JPH07260792A - Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法 - Google Patents
Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法Info
- Publication number
- JPH07260792A JPH07260792A JP6082160A JP8216094A JPH07260792A JP H07260792 A JPH07260792 A JP H07260792A JP 6082160 A JP6082160 A JP 6082160A JP 8216094 A JP8216094 A JP 8216094A JP H07260792 A JPH07260792 A JP H07260792A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- virus
- antigen
- hepatitis
- hepatisis
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
(57)【要約】
【目的】 インターフェロン等によるＣ型肝炎ウイルス
の治療の際のＣ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価を測
定する方法及びこの方法で使用する検査薬を提供する。 【構成】 Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定
において、測定対象試料をその吸光度が２．０以下にな
るように希釈し、Ｃ型肝炎ウイルス抗原ペプチドとして
配列番号１から３に記載のアミノ酸配列のいずれか一つ
を用いることを特徴とするＣ型肝炎ウイルス抗原に対す
る抗体価の測定方法。 【効果】 本発明によりインターフェロン等によるＣ型
肝炎の治療効果を明確に判定することが可能となり、モ
ニターリングに非構造蛋白抗原を加えることにより、コ
ア抗体が陰性である患者の治療効果モニターリングを可
能にし、更にこれらの方法に使用する検査薬が得られ
る。
の治療の際のＣ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価を測
定する方法及びこの方法で使用する検査薬を提供する。 【構成】 Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定
において、測定対象試料をその吸光度が２．０以下にな
るように希釈し、Ｃ型肝炎ウイルス抗原ペプチドとして
配列番号１から３に記載のアミノ酸配列のいずれか一つ
を用いることを特徴とするＣ型肝炎ウイルス抗原に対す
る抗体価の測定方法。 【効果】 本発明によりインターフェロン等によるＣ型
肝炎の治療効果を明確に判定することが可能となり、モ
ニターリングに非構造蛋白抗原を加えることにより、コ
ア抗体が陰性である患者の治療効果モニターリングを可
能にし、更にこれらの方法に使用する検査薬が得られ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、インターフェロン等に
よるＣ型肝炎ウイルスの治療の際のＣ型肝炎ウイルス抗
原に対する抗体価を測定する方法及びこの方法で使用す
る検査薬に関する。
よるＣ型肝炎ウイルスの治療の際のＣ型肝炎ウイルス抗
原に対する抗体価を測定する方法及びこの方法で使用す
る検査薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスとは既知の肝炎
を引き起こすウイルス、例えばデルタ肝炎ウイルス、サ
イトメガロウイルス、ＥＢウイルス、経口感染により流
行を起こすＡ型肝炎ウイルス、主として血液を介して感
染するＢ型肝炎ウイルス等のいずれにも属さない肝炎ウ
イルスの総称である。非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスは大別す
ると２つのタイプに分けることができる。すなわち水伝
播性（経口感染）型と血液伝播性（輸血後感染）型であ
る。前者はＥ型肝炎ウイルスとして既に同定されており
感染後も慢性化しないことが特徴であるが、後者の血液
伝播性（輸血後感染）型ウイルスはＣ型肝炎ウイルス
（ＨＣＶ）とよばれ慢性化しやすく時間が経過すると肝
硬変、肝癌に進行する場合が多く問題である。
を引き起こすウイルス、例えばデルタ肝炎ウイルス、サ
イトメガロウイルス、ＥＢウイルス、経口感染により流
行を起こすＡ型肝炎ウイルス、主として血液を介して感
染するＢ型肝炎ウイルス等のいずれにも属さない肝炎ウ
イルスの総称である。非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスは大別す
ると２つのタイプに分けることができる。すなわち水伝
播性（経口感染）型と血液伝播性（輸血後感染）型であ
る。前者はＥ型肝炎ウイルスとして既に同定されており
感染後も慢性化しないことが特徴であるが、後者の血液
伝播性（輸血後感染）型ウイルスはＣ型肝炎ウイルス
（ＨＣＶ）とよばれ慢性化しやすく時間が経過すると肝
硬変、肝癌に進行する場合が多く問題である。
【０００３】１９８９年、アメリカのカイロン社の研究
者がＨＣＶのｃＤＮＡのクローニングに成功して以来
（Ｃｈｏｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８９、２４４、
Ｐ．３５９）多くのＨＣＶクローンがイムノスクリーニ
ング法（Ｍａｅｎｏら、１９９０、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８、Ｐ．２６８５、Ｔａ
ｋａｍｉｚａｗａら １９９１、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、６
５、Ｐ．１１０５、Ｓａｔｏら、１９９３、Ａｃｔａ
Ｖｉｒｏｌ．３７、Ｐ１３２）やＰＣＲ法（Ｏｋａｍｏ
ｔｏら、１９９２、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１８８、Ｐ３３
１）にて単離され種々の遺伝子型（サブタイプ）が提唱
されている。日本では大別すると４つのサブタイプのＨ
ＣＶ（Ｉ〜ＩＶ型）が存在し、ＩＩ型に感染している例
が最も多いことが報告されている（Ｏｋａｍｏｔｏら、
１９９２、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７３、Ｐ．６７
３）。
者がＨＣＶのｃＤＮＡのクローニングに成功して以来
（Ｃｈｏｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８９、２４４、
Ｐ．３５９）多くのＨＣＶクローンがイムノスクリーニ
ング法（Ｍａｅｎｏら、１９９０、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８、Ｐ．２６８５、Ｔａ
ｋａｍｉｚａｗａら １９９１、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、６
５、Ｐ．１１０５、Ｓａｔｏら、１９９３、Ａｃｔａ
Ｖｉｒｏｌ．３７、Ｐ１３２）やＰＣＲ法（Ｏｋａｍｏ
ｔｏら、１９９２、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１８８、Ｐ３３
１）にて単離され種々の遺伝子型（サブタイプ）が提唱
されている。日本では大別すると４つのサブタイプのＨ
ＣＶ（Ｉ〜ＩＶ型）が存在し、ＩＩ型に感染している例
が最も多いことが報告されている（Ｏｋａｍｏｔｏら、
１９９２、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７３、Ｐ．６７
３）。
【０００４】一方、ＨＣＶの感染を調べるための抗ＨＣ
Ｖ抗体検査薬も種々開発されており、最近では構造蛋白
質（コア蛋白質）と非構造蛋白質とを抗原として組み合
わせた第２世代検査薬が主流で多くの成果をあげている
（Ｆｒｏｓｔら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｒｏｂ
ｉｏｌ、３１、Ｐ．１６３）。使用抗原としては構造蛋
白質（コア蛋白質）が免疫原性が強くＣ型慢性肝炎患者
の９０％以上が陽性を示すこと、また感染初期において
コア抗体が検出される例が多いことから重要であると考
えられる（Ｃｈｉｂａら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８８、Ｐ．４６
４１）。特にコアタンパク領域のＮ末端側に免疫原性の
強い領域が存在していることが知られており（Ｎａｓｏ
ｆｆら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、８８、Ｐ．５４６２）、この領域の
アミノ酸配列を基にして合成ペプチドを作製し患者血清
と反応させると高率で反応することが確認されている
（Ｓａｔｏら、１９９３、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．３７、Ｐ．２９５）。しかしながらこれらの
検査薬はＨＣＶの感染の有無を調べるものであり、モニ
ターリング用の抗体価の定量に用いられるものではなか
った。
Ｖ抗体検査薬も種々開発されており、最近では構造蛋白
質（コア蛋白質）と非構造蛋白質とを抗原として組み合
わせた第２世代検査薬が主流で多くの成果をあげている
（Ｆｒｏｓｔら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｒｏｂ
ｉｏｌ、３１、Ｐ．１６３）。使用抗原としては構造蛋
白質（コア蛋白質）が免疫原性が強くＣ型慢性肝炎患者
の９０％以上が陽性を示すこと、また感染初期において
コア抗体が検出される例が多いことから重要であると考
えられる（Ｃｈｉｂａら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８８、Ｐ．４６
４１）。特にコアタンパク領域のＮ末端側に免疫原性の
強い領域が存在していることが知られており（Ｎａｓｏ
ｆｆら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、８８、Ｐ．５４６２）、この領域の
アミノ酸配列を基にして合成ペプチドを作製し患者血清
と反応させると高率で反応することが確認されている
（Ｓａｔｏら、１９９３、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．３７、Ｐ．２９５）。しかしながらこれらの
検査薬はＨＣＶの感染の有無を調べるものであり、モニ
ターリング用の抗体価の定量に用いられるものではなか
った。
【０００５】またＣ型肝炎の治療には現在主にインター
フェロンが用いられているが、この治療効果をモニター
リングするのに、コア蛋白に対する抗体価を測定する方
法が有用であることが知られており、既にコア蛋白全長
を抗原とした治療モニターング用検査薬が市販されてい
る。これはインターフェロンによってウイルスが減少す
ると同時に、このウイルスのコア蛋白（抗原）が減少し
免疫応答の結果コア抗原に対する抗体も減少することが
考えられる。しかしながらこのモニターリング用検査薬
ではインターフェロン等によるＣ型肝炎の治療効果が明
確に判定が行えず、またこのコア抗体のみをモニターリ
ングする系ではコア抗体が出現しない少数の患者には適
用できないという欠点がある。
フェロンが用いられているが、この治療効果をモニター
リングするのに、コア蛋白に対する抗体価を測定する方
法が有用であることが知られており、既にコア蛋白全長
を抗原とした治療モニターング用検査薬が市販されてい
る。これはインターフェロンによってウイルスが減少す
ると同時に、このウイルスのコア蛋白（抗原）が減少し
免疫応答の結果コア抗原に対する抗体も減少することが
考えられる。しかしながらこのモニターリング用検査薬
ではインターフェロン等によるＣ型肝炎の治療効果が明
確に判定が行えず、またこのコア抗体のみをモニターリ
ングする系ではコア抗体が出現しない少数の患者には適
用できないという欠点がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】前述のようにＣ型肝炎
の治療にはインターフェロンが有用であるが、この治療
効果をモニターリングする方法としては、コア蛋白に対
する抗体価を測定する方法が有用であることが知られて
おり、既にコア蛋白全長を抗原とした治療モニターリン
グ用検査薬が市販されている。しかしこの方法ではコア
抗体が出現しない少数の患者には適用できないという欠
点があると同時にインターフェロン治療に対し著効を示
した患者でも抗体価があまり減少しない場合が認められ
る。
の治療にはインターフェロンが有用であるが、この治療
効果をモニターリングする方法としては、コア蛋白に対
する抗体価を測定する方法が有用であることが知られて
おり、既にコア蛋白全長を抗原とした治療モニターリン
グ用検査薬が市販されている。しかしこの方法ではコア
抗体が出現しない少数の患者には適用できないという欠
点があると同時にインターフェロン治療に対し著効を示
した患者でも抗体価があまり減少しない場合が認められ
る。
【０００７】また一般にＣ型肝炎を診断するにはコア蛋
白と非構造蛋白とを抗原として使用するいわゆる第２世
代検査薬が主に使用されているが、スクリーニングには
第２世代検査薬を、またインターフェロン治療効果のモ
ニターリングにはコア抗原のキットを使用することは繁
雑である。本発明の目的はかかる問題を改善するところ
にあり、インターフェロン治療効果のモニターリングに
有用なＣ型肝炎ウイルスに対する抗体価の測定方法を提
供するものである。
白と非構造蛋白とを抗原として使用するいわゆる第２世
代検査薬が主に使用されているが、スクリーニングには
第２世代検査薬を、またインターフェロン治療効果のモ
ニターリングにはコア抗原のキットを使用することは繁
雑である。本発明の目的はかかる問題を改善するところ
にあり、インターフェロン治療効果のモニターリングに
有用なＣ型肝炎ウイルスに対する抗体価の測定方法を提
供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明の課題は下記の構
成により解決される。すなわち本発明は、Ｃ型肝炎ウイ
ルス抗原に対する抗体価の測定において、測定対象試料
をその吸光度が２．０以下になるように希釈し、Ｃ型肝
炎ウイルス抗原ペプチドとして配列番号１から３に記載
のアミノ酸配列のいずれか一つを用いることを特徴とす
るＣ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法であ
る。
成により解決される。すなわち本発明は、Ｃ型肝炎ウイ
ルス抗原に対する抗体価の測定において、測定対象試料
をその吸光度が２．０以下になるように希釈し、Ｃ型肝
炎ウイルス抗原ペプチドとして配列番号１から３に記載
のアミノ酸配列のいずれか一つを用いることを特徴とす
るＣ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法であ
る。
【０００９】本発明で用いられるＣ型肝炎ウイルス抗原
ペプチドは、配列番号１から３に記載のアミノ酸配列の
いずれか一つからなるものでありＨＣＶのコア蛋白質領
域のアミノ酸配列を基にして種々の長さの配列を有する
ペプチドを作製し得られるものである。より具体的には
本発明の抗原をコードするｃＤＮＡは以下のようにして
得られる。
ペプチドは、配列番号１から３に記載のアミノ酸配列の
いずれか一つからなるものでありＨＣＶのコア蛋白質領
域のアミノ酸配列を基にして種々の長さの配列を有する
ペプチドを作製し得られるものである。より具体的には
本発明の抗原をコードするｃＤＮＡは以下のようにして
得られる。
【００１０】まず、複数の非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者由来
の血清から、例えば、Ｃｈｏｍｅｚｙｎｓｋｉらによっ
て示されるポリエチレングリコール沈殿法によってファ
ージ粒子を回収し、フェノール抽出、イソプロパノール
沈殿法でＲＮＡを調製する（Ｃｈｏｍｅｚｙｎｓｋｉ
ら、１９８７、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２、
Ｐ．１５６）。
の血清から、例えば、Ｃｈｏｍｅｚｙｎｓｋｉらによっ
て示されるポリエチレングリコール沈殿法によってファ
ージ粒子を回収し、フェノール抽出、イソプロパノール
沈殿法でＲＮＡを調製する（Ｃｈｏｍｅｚｙｎｓｋｉ
ら、１９８７、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２、
Ｐ．１５６）。
【００１１】調製したＲＮＡからｃＤＮＡの合成は、市
販品のｃＤＮＡ合成キット（例えば、ＢＲＬ社）とラン
ダム・プライマー（宝酒造社）を用いて行うことができ
る。
販品のｃＤＮＡ合成キット（例えば、ＢＲＬ社）とラン
ダム・プライマー（宝酒造社）を用いて行うことができ
る。
【００１２】次に、合成したｃＤＮＡを市販品のλｇｔ
ｌｌクローニング・キット（ＢＲＬ社）を用いて、λｇ
ｔｌｌファージ・ベクターのＥｃｏＲＩ部位に導入後、
市販品のパッケージング・キット（アマシャム社）を用
いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージングを行ってｃＤＮ
Ａライブラリーを調製することが可能である。
ｌｌクローニング・キット（ＢＲＬ社）を用いて、λｇ
ｔｌｌファージ・ベクターのＥｃｏＲＩ部位に導入後、
市販品のパッケージング・キット（アマシャム社）を用
いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージングを行ってｃＤＮ
Ａライブラリーを調製することが可能である。
【００１３】かかるλｇｔｌｌファージ内に組み込まれ
たｃＤＮＡはλｇｔｌｌファージ上のβ−ｇａｌ遺伝子
の中に組込まれるので、ファージの大腸菌への感染後、
ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド）などの誘導物質による該ファージ上のラクトースオ
ペロンのプロモーターの誘導によりβ−ガラクトシダー
ゼとの融合蛋白質として容易に発現が確認される。
たｃＤＮＡはλｇｔｌｌファージ上のβ−ｇａｌ遺伝子
の中に組込まれるので、ファージの大腸菌への感染後、
ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド）などの誘導物質による該ファージ上のラクトースオ
ペロンのプロモーターの誘導によりβ−ガラクトシダー
ゼとの融合蛋白質として容易に発現が確認される。
【００１４】この様にして、ｃＤＮＡを組込んだλｇｔ
ｌｌファージｃＤＮＡライブラリーから目的とする非Ａ
非Ｂ型慢性肝炎患者の血清特異的に反応する抗原をコー
ドするｃＤＮＡをスクリーニングするには、ヤングら、
（Ｙｏｕｎｇら １９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８０、Ｐ．１１９４）に
示された方法に従って行うことができる。つまり、λｇ
ｔｌｌファージを大腸菌に感染させ、ＩＰＴＧを含む培
地で培養する。形成されたプラークを発現されたβ−ガ
ラクトシダーゼとの融合蛋白質と共にニトロセルロース
メンブレンに写しとり、非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者由来の
血清に含まれる抗体と反応させ、さらにＨＲＰ（西洋ワ
サビパーオキシダーゼ）で標識した抗ヒトＩｇＧ抗体と
反応させた後に発色させることによって、非Ａ非Ｂ型慢
性肝炎患者由来の血清に含まれる抗体と反応性のある融
合蛋白質を発現しているプラークを選択することができ
る。
ｌｌファージｃＤＮＡライブラリーから目的とする非Ａ
非Ｂ型慢性肝炎患者の血清特異的に反応する抗原をコー
ドするｃＤＮＡをスクリーニングするには、ヤングら、
（Ｙｏｕｎｇら １９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８０、Ｐ．１１９４）に
示された方法に従って行うことができる。つまり、λｇ
ｔｌｌファージを大腸菌に感染させ、ＩＰＴＧを含む培
地で培養する。形成されたプラークを発現されたβ−ガ
ラクトシダーゼとの融合蛋白質と共にニトロセルロース
メンブレンに写しとり、非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者由来の
血清に含まれる抗体と反応させ、さらにＨＲＰ（西洋ワ
サビパーオキシダーゼ）で標識した抗ヒトＩｇＧ抗体と
反応させた後に発色させることによって、非Ａ非Ｂ型慢
性肝炎患者由来の血清に含まれる抗体と反応性のある融
合蛋白質を発現しているプラークを選択することができ
る。
【００１５】次に２次スクリーニングとして、こうして
選択されたプラークの中から同様な方法で、非Ａ非Ｂ型
慢性肝炎患者由来の血清に含まれる抗体とは反応する
が、Ｂ型肝炎患者由来の血清および正常人の血清とは反
応しないプラークを選択する。
選択されたプラークの中から同様な方法で、非Ａ非Ｂ型
慢性肝炎患者由来の血清に含まれる抗体とは反応する
が、Ｂ型肝炎患者由来の血清および正常人の血清とは反
応しないプラークを選択する。
【００１６】さらに、２次スクリーニングにパスしたλ
ｇｔｌｌ組換えファージの持つｃＤＮＡの塩基配列を決
定することになるが、その方法は以下のようにする。ま
ず、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｍａｎｉａ
ｔｉｓら Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂｏｒ ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ ｐｒｅｓｓ １９８９）の方法に
したがって少量のファージＤＮＡを調製し、このファー
ジＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩで完全にあるいは部分分
解して得られるｃＤＮＡをｐＵＣ系統のプラスミド・ベ
クターヘサブクローニングする。そしてこのプラスミド
ＤＮＡを調製して、例えば、デュポン社製のＤＮＡシー
クエンサーを用いて塩基配列を決定することができる。
この方法により得られたクローンの配列は本発明者らに
より既に特許出願されている（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４号明細書）。
ｇｔｌｌ組換えファージの持つｃＤＮＡの塩基配列を決
定することになるが、その方法は以下のようにする。ま
ず、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｍａｎｉａ
ｔｉｓら Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂｏｒ ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ ｐｒｅｓｓ １９８９）の方法に
したがって少量のファージＤＮＡを調製し、このファー
ジＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩで完全にあるいは部分分
解して得られるｃＤＮＡをｐＵＣ系統のプラスミド・ベ
クターヘサブクローニングする。そしてこのプラスミド
ＤＮＡを調製して、例えば、デュポン社製のＤＮＡシー
クエンサーを用いて塩基配列を決定することができる。
この方法により得られたクローンの配列は本発明者らに
より既に特許出願されている（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４号明細書）。
【００１７】得られたクローンのうちコア蛋白領域由来
であるクローンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４号明細書）に基づき、長さの異なる３種類の
ペプチドを合成した。すなわちアミノ酸７から３０まで
の２４アミノ酸（以下２４ｍｅｒ 配列番号１）、アミ
ノ酸１から３０までの３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒあ
るいはＳ２９−１、配列番号２）、アミノ酸２から４１
までの４０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配列番号３）、
である。これらペプチドの合成は公知の固相ペプチド合
成法により行われる。さらに得られたペプチドは逆層液
体クロマトグラフィー等で精製し用いることが好まし
い。また実施例から明らかな通りコアタンパクＮ末端側
の領域を抗原として使用すると、配列が短いほどシャー
プな反応が得られ好ましい。また抗Ｃ型肝炎ウイルス抗
体の力価を定量するためにはさらに患者血清と高率に反
応する抗原を選択するのが好ましく、例えばコア抗体が
陰性の患者においては非構造蛋白抗原をコア蛋白抗原と
組み合わせて用いることによりより正確にモニターリン
グできる。このように本発明は配列番号１から３に示さ
れるコア蛋白Ｎ末端側の短いペプチドを用いるものであ
るが、中でも配列番号１（２４ｍｅｒ）は配列番号２
（３０ｍｅｒ）に比べて患者血清での陽性率が若干低下
することからモニターリングには３０ｍｅｒが最も好ま
しく用いられる。またこれらコア抗原ペプチドに非構造
蛋白抗原、好ましくは配列番号４に示されるＮＳ３抗原
を組み合わせることにより、コア抗体が出現しない少数
の患者に対しても非構造蛋白抗原（ＮＳ３）を加えるこ
とにより治療モニターリング可能であること、この測定
系によりＣ型肝炎のスクリーニングとインターフェロン
治療効果のモニターリングが同時に可能となるものであ
る。
であるクローンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４号明細書）に基づき、長さの異なる３種類の
ペプチドを合成した。すなわちアミノ酸７から３０まで
の２４アミノ酸（以下２４ｍｅｒ 配列番号１）、アミ
ノ酸１から３０までの３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒあ
るいはＳ２９−１、配列番号２）、アミノ酸２から４１
までの４０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配列番号３）、
である。これらペプチドの合成は公知の固相ペプチド合
成法により行われる。さらに得られたペプチドは逆層液
体クロマトグラフィー等で精製し用いることが好まし
い。また実施例から明らかな通りコアタンパクＮ末端側
の領域を抗原として使用すると、配列が短いほどシャー
プな反応が得られ好ましい。また抗Ｃ型肝炎ウイルス抗
体の力価を定量するためにはさらに患者血清と高率に反
応する抗原を選択するのが好ましく、例えばコア抗体が
陰性の患者においては非構造蛋白抗原をコア蛋白抗原と
組み合わせて用いることによりより正確にモニターリン
グできる。このように本発明は配列番号１から３に示さ
れるコア蛋白Ｎ末端側の短いペプチドを用いるものであ
るが、中でも配列番号１（２４ｍｅｒ）は配列番号２
（３０ｍｅｒ）に比べて患者血清での陽性率が若干低下
することからモニターリングには３０ｍｅｒが最も好ま
しく用いられる。またこれらコア抗原ペプチドに非構造
蛋白抗原、好ましくは配列番号４に示されるＮＳ３抗原
を組み合わせることにより、コア抗体が出現しない少数
の患者に対しても非構造蛋白抗原（ＮＳ３）を加えるこ
とにより治療モニターリング可能であること、この測定
系によりＣ型肝炎のスクリーニングとインターフェロン
治療効果のモニターリングが同時に可能となるものであ
る。
【００１８】本発明においてＣ型肝炎ウイルス抗原に対
する抗体価を測定する際には、測定血清を希釈し吸光度
２．０以下（より好ましくは１．５以下）とすることに
より定量性が得られる。吸光度２．０以下にするために
は測定対象である血清をＰＢＳ溶液等を用いることで１
０／３倍から１０００／３倍の範囲で希釈することが好
ましい。
する抗体価を測定する際には、測定血清を希釈し吸光度
２．０以下（より好ましくは１．５以下）とすることに
より定量性が得られる。吸光度２．０以下にするために
は測定対象である血清をＰＢＳ溶液等を用いることで１
０／３倍から１０００／３倍の範囲で希釈することが好
ましい。
【００１９】
【実施例】以下実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
【００２０】実施例１ ペプチドの作製 国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４号明細書に記載され
た方法で得られたクローンのうちコア蛋白領域由来であ
るクローンＳ２９の配列に基づき、長さの異なる３種類
のペプチドを合成した。すなわちアミノ酸７から３０ま
での２４アミノ酸（以下２４ｍｅｒ 配列番号１）、ア
ミノ酸１から３０までの３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒ
あるいはＳ２９−１，配列番号２）、アミノ酸２から４
１までの４０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配列番号
３）、である。これらペプチドはペプチド自動合成装置
（アメリカ アプライド バイオシステムズ社製 モデ
ル４３１Ａ）を用いて固相合成法で合成し、得られたペ
プチドを逆層クロマトグラフィーで精製した。得られた
ペプチドは常法に従い組成分析を行い目的とするペプチ
ドであることを確認した。また大腸菌で発現させたＳ４
蛋白については国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４号明
細書の方法を用いて精製し使用した。
た方法で得られたクローンのうちコア蛋白領域由来であ
るクローンＳ２９の配列に基づき、長さの異なる３種類
のペプチドを合成した。すなわちアミノ酸７から３０ま
での２４アミノ酸（以下２４ｍｅｒ 配列番号１）、ア
ミノ酸１から３０までの３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒ
あるいはＳ２９−１，配列番号２）、アミノ酸２から４
１までの４０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配列番号
３）、である。これらペプチドはペプチド自動合成装置
（アメリカ アプライド バイオシステムズ社製 モデ
ル４３１Ａ）を用いて固相合成法で合成し、得られたペ
プチドを逆層クロマトグラフィーで精製した。得られた
ペプチドは常法に従い組成分析を行い目的とするペプチ
ドであることを確認した。また大腸菌で発現させたＳ４
蛋白については国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４号明
細書の方法を用いて精製し使用した。
【００２１】実施例２ マイクロプレートＥＩＡの作製 実施例１記載の４種類の単独合成ペプチドおよびＳ２９
−１と精製Ｓ４抗原とを組み合わせたマイクロプレート
ＥＩＡを作製した。単独合成ペプチドおよびＳ２９−１
と精製Ｓ４抗原とを０．５μｇ／ｍｌの濃度になるよう
にＰＢＳ溶液（０．１Ｍ燐酸緩衝液）１００μｌに溶解
し、マイクロプレートの各ウエルに加え４℃で一晩反応
させた。抗原溶液を吸引除去しさらに０．５％のＢＳＡ
を含むＰＢＳを４℃で一晩反応させブロッキングした。
このブロッキング液を吸引除去し、洗浄液（０．０２５
％のＴｗｅｅｎ２０を含む１／２ＰＢＳ溶液）で洗浄し
て各種抗原固相化プレートとした。
−１と精製Ｓ４抗原とを組み合わせたマイクロプレート
ＥＩＡを作製した。単独合成ペプチドおよびＳ２９−１
と精製Ｓ４抗原とを０．５μｇ／ｍｌの濃度になるよう
にＰＢＳ溶液（０．１Ｍ燐酸緩衝液）１００μｌに溶解
し、マイクロプレートの各ウエルに加え４℃で一晩反応
させた。抗原溶液を吸引除去しさらに０．５％のＢＳＡ
を含むＰＢＳを４℃で一晩反応させブロッキングした。
このブロッキング液を吸引除去し、洗浄液（０．０２５
％のＴｗｅｅｎ２０を含む１／２ＰＢＳ溶液）で洗浄し
て各種抗原固相化プレートとした。
【００２２】実施例３ 患者血清抗体価の測定 インターフェロンで治療を実施し著効を示したＣ型慢性
肝炎患者の血清を、治療前、インターフェロン投与８週
間後、１８週間後、２４週間後（終了時）、終了時から
８週間後、１８週間後、２４週間後の計７点について各
血清をＰＢＳ溶液にて１０／３倍、１０倍、１００／３
倍、１００倍、１０００／３倍に希釈し、各ＥＬＩＳＡ
にて抗体価を測定した。 この抗体価を対数変換し、対
数曲線の傾きを抗体価の減少率とした。なお各ＥＬＩＳ
Ａの測定方法およびカットオフ値は国際公開番号ＷＯ９
２／０９６３４号明細書に記載の方法と同様に行った
（カットオフ値は陰性コントロール値＋０．３とし
た）。その結果を表１に示す。
肝炎患者の血清を、治療前、インターフェロン投与８週
間後、１８週間後、２４週間後（終了時）、終了時から
８週間後、１８週間後、２４週間後の計７点について各
血清をＰＢＳ溶液にて１０／３倍、１０倍、１００／３
倍、１００倍、１０００／３倍に希釈し、各ＥＬＩＳＡ
にて抗体価を測定した。 この抗体価を対数変換し、対
数曲線の傾きを抗体価の減少率とした。なお各ＥＬＩＳ
Ａの測定方法およびカットオフ値は国際公開番号ＷＯ９
２／０９６３４号明細書に記載の方法と同様に行った
（カットオフ値は陰性コントロール値＋０．３とし
た）。その結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
【００２４】表１ではインターフェロン投与前の抗体価
を１００としたときのインターフェロン投与終了６か月
後のカットオフインデックスの減少率を示した。コア抗
原ペプチドの長さが短いほど減少率が高く治療効果をよ
りクリアーに示していた。これはコア蛋白の長さを短く
していくと、抗原上に存在するエピトープが限定される
ためシャープな反応を示すのではないかと推測される。
抗体価のモニターリングでは３０ｍｅｒより２４ｍｅｒ
の系が優れていたが、２４ｍｅｒは３０ｍｅｒに比べて
患者血清での陽性率が若干低下することを考え合わすと
（特許出願中、特願平０５−２７３９３８号明細書）モ
ニターリングでは３０ｍｅｒが適当であると考えられ
る。
を１００としたときのインターフェロン投与終了６か月
後のカットオフインデックスの減少率を示した。コア抗
原ペプチドの長さが短いほど減少率が高く治療効果をよ
りクリアーに示していた。これはコア蛋白の長さを短く
していくと、抗原上に存在するエピトープが限定される
ためシャープな反応を示すのではないかと推測される。
抗体価のモニターリングでは３０ｍｅｒより２４ｍｅｒ
の系が優れていたが、２４ｍｅｒは３０ｍｅｒに比べて
患者血清での陽性率が若干低下することを考え合わすと
（特許出願中、特願平０５−２７３９３８号明細書）モ
ニターリングでは３０ｍｅｒが適当であると考えられ
る。
【００２５】表２では表１と同様にインターフェロンで
治療を実施し著効を示したＣ型慢性肝炎患者の血清を、
治療前、インターフェロン投与８週間後、１８週間後、
２４週間後（終了時）、終了時から８週間後、１８週間
後、２４週間後の計７点について各血清をＰＢＳ溶液に
て１０／３倍、１０倍、１００／３倍、１００倍、１０
００／３倍に希釈し、Ｓ２９−１と精製Ｓ４抗原を組み
合わせたマイクロプレートＥＩＡにて抗体価を測定しカ
ットオフインデックスの減少率を比較した。参考までに
市販キットであるＪＣＣ−２（オーソ社）による測定も
行った。著効例に関してはＳ２９−１と精製Ｓ４を組み
合わせた系で十分抗体価の減少が確認できた。特に血清
ＫＴでは著効を示したにもかかわらずコア抗体（ＪＣＣ
−２）は顕著には減少しなかったが（投与終了後２４週
後で１０．０％）、Ｓ２９−１と精製Ｓ４を組み合わせ
た系では投与終了後２４週後で抗体価が５４．８％減少
し明確に判定することができた。これはコア抗原に加え
て非構造蛋白抗原を加えたことによる効果と考えられ
る。
治療を実施し著効を示したＣ型慢性肝炎患者の血清を、
治療前、インターフェロン投与８週間後、１８週間後、
２４週間後（終了時）、終了時から８週間後、１８週間
後、２４週間後の計７点について各血清をＰＢＳ溶液に
て１０／３倍、１０倍、１００／３倍、１００倍、１０
００／３倍に希釈し、Ｓ２９−１と精製Ｓ４抗原を組み
合わせたマイクロプレートＥＩＡにて抗体価を測定しカ
ットオフインデックスの減少率を比較した。参考までに
市販キットであるＪＣＣ−２（オーソ社）による測定も
行った。著効例に関してはＳ２９−１と精製Ｓ４を組み
合わせた系で十分抗体価の減少が確認できた。特に血清
ＫＴでは著効を示したにもかかわらずコア抗体（ＪＣＣ
−２）は顕著には減少しなかったが（投与終了後２４週
後で１０．０％）、Ｓ２９−１と精製Ｓ４を組み合わせ
た系では投与終了後２４週後で抗体価が５４．８％減少
し明確に判定することができた。これはコア抗原に加え
て非構造蛋白抗原を加えたことによる効果と考えられ
る。
【００２６】
【表２】
【００２７】表３ではインターフェロンで治療を行った
患者検体についてコアペプチド（３０ｍｅｒ、Ｓ２９−
１）と非構造蛋白（Ｓ４）とを組み合わせた第２世代検
査薬で抗体価を測定した。
患者検体についてコアペプチド（３０ｍｅｒ、Ｓ２９−
１）と非構造蛋白（Ｓ４）とを組み合わせた第２世代検
査薬で抗体価を測定した。
【００２８】
【表３】
【００２９】
【表４】
【００３０】
【表５】
【００３１】著効を示した１２例（ＨＣＶ−ＲＮＡが陰
性化した症例）に関しては１例を除き治療終了６か月後
のカットオフインデックスがインターフェロン投与前と
比較して約６０％以上減少した。またインターフェロン
投与終了時と治療終了６か月後を比較しても全例でカッ
トオフインデックスが減少していた。これに対して無効
例では治療終了６か月後のカットオフインデックスがイ
ンターフェロン投与前と比較して減少する傾向にあった
が、インターフェロン投与終了時と治療終了６か月後を
比較してみると１例を除き上昇した。このように第２世
代検査薬の抗体価の推移はＨＣＶ−ＲＮＡと臨床経過を
よく反映していた。特にインターフェロン投与終了時と
治療終了６か月後のカットオフインデックスの増減はイ
ンターフェロン治療による効果を反映していた。
性化した症例）に関しては１例を除き治療終了６か月後
のカットオフインデックスがインターフェロン投与前と
比較して約６０％以上減少した。またインターフェロン
投与終了時と治療終了６か月後を比較しても全例でカッ
トオフインデックスが減少していた。これに対して無効
例では治療終了６か月後のカットオフインデックスがイ
ンターフェロン投与前と比較して減少する傾向にあった
が、インターフェロン投与終了時と治療終了６か月後を
比較してみると１例を除き上昇した。このように第２世
代検査薬の抗体価の推移はＨＣＶ−ＲＮＡと臨床経過を
よく反映していた。特にインターフェロン投与終了時と
治療終了６か月後のカットオフインデックスの増減はイ
ンターフェロン治療による効果を反映していた。
【００３２】コアペプチド（Ｓ２９−１）と非構造蛋白
（Ｓ４）とを組み合わせた第２世代検査薬をモニターリ
ング用に使用できる利点は短いコア合成ペプチド（Ｓ２
９−１）を使用していることで現在市販されている検査
薬と比較してよりシャープにモニターリング可能である
こと、またＮＳ３抗原（Ｓ４）をあわせて使用している
のでコア抗体が陰性の患者においてもモニターリング適
用可能であること、著効例に関してはコア抗体のみをモ
ニターリングするより明確に抗体価の減少がみられるこ
とが挙げられる。また陽性率の高いコアペプチドと非構
造蛋白とを組み合わせたいわゆる第２世代検査薬でスク
リーニングとインターフェロン治療効果のモニターリン
グが同時に可能であることは、スクリーニングとモニタ
ーリングをキットを変えて測定している現状から考えて
よりシンプルな診断が行えると考えられる。
（Ｓ４）とを組み合わせた第２世代検査薬をモニターリ
ング用に使用できる利点は短いコア合成ペプチド（Ｓ２
９−１）を使用していることで現在市販されている検査
薬と比較してよりシャープにモニターリング可能である
こと、またＮＳ３抗原（Ｓ４）をあわせて使用している
のでコア抗体が陰性の患者においてもモニターリング適
用可能であること、著効例に関してはコア抗体のみをモ
ニターリングするより明確に抗体価の減少がみられるこ
とが挙げられる。また陽性率の高いコアペプチドと非構
造蛋白とを組み合わせたいわゆる第２世代検査薬でスク
リーニングとインターフェロン治療効果のモニターリン
グが同時に可能であることは、スクリーニングとモニタ
ーリングをキットを変えて測定している現状から考えて
よりシンプルな診断が行えると考えられる。
【００３３】
【発明の効果】本発明によりインターフェロン等による
Ｃ型肝炎の治療効果を明確に判定することが可能とな
る。また本発明ではコア蛋白抗原と非構造蛋白抗原（Ｎ
Ｓ３）を使用した第２世代検査薬がインターフェロン治
療効果のモニターリングに適用できることを示した。こ
れによりコア抗体が陰性である患者の治療効果モニター
リングが可能になると同時に、スクリーニングとモニタ
ーリングが同じ検査薬キットで行えるようになった。
Ｃ型肝炎の治療効果を明確に判定することが可能とな
る。また本発明ではコア蛋白抗原と非構造蛋白抗原（Ｎ
Ｓ３）を使用した第２世代検査薬がインターフェロン治
療効果のモニターリングに適用できることを示した。こ
れによりコア抗体が陰性である患者の治療効果モニター
リングが可能になると同時に、スクリーニングとモニタ
ーリングが同じ検査薬キットで行えるようになった。
【００３４】
【配列表】配列番号１はＨＣＶのコア蛋白領域由来のク
ローンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３
４号明細書）に基づき合成されたアミノ酸７から３０ま
での２４アミノ酸配列を示す。配列番号２はＨＣＶのコ
ア蛋白領域由来のクローンＳ２９の配列（国際公開番号
ＷＯ９２／０９６３４号明細書）に基づき合成されたア
ミノ酸１から３０までの３０アミノ酸配列を示す。配列
番号３はＨＣＶのコア蛋白領域由来のクローンＳ２９の
配列（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４号明細書）に
基づき合成されたアミノ酸２から４１までの４０アミノ
酸配列を示す。配列番号４は非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの
非構造蛋白領域由来のｃＤＮＡ配列及ひ該ＤＮＡ配列が
コードするアミノ酸配列を示す。
ローンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３
４号明細書）に基づき合成されたアミノ酸７から３０ま
での２４アミノ酸配列を示す。配列番号２はＨＣＶのコ
ア蛋白領域由来のクローンＳ２９の配列（国際公開番号
ＷＯ９２／０９６３４号明細書）に基づき合成されたア
ミノ酸１から３０までの３０アミノ酸配列を示す。配列
番号３はＨＣＶのコア蛋白領域由来のクローンＳ２９の
配列（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４号明細書）に
基づき合成されたアミノ酸２から４１までの４０アミノ
酸配列を示す。配列番号４は非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの
非構造蛋白領域由来のｃＤＮＡ配列及ひ該ＤＮＡ配列が
コードするアミノ酸配列を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中村 春次 滋賀県大津市園山１丁目１番１号 東レ株 式会社滋賀事業場内 (72)発明者 有馬 暉勝 鹿児島県鹿児島市平之町５−１−403号
Claims (3)
- 【請求項１】 Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の
測定において、測定対象試料をその吸光度が２．０以下
になるように希釈し、Ｃ型肝炎ウイルス抗原ペプチドと
して配列番号１から３に記載のアミノ酸配列のいずれか
一つを用いることを特徴とするＣ型肝炎ウイルス抗原に
対する抗体価の測定方法。 - 【請求項２】 測定対象試料を１０／３倍から１０００
／３倍の範囲で希釈することを特徴とする請求項１記載
のＣ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法。 - 【請求項３】 配列番号１から３に記載のアミノ酸配列
のいずれか一つのＣ型肝炎ウイルスコア抗原ペプチドと
Ｃ型肝炎ウイルス非構造蛋白抗原ペプチドとを用いるこ
とを特徴とする請求項１または２記載のＣ型肝炎ウイル
ス抗原に対する抗体価の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6082160A JPH07260792A (ja) | 1994-03-16 | 1994-03-16 | Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6082160A JPH07260792A (ja) | 1994-03-16 | 1994-03-16 | Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07260792A true JPH07260792A (ja) | 1995-10-13 |
Family
ID=13766685
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6082160A Pending JPH07260792A (ja) | 1994-03-16 | 1994-03-16 | Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07260792A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020506386A (ja) * | 2017-02-02 | 2020-02-27 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 少なくとも２種のペグ化された分析物特異的結合剤を使用する免疫アッセイ |
-
1994
- 1994-03-16 JP JP6082160A patent/JPH07260792A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020506386A (ja) * | 2017-02-02 | 2020-02-27 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 少なくとも２種のペグ化された分析物特異的結合剤を使用する免疫アッセイ |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WALEWSKI et al. | Evidence for a new hepatitis C virus antigen encoded in an overlapping reading frame | |
| US5879904A (en) | Nucleotide and peptide sequences of a hepatitis C virus isolate, diagnostic and therapeutic applications | |
| JP2532805B2 (ja) | Ｎａｎｂｖの診断用薬およびワクチン | |
| CA2005950C (en) | Non-a, non-b hepatitis virus genome rna, cdna and virus antigen protein | |
| JP2002528140A (ja) | ヒトｐａｎ−ｈｃｖヒトモノクローナル抗体 | |
| JP2006115845A (ja) | Ｇ型肝炎ウイルスおよびその分子クローニング | |
| Madejon et al. | GB virus C RNA in serum, liver, and peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis B, C, and D | |
| EP0463848A2 (en) | Non-A, non-B hepatitis virus particles | |
| JPH06153960A (ja) | Ｃ型肝炎ウィルスのコア抗原タンパク質及びそれを用いての診断方法及びキット | |
| CA2197569A1 (en) | Nucleotide and amino acid sequences of the envelope 1 and core genes of hepatitis c virus | |
| Masalova et al. | Detection of hepatitis C virus core protein circulating within different virus particle populations | |
| Tuveri et al. | Hepatitis C virus genotypes in French haemophiliacs: kinetics and reappraisal of mixed infections | |
| Lechner et al. | Antibodies directed to envelope proteins of hepatitis C virus outside of hypervariable region 1 | |
| JP2003502285A (ja) | Ｔｔウイルス配列由来のペプチドおよびｔｔウイルスに結合する単一特異性抗体 | |
| WO1992009634A1 (en) | Non-a non-b hepatitis virus antigen protein | |
| JPH07260792A (ja) | Ｃ型肝炎ウイルス抗原に対する抗体価の測定方法 | |
| US5866139A (en) | Nucleotide and peptide sequences of a hepatitis C virus isolate, diagnostic and therapeutic applications | |
| US5885771A (en) | Antigenic peptide compound and immunoassay | |
| Yokosuka et al. | Detection of antibody to hepatitis C E2/NS1 protein in patients with type C hepatitis | |
| KR0126107B1 (ko) | 비-a 비-b형 간염 바이러스 유전자에서 유래하는 dna 및 구성 폴리펩티드 | |
| Kremsdorf et al. | Hepatitis C virus (HCV)-RNA in non-A, non-B chronic hepatitis in France: Nucleotide sequence of a French HCV isolate | |
| CA2151126A1 (en) | Peptides from the c33 region of hcv, antibodies thereto and methods for the detection of hcv | |
| JPH07179493A (ja) | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 | |
| JPH0797398A (ja) | Ｃ型肝炎用検査薬およびｃ型肝炎ウイルス抗原ペプチド | |
| JPH05176774A (ja) | 非ａ非ｂ型肝炎抗原断片、当該抗原断片の製造方法及び当該抗原断片を用いた非ａ非ｂ型肝炎診断用試薬 |