＣＨ２−（ＮＨＲ４−ａａ２）によって表される両性イオン性ホスフィネート−メチレン−アンモニウム結合に転化される、請求項１記載の連結単位。
３．酸性ｐＨで武（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２−（ＮＲ−ａａ２）〔式中、（ａａｌ−ＰＯＯＨ）は第１アミノ酸残基を表し、（ＮＲ−ａａ２）は第２アミノ酸残基を表し、そして（ＣＨ２）は前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の破壊結合を表わす。〕により表される、ペプチド連結単位として使用できるジペプチドであって、前記第１アミノ酸残基（ａａ１−ＰＯＯＨ）−は、主鎖カルボニル基を欠くがその位置において主鎖ホスフィン酸基、即ち、−ＰＯＯＨ−を有し、前記第２アミノ酸残基は、主鎖アミノ基、即ち、−ＮＲ−（ＲはＨ又はＣである）を有し、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の前記破壊結合はペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基、即ち、−（ＣＨ２）−を有し、前記メチレン基は、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有し、前記メチレン基は、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有するジペプチド。
４．前記破壊結合の該ホスフィン酸−メチレン−アミノ結合が、生理学的ｐＨ近傍で、前記ジペプチド内で式（ａａ１−ＰＯＯ）−ＣＨ２−（ＮＨＲ＋−ａａ２）によって表される両性イオン性ホスフィネートーメチレン−アンモニウム結合に転化される、請求項１記載のジペプチド。
５．アミノ末端ペプチド配列、カルボキシル末端ペプチド配列、及び前記アミノ末端ペプチド配列と前記カルボキシル末端ペプチド配列を繋ぐための連結単位を有する改良されたポリペプチドであって、改良点が：前記連結単位が、第１アミノ酸残基（ａａ１）、第２アミノ酸残基（ａａ２）、及び前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間に破壊結合を有するジペプチドを含むこと、前記第１アミノ酸残基が、主鎖カルボニル基を欠くがその代わりにホスフィン酸基を有する残基、即ち、（ａａ１−ＰＯＯＨ−）であること、前記第２アミノ酸残基が、主鎖アミノ基を有する残基、即ち、（−ＮＲ−ａａ２）（ＲはＨ又はＣである）であること、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間の前記破壊結合が、ペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基を有すること、前記メチレン基が、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有すること、前記メチレン基が、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有すること、前記ジペプチドと前記破壊結合が、酸性ｐＨで式（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２ −（ＮＲ−ａａ２）により表されること、前記ジペプチドの前記第１アミノ酸残基（ａａ１）が、前記アミノ末端ペプチド配列とのペプチド結合を有すること、前記ジペプチドの前記第２アミノ酸残基（ａａ２）が、前記カルボキシル末端ペプチド配列とのペプチド結合を有することを含み、それによって、前記アミノ末端ペプチド配列が前記ジペプチドにより前記カルボキシル末端ペプチド配列に連結される改良されたポリペプチド。
６．改良点が、更に、前記破壊結合の該ホスフィン酸−メチレン−アミノ結合が、生理学的ｐＨ近傍で、前記ジペプチド内で式（ａａ１−ＰＯＯ−）−ＣＨ２− （ＮＨＲ＋−ａａ２）によって表される両性イオン性ホスフィネートーメチレン −アンモニウム結合に転化されることを含む、請求項５記載の改良されたポリペプチド。
７．第１アミノ酸残基（ａａ１）、第２アミノ酸残基（ａａ２）、及び前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間に破壊結合を有するジペプチドを有する連結単位、及び主鎖ペプチド結合によって前記連結単位に連結した第３アミノ酸を含むペプチドであって、前記第１アミノ酸残基は、主鎖カルボニル基を欠くがその代わりにホスフィン酸基を有する残基、即ち、（ａａ１−ＰＯＯＨ−）であり、前記第２アミノ酸残基は、主鎖アミノ基を有する残基、即ち、（−ＮＲ−ａａ２）（ＲはＨ又はＣである）であり、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基との間の前記破壊結合は、ペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基を有し、前記メチレン基は、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有し、前記メチレン基は、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有し、前記ジペプチドと前記破壊結合が、酸性ｐＨで式（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２ −（ＮＲ−ａａ２）により表されるペプチド。
８．連結単位をブランキングアミノ酸残基と連結させる方法であって、該フランキングアミノ酸が結合可能なアミノ末端を有し、該連結単位が酸性ｐＨで式（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２−（ＮＲ−ａａ２）〔式中、（ａａ１−ＰＯＯＨ）は第１アミノ酸残基を表し、（ＮＲ−ａａ２）は第２アミノ酸残基を表し、そして（ＣＨ２）は前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の破壊結合を表わす。〕により表され、前記第１アミノ酸残基（ａａ１−ＰＯＯＨ）−は、主鎖カルボニル基を欠くがその位置において主鎖ホスフィン酸基、即ち、−ＰＯＯＨ−を有し、前記第２アミノ酸残基は、結合可能なカルボキシル末端及び主鎖アミノ基、即ち、−ＮＲ−（ＲはＨ又はＣである）を有し、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の前記破壊結合はペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基、即ち、−（ＣＨ２）−を有し、前記メチレン基は、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有し、前記メチレン基は、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有する方法であって、以下の工程を含む方法。工程Ａ：該ブランキングアミノ酸残基の結合可能なアミノ末端を、該連結単位の第２アミノ酸残基の結合可能なカルボキシル末端に連結する。
９．連結単位をフランキングアミノ酸残基と連結させる方法であって、該フランキングアミノ酸が結合可能なカルボキシル末端を有し、該連結単位が酸性ｐＨで式（ａａ１−ＰＯＯＨ）−ＣＨ２−（ＮＲ−ａａ２）〔式中、（ａａ１−ＰＯＯＨ）は第１アミノ酸残基を表し、（ＮＲ−ａａ２）は第２アミノ酸残基を表し、そして（ＣＨ２）は前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の破壊結合を表わす。〕により表され、前記第１アミノ酸残基（ａａ１−ＰＯＯＨ）−は、結合可能なアミノ末端を有するが主鎖カルボニル基を欠き、その位置において主鎖ホスフィン酸基、即ち、− ＰＯＯＨ−を有し、前記第２アミノ酸残基は、主鎖アミノ基、即ち、−ＮＲ−（ＲはＨ又はＣである）を有し、前記第１アミノ酸残基と前記第２アミノ酸残基の間の前記破壊結合はペプチド結合を欠くがその代わりにメチレン基、即ち、−（ＣＨ２）−を有し、前記メチレン基は、前記第１アミノ酸残基の前記ホスフィン酸基に前記メチレン基を連結する第１結合を有し、前記メチレン基は、前記第２アミノ酸残基の該主鎖アミノ基に前記メチレン基を連結する第２結合を有する方法であって、以下の工程を含む方法。工程Ａ：該フランキングアミノ酸残基の結合可能なカルボキシル末端を、該連結単位の第１アミノ酸残基の結合可能なアミノ末端に連結する。
１０．３〜約１５アミノ酸残基の長さを有し、かつリン原子が（ｉ）ペプチド結合のカルボニル炭素原子の代わりにＰｌに結合し、（ｉｉ）ペプチド結合のアミド窒素原子の代わりにメチレンアミン基に結合しているホスフィン酸−メチレンーアミン結合により構成されるＰ１からＰ１′への結合を含有するアスパラギンプロテイナーゼ阻害物質プソイドペプチド。
１１．前記プソイドペプチドが、カルボキシ末端Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルである、請求項１０の阻害物質。
１２．前記阻害物質が、４〜約１０アミノ酸残基の長さを有する請求項１０の阻害物質。
１３．式Ｒ１−Ｘ１−Ｘａａψ〔ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ３〕Ｘ２−Ｚ〔式中、Ｘ１は、アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；ａは、０、１又は２であり；Ｘａａは、アミノ酸側鎖を有する代用アミノ酸残基であり；Ｘ２は、アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；Ｚは、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アシル、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び２ −アミドインダノールからなる群から選ばれ；そしてＲ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アシル、トリフルオロアセチル、キノリン−２−イルカルボニル及びｔ−ＢＯＣからなる群から選ばれる。〕のプソイドペプチドアスパラギンプロテイナーゼ阻害物質であって、３〜約１５アミノ酸残基の長さを有する前記オリゴペプチド類似体。
１４．Ｘａａが、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ及びＰｈｅからなる群から選ばれるアミノ酸側鎖を有する代用アミノ酸であり、Ｘ２のアミノ末端残基が、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ａｌａ及びＰｈｅからなる群から選ばれる、請求項１３のプソイドペプチド。
１５．カルボキシ末端残基が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルとしてエステル化されている、請求項１４のプソイドペプチド。
１６．式Ｒ１−Ｘ１−Ｘａａψ〔ＰＯ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ３〕Ｘ２−Ｚ〔式中、Ｘ１は、アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；ａは、０、１又は２であり；Ｘａａは、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ及びＰｈｅからなる群から選ばれる側鎖を有するアミノ酸代用物であり；Ｘ２は、アミノ末端残基がＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ａｌａ及びＰｈｅからなる群から選ばれるアミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基までの配列を含有するオリゴペプチドであり；Ｚは、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ６アシル、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び２−アミドインダノールからなる群から選ばれ；そしてＲ１は、水素、ＣＩ〜Ｃ６アシル、トリフルオロアセチル、キノリン −２−イルカルボニル及びｔ−ＢＯＣからなる群から選ばれる。〕のオリゴプソイドペプチドアスパラギンプロテイナーゼ阻害物質であって、４〜約１０アミノ酸残基の長さを有する前記オリゴペプチド類似体。
１７．前記アスパルチルプロテイナーゼがカテプシンＤであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
１８．前記アスパルチルプロテイナーゼがカテプシンＤであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
１９．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：７）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２０．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：８）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２１．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：９）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２２．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１０）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２３．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１１）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２４．前記アスパルチルプロテイナーゼがレニンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１２）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２５．前記アスパルチルプロテイナーゼがキモシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１４）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２６．前記アスパルチルプロテイナーゼがキモシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１５）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２７．前記アスパルチルプロテイナーゼがペニシロペプシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１６）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２８．前記アスパルチルプロテイーゼがペニシロペプシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：１７）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
２９．前記アスパルチルプロテイーゼがペプシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２０）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３０．前記アスパルチルプロテイナーゼがペプシンであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２１）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３１．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２３）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３２．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２４）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３３．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２５）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３４．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２６）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３５．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２７）（ＰＩＣ−ＮＨ−ｔＢｕは、ビペリジン −２（Ｓ）−カルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３６．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２８）（ＤＩＱ−ＮＨ−ｔＢｕは、（４ａＳ，８ａＳ）−デカヒドロー３（Ｓ）−イソキノリンカルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３７．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：２９）（ＰＩＣ−ＮＨ−ｔＢｕは、ピペリジン −２（Ｓ）−カルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３８．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（配列番号：３０）（ＤＩＱ−ＮＨ−ｔＢｕは、（４ａＳ，８ａＳ）−デカヒドロ−３（Ｓ）−イソキノリンカルボニルＬｅｎｔ−ブチルアミドである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
３９．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（ＰＩＣ−ＮＨ−ｔＢｕは、ピペリジン−２（Ｓ）−カルボニルｔｅｒｔ−ブチルアミドであり、ＱＣはキノリン−２−カルボニルである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
４０．前記アスパルチルプロテイナーゼがＨＩＶ−１のプロテイナーゼであり、前記オリゴプソイドペプチドが配列【配列があります】（ＤＩＱ−ＮＨ−ｔＢｕは、（４ａＳ，８ａＳ）−デカヒドロ−３（Ｓ）−イソキノリンカルボニルｔｅｒ−ブチルアミドであり、ＱＣはキノリン−２−カルボニルである。）を有する、請求項１６のオリゴプソイドペプチド。
４１．生理学的に許容できる希釈剤中に溶解又は分散させた、有効阻害量で存在するアスパラギンプロテイナーゼ阻害物質プソイドペプチドを含む医薬組成物であって、前記プソイドペプチド阻害物質が３〜約１５アミノ酸残基の長さを有し、かつリン原子が（ｉ）ペプチド結合のカルボニル炭素原子の代わりにＰ１に結合し、（ｉｉ）ペプチド結合のアミド窒素原子の代わりにメチレンアミン基に結合しているホスフィン酸−アミン結合により構成されるＰＩからＰ１′への結合を含有する医薬組成物。
４２．前記プソイドペプチドが、カルボキシ末端Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルとしてエステル化されている、請求項４１の医薬組成物。
４３．アスパラギンプロテイナーゼ、該酵素の基質、及び該アスパラギンプロテイナーゼに対する有効阻害量のプソイドペプチド阻害物質を含有する医薬組成物を水性媒質中で混合して阻害混合液を形成すること、及び前記プソイドペプチド阻害物質が前記アスパラギンプロテイナーゼの活性を阻害するのに十分な時間、前記阻害混合液を維持することを含むアスパラギンプロテイナーゼの活性を阻害する方法であって、前記プソイドペプチド阻害物質が３〜約１５アミノ酸残基の長さを有し、かつリン原子が（ｉ）ペプチド結合のカルボニル炭素原子の代わりにＰＩに結合し、（ｉｉ）ペプチド結合のアミド窒素原子の代わりにメチレンアミン基に結合しているホスフィン酸−メチレン−アミン結合により構成されるＰ１からＰ１′への結合を含有する方法。
４４．前記プソイドペプチドが、カルボキシ末端Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルとしてエステル化されている、請求項４３の方法。メチレンホスフィン酸を含むペプチド連結単位発明の詳細な説明