JPH07500533A - Ｄｎａ、ウイルス及び内毒素を除去する方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＤＮＡ、ウィルス及び内毒素を除去する方法及び装置関連する出願 この出願は、ｒＤＮＡ及びウィルスを除去する方法及び装置」という発明の名称 を有し、１９９０年６月２９日付けにて出願された米国特許明細書０７１５４６ ．０１１号の同時係属出願である。

技術分野 本発明は、生理学的流体から、またヒト及び動物に投与した医薬溶液からＤＮＡ 及びウィルスを除去する方法、及びこの方法を実施するのに用いる装置に関する ものである。特に、本発明は、生物学的医薬溶液及び生体媒質から、例えば、モ ノクローナル抗体溶液、緩衝剤溶液又はウシ血清アルブミン溶液からＤＮＡ。

ウィルス及び内毒素を除去するのに特に有効である。

背景技術 医薬溶液、緩衝剤溶液、生命維持溶液、食塩溶液、及び動物及びヒトに投与され る他のこのような溶液を製造する際の一つの目標は、これらの溶液がホストにお いて有害反応を引き起こす原因となるかもしれない物質をできる限り含まないよ うにすることである。ＤＮＡ、ウィルス及び内毒素のような物質による汚染を零 にしようとする目標は常に探求されているが、実際には時によって極少量のこの ような物質か存在していることがある。食品医薬品局（ＦＤＡ）はこのような物 質に対して越えてはいけない基準を設定している。製造者は、このような物質の レベルが高すぎる場合にはｌバッチの医薬品が不合格になることに常に留意して おり、製品がＦＤＡ基準の限度を越えないことを保証する新規な方法を絶えずめ ている。従って、製造者は、製造プロセスの全段階において、製造に用いる試薬 ならびに最終製品の純度を保証しようと努めている。医薬品及び上述の他の製品 の多くは水溶液として販売されるか、或いは水性媒質中で製造される。従って、 製造者は使用する水かＤＮＡ、ウィルス及び内毒素を確実に含有しないように努 めている。

これらの製造者が使用することの多い一つの技術は限外濾過である。ボール氏ら の米国特許第４，４３１，５４５号、ロスコップフ氏らの米国特許第４．８１６ ．１６２号、及びカスチノ氏らの米国特許第４．４２０，３９８号の明細書には 、水、血液及び血漿を包含する種々の流体から病理的物質及び／又は有毒物質を 除去するためのデュアル・モジュール（ｄｕａｌ−ｍｏｄｕｌｅ）濾過が記載さ れている。

米国特許第４，４３１．５４５号では、一方が負のゼータ電位を有しかつ、他方 が正のゼータ電位を有する２個のフィルタを使用して正に帯電した粒子及び負に 帯電した粒子を濾別している。中性粒子は開示されているように０．ＯＩＥクロ ンまたはこれより大きい細孔の大きさの等級に従って除去される。米国特許第４ ．８１６．１６２号明細書には、血液、血漿又は血清から免疫グロブリン、アル ブミン及びリポタンパク質を除去する装置が記載されているが、ＤＮＡ又はウィ ルスの除去については言及していない。この米国特許明細書においては、フィル タは手術中に血清を循環及び精製する際に使用するためのものである。米国特許 第４゜４２０．３９８号明細書には、細胞が産生ずるモノクローナル抗体を包含 する抗ウイルス物質を、これらの物質が産生される反応「培養液」から分離する ための濾過方法が記載されている。この米国特許は、生成する種が患者内で反応 を起こすかもしれないウィルス、内毒素及びＤＮＡを含有していないかどうかに ついては言及していない。

従来技術では、絶対細孔の大きさ０．０４　ミクロンのフィルタによって多数回 濾過することにより、大きさ０．０７５ミクロンのウィルスは除去されるが、こ れより小さいウィルスは除去されないことが知られている。例えば、ＭＳ２ファ ージ（０，０２４ミクロン）を含有するコウシ血清を０．０４ミクロンフィルタ に通して濾過してもウィルスは除去されない。ウィルスを除去できる上述の環境 においては、除去率は代表的な例ではフィルタ１回通過当り９９．９〜９９．９ ９％である。例えば、本発明者らは０．０４　ミクロンフィルタを使用して試料 １ｍｌ当り１０”個のウィルス粒子を含有する試料から検出可能なレオウィルス （０，０７５ミクロン）をすべて除去した。１９９０年４月に刊行された「ジエ ネティック・エンジニャリング・ニュース」　（第６頁）に発表されている報文 は、生物学的医薬の製造に関し食品医薬品局（ＦＤＡ）がウィルス除去プロトコ ルに対する強調をますます太き（している点、及びフィルタ製造者が一層高度の ウィルス除去を達成することができるよう努力している点、について意見を述べ ている。

モノクローナル抗体のような生物学的医薬中に存在することのあるほかの汚染物 質はＤＮＡである。工業界では一般的に、ＦＤＡはモノクローナル抗体調剤中の ＤＮＡレベルを１回のモノクローナル用量当り１０ピコグラム未満のＤＮＡにす ることをめていると感じている。

モノクローナル抗体のような生物学的医薬の製造者は、その製品が基準に合致し ていることを確認するための品質保証（ＱＡ）方法を確立することを要求されて いる。基準に合致していることを示すのに使用される方法では、試料中のＤＮＡ を生物学的医薬溶液から濃縮するか、或いは固相にする（固体の形で採取する） ことが必要である。よく知られているように、ＤＮＡは濃縮することができ、固 相にすることができ、或いはジエチルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥ）フィ ルタ膜を使用して溶液から除去することができる。製造者（シュライヒヤー（Ｓ ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ）及びシュエル（Ｓｃｈｕｅｌｌ））の報文は、ＤＥＡＥフ ィルタによって０．２μｇ　ＤＮＡレベルを含有する溶液から９０％より多量の 大腸菌ＤＮＡを固相にすることを示している。０．００１μｇ（１ナノグラム） のＤＮＡを含有する一層希薄な溶液において、８０％より多量のＤＮＡを固相に している。ＤＥＡＥフィルタはＤＮＡのようなタンパク質をフィルタに結合させ ることによって作動する。しかし、ＤＥＡＥフィルタを成るモノクローナル抗体 溶液と共に使用する場合には大きな限界が生じる。例えば、麦芽糖のような成分 を含有するモノクローナル抗体含有緩衝剤溶液についてのＤＮＡ測定は、誤った 高いか低いＤＮＡ値の原因となることがあることが分った。ＤＮＡの分析値が正 確であることを保証するには、このような誤った読みが生じないようにする必要 がある。

最近、ウィルス及びＤＮＡのほかに、内毒素が生物学的医薬における重要な汚染 物質になっている。若干の製造者がモノクローナル抗体溶液のようなタンパク質 溶液から内毒素を除去するのに有用なカラム充填材を提供しているが、このよう な充填材はタンパク質溶液がカラムを通過した後に生成物の収率を低下させるこ とが多い。また、上述のＤＥＡＥフィルタ膜は内毒素を除去すると報告されてい る。しかし、本発明者らはＤＥＡＥフィルタ膜が内毒素をすべての供給源から除 去するのに有効であることを確認することができなかった。成る場合には除去率 が高いが、他の場合には除去率が低かった。このような変動は種々の試料におけ る内毒素自体の構造上の変動に起因すると思われる。次に、内毒素における変動 は、内毒素自体の供給源及び内毒素の受けた化学的処理に依存すると思われる。

本発明者らは現在の技術を詳細に検討し、ウィルス、ＤＮＡ及び少なくとも若干 の内毒素を従来達成されていたより低いレベルまで除去できる単一濾過装置を開 単−濾過装置、すなわちＤＥＡＥ被覆フィルタ膜及び絶対細孔フィルタを具える 装置として、前記膜及び絶対細孔フィルタがフィルタ装置の２個の部分に存在し ているものを提供する。前記装置の第１部分はＤＮＡフィルタ部分であり、この 部分は第１の０．２ミクロンフィルタ、第１ＤＥＡＥフイルタ、第２ＤＥＡＥフ イルタ及び第２の０２ミクロンフィルタを具える。第２部分はウィルスフィルタ 部分であり、この部分は第１の０．１　ミクロンフィルタ、第２の０．１　ミク ロンフィルタ、第１の０．０４ミクロンフィルタ及び第２の０．０４ミクロンフ ィルタを具える。

これらのフィルタ部分を単一フィルタ装置内に収容することができ、あるいはま た使用時にＤＮＡフィルタ部分を収容するハウジングの次にウィルスフィルタ部 分を収容するハウジングを設け、これらの２個のハウジングを連結する場合には これらの部分を別個のハウジング内に収容することができる。単一装置によって 得られるレベルより高い濾過レベルを達成するために、多数の装置を直列に結合 することができる。フィルタ装置は医薬溶液の製造又は包装の時点で大規模に使 用することができ、あるいはまた患者に投与する時点で小規模に使用することが できる。いずれの場合にも、患者に投与する際のように圧力を使用して医薬溶液 をフィルタ部材に押し通すか、あるいはいくつかの製造方法におけるように真空 を使用して医薬溶液をフィルタ部材を経て吸引して医薬溶液をＤＮＡフィルタ及 びウィルスフィルタに通すことにより、ＤＮＡ及びウィルスを除去する。

本発明を具体化した装置は、Ｃ型キセノトロピック（ＸｅｎｏＬｒｏｐｉｃ）レ トロウィルスによって例示されるようなウィルスを、約９９．９９５％（４，６ Ｘ　１０’個以上のウィルス粒子の除去）の効率で除去し、またバクテリオファ ージを９９．９９９９９９９７％（３ｘｌ□＋°個以上のバクテリオファージ粒 子の除去）の、効率で除去し、ＤＮＡをモノクローナル抗体試料について１０μ ｇ／試料５００ｍｇのレベルから１０ピコグラム／試料５００ｍｇより低いレベ ルまで、好ましくは１ピコグラム／試料５００ｍｇより低いレベルまで除去し； 若干の細菌内毒素を９７％以上除去する。さらに、これらのフィルタユニットは 医薬又は生物学的医薬を１０％未満、最も多くはこのような医薬、特にモノクロ ーナル抗体及びウシ血清アルブミンを６％以下吸収する。

本発明の他の例においては、ＤＥＡＥフィルタ膜の代りに、ＤＥＡＥ、ＱＡＥ（ 第４級アミノエチル塩）、ＱＡＭ（第４級アミノメチル塩）又は他の第４級塩で 被覆された絶対細孔フィルタを使用する。例えば、第１及び第２のＤＥＡＥフィ ルタ膜の代りに０．０４　ミクロンフィルタをＱＡＥ又はＱＡＭで被覆する。

本発明のさらに他の例は、ＤＥＡＥＳＱＡＥＳＱＡＭ又は他の同様な物質が、０ ．２．０．１及び０．０４　Ｅクロンの絶対細孔フィルタのうちの１つ以上の上 に直接被覆されているか或いはこれらの１つ以上に直接結合している改良された 装置である。このようにして生成する絶対細孔フィルタをＤＥＡセルロースフィ ルタの代りに使用する。

図面の簡単な説明 図１は本発明装置の一例である単一ユニットフィルタ装置の斜視図である。

図２は図１に示した装置の分解図である。

図３は本発明装置の他の例である複数ユニットフィルタ装置の斜視図である。

図４は図３に示した装置の分解図である。

発明を実施するための最良モード 図１において、本発明はフィルタ装置１２であり、この装置は二個構成フィルタ ハウジング部材からなり、該フィルタハウジング部材は頂部ハウジング部材１４ 、底部ハウジング部材１６、及び一連の内部部材（図示せず）を具え、前記頂部 部材１４は入口部材１８を有し、前記底部部材１６は出口部材２０を有し、前記 頂部部材１４と前記底部部材１６とは、例えば、前記頂部部材と前記底部部材と を互にねじで締め合わせることにより、又はボール・ソケット取付具により、又 は他の同様な手段により、漏れのないように互に接続されている。

図２は本発明装置の分解図である。この本発明装置は上述のような目に見える外 部部材１４．１６．１８及び２０と内部部材とを具え、該内部部材は第１扁平フ ィルタ支持部材２４、第１シール部材２８、第１フィルタ部分３０、フィルタ支 持部材４０、第２扁平フィルタ支持部材４６、第２シール部材５０、第２フィル タ部分６０及び第３扁平フィルタ支持部材７０であり；第１扁平フィルタ支持部 材２４は該支持部材の厚さを貫通する複数個の通路２６を有し；第１シール部材 ２８は前記フィルタハウジングの内壁から内方に横方向に成る距離延在し；第１ フィルタ部分３０は全体にわたって互に逐次面接触するフィルタ部材３２．３４ ．３６及び３８を具え、フィルタ支持部材４０においては扁平頂面４２がフィル タ部材３８の底面と接触し、複数個の通路２６が該フィルタ支持部材４０の厚さ を貫通し、複数個の剛固な脚４４が該支持部材４０の底面の外側端縁に設置すら れ：第２扁平フィルタ支持部材４６は該支持部材を貫通する複数個の通路２６を 有し、該支持部材４６の頂面４８は脚４４と接触し；第２フィルタ部分６０は全 体にわたって逐次互に面接触するフィルタ部材６２，６４゜６Ｇ及び６８を具え ；第３扁平フィルタ支持部材７０は該支持部材の厚さを貫通する複数個の通路２ ６を有し：上述の部材の底面と頂面との面接触は２４と２８．２８と３２．３２ と３４．３４と３６．３６と３８．３８と４０．４６と５０．５０と６２．６２ と６４．６４と６６．６６と６８及び６８と７０であり；フィルタ支持部材２４ の頂面は頂部ハウジング部材１４の内部によって支持され、フィルタ支持部材７ ０の底面は底部ハウジング部材１６の内部によって支持され；前記頂部ハウジン グと前記底部ハウジングとを接続することによって前記内部部材を封入すると、 前記シール部材２８及び５０に圧力が作用し、これらのシール部材２８及び５０ は前記ハウジングの壁に対してシール作用を行い、これによりフィルタ部分３０ 及び６０の回りの流れを阻止し、この流れを前記フィルタ部分３０及び６０を通 ってのみ起るようにする。

図３に示す本発明装置の第２の例は、二部分構成のフィルタ装置１２であって、 該フィルタ装置は第１ＤＮＡ除去フイルタユニツト４及び第２ウイルス除去ユニ ツト６を具え、これらのユニットは連結手段８０によって接続されている。

図４は図３に示すような二個ユニット構成のフィルタ装置の分解図であり、この フィルタ装置は第１ＤＮＡ除去フイルタユニツト４及び第２ウイルス除去フイル タユニツト６を具え、第１ＤＮＡ除去フイルタユニツト４は頂部フィルタハウジ ング部材１４、底部フィルタハウジング部材１６及び内部部材を具え、前記頂部 部材１４は入口部材１８を有し、前記底部部材１６は出口部材２０を有し、前記 内部部材は内部壁に接触しかつ互に逐次面接触し；前記内部部材は第１扁平フィ ルタ支持部材２４、シール部材２８、ＤＮＡフィルタ部分３０及び第２扁平フィ ルタ支持部材７２であり：第１扁平フィルタ支持部材２４は該支持部材の厚さを 貫通する複数個の通路２６を有し；シール部材２８は前記ハウジングの内側壁と 接触しかつ前記フィルタハウジングの内壁から内方に横方向に成る距離延在し、 ＤＮＡフィルタ部分３０はフィルタ部材３２．３４．３６及び３８を具え：第２ 扁平フィルタ支持部材７２は該支持部材の厚さを貫通する複数個の通路２６を有 し；第２ウイルス除去フイルタユニツト６は頂部フィルタハウジング部材１５、 底部フィルタハウジング部材１７及び内部部材を具え、前記頂部部材１５は入口 部材１９を育し、前記底部部材１７は出口部材２１を有し、前記内部部材は互に 逐次面接触し、前記内部部材は第１扁平フィルタ支持部材４６、第１シール部材 ５０、ウィルスフィルタ部分６０、第２扁平フィルタ支持部材７０及び連結部材 ８０であり、第１扁平フィルタ支持部材４６は該支持部材の厚さを貫通する複数 個の通路２６を有し；第１シール部材５０は前記ハウジングの内側壁と接触しか つ前記内壁から内方に横方向に成る距離延在し；ウィルス除去フィルタ部分６０ はフィルタ部材６２．６４．６６及び６８を具え；第２扁平フィルタ支持部材７ ０は該支持部材の厚さを貫通する複数個の通路２６を有し；連結部材８０は出口 部材２０及び入口部材１９を連結することにより前記ＤＮＡフィルタユニット４ と前記ウィルス除去フィルタユニット６とを接続し；上述の部材の底面と頂面と の面接触は２４と２８．２８と３２．３２と３４．３４と３６．３６と３８．３ ８と７２．４６と５０．５０と６２．６２と６４．６４と６６．６６と６８及び ６８と７０であり；支持部材２４及び４６の頂面はそれぞれのその頂部ハウジン グ部材１４及び１５の内部によって支持され、かつフィルタ支持部材７０及び７ ２の底面はそれぞれのその底部ハウジング部材１６及び１７の内部によって支持 され、それぞれの頂部及び底部のハウジング部材を接続することにより前記内部 部材を封入して前記シール部材に圧力を及ぼし、これによりフィルタ部分３０及 び６０の回りの流れを阻止し、この流れをそれぞれのフィルタ部分のみを通って 起るようにし：さらに前記第１ＤＮＡ除去フィルタ部分と前記第２ウィルス除去 フィルタ部分とを入口部材１９及び出口部材２０に取り付けられた連結部材８０ によって接続する。

上述のフィルタユニットは可能な任意の適当な大きさ及び形状、すなわち丸形、 正方形又は長方形にすることができ、唯一の限定条件はフィルタ部分３０及び６ ０に用いるフィルタ材の大きさ及び形状の入手の容易さである。フィルタユニッ トは緩衝剤溶液、医薬、医薬溶液などの製造又は調製に使用される商業的に有用 な量の水を取り扱うのに適した大きさにすることができる。フィルタは製造プロ セスにおいて新しい水性物質が添加される任意の点で使用することができ、製造 プロセスの終りの包装工程においてＤＮＡ、ウィルス及び内毒素を除去するのに 特に有用である。さらに、本発明のフィルタシステムは患者に生理学的溶液又は 医薬溶液を投与する装置と組み合わせて使用することができ；例えば、本発明の フィルタンステムは皮下注射器に組み込むことができ、或いは皮下注射器内に配 置することができる。すべての使用例において、濾過される溶液はＤＮＡ除去フ ィルタ部分を通り、次いでウィルス除去フィルタ部分を通る。

上述のフィルタ装置のフィルタ部材はジエチルアミノエチルセルロースと絶対細 孔フィルタとを組み合わせたものである。これらのフィルタは、本発明装置にお いて使用した場合に、約０．１　ミクロンのＣ型レトロウィルスを４．６Ｘ１０ ″個以上のレトロウィルス粒子の効率で除去し、ＤＮＡを１０ミクロダラム／ｍ ｌのレベルから１ピコグラム／ｍ＋より少ないレベルまで除去し、いくつかの細 菌内毒素の約９７２６を除去する。あるいはまた、これらのフィルタはＤＮＡを １０ピコグラム／用量のレベルから１ピコグラム／用量より少ないレベルまで除 去する。

さらに、本発明のフィルタ部材は被処理溶液、例えばモノクローナル抗体又はラ ン血清アルブミンの溶液から６％以下のタンパク質を吸収する。本発明の好適例 においては、フィルタ部材３２及び３８は０，２ミクロン絶対細孔フィルタであ り、フィルタ部材３４及び３６はＤＥＡＥ被覆フィルタ、例えばシュライヒヤー 及びンユエル社のＮＡ４５フイルタであり；フィルタ部材６２及び６４はＯ，ｌ Ｅクロン絶対細孔フィルタであり：フィルタ部材６６及び６８は０．０４ミクロ ン絶対細孔フィルタである。

本発明の好適例においては、約０．１０８ミクロンの大きさの感染性フィルタ粒 子を濾過装置１回通過当り９９．９９％以上の効率で除去することができる。濾 過装置を２基以上直列に使用することにより一層高い効率を得ることができる。

本発明装置を使用するプロセスにおいては、水、緩衝剤溶液及び生物学的医薬を 包含する医薬溶液は３〜９の範囲のｐＨを有する。さらに、これらの溶液は特定 の塩を０．５モル（Ｍｏｌａｒ）未満の含有量で含有する。特定の塩はリン酸塩 、塩化物、臭化物、沃化物、硫酸塩及び酢酸塩陰イオンのリチウム、ナトリウム 、カリウム及びアンモニウム塩からなる群から選択された１種又は２種以上の塩 である。本発明装置を使用する場合には、溶液をウィルス除去部分に通す前に先 ずＤＮＡ除のではない。

実施例１　ウィルスの除去 順次に、０．２　ミクロン、ＤＥＡＥＳＤＥＡＥ、０．２　ミクロン、０．１　 ミクロン、０．１　ミクロン、０．０４ミクロン及び０．０４ミクロンの８個の フィルタ部材を使用して本発明のフィルタユニットの内部部材を組み立てた。０ ．２．０．１及び０．０４　ミクロン部材は絶対細孔フィルタであり、ＤＥＡＥ 部材はＮＡ４５フイルタ（シライヒヤー及びシュニル社）であった。フィルタユ ニットをオートクレーブ処理可能な注射器内に富封し、標準操作を用いてオート クレーブ処理、すなわちガス滅菌を行った。フィルタ部材を収容している滅菌さ れた注射器を米国メリーランド州２０８５０　ロックビル、ブラックウェル　ロ ード９９００所在のライフ・サイエンシズ・センターのマイクロバイオロジカル ・アソシエイト（ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に送 って、Ｃ型レトロウィルス（０，１０４ミクロン）と大きさの類似しているマウ ス・キセノトロピック（ｘｅｎｏＬｒｏｐｉｃ）　・レトロウィルス（０，１ミ クロン）を加えたモノクローナル抗体溶液を使用して評価した。各注射器のフィ ルタ装置を１個のレトロウィルス添加試料について評価した。Ｓ＋Ｌアッセイに よれば、試料は４．３７ｘ　ｌ　Ｏ’　、５．６　ｘ　１０’及び４．Ｉ　Ｘ　 １０’　ＦＰＵ　／ｍ　Ｉを含有して３同書分析した。３個のモノクローナル抗 体濾液のいずれにもレトロウィルスは見い出されなかった。抗体回収率は９０％ より大きかった。

実施例２　ＤＮＡ／ウィルス除去フィルタによるバクテリオファージの除去達成 可能な最大キセノトロピック・レトロウィルス濃度は約１０’ＦＦＵ／ｍ１であ る。本発明のＤＮＡ／ウィルス除去フィルタの高いウィルス粒子除去効率を確認 するために、バクテリオファージＴ４（約０．１ミクロン）を第２のモデルウィ ルスとして選択した。バクテリオファージ７４１１度に関するアッセイは大腸菌 Ｂ　（ＡＴＣＣＩ　１３０３）のローン（ｌａｗｎ）におけるプラーク形成（プ ラーク形成単位（ＰＦＵ）についてであった。バクテリオファージＴ４は最大濃 度（９，９ｘｌＯ”ＦＦＵ／ｍ＋）まで生育した。未希釈バクテリオファージ溶 液を３個のアリコートに分けた。各アリコートを別個のＤＮＡ／ウィルス除去フ ィルタ装置に通して濾過した。希釈し、大腸菌の皿で培養することにより、濾液 中のバクテリオファージＴ４ｉ１度をアッセイした。３個の濾液のいずれも生ウ ィルスを含有していなかった。このアッセイは３．３ＦＦＵのアンサ−テンティ （ｕｎｃｅｒＬａｉｎｔｙ）を有していた。これらの結果は、本発明のＤＮＡ／ ウィルス除去フィルタ装置によって０．１Ｅクロンバクテリオフアージの濃度を ３．０ｘｌＯ個／ｍ＋の粒子数以下に（９９，９９９９９９９７％）減少できる ことを示す。Ｃ型レトロウィルスのような約０．１ミクロンという類似の大きさ を有するウィルスの場合にも、同様な結果を得ることができた。Ｃ型レトロウィ ルスはモノクローナル抗体医薬用の調整原料中の汚染物質であることが見い出さ れている。本発明者らの知る所によれば、従来知られているフィルタ装置に１回 通してもこのウィルス除去レベルを達成することはできなかった。本発明のフィ ルタ装置の使用すると、調整原料中のＣ型レトロウィルス１度を３ｘｌＯ個／ｍ ｌ以下に減少することができた。１０７個／ｍ１程度の名目上の（ｎｏ組ｎａｌ ）ウィルス粒子数を含有する溶液を安全限界の１０００分の１のレベルである検 出不能なウィルスレベルまで濾過することができた。

溶液中のウィルス１度が大きく１０７個／ｍｌのウィルス粒子を超えている場合 には、溶液を２回以上濾過して検出不能なウィルスレベルを有する溶液を得るこ とができた。本発明のフィルタ装置を２基直列に使用した場合に、約１ｏ１７〜 ＩＱ＋１個／ｍｌ　［（３Ｘ１０１０）ｘ　（３Ｘ１０”）／１０００＝９ｘｌ Ｏ”個〕のウィルス粒子を除去することができた。

実施例３　ＤＮＡ添加抗体溶液からのＤＮＡの除去モノクローナル抗体４００ｍ ｇ及びＤＮＡを含有するモノクローナル抗体溶液を本発明のＤＮＡ／ウィルス除 去フィルタユニットに通して濾過した。濾過前後のＤＮＡ分析結果は、濾過前に ＤＮＡが７２７１）ｇ及び４４２μｇ／試料であり、濾過後にはそれぞれＤＮＡ が５ｐｇ及びｌｐｇ／試料であることを示した（除去率９９．３％及び９９．８ ％）。

実施例４　商業的に入手可能な抗体溶液からのＤＮＡの除去商業的に入手可能な モノクローナル抗体溶液を分析した結果、有意なりＮＡ汚染があることを示した 。この分析は、ナイロン６６膜上で固相にしたＤＮＡを検出するために、米国メ イン州ロックランド所在のＦＭＣバイオプロダクツ社から入手したアッセイキッ ト（ＦＭＣアッセイ）を使用して行った。５０ツトのＤＮＡ含有モノクローナル 抗体溶液を、本発明のフィルタ装置に通して濾過する前後において、ＤＮＡにつ いて分析した。濾過された溶液はすべて抗体用量当りｌＯピコグラム未満のＤＮ Ａを示し、５０ツトの内２０ットは抗体用量当り１ピコクラム未膚のＤＮＡを示 した。これらの結果を表１に示す。

表１　抗体製品からのＤＮＡ除去のまとめ製品の　濾過前の平均ＤＮＡ　濾過後 の１度濾過Ｎａ　ＤＮＡｐｇ／Ｍａｂ　ｍｇ　ＤＮＡｐｇ／用量　Ｄ　Ｎ　Ａ　 ｐｇ／用量１　０、６５　２６０　２．６ ２　０．３０　１２０　０．４ ３　０、３４　３．４　２．６ ４　０、１３　１．３　３．１ ５　０．１３　１４０　０ 実施例５　ＤＮＡ除去の確認 商業的目的のＤＮＡ除去を確認するために、１００ミクログラムのハイブリドー マ産生ＤＮＡを添加した緩衝液中の医薬高級モノクローナル抗体（Ｂｌ）の試料 ５００ｍｇを使用して、ＤＮＡ／ウィルス除去フィルタを試験した。確認に使用 したＤＮＡは、モノクローナル抗体を産生ずるのに使用したと同じ細胞培地から 精製したもので、抗体産生の際に実際に出合ったＤＮＡにできる限り類似させた ものであった。３個の抗体溶液にＤＮＡを加えた。２個の未添加抗体溶液、２個 のＤＮＡ未添加緩衝剤（単独）溶液、及び１００ミクログラムのＤＮＡを添加し た２個の緩衝剤（単独）溶液を対照として使用した。ＤＮＡ添加溶液中の実際の レベルは蛍光ＤＮＡアッセイ法によってめた。ＤＮＡ添加抗体溶液は実際のＤＮ Ａレベルか８１．９２及び７４ミクログラム／試料であることが分った。ＤＮＡ 添加緩衝剤溶液は実際のＤＮＡレベルが８９及び９６ミクロクラム／試料である ことか分った。溶液試料はすべて容積を等しくした。

試験溶液（全部で９個の溶液）をそれぞれ別個の２５＋ｕ＋ＤＮＡ／ウイルス除 去フイルタ装置に通して濾過した。各濾液中の残留ＤＮＡを濃縮し、固相となし 、標準ＦＭＣ−ＤＮＡアッセイ法を使用して２回定量した。各アッセイにおける ＤＮＡ量は、同しアッセイ法で行った精製ハイブリドーマＤＮＡ実験で得られた 標準曲線からめた。標準曲線に対して、機器の反射濃度計（ｉｎｓＬｒｕ＋１ｅ ｎＬ’ｓ　ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ　ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ）によって測定さ れた試料バンドの色の強さをピーク高さくｃｍ）として測定した。標準曲線デー タを、ピーク高さが（最大発色を与える標準物質及びブランクに対する）対数（ ｌｏｇｉｃ）　対　添加ＤＮＡ標準物質量（ピコグラム）の対数に変換されてい る対数一対数（ｌｏｇ−１ｏｇｉｔ）変換によって、線形に変換した。次いで、 試験試料をＤＮＡ標準曲線に内挿して色の強さをめた。

これらの結果は表２に示されており、ＤＮＡ／ウィルス除去フィルタに１回通し た場合にＤＮＡレベルをＤＮＡ約ｌＯピコグラム／モノクローナル抗体５００ｍ ｇ（平均値＝ＤＮＡｔ１３ｐｇ／抗体５００ｍｇ）まで約ｌθ個／ｍｌ低下する ことができることを示す。等容積のＤＮＡ未添加緩衝剤（単独）溶液に対する平 均値は６．２９ｇであった。従って、濾過されたＤＮＡ添加抗体溶液中に検出さ れた正味のＤＮＡの平均値はＤＮＡ６．ｌ　ｐｇ／抗体５００ｍｇであった。

Ｂｌ　５００　ｍｇ　１００μｇ　８１　μｇ　９８．９％　ｔｅ、ｓｐｇＢｌ 　５００　ｍｇ　ｌｏｏμｇ　９２　ｐｇ９Ｂ、０％　８．６　ｐｇ　１２．３ 　ｐｇＢｌ　５００　ｍｇ　１００μｇ　７４　ｕｇ　９６．７％　１１．７１ １ｇＢ１５００ｍｇ　ＯＯ９６，３％　３．３ｐｇＢ１５００ｍｇ　ＯＯ９２， ８％　３．２１１ｇ　３．２９ｇ緩衝剤　１００μｇ　８９μｇ　Ｎ／Ａ　１６ ．９ｐｇ緩衝剤　１００μｇ　９６μｇ　Ｎ／Ａ　３．３　ｐｇ　＋０．１　ｐ ｇ緩衝剤　ｏ　ＯＮ／Ａ　９．８ｐｇ 緩衝剤　０　０　Ｎ／Ａ　２．６ｐｇ　６．２ｐｇ＊モノクローナル抗体試料５ ００　ｍｇ中の全ＤＮＡ　（試料を２回分板した場合の平均実測値 ＤＮＡ及び内毒素に汚染されている１０％麦芽糖−リン酸緩衝剤溶液に５０ｍｇ ／ｍｌのウシ血清アルブミンを溶解した溶液１００ｍ１を４７ｍｍＤＮＡ／ウィ ルス除去濾過装置に通して濾過した。出発溶液はＤＮＡ２４８ｐｇ／ｍｌ及び内 毒素１９６６単位／ｍｌ　（ＥＵ／ｍｌ）を含有していた。

先ず、濾液の中間及び最後の２０ｍ１部分を採取し、分析した。分析した濾液部 分のいずれからもＤＮＡは検出されなかった。内毒素レベルは：最初の試料−３ ０，７２ＥＵ／ｍｌ、中間の試料−３０，７２ＥＵ／ｍ　Ｌ最後の試料＝６１． ４４　ＥＵ／ｍ１であった。最後の試料における内毒素除去率は９６．９％であ った。溶液回収率は９５％（９５ｍｌ）であり、タンパク質の１度変化は認めら れなかった。

同時係属出願明細書における開示 背景技術 内毒素は薬剤ホストにおいて発熱又は毒性反応を起こすことのある非経口薬剤中 の望ましくない汚染物質である。米国の食品医薬品間（ＦＤＡ）に一般的に受け 入れられている内毒素の上限は５ＥＵ／体重ｋｇ／時間の注入量である。モノク ローナル抗体のような非経口薬剤に対する製造者の放出（ｒｅｌｅａｓｅ）基準 は、一般的に最大許容内毒素濃度に対する規格を含んでいる。この規格の放出基 準６二合格しない非経口薬剤の製造ロットは、さらに処理して内毒素１度を低下 させる力１、或いは廃棄する必要がある。

内毒素を除去するためのカラムクロマトグラフィ法はＭ、　Ｄ、　Ｈｏｌｌｅｎ ｂｅｒｇらｒｃａｎ。

Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、ｊ　５９　：　８９０〜８９２ 　（１９８１）　；Ａ、　Ｃ，ｌ５ｓｅｋｕＬｘｒＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉ ｃａｌ　ＭｅｔｈｏｄｓＪ　６１　：　２７５〜２８１　（１９８３）　；及び ｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｐｏ出Ｊ　１９８４年１２月号、第１０３５〜１ Ｏ３８頁に記載されている。しかし、カラムクロマトグラフィは装置、クロマト グラフィ用材料及び廃棄物処理に相当な出費を伴なう。また、カラムクロマトグ ラフィによって生成物収率の低下が起り、従って製造コストか高くなることが多 い。ここに記載する本発明においては、フィルタ膜、絶対細孔フィルタ及び／又 は被覆された絶対細孔フィルタを使用して、緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物 学的医薬水溶液中の内毒素レベルを低下させる。

発明の開示 本発明はＤＥＡＥで被覆されたフィルタ膜及び絶対細孔フィルタを具える単一濾 過装置を提供し、この装置は緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液 中に存在する内毒素の９８％までを除去することができる。本発明によって提供 されるフィルタ膜及び絶対細孔フィルタは濾過装置の２個の部分中に存在する。

濾過装置の２個の部分は単一ハウジング内に収容することができ、或いは別個の ハウシング内に収容することができる。濾過装置の第１部分はＤＮＡ／内毒素除 去部分であり、第２部分はウィルス／内毒素除去部分である。本発明の濾過装置 の他の例においては、フィルタ膜を取り除き、その代りにＤＥＡＥ、ＱＡＭ又は ＱＡＥ塩及び同様な物質、或いはその混合物によって被覆された少なくとも１個 の絶対細孔フィルタを使用する。本発明のさらに他の例においては、フィルタ膜 を取り除き、残りの絶対細孔フィルタのうちの少なくとも１個を、ＤＥＡＥ、Ｑ ＡＭ、又はＱＡＥ塩及び同様な物質、又はその混合物によって被覆する。

発明の詳細な説明 本発明は、緩衝剤水溶液、医薬水溶液又は生物学的医薬水溶液を、第１　ＤＮＡ Ｚ内毒素フィルタ部分及び第２ウィルス／内毒素フィルタ部分に通してＤＮＡ、 ウィルス及び内毒素を実質的に除去し、次いで前記緩衝剤水溶液、医薬水溶液又 は生物学的医薬水溶液を捕集することにより、緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生 物学的医薬水溶液からＤＮＡ、ウィルス及び内毒素を除去する方法を提供する。

本発明のフィルタ装置は（１）第１ＤＮＡ／内毒素フィルタ部分及び（ＩＩ）第 ２ウィルス／内毒素フィルタ部分を具え、（Ｉ）前記第１ＤＮＡ／内毒素フィル タ部分は：（Ａ）　（ｉ）第１絶対細孔フイルタ、（ｉｉ）（ａｌＤＥＡＥセル ロースフィルタ膜と、（ｂ）ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ塩、第４級アミノ エチル塩、第４級アミノメチル塩及び同様な物質からなる群から選択された少な くとも１種の塩で被覆された絶対細孔フィルタとからなる群から選択された一つ のものである第１及び第２のフィルタ、及び（ｉｉ）第２絶対細孔フイルタ を具えるか；或いは （Ｂ）　？Ｊ［数個の絶対細孔フィルタであって、そのうちの少なくとも１個の フィルタがジエチルアミノエチル塩、第４級アミノエチル塩、第４級アミノメチ ル塩及び同様な物質からなる群から選択された少なくとも１種の塩で被覆されて いるもの を具え； （Ｉｔ）前記第２ウィルス／内毒素フィルタ部分は：前記ＤＮＡフィルタ部分に おける前記絶対細孔フィルタより小さい直径を有する絶対細孔フィルタ又は前記 ＤＮＡフィルタ部分における被覆された絶対細孔フィルタを具える。

モノクローナル抗体のいくつかのロフトからの試料を前記フィルタ装置に通して 濾過した。試料溶液の内毒素１度（内毒素単位、ＥＵ）をリムルス・アメーバサ イト・ライセイト（いｍｕｌｕｓ　Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ　Ｌｙｓａｔｅ）　（Ｌ ＡＬ）アッセイによって測定した。アソシエイツ・オブ・ケーブコソド（Ａｓｓ ｏｃｉａｔｅｓ　ｏｆ　Ｃａｐｅｃｏｄ）　Ｌ　Ａ　Ｌ（米国サマチューセソツ 州ケーブコソド所在）アッセイを使用した、このアッセイの最大感度は０．０６ ＥＵ／ｍｌであった。内毒素標準物質は活性がｌ０ＥＵ／ｍｇであると記載され ていた。精製モノクローナル抗体製品に内因性の内毒素を、表３　モノクローナ ル抗体製品をＤＮＡ／内毒素／ウィルスフィルタ装置に通して濾過したことによ るＬＡＬ定置した内毒素１度の低下０ １７８７−８４Ａ　１０　２５　５　０．１０　＜０．０１１８２５−ＩＡ　５ ０　２５　２０　０．７７　０．０１１８２５−ＩＢ　５０　２５　２０　０． ７７　≦０．０１１８２５−１ｃ　５０　２５　２０　０．７７　０．７７５３ ０９００１　３０　２５　７．１２　８．６３　０．３３５０６１００２　５６ ８　９０　５．０１　２４゜３５　０．７７５１９０００２　９１　９０　２０ ．７４　０．０９　０．０１５０１１００１　８０　９０　５３．０８　０．０ ２　０．０１５３２１００７　６０　９０　４２．９０　０．０４　０．０１５ ３５１００１　６３　９０　２１．６４　０．０２　０．０１＊モノクローナル 抗体を、ＤＮＡ／内毒素／ウィルス除去フィルタ装置によって処理する前後にお ける内毒素濃度についてＬＡＬア表３に示す結果は、医薬品縁モノクローナル抗 体調剤中の内因性内毒素１度を、本発明の一例であるＤＮＡ／内毒素／ウィルス 除去フィルタ装置によって低下させることができることを示す。本発明のフィル タ装置はこのように製品中の内毒素１度を９８％まで低下させた。このようなモ ノクローナル抗体製品の内毒素レベルの実測された低下は、このような製品を、 薬剤の投与を受ける患者に対する危険を小さくすると共に一層多い用量及び／又 は一層大きい注入速度で投与することを可能にするのに十分である。

実施例７　フィルタ装置を通した後における内毒素の除去部３に示すデータは、 使用不能であった抗体製品のロフトを、本発明のＤＮＡ／内毒素／ウィルスフィ ルタ装置に通して濾過することにより、救済することができたことを示す。例え ば、使用不能であった抗体製品のロフトを、本発明のＤＮＡ／内毒素／ウィルス フィルタ装置に通して濾過することにより救済することができることを示す。例 えば、ロット５０６１００２は、その内毒素１度２４．３５Ｅ、Ｕ、　／ｍｇ　 （製品規格５Ｅ、Ｕ、／ｍｇ）が大きすぎて所望量を妥当な時間内に注入するこ とが許されないので、目的とする非経口使用には不合格である医薬品縁モノクロ ーナル抗体であった。この製品の標準コストの値は５０，０００ドルであり、こ の製品を廃棄した場合にはこの金額が損失になる。しかし、本発明のＤＮＡ／内 毒素／ウィルスフィルタ装置に通して濾過した後に、内毒素濃度は合格である０ 、　７７　Ｅ　、肌／ｍｇに低下した。

表３に示すデータ及び実施例７は本発明のフィルタ装置に通した後における内毒 素の全除去量を示している。この実施例では、各フィルタ部分によって除去され た内毒素量を測定した。その結果は、両フィルタ部分が試料から内毒素を除去す るのに有効であることを示した。

ロット番号５３０９００１のモノクローナル抗体の７．１２ｍｇ／ｍＬ溶液の試 料３０ｍｇを４７ｍｍ径フィルタ装置に通した。ＤＮＡ／内毒素除去部分は２個 の０．２ミクロンフィルタ膜及び２個のＮＡ４５フイルタ（シュライヒャー及び シュニル社）を収容していた。ウィルス／内毒素除去部分は上述のように組み立 てられた２個の０．１ミクロンフィルタ及び２個の０．０４ミクロンフィルタを 収容していた。試料中の内毒素レベルを濾過前、ＤＮＡ／内毒素部分に通した後 ウィルス／内毒素部分に通す前、及びＤＮＡ／内毒素部分及びウィルス／内毒素 部分の両方に通した後に測定した。その結果は次の通りであった：試料の試験　 内毒素レベル 濾過前　８．６　Ｅ、　Ｕ、　／抗体ｍｇ両部分の間　０．６　Ｅ、　Ｕ、　／ 抗体ｍｇ両部分の後　０．３　Ｅ、　Ｕ、　／抗体ｍｇ分析結果は、ＤＮＡ／内 毒素部分に通すことにより内毒素の９３％が除去され、両フィルタ部分を通すこ とにより内毒素の９６．５％（内毒素の追加３．５％、残留内毒素の５０％）か 除去されたことを示した。

実施例９　ウィルス粒子の除去 実施例２において得た結果は、本発明のＤＮＡ／内毒素／ウィルス除去フィルタ 装置が試料中のバクテリオファージ濃度を粒子数で３Ｘ１０’°個低下させるこ とができたことを示す。この実施例は、最初の実験においてウィルスが不活性に なったか断片になったかどうか、及び不活性になったウィルス又はそのサブユニ ットを本発明のフィルタ装置に通す必要があるかどうかを決めるための付加実験 に関するものである。不活性化又は断片化ウィルス粒子或いはウィルスサブユニ ットはＬＡＬ分析によって検出されなかった。透過電子顕微鏡を使用する他の方 法を使用して不活性化ウィルス粒子又はウィルスサブユニットを調べた。

バクテリオファージＴ４を５Ｘ１０”プラーク形成単位／ｍｌの濃度まで生育さ せた。次いで、生成したバクテリオファージ懸濁液をＤＮＡ／内毒素／ウィルス 除去フィルタ装置に通して濾過し、超遠心分離によって得た濾液を透過電子顕微 鏡によってＴ４バクテリオファージ及びＴ４バクテリオファージサブユニットに ついて調べた。Ｔ４バクテリオファージもＴ４サブユニットも観察されなかった 。実測された負の格子の数に基いて、濾液中の粒子濃度は１．７３Ｘ　１０　” 個／ｍ１より小さいことが分った。この結果は、ウィルスの粒子又はサブユニッ トの９９、９９７％以上が試験溶液である懸濁液から除去されたことを示す。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成　６年　４ 月２７日

Claims (31)

【特許請求の範囲】
1. １．緩衛剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液からＤＮＡ、ウイルス及 び内毒素を除去するに当り、 前記緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液のうちの１種を、第１Ｄ ＮＡ／内毒素フィルタ部分及び第２ウイルス／内毒素フィルタ部分に通して、前 記ＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を実質的に除去し；次いで前記緩衝剤水溶液、医 薬水溶液又は生物学的医薬水溶液を捕集し；（１）前記第１ＤＮＡ／内毒素フィ ルタ部分として：（Ａ）（ｉ）第１絶対細孔フィルタ、 （ｉｉ）（ａ）ＤＥＡＥセルロースフィルタ膜と、（ｂ）ジエチルアミノエチル 塩、第４級アミノエチル塩及び第４級アミノメチル塩からなる群から選択された 少なくとも１種の塩で被覆された絶対細孔フィルタとからなる群から選択された 一つのものである第１及び第２のフィルタ、及び（ｉｉｉ）第２絶対細孔フィル タ を具えるフィルタ部分を使用するか；或いは（Ｂ）複数個の絶対細孔フィルタで あって、そのうちの少なくとも１個のフィルタがジエチルアミノエチル塩、第４ 級アミノエチル壇、第４級アミノメチル塩及び同様な物質からなる群から選択さ れた少なくとも１種の塩で被覆されているものを具えるフィルタ部分を使用し； （ＩＩ）前記第２ウイルス／内毒素フィルタ部分として：前記ＤＮＡフィルタ部 分における前記絶対細孔フィルタより小さい直径を有する絶対細孔フィルタ又は 前記ＤＮＡフィルタ部分における被覆された絶対細孔フィルタを使用する ことを特徴とするＤＮＡ、ウイルス及び内毒素の除去方法。
2. ２．濾過された溶液中の生物学的医薬を包含する医薬の収率が出発溶液に対して ９０％以上であることを特徴とする請求項１記載の方法。
3. ３．ウイルスが０．１００ミクロン以上である場合にはウイルス除去率が９９． ９９９９９９９７％以上であり；医薬又は生物学的医薬の濾過された溶液中の収 率が出発溶液に対して９０％以上であることを特徴とする請求項１記載の方法。
4. ４．濾過された溶液中のＤＮＡが好ましくは溶液１００ｍ１当り１０ピコグラム 未満であることを特徴とする請求項１記載の方法。
5. ５．濾過された溶液中のＤＮＡが１ピコグラム未満であることを特徴とする請求 項４記載の方法。
6. ６．前記内毒素除去率が出発溶液に対して約９８％でであることを特徴とする請 求項１記載の方法。
7. ７．緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液が３〜９の範囲のｐＨを 有することを特徴とする請求項１記載の方法。
8. ８．緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液はいずれも０．５モル（ Ｍｏｌａｒ）未満の特定塩を含有し、前記特定塩はリン酸塩、塩化物、臭化物、 沃化物、硫酸塩及び酢酸塩陰イオンのリチウム、ナトリウム、カリウム及びアン モニウム塩からなる群から選択された１種又は２種以上の塩であることを特徴と する請求項１記載の方法。
9. ９．医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液からＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を除去 するに当り、 前記溶液のいずれかを第１ＤＮＡ／内毒素フィルタ部分及び第２ウイルス／内毒 素フィルタ部分に通して著しく低下したＤＮＡ及び内毒素レベルを有する濾過さ れた医薬水溶液又は濾過された生物学的医薬水溶液を得、この際前記溶液を （ａ）第１ＤＮＡフィルタ部分において第１の０．２ミクロン絶対細孔フィルタ 、第１ジエチルアミノエチルセルロースフィルタ、第２ジエチルアミノエチルセ ルロースフィルタ及び第２の０．２ミクロン絶対細孔フィルタに通し、（ｂ）第 １の０．１ミクロン絶対細孔フィルタ、第２の０．１ミクロン絶対細孔フィルタ 、第１の０．０４ミクロン絶対細孔フィルタ及び第２の０．０４ミクロン絶対細 孔フィルタに通し、 次いで濾過された溶液を捕集する ことを特徴とするＤＮＡ、ウイルス及び内毒素の除去方法。
10. １０．濾過された溶液中の生物学的医薬を包含する医薬の収率が９０％以上であ ることを特徴とする請求項９記載の方法。
11. １１．ウイルスが０．１００ミクロン以上である場合にはウイルス除去率は９９ ．９９９９９９９７％（３×１０１０個）以上であり；医薬又は生物学的医薬の 濾過された溶液中の収率が９０％以上であることを特徴とする請求項９記載の方 法。
12. １２．濾過された医薬又は生物学的医薬の溶液中のＤＮＡを好ましくは１０ピコ グラム未満に低下させることを特徴とする請求項９記載の方法。
13. １３．濾過された医薬又は生物学的医薬の溶液中のＤＮＡを１ピコグラム未満に 低下させることを特徴とする請求項１２記載の方法。
14. １４．前記内毒素除去率が出発溶液に対して約９８％までであることを特徴とす る請求項９記載の方法。
15. １５．医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液が６〜８の範囲のｐＨを有することを 特徴とする請求項９記載の方法。
16. １６．医薬又は生物学的医薬は０．５モル（Ｍｏｌａｒ）未満の医薬又は生物学 的医薬の塩を包含する特定塩を含有し、前記特定塩はリン酸塩、塩化物、臭化物 、沃化物、硫酸塩及び酢酸塩陰イオンのリチウム、ナトリウム、カリウム及びア ンモニウム塩からなる群から選択された１種以上の塩であることを特徴とする請 求項９記載の方法。
17. １７．前記緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液を、真空手段又は 圧力手段により、前記ＤＮＡ／内毒素フィルタおよび前記ウイルス／内毒素フィ ルタに通すことを特徴とする請求項１〜９のいずれか一つの項に記載の方法。
18. １８．適当な入口／出口手段、内部ガスケット及びフィルタ支持部材を有するハ ウジングと、内部フィルタとを具える、緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的 医薬水溶液からＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を除去する装置において、流入側か ら流出側に向って、互に対面接触する第１の０．２ミクロンフィルタ、第１ジエ チルアミノエチルセルロースフィルタ、第２のジエチルアミノエチルセルロース フィルタ及び第２の０．２ミクロンフィルタを有する第１ＤＮＡ／内毒素フィル タ部分と、 流入側から流出側に向って、互に対面接触する第１の０．１ミクロンフィルタ、 第２の０．２ミクロンフィルタ、第１の０．０４ミクロンフィルタ及び第２の０ ．０４ミクロンフィルタを有する第２ウイルス／内毒素フィルタ部分とを具える ことを特徴とするＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を除去する装置。
19. １９．前記０．０２、０．１及び０．０４ミクロンフィルタが絶対細孔フィルタ であることを特徴とする請求項１８記載の装置。
20. ２０．ＤＮＡを好ましくは１０ピコグラム未満のレベルに低下させることができ ることを特徴とする請求項１８記載の装置。
21. ２１．ＤＮＡを１ピコグラム未満のレベルに低下させることができることを特徴 とする請求項２０記載の装置。
22. ２２．ウイルスが０．１００ミクロン以上である場合にはウイルスを９９．９９ ９９９９９７％（３×１０１０個）除去することができることを特徴とする請求 項１８記載の装置。
23. ２３．出発溶液中に存在する内毒素の約９８％までを除去することができること を特徴とする請求項１８記載の装置。
24. ２４．濾過された溶液中の医薬又は生物学的医薬の収率が未濾過溶液に対して９ ０％以上であることを特徴とする請求項１８記載の装置。
25. ２５．濾過しようとする前記溶液を圧力又は真空手段によって前記除去装置に通 すことを特徴とする請求項１８記載の装置。
26. ２６．前記除去装置は患者に前記緩衝剤水溶液、医薬水溶液又は生物学的医薬水 溶液を投与する手段であり、該手段は前記ＤＮＡ／内毒素フィルタ部分及びウイ ルス／内毒素フィルタ部分を具えることを特徴とする請求項１８記載の装置。
27. ２７．前記装置は前記ＤＮＡ／内毒素除去フィルタ及びウイルス／内毒素除去フ ィルタを具える注射器一濾過装置であることを特徴とする請求項１８記載の装置 。
28. ２８．ＤＥＡＥ官能基、ＱＡＥ官能基、ＱＡＭ官能基又は他の第４級アミン官能 基が０．２、０．１及び０．０４ミクロンの絶対細孔大きさのフィルタから選択 された少なくとも１種のフィルタに直接結合しており、このフィルタがＤＥＡＥ セルロースフィルタの代りに設けられていることを特徴とする請求項１８記載の 装置。
29. ２９．適当な入口／出口手段、内部ガスケット及びフィルタ支持部材を有するハ ウジングと、内部フィルタとを具え、緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医 薬水溶液からＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を除去する装置において、流入側から 流出側に向って、互に対面接触する第１の０．２ミクロンフィルタ及び第２の０ ．２ミクロンフィルタを有する第１ＤＮＡフィルタ部分と、流入側から流出側に 向って、互に対面接触する第１の０．１ミクロンフィルタ、第２の０．１ミクロ ンフィルタ、第１の０．０４ミクロンフィルタ及び第２の０．０４ミクロンフィ ルタを有する第２ウイルスフィルタ部分とを具え、前記絶対細孔フィルタの少な くとも１個がＤＥＡＥ、ＱＡＥ、ＱＡＭ及び他の第４級アンモニウム塩からなる 群から選択された少なくとも１種の塩で被覆置されている ことを特徴とするＤＮＡ、ウイルス及び内毒素の除去装置。
30. ３０．緩衝剤水溶液、医薬水溶液及び生物学的医薬水溶液からＤＮＡ、ウイルス 及び内毒素を除去する装置において、 前記溶液に対する入口手段及び出口手段、フィルタ部分と内部ガスケットとを積 み重ねた組立体及び前記フィルタ部分に対する支持手段を有し、前記組立体がＤ ＮＡフィルタ部分及びウイルスフィルタ部分を有し、これらのフィルタ部分が該 フィルタ部分を通る前記溶液から実質的にＤＮＡ、ウイルス及び内毒素を除去す るように構成及び配置されているハウジング及び前記ＤＮＡ、ウイルス及び内毒 素を除去した後に前記溶液を捕集する手段を具えることを特徴とするＤＮＡ、ウ イルス及び内毒素の除去装置。
31. ３１．前記ＤＮＡフィルタ部分は （ｉ）第１絶対細孔フィルタ （ｉｉ）（ａ）ＤＥＡＥセルロースフィルタ膜と、（ｂ）ジエチルアミノエチル 壇、第４級アミノエチル塩及び第４級アミノメチル塩からなる群から選択された 少なくとも１種の塩で被覆された絶対細孔フィルタとからなる群から選択された 一つのものである第１及び第２のフィルタ、及び（ｉｉｉ）第２絶対細孔フィル タ を具え； 前記ウイルスフィルタ部分は前記ＤＮＡフィルタ部分における前記絶対細孔フィ ルタより小さい細孔直径を有する絶対細孔フィルタを具えることを特徴とする請 求項２７記載の装置。