JPH07502261A

JPH07502261A - 光活性化可能なトリガーされた放出を伴なうリポソーマル送達システム

Info

Publication number: JPH07502261A
Application number: JP5505503A
Authority: JP
Inventors: トンプソン　デビッド　エイチ; アンダーソン　ヴァレリー　シー
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1991-09-09
Filing date: 1992-09-09
Publication date: 1995-03-09
Also published as: AU2590292A; US5277913A; WO1993004673A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】等厚性物質を前記リポソームのなかに入れ、前記等厚性物質としては、該等厚性物質によって吸収される光で照射した際に前記ビニルエーテル官能性部分を開裂して前記膜に破裂を生しさせ、これにより前記送達すべき物質の少なくともある部分を前記リポソームから脱出できるようにするものを使用し；前記リポソームの少なくともある部分を標的に供給し；前記等厚性物質によって吸収される光によって標的位置を照射して、前記等厚性物質によって前記ビニルエーテル官能性部分を開裂させかつ送達物質のある部分を放出させることを特徴とするリポソーム中の治療用物質を標的に送達する方法。

光活性化可能なトリガーされた放出を伴なうリボソーマル送達システム本発明はリポソーム、特に薬物、核酸、およびタンパク質を輸送するためのりポソーマル（ｌ　ｉｐｏｓｏｍａｌ）送達システムに関するものである。リポソームは、光照射のようなトリガー作用をする外的現象に応答して、その内容物を選択的に放出する。

２、背景技術の説明リポソームは、空洞部を包囲する顕微鏡的液体二重層小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ）である。リポソームの小胞は１個の二重層または多数の二重層（多層小胞）を有することがてきる。これらの小泡は、その水性空洞部中に水溶性薬物を封入することができるか、あるいは膜自体のなかに液体可溶性薬物を担持することができる。リポソームは、細胞毒注薬のような治療剤を封入するため、および前記治療剤を生物における標的位置に運ぶために、既に使用されている。例えば、米国特許第３．９９３．７５４号明細書は、抗腫瘍剤をリポソームのなかに封入し、このリポソームを動物に注射する、改善された悪性腫瘍の化学治療方法を開示している。

医薬をリポソーム中に封入すると、薬物の副作用を軽減し、標的位置に送達する薬物動力学を改善し、かつ薬物の治療指数を改善することができる。しかし、リポソームの広範囲にわたる使用に対する重大な制約は、リポソームを特定の標的位置に向けるのか困難であることてあった。被検者に静脈内投与したリポソームは、網内系に迅速に蓄積する。これにより、肝臓、牌臓および骨髄のような有窓性毛細管を有する器官において高リポソーム濃度が達成される。リボソーマル系はこれらの器官に浸潤する腫瘍（例えば血液学的照性）を治療するのに有効なことがあるが、他の解剖学的位置における標的腫瘍（ｔａｒｇｅｔｅｄｔｕｍｏｒ）を治療するのには有用性が小さかった。従来の研究では、網内以外の標的位置において、リポソームからの放出を「トリガーする」方法か研究されていた。

ある従来方法では、リポソーム飽和標的位置を臨界温度より高い温度に加熱することにより、例えば、標的組織を高周波加熱することにより、リポソーム内容物の漏出を促進している。

ヤトビン（Ｙａｔｖｉｎ）等［サイエンスＪ　２０２　：１２９０　（１９７８）。他の従来方法では、ｐＨに感応する脂質から製造され、内容物である薬物を低ｐＨ標的領域中に漏出するリポソームを使用している。局部的酸性度を有するこのような区域は時として腫瘍中に存在していることがあり、従ってこのようなリポソームの静脈内投与によって抗腫瘍剤である化学治療剤を標的位置で好ましくは選択的に放出させることが提案されている。ヤトビン等「サイエンス」　２１Ｏ・１２５３　（＋９８０）。

同様に、米国特許第４，８８２，１６４号明細書は感光性リポソームを開示しており、このリポソームは適当な波長の光（紫外光）で照射した際にトランスないしノス異性化を受けてリポソームの流体内容物をリポソーム膜を経てこれを包囲する雰囲気中に脱出できるようにする。最後に、英国特許第２，２０９．４６８号明細書は感光剤を組み入れたリポソームを開示しており、このリポソームは光を吸収し、脂質膜を変化させてリポソームから薬物を放出させる。紫外光または可視光を使用して小胞の内容物を放出させることに関するいくつかの報文が提出されているか、これらの系はいずれも生体適合性脂質を使用しており、この脂質は１ｍｍを、超える組織侵入深さを有する振動数の光によって分断される。

動力学的治療方法（ＰＤＴ）は病変組織の局部的区域を治療する他の方法である。感光性薬物は全身的、局部的、または注射により、腫瘍のような標的位置に投与される。適当な光源、例えば、アルゴン排気色素レーザまたは太陽灯によって標的位置を照射すると、２種の提案された機構のうちの一方によって、標的位置の細胞に対する細胞毒作用が誘発される。タイプＩの感光の場合には、電気的に励起された薬物は生物基質と直接反応し、遊離基を生成し、これらの遊離基は次いでラジカル反応を開始し、この反応は細胞毒による損傷を生じさせる。タイプ ■の感光では、エネルギーが電気的に励起された薬物から酸素に伝達され、−事項の分子状酸素が生成し、この酸素は次いで細胞毒性を存する酸素付加生成物を生成する。

光力学的治療方法（ＰＤＴ）はガン患者に実験的に使用されており、全世界において何千という臨床試験が進行中である。

現在、ホトフリン（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ）　Ｉ［とじて知られている１種の実験薬（ヘマトポルフィリン誘導体の精製物）が、ランダム化された臨床試験に用いられている。光力学的治療方法の実施に用いられる他の感光性薬物としては、フタロシアニン、メロシアニン５４０、置換プリン、キサンチン誘導体（ローダミン１２３　６Ｇ＆Ｂ）、陽イオンシアン染料、含塩素重合体などがある。

従って、本発明の目的は、生体適合性てあってその内容物の）・リガーされた放出を可能にする改善された薬物送達システムを提供することにある。

本発明の池の目的は、ｐＨの変化に応答してその内容物のトリガーされた放出を行うのに適した改善されたリポソームを提供することにある。

本発明のさらに他の目的は、リポソームによって運ばれた薬物に及はすトリガー作用をする現象の作用を軽減する改善されたリポソームを使用するトリガーされた放出システムを提供することにある。

本発明のさらに他の目的は、感光性薬物に伴われる溶解性の問題を克服し、かつ標的位置に前記薬物を選択的に送達することができる改善された光力学的治療方法を提供することにある。

発明の概要上述の目的は、一つの好適な例においては、空洞部を包囲するリポソームの二重層膜を含有する人工リポソームを提供することにより達成される。このリポソーム膜は、ビニルエーテル官能性部分を存する脂質を含存し、このビニルエーテル官能性部分は開裂した際に前記膜に局部的破裂を生じさせる。また、リポソームは、トリが一作用をする外的現象に応答してビニルエ−テ官能性部分を開裂させる光活性化可能な染料のような溶加性物質を含有する。トリが一作用をする現象としては、光照射、ｐＨの低下、または光活性化されたｐＨ低下がある。

特に好適な例においては、リポソーム膜は、１個の極性先端基および２個の親油性鎖を有し、脂質によって二重層構造中に包み込むことができるようにする両親媒性脂質、好ましくはリン脂質を含有する膜である。親油性鎖としては脂肪酸が好ましく、親油性鎖の一方のかビニルエーテル官能性部分を有する。

両方の新油性鎖がビニルエーテル官能性部分を有する他の例も可能である。この要件を満たす特定のリン脂質は次式で表わされるプラスマロゲンである：ＣＨ２０ＣＨ＝　ＣＨＲ＋上式において、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ長い炭化水素鎖（またはビニルエテール）、例えば、アルキルまたはアルケニルである。好適例においては、Ｒ２およびＲ１はそれぞれ（ＣＨり。

（ただし、ｎは１２〜２４である）を示し、Ｒ１は二重層形成性ホスホリルエステル、例えば、コリンエタノールアミン、セリン、またはイノシトールを示す。

特に好ましい例においては、Ｒ１またはＲ２のいずれかは１２〜１６個の炭素長であり、他の鎖は少なくとも１６個の炭素長であり、特に好ましくは１８個の炭素である。

ビニルエーテル官能性部分を開裂させる溶加性物質は、溶加性物質によって吸収される波長を有する光による溶加性物質の照射に応答して、反応性酸素種または酸を生成するのが好ましい。リポソームによって送達される医薬用、化粧用、診断用またはその他の物質を、リポソームによって生成した空洞部またはリポソームの二重層のいずれかのなかに運び込むことができる。このように位置に融通性かあるのは育利である。その理由は、リポソームが薬物および溶加性物質を別々の区画のなかに運び込むように構成することもできるからである。溶原性物質が完全にまたは主として二重層膜の中に残る親油性光感作物質である場合には、包囲された空洞部中に薬物を運び込むことができる。あるいはまた、光感作物質が空洞部中に存在する場合には、二重層の中に親油性薬物を運び込むことができる。このように光感作物質と薬物とが空間的に分離されていることは、反応性酸素種による酸化から、あるいは感作物質の照射に応答して生ずる酸性度の局部的増大によって起こる生物学的および／または物理化学的損傷から薬物を保護するのを助ける。

また、本発明は、リポソーム中の治療用物質または化粧用物質を、被検者における標的位置に送達する方法に関するものである。リポソーム膜は、ビニルエーテル官能性部分を有する脂質を含存し、前記ビニルエーテル官能性部分は該官能性部分が、開裂した際に前記膜に局部的破裂を生じさせる。リポソームによって運ばれた温厚性物質を光照射した際に、治療用または化粧用の物質がリポソームの空洞部から放出される。温厚性物質によって吸収された光はビニルエーテル官能性部分を開裂して前記膜に局部的破裂を生じさせる。このようにして、治療用物質をリポソームから脱出させることかできる。

リポソームは、標的位置に直接注射することにより被検者に静脈内投与するか、あるいは標的位置に局所適用することにより被検者に投与する。次いで、標的位置を照射してビニルエーテル官能性部分を開裂させ、標的位置における運ばれてきた物質の放出を選択的に制御する。標的位置はスペクトルの赤または近赤外部の光で照射するのが好ましい。光は好ましくは約６４０ｎｍより長い波長、さらに好ましくは７００ｎｍより長い波長、最も好ましくは約８００ｎｍより長い波長を有する。その理由は、これらの振動数において光が組織中に深く侵入するからである。

図１は本発明の送達システムの光分解の反応式及びリポソーム膜の酸触媒加水分解物の配置図である。

図２および３は、酸性化又は光照射に応じて膜に局部的な破裂を発生させたことを示す本発明のリポソームの配置図である。

図４は１５°Ｃ（ロ）および３７℃（■）でプラスＰＰＣ／ＤＰＰＣからグルコースのＺｎＰｃで感光された放出を示すグラフである。

図５は近赤外線λ＞６４０ｎｍ（ロ）；暗色部（■）：アルゴンーパージ（◇）；◆およびＺｎＰｃ溶原性等厚剤を用いないリポソームにおけるプラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃから３７°ＣでグルコースのＺｎＰｃで感光された放出を示すグラフである。

図６は１５°ＣおよびｐＨ８（■）；およびｐＨ４，２（ロ）でプラスＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソームからカルセインの酸で開始された放出のパーセントを示すグラフである。

図７は３７°ＣおよびｐＨ８（■）；およびｐＨ４，２（ロ）でプラスＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソームからカルセインの酸で開始された放出のパーセントを示すグラフである。

図８は６３０ｎｍより大きな波長を有する光で照射（○）；及びある光照射の存在下で照射（・）した後、３７℃でＡｌＣｌＰｃ５で感光されたプラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃリポソームからグルコースを放出する明白なパーセントを示すグラフである。

図９は６３０ｎｍより高い波長を有する光で照射（ロ）；及び光照射しない暗色部（■）て、３７°ＣてプラスＰ　Ｐ　Ｃ／ＤＨＣからグルコースの明白なＡｌＣｌＰｃ５で感光された放出を示す図８に類似したグラフである。

図１Ｏは照射後の時間の機能（）；及び暗色部（マ）において、２０ｍＭトリス／１００ｍＭ　ＮａＮｚ、ｐＨ８，３７°ＣでプラスＰＰＣ／ＤＨＣ（３０モル９６）リポソームからＡｌＣｌＰｃ５で感光されたグルコースの放出における単一酸素の媒介によるグラフで提示する不足を示す。

図Ｉｔは６３０ｎｍで照射した後（）：及び照射しない（ム）で２０ｍＭｌ−リス／Ｄ２０／１００ｍＭ　ＮａＣ］、ｐＩ）８．４．３７°ＣにおけるプラスＰＰＣ／ＤＨＣ（３０モル９６）から明白なグルコース放出を示す図１Ｏに類似したグラフである。

図■２は２０ｍＭ）リス／Ｈ，Ｏ／１００ｍＭ　ＮａＣｌ、ｐ）（ｓ　（）；２０ｍＭ）リス／１００ｍＭ　ＮａＮｚ、ｐＨ８（０）；　２０ｍＭ）リス／Ｄ２０／１００ｍＭ　ＮａＣ１、ｐＤ８．　４　（・）で３７°Ｃにおける照射された（λ＞６３０ｎｍ）プラスＰＰＣ／ＤＨＣリポソームから明白なグルコ−放出力イネチックを示すグラフである。

図１３は光分解（λ＞６３０ｎｍ）を９０分間行う前（−）及び行ったｉ！（− ・−）の２０ｍＭ）リス／Ｄ２０／ｌ００ｍＭ　ＮａＣｌにおけるプラスＰＰＣ／ＤＨＣ（３０モル９６）リポソームの吸収スペクトルである。

図１４および１５は感光された光分解（λ＞６３０ｎｍ）を１００分間行なう前（図１４）および行った後（図１５）のそれぞれ負の歪み（２９６アンモニウムモリブデート、ｐＨ８トリス）を示す光学顕微鏡写真、プラスＰＰＣ／ＤＨＣ（３０モル９６）リポソームの透過電子顕微鏡写真である。

図１６は純粋なプラズマスローゲンリポソームから蛍光マーカーの活性物を放出する期間中の機能としてカルボキシ蛍光物か残存するパーセントを示すプロットである。

図１７は様々な電力におけるレーザー照射した後に放出されるリポソームを示すグラフである。

好ましい実施例の説明本発明は、人間や動物のような、生きた組織における目的部位に対する薬剤又は他の物質を輸送するリポソームの伝達システムである。リポソーム１０（図２）は、好ましくは反応性酸素種（ＲＯ３）によって酸化された又は酸によって加水分解されたビニルエーテルを含有する両親媒性の燐酸脂質を含有する単一板状二重構造膜１２である。酸加水分解はリポソームの周囲におけるｐＨを直接低下させることによって、又は照射に応じて酸を放出する光活性化感光剤を使用することによって起こさせることができる。

ビニルエーテル基は周囲媒体に免れるリポソームによって運搬される薬剤又は他の物質を許容する膜に局部的な分裂を起こさせて脂質（図１に示すように）に変化させる。膜二重構造と水成周囲との間の界面９又はリポソーム内部は図１における仕切り線によって示される。

図２Ａは光感光剤Ｓなどのような等厚性の物質はりボゾームキャビティ又は膜二重構造に向けて運搬されることを示す。酸又は適当な波長の光に暴露した場合、感光剤（又は直接酸に暴露）はビニルエーテル結合の分裂を誘導する。機能基の分裂は、完全な二重層構造を通して細孔１４、外側の二重層構造における割れ１６、又は二重膜構造の内側及び外側の両者を通して分裂された領域１８などのような局部的な分裂を生ずる。

この局部的な分裂は内容物の放出に伴って分裂領域又は完全なリポソームの不溶解性に対し、単一な孔又は割れを拡大することかできる。

本発明者らは理論によって明らかにしたいと思わないが、酸分裂の概念的なメカニズムを図３に示し、この図に二重層構造膜１２の分離された部分は分裂する前と分裂した後を示す。分裂前に、シアルギル両親媒性は二重層構造膜を生産する円筒形の形状をとる傾向がある。分裂した後、モノアルキル光生産物は、動力学的に円錐形状を選択し、これは連続的な膜部分２６．２８の間にミセル２４のようなミセルを生成する傾向かある。ミセルの阻害はりボッ−１５１０の内容物が通過することがでさる孔３０．３２を生成する。

等厚性光感光剤は、光照射に応じてＲＯ３又は酸の放出又は生成を起こす。光に応じてＲＯ３を生成する光感先割の具体例は以下の表Ｉに示されるものを含む４゜表　！ −ｆｆ１項酸素発生感光剤フエナヂアジンキノン類；オフ９　Ｊ　ｆルア００（４，０２）　０．７バクテリΔりＬ１０フィル　７８０（４，（１５）　０．３７、ｕＵ’ｃＳ　ＧＯＯ（５，４７）乙Ｇ、　１０．２３−テ！・ラヒドロキシＩ’ｃ　７０８（５，Ｏ）　；６７２（４Ｄ）　＜０．４ここで使用する反応性酸素種には、例えば酸素、水酸基、過酸化水素および超酸化物が含まれる。ホトイルミネーションに応答してｐＨを低下させる物質を励磁すると４−ホルミル−６−メドキシー３−二トロフェノキシ酢酸（Ｊａｎｋｏ、　Ｋ、　；　Ｒｅ１ｃｈｅｒｔ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ　、　Ａｃｔａ　９０５：　４０９〜４］６　（１９８７）；トリアリールスルホニウム塩（Ｄｅｋｔａｒ、　Ｊ、Ｌ、　；　Ｈａｃｋｅｒ、　Ｎ、Ｐ、　Ｊ。

Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　１１２：　６００４〜６０１５（１９９０）；ジベンゼンスルホニルジアゾメタンおよび誘導体（Ｐｏｏｔ、Ａ、；　Ｄｅｌｚｅｎｎｅ、　Ｇ、；Ｐｏ１ｌｅｔ、　Ｒ；　Ｌａｒｉｄｏｎ、　Ｖ、　Ｊ、　Ｐｈｏｔｏｇｒ、　Ｓｃｉ　、　１９　：　１８　（１９７１）が含まれる。

ビニルエーテル官能性部分を有する部分の開裂に対する反応機能は５ｎｙｄｅｒ、　Ｆ、、編集”　Ｅｔｈｅｒ　Ｌｉｐｉｄｓ：　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　、　”　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎ、　Ｙ　（＋９７２）に詳細に記載されている。

図２の例には、リポソームを使用して輸送した薬物りをリポソーム１０て封入して、膜１２により囲む空洞部２０にもたらす。水性または親水性光活性化し得る感光剤Ｓを水性空洞部２０および／または周囲の水性媒質中にもたらす感光剤Ｓの光活性化後、膜の分裂１４，１６．１８を通って移動し薬物の送達か望ましい目標領域に移送するため周囲の媒質に逃す薬物りを示す。図２に示す薬物りは任意の水溶性または親水性薬物、例えば空洞部２０の水性の周囲に全体的に、主要部分かまたは部分的に凝離するドキソルビシン、ドウノマイシンまたはゲンタマイシンとすることができる。或いはまた、疏水性薬物を全体的にまたは部分的に膜１２の脂質炭化水素内部にもたらす。アンホテリシンＢのような疏水性薬物脂質と一緒に可溶化することができ主として脂質二重層膜Ｉ２内にもたらす。Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃ’ｔ、　Ｄｉｓ　１４７　：　９３９〜９４８　、は、アンホテリシン７Ｂを運ぶリポソーム方法の記載が参考になる。脂質膜における高捕捉効率を得る他の方法は、リポソーム膜に易溶性である分子をつくるため疏水性基（例えば脂肪酸またはリン脂質）を薬物に化学的に結合することである。

他の例においては、感光剤および薬物を別個に空洞部および二重層に運んで薬物上の感光剤からのＲＯ３または酸遊離の作用を最小にする。上記のアンホテリシンＢリポソームキャリヤーにおいてはＡｌＣｌＰｃ５のような水溶性または親水性光活性化を空洞部２０および周囲の水性周囲に運ぶ。ドキソルビシンのような親水性薬物をリポソーム空洞部２０に運び、疏水性感光剤例えばＺｎＰｃを膜２０に供給する。

本発明におけるリポソームは、全体的にまたは部分的にリン脂質、例えばプラスマロゲンからなるのが好ましい。プラスマロゲンは血小板に存在するリン脂質であり、加水分解すると高級脂肪アルデヒド（例えばパルミタール）を遊離する。

またプラスマロゲンは筋肉の細胞膜および神経繊維のミニリン鞘に見出される。

本発明においてリポソームを形成するのに適するプラスマロゲンの例はウシの心臓ホスホチジルクロリンおよびウシの脳ホスホチジルエタノールアミンから誘導される。一般にプラスマロゲンは１個または２個以上の炭素−炭素二重結合を含む場合がある２個の長鎖アルキル基を有するジアルキルグリセロールである。本発明におけるプラスマロゲン膜二重層とその隣接する周囲１１または水性コア１３との間の界面または界面の近くにビニルエーテル官能性部分を有する。ビニルエーテル官能性部分は界面９の約４〜６個の炭素の範囲内にあるべきで、最も好ましくは界面にあるべきである（即ち、界面と官能性部分の間に炭素が介在しない）。脂肪酸鎖に付加的二重結合、好ましくはビニルエーテル官能性の二重結合をもって共役している１個以上の二重結合を与えることは本発明の範囲内に入る。

本発明を達成するのに使用したプラスマロゲンは次式％式％（式中のＲ１およびＲ２はそれぞれ長鎖炭化水素残基を示す）で表される。好適例においては、Ｒ１およびＲ２はそれぞれアルキル基またはアルケニル基で、好ましくは１２〜２４個の炭素の長鎖を有する。Ｒ１またはＲ２は例えば（ＣＨｚ　）ｎを示し、但しｎは１２〜２４である。置換Ｒ３は（式中のＲ，Ｒ，およびＲ９はアルキル基を示す）で表される。

リポソーム内容物の迅速なトリガーされた放出が望ましい場合には、比較的短い鎖ｎ＝１２〜１６か好ましい。しかし比較的低速のバックグラウンド漏洩速度の比較的安定な粒子は、一層長いｒ＋−１８〜２４のＲ９およびＲ２鎖のものが得られる。

リボソール安定性と迅速なトリガされた放出を争って考慮することは、Ｒ１またはＲ２の一つをｎ＝１２〜１６の短鎖でつくり他のものをｎ＝１８〜２４の一層長い鎖でつくることにより釣り合わせることかできる。かかるリポソームは一層長いＲ鎖により、内容物の漏洩を減じて付与される向上した安定性を有し、一層短いＲ鎖によりリポソーム内容物の迅速なトリガーされた放出が与えられる。

Ｒ１およびＲ３の一方または両方はビニルエーテル官能性をリポソームの一般的製造方法は知られている。例えば米国特許第４．８８２，１６５号および”　Ｌｉｐｏｓｏｍｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　”　ｉｎ　Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　、　Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｖ、１ｎｃ、　、ニューヨーク（１９８３）参照。本発明におけるリポソームの好適例をつくるのに用いられる概要は溶媒の蒸発により脂質の薄膜をつくることである。乾燥した脂質のフィルムと光感先刻およびキャリヤー物質と混合し、加温、旋回し、嫌気音波処理または数回の凍結融解サイクルに次いでヌクレオボアーフィルターを介して押出してリポソームを負荷する。

薬物のリポソームの負荷薬物をリポソームに負荷する若干の方法を０ｓｔｒｏ　ａｎｄ　Ｃｕ１ｌｉｓ。

Ａｍ、　Ｊ、　Ｈｏ５ｔ）、　Ｐｈａｒｍ　４５６　：　１５７６〜１５８７　（１９８９）およびＪｎｌｉａｎｓによる“［ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇｓ　ｗｉｔｈ　Ｌｉｐｏｓ。

ｍｅｓ″ｉｎ　Ｌｉｐｏｓｏｍｅ　、Ｉｂ１ｄに記載されている。大部分の薬物は、リポソームを、薬物と出発原料を一緒に可溶化させることにより形成される。薬物を位置させるリポソームの位置（空洞部分または膜）は薬物の性質により決まる。アンホテリシンＢのような疏水性薬物は、有機溶媒中で脂質と一緒に可溶化する。Ｌ。

ｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、　Ｊ、１ｎｆｏｃｔ、　Ｄｉｓ、　１４７　：　９３！ＩＪ−９４５（１９８３）参照。

溶媒の次の除去およびリポソームの次の水和により主として膜において疏水性薬物とリポソーム薬物複合体を得る。

水溶性薬物は、上記Ｌｉｐｏｓｏｍｅｌ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎに記載されているように、薬物を含む水溶液中でリポソームを数サイクルの凍結および融解を旋すことによりリポソーム空洞部分内は封鎖することができる。最後に、負荷した両親媒性薬物を、ＢａＬＬｙ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ　、　Ｂｉｏｐｈｙｓ　、　Ａｃｔａ　８］２　：　６６〜７６　（１９８５）に記載されているように、膜内ｐＨ勾配を用い予め形成したリポソームに負荷することができる。

光力学的感光剤感光剤を選定するに当たって、照射するための選定した光の波長において高い吸光係数を有する（強力吸収）感光剤を選択する。表１は多数の感光剤の最高吸収の波長を示す。λ１．１が知られると、同じかまたはほぼ同じλ１１．を有する波長の充てリポソームを照射する照射源を選定することかできる。本発明におけるリポソーム送達システムを案出するに当たって、先ず薬物の疏水性かまたは親水性を考慮するのがよい。次いで水または脂質に反対の溶解性を有する感光剤を選定するのかよい。

次いて感光剤が、感光剤のλ。、８に対応する波長を有する照射源の選定を指示することができる。

好ましい感光剤を選定する際の一般的指示を与える他の望ましい特質は、光子エネルギーを伝達する際の感光剤の効率を測定する感光剤の量子収率比である。トリガーすることが、ＲＯ８により影響される場合には、エネルギーを酸素に伝達しこれを励起する際の高量子効率を有する感光剤が好ましい。トリガーすることをｐＨの低下により起こす場合には、水素イオン（Ｈ＋）を生成するため高量子効率を有する感光剤が好ましい。

膜安定剤の添加下記例に記載するリポソームは、純粋なプラズママロゲンリポソームおよびプラスマロゲンとＤＨＣまたはＤＰＰＣのような安定剤を含有する混合リポソームである。プラスマロゲンがほぼ完全に光活性化し得るジアルキル両親媒性形態である場合には安定てほぼ純粋のプラスマロゲンを製造することができる。

出発物質中に著しい分量のモノアルキル分裂両親媒性ホト生成物を含むとリポソームの漏洩を増す。はぼ純粋なジアルキル両親媒性形態のものは、２０重量９６未満のりソリピド（ｌｉｓｏｌｉｐｉｄ）を有するものとして定義される。ジアルキル両親媒性形態のものか約２重量９６未満のりソリピドを有するのが好ましい。

はぼ純粋なリポソームは、ジヒドロコレステロール（ＤＨＣ）およびジパルミトイルホスファチジルクロリン（Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃ）のようなコーリピドを含むことによるかまたは約１６個以上の炭素原子を含むようにアルキル鎖長さを増すことにより安定化することができる。膜安定性が突然上ずるコーリビドの臨界的分量はないか、約１０重量９６またはこれにより多くのコーリピドを添加するのが適当であることを見出した。

使用し得る他のコーリピド安定剤の例は硫酸塩リン酸塩およびグルコシドクロネートコレステロール誘導体（Ｃｈｅｌｔｈａｍ等、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、：　２６５　：　１２４０４〜４Ｃ９（１９９０）へエルゴステロール、デヒドロエルゴステロ・−ル（Ｋａｓ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２９　：１３１５〜１３２２　（１９９０）　）　；およびトロフェロール（Ｈａｌｋｓ−Ｍｉ　ｌ１ｅｒ等、Ｌｉｐｉｄｓ　２０　：　１９５〜２０　（１９８５）　）。

実施例１メロンアニン５４０（ＭＣ−５４０）およびクロマトグラフィで精製したカルセインをモレキュラーブローブズ社（Ｍｏｌｅｃｕｆａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ　Ｉｎｃ、）から購入した。アメリカン　トウキヨー　カセイ（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｏｋｙｏ　Ｋａｓｅｉ）からのバルミチン酸無水物、アルトリンチ　ケミカル社（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）からのＮ、　Ｎ。

Ｎ’、Ｎ’−テトラメチル−フェニレンジアミン（ＴＭＰＤ）、および９８＋０６ジンタフタロシアニン（ＺｎＰｃ）を購入して使用した。アメリカン　ｌ−ウキヨー　カセイからのＤＭＡＰ〔４−（ジ−メチルアミ、？）ピリジン〕をエーテルから再結晶した。ＮＡＤＰ、ＡＴＰ、’＼ギソキナーゼ、およびグルコース −６−リン酸デヒドロゲナーゼをシグマ　ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）から購入した。ＤＰＰＣおよびＢＨＰＣ（ウシ心　ホスファチジルコリン）はアバンチ　ポーラ−リピッズ（Ａｖａｎｔｉ　Ｐｏ１ａｒ　Ｌｉｐｉｄｓ）から得、これは１次元ノリ力ＴＬＣ（ＣＨＣｌ、／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ；　６５　：　３５　：　６）上て単一スボッｌ−を示した。ず・＼ての脂質を使用するまでアルゴン下−２０°Ｃテ保ｒＴ−シタ。ＣＨＣｌ、およびヘンゼンをＰ２Ｏ６およびＣａＨ，てそオ］ぞれ乾燥し、さらに蒸留した。シリカを！、１のＣＨＣｌ　ｚ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨて予め洗浄し使用する前に１１０°Ｃて乾燥した。

定常状態にある吸収スペクトルをヒューレソトーバッカード８４５２Ａ　ＵＶ硯感度ダイオード配置（ＬＩＶ−ｖｉｓ　ｄｉｏｄｅ　ａｒｒａｙ）分光光度計上で記録した。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を副環境（５ｕｂ−ａｎｂｉｅｎｔ）操作可能なパーキンエルｖ　ＤＳＣ７／インタークーラ（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　Ｄ　Ｓ　Ｃ７／　Ｉｎｔｅｒｃｏｏｌｅｒ）を用いて行った。試料および対照を代表的に５〜７５°Ｃがら２〜５°Ｃ／分で加熱した。蛍光測定は調温試料区画を備えたパーキンエルマーＭＰＦ−６６蛍光計で行った。’Ｈ−ＮＭＲスペクトルは内部標準としてテトラメチルシランを用いたジェネラルエレクトリックＱＥ−３００分光計で記録した。照射キュベラ）・（ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｃｕｖｅｔｔｅ）表面の光強度をコウヒレント２１Ｏパワーメータ（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ　２１０　ｐｏｗｅｒ　ｍｅｔｅｒ）を用いて測定し、た。

１−アルキービーエニルーエスエヌーグリセロ−３−ホスホコリン（ｐｌａｓ　ＰＰＣ）の調製：リソプラスメニルコリン（１−アルキ−１′−エニルーエスエヌーグリセロー３ −ホスホコリンをＢＨＰＣのアルカリ脱アシル化（ＭｅＯＨ／ベンゼン中（７）０．０５Ｎ　ＫＯＨ）ｉ：より調製しＣＨＣＩ２　／ＭｅＯＨの連続した段階勾配〔ベルゲルソソ（Ｂｅｒｇｅｌｓｏｎ）、１９８０年〕を用いたシリカ上のフラッシュクロマトグラフィにより精製した。収率は５０−６０９６の範囲て、天然脂質の供給源のプラズマロゲンに基いた。精製したリソプラスメニルコリンはＣＨＣＩｓ　／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：３５ニア）とＣＨＣｌ　ｓ　／Ｍｅ　ＯＨ／Ｈ２０（６５：　３５：５）中のＴＬＣによる単一スボッｉ・であった。

１−アルキ−１′−エコルー２−パルミトイルーエスエヌ一グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ　］　ａ　ｓ　ＰＰＣ）の調製：リソブラスメニルコリンをグイビスダルスキ（Ｇｕｉｖｉｓｄａｌｓｋｙ）等のｒＪ、　Ｏｒｇ、　ＣＩ＋ｅｍ、Ｊ　５４　：４６４３−４６４８　（１９８９年）に記載された方法を部分的に改良してアンル化した。ソリプラスメニルコリン（２１３ｍｇ　：　０．　４４ミリモル）、バルミチン酸無水物（９１７ｍｇ；１．９ミリモル）、およびＤＭＡＰ　（６０ｍｇ；０．４９ミリモル）を５ｍｌのＣＨＣ１ｓと混合しアルゴン下に室温で４８時間がき混ぜた。反応混合物をセライトのパッドにより濾過し、溶媒を減圧下に除去した。粗材材を９５　：　５（７）ＣＨＣＩ３　／ＭｅＯＨ＋、：溶解しＣＨＣｌ、／ＭｅＯＨｃ７）連続した段階勾配（９５：５，９０：１０，８０＋２０および３０：２０）を用いてシリカゲルフラッシュクロマトグラフィにより精製しＴＬＣで１つのスポットを示す（Ｒｆ＝　０．　５２．　ＣＨＣＩ　−／Ｍｅ　ＯＨ／　ＮＨＪ　ＯＨ，６５：　３５：　６）　Ｐｌａｓ　ＰＰＣ（２７４ｍｇ、　８７９６）が得られた。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＩ３）：　５．９１　（ｄ、Ｊ＝６．１６Ｈ２、ＩＨ，− ０ＣＨ＝Ｃ−）、５．３４−５．１４　（ｍ、１．６５Ｈ，ビニルＨおよび０− Ｃ＝ＣＨ）、４．４２−４．３２　（ｍ、３Ｈ，５ｎ−２ＣＨおよびＰＯＣＨ，）、４．０２−３．７８　（ｍ、　４Ｈ，５ｎ−１３Ｃｉ−Ｉ　２）、　３．　５　（ｓ、　２Ｈ，−０ＣＯＣＨ２）、２．０２　（ｍ、２Ｈ，アレリックＣＨ２）、１．２８　（ｍ、４９　５０Ｈ）　、０．　９　（ｔ、６Ｈ，ω−ＣＨｚ）。

光誘導放出光力学的研究用Ｐｌａｓ　ＰＰＣｌ０ＰＰＣ（８：　１モル１モル）ベヒクルをクロロホルム中で乾燥脂質を溶解することおよびアルゴン流を用いて溶媒を除去することにより調製した。得られた脂質フィルムを次に１〜２時間減圧下に乾燥し放れない溶媒を除去する。ＺｎＰＣのエタノール貯蔵溶液を増感剤の５ｍＭピリジン溶液から希釈することにより調製した。次に、１００〜２００μＩのＺｎＰＣを１６５ｍｇのグルコース（−〇。

３Ｍ）を含む２．８ｍｌの２０ｍＭトリス、ｐＨ８に添加した。懸濁液を４５℃ に温め、渦混合し、さらにリポソームと５回凍結−解凍サイクルで処理する。最後に、懸濁液を４７°Ｃで調温したりペックス　バイオメンブラン　イクストラダー（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ　Ｅｘｔｒｕｄｅｒ）を用いた積層した０、０８ミクロンのヌクレオボア　フィルタ（Ｎｕｃｏｅｏｐｏｒｅ　ｆｉｌｔｅｒ）により１０回抽出した。放たれた増感剤およびグルコースを少量の緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−２５カラムの下方に通過させることにより除去した。ＵＶ視感度分析８（１０−％のトリトンＸ−１００て可溶化した後の）およびベティ１−ウ（Ｐｅｔｉｔｏｕ）のｒＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｌ　９１　：　３５０〜３５３　（１９７８年）に記載されたようなリンアッセイはこれらの小胞中のＺｎＰｃおよび脂質の濃度がそれぞれ、０．０５〜０．１ＨＭおよび４．８ｍＭであることを示した。

ＭＣ−５４０を増感剤が脂質フィルムに添加される前にグルコース／トリス溶液中て直接に溶解される以外は同様の方法でＰ　ｌ　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＰＰＣリボリームに結合した。ＭＣ−５４０の終濃度は分光光度法で決定されたように２０℃Ｍであった。

かき混ぜ、調温した（±０．１’Ｃ）リポソームを含むＭＣ−５４０の溶液に１０ｃｍの水セルおよびコーニング　０Ｇ−４９５フイルタを通した１００−Ｗタングステンランプ（１０ｍＷ／ｃｍ２）を用いて照射した。ＺｎＰＣリポソームに１６００−Ｗ高圧キセノンランプ（オスラムＸＢＯ−１６００）を用いて照射した。入射光線（８０ｍＷ／ｃｍ”　）は冷却した０゜０２％ローダミンＢ（水）溶液が流れる］０ｃｍセルに透過させた。この溶液フィルタは６４０ｎｍより長い波長の光を透過した〔パーカー（Ｐａｒｋｅｒ）、　１９６８年）。光分解セルの内側の温度を較正したフロック（Ｆｌｕｋｅ）　５１　Ｋ／Ｊ熱電対を用いて監視した。この方法により、照らされた試料の温度が実験の経過中０．２° Ｃ以上変化しないことがわかった。

内容物の漏れを光分解中に数回２５〜５０μＬアリコートのリポソーム溶液を回収することにより監視した。グルコースの漏れはデメル（Ｄｅｍｅｌ）等のｌ’ Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　Ｊ　Ｉ　５０：６５５〜６６５　（１９６８年）；およびキンスギ（Ｋｉｎｓｋｙ）等のｒＢｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　Ｊ　ｌ　５２　：　１７４　（１９６８年）のグルコースオキシダーゼアッセイにより分析した。

脂質過酸化ヒドロペルオキシド形成はギロツティ（Ｇｉｒｏｔｔｉ）等のｒＡｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｊ　２３６　：　２３８〜２５１　（１９８５年）により報告された方法をわずかに改良した薄層クロマトグラフィにより試験した。すべての操作を減光室内灯下に行った。２：１　（Ｖ／Ｖ）のＣＨＣＩ　ｓ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨを用いた抽出の後、脂質をベーカー（Ｂａｋｅｒ）シリカ　ｌ　Ｂ−Ｆプレート上に配置し７５：　２５　：　４　（Ｖ／Ｖ／Ｖ）＋７）ＣＨＣｌ、／ＭｅＯＨ／Ｈｚ　Ｏで展開させた。これらのプレートを次に乾燥させｌ　９６酢酸が含まれる１　：　ｌ　（Ｖ／Ｖ）のＣＨＣＩ　！　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ中の１％ＴＭＰＤ溶液を噴霧した。これらの条件下に、ＰＩａｓＰＰＣは０゜３２のＲｆを有し酸化生成物はＲｆＯ，２４で紫色の点としてｐＨ誘因放出研究用リポソームを上述のように調製した。代表的実験では、４ｍｇのＰＩａｓＰＰＣおよび０．７ｍｇのＤＰＰＣを１ｍｌのＣＨＣｌ、と混合し、減圧下に乾燥して、さらに４６．８ｍｇのカルセインを含む２．５ｍｌの２０ｍＭトリスと混合した。５　Ｎ　Ｎ　ａ　ＯＨでｐＨを８に調整した後、渦混合した懸濁液を５つの凍結−解凍サイクルで処理した。リポソームは上述のように２つの積層した０、１ミクロンのヌクレオボア　フィルタにより５回押し出した。リポソーム（５０μＩ）をＧ−２５カラムから収集し１．４５ｍ１の２０ｍＭ　Ｎａ０Ａｃ／ＨＯＡｃ＋３０ｍＭ　ＮａＣ１，ｐＨ４，２緩衝液または同量の２０ｍＭ１−リス＋３０ｍＭ　ＮａＣｌ、ｐＨ８緩衝液で希釈した。カルセインの放出をアレン（Ａｌｉｅｎ）のｒＬｉｐ。

ｓｏｍｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃブレオリアブイス（Ｇｒｅｏｒｉａｄｉｓ）編１」。

第３巻１７７〜１８２．ＣＲＣブレス、米国フロリダ州、ボカラトン（Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ）　（１９８４年）に記載されたように監視した。

放出の割合を１００μｌの１０９６　トリトンＸ−１００で破壊した後に計算した。

示差走査熱量測定表■に主要なゲルから液体への結晶相転移温度、ＤＰＰＣおよびＰ　１　ａ　ｓ　ＰＰＣリポソーム（＜１０００人）のＴｅｌ　ならびに種々のモル比の２種の脂質を含むリポソームのＴｅを示す表■ 組成’　Ｔｃ（”Ｃ）” ＰｌａｓＰＣ３９，４ＤＰＰＣ４１，５ｅＰ　Ｉ　ａＰＰＣ／ＤＰＰＣ’　（８：Ｉ）　３８．５Ｐ　Ｉ　ａ　ｓ／ＤＰＰＣ”　（８：　Ｉ）　３８．９ＰＩａｓＰＣ／ＤＰＰＣ（１：ｌ）　３９．４．４３．４ａ２０ｍＭトリス緩衝液、ｐｒ−ｒｓに１０ｍＭの脂質；＜１０００人直径ｄ含有物＜１ｕＭ　ＺｎＰＣ＋０．３Ｍグルコースｅ含有物０．３ＭグルコースプラスＰＰＣ及び８：ｌプラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃは、−５°Ｃの半値幅における幅について単一の転移を示す。このような幅の広い不共同的転移は、半合成リポソームを構成する分子種の分散に寄与し得る。上記方法によるプラスＰＰＣの調製は、９６９６が飽和し、６８９６が０１６゜であるｌ−アルク−１ ′エニル脂質鎖の混合物となることか、後のクロマトグラフによる分離はないが、クリア氏およびグロス氏によるｒＪ、ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　Ｊ　１９８５年３３８巻６１〜６９頁に示されている。

また、表■は、光分解の前の、小液泡の水性コア内に捕えたｌμＭ未満の親油性ＺｎＰｃ及び／又は０．３Ｍのグルコースを含むプラスＰＰＣの代表的な試料に対するＴ、を示す。未充填プラスＰＰＣリポソームからのこれらのデータの比較は、分子バッキングがリポソームの炭化水素及びヘッドグループ領域内の増感剤及びグルコースの混入に際し容易に混乱しないこと光照射によるリポソームを含むブラスマローゲンの分裂は、照射に応じてＲＯＳを生成するＺｎＰｃ感光剤を含むリポソーム系で研究された。以下の図の水平軸上に示された時間１６００Ｗ高圧キセノンランプを用いてリポソームを照射した。

図４は、感光剤としてＺｎＰｃを含む８ニー１プラスＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソーム（〔脂質）／　（ＺｎＰｃ）＞　Ｉ　Ｏ’　）の照射後、グルコースを捕捉されたリポソームの放出運動を示す。

放出速度は小液泡がゲル相である１５°Ｃにて決定され、３７°Ｃではより多（の液体二層か優位を占める。６０分間の照射の後、２０％未満の捕捉グルコースは１５°Ｃにて捕捉され、３７℃における６２９６と比較される。故にリポソームの光照射は生理的な温度である３７°Ｃにてグルコース放出を強め、これはヒト体中で見い出される。

またＺｎＰｃ／プラスＰプラスＣ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃからのダークな漏れは両方の温度にて測定される。１５°Ｃ及び３７°Ｃにおいて６０分後、グルコース放出はそれぞれ４％及び３０９６であることがわかった。これによりリポソームの照射はＺｎＰｃ／プラスＰＰ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃ小液泡のグルコース放出において実質的に増加する。

３７°Ｃにおける光誘導放出は種々のコントロール実験に対するものと共に図５に示される。ＺｎＰｃ又は次の懸濁のアルゴンパージングかない場合におけるリポソームの照射はダーク（温度の）漏れ速度と区別できない放出速度となる。図４（８二ｌプラスＰＰＣ／ＤＰＰＣ）で用いた増感剤及び酸素の同一の状態の下の、Ｔｃにおける純粋なりＰＰＣ小液泡の照射はダークＤＰＰＣコントロールで測定されたもの（図示せず）に類似した漏れ速度となる。

プラスＰＰＣ／ＤＰＰＣ／ＺｎＰｃ照射試料の分析はプラスＰＰＣよりわずかに低いＲ２に関して新しい生成物の形成を示す。この点はＮ、　Ｎ、　Ｎ’　、　Ｎ’−テトラメチルフエニＩ／ンジアミンスプレー剤を用いてダークブルーに着色し、酸化脂質生成物はヒドロペルオキシドであることを示唆する。ヒドロペルオキシド生成物はダークな増感剤のない、又はアルゴンパージコントロールにおいて観察されなかった。

この系の一重項酸素（１０□）の可能なかかわりあいを、１００ｍＭナトリウムアザイド、既知の１０２クエンチャ−を含む同一のリポソーム調製の照射により研究する。小液泡溶解に対する保護は実験（図５）のアザイドによってはできない。

カルセインの酸トリガー放出プラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃリポソームからのカルセインの放出は蛍光強度を増加させる。図６は１５°Ｃ，ｐＨ８及びｐＨ４゜２における放出の時間経過を示す。３７°Ｃにおけるアナログプロットを図７に示す。１５°Ｃのカルセインの放出速度はｐＨに依存しないことがわかり、実質的な速度増加は３７°Ｃである生理的温度にて観察される。このように３時間後、３７％のカルセインをｐＨ４，２にて放出するが、ｐＨ８ではほんの７９６がリポソームコアから漏れた。

一重項酸素０２のタイプ■生成は多くの光力学的感光において優越的なメカニズムであると思われ、タイプＩフリーラジカル通路はある条件下で重要となり得る。これらのことは増感剤の膜結合、増感剤の当面の環境における高い脂質／酸素比、及び高光強度を含む。ＰＣリポソームに添加した際、ＺｎＰｃは疎水２層の内部に局在すると思われる。また、発明者は脂質が局在的に高濃度であるように、ＺｎＰｃ染料がプラスメニコリンの２層に同様にとり入れられると考える。このように、７９１１通路は本発明のリポソームの感光に重要な役割を果たし得る。

アジドがグルコースの光刺激漏洩を減じないことを観察すると、　’０２がＴＬＣにより観察される脂質パーオキサイド類の形成に対し責任がなくなることが示唆される。この系の脂質過酸化は励起状態のＺｎＰｃを介して発生した単一酸素以外のラジカル酸素種を含むこと明らかである。

第５図に示す結果は、３７°ＣでのＺｎＰｃの照射がグルコースをプラスＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソームにおける暗色漏洩速度より著しく高い速度で放出することを示す。ＴＬＣデータは、光分解により形成される生成物の一つがビニルエーテル含有鎖の酸化によることを示唆する。従って、この光酸化によるプラスＰＰＣ二重層の崩壊は＠Ｉおよび２図に示すような内容物の包囲媒質への漏洩になる。

しかし、プラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃのゲル相内での照射中に測定された放出速度は非照射試料からのＺｎＰｃおよびＭＣ−５４０の両者を含有するリポソームに一層類似する。これは、二重層が一層流動性の液状結晶性相である場合に、小嚢放出速度の増大か生ずることを示唆する。ゲル相の増大した速度と、Ｔｃ以下の減少した酸素溶解性の両者がこの効果に貢献する場合かある。その結果、本発明にかかわるリポソームは生理学的温度で所期した漏洩機能をより好ましく発揮する利点を有する。

類似のグルコース放出効果は、ＺｎＰｃ増感剤を備える照射された純粋なりＰＰＣリポソームでは観察されなかった。

酸でトリガーされた放出プラスマロゲンの５ｎ−１ビニルエーテル漏洩の酸加水分解は次の式ｌに示すような脂肪酸アルデヒドおよびリソ脂質の形成になる。ＴｔＳ（３および７図のデータは、４．２のｐ　Ｈての加水分解か低ｐＨでの小嚢の脱安走化と一致する水溶性コアからの内容物の放出になることを示す。光増感された放出について、溶液温度がＴｃ以下の場合、かかるｐＨでの放出は少ないことが観察された。

本発明の重要な利点は、プラスＰＰＣの転移温度が生理学的な温度の範囲内にあることにある。類似の光束では、リポソーム内でＺｎＰｃを用いる生体内運動放出プロファイルを第４および５図に示す物に類似させるへきである。若干の熱漏洩か３７°Ｃて生ずるか、プラスＰＰＣを基にしたリポソーム系は薬品搬送システムとしての使用に適している。

可視光または酸性化によりトリガーされたプラズマロゲンリポソームからのＯｔｔ材料の刺激放出は本実施例で立証される。

本例のリポソーム搬送システムは、光、０□および増感剤の存在下でラジカル酸素および／または１０２中間体のような反応性酸素種と燐脂質を光酸化する天然の１−アルケーｌ°　−ニル−２−アシル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホクロリン類を含む。グルコースのような親水剤がこれらリポソーム類から光酸化により放出される。

実施例１１本例は、小嚢の水１８性コアに局在化させたＡｌＣｌＰｃ５増感剤、水溶性フタロシアニンを用いて先述動機構によるプラズマロゲンリポソームの光変性を行うことについて述べる。本例に用いた光増感剤ＡｌＣｌＰｃ５の構造式を下記に示す。

融点をメルーテンブ１１毛細管融点装置で測定し、補正した、ＡｌＣｌＰｃ５　（ミツドセンチユリ−、シカゴ、ＩＬ）、およびバルミチン酸無水物（アメリカン東京化成）を用いた。ＮＡＤＰ、ＡＴＰ、ヘキソキナーゼ、ベーカーイース）・グルコース−６ホスフエートデヒトロゲナーゼおよびＤ−グルコースはシグマから入手した。ジヒドロコレステロール（ＤＨＣ；アルドリッチ、融点１４４− ５°Ｃ，融点１４０−１４２°Ｃ）、１゜２−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロ −３−ホスホクロリン（ＤＰＰＣ；アバンチ）および牛の心臓のホスホクロリン（Ｂ　ＨＰＣニアバンチ）ｆ’／’）力ＴＬｃ　（ＤＨＣ：　９０　：　Ｉ　０ＣＨ２Ｃ１ｘ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ：　Ｄ　Ｐ　Ｐ　ＣおよびＢＨＰＣ；　６５　：　３５　：　６ＣＨＣＩ　、／ＭｅＨ／ＮＨ，ＯＨ）による単一スポットで、さらなる精製なしに用いた。ｌ−アルヶービ　−ニルー２−バルミトイルー５ｎ −グリセロ−３−ホスホクロリン（プラスＰＰＣ）を１−アルケービーニルーｓｎ−グリセロ−３−ホスホクロリンのアルギル化、次いでＢＨＰＣのアルカリ性脱アルキル化により製造した。ギスビスダルスキーおよびピットマン著、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、５４　：４６４３−４８　（１９８９）参照。脂質類をアルゴン雰囲気下−７０″Ｃて使用するまで保存した。ＣＨＣｌ、をＰ、Ｏ，上て乾燥し、使用前に新たに蒸留した。カラムクロマトグラフ用のシリカをＩｌｌのＣＨＣｌ。

／ＭｅＯＨで予備洗浄し、ＩＩＯ’Ｃで乾燥した。

定常状態の吸収測定と、示差走査形カロリメトリー測定とを実施例１に用いたと同じ装置で行った。試料を適当な温度範囲にわたり２−５°Ｃ／分で加熱した。

電子顕微鏡用の試料を、銅グリッドを押出し成形したリポソームで被覆し、ｐＨ＝８の２０　ｍ　Ｍ　ｌ−リス緩衝液中２９６モリブデン酸アンモニユウムで汚染させることにより製造した。試料を３時間真空乾燥し、透過型電子顕微鏡により観察した。

プラスＰＰＣリポソームを、適当量のプラスＰＰＣおよびＤＨＣまたはＤＰＰＣのいずれかとをＩ　２ｍＬノＣＨＣＩ　３１．。

溶解し、Ａｒ流を用いて乾燥フィルムまで蒸発させることによりＩＯｍ〜１リポソーム懸濁液として製造した。高真空下での１−２時間の完全溶剤除去後、０．３Ｍのグルコースど２００−２５０μＬの４０　μＭス１−ツクＡ、ＩＣｌＰｃ５溶液とを含有するｐＨ＝８の２０ｍＭ１−リス１００ｍＭＮａＣ１緩衝液３ｍｌを添加した。この混合物を５５−６０°Ｃて強く渦まかせて淡青色の懸濁液を形成し、これを５回の凍結−融解サイクルを介して十分に水和した。次いて、定温状態のリペックスバイオメンブランス押し出し機を用いて、乳液を４８°Ｃて１０００および８００Ａの段積みヌクレオボアフィルターにより１０回押し出した。取り込まれなかった増感剤およびグルコースを緩衝液で平衡にしたセファデックスＧ−２５カラム」二でのゲル濾過により除去した。最終リポソーム懸濁液中のＡｌＣｌＰｃ５の濃度は３−７μｍの範囲内てあった。

リポソーム内てのＮ　ａ　Ｎ　、ｌまたはＤ２０の使用を必要とする実験を同様の方法て行った。緩衝液のｐ　Ｈを、オリオン５Ａ７２０　ｐ　Ｈメーター（ｐＤ＝ｐＨ＋０．４）およびＤＣＩを用いて８．４に調節した。増感剤混入リポソームの調節を暗室内でまたは減光条件下て行った。

ＡｌＣｌＰｃ５増感リポソームからの光誘導グルコース放出は、リポソームの撹拌定温状態の溶液を１００Ｗのタングステン灯て照射することにより示され、この場合上記灯の出力をまず１０ｃｍセルの水、一ついてコーニングｏｃ−ｓ３ｏカットオフフィルターにより濾過し、標準の３ｍＬキュベツトの１．　５Ｘ　０．　５　ｃｍ’の面積を満たすように収束させた。キュベツト表面での光強度をコヒーレント２１０電力計で測定したところ、２０（±５）ｍＷ／ｃｍ”であった。光分解セル内側の温度を校正したフリューケ５１に／Ｊサーモカップルにより定期的にモニターしたところ、±０．２°Ｃ内て一定てあった。

３７°Ｃてのリポソーム内の漏洩を、光分解の間に２５μＬのりボソマル溶液を種々の時間で取り出すことによりモニターした。放出グルコースの酵素燐化中ＮＡＤＰの還元により生じるＮＡＤＰＨ（λ、、、　３４０　ｎｍ）のモニター生産を含む酵素グル′ロースオキソダーゼアッセイを用いて放出グルコースを定量化した。同１゛トグルフースの総量をトリトンＸ−ｌＯＯ洗浄剤でのリポソームの崩壊により決定した。

７５μＬのリポソームを１５０μＬの２　：　＋ＣＨＣ１ｔ　／ＭｅＯＨに添加することにより薄層クロマトグラフィーを行い、渦まかせて混合した。有機層を除去し、ベーカーシリ力ＩＢ−Ｆ仮」二（こスポットさせ、６５　：　３５　：　６　（ｖ／ｖ／ｖ）のＣＨＣｉ　＝　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　Ｎ　Ｈ４０Ｈて展開した。２０９６のＨ２Ｓ　Ｏ４に浸漬した板を炭化した後これらのスポットを目視により観察した。

表Ｉ＋は示差走査型カロリメトリーにより得たＤＰＰＣ，プラスＰＰＣ，および混合プラスＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　ＣまたはプラスＰＰＣ／ＤＨＣリポソームの主ゲル−液体結晶転移温度（Ｔｃ）を示す。

純粋なプラスＰＰＣリポソームはシアツル同族体ＤＰＰＣで観察されたものより僅かに低いＴｃを示す。ＤＰＰＣおよびプラスＰＰＣの構造的類似性は２種の脂質の不混和性（すなわち相分離ドメイン）のあらゆるカロリメトリックな認識領域を排除すること明らかである。これに対し、３０モル？６　Ｄ　ＨＣは転移温度を７°Ｃたけ増加する。この結果はＤＰＰＣ：　３０モル９６コレステロ一ル混合物のＴｃで報告された５−１０℃の増加と一致する。３０モル９６　Ｄ　ＨＣの混入は大きさを減じ、プラスＰＰＣ転移を広げて成る試料では観察し得ない転移にする。

ここで使用した濃度におけるグルコース及びＡｌＣｌＰｃ５の移入によっては、負荷していない小胞において測定したＴｃから、Ｔｃに顕著な変動はもたらされなかった。顕微鏡的分子バッキングは、コア内のグルコース及び感光剤の可溶化によっては、はとんど阻害されなかった。

直径８０ＡのＰ　１　ａ　ｓ　ＰＰＣリポソーム中にＡＩＣＩＰｃＳをカプセル封入することにより、吸収最大が、６７４ｎｍから（２０ｍＭ）リス、ｐＨ８，文献値、最大６７５ｎｍ（２７））、６７２ｎｍへと少し移動した。リポソーム溶液中において吸収最大が大きく移動しないのは、小胞の内部水溶性コア中にＡｌＣｌＰｃ５が優先的に局在化しており、ここでこのリポソームと炭化水素二分子層との相互作用が最小であることと、適合している。染色光漂白を、放射の過程を通してλｍａｘでの光強度を監視することによって、及び／又は、リポソーム溶液のＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００分離部分標本を測定することによって、チェックした。ＡｌＣｌＰｃ５の漂白は、観察されなかった。

図８は、ＡｌＣｌＰｃ５　ｒ　［脂質）／　（ＡＩＣＩＰｃＳ）約１０３」を負荷された３７°ＣにおけるＩ　Ｏｍｏ　１９６Ｐ　１　ａ　ｓＰ　Ｐ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃリポソームからのグルコースの光誘起放出のキネティックスを示す。

包括されたグルコースの放出が、９０分間の放射の間にほぼ完全になされる一方、熱的過程に起因するグルコースの透過は、同じ時間間隔の間に、光のない場合に、包括されたグルコースのうち６０９６の放出をもたらした。この高い暗漏出速度は、プラスマロゲンリポソーム中で既に酸化されたビニルエーテル連鎖の存在によるものであった。

酸化されたプラスマロゲン不純物を含有しているＰｌａｓＰＰ　Ｃ／Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃ系からのグルコースの暗漏出速度を更に低減するために、同時添加物としてＰＩａｓＰＰＣリポソーム含有ＤＨＣを準備した。これらのＰ　］　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＨＣ小胞からのグルコースの放出を、図９にプロットする。Ｐ］ａｓＰＰＣ／ＤＨＣからの光誘起放出速度は、ＰＩ　ａｓＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソーム中で観察された速度の実験的誤差の範囲内にある。

しかし、９０分間の暗透過の後、Ｐ　Ｉ　ａｓＰＰＣ／ＤＨＣリポソームコアから、包括されたリポソームのうち僅かに２５％のみが放出され、Ｐ　Ｉ　ａｓＰＰＣ／ＤＰＰＣ暗漏出速度から２゜４倍減少した。従って、相当量のりソリピッド（Ｉｙｓｏｌｉｐｉｄ）がプラスマロゲン中に存在しているＡ］ＣｌＰｃ５水溶性感光剤を使用して調製するのに際して、ＤＨＣが好ましいコーリピッド（ｃｏｌｉｐｉｄ）安定化剤であるように思える。

１００ｍＭのナトリウム　アジド（ｓｏｄｉｕｍ　ａｚｉｄｅ）、公知の’　Ｏｔクエンチャ−の存在下に監視した放出速度を、図１Ｏに示す。アジドを含有するリポソームは、アジドを含有しない比較例に比へて、最初の２５〜３０分間の放射の間、顕著な誘導時間（即ち、グルコースの放出か少ないか測定不能である）を示した（図９と図１０と比較すること。）この結果は、短い時間スケールにおいてリポソーム特性を短時間変動させるための経路に依存するアジドクエンチングと適合している。光分解の９０分間前及び後におけるＵＶ／Ｖｉｓ分析か示すところでは、６７２ｎｍにおける光強度が、０．４５４から０．５６７へと少し上昇した。損傷リポソーム状態の原因となるプロセスを早い時間にクエンチするけれとも、９０分間の放射により、アジドを含有する試料においてさえも、リポソームの光散乱特性に、幾らかの変化がもたらされる。

また、トリス／Ｄ、Ｏ／ＮａＣ１緩衝液によって調製した小胞中で、光誘起内容物漏出を測定した（図１１）。短い誘導時間（約１０分間）に引き続いて、この見かけ放出速度が、５５分間の放射の後、２００％を越える最終値へと劇的に上昇する。この結果は、リポソームの凝集又は融合と適合している。

リポソーム内容物の漏出における純粋に光誘起された変化を、放射されたリポソームの速度（図９．１０，１１）から暗漏出速度を差し引き、図１２に再度プロットすることによって、図１２に示した。これらのすべての場合（即ち、トリス／ＮａＣ１、トリス／ＮａＮ２、トリス／　Ｄ　ｔ　Ｏ／　Ｎ　ａ　Ｃ１）において、１０分間から３０分間にわたって、顕著な誘導時間が観察される。膜結合フタロシアニンによる感光化を伴うグルコース漏出に関する同様の研究によれば、こうした遅れ時間は観察されなかった。

放射の後におけるリポソームのＴＬＣ分析が示すところでは、幾つかの新しい生成物が生成しており、いずれも出発のＰｌａｓＰＰＣよりも一層極性であった。

表３は、ＰｌａｓＰＰＣ／ＤＨＣ／Ｉ−リス／ＮａＣｌリポソームの光分解（９０分間）からの各生成物、及び、トリス／アジド及びトリス／Ｄ２０／ＮａＣｌの実験からの生成物の、６５：３５：６　ＣＨＣｌ５／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ中におけるＲｆＳを示す。また、Ｄ−グルコース、ＤＨＣ，Ｐ　Ｉ　ａ　ｓ　ＰＰＣ及びｌ−バルミトイル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＣ）の真正な試料もスポラ１へした。また、各々の場合において、対応する暗比較試料からの部分標本もスポットした。すべての暗試料は、ＰＩａｓＰＰＣのＲｆに対応するＲｆＯ，５４のスポット１つだけを示した。

表３トリス−Ｄ２０／ＮａＣ１中における、光誘起されたリポソームの形態の変化が、溶液の濁度が大きく増大したことによって、確証された。粒径か増大するのにつれて、溶液の濁度が増大する。

本例は、ＡｌＣｌＰｃ５のような水溶性フタロシアニンが、プラスマロゲンリポソームからの包括グルコースの放出を刺激するＲＯ３を生産する可能性を示している。この研究が例■と異なっている点は、例ＩＩにおける感光剤が、ビニルエーテル連鎖から離れて、リポソームの親水性コア内に局在化していることである。脂質の過酸化は、二分子層／水性界面を通してＲＯ３が拡散することを、必要とする。定量的測定は相当に変化するけれとも、ホスファチジルコリン／水工分子層界面を通る’０２の透過効率か、等方性溶液中で、又は、ミセル中で観測される透過効率よりも、小さいように見える。次に、ＤＳＣのデータが示すところでは、Ｐ　Ｉ　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＰＰＣリポソームとは対照的に、Ｐ　Ｉ　ａ　５ＰＰＣ／ＤＨＣ小胞か３７°Ｃてゲル相中にあり、この中で酸素が溶解度を減少させた。最後に、ＤＨＣは、二分子層構造を安定化させ、グルコースの熱的透過を減少させる。コレステロール及びＤＨＣのようなステロイド類を添加すると、二分子層膜の粘度が上昇する。従って、ビニルエーテル連鎖へのＲＯ３の拡散は、Ｐ　Ｉ　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＨＣリポソーム中における方が、例■のＰ　Ｉ　ａｓＰＰＣ／ＤＰＰＣ小胞中におけるよりも、遅くなりつる。

図１２のデータが明白に示すところては、ＰＩａｓＰＰＣ／ＤＨＣリポソームは、酸素の存在下に放射によって影響を受ける。１００９６を越えるグルコース放出の観測が示唆するところでは、光によって誘起された幾分かの形態的変化によって、ＮＡＤＰの減少に起因するあらゆる増加とも独立して、リポソームの光散乱の増加がらたらされた。リポソームの径及び構造の変化か、電子顕微鏡写真（図１４及び図１５）によって確認され、これらは可視光か放射された後に平均リポソーム径が顕著に増大したことをしめしている（図１５）。光分解された試料の顕微鏡写真（図１５）中において、直径の大きな（＞　１２００Ａ）多層構造が多いのは、吸収スペクトル（図１３）を通して観察されたティリングの増大に起因しているのが、もつともありそうなことである。最後に、この顕微鏡写真において、大きな多層構造か多いのは、グルコースの相当部分が光分解によって放出されたことを、示唆している。

放射の前後における（それぞれ図１４及び図１・５）２０ｍＭトリス／Ｄ２０／ＮａＣＩ中のＰ　１　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＨＣリポソームの電子顕微鏡写真が、光分解に引き続いて、大きな多層小胞からなる一層大きな集団を示している。光分解に先立って、このリポソーム（この実験のために、重畳された０、０５μｍヌクレオポール（Ｎｕｃ　１　ｅｏｐｏ　Ｉ　ｅ）フィルターを通して押し出された）は、単層であり、６００Ａのメディアン径を有する狭い粒径分布を示していた。対照的に、放射された小胞は、多層が優先しており、統計的に一層大きく、１１００−１２００Ａのメディアン径を有していた。

ＴＬＣの結果が示すところでは、光分解された試料における新生酸物の生成は、これらの暗比較例中では見られなかった。

光分解の間に生成する主生成物が、ＬｙｓｏＰＣのＲｆに非常に近いＲｆを示すという観察が示唆するところでは、ＡｌＣｌＰｃ５の感光によって優先して誘起される反応は、脂質績の開裂である。Ｐ　Ｉ　ａ　ｓ　ＰＰＣ中における５ｎ− ２鎖の飽和性から見て、こうした反応は、ｓｎｌ鎖のビニルエーテル連鎖で生じうるのが、もっともありそうなことである。

光分解のｆｆ１Ｔ　ｉ＆におけるリポソームの吸収スペクトルを、図１３に示し、かつ、リポソーム性の散乱が大きく増大したことが、放射に起因していたことを示している。こうした作用は、リポソームの凝集及び／又は散乱によって、引き起こされうる。

散乱特性においてこれに匹敵する変化は、暗比較例において使用したリポソームの吸収スペクトルにおいては、観察されなかった。

この例か示すところては、Ｐ　］　ａ　ｓ　ＰＰＣが、３０ｍｏ！？６の濃度でＤＨＣと結合されたときに、単層小胞を形成する。カプセル封入されたグルコースの３７°Ｃにおける能動的透過は、リソリビソド（Ｉｙｓｏｌｉｐｉｄ）不純物を含有しているＰ　Ｉ　ａ　５ＰＰＣ／ＤＰＰＣ小胞中で観察される透過よりも、小さい。水溶性コア中に包括されたＡｌＣｌＰｃ５の存在下におけるＰ　］　ａ　５ＰＰＣ／ＤＨＣリポソームの可視的放射により、新しい光生成物の生成たけてなく、小胞の径及び形態に顕著な変化がもたらされる。見かけグルコース放出プロットにおける誘導時間の観測は、光によって誘起された形態的変化に対するＲＯ３依存機構と、適合している。

例ＩＩＩ純粋なジアルキルプラスマロゲンリポソームを、例Ｉ又は例ＩＮこお１するよう（こして、最初にクロマトグラフィー（こよ−ンてプラスマロゲン出発原料を精製し、ＤＨＣ又はＤＰＰＣコーリピッド安定化剤を加えずに、調製した。このプラスマロゲンを、はぼ完全にジアルキル形になるように、２０９６未満のりソリピットを含有するように、及び好ましくは２９６未満のりソリピッドを含有するように、精製した。これは、既に記載したような薬剤又は他の物質と共に配置した。図１６は、純粋な非照射プラスマロゲンリポソームからの蛍光標識（カルボキシフルオレセイン：　ｃａｒｂｏｘｙｆｕｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ　）の受動的放出を示す。これが示すところでは、純粋なＰ］ａｓＰＰＣリポソームの漏出特性は、Ｐ　１　ａ　ｓ　ＰＰＣ／ＤＰＰＣ（８：　５　：　１）のデータから、実質的に変化していない。

例ＩＶ本発明のリポソームを製造するのに適しているであろう、他の例のプラスマロゲンには、ビス−ビニルエーテル脂質（ｓｎ−１及び５ｎ−２鎖又は（ｓｎ−１）２又は（ｓｎ−２）２を有する：モノ又はビス−エナミン；グリセリンベースではないモノ又はビスビニルエーテルが含まれる。

例Ｖ照射源の量及び特性については、照射源の好ましい特性を先の例に記載してきたけれども、いかなる臨界的なパラメーターを有しているとも知られていない。この照射は、本例に示した、量に関連するリポソーム応答を作りだすことを発見した。このリポソームは、上の例Ｉに示したように調製したが、感光剤として、ＺｎＰｃ感光剤を、細菌性クロロフィルによって置き換えた。この照射源は、７９８　ｎｍにおけるレーザー出力を有する３ワツトのアルミニウム／ガリウム／砒素レーザーであった。この強度（前記溶液中における）を、６００ミリワツト又は１．９ワツトの出力を得られるように、調整した。３７°Ｃにおけるグルコース放出のデータを、図１７に示す。レーザー出力か増大すると、グルコース放出が増大することが示された。

例Ｖｌ臨床的用途においては、本発明のプラスマロゲンリポソームは、静脈内投与されるであろう。この患者は、例えば、ここに参照して本明細書中に包含する米国特許第３，９９３．７５４号におけるような、又は、やはりここに参照して本明細書中に包含するフォルセン（Ｆｏｒｓｓｅｎ）のｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　５ｃｉｅＵＳＡ　Ｊ　７８　：１８７３〜１８７７頁（１９８１年）及びフォルセン（Ｆｏｒｓｓｅｎ）のｒＣａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　Ｊ　４３　：　５４６〜５５０頁（１９８３年）におけるドキソルビシンの投与におけるような、細胞毒性ガン化学療法剤を含む、ＩＶリポソームを受容するであろう。腫瘍（例えば、肺又は大腸の腺癌）のような標的領域を、上記の例に記載した照射源のいずれかによって、注射の一時間以内に照射するであろう。もしもリポソームが、保持される貯蔵時間の間安定ではないとすれば、投与の直前にリポソームを調製することが好ましいであろう。臨床の実際では、好ましい光源は、光フアイバー束に結合された拡散チップを備えたエンドスコープであろう。例Ｖのアルミニウム／ガリウム／砒素レーザーのようなレーザーは、標的を照射するのに、特に小さな腫瘍又は小転移を照射するのに、好ましく使用できる。他の好適な照射源には、フィルターされたタングステン、キセノン又は水銀光源、及びポンプレーザーが含まれる。

また、細胞毒作用を有する光力学的感光剤を選択することができ、ビニルエーテル官能性部分を開裂させるのにこれを使用することができる。こうしたリポソーム系は、標的部位に感光剤を運ぶという利点を有しているであろう。

例Ｖｌｌまた、本発明のリポソームは、標的部位にコスメティクス（ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ）運ぶのに、使用することかできる。湿気補給剤が、リポソーム中へと包含されるであろうし、所望の標的部位に局部的に適用されるであろう。感光剤は、通常の室内光に対応するλｍａｘを有するように、選択できるであろう。

次いて、リポソームの内容物は、室内光により媒介された光分解によって、標的部位で放出されるであろう。

本発明の原理を、多くの好適例において、説明し、記載してきたけれども、本技術分野に習熟した者であれば明白であるように、本発明は、この原理から離れることがなければ、その装置及び詳細を変更することかできる。我々は、次の特許請求の範囲の制振及び範囲内に帰着するすべての変更について、権利を請求する。

的時間、ｍｉｎ朗１１／ｌ、ｍ１ｎＢ’１ｌＶＩ、ｍ１ｎＦＩＧ、　１５フロントページの続き（７２）発明者　アンダーソン　ヴアレリー　シーアメリカ合衆国　オレゴン州　９７２１９　ポートランド　ニス　ダブリュー　フイフティサード　アベニュー　１０１０６

Claims

【特許請求の範囲】

１．人工リボソームにおいて、リボソーム膜と溶原性物質とからなり；前記リボソーム膜は空洞部を包囲しており、ビニルエーテル官能性部分を有する脂質を含有し、前記ビニルエーテル官能性部分は開製した際に前記膜に破裂を生じさせるものであり；前記溶原性物質はトリガー作用をする外的現象に応答して前記ビニルエーテル官能性部分を開裂させるものであることを特徴とする人工リボソーム。
２．脂質はプラスマロゲンであることを特徴とする請求項１記載のリボソーム。
３．溶原性物質は、トリガー作用をする外的現象に応答してビニルエーテル官能性部分を開裂させる反応性酸素種を生成するものであることを特徴とする請求項１記載のリボソーム。
４．溶原性物質は光を吸収し、かつ該物質の光照射に応答して反応性酸素種を生成するものであることを特徴とする請求項１記載のリボソーム。
５．溶原性物質は約６３０ｎｍより長い波長を有する光による照射に応答して反応性酸素種を生成するものであることを特徴とする請求項１記載のリボソーム。
６．人工リボソームにおいて、リボソーム膜と溶原性物質と治療用物質とからなり；前記リボソーム膜はビニルエーテル官能性部分を有するプラスマロゲンからなり、前記ビニルエーテル官能性部分は開裂した際に前記膜に破裂を生じさせるものであり、前記溶原性物質は、該溶原性物質によって吸収される光による照射に応答して局部的にｐＨを低下するか反応性酸素種を生成して前記ビニルエーテル官能性部分を開裂させるものであり；前記治療用物質は、前記リボソームによって運ばれ、前記膜における破裂によって前記リボソームから放出されるものであることを特徴とする人工リボソーム。
７．リボソーム膜が治療用物質を収容する空洞部を取り囲んでおり、溶原性物質が前記膜のなかに含有されていることを特徴とする請求項６記載のリボソーム。
８．リボソーム膜が溶原性物質を収容する空洞部を取り囲んでおり、治療用物質が少なくとも部分的に前記膜のなかに含有されていることを特徴とする請求項６記載のリボソーム。
９．リボソーム中の治療用物質を標的に送達するに当り、空洞部を包囲し、かつビニルエーテル官能性部分を有する脂質を含有するリボソーム膜であって、前記ビニルエーテル官能性部分は開裂した際に前記膜に破裂を生じさせるものを供給し；送達すべき物質を前記リボソームのなかに入れ；溶原性物質を前記リボソームのなかに入れ、前記溶原性物質としては、該溶原性物質によって吸収される光で照射した際に前記ビニルエーテル官能性部分を開裂して前記膜に破裂を生じさせ、これにより前記送達すべき物質の少なくともある部分を前記リボソームから脱出できるようにするものを使用し；前記リボソームの少なくともある部分を標的に供給し；前記溶原性物質によって吸収される光によって標的位置を照射して、前記溶原性物質によって前記ビニルエーテル官能性部分を開裂させかっ送達物質のある部分を放出させることを特徴とするリボソーム中の治療用物質を標的に送達する方法。